Автореферат и диссертация по медицине (14.00.15) на тему:Комплексная оценка эффективности применения аутогенных клеток стромы лимфатических узлов и лазерного излучения при коррекции лимфатических отеков конечностей (экспериментальное исследование)
- Ученая степень
- кандидата медицинских наук
- ВАК РФ
- 14.00.15
Автореферат диссертации по медицине на тему Комплексная оценка эффективности применения аутогенных клеток стромы лимфатических узлов и лазерного излучения при коррекции лимфатических отеков конечностей (экспериментальное исследование)
На правах рукописи
Сапрыкйна Екатерина Сергеевна
КОМПЛЕКСНАЯ ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ ПРИМЕНЕНИЯ АУТОГЕННЫХ КЛЕТОК СТРОМЫ ЛИМФАТИЧЕСКИХ УЗЛОВ И ЛАЗЕРНОГО ИЗЛУЧЕНИЯ ПРИ КОРРЕКЦИИ ЛИМФАТИЧЕСКИХ ОТЕКОВ КОНЕЧНОСТЕЙ (ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ)
14.00.15 - патологическая анатомия 14.00.27 - хирургия
Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук
003468602
Саратов - 2009
003468602
Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Самарский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию».
Научные руководители:
доктор медицинских наук, профессор Колсанов Александр Владимирович; доктор медицинских наук, профессор Жуков Борис Николаевич.
Официальные оппоненты:
доктор медицинских наук, профессор Степанов Сергей Алексеевич; доктор медицинских наук, профессор Островский Николай Владимирович.
Ведущая организация: Федеральное государственное учреждение «Институт хирургии имени A.B. Вишневского Росмедтехнологий».
Защита состоится //йс?2009 года в часов на заседании диссертационного совета Д 208.094.01 при ГОУ ВПО Саратовский ГМУ Росздрава по адресу: 410012, г. Саратов, ул. Большая Казачья, 112.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО Саратовский ГМУ Росздрава
Автореферат разослан «Д0»ГиЦМЛ009 г.
Ученый секретарь
диссертационного совета
доктор медицинских наук, профессор
Маслякова Г.Н.
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы
Лимфедема - распространенное социально значимое заболевание. По данным ВОЗ, данной патологией страдает около 10 % населения. J.Caslcy-Smith (1980) считает, что около 300 миллионов человек во всем мире страдают от различных форм лимфедемы. Основная группа пациентов - женщины молодого и среднего возраста. Соотношение заболевших женщин и мужчин составляет 3:1 - 5:1 (Заварина И.К. и соавт., 2006). Число вновь выявленных больных возрастает с каждым годом (Борисов A.B., 2007; Foldi М. et al., 2005; Warren AG et al., 2008; Garfeln E.S. et al., 2008), причем тенденции к снижению уровня заболеваемости не наблюдается (Аничков М.Н. и соавт., 1983; Бубнова H.A., 2008; Clodius L. et al., 1990). Социальная значимость обсуждаемой темы велика и обусловлена тем, что большинство больных - это люди трудоспособного возраста (96%), для которых чрезвычайно важна реабилитация (Любарский М.С. и соавт., 1998; Поташов Л.В. и соавт., 2000; Бубнова H.A. и соавт., 1992, 2005;). Пациентам с лимфедемой приходится лечиться долго и, зачастую, с минимальным эффектом (Богомолов А.Д., 1987; Любарский М.С. и соавт., 2001).
Эффективность лечения больных лимфедемой, как считают многие авторы, зависит от адекватной оценки состояния лимфатических коллекторов, лимфатических узлов и индивидуального подхода к выбору тактики лечения (Савченко Т.В., 1989; Абалмасов К.Г. и соавт., 2000; Бубнова H.A. и соавт., 2003, 2006; Olszewski W.L. et al., 2002; Witte M. H. et al., 2002; Foldi M., 2005).
В настоящее время в мире накоплен достаточно большой опыт лечения больных с лимфедемой конечностей, разработаны разнообразные диагностические методики, способные с достаточной степенью достоверности оценить состояние лимфатического коллектора конечностей, степень функциональных изменений, возможности их коррекции (Фионик О.В., 2007; Szuba A., Rockson S.G., 1998).
На сегодняшний день известно множество методов лечения больных с лимфатическими отеками конечностей (медикаментозный, физиотерапевтический, компрессионный, хирургический). Однако большинство существующих методов лечения требуют использования специальной дорогостоящей аппаратуры, наличия высококвалифицированных профильных специалистов, что можно обеспечить лишь в крупных специализированных научно-исследовательских центрах (Поташов Л.В. и
соавт., 2000; Ишенин Ю.М. и соавт., 2005; Фионик О.В., 2008; Campisi С., 1999). При этом эффективность предлагаемых методов коррекции патологического процесса остается невысокой (Покровский A.B. и соавт., 2005; Бубнова H.A., 2008; Posner T.N., Smith N.A., 2000; McGuinriess C.L., Burnand K.G., 2001). Вопрос об эффективности лечения лимфедемы и затратах на его проведение является важным для государственного здравоохранения.
В последнее время низкоинтенсивное лазерное излучение стало объектом пристального внимания медиков; по мнению многочисленных авторов, оно оказывает положительное влияние на самые различные биологические процессы. По данным Т.В. Кончуговой (1995), Г.Е. Брилль, И.О. Бугаевой, Н.В. Богомоловой (2003, 2005), инфракрасное лазерное излучение оказывает стимулирующее влияние на генетический аппарат лимфоидных клеток, способствует активации тимоцитов и лимфоцитов. Литературные данные подтверждают ведущую роль микроциркуляции в осуществлении биологических эффектов низкоинтенсивного лазерного излучения (Жуков Б.Н. и соавт., 1985,1995, 2006; Gourgoulatos Z. et al„ 1989; Lindsberg P.J. et al., 1989). По данным P.C. Lievens (1988), после лазерного воздействия происходит более быстрая регенерация лимфатической системы, что дает основной дренирующий и противоотечный эффекты лазеротерапии.
Современная медицина широко использует биотехнологические методы для лечения тяжелых повреждений различных органов. Использование культивированных клеток человека и созданных на их основе тканевых конструкций открывает уникальную возможность применения их в клинической практике. Применению клеточной и тканевой трансплантации, направленному на коррекцию лимфооттока, уделяют все большее внимание в современной лимфологии.
На современном этапе вопрос применения клеточных и тканевых технологий в коррекции лимфатических отеков конечностей еще не достаточно изучен и требует дополнительных научных исследований. Поиск новых способов и схем лечения пациентов с лимфедемой конечностей является весьма актуальной задачей в современной хирургии.
Методы лечения пациентов с лимфатическими отеками конечностей постоянно совершенствуются и пополняются новыми разработками. Большее предпочтение на современном этапе отдается комбинированному лечению пациентов с указанной патологией. Данная работа посвящена отработке новой комбинированной методики
коррекции лимфатических отеков конечностей в эксперименте, что и позволило сформулировать цель и задачи настоящего исследования.
Цель исследования
Улучшить результаты коррекции лимфатических отеков конечностей путем отработки в эксперименте методики применения низкоингенсивного лазерного излучения и культуры аутогенных клеток стромы лимфатических узлов.
Задачи исследования
1. Разработать методику моделирования острого лимфатического отека конечности в эксперименте.
2. Провести комплексную оценку эффективности применения низкоинтенсивного лазерного излучения как самостоятельного метода в коррекции лимфатических отеков в эксперименте.
3. Провести комплексную оценку эффективности применения низкоинтенсивного лазерного излучения при совместном использовании с трансплантацией культуры аутогенных клеток стромы лимфатических узлов в коррекции лимфатических отеков в эксперименте.
4. В сравнительном аспекте оценить эффективность применения низкоинтенсивного лазерного излучения как самостоятельного метода и при сочетании с культурой аутогенных клеток стромы лимфатических узлов в коррекции лимфатических отеков в эксперименте.
5. Изучить морфологические особенности реакции тканей паховой области экспериментального животного в ответ на трансплантацию культуры аутогенных клеток стромы лимфатических узлов и лазерное воздействие.
Научная новизна работы
Впервые разработана методика моделирования острого лимфатического отека конечности в эксперименте путем интраолерационного удаления пакета паховых лимфатических узлов (Удостоверение на рационализаторское предложение № 372 от 22.12.03, выданное ГОУ ВПО «Самарский государственный медицинский университет Росздрава»).
Впервые разработан способ хирургической коррекции острого лимфатического отека конечности с использованием культуры аутогенных клеток стромы лимфатических узлов (патент РФ на изобретение № 2280461 от 27.07.2006).
Впервые разработан способ хирургической коррекции острого лимфатического отека конечности с применением аутогенных клеток стромы в сочетании с лазерным излучением (Удостоверение на рационализаторское предложение N2 626 от 17.11.08, выданное ГОУ ВПО «Самарский государственный медицинский университет Росздрава»).
Проведена комплексная морфологическая оценка новообразованной соединительной ткани после применения низкоинтенсивного лазерного излучения и культуры аутогенных клеток стромы лимфатических узлов.
Впервые проведена сравнительная оценка эффективности способов коррекции лимфатических отеков конечности при использовании низкоинтенсивного лазерного излучения и при его сочетании с трансплантацией культуры аутогенных клеток стромы лимфатических узлов.
Изучены морфологические особенности реакции тканей паховой области экспериментального животного в ответ на трансплантацию культуры аутогенных клеток стромы лимфатических узлов и лазерное воздействие.
Научно-практическая значимость работы
В эксперименте разработана методика применения низкоинтенсивного лазерного излучения в сочетании с использованием культуры аутогенных клеток стромы лимфатических узлов для коррекции лимфатических отеков конечностей и обоснована ее высокая эффективность.
Доказан более выраженный эффект от сочетанного применения культуры аутогенных клеток стромы лимфатических узлов и низкоинтенсивного лазерного излучения по сравнению с использованием низкоинтенсивного лазерного излучения в качестве самостоятельного метода.
На модели лимфатического отека у белых крыс изучены морфологические особенности реакции тканей паховой области экспериментального животного в ответ на трансплантацию культуры аутогенных клеток стромы лимфатических узлов и лазерное воздействие.
Публикации и внедрения
По теме диссертации опубликовано 12 работ, из них 2 в рецензируемых научных изданиях, рекомендованных ВАК Минобрнауки РФ; 1 работа - в зарубежной печати. Получены патент РФ на изобретение и удостоверения на 2 рационализаторских предложения.
Реализация результатов
Полученные научные результаты исследования используются в работе сердечно-сосудистого отделения клиники госпитальной хирургии Самарского государственного медицинского университета; в преподавании курса хирургических болезней студентам и курсантам кафедр госпитальной хирургии, оперативной хирургии и клинической анатомии с курсом инновационных технологий; при выполнении экспериментов на базе Института экспериментальной медицины и биотехнологий ГОУ ВПО «Самарский государственный медицинский университет Росздрава».
Апробация диссертации
Основные положения работы доложены на межрегиональной иаучно-праггической конференции с международным участием «Санкт-Петербургские научные чтения - 2004» (Санкт-Петербург, 2004); Международном конгрессе Европейской ассоциации банков ткани (Чехия - Прага, 2004); заседании Самарского областного научного общества хирургов им. В.И. Разумовского, № 819 (2004); II Всероссийском симпозиуме с международным участием «Клинические и фундаментальные аспекты тканевой и клеточной терапии» и конференции «Теория и практика клеточных биотехнологий» (Самара, 2004); II съезде лимфологов России (Санкт-Петербург, 2005); научной конференции молодых ученых «Аспирантские чтения» (Самара, 2006, 2007); расширенных заседаниях кафедр госпитальной хирургии, оперативной хирургии и клинической анатомии с курсом инновационных технологий (Самара, 2007, 2008); III съезде лимфологов России (Москва, 2008).
Объем и структура диссертации
Диссертационная работа изложена на 151 странице машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, общей характеристики материалов и методов в эксперименте, результатов собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, практических рекомендаций, списка литературы.
Список литературы включает 258 источников, из них 182 отечественных, 76 зарубежных.
Работа иллюстрирована 53 рисунками, 5 диаграммами.
Положения, выносимые на защиту
1. Применение низкоинтенсивного лазерного излучения в качестве самостоятельного метода коррекции лимфедемы конечностей позволяет добиться
регресса экспериментального лимфатического отека за счёт открытия резервных капилляров и стимуляции процесса неоангиогенеза.
2. Применение низкоинтенсивного лазерного излучения в сочетании с использованием культуры аутогенных клеток стромы лимфатических узлов позволяет ускорить процесс регресса экспериментального лимфатического отека и добиться практически полного его купирования за счет более активного процесса открытия резервных капилляров и стимуляции процесса неоангиогенеза.
ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы исследования
Эксперименты выполнялись на базе Института экспериментальной медицины и биотехнологий ГОУ ВПО «Самарский государственный медицинский университет Росздрава» (директор Института - профессор Л.Т. Волова).
Экспериментальный раздел работы выполнен на 48 беспородных половозрелых белых лабораторных крысах. Масса животных - 150-200 г. Отбор в серии наблюдения был случайным.
На первом этапе проводили наблюдение за серией экспериментальных животных (п=3), не подвергая их какому-либо воздействию, с целью изучения макро-и микроскопических особенностей строения паховых лимфатических узлов и окружающих тканей в норме, особенностей расположения лимфатических коллекторов. Опытным животным проводили хромолимфографию с подсчетом общей площади лимфатических сосудов в полях зрения микропрепарата.
На втором этапе моделировали острый лимфатический отек конечности в эксперименте. После создания модели острого лимфатического отека (на 84-е сутки после удаления паховых лимфатических узлов) выводили опытных животных (п=3) из эксперимента. В дальнейшем этим животным было проведено морфологическое исследование мягких тканей оперированной конечности с целью изучения характера изменений в тканях в процессе формирования лимфатического отека конечности.
