Автореферат и диссертация по медицине (14.00.29) на тему:Консервирующие растворы для донорской и аутологичной крови (разработка, совершенствование, внедрение)

РГ6 од

9 ^ Ч|0|| 2российская Академия медицинских наук Гематологический научный ментр

На правах рукописи

ГОЛУБЕВ А Вера Леонидовна

КОНСЕРВИРУЮЩИЕ РАСТВОРЫ ДЛЯ ДОНОРСКОЙ И АУТОЛОГИЧНОЙ КРОВИ (разработка, совэриеисгвование, внедрение)

14.00.28 - Гематология и переливакие крови

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Иссква 1933 г.

Работа выполнена в Гематологическом научном Центре РАМН.

Официальные оппоненты: доктор биологических наук Ю. А. ШАРОВА доктор медицинских наук В. Б. ХВАТОВ доктор медицинских наук ¡й Н. АНДРЕЕВ

•Ведущее учреждение - Онкологический научный" Центр РАМН

Защита диссертации состоится "_" _1993 г.

в часов на заседании специализированного совета Д 074.08.02. в . Гематологическом научном Центре РАМН (Москва, Новозыковский пр. ,4а)

С авторефератом шхю ознакомиться в библиотеке Гематологического научного Центра.

Автореферат разослан "/■/" 1993 г.

Ученый секретарь специализированного совета кандидат биологических наук

В.Д.РЕУК

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. В современной трансфузиологии проблема совершенствования методов и средств консервирования крови и ее компонентов продолжает занимать значительное место. От достижений в этой области во многом зависят успехи трансфузиологии. Несомненно, что использование при заготовке крови гемоишсервантов высокого качества позволяет сохранять донорскую кровь и выделевные кз нее компоненты необходимое время в полноценном состоянии. Это в значительной степени определяет эффективность гемотрансфузиовной терапии.

Принципиальной особенность«) современной трансфузиологии является использование компонентной гемотерапии, т. е. направленное восполнение дефицита тех или иных клеточных элементов крови или белковых препаратов плазмы, в том числе и факторов свертывания (Аг-раненко RA., 1978, 1982, 1985; Гаврилов O.K., 1977; Шабалин RH., 1987, Воробьев А. И., 1990; Waldman А. , 1981; Perkin H., 1981 И др).

Показания к переливанию цельной крови в настоящее время значительно суягны, что связано с риском развития посттрансфузионных реакций и осложнений, обусловленных прежде всего аллоиммунизацией антителами лейкоцитов и тромбоцитов, плазменных белков я возникающими при этом иммунвыми конфликтами (Аграненко В. А., 1979, 1984, 1986; Федоров RA., 1980; Friedman В. , 1981; Tasrell H., 1982; Холлан С. , 1989). Цельная кровь, как трансфузионная среда, в настоящее время по обоснованным показаниям используемся лишь при отсутствии зритро-цитной массы, заменяющей переливание цельной крови при обменных трансфузиях, массивной кровологере с резким уменьшением ОЦК, а такте при плановых операциях с использованием аутологичной крози (Аг-ргкэнко В. А. , 19S4; ЯУкова ПК , 1991; Beal R.W., 1985; Axelrod F., 1989; Tyson G.S., 1989; Lee D. , 1990; Goodnough L., 1990; Mazes В. , 1989; Lindenbaum С., 19ВО « др= ).

Шследнее обстоятельство весьма важно,, т.к. из-за возросшей угрозы заражения больных вирусными инфекциям (гепатиты, СПИД), передаваемыми с переливаемой кровьй, хирурги стали отдавать предпочтение аутологичной крови для обеспечения ряда хирургических плановых операций. Для накопления же больших, объемов аутокрови необходимы консерванте, обеспечивающее длительное хранение.

Удлинение срока хранения ааготовленной от донора крови - это целое направление в проблеме консервирования крови, которому в настоящее время уделяет внимание многие исследователи.

Исследованиями ряда ученых (Мегушп Н.. 1984; Petrosky Т. ,1990; Fukuda N., 1990 и др.) доказана возможность сохранения в полноценном состоянии эритроцитов крови в течение 84-125 и более дней с помощью добавок к консервантам различных метаболически акгизных веществ.

Вещэства, вводимые в консервирующие растворы, позволяют длительно поддерживать метаболизм эритроцитов на близком к физиологической норме уровне, повышая тем самым полноценность крови и ее лечебную эффективность, в первую очередь, в обычные (до 21 дня) сроки хранения. Учитывая имеющийся в настоящее вреки дефицит донорских кадров, продление времени хранения крови позволит обходиться меньшим количеством доноров, создавать запасы крови и эритроцитов, что важно в экстремальных ситуациях, а также для обеспечения аутокрогыо плановых операций с большой кровопотерей, например, ортопедических. Возникает также возможность управлять ресурсами крови - при необходимости перераспределять ее из лечебных учреждений с низкой транс-фузиологическоа активностью в клиники с высокой потребностью в крови и ее компонентах. Установлено, что удлинение времени хранения крови на 1 недели позволяет снизить объем заготавливаемой крови на . 3-8%, уменьшить ее брак, связанный с истечением срока годности (Abbot J. , 1978; lfelvoy P., 1982; Cohen M. , 1983; Taswell H., 1S80). Из этого понятно, насколько.важно использование определенного состава растворов для консервирования и хранения крови в полноценном состоянии.

Первые отечественные гемоконсерванты промышленного производства, широко применявшиеся в Службе крови страны, - глюкозо-цитратный раствор ЦОЯИШ N7-6 л глюкозо-фосфатный ЦОЛИПК N12, обеспечивали морфофунвдиовальную полноценность консервированной крови в течение 3-х недель хранения. Оба раствора обеспечивали жизнеспособность эритрошпов 21-дневноЗ крови в пределах 73-75Z от исходного уровня через сутки после трансфузии реципиенту, что по международному стандарту считается удовлетворительным показателем сохранности крови. Однако ряд недостатков, имеющихся у этих консервантов (использование в их составе левомицетина, часто являющегося причиной аллергических реакций у больЕьас после трансйгзиЯ такой крови, недостаточная стабилизация и, в связи с этим, наличие мелких сгустков в крови, потребность в увеличении pH консервированной крови, а также потребность в новых методах контроля качества консерванта на стадии промышленного производства) вызвали необходимость совершенствования и стандартизации этих гешконсервантов с целью повышения их консер-

вируюцих свойств.

Учитывая компонентную направленность в гемотерапии, при разработке растворов для консервирования крови одним из главных критериев их эффективности рассматривалась возможность обеспечения полноценности и хранения компонентов крови в пригодном для трансфузии состоянии.

Как известно, одним из важнейших компонентов консервированной крови являются эритроциты, переливание которых обеспечивает транспорт кислорода в организме больного. Однако широкое использование в . лечебной практике эригроцитной массы (ЭМ), остающейся после отделения от плазмы, долгое время тормозилось ограниченностью сроков ее хранения (5-7 днями с иоыента заготовки крови). Такой короткий срок годности объяснялся риской бактериального загрязнения ЭМ в процессе ее приготовления (в стеклянных бугшках). Кроме того, считалось невозможным длительное хранение ЭМ, обедненной плазмой и растворенными в ней веществами, необходимыми (например, глюкоза) для жизнедеятельности эритроцитов. Предстояло опровергнуть научную обоснованность этого положения, изучить степень сохранности свойств ЭМ в ■ сранении с цельной кровь» с целью удлинения срогав ее годности.

Некоторые категории больных, сенсибилизированных многократными гемотрансфузиями (гематологические и др.) нуждаются в повторных переливаниях эритроцитюй массы, максимально лишенной лейкоцитов и тромбоцитов; удаление этих клеток необходимо с цельв-предупреждения негемолитических посттрансфузионных температурных реакций. Требовалось разработать эффективные, легко воспроизводимые в практике методы получения этой трансфузионной среды, взамен трудоемкого, неэкономичного и неэффективного метода, применявшегося в Службе крови.

Возрастающая потребность лечебных учреждений в гемотрансфузи-ончых средах сделала актуальной-задачу совершенствования действузо-щх. и изыскания новых консервирующих растворов, позволяющее длительно поддерживать обменные процссси в консервированной крови ка максимально криблияенсэм • к физиологическому уровне. Решение такой задачи позволишь бы повысить лечебную эффективность как цельной крови, так и ее компонентов, одновременно увеличив сроки их хранения в полноценном состоянии перед трансфузией. При этом следует отметить, что в соответствии с требованиями фарююмитета, оценка консервирующих свойств растворов и их влияния на качество компонентов крови не моает производиться в отрыве от оценки прежде всего самой консервированной крови.

- б -

ксе вышеизложенное определило цель и задачи настоящего исследования.

Цель и задачи исследования. Целью исследования явилось создание высокоэффективного консервирующего раствора, обеспечивающего длительную сохранность биологических и функциональных свойств крови, выделенных из нее полноценных компонентов.

В соответствии с целью Сыли поставлены следующие задачи:

1. За основе углубленного изучения и анализа консервирующих свойств используемых в практике Службы крови растворов ЦОЛИПК N7-6 и N12 усовершенствовать их рецептуры; провести сравнение морфофунк-циональной полноценности крови и ЭМ, консервированных на исследуемых растворах; разработать эффективные методы получения Щ, обед-ной лейксщгеаш и тромбоцитами.

2. Определить пути удлинения сроков хранения крови с помощью добавок в консервант метаболически активных веществ, обеспечивающих поддержание обменных процессов в клетках крови на более высоком уровне; выбрать эффективные и оптимальные концентрации добавок.

3. Разработать научнообоснованную рецептуру нового консервирующего раствора для длительного хранения крови, изучить его стабильность и безопасность в лабораторных условиях и в эксперименте.

4. Есследоззть ыорфофункциональную полноценность и жизнеспособность крови, заготовленной на новом гемоконсерванте, а также выделенной из нее ЭМ в процессе хранения; установить возможность получения других компонентов, пригодных для использования в клинике.

5. Изучить переносимость и лечебную- эффективность трансфузий крови и ЭМ различных сроков хранения, консервированных на новом растворе.

6. Разработать нормативную документацию на усовершенствованные и новый гемокоясерванты и внедрить их в медицинскую практику.