На третьем этапе экспериментальные животные с созданной моделью острого лимфатического отека конечности были разделены на 3 серии.
За животными 1-й серии (контрольной) (п=14) после моделирования лимфатического отека конечности наблюдали в течение всего эксперимента.
У животных 2-й серии (п=14) проводили воздействие лазерным излучением без введения культуры аутогенных клеток стромы паховых лимфатических узлов.
В 3-й серии (п=14) животным после моделирования лимфатического отека вводили культуру аутогенных клеток стромы паховых лимфатических узлов и осуществляли контактное воздействие низкоинтенсивным лазерным излучением на паховую область оперированной конечности.
Максимальная длительность эксперимента составляла 7 месяцев.
Итак, для изучения возможности применения низкоинтенсивного лазерного излучения и аутогенных клеток стромы лимфатических узлов в коррекции лимфедемы конечностей всем экспериментальным животным выполняли моделирование лимфатического отека конечности с последующей коррекцией его различными способами. Моделирование острого лимфатического отека конечности у животных осуществляли путем удаления паховых лимфатических узлов единым блоком с окружающей жировой клетчаткой.
Для морфологического подтверждения наличия отека проводили микроскопическое исследование иссеченного сектора мягких тканей бедра оперированной конечности. В условиях операционной экспериментальному животному давали эфирный наркоз, затем проводили иссечение послойною сектора мягких тканей на уровне средней трети бедра оперированной конечности. Иссеченный фрагмент помещали в 10%-ный нейтральный формалин на 24 часа. Далее материал обезвоживали, обезжиривали и заливали в парафин в гистологическом автомате по общепринятой методике (Меркулов Г.А., 1961). С парафиновых блоков готовили несколько срезов толщиной 5 мкм на 10-15 предметных стеклах.
Для окрашивания микропрепаратов применяли растворы красителей, приготовленные по общепринятым прописям (Пирс Э., 1962; Лилли Р.Д., 1969; Сапожников А.Г., Доросевич А.Е., 2000): гематоксилин и эозин, пикрофуксин по Ван-Гизон, кислотный орсеин, применяли методику импрегнации серебром. Гистологические срезы выполняли в поперечном направлении. В препаратах определяли количество лимфатических сосудов, расширение и деформацию лимфатических сосудов и капилляров, клеточную инфильтрацию лимфогистиоцитарного характера, фиброз клетчатки, увеличение количества фибробластов и развитие клеточного и внеклеточного склероза, высчитывали общую
площадь лимфатических сосудов в полях зрения при помощи окулярной тест-сетки Автандилова.
Для подтверждения наличия отека оперированной конечности и для выявления динамики отека выполняли следующие методы обследования: волюметрия конечности и измерение окружности конечности на уровне средней трети бедра.
Для оценки лимфатического русла конечности экспериментальному животному проводили хромолимфографию (определение характера распространения красителя по тканям) путем введения красящего вещества (1%-ная метиленовая синь) в объеме 0,1 мл инсулиновым шприцем в 1-й межпальцевой промежуток задней лапы.
Для морфологического подтверждения увеличения числа активно функционирующих лимфатических капилляров и образования новых лимфатических сосудов и капилляров проводили микроскопическое исследование иссеченного сектора мягких тканей бедра оперированной конечности животным 2-й и 3-й серий.
Для изучения морфологической картины новообразованной ткани выполняли гистологическое исследование. Обращали внимание на ее структуру, измеряли линейные размеры клеток в двух взаимно перпендикулярных направлениях.
Гистологические срезы толщиной 5-7 мкм изучали светооптически и телеметрически с помощью камеры CCD КОСОМ KCC-310PD и светового микроскопа Nicom ALPHAPHOT-2 YS2-11 (Japan).
Удаленные лимфатические узлы при моделировании лимфатического отека конечности использовали для получения культуры клеток стромы. Клетки выращивали в культуральных флаконах Corning (производство США) объемом 25 см2 при 37°С в присутствии 5% СО1 в средах MEM и RPMI-1640 с добавлением 10%-ной фетальной бычьей сыворотки (ООО «Биолот»). В работе использованы инвертированный микроскоп Биолам П-2-1, термостаты и С02-инкубаторы фирмы Sanyo (Incubator MIR-262), ламинарный бокс (БАВп-01 «Ламинар-С») с вертикальным потоком воздуха II класса защиты.
Полученную культуру клеток стромы лимфатических узлов вводили животным 3-й серии (п=14) после моделирования лимфатического отека конечности и его стабилизации. Во всех случаях доза клеток в водимой суспензии составляла 300 тысяч клеток в 0,2 мл 0,9%-ного стерильного раствора хлорида натрия (по методике Г.В. Яровенко, В.В. Российской, 2005, 2006, 2007). Трансплантацию суспензии аутогенных клеток стромы паховых лимфатических узлов проводили инъекционным
путем подфасциально в паховую область оперированной конечности и на 10-е сутки после введения культуры клеток контактно воздействовали низкоинтенсивным лазерным излучением (длина волны - 830 нм).
В эксперименте после моделирования лимфатического отека конечности животным 3-й серии на 10-е сутки после введения культуры клеток и животным 2-й серии проводили контактное воздействие (излучатель соприкасается с кожным покровом) инфракрасным низкоинтенсивным лазерным излучением в паховой области оперированной конечности. С этой целью был использован лазерный аппарат AJI - 01 «Семикон», мощностью 30 мВт, длиной волны - 830 нм (инфракрасный диапазон). Режим работы - непрерывный, экспозиция - 3 минуты, курс воздействия -10 сеансов; частота - через день (Б.Н. Жуков, Н.А. Лысов, 1993).
Статистическая обработка результатов выполнена при помощи пакета статистической обработки STATISTICA 6 ©StatSoft, Inc. (2001), с использованием программ Microsoft Excel Vista, Biostat.
Первой методикой, примененной к массиву данных, была программа описательной статистики. Были изучены средние величины в группах наблюдения, величины среднего квадратического отклонения. Нормальность распределения наблюдений оценивалась по методикам Шапиро-Вилка, Колмогорова-Смирнова. Достоверность сравнения результатов в группах наблюдения подтверждена методами параметрической статистики - t-критерий Стьюдента с поправкой Бонферрони для множественных сравнений с контрольной группой.
Для интегральной оценки выраженности уменьшения отёка и скорости её развития применили методику вычисления площади под кривой объёма конечности (area under curve, AUC).
Выявленные закономерности и связи изучаемых параметров между группами и признаками были значимыми при вероятности безошибочного прогноза Р = 95% и более.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ На первом этапе эксперимента проводили наблюдение за серией животных (п=3), не подвергая их какому-либо воздействию. Выявили, что состояние опытных крыс в ходе всего эксперимента не менялось, было удовлетворительным.
На 42-е, 74-е, 103-и сутки было выведено по одному животному на каждый срок. Проводили морфологическое исследование, в ходе которого выявили, что
макро- и микроскопическая картины у всех животных были схожими. При макроскопическом исследовании получено: в паховых областях обеих конечностей рядом с бедренными сосудами визуализировался пакет паховых лимфатических узлов серовато-розового цвета, окруженных жировой клетчаткой в количестве 2-4, округлой формы размером 0,2 до 0,6 см.
При микроскопическом исследовании у экспериментальных животных обнаружено, что лимфатические узлы имеют хорошо выраженную капсулу, представленную фибробластами, коллагеновыми и эластическими волокнами; каркас состоит из нежных ретикулярных волокон. Внутрь от капсулы отходят соединительно тканные перегородки (трабекулы), связанные с капсулой. В структуре узла определяли хорошо различимые корковое и мозговое вещества, мякотные тяжи и синусы. На срезах узла, проведенных через ворота, определяли периферическое, более плотное корковое вещество, состоящее из лимфатических узелков, а также центральное более светлое мозговое вещество, образованное мозговыми тяжами и синусами. Наиболее многочисленной формой из клеточных элементов, которыми представлены лимфатические узлы, являются лимфоциты и макрофаги. В структуре узла определяется также развитая сеть трабекулярных сосудов и сосудов мякотных тяжей.
В ходе эксперимента была приведена хромолимфография. Через 30 секунд после инъекции витального красителя в 1-й межпальцевой промежуток происходило контрастирование поверхностных лимфатических коллекторов. Через 1 минуту после введения красителя прокрашивались глубокие коллекторы. Через 1,5 минуты наблюдалось прохождение красителя в лимфатические узлы (появление красителя в синусах узлов). Далее краситель перемещался по выносящим лимфатическим сосудам на переднюю брюшную стенку и через 4,5 минуты уже визуально не определялся.
После выполнения хромолимфографии производили морфологическое исследование. Осуществляли забор сектора мягких тканей конечности с лимфатическими узлами.
При исследовании в синусах лимфатических узлов определяли следы красителя. Визуализировали лимфатические сосуды со следами красителя в мягких тканях конечности и жировой ткани, окружающей лимфатические узлы.
При выполнении подсчета общей площади лимфатических сосудов в полях зрения этот показатель составил 503± 13,8 мкм2.
На втором этапе эксперимента у серии животных (п=3) моделировали острый лимфатический отек конечности путем удаления паховых лимфатических узлов.
Через 4 суток после удаления паховых лимфатических узлов отмечали нарастание отека; показатели отека составили, по данным измерения окружности оперированной конечности, 1,3±0,026 см; по данным волюметрии, - 4,8±0,078 мл (р<0,05). Максимальных цифр показатели отека достигали в среднем на 20-е сутки (по данным измерения окружности оперированной конечности и данным волюметрии 1,6±0,04 см и 6,0±0.03 мл, р<0,05, соответственно), после чего происходило уменьшение отека со стабилизацией его к 42-м суткам (показатели, по данным измерения окр>жности оперированной конечноети и данным волюметрии, - 1,2±0,01 см и 4,5±0,1 мл, р<0,05, соответственно). Контрольные измерения на более поздних сроках эксперимента (84-е сутки) подтверждают стабилизацию отека и сохранность его на прежних цифрах (рис. 1).
4 сутки 20 сутки 42 сутки 84 сутки
Рис. 1. Динамика отека оперированной конечности в зависимости от срока эксперимента (по данным измерения окружности конечности и волюметрии).
Морфологическое исследование мягких тканей оперированной конечности экспериментального животного, проведенное на 84-е сутки исследования с целью подтверждения наличия отека, показало увеличение числа лимфатических сосудов и их дилатацию, наличие клеточной инфильтрации лимфогистиоцитарного характера и развитие клеточного и внеклеточного склероза. Также отмечался умеренный фиброз клетчатки с расширением лимфатических сосудов. Описанные изменения в тканях характерны для лимфатического отека.
Выполняли подсчет обшей площади лимфатических сосудов в полях зрения микропрепарата. Выявлено, что во всех сериях животных, у которых производили
удаление паховых лимфатических узлов с формированием модели лимфостаза, этот показатель составил 540,22± 14,4 мкм2. Сравнение полученного показателя с показателем у животных в норме (503±13,8 мкм2) свидетельствует о статистически значимом увеличении (р<0,05).
Таким образом, использование методики удаления паховых лимфатических узлов позволяет в эксперименте создать эффективную модель острого лимфатического отека.
На третьем этапе эксперимента за животными 1-й (контрольной) серии в ходе всего эксперимента вели регулярное наблюдение с контролем уровня отека оперированной конечности. Показатели отека стабильно оставались на одном уровне и, по данным измерения окружности конечности на всех сроках эксперимента, составляли в среднем 1,2±0,01 см (р<0,05), а по данным волюметрии, - 4,5 ±0,1 мл (р<0,05).
При морфологическом исследовании, проведенном на 18-е, 28-е, 42-е, 74-е, 103-и сутки у экспериментальных животных 1-й серии, в паховой области оперированной конечности отмечали заживление первичным натяжением.
При выполнении хромолимфографии экспериментальным животным 1-й серии контрастирования глубоких лимфатических коллекторов получить не удалось, что свидетельствует о нарушении дренирующей функции лимфатической системы конечности.
При морфологическом исследовании сектора мягких тканей оперированной конечности после выполнения хромолимфографии отмечали большое количество лимфатических сосудов со следами красителя в мягких тканях конечности, их дилатацию, наличие клеточной инфильтрации лимфогистиоцитарного характера, увеличение количества фибробластов и развитие клеточного и внеклеточного склероза. Также наблюдали умеренный фиброз клетчатки с расширением лимфатических сосудов. Описанная морфологическая картина типична для лимфатического отека конечности.
При выполнении подсчета общей площади лимфатических сосудов в полях зрения микропрепарата выявлено, что в 1-й серии животных данный показатель составил 540,22±14,4 мкм2, что достоверно отличается от показателя у животных в норме (503±13,8 мкм2). Зафиксировано статистически значимое увеличение, р<0,05.
Таким образом, лимфатический отек, сформировавшийся у животных 1-й серии самостоятельно не купировался в ходе эксперимента. Показатели асимметрии неизменно оставались на одном уровне. Увеличение числа активно функционирующих лимфатических сосудов, обнаруженное в ходе эксперимента скорее всего носит компенсаторный характер.
За животными 2-й серии (экспериментальные животные с созданной моделью лимфатического отека) вели регулярное наблюдение с контролем уровня отека оперированной конечности путем измерения окружности оперированной конечности и данным волюметрии. Показатели отека стабильно оставались на одном уровне.
Асимметрия составляла, по данным измерения окружности оперированной конечности, на уровне средней трети бедра - 1,2±0,01 см (р<0,05), а по данным волюметрии, - 4,6±0,1 мл (р<0,05).
Через 10 суток от начала третьего этана эксперимента опытным животным 2-й серии начали проводить контактное воздействие инфракрасным низкоинтенсивным лазерным излучением на паховую область оперированной конечности.
На 18-е сутки от начала третьего этапа эксперимента (после 5 сеансов воздействия низкоинтенсивным лазерным излучением) наблюдали уменьшение отека на 19,8%. Показатели асимметрии составили: по данным измерения окружности оперированной конечности, - 0,97±0,048 см (р<0,05), асимметрия, по данным волюметрии, - 3,61 ±0,18 мл (р<0,05).
На 28-е сутки у животных 2-й серии зафиксировали уменьшение отека на 27,2%; показатели асимметрии составили, по данным измерения окружности оперированной конечности, - 0,87±0,04 см (р<0,05), асимметрия, по данным волюметрии, - 3,27±0,16 мл (р<0,05).
К 42-м суткам у животных 2-й серии отмечали уменьшение отека на 39,7%; асимметрия по данным измерения окружности оперированной конечности составила 0,77±0,03 см (р<0,05); асимметрия, по данным волюметрии, - 3,0±0,14 мл (р<0,05).
На 56-е сутки показатель регресса отека у животных 2-й серии составил 53%; асимметрия, по данным измерения окружности оперированной конечности, -0,72±0,03 см (р<0,05); асимметрия, по данным волюметрии, - 2,79±0,12 мл (р<0,05).
При дальнейшем наблюдении за животными 2-й серии (74-е и 103-и сутки эксперимента) показатели асимметрии оставались на прежнем уровне: по данным
измерения окружности оперированной конечности, - 0,72±0,03 см (р<0.05); асимметрия, по данным волюметрии, -2,79±0,12 мл (р<0,05).
На 74-е и 103-и сутки эксперимента микроскопическая картина была аналогична полученной ранее.
Таким образом, использование низкоинтенсивного лазерного излучения в качестве монотерапии у животных 2-й серии (с созданной моделью лимфатического отека конечности) приводит к уменьшению отека оперированной конечности, и максимальный показатель регресса отека составил 53% (рис.2).
сутки
Рис. 2. Динамика отека конечности у животных 2-й серии эксперимента.
При выполнении хромолимфографии контрастирование лимфатических коллекторов удалось получить у всех животных 2-й серии, но сеть контрастированных сосудов была выражена незначительно, что свидетельствует о частичном восстановлении дренирующей функции лимфатической системы конечности; далее краситель перемещайся по выносящим лимфатическим сосудам на переднюю брюшную стенку.
При морфологическом исследовании на всех сроках эксперимента в паховой области оперированной конечности новообразованной ткани обнаружить не удалось, хотя отмечалась хорошая васкуляризация мягких тканей оперированной конечности. Данные подсчета общей площади лимфатических сосудов в полях зрения микропреггарата у всех животных 2-й серии на 18-е, 21-е, 28-е, 42-е, 74-е, 103-и сутки эксперимента были суммированы. Выявлено, что после 5 сеансов (18-е сутки исследования) воздействия низкоинтенсивным лазерным излучением данный показатель увеличился на 18,9% и составил 598±19,5 мкм2; на 28-е сутки (после 10 сеансов воздействия низкоинтенсивным лазерным излучением) показатель
увеличился на 29,8% и составил 653±20,8 мкм2 (зафиксировано статистически значимое увеличение показателя по сравнению с нормой, р<0,05); на 42-е сутки показатель увеличился на 31,4% и составил 661 ±22,4 мкм2 (зафиксировано статистически значимое увеличение показателя по сравнению с нормой, р<0,05); на более поздних стадиях эксперимента описанный показатель не претерпевал значимых изменений и оставался примерно на одном уровне. Динамика данного показателя свидетельствует в пользу того факта, что при воздействии низкоинтенсивным лазерным излучением происходит увеличение числа функционирующих сосудов и капилляров. Данные изменения наступали за счет начала функционирования резервных капилляров, развивающегося по механизмам срочной адаптации, а также за счет более пролонгированного процесса, связанного с новообразованием капилляров, который относится к механизмам долговременной адаптации системы микроциркуляции (рис.3).
Рис. 3. Динамика показателя общей площади лимфатических сосудов в полях зрения микропрепарата конечности у животных 2-й серии в зависимости от срока эксперимента.
У животных 3-й серии через 10 суток после трансплантации культуры клеток стромы паховых лимфатических узлов в паховую область оперированной конечности был отмечен незначительный регресс отека оперированной конечности. По данным измерения окружности оперированной конечности на уровне средней трети бедра и данным волюметрии, показатель регресса отека составил от 7% до 13%: асимметрия по данным измерения окружности оперированной конечности - 1,085±0.02 см (р<0,05); асимметрия по данным волюметрии - 4,025±0,16 мл (р<0,05).
На данном этапе эксперимента животным 3-й серии начали проводить контактное воздействие инфракрасным низкоинтенсивным лазерным излучением па
паховую область оперированной конечности. Время воздействия - 3 минуты, количество сеансов - 10, частота - через день.
На 18-е сутки от начала третьего этапа эксперимента у животных 3-й серии (после 5 сеансов воздействия низкоинтенсивным лазерным излучением) отмечали уменьшение отека на 34%. Показатели асимметрии составили: по данным измерения окружности оперированной конечности - 0,79±0,03 см (р<0,05), асимметрия по данным волюметрии - 3,69±0,14 мл (р<0,05).
На 28-е сутки (после 10 сеансов воздействия низкоинтенсивным лазерным излучением) у животных 3-й серии отмечали уменьшение отека на 56%; показатели асимметрии составили: по данным измерения окружности оперированной конечности, - 0,52±0,026 см (р<0,05); асимметрия по данным волюметрии - 1,98±0,09 мл (р<0,05).
К 42-м суткам после введения культуры клеток регресс отека у животных 3-й серии достиг следующих показателей: асимметрия, по данным измерения окружности оперированной конечности, составила 0,16±0,008 см (р<0,05); асимметрия, по данным волюметрии - 0,4б±0,02мл (р<0,05).
На 56-е сутки после введения культуры клеток у животных 3-й серии отмечали почти полное купирование отека (96%). Асимметрия, по данным измерения окружности оперированной конечности, - 0,09±0,004 см (р<0,05); асимметрия по данным волюметрии, - 0,23±0,01мл (р<0,05). При дальнейшем наблюдении за животными 3-й серии показатели отека неизменно оставались на одном уровне.
При морфологическом исследовании в паховой области оперированной конечности обнаружили наличие новообразованной ткани в виде 1-3 небольших, не четко оформленных отдельных образований округлой формы, беловато-желтого цвета в сочетании с тканью, визуально напоминающую рыхлую соединительную ткань со множеством соединительнотканных перемычек. Размер образований колебался от 0,1 см (на ранних сроках эксперимента - 18-е, 28-е сутки) до 0,3 см (на более поздних сроках - 42-е, 74-е сутки). Микроскопически образование представляло собой конгломерат рыхлой волокнистой ткани, состоящий из коллагеновых и небольшого количества ретикулярных волокон разной степени зрелости; в структуре визуализировалось большое количество кровеносных капилляров и сосудов, а также лимфатических сосудов и капилляров синусоидного типа со слабо выраженной, плохо визуализируемой базальной мембраной, пронизывающих новообразованную
соединительную ткань. Какой-либо органоспецифичности не зафиксировано. Отмечалась хорошая васкуляризация мягких тканей оперированной конечности. Описанная картина наблюдалась как на ранней стадии эксперимента, так и на более поздних стадиях (74-е, 103-и сутки).
Таким образом, можно заключить, что после пересадки культуры клеток стромы паховых лимфатических узлов в сочетании с низкоинтенсивным лазерным излучением в паховой области происходит неогенез соединительной ткани. В новообразованной ткани дифференцировки слоев не отмечается. В то же время наблюдается богатая васкуляризация паховой области оперированной конечности. Новообразованные сосуды, визуализируемые на данной стадии эксперимента, имеют более крупный просвет и более разветвленную сеть, чем у животных 2-й серии на этом же этапе эксперимента.
В ходе эксперимента всем животным 3-й серии на данном этапе эксперимента была приведена хромолимфография.
Были получены следующие результаты: через 30 секунд после инъекции витального красителя происходило контрастирование поверхностных лимфатических коллекторов. Через 1 минуту после введения красителя происходило контрастирование глубоких коллекторов, а также новообразованных лимфатических сосудов, которые представляют собой развитую разветвленную сеть, окружающую новообразованную соединительную ткань. Далее краситель перемещался по выносящим лимфатическим сосудам на переднюю брюшную стенку и через 4,5 минуты уже визуально не определялся.
В ходе эксперимента после выполнения хромолимфографии производили морфологическое исследование. Осуществляли забор сектора мягких тканей оперированной конечности с новообразованной тканью. Были получены следующие результаты: в структуре новообразованной ткани красителя выявлено не было, но он определялся в сосудах, ее пронизывающих. Визуализировалось большое количество новообразованных лимфатических сосудов со следами красителя в мягких тканях конечности.
Данные подсчета общей плошади лимфатических сосудов в полях зрения микропрепарата у всех животных 3-й серии на 18-е, 21-е, 28-е, 42-е, 74-е, 103-и сутки эксперимента были суммированы. Выявлено, что после 5 сеансов (18-е сутки исследования) воздействия низкоинтенсивным лазерным излучением данный
показатель увеличился на 25,6% и составил 632±21,1 мкм2'; на 28-е сутки (после 10 сеансов воздействия низкоинтенсивным лазерным излучением) показатель увеличился на 38% и составил 695±23,7 мкм2 (зафиксировано статистически значимое увеличение показателя по сравнению с нормой, р<0.05); на 42-е сутки показатель увеличился на 40,7% и составил 708±24,9 мкм2; на более поздних стадиях I эксперимента описанный показатель не претерпевал значимых изменений и оставался примерно на одном уровне (рис.4). Динамика данного показателя говорит в пользу того факта, что у животных 3-й серии происходит активный процесс новообразования функционирующих сосудов и капилляров.
Рис. 4. Динамика показателя общей площади лимфатических сосудов в полях зрения микропрепарата конечности у животных 3-й серии в зависимости от срока эксперимента.
Таким образом, применение культуры клеток стромы лимфатических узлов, вводимой инъекционным путем в сочетании с воздействием низкоинтенсивным лазерным излучением, позволяет добиться почти полного регресса лимфатического отека конечности (96%), созданного в эксперименте через 56 суток после трансплантации культуры клеток, в то время как использование низкоинтенсивного лазерного излучения в качестве самостоятельного метода приводит к регрессу отека оперированной конечности только на 53% (рис.5).
Благодаря стимулирующему влиянию низкоинтенсивного лазерного излучения на лимфоидную ткань и наличию в паховой области оперированной конечности культуры клеток стромы паховых лимфатических узлов, процесс неоагиогенеза в 3-й серии экспериментальных животных реализуется в такой короткий срок (56 суток). К этому сроку происходит формирование тканевого конгломерата, состоящего из коллагеновых и ретикулярных волокон, пронизанного выраженной новообразованной
сетью кровеносных и лимфатических сосудов и капилляров. Полученные в ходе эксперимента данные позволяют нам предположить, что именно этот новообразованный тканевой конгломерат берет на себя дренирующую функцию. Вопрос влияния низкоинтенсивного лазерного излучения на процесс дифференцировки клеток стромы лимфатических узлов требует дальнейшего изучения.
серий.
ВЫВОДЫ
1. Разработанная модель острого лимфатического отека конечности позволяет изучать течение данного патологического процесса у экспериментальных животных и оценивать эффективность различных способов коррекции.
2. Разработан новый комбинированный метод коррекции лимфатического отека конечности, основанный на использовании низкоинтенсивного лазерного излучения и трансплантации культуры аутогенных клеток стромы лимфатических узлов и низкоинтенсивного лазерного излучения в качестве самостоятельного метода.
3. Применение низкоинтенсивного лазерного излучения (аппарат АЛ-01 «Семикон», длина волны 830 нм, мощность 30 мВт, количество сеансов - 10, частота воздействия через 1 день) в качестве самостоятельного метода при экспозиции 3 минуты позволяет добиться регресса экспериментального лимфатического отека на 53% к 56-м суткам от начала воздействия.
4. Контактное воздействие низкоинтенсивного лазерного излучения (с указанными характеристиками) при экспозиции 3 минуты в сочетании с пересадкой
аутогенных клеток стромы лимфатического узла позволяет добиться
практически полного регресса экспериментального лимфатического отека конечности (96%) к 56-м суткам.
5. При использовании низкоинтенсивного лазерного излучения в качестве самостоятельного метода регресс отека наступает в большей степени за счет начала функционирования резервных капилляров, находившихся ранее в неактивном состоянии.
6. При использовании низкоинтенсивного лазерного излучения в сочетании с применением аутогенных клеток стромы лимфатических узлов практически полного купирования лимфатического отека позволяет добиться активного процесса неоангиогенеза лимфатических сосудов и капилляров.
Низкоинтенсивное лазерное воздействие вызывает дифференцировку клеток стромы паховых лимфатических узлов крысы и приводит к новообразованию соединительной ткани.
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
1. Моделирование острого лимфатического отека конечностей в эксперименте осуществляют путем удаления пакета паховых лимфатических узлов. Созданную модель лимфатического отека конечности можно рекомендовать к использованию в научно-исследовательских лабораториях с целью детального изучения нарушения лимфооттока и отработки новых методов коррекции данного состояния.
2. Разработанный способ коррекции лимфатических отеков конечностей в эксперименте за счет использования низкоинтенсивного лазерного излучения (аппарат АЛ-01 «Семикон», длина волны - 830 нм, мощность - 30 мВт, количество сеансов - 10, с частотой воздействия через 1 день, экспозиция - 3 минуты) и культуры аутогенных клеток стромы лимфатических узлов может быть использован в хирургической практике.