Научная новизна работы. На основании оптимально подобранных ингредиентов, в результате проведенных исследований разработан для практического применения новый в отечественной Слуабе крови, простой в технологии, высокоэффективный консервирующий раствор Циглю-фад, обеспечивающий длительную(до 50 дней в полимерных контейнерах и до 35 двей в стсазшиых бутылках) сохранность донорской крови и ЭМ. Установлена возьеояность (йхшщотарования заготовленной на нем крови на полноценные компоненты, сохраняющие функциональную активность. Доказала на экспериментальном и клиническом материале безопасность консерванта, его хорошая переносимость и выраженное

антианемическое действие крови и ЭМ, консервированных ва нем. В результате, эти гемотрансфузионные среды могут эффективно использоваться для лечения больных с острой и хронической анемией различной этиологии. Проведена клиническая оценка и установлено выраженное заместительное действие трансфузий крови не только обычных, но и длительных (35-50 дней) сроков хранения.

Установлена возможность промышленного производства первого в нашей стране консерванта для длительного хранения крови взамен одного из стандартных растворов, которая основана га воспроизводи. мости нового консерванта на заводах медпрепаратов и стабильности его физико-химических свойств в течение 2-х лет храневия в стеклянных бутылках и 1.5 лет в полимерных' контейнерах.

Доказана возможность повышения консервирующих свойств этого раствора и морфофункциональной полноценности заготовленной на нем крови с помощью введения в его состав никотиначида и аскорбиновой кислоты, что подтверждено положительным решением на заявку на авторское свидетельство (N2805870/13, 1980г).

Установлена фактически одинаковая сохранность цельной консервированной крови и выделенной из нее эритроцитной массы, доказана целесообразность изъятия левомицетина из состава отечественных стандартных гемоконсервантов и обоснована безопасность заготовки и хранения с ними донорской крови; усовершенствован состав и технология получения глшозо-фосфатного раствора, галогенного в основу нового консерванта для длительного хранения крови и 31

Диссертация выполнена в соответствия с тематикой КИР ДНМИГПК -БГНЦ за 1575М985гг, а также с отраслевой научно-технической программой С. 17 - "Раяработать и внедр'ггь з правшу эффективные методы трснсфуаяолзгнчее.'юй помогу населению стрелы" на 1986-1990гг.

Практическая значглюеть. Утвержден КЗ СССР и ваедрен с 1993г. в промышленное производстзо (взаьан одного из стандартных) новый гемоконсерзант Цигдкфад, обеспечивай^ сохранность крови и ЗЫ на яротикегии 35 дней хранения в стеклянных бутылках; получэно (протокол N12 от 29.08.91) разрешение Фаригоштета на ¡¿едше^ское применение зтого ^ксервгнта в полимерных контейнерах, позволят?« хранить кровь (ЭМ) до 50 дней, удлинение времени хранения крови в полноценном состоянии позволяет пьеть запасы крови (ЭМ), например, для ау-тотрансфузмй (что чрезвычайно важно как средство профилактики пост-трансфузионных реакций, заражения СПИД, вирусным гепатитом, цитоме-галовирусом). Кроме того, поязилась возможность уменьшения числа

требуемых доноров, брака крови и ЭЫ по истечении срока их годности.

Усовершенствованы, стандартизированы и внедрены в практику Службы крови гемококсерванты для массовой заготовки крови Глпгицир и Цитроглюкофосфат, что позволило уменьшить вероятность возникновения аллергических реакций у Сольных на трансфузии консервированной крови, а также гарантировать хорошую стабилизацию - и более высокий рН крови в процессе ее заготовки и хранения. Разработаны и переданы' в практику Службы крови простые и эффективные методы получения ЭМ, обедненной лейкоцитами й тромбоцитами.

Внедрение в практику. Разработаны и утверждены Ш СССР Временные фармакопейные статьи на г люкозо-цитратами раствор Глюгицир (ВХС 42-1064-80) взамен ЦОЛИПК N7-6, на глшозо-фосфатньй раствор Цитроглюкофосфат (ВВС 42-1137-81) взамен ЦОЛИПК N12, на новый глюкозо-фосфатный с аденином раствор Циглпфад (ВК 42-1985-90) взамен Цитроглюкофосфата. Из перечисленных гемоконсервантов раствор Глюгицир, как наиболее простой, по составу и легко воспроизводимый, рекомендован для производства не только на заводах медпрепаратов, но и в учреждения;: Службы крови при необходимости. С этой целью разработан и внедрен в практику в 1981 г. "Временный типовой Регламент производства раствора Глягицир в учреждениях Службы крови". Заготовленную на зтт растворе кровь целесообразно использовать для фракционирования на компоненты, в первую очередь, для получения концентрата тромбоцитов и факторов свертывания. Раствор Циглюфад, предназначенный для длительного хранения консервированной крови и выделенной из нее ЗЫ,. рациональнее использовать для обеспечения аутоге-мотрансфузий при плановых операциях с большой кровопотерей, для обменных транпфугий, для восполнения острой массивной кровопотери. Однако при необходимости, кровь на этом растворе может быть фракционирована на полноценные компонента

Разработаны и утверждены ЫЗ СССР Инструкции по заготовке и хранению донорской крови со стерильными растворами Глюгицир (1981г.), Цятроглгкофосфат (1981г.) и Циглпфад (1990г.); по заготовке и хранению эритроцнтной массы, выделенной из консервированной крови (1982г.); по заготовке зратроцитной массы, обедненной лейкоцитами и тромбоцитами (1987г.).

В процессе соверианствовгяш рецептур действующих консервантов с целью их внедрения в прагст?/ били разработаны и утверждены ЫЗ СССР Инструкции по клинической" применения крови с растворами Глягицир (1981г.) и Цитроглшзфосфат (1981г.), а также по клиническому

- У -

применению крови и ЗМ с новым раствором Циглюфад (1990г.).

Пензенским, Саранским и Курганским заводами медпрепаратов освоено промышленное .производство консервантов: Глюгицира - с 1981г., Цитроглшофосфата - с 19В1г. и Циглпфада - с 1990г..

Материалы диссертации включены в программу курса лекций врачей Службы крови, аспирантов, ординаторов ВГНЦ.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Совершенствование рецептур глпкозо-цитратного (ЦОЛЖК N7-6) . и гликозо-фосфатного (ЦОЛИБК N12) растворов позволило создать и вне

дрить в практику современные стандартные гемоконсерванты дхч массовой заготовки донорской крови, обеспечивающие ее лечебную эффективность и безопасность трансфузий.

2. Разработанный новый с отечественным адениноы гемокавсервант Циглюфад сохраняет морфофункциональные свойства крсви в пригодном для транефугий состоянии в течении 50 дней хранения в полимерных контейнерах и 35 дней в стеклянных бутылках. Доказана . возможность получения из fgraBH, заготовленной на новом консерванте, полноценных ■ компонентов.

2. применение раствора Циглюфад для заготовки консервированной крови (эритроцитной массы) позволяет получать, как показали клинические испытания консерванта, эффективные гемотрансузиоккые среды заместительного действия для лечения острой и хронической анемии.

Апробация работы. Результаты диссертационной работы доложены на научных сессиях ЦЕШ5ГПК (Москва 1981,1983,1985,1986,1937,1988гг), I Всесоюзном симпозиуме "Консервирование крови и ее компонентов" (Москва,1978г.), I Республиканской конференции Литовского научного обпрства геьатологов и трансфузиологов (Вильнюс, 1963?), II Всесоюзном съегде гематологов и трансфузпологов (Львов, 1985г), II Всероссийском съезде гематологов и тразсфузиолсгов (Челябинск,1986г), научной конференции -'Средства и методы биог.чец®]ической коррекции в гематологии я траасфузиолопш" (1&нск,1983г), научно-производственном совещании "Проблемы и перспективы разработки и клинического при менеша кровезаменителей и инфузионных растворов" (ЫоскЕа,1990г), III съезде гематологов и трачсфуэпорогов Узбекистана (Ташкент, 199Сг), III Всесоюзном съезде гематологов и трзлсфузшлогов (Киров, 1991г). Материалы диссертации доложены во время зарубежных команди-

iU

ровок на симпозиуме и научной конференции в городе Будапеште и в городе Бомбее (1985, 1986гг). Новый консервирующий раствор Циглюфад представлялся на ВДНХ СССР (1991г.).

Основные результаты настоящего исследования опубликованы в 50 печатных работах, в том числе в главе книги на английском языке, в 1 статье и в тезисах в зарубежных изданиях. Минздравом СССР утверждены 4 тс, ! ЗС, 8 инструкций.

Структура и объем работы. Диссертация изложена на 207 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, главы с описанием методов исследований, шести глав с изложением результатов собственных исследований, заключения, выводов и списка литературы. Текст иллюстрирован 23 таблицами и 12 рисунками. Библиография: 19? источников, из них 90 отечественных и 107 иностранных.

Материалы и методы исследования.

Исследование включает в себя лабораторный, экспериментальный и клинический разделы.

Объектами лабораторных исследований (около 800 опытов) являлись донорская кровь, консервированная на растворах ЦОЛИГК N7-6, ЦОЛКПК Ml2, Цотроглюкофосфат и Циглюфад, выделенные из крови компоненты - эритроцитиая масса (ЭМ), концентраты тромбоцитов (КТ), лейкоцитов (Ж), криопреципитаг и сами консервирующие растворы.

Кровь от доноров заготавливали в дозе 200-400 мл в стеклянные флаконы или полимерные контейнеры типа "Гемакон с исследуемым раствором в соотношении 4:1 и хранили при 4* С в течение 21-35-50 дней. Образцы крови к ее компонентов в условиях in vitro изучали с применением морфологических, физико-химических и биохимических методов

исследования.

В процессе хранения крови изучали морфологию эритроцитов в на-тивной капле крови при световой микроскопии, их поверхностную архитектонику методом электронной сканирующей микроскопии, злектрофоре-тическую подвижность эритроцитов (ЭЩ) с помощью прибора Opton, концентрацию общего гемоглобина цианметгемоглобиновым методом, свободного гемоглобина в плазые бензидиновым методом (Г.ЕДервиз, 1966г.), процент гемолиза вычислялся по формуле Hogman (1981г.).