3. Низкоинтенсивное лазерное излучение с указанными характеристиками оказывает стимулирующее влияние на неоангиогенез и приводит к открытию резервных капилляров. Можно рекомендовать использование лазерного воздействия в коррекции лимфатических отеков конечностей.
4. С целью повышения эффективности коррекции лимфатических отеков конечности целесообразно сочетанное применение низкоинтенсивного лазерного
излучения с указанными характеристиками и культуры
аутогенных клеток стромы лимфатических узлов, вводимой инъекционным путем в паховую область конечности.
5. Методика трансплантации культуры аутогенных клеток стромы лимфатических узлов в сочетании с применением низкоинтенсивного лазерного излучения с указанными характеристиками является простой и безопасной при выполнении, что позволяет рекомендовать ее для использования в клинической практике.
Список работ, опубликованных по теме диссертации
1. Использование аутогенных стромальных клеток в лечении острого лимфатического отёка конечностей / Б.Н.Жуков, Г.В. Яровенко, В.В. Российская, Е.С. Сапрыкина// Вопросы реконструктивной и пластической хирургии: Материалы научной конференции с международным участием. Выпуск 3-4. - Томск, 2004. - С. 40-41.
2. Применение культуры аутогенных стромальных клеток для коррекции острого лимфатического отека конечностей / Б.Н. Жуков, Г.В. Яровенко, JI.T. Волова, Е.С. Сапрыкина// Клинические и фундаментальные аспекты тканевой терапии. Теория и практика клеточных биотехнологий: Материалы II всероссийского симпозиума с международным участием. - Самара, 2004.-С. 127-129.
3. Сапрыкина, Е.С. Новые подходы в лечении острого лимфатического отека конечностей / Г.В. Яровенко, Е.С. Сапрыкина // Санкт-Петербургские научные чтения: Материалы VI научно-практической конференции с международным участием. - СПб., 2004.- С. 211-212.
4. Новые подходы в лечении острых лимфатических отеков конечностей в эксперименте / Л.Т. Волова, Г.В. Яровенко, В.В. Российская, Е.С. Сапрыкина // Материалы Международного конгресса Европейской Ассоциации банков тканей. -Прага, 2004.- С. 164.
5. Аутогенные ретикулярные клетки в восстановлении лимфатического оттока при периферических отеках / Б.Н. Жуков, Г.В. Яровенко, В.В. Российская, Е.С. Сапрыкина// Материалы II съезда лимфологов России. -СПб., 2005,- С.112-113.
6. Клеточные технологии в восстановлении периферического лимфатического оттока / Б.Н. Жуков, Г.В. Яровенко, В.В. Российская, Е.С. Сапрыкина // Трудные и нестандартные ситуации в хирургии. Новые технологии в медицине: Материалы конференции. - Ижевск, 2006.- С. 116-118.
7. Сапрыкина, Е.С. Методика создания модели нарушения периферического лимфатического оттока на экспериментальных животных /Е.С. Сапрыкина // Аспирантские чтения - 2006: Труды межвузовской конференции молодых ученых. Приложение к межвузовскому журналу «Аспирантский вестник Поволжья». -Самара, 2006.- С. 73-74.
8. Аутологичная трансплантация культуры клеток стромы лимфатических узлов для купирования вторичной лимфедемы в эксперименте / J1.T. Волова, Г.В. Яровенко,
B.В. Российская, Е.С. Сапрыкина Н Стволовые клетки и . перспективы их использования в здравоохранении: Материалы научной конференции. - М., 2007,-
C. 37-38.
9. Сапрыкина, Е.С. Возможности использования ткани лимфатических узлов для получения культуры стромальных клеток / Б.Н. Жуков, Г.В. Яровенко, Е.С. Сапрыкина//Бюллетень НЦССХ им. А.Н. Бакулева РАМН. - М., 2007,- С. 128.
10. Сапрыкина, Е.С. Экспериментальное обоснование новой методики лечения лимфатических отеков конечностей / Е.С. Сапрыкина // Аспирантские чтения -2007: Труды межвузовской конференции молодых ученых Приложение к межвузовскому журналу «Аспирантский вестник Поволжья». - Самара, 2007,- С. 273-275.
11. Лазерное излучение с применением культуры клеток стромы лимфатических узлов в коррекции экспериментальной лимфедемы / Б.Н. Жуков, A.B. Колсанов, Г.В. Яровенко, Е.С. Сапрыкина // Инновационные технологии в трансплантации органов, тканей и клеток: Материалы Всероссийской конференции с международным участием. - Самара, 2008.-С. 170-172.
12. Новый подход к лечению лимфатических отеков нижних конечностей / Б.Н. Жуков, A.B. Колсанов, Г.В. Яровенко, Е.С. Сапрыкина// Морфологические ведомости,- 2008,-№8. - С. 158-164.
Изобретения
1. Пат. 2280461 Способ лечения острого и хронического лимфатического отека конечностей / Г.В. Яровенко, Б.И. Жуков, Л.Т. Волова, В.В. Российская, Ю.Л. Кецко, Ю.Г. Кутырева; Е.С. Сапрыкина (РФ ГОУ ВПО «Самарский государственный медицинский университет Росздрава»), - №2004114675; Заявл. 13.05.2004; Опубл. 27.07.2006. Бюл. №21.
Подписано в печать 14.04.09 г. Объем - I печ. л.. Тираж 100. Заказ № 071
Отпечатано с готового оригинал-макета Центр полиграфических и копировальных услуг Предприниматель Серман Ю.В. Свидетельство № 3117 410600, Саратов, ул. Московская, д.152, офис 19, тел. 26-18-19, 51-16-28
Оглавление диссертации Сапрыкина, Екатерина Сергеевна :: 2009 :: Саратов
ВВЕДЕНИЕ.
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.
1.1 Современное состояние вопроса патологии лимфооттока.
1.2 Принципы лечения больных с лимфатическими отеками конечностей. Применение тканевой и клеточной трансплантации для коррекции лимфатических отеков конечностей.
1.3 Применение культуры аутогенных клеток стромы лимфатических узлов в коррекции лимфатических отеков конечностей в эксперименте.
ГЛАВА 2. ХАРАКТЕРИСТИКА ЭКСПЕРИМЕНТОВ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.
2.1 Характеристика эксперимента.
2.1.1 Методика применения культуры аутогенных клеток стромы лимфатических узлов белых крыс и низкоинтенсивного лазерного излучения с целью коррекции экспериментального лимфостаза.
2.1.2 Методы исследования, использованные в эксперименте.
2.2 Методы статистической обработки.
ГЛАВА 3. МАКРО- МИКРОСКОПИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ ПАХОВОЙ ОБЛАСТИ КОНЕЧНОСТИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО ЖИВОТНОГО В НОРМЕ И ПРИ МОДЕЛИРОВАНИИ ОСТРОГО
ЛИМФАТИЧЕСКОГО ОТЕКА В ЭКСПЕРИМЕНТЕ.
ГЛАВА 4. СРАВНЕНИЕ РАЗЛИЧНЫХ СПОСОБОВ КОРРЕКЦИИ ЛИМФАТИЧЕСКИХ ОТЕКОВ
КОНЕЧНОСТЕЙ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ.
4.1 Результаты наблюдения за животными с лимфатическим отеком конечности.
4.2 Применение низкоинтенсивного лазерного излучения в коррекции лимфатического отека в эксперименте.
4.3 Применение культуры аутогенных клеток стромы лимфатических узлов в сочетании с низкоинтенсивным лазерным излучением в эксперименте.
ГЛАВА 5. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.
ВЫВОДЫ.
Введение диссертации по теме "Патологическая анатомия", Сапрыкина, Екатерина Сергеевна, автореферат
Лимфедема - распространенное социально значимое заболевание. По данным ВОЗ, данной патологией страдает около 10 % населения. J.Casley-Smith (1980) считает, что около 300 млн. человек во всем мире страдают от различных форм лимфедемы. Основная группа пациентов - это женщины молодого и среднего возраста. Соотношение заболевших женщин и мужчин составляет 3:1 — 5:1 (Заварина И.К. и соавт., 2006). Число вновь выявленных больных возрастает с каждым годом (Борисов А.В., 2005; Foldi M. et al., 2005; Warren AG et al., 2008; Garfein E.S. et al., 2008), причем, тенденции к снижению уровня заболеваемости не наблюдается (Аничков М.Н. и соавт., 1983; Бубнова Н.А., 2008; Clodius L. et al., 1990): Социальная-значимость обсуждаемой темы велика и обусловлена тем, что большинство больных — это люди трудоспособного возраста (96%), для5 которых чрезвычайно важна реабилитация^ (Бубнова Н.А. и соавт., 1992, 2005; Любарский М.С. и соавт., 1995; Поташов Л.В: и соавт., 2000). Пациентам с лимфедемой приходится-лечиться* долго и, зачастую, с минимальным эффектом (Любарский М.С. и соавт., 2001).
Эффективность лечения больных лимфедемой, как считают многие авторы, зависит от адекватной' оценки состояния лимфатических коллекторов, лимфатических узлов и индивидуального подхода к выбору тактики лечения (Савченко Т.В., 1983; Абалмасов К.Г. и соавт., 2000; Бубнова Н.А. и соавт., 2003, 2006; Witte М. Н. et al., 2002; Foldi М., 2005).
В настоящее время в мире накоплен достаточно большой опыт лечения' больных с лимфедемой конечностей, разработаны разнообразные диагностические методики, способные с достаточной степенью достоверности оценить состояние лимфатического коллектора конечностей, степень функциональных изменений, возможности их коррекции (Фионик О.В., 2007; Szuba A., Rockson S.G., 1998).
На сегодняшний день известно множество методов лечения больных с лимфатическими отеками конечностей (медикаментозный, физиотерапевтический, компрессионный, хирургический). Однако большинство существующих методов лечения требуют использования специальной дорогостоящей аппаратуры, наличия высококвалифицированных профильных специалистов, что можно обеспечить лишь в крупных специализированных научно-исследовательских центрах (Поташов JLB. и соавт., 2000; Ишенин Ю.М. и соавт., 2005; Фионик О.В., 2008; Campisi С., 1999). При этом эффективность предлагаемых методов коррекции патологического процесса остается невысокой (Покровский А.В. и соавт., 2005; Бубнова Н.А., 2008; Posner T.N., Smith N.A., 2000; McGuinness C.L., Burnand K.G., 2001). Вопрос об' эффективности лечения лимфедемы и затратах на его проведения является важным для государственного здравоохранения.
В последнее время низкоинтенсивное лазерное излучение стало объектом пристального внимания' медиков и, по мнению многочисленных авторов, оказывает положительное влияние на самые различные-биологические процессы. По данным Кончуговой Т.В. (1995), Бриль Г.Е., Бугаевой И.О., Богомоловой Н.В. (2003, 2005) инфракрасное лазерное излучение оказывает стимулирующее влияние на генетический аппарат лимфоидных клеток, способствует активации тимоцитов и лимфоцитов. Литературные данные подтверждают ведущую роль микроциркуляции в осуществлении биологических эффектов низкоинтенсивного лазерного излучения (Жуков Б.Н. и соавт., 1985, 1995, 2006; Gourgoulatos Z. et al., 1989; Lindsberg PJ. et al., 1989). По данным Lievens P.C. (1988), после лазерного воздействия происходит более быстрая регенерация лимфатической системы, что дает основной дренирующий и противоотечный эффект лазеротерапии.
Современная медицина широко использует биотехнологические методы для лечения тяжелых повреждений различных органов. Использование культивированных клеток человека и созданных на их основе тканевых конструкций открывает уникальную возможность применения их в клинической практике. Применению клеточной и тканевой трансплантации,, направленному на коррекцию лимфооттока, уделяют все большее внимание в современной лимфологии.
На современном этапе вопрос применения клеточных и; тканевых технологий в коррекции лимфатических отеков конечностей еще не достаточно изучен и требует дополнительных научных исследований: Поиск новых способов и схем лечения; пациентов: с лимфедемой конечностей является весьма актуальной задачей в современной хирургии.
Методы лечения пациентов с лимфатическими , отеками* конечностей постоянно совершенствуются и пополняются новыми разработками,- Большее предпочтение на современном этапе отдается комбинированному лечению, пациентов? с указанной патологией! Данная работа посвящена отработке новой комбинированной; методике коррекции лимфатических отеков конечностейш,эксперименте,.что.:ишозволило;сформулировать цель и задачи настоящего исследования.1
Цель исследования
Улучшить результаты коррекции лимфатических отеков конечностей путем отработки в эксперименте методики? применения низкоинтенсивного лазерного излучения и культуры аутогенных клеток стромы лимфатических узлов:
Задачи исследования
1. Разработать методику моделирования острого, лимфатического отека конечности в эксперименте.
2. Провести комплексную оценку эффективности; применения низкоинтенсивного лазерного излучения как самостоятельного * метода в коррекции лимфатических отеков в эксперименте.
3. Провести комплексную- оценку эффективности применения низкоинтенсивного лазерного излучения при совместном: использовании с трансплантацией культуры, аутогенных клеток стромы лимфатических узлов в коррекции лимфатических отеков в эксперименте.
4. В- сравнительном аспекте оценить эффективность применения низкоинтенсивного лазерного излучения как самостоятельного метода и при сочетании? с культурой аутогенных клеток стромы лимфатических узлов в коррекции лимфатических отеков; в эксперименте.
5. Изучить морфологические особенности реакции тканей паховой области экспериментального животного? в ответ на трансплантацию, культуры аутогенных клеток стромы лимфатических узлов и лазерное воздействие.