Концентрацию внеклеточного калия измеряли методом пламенной фотометрии, величину рН-потенцкометркчески и с помощью аппарата

- и -

микро-Аструп при комнатной температуре, гематокритный объем - стандартным методом с помощью ыикрокапмлляров и центрифугирования при ЗСОО об/мин на специальной центрифуге фирмы Adams Redacrit. Концентрацию АТФ определяли лкциферин-люциферазным методом (Атауллаха-нов Ф. Л с соав. ,1981 г); 2,3-ДОГ - по методу Машковой НЕ. (1954г).

Нислородтранспортную функцию эритроцитов консервированной крови исследовали путем построения кривых диссоциации оксигемоглобина и определения значений с помощью аппарата микро-Аструп.

При изучении реологических свойств крови и ЭМ в процессе"хра-. нения определяли их вязкость при скоростях сдвига от 0.1 с"1 до 128 с"1, вязкость плазмы (с помощью сканирующего ротационного реометра фирмы Contraves, агрзгацию эритроцитов (Ваньков Д.Е., 1971г.), индекс регидности (Dintenfass L , 1981г.). Деформируемость эритроцитов изучали методом фильтрации эритроцитных взвесей через поли-карбоновые мембранные фильтры (фирма Nucleopore.CIBA) с диаметром пор 5 мкм.

Микроагрегаты в крови и ЭМ подсчитывали по методике, разработанной в Киевском НЙИГ1Ж (Тимченко ЕЕ , Петров М.М., 1985г.)

Изучение серологических свойств крови проводили по методикам, утвержденным для широкой практики.

Шсттрансфузионную выживаемость эритроцитов с помощью метки Сч-51 определяли по методике Шитиковой М. Г. и Тальской И.Е(1963г).

Для исследования функциональной полноцегаюсти КГ и КЛ их выделяли из крови в первые 1-3 часа после заготовки крови от доноров. Заготовку .КТ осуществляли двуш методами: из плазмы, обогащенной трс»«5оцитакм (ОТП) и из лейкотромбоцитарного слоя (ЛГС). Подсчет тромбоцитов и лейкоцитов проводили б камере Горяева с покс21>п светового микроскопа. ЬЬрфофункциональную активность тромбоцитов оценивали но их способности к агрэгации (индуцированной АДФ в концентрации 20 мкюль) и реакции на гипотонический шок (РГШ), по определенна поверхностной архитектоники тромбоцитов с помощью электронного микроскопа (Яоэлнец Г. И., Лобовская Л В., 1984г.). КГ хранили yt течение 24-72 часов при ксьяатной температуре в условиях постоянного перемешивания на мевалке-инкубаторе фирьш Helmer-Labs (Великобритания) при скорости■вращения 2 об/мин.

О функциональной полноценности лейкоцитов судили по сохранению поглотительной гиггивкости а&гоцйтирухкзих клеток и их переваривакцей способности методами Райта в модификация А. Г. Егорова (1949г.) и A. U. Фроловой .(1972г.).

Выделение криопрецштатата и определение активное^ фактора VIII производили (совместно с ЕЕЕвлектьевой и Л А. Анохиной) в первые 1-3 часа после заготовки крови от донора по методике, описанной в "Регламенте производства криопреципитата" (1979г.).

При усовершенствовании рецептуры консервантов стабилизирующую активность растворов оценивали визуально по наличию сгустков, видимых на границе плазмы с ЗЫ и на фильтре после фильтрования крови,, или нитей фибрина в плазме консервированной крови. Уровень осмотического давления в плазме контролировали криоскопически.

Для определения количества ионов цитрата- в консерванте N12 разработан (совместно с Щербаковой 11 и Солодовой А.Ф.) фотоколориметрический метод, основанный на реакции комплексообрааованЕя лимонной кислоты с ионами меди и железа в совместном применении. Реакция дает окрашенные продукты, которые можно колориметрироаать.

В исследованиях эффективности антимикробного действия левоми-цетина в консервирующих растворах и крови в бакпосевах анализировали результаты заражения исследуемых объектов грамположителышыи и граштрицательными микроорганизмами в различных концентрациях (золотистым стафилококком, белым стафилококком, устойчивым к левомице-тину, спороносной, кишечной и синегюйной палочками).

Совершенствование рецептур гемсконсервантов, изучение юрфо-функциональных свойств крови и ее компонентов при хранении в исследуемых растворах, организация клинических испытаний гемоконсерван-тов, разработка нормативных документов выполнены совместно с сотрудниками ВГШ£ проф. Аграненко Е А., к. м. н. Суворовой И. А., проф. Пушкарь Л. Е, к. б. н. Тибиловой ЕЕ, к. б. н. Марковой Е А., к. б. н. Трошиной ЕЕ, к. б. н. Крижевской Е Е, проф. Коэинцрм Р. И., к. б. н. Ряполовой ЕЕ, к. б. н. Борзовой Л. Е , проф. Горбуновой Е А., б. н. Лиховецвзй З.М., к.6. н. • Дригожиной Т. А., к.6. н. Балакиной Т.Д., к.м.н. Лавровой Л. П. Изучение приживаемости эритроцитов (меткой Сг-51) осущгствляли совместно с к.м.н. Шитиковой М.Г. и к. б. е. Цустовойт Л А. Эффективность антимикробного действия левомицетина в гемоконсервантах и функциональная активность лейкоцитов изучены совместно с проф. Голосовой Т. К и ¿б.н. Ермаковой Г. Л

Стабильность растЕоров лабораторных и опытно-прошшлеяных серий Глюгицвра, Дигроглнкофосфа^а и ЦиглЕфзда изучалась в соответствии с проектами соогветствущих Временных фармакопейных статей совместно с к.б.н. Ляйыан 0.Ц.(ЕГЩ) и к.6.н. Алексеевым ЕЕ и м.Н.С. Саплегой ЕТ. (ВНИИТЕРЩ.

В экспериментальном разделе исследований на лабораторных животных (около 600 животных) изучали безвредность консерванта Циглюфад в сравнении со стандартным раствором Цитроглюкофосфат по тестам: острая и хроническая токсичность, анафилактогенность, злйриотоксич-ность, пирогенность (совместно с к.б.н. Смирновым А.В., Лопыревой 0. И. (ВНИИТКГП), к.б.н. Авиловым А. а (ВГШО. Исследования проводили в соответствии с "Методическими рекомендациями по доклиническому изучению токсического действия новых фармакологических препаратов" (1984г.).

В клиническом разделе проанализированы результаты клинического испытания лечебной эффективности трансфугий крови и ЭК, заготовленных на консерванте Циглюфад. Клиническое изучение проводилось в 8 лечебных учреждениях у 496 больных с анемией различной этиологии (744 трансфузии) совместно с д. м.н. Жеребцовым JL А., д. м. н. • Смирновым C.B. (ЕГНЦ), Калеко С.П. (ВМедА), д. м. в. Сведенцовым Е. П. (Ки-ровИПК), проф. Мельниковой В. H ЛенИПК), д.м.н. Жуковой Ю. В. ( ЛИТО).

Результаты исследований обработаны методом вариационной статистики с применением критерия Стыодента

Результаты исследований и их обсуждение.

1. Усовершенствование рецептур действующих гемоконсервантов.

1.1. Гдикозо-цигратный раствор ЦОЖПК М7-6.

Результатами проведенного в соответствии "с современными требованиям» углубленного исследования свойств крови, заготовленной на растворе ЦОЛКГК К7-6, а также выделенной из нее ЭМ, вперзые в отечественной Службе крови было показано, что ЭМ сохраняет сзои свойства в основном в те же сроки, что и цельная кровь, т. е. 21 день. При этом обращающий на себя внюшиг уровень свободного гемоглобина в плзвме 8М с ге:латокрйтним числом в среднем 0.75, значительно превышавший таковой в цельной крови, объясняется тем, что весь свободный гемоглобин в ЭМ сконцентрирован в небольшом объеме оставшейся плазмы; при пересчете же на объем плазмы цельной крови разница между показателями практически невелика, т.е. процесс повреждения мембраны эритроцитов при хранении протекает с одинаковой интенсивностью и в цельной крови и в ЭМ. Количество свободного гемоглобина, вводимое реципиенту с дозой ЭМ является таким же, как и при трансфузии дозы цельной крови (не более 0.6 г/в к 21 дню

хранения), что не может оказывать отрицательного влияния на организм больного. Аналогичное явление наблюдалось и с нарастанием внеклеточного калия.

Помимо общепринятых показателей, характеризующих степень сохранности крови и ЗМ, проведено параллельное изучение уровня фосфорных фракций в эритроцитах крови и ЗМ, а именно АТФ и 2,3-ДОГ. Динамика изменения этих показателей позволяет косвенно судить о способ-' ности эритроцитов приживать в кровяном русле реципиента после трансфузии и отдавать кислород тканям.

Отмечена одинаковая тенденция постепенного снижения уровня АТФ в эритроцитах как в цельной крови, так и в ЭМ, выделенной из нее (разница не превышала 102). К 21 дню в эритроцитах цельной крови сохранялось 50.21 от исходного уровня АТФ, в ЭМ - 40Х. Эти результаты вселяли уверенность, что приживаемость эритроцитов, обедненных плазмой, долота быть такой же, как в цельной крови. Это предположение было подтверждено данными Талъской И. Н. с соав., 1973г..

Установлено быстрое с нижние концентрации 2,3-ДФГ в эритроцитах мевду 3 и 7 днем хранения, причем также почти с одинаковой скоростью в цельной крови и в ЭМ (54.5Х и 50.42 от исходных величин соответственно на 7 день хранения). Величина Р50 , отражающая степень сродства гемоглобина к кислороду, также резко снижалась в этом интервале вреизни. Цри этом отмечена корреляция в изменении ДФГ и величины Р5Э в эритроцитах крови. Эти данные исследований ин витро позволили считать, что максимальной способностью отдавать кислород ткааям эритроциты крови на растворе 7-6 обладают лишь в первые 3-4 дня хранения, т.е. в эти сроки они наиболее эффективны для трансфузий при острых гипоксических состояниях.

Изучено влияние на уровень фосфорных фракций консервированной крови температурного режима хранения крови 0° +1* С, который может иметь место в практике СЩ. при неисправности холодильников, в сравнении с обычнш 4*±2*С. Установлено, что при этом диапазоне температур набдхдается лучшая (на 10-201) сохранность уровня 2,3-ДЯГ в эритроцитах в сравнении с обычной температурой хранения и, следовательно, поддержание более высокой функциональной активности эритроцитов. Полученные результаты ииеюг практическое значение, поскольку хранение глюкозо-нитратной крови яри 0* +1° С даст возможность удлинить до 7-8 дней сроки вькоксй Функциональной активности ее эритроцитов, что важно при траасоузиологическом лечении острых гипоксических состояний. Крске того снигение температуры в камере холо-

дильника 'до О*С (например, при его неисправности) в практике СПК не вызовет повреждения крови.

Сравнительное изучение реологических свойств крови и ЭМ показало, что относительная вязкость последней при хранении возрастает в большей степени, чем в крови. Однако при заготовке 31 с величиной гематокрита 0.7-0. 8 не возникает каких-либо затруднений при ее переливании в обычных количествах (500-750 ил). Щзи веобхЪдимости трансфузий боль сих доз ЭЫ (при токе, сопровождающемся острой анемической гипоксией и др.) могут быть рекомендованы сочетания ее -с со. левыми растворами или кровезаменителями.

.Результаты бактериологического контроля ЗМ со сроком хранения до 21 дня во флаконах свидетельствовали о ее стерильности.

Трансфузии ЗН хорошо переносились больными, реакций и осложнений не отмечено. При оценке противоанемического эффекта не выявлено разницы между трансфузиями ЭМ ранних и поздних (до 21 дня) сроков хранения.

Эти данные послужили основанием для разработки "Инструкции по заготовке и хранению эритроцитной массы" (утв. 1Е СССР 15.02.82), • разрешающей удлинение срока ее хранения до 21 дня при 4*С, что имело болыюе практическое значение для решения проблемы оптимального использования этой гемотрансфузионной среды по ее прямому назначению - в качестве эффективного лечебного средства при анемии различной этиологии.

1.2. Совершенствование рецептуры геиоконсерзанта N7-6 - научно-практическое обоснование возможности массовой заготовки крови без антибактериальных препаратоз.

Один из ингредиентов раствора N7-6 - лзвомицетин был введен для предупреждения бактериального загрязнения крови в момент ее заготовки.

Однако, учитывая его аллергизирупцее действие на организм больиого, а также широкое использование в отечественной Службе кро-зи комплекса мер асептики при заготогке крови в стационарных и выездных условиях и применение в практике-гешкоксерванта заводского изготовления, был поставлен вопрос о возможности изъятия левомице-тина из состава раствора без ущерба качеству консервированной крови.

В результате комплексной (с участием 5 НИИПК и 18 СПК) научно-практической работы по изучению эффективности левомицетина е

составе консервирующего раствора установлено либо отсутствие, либо слабовыражевная антимикробная активность антибиотика; не обнаружено достоверной разницы между результатами бактериологического контроля крови, заготовленной на растворе с девомицетином и без него (840 исследований). Изучение морфофункциональных свойств крови, консервированной на растворе N7-6 без левомицетина, не выявило никаких особенностей в сравнении с контролем (.кровь на 7-6).

На основании изложенного была доказана целесообразность и безопасность изъятия левомицетина из состава гемоконсерванта; получено соотвЖтвуювдее разрешение Фармкомитета на исключение левомицетина. Номенклатурной комиссией Фармкомитета раствору N7-6 без левомицетина присвоено название Глюгицир.

Широкие клинические испытания кроаи, консервированной на Глю-гицире (2500л в 7 лечебных учреждениях), показали, что по своей лечебной эффективности она ни в чем не уступает крови, заготовленной -на растворе 7-6. Бактериологические исследования подтвердили ее полную стерильность.

На основании полученных данных разработана и утверждена НТД на •этот консервант - ЮС 42-1064-80, Инструкция по заготовке крови в бутылки со стерильным раствором Глюгицир (утв. 21.05.81), Временный Типовой Регламент производства раствора Глюгицир в учреждениях Службы крови (1981г.). Консервант выпускается в настоящее время Саранским и Пензенским заводами ыедпрепаратов в стеклянных флаконах и Курганским комбинатом "Синтез" в полимерных контейнерах. Заготовка крови в полимерной таре позволяет, по нашим данным, сохранять свойства этой крови и ЗЫ в течение 30 дней на допустимом для трансфузий уровне. Однако предельный сроком хранения оставлен 21 день. т.к. к 30-му наблюдается снижение АТФ в эритроцитах крови до 45. TL, а в ЗЫ до 53.6t. При чрезвычайных же обстоятельствах (отсутствие запасов крови или ЭМ) возможно продление срока до 25-30 дней, поскольку выявленные изменения свойств этих сред не являются критическими.

1.3. Глхкозо-фосфатный раствор ЦОЛИПК N12

Благодаря введении в рецептуру 3-х замещенного фосфата натрия, достигнуто превосходство консервирующих свойств раствора N12 по сравнению с N7-6 - благоприятное влияние на величину pH крови и сохранность ее фосфатных фракций в процессе консервирования, мень-

шее накопление свободного гемоглобина в плазме в процессе хранения. Проведенные одновременно по аналогичным тестам исследования ЗЫ, выделенной из крови на растворе N12, показали, что ЭМ (как и на растворе N7-6) почти не отличается по своим свойствам от цельной крови, из которой подучена, и может быть использована для трансфузий в те же сроки, что и цельная кровь. Установлено, что эритроциты крови на рец.Н12 значительно дольше и на более высоком уровне (по сравнению с кровью на 7-6) сохраняют способность отдавать кислород тканям (уровень 2,3-ДФГ в крови на рец.Ш2 на 10 день составлял*74% от исходного, в крови на 7-6 - 68Z уже на 3 день хранения). Еще более высокие (на 10-162) показатели этой фосфорной фракции определялись в крови на растворе N12 в условиях низких температур (Ö+1*C) на протяжении всего периода хранения.

На основании этих данных, полученных в условиях in vitro, нами сделан вывод о том, что при трансфузиях, целью которых является улучшение снабжения тканей кислородом, целесообразнее использовать кровь или ЭЫ на рец. N12 продолжительностью хранения до 7-10 дней, в то время как кровь на N7-6 в этих условиях наиболее эффективна в первые 3-4 дня хранения.

1. 4. совершенствование г лшозо-фосфатного раствора ЦОЛИПК N12.

Цри широком использовании гемоконсерванта N12 в Службе крови выявился ряд недостатков (наличие мелких сгустков в крови в следствие неполной стабилизации, низкий pH раствора, наличие лево-мицетина), которые потребовали его совершенствования. В результате, увеличено количество лимонной кислоты в прописи раствора с 7.5 г/л до 10. Ог/л, что надежно гарантировало антикоагулируицее действие консерванта на кровь на протяжении всего периода ее хранения; этим устранено появление сгустков в крови и затруднения при отделении плазмы из-за наличия в ней нитей фибрина. Контрольная заготовка в выездных условиях 85л консервированной крови и приготовление из нее компонентов подтвердила надежную стабилизацию крови. Одновременно с целью анализа точного количества лимонной кислоты в консерванте при его заводском производстве, был разработан новый фотоколориметрический ме'тод ее определения, в основе которого лежит реакция комплексообразования лимонной кислоты с солями меди и железа в их совместном применении. Реакция дает окрашенные продукты, которые можно колориметрировать. Ыетод позволяет определить количество

лимонной кислоты в консерванте с небольшой затратой исследуемого раствора, обладает достаточной точностью и воспроизводимостью, не требует много времени для исполнения и дефицитных реактивов. Метод включен в В» на усовершенствованный раствор.

Произведена корректировка рН консерванта с 4.5-5.0 до 5.5-5.9 (в среднем 5.7), одновременно выбран оптимальный режим стерилизации этого раствора при 106* в течение 45 минут, обеспечивающий его стерильность и соответствие эталону цветности.

Параллельно с раствором N7-6 проведена работа по изъятию лево. мицетина из состава консерванта N12, подтвердившая целесообразность и безопасность заготовки крови в раствор без антибактериального препарата.

кзрфофункциовальные исследования свойств крови, заготовленной на усовершенствованном растворе N12, показали его преимущества перед рец. N12 в старой прописи и Глпгициром в более высоких значениях рН крови на протяжении всего периода наблюдения, в более высоком уровне 2,3-ДОГ и Р50, особенно в первые 10 дней после ее заготовки, в меньшем накоплении свободного гемоглобина в плазме по сравнению с • кровью на Глюгицире.

Полученные данные послужили основанием для утверждения изменений в составе рецепта N12, которому в результате было присвоено название Цитроглпкофосфат (ЦГФ).

Клиническое изучение трансфузий крови, консервированной на этом растворе (160 трансфузий 73 больным в. дозах от 250 мл до 2 л различных сроков хранения) показало хорошую переносимость и лечебную эффективность этой крови, выражавшуюся в антианемическом действии, фи острых пшоксических состояниях, по нашему мнению, наибольший лечебный эффект возможен при трансфузиях крови СЭМ), заготовленной на растворе ЦГФ со сроком хранения до 8-10 дней; при умеренной гипоксии (операция, травма с умеренной кровопотерей) и хронической анемии наряду с кровезаменителями могут применяться трансфузии крови (Э10 более длительных сроков хранения.

На консервант Цитроглакофосфат разработаны и утверэдены МС 42-1137-81 и Инструкция по заготовке и хранению крови (1981). Производство раствора озвоено Красноярским и Саранским заводами мед-препаратов.