Научная новизна работы
Впервые разработана методика моделирования острого лимфатического отека конечности в эксперименте путем интраоперационного удаления пакета паховых лимфатических узлов (Удостоверение на рационализаторское предложение № 372 от 22.12.03, выданное ГОУ ВПО «Самарский государственный медицинский университет Росздрава»).
Впервые разработан способ хирургической коррекции острого лимфатического отека конечности с использованием культуры аутогенных клеток стромы лимфатических узлов (патент РФ на изобретение № 2280461 от 27.07.2006).
Впервые разработан способ хирургической коррекции острого лимфатического отека конечности; с применением аутогенных клеток стромы в. сочетании с лазерным излучением (Удостоверение на рационализаторское предложение . № 626 от 17.11.08, выданное ГОУ ВПО «Самарский государственный -медицинский университет Росздрава»):
Проведена комплексная морфологическая оценка новообразованной соединительной ткани " после применения, низкоинтенсивного лазерного излучения и культуры аутогенных клеток стромы лимфатических узлов.
Впервые проведена сравнительная оценка эффективности способов коррекции лимфатических отеков конечности при использовании низкоинтенсивного лазерного излучения и при его сочетании с трансплантацией культуры аутогенных клеток стромы лимфатических узлов.
Изучены морфологические особенности реакции тканей паховой области экспериментального животного в ответ на трансплантацию культуры аутогенных клеток стромы лимфатических узлов и лазерное воздействие.
Научно-практическая значимость работы
В эксперименте разработана методика применения низкоинтенсивного лазерного излучения в сочетании с использованием- культуры аутогенных клеток стромы лимфатических узлов для коррекции лимфатических отеков конечностей и обоснована ее высокая эффективность.
Доказан более выраженный эффект от сочетанного применения культуры аутогенных клеток стромы лимфатических узлов и низкоинтенсивного лазерного излучения* по сравнению с использованием низкоинтенсивного лазерного излучения в качестве самостоятельного метода.
На модели лимфатического отека у белых крыс изучены морфологические особенности реакции тканей паховой области экспериментального животного в ответ на трансплантацию культуры аутогенных клеток стромы лимфатических узлов и лазерное воздействие.
Публикации и внедрения
По теме диссертации опубликовано 12 работ, из них 2 в рецензируемых S научных изданиях, рекомендованных ВАК Министерства образования и науки РФ, одна работа - в зарубежной печати. Получены Патент РФ на изобретение и 2 рационализаторских предложения.
Реализация результатов
Результаты исследования, используются в работе сердечно-сосудистого отделения клиники госпитальной хирургии Самарского государственного медицинского университета. Полученные научные данные используются в преподавании курса хирургических болезней, студентам и курсантам кафедр госпитальной хирургии, оперативной хирургии и клинической анатомии с курсом инновационных технологий, при выполнении экспериментов на базе Института экспериментальной медицины и биотехнологий ГОУ ВПО «Самарского государственного-медицинского университета Росздрава».
Апробация диссертации
Основные положения работы доложены на межрегиональной научно-практической. конференции с международным участием «Санкт-Петербургские научные чтения - 2004» (Санкт-Петербург, 2004); Международном конгрессе Европейской ассоциации Банков ткани (Чехия -Прага, 2004); заседании Самарского областного научного общества хирургов им. В.И. Разумовского № 819 (2004); II Всероссийском симпозиуме с международным участием «Клинические и фундаментальные аспекты тканевой и клеточной терапии» и конференции «Теория и практика клеточных биотехнологий» (Самара, 2004); II Съезде лимфологов России (Санкт-Петербург, 2005); научной конференции молодых ученых «Аспирантские чтения» (Самара, 2006, 2007); расширенных заседаниях кафедр госпитальной хирургии, оперативной хирургии^ и клинической анатомии с курсом инновационных технологий (Самара, 2007, 2008); III Съезде лимфологов России (Москва, 2008).
Объем и структура диссертации
Диссертационная работа изложена на 151 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, общей характеристики материалов и методов в эксперименте, результатах собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, практических рекомендаций, списка литературы.
Заключение диссертационного исследования на тему "Комплексная оценка эффективности применения аутогенных клеток стромы лимфатических узлов и лазерного излучения при коррекции лимфатических отеков конечностей (экспериментальное исследование)"
выводы
1. Разработанная; модель острого лимфатического отека конечности позволяет, изучать течение данного патологического процесса у экспериментальных животных и оценивать эффективность различных способов коррекции.
2. Разработан новый комбинированный метод коррекции лимфатического отека конечности, основанный; на использовании; низкоинтенсивного лазерного излучения и трансплантации культуры аутогенных клеток стромы лимфатических узлов;; и низкоинтенсивного лазерного излучения в качестве самостоятельного метода.
3. Применение низкоинтенсивного лазерного излучения (аппарат АЛ-01 «Семикон», длина волны 830 нм, мощность 30 мВт, количество сеансов — 10, с частотой воздействия через день) в качестве самостоятельного метода при экспозиции 3 минуты позволяет добиться регресса экспериментального лимфатическогоотекана 53% к;56-м суткам отначала'воздействия; .
4. Контактное воздействие низкоинтенсивного лазерного излучения, (с указанными характеристиками) при экспозиции 3 минуты; в сочетании с пересадкой аутогенных клеток стромы лимфатического узла позволяет добиться практически полного регресса экспериментального лимфатического отека конечности (96%) к 56-м суткам.
5. При использовании низкоинтенсивного лазерного излучения в качестве самостоятельного метода регресс отека наступает в большей степени за счет начала функционирования: резервных капилляров, находившихся ранее в неактивном состоянии.
6. При использовании; низкоинтенсивного лазерного излучения в сочетании с применением5 аутогенных клеток стромы лимфатических; узлов практически полного купирования лимфатического отека позволяет добиться* более активный процесс неоангиогенеза лимфатических сосудов и: капилляров.*
Низкоинтенсивное лазерное воздействие приводит к дифференцировке клеток стромы паховых лимфатических узлов крысы в сторону неогенеза соединительной ткани.
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
1. Моделирование острого лимфатического отека конечностей в эксперименте осуществляют путем удаления пакета паховых лимфатических узлов. Созданную модель лимфатического отека конечности можно рекомендовать к использованию в научно-исследовательских лабораториях с целью детального изучения нарушения лимфооттока и отработки новых методов коррекции данного состояния.
2. Разработанный способ коррекции лимфатических отеков конечностей в эксперименте за счет использования низкоинтенсивного лазерного излучения (аппарат AJI-01 «Семикон», длина волны 830 нм, мощность 30 мВт, количество сеансов — 10, с частотой воздействия через день, экспозиция — 3 минуты) и культуры аутогенных клеток стромы лимфатических узлов может быть использован в хирургической практике.
3. Низкоинтенсивное лазерное излучение (с указанными характеристиками) оказывает стимулирующее влияние на неоангиогенез и приводит к открытию резервных капилляров. Можно рекомендовать использование лазерного воздействия в коррекции лимфатических отеков конечностей.
4. С целью повышения эффективности коррекции лимфатических отеков конечности целесообразно сочетанное применение низкоинтенсивного лазерного излучения (с указанными характеристиками) и культуры аутогенных клеток стромы лимфатических узлов, вводимой инъекционным путем в паховую область конечности.
5. Методика трансплантации культуры аутогенных клеток стромы лимфатических узлов в сочетании с применением низкоинтенсивного лазерного излучения (с указанными характеристиками) является простой при выполнении и безопасной, что позволяет рекомендовать ее для использования в клинической практике.
Список использованной литературы по медицине, диссертация 2009 года, Сапрыкина, Екатерина Сергеевна
1. Абалмасов, К.Г. Коррекция нарушений лимфооттока после радикальной мастэктомии / К.Г. Абалмасов, А.П. Леин, Н.О. Миланов // Вестник хирургии. 1982. - т. 128. - №6. - С. 21-28.
2. Абалмасов, К. Г. Хирургическое лечение хронических лимфатических отеков конечностей и половых органов: Дис. . докт. мед. наук/ К.Г. Абалмасов. М.- 1992. - С. 306.
3. Абалмасов, К.Г. Повреждение регионарных лимфатических коллекторов в сосудистой хирургии / К.Г. Абалмасов, А.А. Малинина, К.М. Морозов // Грудная и сердечно-сосудистая хирургия.-1997 №21- С. 129.
4. Абалмасов, К.Г. Комплексное лечение постмастэктомического лимфатического отека / К.Г. Абалмасов, Ю.С. Егоров // Анналы пластической, реконструктивной и эстетической хирургии. 2005. - N 2. - С. 59-60.
5. Абрамов, Ю.А. Формирование лимфовенозного анастомоза у пациентов с рецидивирующим рожистым воспалением / Ю.А. Абрамов, А.Н. Косенков, В.М. Наренков // 1-й Съезд лимфологов России: Мат. конференции. М., 2003. С. 91.
6. Автандилов, Г.Г. Медицинская морфометрия: Руководство / Г.Г. Автандилов. М.: Медицина, 1990. — 384 с.
7. Автандилов, Г.Г. Проблемы патогенеза и патологоанатомической диагностики болезней в аспектах морфометрии / Г.Г. Автандилов. М.: Медицина, 1984.-288с.
8. Аничков, М.Н. Хирургическое лечение нарушений лимфатического оттока вследствие травм конечностей / М.Н. Аничков, Е.П. Кохан, Т.В. Савченко и др.// Военно-медицинский журнал. — 1982. №3. — С.25-28.
9. Архангельский, А.В. Влияние инфракрасного лазера на морфоэнзимологию и кислородный баланс раны в эксперименте / А.В.
10. Архангельский, О.Г. Астафьева // Архив патологии. 1982. - Т. 42. — С. 1923.
11. Бабанин, И.Л. Эффективность эндоскопического лечения пузырно-мочеточникового рефлюкса у детей с использованием биоимплантатов / И.Л. Бабанин, И.В. Казанская, В.Д. Коноплёв // Мат. X Российского съезда урологов. М., 2002. - С. 698—699.
12. Байбеков, И.М. Морфологические основы низкоинтенсивной лазеротерапии / И.М. Байбеков, А.Х. Касымов, В.И. Козлов, Э.Ш. Мусаев, Н.Г. Самойлов // Под ред. В.И. Козлова и И.М. Байбекова. Ташкент: Изд-во Ибн Сины, 1991.-223 с.
13. Байбеков, И.М. Повреждение и восстановление клеток при низкоинтенсивном лазерном воздействии / И.М. Байбеков, А.Х. Касымов, Э.Ш. Мусаев, А.И. Байбеков // Лазерная медицина. 1998. - Т.2. - Вып.2-3 - С.32-35.
14. Байбеков, И.М. Клеточные основы лазерных воздействий на биоткани / И.М. Байбеков, М.И. Байбекова // Лазер и здоровье 99: Мат. Международ. Конгр. - М., 1999. - С. 422-423.
15. Бенда, К. Лимфедема конечностей / К. Бенда, А.Ф. Цыб, Л. Баржинка и др.- Прага: Авиценум, 1987. — 331 с.
16. Бобрик, И.И. Развитие кровеносных и лимфатических сосудов / И.И. Бобрик, Е.А. Шевченко, В.Г. Черкасов. Киев: Здоовья, 1991. — 207 с.
17. Борисов, А.В. Значение конструкции лимфангиона как структурно-функциональной единицы лимфатического сосуда для биологии и медицины / А.В. Борисов // Материалы II Съезда лимфологов России. Санкт-Петербург, 2005. — С.34-36.
18. Бородин, Ю. И. Лимфатический узел при циркуляторных нарушениях / Ю.И. Бородин, В. Н. Григорьев. Новосибирск: Наука. Сиб. отд-ние. - 1986. -268 с.
19. Бородин, Ю.И. Общая анатомия лимфатической системы / Ю.И. Бородин, М.Р Сапин, Л.Е. Этинген и др. —Новосибирск: СО РАМН.- 1990.243 с.
20. Бородин, Ю.И. Частная анатомия лимфатической системы / Ю.И. Бородин, М.Р. Сапин, Л.Е. Этинген и др. Новосибирск: СО РАМН.- 1995.157 с.
21. Бородин, Ю.И. Дискуссионные вопросы лимфологии / Ю.И. Бородин// Вестник лимфологии. 2008. - №2. - С.25.
22. Бриль, Г.Е. Влияние инфракрасного лазерного излучения на динамику субпопуляционного состава лимфоцитов в органах иммунной системы / Г.Е. Брилль, И.О. Бугаева // Лазерная медицина. — 2005. Т.9, вып. 2, С. 4-7.
23. Бриль, Г.Е. Изменения содержания депроидизированной ДНК и уровня РНК в клетках лимфоидных органов при облучении животных инфракрасным лазером / Г.Е. Брилль, И.О. Бугаева // Лазерная медицина. — 2005. Т.9, вып.З, С. 48-52.
24. Брискин, Б.С. Влияние чрезкожного лазерного облучения крови на микроциркуляцию / Б.С. Брискин, А.К. Полонский, И.М. Алиев и др// Мат. Юбилейной конференции научно-исследовательского центра ММСИ. -М., 1993. — С.77-78.
25. Бубнова, Н.А. Оригинальная методика наложения микрохирургических лимфовенозных анастомозов в лечении лимфедемы конечностей / Н.А. Бубнова, С.В. Петров// Вестник аритмологии. 1995. - №4 - С. 49.
26. Бубнова, Н.А. Компрессионное лечение больных лимфедемой нижних конечностей / Н.А. Бубнова, А.И. Прокопец, О.В. Фионик //Материалы 1 съезда лимфологов России. — Сердечно-сосудистые заболевания. — 2003. — Т.4, №5. С. 122.