Одним из наиболее эффЕгстивюи видов ЗУ, предназначенной для больных, нуждающихся в повторной длительной гемотерапии, является ЗМ, максимально лишенная лейкоцитов к тромбоцитов (ЭЮЛТ). Нами

разработаны 2 метода ее получения. Первый метод позволяет использовать как свежезаготовлениую (1 сутки), так и хранившуюся (2-7 суток) консервированную кровь. В его основе лежит применение специального режима центрифугирования крови (1700е в течение И минут -для флаконов и 1250г в течение 20 минут - для контейнеров), который в сочетании с 3-х кратным (для свежезаготовленной крови) или 2-х кратным (для хранившейся) отмыванием эритроцитов физиологическим раствором обеспечивает удаление из ЭМ около 901 лейкоцитов и практически всех тромбоцитов. Второй метод получения ЭШЛТ состоит из . отмывания хранившейся в течение 2-7 суток ЭМ, оставшейся в результате фракционирования крови, на плазму и клеточные компоненты, и обеспечивает удаление примерно 92Х лейкоцитов, тромбоциты удаляются полностью. Простые и доступные методы получения ЭШЛТ позволяют быстрее, чем ранее, без особых трудовых затрат получить аре активную трансфузионную среду, применение* которой гарантирует предупреждение посттрансфузионных реакций у сенсибилизированных больных. В настоящее время методы широко используется в практике Службы крови в соответствии с разработанной и утвержденной в МЗ СССР Инструкцией •(N18-9/76 от 10.02.87). -

Таким образом, представленные материалы явились итогом работы по совершенствованию и стандартизации гемоконсервантов для массовой заготовки крови и ЭМ, которые длительное время применятся в Службе крови как основные растворы для консервирования донорской крови.

2. Разработка нового консерванта для длительного хранения крови в полноценном состоянии,

2.1. Изучение влияния добавок различных метаболически активных веществ на свойства консервированной крови с целью удлинения сроков ее хранения.

В качестве добавок исследованы отечественные аденин, никотина-мид и аскорбиновая кислота. Действие аденина, участвующего в синтезе АТФ в эритроцитах, необходимой для сохранения их жизнеспособности, изучено на образцах, полученных из двух источников сырья: калиевой соли триметилксантина и динитрила малоновой кислоты. Показано, что аденин из указанного сырья не уступает по своей чистоте и биохимической активности зарубежным образцам и является пригодным для целей консервирования крови.

Изучено также влияние никотинаыида, оказывающего благоприятное действие на поддержание биохимических, морфологических, электрокинетических свойств эритроцитов, и аскорбиновой кислоты-для под-дергания кислородтранспортной функции эритроцитов консервированной крови в процессе хранения.

фи изучении влияния названных добавок в качестве базового консерванта был взят раствор ЦГФ, контролем служила кровь на стан-' дартном консерванте ЦГФ. .

В результате исследований установлено, что добавление аденина (ЦГФА) в конечной концентрации 0.5мМ (0.34 г/л раствора) позволяет длительно (до 35 дней) и на высоком уровне поддерживать концентрацию АТФ в эритроцитах. (Рис ). На 28 день хранения она составляла 82.0*6.5Z, а аа 35 день - 5S. 0*4.4Z от исходного уровня. В контроле зге этот показатель в те же сроки бив равен лишь 40.0±8. б и 33. 5±14.0Z.

Сочетанное действие аденина и никотинамида (ЦГФАН) в оптимальной концентрации последнего 20мМ оказало благоприятное влияние на сохранность физико-химических и биохимических свойств крови. Результаты исследований показателей АТФ, гемоглобина и калия плазмы, рН крови и морфологического статуса эритроцитов показали преимущества консерванта, содержащего обе добавки по сравнению с введением одного только аденина.

Добавление аскорбиновой кислоты (в нестабильной форме) к консерванту ЦГФ с аденином обеспечивало высокий уровень 2,3-ДФГ -100Z от исходной величины даже на 21 день хранения и 802 - на 28 день. При этом концентрация АТФ также сохранялась высокой - 80% от исходного уровня на 21 день. Попытки стабилизировать аскорбиновую кислоту способами, пригодными для внутривенного введения препарата, (в соответствии с ГФ X, ст. 44) не увенчались успехом. Поэтому нам пришлось отказаться от использования этой добавки.

Таким образом, исследование влияния разных добавок-метаболитов обмена веществ показало, что наиболее благоприятным для крови является введение в состав базового глхкозо-фосфатного раствора аденина и никотинамида, но и включение одного аденина также достаточно эффективно. Раствор ЦГФАН имел преимущества по показателям рН, уровня калия и гемоглобина в плазме, а также электрофоретичзской подвижности эритроцитов, их морфологической сохранности, величине Р50 . Однако при сопоставлении с консервантом ЦГФА разница по всем показателям была статистически достоверной лишь в поздние сроки хране-

Рис. Уровень АТФ в эритроцитах крови, консервированной на растворах ЦГФАН (1), ЦГФА (2), ЦГФ (3).

ния, на 28 и 35 дни, а выявленные изменения в крови на ЦГФА не выходили за уровень предельно допустимых. %о касается сохранения та- кого важного показателя, характеризующего биологическую полноценность эритроцитов, как АТФ эритроцитов, то консервант ЦГФА обеспечивал его поддержание на высоком уровне в течение 35 дней хранения. В итоге мы остановились на варианте с добавлением одного аденина. Такой выбор был нами сделан с целью упрощения состава будущего нового консерванта, технологии его производства в заводских условиях, а также методов количественного контроля ингредиентов и качества препарата при сохранении в то же время эффективности консервирующего действия на кровь. Вместе с тем, сочеганное применение аденина с никотинамидом моиет оставаться как резерв одного из путей совершенствования гемоконсервантов в будущем.

2.2. Совершенствование состава раствора Цитроглккофосфат

Использованный в качестве основы для нового разрабатываемого гемоконсерванта стандартный глюкозо- фосфатный раствор ЦГФ требовал совершенствования технологии производства, а именно, отказа от применения едкого натра для корректировки требуемой величины рН консерванта. Получение нужной величины рН - самая трудоемкая, длительная и небезопасная часть процесса производства этого раствора в заводских условиях. Кроме того, едкий натр является дефицитным веществом.

С целью совершенствования технологии производства ЦГФ необходимо было исключить из прописи раствора едкий натр, сохранив одновременно рН консерванта, а такж имеквдеся количества глюкозы, неорганического фосфата и ионов цитрата, обеспечивающих полноценность консервированной крови. В итоге исследовательской работы (28 вариантов рецептуры) была выработана пропись раствора, которая удовлетворяла всем требованиям и позволила сделать технологию консерванта простой, безопасной, легко воспроизводимой и экономичной.

В составе раствора применена оптимально подобранная композиция двуаамешинного цитрата натрия и лимонной кислоты, обеспечивающая требуемый рН (в среднем 5.7) и хорошую ангикоагулирухцую активность раствора. Остальные ингредиенты оставлены без изменений, как в стандартном растворе ЦГФ. В результате обеспечена изоосмолярность плазмы крови, консервированной ва этом модифицированном растворе (ЦГФ-28), достигнуты требуемая величина рН (5.7) раствора, гарантированная стабилизация и морфофувкциональная полноценность крови в процессе хранения. Упрощенная технология производства раствора Ц№-28 была апробирована в заводских условиях. Растворение ингредиентов консерванта в воде для инъекций сразу обеспечивало требуемую величину рН, что значительно уменьшало время и трудозатраты на приготовление раствора Модифицированный таким образом раствор ЦГФ явился базовым для нового консерванта для длительного хранения крови, в состав которого включены: двузамещэвный цитрат натрия 14. Ог/л, лимонная кислота 1.365г/л, глюкоза 30. Ог/л, трехзамещенный фосфат натрия 7.5г/л и аденин 0.34г/л. РН раствора 5.5-5.9, в среднем 5.7; соотношение раствор: кровь-1:4. Номенклатурной комиссией Фармкомитета этому раствору дано название Циглюфад.

3. Новый консервирующий раствор с аденином Циглюфад для длительного хранения донорской крови.

Наличие в консерванте аденина позволило увеличить сроки хранения заготовленной на ней крови с 21 до 35 дней хранения при 4® С в стеклянных бутылках. Приживаемость 35-дневных эритроцитов через сутки после трансфузии составляла 84.029.62, а период их полукизни . 27.213.5 дней, что убедительно свидетельствует о высоких консервирующих свойствах раствора.. По показателям 2,3-ДФГ и Р50 , характеризующим кислородгранспортную функцию крови, можно полагать, что ее эритроциты сохраняет способность транспортировать кислород тканям в течение первых 12-14 дней хранения; для консерванта ЦГФ этот срок составляет 7-10 дней. Эти выводы нашли еще большее подтверждение в экспериментальных исследованиях ЕС. Ярочкина.

Исследовано влияние полимерной тары на свойства консервированной крови. Установлено, что использование раствора Циглюфад в •ПВХ-контейверах позволяет (табл.1) сохранять морфофункциональную полноценность крови на протяжении 50 дней хранения. Всестороннее исследование свойств крови показало достоверное преимущество полимерной тары перед стеклянной. При этом приживаемость эритроцитов Циглюфад-крови в контейнерах составляла на 42 день 81.0±3.51, на 50 - 77.5110.61, период их полужизни был равен 24.612.1 и 21.3*5.8 дням соответственно. Эти результаты приживаемости коррелируют с высокими цифрами концентрации АТФ. Так на 35, 42 и 50 дни хранения определялось 8а 7±б. АХ, 77.8*8. 4% и 63.9±5.77. АТФ от исходного уровня соответственно. Изучение электрокинетических и реологических свойств крови также показало преимущество полимерных контейнеров перед стеклянными бутылками, хотя даже при длительных сроках хранения Циглюфад-крови в стеклянной таре эти показатели не превышали предельно допустимых значений.

Несомненно, что пластик контейнеров благоприятно влияет на состояние мембраны эритроцитов ввиду меньшей травматизации их во время заготовки и хранения по сравнению со стеклом бутылок, а также благодаря его газопроницаемости.

На основании полученных результатов изучения свойств крови, заготовленной на новом растворе Циглюфад, нами установлены предельно допустимые сроки ее хранения - 35 дней в стеклянных бутылках и 50 дней в полимерных контейнерах.