27. Бубнова, Н.А. Лимфедема нижних конечностей / Н.А. Бубнова, О.В. Фионик // Медицина XXI век. 2006. - 2. - С.74-75.
28. Бугаева, И.О. Функциональная морфология лимфатическиз узлов и тимуса под влиянием низкоинтенсивного лазерного излучения / И.О. Бугаева, Н.В. Богомолова., Г.Е. Брилль, Г.Р. Колоколов// Вестник ОГУ.-2003. №5.-С. 121- 124.
29. Вайнагий, О.М. Структурные изменения в лимфатическом узле под влиянием низкоинтенсивного лазерного излучения / О.М. Вайнагий // Лазерная медицина. 1998. - Т.2, вып. 1. - С. 31-33.
30. Вахитов, М.Ш. Комплексная терапия вторичной лимфедемы нижних конечностей / М.Ш. Вахитов, Н.А. Бубнова, С.В. Лапекин и др.// Вестник лимфологии. 2008. - №2. - С.67-68.
31. Волкова, О.В. Эмбриогенез и возрастная гистология внутренних органов человека / О.В. Волкова, М.И. Пекарский. — М.: Медицина, 1976. -263 с.
32. Восстановительное лечение больных с лимфедемами конечностей / А. Ф. Стрельченок, И. К. Заварина, А. Б. Столярж и др. // Анналы пластической, реконструктивной и эстетической хирургии. 2006. - N 4. - С. 142-143.
33. Выренков, Ю.Е. Клиническая лимфология /Ю.Е. Выренков. М.: Медицина, 1986. — 170 с.
34. Выренков, Ю.Е. Лимфологические методы в хирургии и интенсивной терапии: Учебное пособие / Ю.Е. Выренков, В.И. Вторенко, З.А. Шевхужев. Российская медицинская академия последипломного образования. — М., 1997.-29 с.
35. Выренков, Ю.Е. Лимфатический посткапилляр / Ю.Е. Выренков, Н.А. Калашникова, И.С. Сесорова и др.// Вестник лимфологии. 2008. - №2. — С. 50.
36. Гамалея, Н.Ф. Лазеры в эксперименте и клинике / Н.Ф. Гамалея. М.: Медицина., 1972. - 232 с .
37. Гамалея, Н.Ф. Механизмы биологического действия излучения лазеров /Н.Ф. Гамалея// Лазеры в клинической медицине. М., 1981. - С. 35- 85.
38. Гариб, Ф.Ю. Иммунокоррегирующее влияние внутрисосудистого лаерного облчения крови у больных ожоговой болезнью /Ф.Ю. Гариб, Н.А. Нуралиев, Е.Е. Яругский, А.А. Саидов// Актуальные вопросы лечения ожогов: Мат. Конференции. Ташкент, 1992. - С. 70.
39. Гладкова, Н.Д. Влияет ли облученпе здоровых людей низкоинтенсивным красным светом на функционирование иммунной системы? / Н.Д. Гладкова, Е.Д. Пятова// Применение лазеров в хирургии и медицине. М., 1989. - Ч. 1. - С. 506-508.
40. Данилова, И.Н. Лазерное излучение / И.Н. Данилов // Курортология и физиотерапия. -М.: Медицина, 1985. Т. 1. — С. 532-535.
41. Девятков, Н.Н. Физико-химические механизмы биологического действия лазерного излучения / Н.Н. Девятков, С.М. Зубкова, И.Б. Лапурин, Н.С. Макеева //Успехи современной биологии. — М., 1987. Т. 103. Вып. 1. — С. 31-43.
42. Демидова, В.К. Особенности развития лимфатических узловразличных областей тела человека / В.К. Демидова// Вопросы морфологии и физиологии. Рига, 1960.-С. 185-191.
43. Долгова, М.А. Развитие соединительнотканной стромы и кровеносных сосудов лимфатических узлов плода человека / М.А. Долгова// Архив анатомии. 1967. - Т.52. -№7. - С.97-103.
44. Дрюк, Н.В. Изменение лимфатической системы нижниих конечностей при варикозной болезни и посттромбофлебитическом синдроме / Н.Ф. Дрюк, A.M. Бахарев, Н.К. Бульба и др// Клиническая хирургия. М., 1989. -№7.-С. 31-33.
45. Елисеенко, В.И. Механизмы взаимодействия низкоэнергетического лазерного излучения ИК-спектра с биологическими тканями / В.И. Елисеенко // Лазеры и аэроионы в медицине: сб. докл., статей, сообщений и исследований. -Калуга-Обнинск, 1997. С. 71.
46. Емельянов, А.В. Актуальные вопросы лечения хронической обструктивной болезни легких стабильного течения / А.В. Емельянов // Русский медицинский журнал.-2005.-Т. 13.-№21.-С. 1386-1392.
47. Жданов, Д.А Новые данные по функциональной анатомии лимфатических узлов / Д.А. Жданов // Тез. 7 Всесоюзного съезда анатомов, гистологов, эмбриологов. Тбилиси, 1966. - С. 15-17.
48. Жданов, Д.А. Общая анатомия и физиология лимфатической системы / Д.А. Жданов. М.: МЕДГИЗ, 1952. - 336 с.
49. Жуков, Б.Н. О нарушениях и коррекции лимфооттока при хронической венозной недостаточности нижних конечностей / Б.Н. Жуков, В.К. Борисов //Вестник хирургии им. И.И. Грекова. М.,1976, №2. С. 89-92.
50. Жуков, Б. Н. Лазеры в клинике и эксперименте: Сб. науч. тр. / Б.Н. Жуков.- Куйбышев, 1990. 77с.
51. Жуков, Б.Н. Лекции по лазерной медицине / Б.Н. Жуков, В.Н. Бакуцкий, Н. А. Лысов, В.И. Анисимов. Самара: Самар. мед. ун-т, 1993. - 50 с.
52. Жуков, Б.Н. Лимфоотток при хронической венозной недостаточности нижних конечностей / Б.Н. Жуков, С.А. Столяров. Самара, 1995. - 116с.
53. Жуков, Б.Н. Лазерное излучение в экспериментальной и клинической ангиологии: Монография / Б.Н. Жуков, Н.А. Лысов. Самара: "Самарский Дом печати", 1996. - 168 с.
54. Жуков, Б.Н. Патология и коррекция лимфооттока при хронической венозной недостаточности нижних конечностей / Б.Н. Жуков, П.Н. Мышенцев, С.А. Столяров // Флеболимфология, 1997. №4. - С. 5-11.
55. Жуков, Б.Н. Лазерные технологии в медицине / Б.Н. Жуков, Н.А. Лысов, В.И. Анисимов.- Самара, 2001. 224 с.
56. Жуков, Б.Н. Аутогенные ретикулярные клетки в восстановлении лимфатического оттока при периферических отеках /Б.Н. Жуков, Г.В. Яровенко, В.В. Россинская и др.// II съезд лимфологов России: Тезисы докладов. Санкт-Петербург.- 2005.- С.112-113
57. Жуков, Б.Н. Возможности использования ткани лимфатических узлов для получения культуры стромальных клеток / Б.Н. Жуков, Г.В. Яровенко и др.// XIII Всероссийского съезда сердечно-сосудистых хирургов: Тезисы докладов. Москва.- 2007.- С. 128
58. Завариной, И.К. Состояние глубокого лимфатического оттока при посттромботической венозной недостаточности / И.К. Заварина, Т.В. Савченко, Т.Г. Кафаров// Клиническая хирургия. — М., 1982. №7. — С. 17-20.
59. Зеньков, JI.H. Лазерное излучение как стимулятор некоторых иммунобиологических систем организма в клинике и эксперименте / Л.Н. Зеньков, С.И. Юпатов//Рукопись. Гродно, 1992. - 10 с.
60. Зербино, Д.Д. Общая патология лимфатической системы / Д.Д. Зербино. Киев: Здоровье. -1974.-160 с.
61. Зербино, Д.Д. Визуализация патологии лимфатической системы: открытие морфологической основы форм и стадий ее недостаточности/Д.Д. Зербино// Вестник лимфологии. — 2008.- №3. С. 13-14.
62. Зербино, Д.Д. Клиническая патология лимфатической системы: нозология и синдромология /Д.Д. Зербино// Вестник лимфологии. — 2008.-№3. — С. 13.
63. Зимон, И Н. Влияние внутрисосудистого лазерного облучения крови на стереоультраструктуру эритроцитов при лечении разлитого гнойного перитонита / И.Н. Зимон, А.И. Агзамов, В.А. Хорошаев и др.// Хирургия.-М.: Медицина, 1992. №9. - С.35-39.
64. Илларионов, В.Е. Основы лазерной терапии / В.Е. Илларионов. М.: Респект, 1992. - 123 с.
65. Ичираули, Г.Н. Хирургическая коррекция мышечно-венозной помпы голени при посттромбофлебитической болезни в свете отдаленных результатов: Автореф. дис. . канд. мед. наук /Т.Н. Ичираули. — М., 1991. — 18с.
66. Кадыров, Р.Ю. Состояние лимфатических сосудов при посттромбофлебитической болезни / Р.Ю. Кадыров // Мед. Журнал Узбекистана. 1978. - №5. - С.62-65.
67. Казимирко, В.К. О субклеточных механизмах воздействия лазерного излучения / В.К. Казимирко, Н.Н. Клодченко // Лазерная и магнитная терапия в экспериментальных и клинических исследованиях: Тез. докл. Всерос. симпоз. Обнинск, 1993. - С. 32-34.
68. Кафаров, Т.Г. Комплексное лечение лимфедемы: Автореф. дис. . канд. мед. наук. М., 1982. -21с.
69. Киреева, Н. Б. Эндоскопическая коррекция пузырно-мочеточникового рефлюкса у детей с использованием ауто- или аллофибробластов / Н.Б. Киреева., Л.А. Хафизова., В.В. Паршиков и др. //Нижегородский медицинский журнал. 2003. - № 3—4. - С. 8-12.
70. Киселева, Р.Е. Формирование неспецифического адаптационного синдрома в клетках крови при облучении лазером / Р.Е. Киселева, Л.В. Кузьмичева, Н.В. Альба и др. // Лазер и здоровье 99: Материалы Междунар. Конгр. -М., 1999. - С. 449-450.
71. Клебанов, Г.И. Свободно-радикальные механизмы действия лазеротерапии / Г.И. Клебанов, Ю.О. Тесюлкин, И.В. Бабенкова // Клиническое и экспериментальное применение новых лазерных технологий: материалы Междунар. конф. М.-Казань, 1997. - С. 308-309.
72. Клебанов, Г.И. Молекулярно-клеточные механизмы лазеротерапии / Г.И. Клебанов // Лазер и здоровье — 99: материалы Междунар. Конгр. — М., 1999.-С. 451-452.
73. Клименко, Д.А. Компрессионное лечение посттравматической лимфовенозной недостаточности /Д.А. Клименко, В.К. Шишло, А.А. Малинин // Вестник лимфологии. 2008. - №3. - С. 32-33.
74. Ковкало, Д.Н. Внутрисосудистое лазерное облучение крови в комплексном лечении гнойно-септических заболеваний / Д.Н. Ковкало, Е.П. Коновалов, П.И. Толстых и др. // Применение лазеров в хирургии и медицине.-М., 1989- Ч. 1.-С. 170-172.
75. Козлов, В.И. Основы лазерной физио- и рефлексотерапии / В.И. Козлов, В.А. Буйлин, Н.Г. Самойлов, И.И. Марков // Под ред. O.K. Скобелкина. -Самара-Киев, 1993. .216 с.
76. Козлов, В.И. Актуальные проблемы применения низкоинтенсивного лазерного излучения в медицине / В.И. Козлов // Клиническое и экспериментальное применение новых лазерных технологий: материалы Междунар. конф., -М.-Казань, 1997. С. 310-312.
77. Козлов, В.И. Лазерная терапия: итоги и перспективы / Козлов В.И. // Лазер и здоровье 99: материалы Междунар. Конгр. - М., 1999. - С. 317319.
78. Колсанов, А.В. Лечение раневых дефектов кожи и мягких тканей различной этиологии с применением клеточных культур и биопокрытий / А.В. Колсанов// Нижегородский медицинский журнал. 2003. - №1. -С.134-139.
79. Коненков, В.И. Клинически аспекты лимфологии / В.И. Коненков, Ю.И. Бородин// II Съезд лимфологов России: Тезисы докладов. — Санкт-Петербург, 2005. С. 150-152.
80. Константинова, Г.Д. Лимфологические проблемы во флебологии / Г.Д. Константинова, Е.Г. Градусов, Е.Д. Донская // Материалы II Съезда лимфологов России 23-25 мая 2005 г. Санкт-Петербург, 2005. - С. 152-153.
81. Корухов, Н.Ю. Создание аппарата «вспомогательная печень и его применение в комплексном лечении острой печеночной недостаточности: Дис. . .д-ра мед. наук / Корухов Н.Ю. М., 1989. - 357 с.
82. Крылов, B.C. Аутовенозное шунтирование в микрохирургии лимфатических сосудов / B.C. Крылов, Н.О. Миланов, К.Г. Абалмасов// Клин, хиругия.- 1982. №7. - С. 11-14.
83. Крюк, А.С. Терапевтическая эффективность низкоинтенсивного лазерного излучения / А.С. Крюк, В.А. Мостовников, И.В. Хохлов, Н.С. Сердюченко. Минск: Наука и техника, 1986. — 231 с.
84. Куприянов, В.В. Микролимфология / В.В. Куприянов, Ю.И. Бородин, Я. Л. Караганов, Ю.Е. Выренков. М.: Медицина, 1983.- 287 с.
85. Лазерное излучение в экспериментальной и клинической ангиологии: Монография / Б.Н Жуков, Н. А. Лысов.- Самар. гос. мед. ун-т; Самар. меведомств. НИИ "Неионизирующие излучения в медицине". Самара: Самар. Дом печати, 1996. - 167с.
86. Лазеры в медицине / Н.Ф. Гамалея, 3. М. Рудых, В.Я. Стадник. Киев: Здоров'я, 1988.-43 с.
87. Лапрун, И.Б. Действие излучения гелий-неонового лазера на перекисное окисление липидов и некоторые сопряженные реакции организма: Автореф. дисс. канд. биол. Наук / И.Б. Лапрун- М., 1981- 15 с.
88. Левин, Ю.М. Стимуляция лимфообразования и лимфооттока / Ю.М. Левин, А.Е. Сорокатый //Пат. Физ. 1979. - № 4. - С. 28-31.
89. Левин, Ю.М. Основы лечебной лимфологии / Ю.М. Левин. М.: Медицина, 1986. - 287 с.
90. Левин, Ю.М. Лимфотропная антибиотикотерапия / Ю.М. Левин, В.М. Буянов, К.Ю. Данилов //Хирургия. 1987. - №1. - С. 72-75.
91. Левин, Ю.М. Лечение, оздоровление, профилактика в условиях кризиса экологии организма / Ю.М. Левин. Москва: Изд-ство МГОУ, 1998 - 231 с.
92. Лобанова, В.В. Изучение лечебного действия низкоинтенсивного лазерного излучения на гнойные раны и трофические язвы: Автореф. дис. .канд.мед.наук / В.В. Лобанов. Минск, 1984. — 15 с.
93. Лохвицкий, С.В. Сочетанные хирургические вмешательства при хронической лимфовенозной недостаточности конечностей / С.В. Лохвицкий, А.Д. Богомолов, Г.К. Магзумов// В кн.: хирургия сосудов,-Майкон.- 1983. С.136-139.
94. Лохвицкий, С.В. Эндолимфатическая химиотерапия — способ выбора при лечении раневой инфекции / С.В. Лохвицкий, Ю.М. Шептунов, А.Е. Гуляев // Раны и раневая инфекция. М., 1993. - С.264-266.
95. Лурия, Е.А. Кроветворная и лимфоидная ткань в культурах / Е.А. Лурия. -М., 1972. 263 с.
96. Любарский, М.С. Комплексное лечение лимфедемы нижних конечностей М.С. Любарский, А.И. Шевела, В.В. Нимаев, В.П. Плешаков // Лимфология (эксперимент, клиника), т.З. — Новосибирск. 1995. - С.89-92.
97. Любарский, М.С. Новые технологии в лечении лимфедемы конечностей / М.С. Любарский, А.И. Шевела, А.А. Смагин //Бюллетень СО РАМН.-2001. № 4.-С. 116-120.
98. Матвеева, Ю.А. Эффективность лазеротерапии у больных стенокардией / Ю.А. Матвеева, А.С. Списаревская// Всероссийская юбилейная научно-практическая конференция по кардиологии и кардиохирургии: Материалы конференции. Самара, 1997. — С. 105-106.
99. Наренков, В.М. Формирование лимфовенозного анастомоза у пациентов с рецидивирующим рожистым воспалением / В.М. Наренков, Ю.А. Абрамов, А.Н. Косенков // 1-й Съезд лимфологов России: Мат. конференции. М., 2003. - с 91.
100. Наренков, В.М. Профилактика рецидивирующего рожистого воспаления методом лимфовенозного дренирования: Автореф. Дис. . канд. мед наук / В.М. Наренков. М., 2007. - 22 с.
101. Онищенко, Н.А. Гемоперфузия через донорские гепатоциты и фрагменты селезенки повышает эффективность лечения хронической печеночной недостаточности традиционными методами / Н.А. Онищенко,
102. В.И. Шумаков, А.А. Писаревский, и др.// Очерки по физиологическим проблемам трансплантологии и применения искусственных органов: Сб. науч. тр. Тула: Репроникс Лтд, 1998. - С. 338-376.
103. Орлов, Р.С. Лимфатические сосуды. Структура и механизмы сократительной аткивности / Р.С. Орлов, А.В. Борисов, Р.П. Борисова. -Л.: Наука, 1983.- 168
104. Павлюст, Л.П. Влияние низкоинтенсивного лазерного излучения на липиды крови, гепатоцитов и энтероцитов: Автореф. дис. . канд. биол. Наук / Л.Н. Павлюст. Львов, 1988. - 24 с.
105. Пагава, К.И. Механизмы действия низкоинтенсивного лазерного излучения на целостный организм / К.И. Пагава //Применение лазеров в хирургии и медицине: тез. Международного симпоз. — М.- Самарканд, 1988. -С. 540-541.
106. Петренко, В. М. Лимфатический узел: макро- и микроорганизация, ее физические основы и моделирование /В.М. Петренко// В кн.: Структурно-функциональные основы лимфатической системы. СПб.: изд. СПб ГМА, 1998. С. 46-54.
107. Петренко, В.М. Эволюция и онтогенез лимфатической системы / В.М. Петренко. СПб.: Изд-во ДЕАН, 2003. - 336 с.
108. Петренко, В.М. Основы эмбриологии. Вопросы развития в анатомии человека / В.М. Петренко. СПб.: СПбГМА, изд-во ДЕАН, 2003. - 400 с.
109. Петренко, В.М. К вопросу о строении лимфатической системы /В.М. Петренко. Успехи современного естествознания. — 2008. №5. - С. 128
110. Полонский, А.К. О некоторых проблемах лазерной терапии / А.К. Полонский // Проблемы лазерной медицины: материалы IV Междунар. конгр. -М.-Видное, 1997.-С. 151.
111. Попова, В.И. Изменения периферической крови при воздействии низкоэнергетического лазерного излучения /В.И. Попова // Гигиена труда и профзаболеваний: Мат. научн. конференции. 1985. - № 11. - С. 44-45.
112. Поташов, JI.B. Хирургическая лимфология / JI.B. Поташов, Н.А. Бубнова, Р.С. Орлов и др. СПб: Изд-во СПбГЭТУ «ЛЭТИ», 2000. - 270 с.
113. Применение магнитолазерного терапевтического аппарата на арсениде галлия: метод, рекомендации /Под ред. O.K. Скобелкина, А.К. Полонского, В.И. Корепанова. М., 1991. - 75с.
114. Савельев, B.C. Болезни магистральных вен / B.C. Савельев, Э.П. Думпе, Е.Г. Яблоков. М.: Медицина, 1972. - 440 с.
115. Савельев, В. С. Настоящее и будущее флебологии в России /B.C. Савельев // Флеболимфология. 1998. - № 9. С. 4-6.
116. Савельев, B.C. Флебология / B.C. Савельев.- М.: Медицина, 2001.- 664 с.
117. Савченко, Т.В. Профилактика тромботических осложнение у больных лимфедемой / Т.В. Савченко, М.Н. Титов, Н.Н. Крылов// Клин. Медицина. -1983. №5. — С.52-56.
118. Салиманжанов, Н.Н. Этапная хирургическая реабилитация больных с лимфовенозной недостаточностью конечностей /Н.Н. Салиманжанов. — Хирургия. 1997. - №5. - С. 26-30.
119. Сапин, М.Р. Лимфатический узел / М.Р. Сапин, Н.А. Юрина, Л.Е. Этинген. М.: Медицина, 1978. - 272 с.
120. Сапин, М.Р. Внеорганные пути транспорта лимфы / М.Р. Сапин, Э.И. Борзяк. М.: Медицина, 1982. - 264 с.
121. Сапин, М.Р. Иммунная система человека / М.Р. Сапин, Л.Е. Этинген — М.: Медицина, 1995. 304 с.
122. Сапин, М. Р. Новый взгляд на лимфатическую систему и ее место в защитных функциях организма / М.Р. Сапин // Морфология. 1997. - № 112 (5).-С. 84-87.
123. Саркисов, Д.С. Аллотрансплантация культивированных фибробластов на незаживающие раны после аутодермопластики /Д.С. Саркисов, Е.В*. Глущенко, С.С. Морозов// Бюллетень экспериментальной биологии и медицины.-1991 .-№5.-С. 542-544.
124. Саркисов, Д.С. Использование культивированных фибробластов для восстановления кожных покровов у тяжелообожженных / Д.С. Саркисов,
125. B.Д. Федоров, Е.В. Глущенко// Бюл. Эксп. биол. мед.- 1995.-Т.19,№ 6.1. C.566-570.
126. Скупченко, В.В. Экспериментальное и клиническое применение лазерного излучения в коррекции репаративного морфогенеза / В.В.
127. Скупченко, Е.С. Милюдин // Лазер и здоровье 99: материалы Междунар. Конгр. -М., 1999. - С. 481-482.
128. Современные представления о физиологии лимфотока и лечение лимфедемы нижних конечностей /Ерофеев Н.П., Фионик О.В., Бубнова Н.А. и др. // Актуальные вопросы современной морфологии и физиологии.I
129. Сборник научных трудов, посвященный 100-летию основания СПбГМА имени И.И. Мечникова. СПб. - 2007. - С. 1.48 - 154.
130. Степанов, В.А Современные методы контроля лазерного облучения крови / В.А. Степанов, М.А. Каплан, О.Ю. Воронина. Новосибирск, 1990 — С. 20-21.
131. Степанов, В.А. Действие низкоинтенсивного излучения на процессы в тканях в условиях лазерной- терапии / В.А. Степанов* М.А. Каплан, О.Ю. Воронина// Низкоинтенсивные лазеры в медицине: материалы Всесоюзного симпоз. -Обнинск, 1991. Ч. 1. С. 104-107.
132. Суринов, Б.П. Иммуномодулирующие эффекты НИЛИ / Б.П. Суринов, Н.А. Карпова, В.Г. Исаева // Низкоинтенсивные лазеры в медицине: материалы Всесоюз. симпоз. Обнинск, 1991. Ч. 1. — С. 107-109.
133. Суханова, Г.И. Сравнительная оценка эффективности лазеро- и АУФОК-терапии при бронхиальной астме / Г.И. Суханова М.Ф. Киняйкин, А.А. Знахуренко// Современное состояние проблемы колоректального рака: Мат. конференции. — Санкт-Петрбург, 1993. С. 58-60.
134. Трапезников, Н.Н. Действие излучение гелий-неонового лазера на лимфоциты человека in vitro / Н.Н. Трапезников, В.М. Купин// Вестник АМН СССР. 1984. - №5. - С. 40-43.
135. Трофимов, В.А. Исследование модификации супероксиддисмутазы при действии низкоинтенсивного излучения гелий-неонового лазера / В.А. Трофимов, А.П. Власов // Проблемы лазерной медицины: материалы IV Междунар. конгр. -М.-Видное, 1997. С. 311.
136. Фионик, О.В. Опыт применения препарата Антистакс в лечении хронической венозной недостаточности / О.В. Фионик, А.Ю. Семенов, Н.Б.
137. Ершова // XIV Российский национальный конгресс «Человек и лекарство». Сборник материалов конгресса. — Москва. 2007. - С.234-235.
138. Фионик, О.В. Современные подходы к диагностике и лечению лимфедемы нижних конечностей / О.В. Фионик, Н.А. Бубнова // 80 лекций по хирургии / Под общей редакцией Савельева B.C. 2008. — С.278-289.
139. Фриденштейн, А.Я. Клеточные основы кроветворного микроокружения /А.Я. Фриденштейн, Е.А. Лурия. М.: Медицина, 1980. — 216 с.
140. Харина, Г.М. Изменение цитоархитектоники лимфоидных органов при воздействии на организм лазерного излучения / Г.М. Харина // Применение лазеров в хирургии и медицине: Мат. конференции. М., 1989. - Ч. 1. — С. 567-569.
141. Хасаев, Х.М. Новое в диагностике и лечение хронических лимфатических отеков нижних конечностей / Х.М. Хасаев, Б.М. Уртаев, М.М. Алиев // Перспективные информационные технологии и интеллектуальные системы. 2003.- №1. - С.64-67.
142. Хирургическое лечение лимфатических отеков конечностей / М.С. Любарский, А.И. Шевела, О.А. Шумкови др. // Мат. 11 науч.-практич. конф. «Актуальные вопросы современной медицины».- Новосибирск, 2001.-С. 251.
143. Хомерики, С.Г. Влияние облучения крови гелий-неоновым лазером на количесвто лейкоцитов крови и лейкоцитарную формулу / С.Г. Хомерики // Клиническая лабораторная диагностика. М., 1992. - №11-12. — С. 50-52.
144. Цукерман, И.Я. Внутрисосудистое облучение крови в экспериментальной и клинической онкологии / И.Я. Цукерман, З.Д. Кицманюк, В.Б, Демочко// Применение лазеров в хирургии и медицине. -М., 1989. -Ч.1.-С. 109-110.
145. Цуман, В.Г. Критерии эффективности лазеротерапии при лечении детей с гнойно-септическими заболеваниями / В.Г. Цуман, В.И. Шербина, А.Е. Машков, Е.З. Друзюок // Проблемы лазерной медицины: материалы IV Междунар. конгр. -М.-Видное, 1997. С. 98-99.
146. Цыпин, А.Б. Терапия септических состояний с помощью подключения ксеноселезенки / А.Б. Цыпин, А.А. Макаров, С.Ю. Сафаров, и др / Тез. докл. 7-го Международного симпозиума по гемосорбции. Киев, 1986. - С. 124-125.
147. Чалык, Ю.В. Влияние BJIOK на функциональную активность лейкоцитов и систему антиоксидазной защиты / Ю.В. Чалык // Низкоинтенсивные лазеры в эксперименте и клинике. — Саратов, 1992. -С. 107-110.