ПОКАЗАТЕЛИ КРОВИ, КОНСЕРВИРОВАННОЙ НА РАСТВОРЕ ЦИГЛЮ1-АД В ПЛАСТИКАТНЫХ КОНТЕЙНЕРАХ И СТЕКЛЯННЫХ ФЛАКОНАХ (М ± б)

Таблица 1

|-1-1-г

Дни |Чис-1 Свободы. Нв | хра | ло | плазмы 1 ие- |о!ш-| г/л |

т-:—г

| Калий | | 1. плазмы | | мМ/л |

I I

----1-1

I I

АТФ | Сфероциты | Прижива-% I X I емостъ

Гемолиз X

РН

1шя |тов I __I_1_

П Л

0 24 |0.09.± 0.04 (0.04

7 15 10.11 + 0. 02*10.06

21 16 )0.27 * 0.06*10.13

35 21 ¡0. 46 ± 0.31*|0.15

42 21 |0.54 ± 0.22 |0.26

50 19 ¡0. 60 ± 0.24 |0.30

0 17 10.06 ± 0.03 10.03

7 17 |0. 23 ± 0.17 10.11

21 16 )0. 53 ± 0.23 10. 26

35 17 |0. 96 ± 0.29 |0.52

ПЛАСТИКАТНЫЕ КОНТЕЙНЕРЫ

± О. 17 |6. бб ± С Т Е К Л Я Н

0. 08*| 8.16 ± 5. 5 0.04*| 9.5 ± 1.6 0.09 ¡15.7 0.09 ¡25.2 0.07 |29. а 0.08 |37.7 Н Ы Е 0.05 | 0.07 112.2 ±3.7 0.04 123.4 1 6.2 0.05 138.0 4 2. 0

± 2.6* ± 4. 2* ± Б. 2 16.0 ФЛАКОН 5. 4 * 1.3

100 | 0 | 125.6 ±. 7.5 | 0.5 ± 0.3 | 114.0 ± 12. Б | 4.8 ± 1.7*| 83.7 4 6.4*111.2*2.6*1

77. 3 63.9

8.4 5.7

118.1 126.3

3. 4 6.0

Ы

100

124. О 4 33. Б 105. О ± 30. 2 69.0 ± 13.4

181.0 ±3.5 |77. 6 1 10. 6

I

I 2. О ± 2. О 120.0 ±3.2 141.0 ±3.0

I

184.0 ±9.0

го

* - различия по соответствующим показателям в контейнерах и флаконах достоверны

Доказана полноценность компонентов, выделенных из крови, консервированной на растворе Циглюфад.

При изучении свойств ЭМ установлено, что по всем основным показателям она сохраняет свою полноценность в те же сроки, что и кровь (табл. 2). Однако необходимо отметить, что уровень плазменного гемоглобина в ЭМ в стеклянных бутылках нарастал с большей скоростью, чем в крови, и достигал высоких значений (2.24г/л) к 35 дню, даже после пересчета на гематокрит цельной крови. Вместе с тем, процент гемолиза в этот " срок хранения не превышал предельно допустимый по литературным данным уровень - IX. В ЭМ он был равен 0.64±0.032, а в крови 0.59^0.042. Тем не менее, мы сочли целесообразным ограничить в практике срок использования ЭМ для переливаний 28 днями (в стеклянных бутылках).

ЭМ в ПВХ-контейяерах практически по всем показателям сохраняет свою полноценность в те же сроки, что и цельная кровь, т. е. 50 дней. Однако, как и в стеклянной таре, срок применения ЭМ в практике следует ограничить с учетом величин свободного гемоглобина в плазме. По нашим данным, эта величина на 35 день составляла 4.12г/л, что в .пересчете на гематокрит плазмы цельной крови равно 1.44,2г/л, а в процентах составляет 0.202. Хранение ЭМ до 42 дней увеличивало процент гемолиза до 0.652, к 50 дню - до 0. 752, оставаясь при этом в пределах, допустимых для трансфузии. Полученные результаты согласуются с литературными данными. Однако, учитывая достаточно высокие цифры свободного гемоглобина в плазме ЭМ, хранящейся в ПВХ-контей-нерах, мы считаем целесообразным ограничить срок ее применения в лечебной практике 35 днями; в экстренных ситуациях, когда нет другой зритроцитсодергалей среды, возможно использовать ЗМ до 42 дней хранения.

Изучены серологические свойства" эритроцитов Циглюфад-крови с целью установления активности в изосерологических реакциях специфических агглюгинабельных свойств и возможности появления неспецифических реакций в процессе длительного хранения с аденином. Установлено, что серологические свойства крови сохраняются до 50 дней хранения и не зависят от • испытуемого вида консерванта (в качестве сравнения исследовали кровь на ЦГФ и Глюгадире). Установлено также, что тепловые пробы (с желатином, на чайке Петри) при определении резус-фактора для консервированной крови не пригодны (свертывание крови). Предложено использовать вместо тепловых проб методику с полит люгашом, утвержденную в 1979г.

Таблица 2

ПОКАЗАТЕЛИ ШРЗОФУНИШОНАЛЬНОЙ ПОЛНОЦЕННОСТИ ЗРИТРОЦИТНОЙ МАССЫ С ГЕМАТОКРИТОМ 0.75-0.8 В СРАВНЕНИИ С КРОВЬЮ. ЗАГОТОВЛЕННЫХ НА КОНСЕРВАНТЕ ЦИГЛЮВД В СТЕКЛЯННЫХ ФЛАКОНАХ (п-9, М±б)

I . . - . г................ 1 .. „ ! АТФ |

I Трансфу- 1 Дни Сферо- Гемо- К+ 2 от исход-|

| знойная | исследо- цить, РН лиз, плазмы. ной концен-|

I среда | вания X г мМ/л трации |

1 о 0 7.12 0.03 11.0

| Эритро- 0 0.12 0.02 1.2 100.0 |

| цитная | 28 19.4 6.58 0.28 75.0 73.9 |

| масса 6.75 0.10 0.02 15.3 24.0 !

1 35 34.5 6. 54 0. 54 113.5 56.3 |

12.0 0.20 0.03 21.0 13.4 I

1 о 0 7.10 0.03 5.4

0 0.15 0.01 1.28 100.0 |

| Кровь 26.0 6.75 0.41 ' 33.0 82.0 |

| 28 2.4 0.10 0.12 2.40 17.0 |

р<0.1 <0.001 <0.02 <0.001 <0..02 |

41.0 б. 62 0.59 38.0 59.0 |

1 35 3.0 0.15 0.04 2.0 13.4 I

1 ( р>0. 2 >0.5 I <0.01 <0.001 <0.01 | I |

Исследована возможность выделения концентратов тромбоцитов из Циглюфад-крови двумя методами: из обогащенной тромбоцитами плазмы и из лейкотромбоцитарлого слоя. Установлено, что из крови на новом растворе возможно выделение концентратов тромбоцитов и сохранение их в удовлетворительном морфофункциональном состоянии в течение 48-72 часов при комнатной температуре в условиях постоянного автоматического перемешивания.

Доказана возможность выделения из крови, консервированной на новом растворе, криопреципитата с активностью VIII фактора свертыва-. ния, близкой по значению этому показателю крови на Глпгицире и ЦГФ.

Из крови на новом гемоконсерванте можно выделять концентрат лейкоцитов в функционально полноценном состоянии. Фагоцитарная активность таких лейкоцитов сохраняется на достаточно высоком уровне в течение 24-48 часов хранения при 4*с; Цхэцент фагоцитирующих клеток в эти сроки составлял 83-792.

Таким образом, результаты исследований позволили заключить, что кровь, заготовленная на новом растворе Циглюфад, сохраняясь в полноценном состоянии в течение 35 дней в стекле и 50 дней в поли-• мерных контейнерах, может быть использована и как источник заготовки основных полноценных компонентов крови - эритроцитной массы, концентратов тромбоцитов и лейкоцитов, криопреципитата. • Добавление отечественного аденина в консервирупций глхкозо-фосфатный раствор для крови не оказывает отрицательного действия на процесс выделения и сохранения функциональной полноценности компонентов, не влияет на активность фактора VIII в криопреципигате й на сохранность серологических свойств эритроцитов.

С целью изучения безвредности нового консерванта проведено всестороннее биологическое изучение свойств Циглюфада на 5 видах животных, показавшее, что вводимый в дозах многократно превышающих терапевтичесгае, он является безвредным препаратом. Циглюфад не оказывает неблагоприятного влияния на жизненно важные органы и системы животных при изучении острой и хронической токсичности, не обладает пирогенным, аллергизирущим, тератогенным, эмбриотокси-ческим и канцерогенным действием.

Новый консервант по своему составу и технологии получения является легко воспроизводимым в условиях промышленного производства. Химико-аналитические, биологические и бактериологические исследования этого раствора показали, что он стабилен в течение 2-х дет хранения в стеклянной и 1.5 лет хранения в полимерной таре. В эти сро-

ки препарат отвечает всем требованиям проекта ВХС по всем показателям.

4. Изучение переносимости и терапевтической эффективности трансфузий крови и ЭМ, заготовленных на новом растворе Циглюфад.

Клиническое изучение трансфузий крови и ЗЕ, заготовленных на Циглюфаде, проведено в 8 лечебных учрзвдениях. Всего осуществлено 744 тргкефузии крови (ЗМ) со сроками хранения до 35 дней в стеклянных бутылках и до 50 дней в ПВХ-коятейнерах 496 больным с анемией различной этиологии. Дозы перелитой кровк (ЭМ) колебались от 250 мл до 2750 мл, при этом 40.91 трансфузий произведено с использованием крови (ЭМ) обычных сроков хранения, 52.8% - со сроками 22-35 дней хранения и 6.32 - 35-50 дней.

Установлена хорошая переносимость переливаний крови и ЭМ. Количество отмеченных посттрансфузионных реакций (22 на 744 трансфузии - 2.95%) не превышало таковое при использовании крови, ваготов-.ленной на стандартных консервантах - 3-42. Бри этом реакции отмечались у больных, имевших в анамнезе множественные гемотраасфузии и, по всей вероятности, были вызваны аллосенсибилизацией больных предшествующими переливаниями крови, но не ее качеством. Оценка результатов, которую осуществляли с учетом состояния больных, температуры их тела, показателей красной крови, билирубина, трансамиказ, свободного гемоглобина плазмы, анализов мочи до и после трансфузии, показала, что крсзь и ЗМ, заготовленные на растворе Циглкрад, являются полноценней трэнсфузлонш&л .средами. Они обладают выраженным антианемическим действием даже в поздкие срс:ш хранения (более 22 дней), алалопгчдым действию крови ра:л;и^ сроков хранения, не сказывая повреждающего влияния на функцию печени и почек. . Бо своему терапевтическому действию кровь и ЭЫ длительных сроков хранения нз растворе Циглюфад не уступают эффекту от трансфузии крови (ЭМ), заготовленных на стандартных консервантах Глюгицир и Цитрсглхкофосфат обычных сроков хранений.

На основами всесторонних лабораторных, экспериментальных и клинических ксслсдовацкй крови и ЭМ,' консервированных на новом растворе Циглюфад, нами разработана и утверждена в МЗ СССР нормативная документация на этот консервант - ШС и Инструкции по заготовке и и хранению, клиническому применению крови и ЗМ, консервированных на

этом растворе. Выпуск первой промышленной партии нового раствора, взамен одного из стандартных - Цитроглюкофосфата, начат в 1993 г.

Внедрение нового гансерванга в широкую практику имеет большое значение, поскольку удлинение срока хранения консервированной на нем крови и ЭМ дают определенные организационные, лечебные и экономические преимущества. Использование этого раствора в практике Службы крови будет способствовать сохранению свойств консервированной крови и ЭМ на максимально приближенном к физиологическому уровне, а следовательно, повышению лечебной эффективности их трансфу-.зий, особенно первых двух недель хранения, при острых и хронических анемических состояниях; снизит брак крови и ЭМ, связанный с истечением срока их годности; увеличит ресурсы гемотрансфузионных сред без соответствующего увеличения количества доноров; создаст более благоприятные условия для оптимального управления запасами крови (удовлетворение потребностей лечебной сети, распределение и перераспределение запасов крови и др.).

Особо следует отметить значение нового консерванта для заготовки и хранения аутологичной крови, которую в настоящэе время все •чаще применяет в хирургической практике взамен донорской. Из приведенных выше материалов очевидно, что консервант Циглюфад является . наиболее перспективным для этой цели, т.к. дает возможность накопления аутологичной крови для обеспечения обширных оперативных вмешательств, сопровождающихся болыюй кровопотерей.

Для применения в практике современной Службы крови нами рекомендуется 2 консерванта: Глюгицир - для заготовки крови как основного источника получения клеточных компонентов и плазмы; Циглюфад -для длительного хранения донорской и аутологичной крови и ЭМ, с целью создашш их запасов и последухшэго использования в клинической практике (плановой хирургии или чрезвычайных ситуациях). При необходимости из Циглюфад-крови, в том числе аутологичной, южно выделять, кроме ЭМ,полноценные концентраты тромбоцитов, лейкоцитов, криопреципигат.

В заключение следует заметить, что представленный в данной работе материал отражает результат многолетней научно-практической работы по непрерывному процессу совершенствования консервирующих кровь растворов. И новый геиоконсервант Циглюфад является закономерным итогом этого процесса.

выводы

1. Разработан и внедрен в промышленное производство (ВК 42-1S85-90) новый консервант Циглюфад для длительного хранения крови на основе усовершенствованного раствора Цитроглюкофос'фат с отечественным аденином. Циглюфад обеспечивает сохранность заготовлен--ной на нем крови в биологически полноценном состоянии в течение 50 дней в полимерны:: контейнерах и 35 дней в стеклянных бутылках.

2. Доказана идентичность биохимических свойств и эффективность для консервирования крови ..рйраацов.ртечественного аденина, полученных из двух источников сырья - динитрила малоновой кислоты и триме-тилксантина.

3. Показана эффективность добавок к консерванту других метаболитов обмена веществ - никотанамида и аскорбиновой кислоты для повышения морфофункдиональной полноценности крови и удлинения срока ее хранения. Установлены оптимальные концентрации добавок.

4. Определена возможность использования крови, консервированной на новом растворе, как источника получения полноценных компонентов: концентратов тромбоцитов со сроком хранения до 72 часов и концентратов лейкоцитов со сроком хранения до 48 часов, зритроцит-ной массы, сохраняющей свои ыорйсфункциональные свойства в течение 42 и 35 дней в пластикатвой и стеклянной таре соответственно. Установлена воамохнссть выделения из плазмы этой крови криопреципитата с такой же активностью VIII фактора свертываемости, как в криопре-ципитате из крови на стандартных растворах.

5. В эксперименте ва жвоткьн и в клинике ьри лечении острой и хронической анемии доказала безвредность Цяг.Есфада, хоровая" переносимость и вцраженное заместительное действие траасфузий заготовленной на нем крови и эрятроцитпой ма^сы. Показано, что антканеми-ческий эффэкт от переливаний крбвн и гритрогдакой иэсся длительных сроков хранения (22-50 дкей) достоверно не отличается от тэкЬвого малых и средних сро;мв (до 21 дня), ч^о чрезвычайно валаю для обеспечения аутотраясфузий з бол¿azx оиъэ;Х1Х при ¡иачовыл операциях.

6. Усовгпгнствсвшы составы глккозо-ц::тргткогс (ЦСДИК 7-6) и глюкозе-фосфганого (ДОМНИ Н1£) растворов для массовой заготовки донорской крови, что ловксило их безопасность, ух^таило г:о;:сервяру-Щие свойства, а следовательно, лечебную эффективность трансфузий заготовленной крови. Эти усовершенствованные растворы утверждены и

внедрены в практику в качестве стандартных гемококсервантов Глюги-цир и Цитроглшофосфаг (БСС 42-1064-80; 1С 42-2678-89; БК 42-1137-81).

7. Установлена одинаковая степень сохранности цельной крови, заготовленной на стандартных консервантах, и зритроцитной массы, выделенной из нее, что позволило сохранять эритроцитную массу (с величиной гематокрита 0.7-0.8) и использовать в лечебной практике в течение тех же сроков, что и цельную кровь.

8. Разработаны эффективные, легко воспроизводимые методы получения зритроцитной массы, обедненной лейкоцитами и тромбоцитами. Методы широко применяются в Службе крови бывшего Союза в соответствии с утвержденной "Инструкцией по заготовке зритроцитной массы, обедненной лейкоцитами и тромбоцитами" (N18-9/76 от 10.02.87).

Список работ, опубликованных по теме диссертации.

1. Абшюв А. Е , Аграненко В. А., Суворова И. А., Голубева В. Л. и др. Изучение биологических свойств нового гемоконсерванта с аде-нином. //Материалы 58-й научн. сессии ЦНИИГ1К -1986. -с. 43-54.

2. Аграненко К А., Виноград- Финкель Ф. Р., Суворова И. А., Голубева В. Л., Щербакова Л Н. и др. Усовершенствование гемоконсерванта N12. //Материалы 3 съезда гемат. и трансфуз. Узбекистана. Ташкент. 1975.-с. 69-71.

3. Аграненко К А., Виноград-йинкель Ф. Р., Суворова И. А., Голубева £ Л и др. Сравнительная характеристика зритроцитной массы и цельной крови, заготовленных на разных гемоконсервантах. //Пробд. ге-матохи перех крови. -1976. -N8. -с. 37-42.

4. Аграненко Е А., Голосоза Т. В., Голубева К Л , Ыарголина А. К и др. О целесообразности изъятия левомицетина из растворов для консервирования крови.//Пробл. гематол. и перелив, крови.-1976.-N8.-с. 49-54.

5. Аграненко В А., Голубева В .1, Виноградова И. Л. и др. Изменение кислородно-транспортной функции эритроцитов в процессе хранения крови, консервированной разньш методами. //Пробл. гемагол. и перех крови. -1977. -N8. -с. 6-11.

6. Аграненко В А., Голубева В. Л. Цитроглюкофосфат - эффективный консервирующий раствор для крови. //Сов. Мед. -1979. -N8. -с. 19-22.

7. Аграненко В. А., Голубева В. Л., Суворова И. А., Пушкарь Л. Е н др. Внедрение новых гемоконсервантов в практику отечественного здравоохранения.//Материалы 54-й научн. сессии ЦНИИГПК. -1932.-с. 26-28.

8. Аграненко В А.. Голубева В. Л., Суворова И. А., Тронмна Е М. • и др. Оптимизация методов консервирования и фракционирования крови на компоненты. //Сб. "Средства и методы биоспецифической корреирд в гематологии и транефузиояогки". Ыинск. -1988. -с. 6.

9. Аграненко Е А., Голубева Е Л., Суворова К. А., Тибилова ЕЕ, Сведенцов Е.А., Дутова НЕ Зффзктивность траясфузий крови и зритроцитной массы длительных сроков хракания.//Материалы III ■ Всесоюзного съезда гематол. и трансфуз. Киров.-1991.-т. 2.-с. 432-453.

10. Аграненко Е А., Голубева Е Л., Волкова Р. К к др. Изыскание оптимальных методов получения из консервированной крови зритроцитной массы с максимальным удалением лейкоцитов и тромбоцитов. //Материалы 59-й научн.сессии ЦНШШ-1987.-с. 14-16.

11. Аграненко Е А., Суворова И. А., Голубева Б. JL , Маркова R А. и др. Научные обоснования для удлинения сроков хранения эритроци-цитной массы.//Материалы 54-й научн. сессии ЦНИИГПК.-1982.-с. 24-26.

12. Аграненко Е А., Суворова И. А., Голубева Е X , Кочергин ЕЕ и др. Новый консервирующий раствор для крови с аденином, ни-котинамидом и фосфатами.//Гематол. и трансфуз.-1985. N2.-с. 12-18.

13. Аграненко Е А., Суворова И А., Голубева Е X , Тибилова Е Е и др. Разработка нового консервирующего раствора для крови на основе аденина, обеспечивающего длительные сроки ее хранения 'при

. положительной температуре. //Материалы 58-й научи, сессии ЩШГПК. -1986. -с. 34-35.

14. Аграненко Е L , Суворова И. L, Голубева Е JL , Тибилова ЕЕ и др. Новые методы консервирования крови и эритроцитной массы. //Сб. "Новое в гематологии и трансфузкологии". Тез. докл. 111 съезда гематол. и траясфуз. Узбекистана. Ташкент. -1990. -с. 38-40.

15. Аграненко Е А., Суворова И. А., Кошевая Е Е , Тибилова Е Е . Голубева Е X , Маркова El и др. Морфофункциональная полноценность крови и концентрата эритроцитов, консервированных в

• полимерных контейнерах и стеклянных флаконах. //Гематол. и транс-фуз. -1987. -N7. -с. 28-33.

16. Аграненко Е А., Суворова И. А., Маркова Е А., Голубева Е Л и др. Новый консервирующий раствор для донорской крови. //Материалы 53-й научн. сессии ЦНИИГПК. -1981. -с. 22-24.

17. Agranenko У. A., Suvorova i.A., Tibi 2 ova N.N., Markova N. A., Golubeva V. L New preservatives containing adenine and nicotinanide for blood and packed red ceils. //Haematology and Transfusiology. Ed. O.K Savrilov. -1986.-p. 89-102.

18. Аграненко E A., Тибилова E E , Голубева EX и др. Оптимизация методов консервирования, фракционирования и использования донорской крови и эритроцитной массы. //Тез. докл. 111 Всесоюзного съезда гематол. и трансфуз. Киров. -1991. -т. 1. -с. 42-43.

19. Галкин Е Е , Голубева Е Л. , Атауллаханов Ф. И., Казанец Е. Г., и др. Проблемы контроля качества компонентов крови. //Гематол. и трансфуз. -1991. -N1. -с. 37-40.

20. Голубева Е Л. Новый консервирующий раствор для длительного хранения донорской и аутокрови. //Инф. бия. "Новое в трансфузиологии". М.-1992.-с. 16-18.

21. Голубева Е X , Азовская С. Ф., Черняховский Ф. Р. и др. Кислородно-транспортная функция консервированной крови разных сро-

ков хранения. //Материалы 1 Всесоюзного съезда гематол. и трансфуз. Баку. -1979. -с. 453.

22. Голубева Е Л , Аграненко Е А., Азовская С. А., Виноградова И. JI Эффективность трансфузий консервированной крови и ее связь с сохранением дыхательной функции. //Материалы Всесоюз. конф. "Вопросы трансфузиологии .ч гематологии в педиатрической практике". Баку.-1979 с. 15-16.

23. Голубева Е JL , ВолкоЕа Р. И. , Балезина .1Е , Трошина Е Ы. и др. Дуги рационального использования консервированной крови.//Сб. трудов "Научнс-практически? аспекты фракционирования крови". Л. -1989 с. 8-16.

24. Голубева Е JL, Суворова И. А., Сухова А. Г., Олдурова С. Е О влиянии температуры хранения консервированной крови на содержание 2,3-Д55Г и АГФ в эритроцитах.//"Пробл. гематол. и перелив, крови.-1976 N12.-с. 26-30.

25. Голубева Е JL, Суворова И. А., Ляйыан О. М., Промышленные гемоконсерванты и их упаковка //Сб. "Актуальные пробл. производства кровезаменителей, консервантов крови, гормональных й органотерапев-• тических препаратов". -¡А -1982. -с. 83-84.

26. Голубева R А., Суворова И. А., Минина Л. Т., ¡Макарова Е. ?! и др. Производство гемоконсервантов.//Гематол. и траасфуз.-198а-N10. с. 58-61.

27. Голубева Е JL , Суворова И. А., Трошина Б. Ц., Тибилова Е Е , Маркова Н. А. Усовершенствование гемоконсерваита Цитроглвкофосфат. //Гематол. и тргзсфуз.-19S9.-Nl.-c. 47-50.

28. Голубава Е Л, Суворова И. А., Аграненко Е А. Соваршенство-вание технологии приготовления глюкозо-фос^аткогс рэсгвора _ кг_ч основы нового гемогонссрванта. /Л&териалк IV Всесо;язой' научно- тех-нич. конф. "Актуальные проблемы улучшения качеств ¡фоьезааенителей, консервантоз хрози, гормональных препаратов". -1391.-е. 131-132.

29. Голубева ЕЛ., Трошма Е14 , "Суворова й. А. я др. Зффгктив-:ше методы получения эритроцитной шасси, обедненной лейкоикгал и тромбоцитами.//Тез."до;сл. 11 Всесоюзного съезда гематол."и трансфуз. Челябинск. -198G. -с. 101-102.

30. Zhukova L., Kalnoerzs V., Golubeva V. Autologous blood transfusion in orthopaedic surgery. //Abst. of 3-rd Regional Congress European Region. -Praga. -1991.-p. 224.

31. Zhukova L. , Kalnberzs V. , Klezis V. , Lacis A., Golube-va Y., Suvorova I. Autoblood transfusion in total hip replacement.

//I Liet vos travmatology-ortopedi Suvaziavimas PRANES1MY RINKI NYS Klaipeda -1992. -p. 86.

32. Жукова IQ Е, Калнберз К. В., Аграненко Е А., Тибилова а Е , Голубева В. Л. Возмещение операционных кровопотерь аутокровьв, заготовленной на новых гемо консервантам. //Тез. докл. научн. конф. "Актуальные вопросы аутотрансфузий крови и ее компонентов". С-П.-1991.-с. 19.

33. Кочергин П. М., Черненко Г. Т., Аграненко В. А., Смирнов А. В., Суворова К А., Водина З.К , Лопырева О. И., Худякова Н. Е , Голубева R JL и др. Фармакологическая характеристика консерванта крови "Цигжфад". //Tea. докл. 11 Укр. съезда гемотол. и трансфуз. Киев. -1986г. -с. 32-33.

34. Лиховецкач 3.1L , Еригожина Т. А., Горбунова Н. А., Аграненко RА., Суворова И.А., Голубева aJL и др. Реологические свойства консервированной крови в процессе хранения в полимерных контейнерах и стеклянных флаконах.//Гематол. и трансфуз.-1989.-N3.-с. 46-51.

35. Маркова Н. А. , Тибилова Н. И., Аграненко В. А., Суворова И. А., Голубева В. Л. и др. Повышение эффективности консервирования эритроцигной массы и цельной крови в присутствии никэтинамида и

- аденина //Материалы 55-й научн. сессии ЦШШГПХ. -1983. -с. 34-35.

36. Насыбуллина X. С., Голубева В. Л., Олдурова С. а и др. Применение крови, заготовленной на глккозофосфатных консервантах с лимонной кислотой, при обменных и других грансфузиях. //Труды XII Международ. Конгр. по. перел. крови. М. -1972. с. 42-43.

37. Олдурова С. Е , Суворова И. А., Сухова А. Г., Голубева В. Л. Сравнительная характеристика крови, заготовленной на консервантах N12 и 7-6. //Цюбл. гемат. и перел. крови. -1975. -N1. -с. 40-43.

38. Полякова Л П., Аграненко В. А., Суворова И. А., Голубева Е Л., Борэова JL Е и др. Сравнительная характеристика эритроцитиой взвеси с различными плазмозаыещахщими растворами. //Пробл. гематол. и перел. крови. -1280. -N1. -с. 11-15.

39. Ряполова И. Е , Лобовская Л Е , Суворова И. А., Голубева Е Л.

Балезина Л. Е и др. Морфофункциональная полноценность эритроцитов и

тромбоцитов, выделенных ив крови, заготовленной на консерванте Циг-люфад. //Гегатол. и трансфуз. -1988. -N10. -с. 56-62.

40. Суворова И. А., Аграненко Е А., Тибилова Е Н., Маркова Н. А., Голубева ЕЛ. и др. Изучение функциональной полноценности компонентов, полученных из кроеи, заготовленной на новом консерванте Циглюфад.//Материалы 59-й научн. сессии ЦНИИГПК.-1987.-с. 16-18.

41. Суворова И. А., Алексеев Е В , Саплева Е Т., Веремьев И. Е ,

- з& -

Лопырева 0. И. , Аграненко К А., Голубева К Л. к др. Циглюфад - новый консервант для донорской крови. //Материалы научно-произв. совещания ВНШТКГП "Пробл. и перспективы разработки и клинического применения кровезаменителей и инфузионных растворов. "М.-1990. -с. 97-101.

42. Суворова И. А., Голубева К Л. , Аграненко Е А. и др. Изменения в рецептуре консерзанта N12 для производства в заводских условиях. //Материалы 47 научн. сессии ЦОЛИЛК. -1975. -с. 17-18.

4а Суворова И. А., Голубева Е Л , Тальская Л Е , Воробьева Г. С. и др. Свойства эритроцитаой массы, хранившейся без плазмозамещаюеде-го раствора в течение 21 дня при 4'С. //Сб. материалов I Всесоюзного симпоз. "Консервирование крови и ее компонентов". Ы.-1981.-с. 29-31.

44. Суворова И. А., Голубева Е Л. , Аграненко В. А., Виноград-Зинке ль Ф. Р. Характеристика крови, заготовленной на Дитроглвко-фосфате. //Там хе. с. 23-25.

45. Суворова И. А., Голубева Б. Л. , Тибилова Е Е , Аграненко Е А. и др. Разработка единых методов доклинического изучения консервирующих растворов для крови и зритроцитной массы.//Материалы 55-й научн. сессии ЦНИШЖ. -1983. -с. 47-48.

46. Суворова й. А., Маркова Е А., Голубева ЕЛ , Платонова О.Е Сукясян Г. Е функциональная полноценность крови, консервированной на растворе с адезиком и никотинамидом. //Материалы 11 Всесоюзного съезда гематол.и трансфуз. Львов. -1985. -с. 40-41.

47. Суворова И. А. , Зоренко Е Ю., Голубева Е Л. , Тибилова Е К , Крижевская Ю.Е и др. Первый опыт клинического применения малых и больших /35 дн. / сроков хранения крови и зритроцитной массы, заготовленных на новых консервирующих растворах. //Материалы 60-й научн. сессии ЦНИИПЖ. -1988. -С. 24-25.

48. Сычкова Л. & , Дерендяева Т. Н. , Абилов А. Е , Новожилова Л. А. Голубева Е Л., Суворова И. А. и др. Изучение тератогенных и мутагенных свойств гемококсерганта Циглюфад. //Там хе, с. 26-28.

49. Тибилова ЕЕ , Голубева ЕЛ. , Раполова К.Е , Козинец Г. К. Морфофункциональнач полноценность крози и зритроцитной массы при хранении в различной таре. //Виосовместишсть /на рус. и ада гл. яз/. -1993. -N2.-0. 82-92.

50. Черняховский & Р., Аграненко Е А. , Митерев Ю. Г., Ступин ЕС., Сузорова И. А., Иванова А. Е, Керёбцов' Л А., 'Голубева Е Л. Трансфузии зритроцитной массы различных"сроков хранения при анемических состояниях.//Гематол. и трансфуз. -1987..-НЗ. -с. 28-33.