148. Чепеленко, Г.В. Рентгено-диагностика заболеваний лимфатических узлов / Г.В. Чепеленко. — Челябинск: Уральское книжное изд-во. — 1984. -170 с.
149. Черкасов, А.В. Лечебное применение полупроводниковых ИК-лазеров / А.В. Черкасов, Ю.А. Порецкий, Г.Г. Прончатов // Применение полупроводниковых лазеров и светодиодов в биомедицине и медицинском приборостроении: тез. докл. — Калуга, 1989. С. 77-78.
150. Чернышенко, Л.В. Лимфатическая система в норме и патологии / Л.В. Чернышенко, А.А. Сушко. Киев: Здоровье, 1973. — 198 с.
151. Чернух, A.M. Микроциркуляция / A.M. Чернух, П.Н. Александров, О.В. Алексеев. -М.: Медицина, 1984. 432 с.
152. Шабалин, В.Н. Влияние лазерного излучения на иммунокомпетентные клетки / В.Н. Шабалин, Т.В. Иваненко, Т.В. Скокова и др // Лазеры и медицина: сб. тез. докл. Междунар. Конф. -Ташкент-М., 1989. С. 143-144.
153. Шумаков, В.И. в кн. Очерки по физиологическим проблемам трансплантологии и применения искусственных органов / В.И. Шумаков, А.А. Писаревский, Н.А. Онищенко и др. — Тула: Репроникс Лтд., 1998. С. 338-376.
154. Юрах, Е.М. О влиянии гелий-неонового лазера на кровеносное русло периферических нервов / Е.М. Юрах // Тез. докл. Всесоюз. конфер. по применению лазеров в медицине. Красноярск, 1983. - С. 169.
155. Ярилин, А.А. Основы иммунологии /Ярилин А.А. — М.: Медицина, 1999.- 154 с.
156. Яровенко, Г.В. Коррекция лимфатического оттока при посттромбофлебитической болезни нижних конечностей: Дис. . канд. мед. наук / Г.В. Яровенко. Самара, 1999. - 179 с.
157. Яровенко, Г.В. Возможности использования ткани лимфатических узлов для получения культуры стромальных клеток / Г.В. Яровенко, Б.Н. Жуков// XIII Всероссийского съезда сердечно-сосудистых хирургов: Тезисы докладов. М., 2007. - С. 128.
158. Яровенко, Г.В. Возможности пллучения стромальных клеток из лимфатических узлов человека / Г.В. Яровенко, В.В. Россинская//Ш Съезд лимфологов России:мат. Канфер. М., 2008. — С.23-25.
159. Allegra, С. Morphologic and functional changes of the microlymphatic network in patients with advancing stages of primary lymphedema / C. Allegra // Lymphology. 2002.- №35. - С. 114-120.
160. Atsumi, K. Biostimulation effect of low power energy of dioxide laser for pain relief / K. Atsumi, I. Fuj'imasa, Y. Abe// Laser surg. med.- 1987. №1. — P.77.
161. Augustine, E. Physical therapists play an important role in treating lymphedema / E. Augustine // Oncol. Nurs Forum. 1997. Vol. 23. - № 3. P. 421-422.
162. Barker, S.G.E. Lymphangiosarcoma complicatying chronic primary lymphoedema / S.G.E. Barker, K.G. Burnand et.al. // Br. J. Surg. 1987. - V. 74. -P. 1180.
163. Baum, J. Moglichkeiten und Grenzen der Akupunktur in der Schmerzambulanz / J. Baum// Akupunktur. 1986. Bd. 14. - № 2.- S. 95-104.
164. Baumeister, R.G.H. Transplantation of lymph vessels on rats as well as a first therapeutic application on the experimental lymphedema of the dog / R.G.H. Baumeister, J. Seifert, B. Wiebecke// Eur. Surg. 1980. - P. 12-16.
165. Becker, C. Long-term Results Following Microsurgical Lymph Node Transplantation /Becker С , J.Assouad, M. Riquet, G.Hidden // Ann Surg. 2006 March; 243(3): 313-315.
166. Belcaro, G. Lymphatic tissue transplant in lymphedema~a minimally invasive, outpatient, surgical method: a 10-year follow-up pilot study / G.
167. Bourgeois, H. Les effects biologiques des lasers / H.Bourgeois// Bull! mem. Soc.Med. Paris.-1985.-№l.-P.l-3.
168. Bourne, D.W.A. First Course in Pharmacokinetics & Biopharmaceutics ; University of Oklahoma College of Pharmacy. 1995. http://157.142.72.143/gaps/pkbio/Ch04/Ch0403.htm5
169. Brennan, M.J. Overview of treatment options and review of the current role and use of compression garments, intermittent pumps, and exercise in the management of lymphedema / M.J. Brennan , L.T. Miller .// Angiology. 2008. -№59(1). -P. 77-83.
170. Brunetand, L.M. et al. International laser Symposium: Abstr. -Florence, 1979. P. 36.
171. Brunetaud, I.M. Generalites sur les lasers / Brunetaud I.M., Maunoury V., Mordon S. // J. Gynecol. Obstetr. Biol. Reprod. 1986. - V. 15. № 4. - P. 424426.
172. Brunner, R. Application of laser light of low power density. Experimental and clinical investigations / R. Brunner// Curr. probl. dermatol. 1986. - №15. - P. 111-116.
173. Campisi, C. Surgery for the treatment of lymphedema / C. Campisi // Eur J Lymph Rel Prob. 2002. - №10. - P.24-27.- 146200: Carr, I. Lymphoreticular diseas /I. Carr, B;W. Hancock, L. Ilanry, W.A. Milford. -Moskow. 1980. - P: - 278
174. Casley-Smith, J.R. Treatment for lymphedema ofthe arm—the Casley-Smith method: a noninvasive method produces continued reduction/ Casley-Smith J.R, Boris M, Weindorf S, Lasinski B.// Cancer. 1998. - №15. - P.2843-2860;
175. Casley-Smith, J.R: A . fine structural study of the removal of the effectiveness of benzo-pyrone treatment .of lymphedema by the destruction of the macrophages by silica / Casley-Smith, J;R:// Br. J. Exp; Pathol. 1978. - №59(2). - P. 116.
176. Chen, H.C. Lymph, node transfer, for the treatment of obstructive lymphoedema in the canine model. / H.C. Chen, M.C. O'Brien, I.W. Roger, et al. // Br J Plast Surg.-. 1990.- №43.-P:578-586.; '
177. Foldi, M. Physiology and pathophysiology of lymphflow In Lymphedema/ Foldi, M. L. Clodius L. Stuttgart, 1977. - Georg Thieme Publishers. - pp. 1-11.
178. Foldi, M. Therapy of chronic lymphedema of the limbs / M. Foldi // Phlebologie. 1988. - № 41.- P.397-400.
179. Foldi, M. Treatment of lymphoedema / M. Foldi // Lymphology. -1994. -№27.- P. 1-5.
180. Garfein, ES Learning from a lymphedema clinic: an algorithm for the management of localized swelling / E.S. Garfein , L.J. Borud, A.G. Warren , S.A. Slavin// Plast reconstr Surg. 2008. - №121(2). - P.521-528.
181. Glassberg, E. Biological effects of lower energy irradiation / E. Glassberg, G.P. Lask, J. Uito// Laser surg. and Med. 1988. - №8. - P. 186.
182. Goldman, L. Biomedical aspects of the laser. New York: Springer-Verlag, 1967. V. 1.332 p.
183. Gyapong, J.O. The economic burden of lymphatic filariasis in northern Ghana / J.O. Gyapong, D. Evans, M. Aikins, M. Gyapong et al.//Ann Trop Med Parasitol. 1996. -№90(1). -P.39-48
184. Jones, Nicole H. "Finding the Area under a Curve Using JMP and a Trapezoidal Rule", SAS Institute, 1997 http://www.jmpdiscovery.com/news/jmpercable/fall97/trapezoidalrule.html
185. Jurgen, Scifert Experimental basis and first application of clinical lymph vessel transplantation of secondary lymphedema / Jurgen Scifert, Baldur Wiebecke// World Journal of Surgery. 2005. - P. 401-407.
186. Kampmeier,O.F. The development of the thoracic duct in the pig / O.F. Kampmeier// Amer. J. Anat. 1912. Vol.13. - P. 401-475.
187. Kinmonth, О The prognosis of primary lymphedema of the lower limbs / O. Kinmonth // Arch.Surg. 1981. - V.l 16. - N 9. - P.l 157 - 1160.
188. Konopik, J., Conservative treatment of chronic lymphedema and sclerotic skin processes / J. Konopik //Z Arztl Fortbild (Jena). -1984. №78(8). - P. 307310.
189. Lindvall, O. Evidence for long-term survival and function of dopaminergic grafts in progressive Parkinson's disease /О. Lindvall// Ann. Neural.- 1994. -№35. — P.172-180.
190. Livens, P.S. The influence of laser on the lymphatic system /P.S. Livens// Laser surg. med. -1989. №8. - P. 175.
191. Mattioli, A. Comportamento dei collectori limfatici nella safenectomia mediante strippig / A. Mattioli// Minerva chir. 1973. - Vol.28. - P. 544-550.
192. Mayall, R.G. Lymphography apres saphenectomies et dans les seguelles de thrombophlebite correlations therapeutigues/ Mayall R.G., C. Barbrosa// Phlebologie. 1968. - Vol.21. - P. 175-178.
193. McGuinness, C.L. Lymphoedema / C.L. McGuinness, K.G. Burnand// Trop Doct. 2001. - №31 .-P.2-7.
194. Mester, E., The biochemical effects of laser application / E. Mester, A. Mester, //Laser Surg, and Med. 1985. V. 5. № 1. P. 31-39.
195. Mester, E. Laser stimulation of wound healing II Immunological tests / E. Mester, S. Naguluskay, A. Doklen //Acta chirurgical Acad. Sci. Hung. 1976. V.17. №1. P.49-55.
196. Mester, E. Wirkung der Laserstrahlen und die Wundheilund / E. Mester, T. Spiry, B. Szende, I.G Tota. // Z. exp. Chir. 1971. Bd. 4. № 5. S. 307-312.
197. Nanda, B. Treatment seeking behaviour and costs due to acute and chronic forms of lymphatic filariasis in urban areas in south India / B. Nanda, K. Krishnamoorthy// Trop Med bit Health. 2003. - №8(1). - P.56-59.
198. Neese, P.Y. Management of lymphedema / P.Y. Neese // Lippincotts Prim Care Pract. 2000. - №4. - P 390-399.
199. Nitzsche, H. Peripheres lymphalussystem der unteren Extremitaten bei chronischen Veneninsuffiziens / H. Nitzsche, O. Peter, S. Anders// Phlebologie und Proctologie. 1985.
200. Ottesen, E. A. The global programme to eliminate lymphatic filariasis / E. A. Ottesen //Trop Med bit Health. 2000. -№ 5(9). - P. 591-594.
201. Palrlato, Y. Superoxide dismutase activity in the skin of rats irradiated by He-Ne laser / Y. Palrlato, Y. Cimmino, E. De Venditis et al.// Experientia. -1983.- V. 39.- № 7. P. 750-751.
202. Passarella,S. Increase of proton electrochemical potential and ATP synthesis in rat liver mitochondria irradiated in vitro by helium-neon laser / S. Passarella, E. Gasamassima, S. Molinary et al // FEBS Lett. 1984. - V. 175. - № 1. - P. 9599.
203. Patten, B. The development of the sinoventricular conduction system / B. Patten// Med Bull (Ann Arbor). 1956. - №22. - P 1-21.
204. Piller, N.B. Macrophage and tissue changes in the developmental phases of secondary lymphoedema and during conservative therapy with benzopyrone /N.B. Piller // Arch Histol Cytol. 1990. -№53. - P.209-218.
205. Posner, T.N. Limits on treatment for lymphoedema / T.N. Posner, N.A. Smith// Med J Aust. 2000.- №173. - P.501-502.
206. Ranvier, L. Development des vaisseaux lymhatiques / L. Ranvier HQ. R. Acad. Sci.- 1985.-Vol. 121.-P. 1105-1125.
207. Repice, F. He-Ne laserradiation of the rat thymus and lymph node / F. Repice//Bull. Soc. Ital. biol. Sper. 1985. - №61. - P. 1401-1407.
208. Rockson; S.G. Lymphedema / S.G. Rockson // Am J Med. 2001. - №110. -P. 288-295.
209. Rockson, SG. Lymphedema/ S.G. Rockson // Curr Treat Options Cardiovasc Med. 2006. - №8. P. 129-136.
210. Sabin, F. R. On the origin of the lymphatic system from the veins and the development of lymph hearts and thoracics duct in the pig / F. R. Sabin // Amer J. Anat. 1902. - №1. - P. 367-391.
211. Seshi, B. Human Bone Marrow Stromal Cell: Coexpression of Markers Specific for Multiple Mesenchymal Cell Lineages / B. Seshi, S. Kumar, D. Sellers //Blood Cells, Molecules, and Diseases. 2000. - V.26. -N.3. - P. 234246.
212. Shin, W.S. Animal models for the study of lymphatic insufficiency / W.S. Shin, A. Szuba, S.G. Rockson // Lymphat Res. Biol. 2003. - №1. - P. 159-169.
213. Slipka, J. Early development of the lymphatic system /J. Slipka, J. Kosova// Pizen. Lee. Sb. 1981. - B. 41. - P. 15-21.
214. Srividya, A.The dynamics of infection and disease in Bancroftian filariasis / A. Srividya, S.P. Pani, P.K. Rajagopalan et al.// Trans R Soc Trop Med Hyg. -1991.-№85.-P. 255-259.
215. Szuba, A. Lymphedema: Anatomy, physiology and pathogenesis / A. Szuba,
216. Rockson // Vase Med. 1997. - №2. - P. 321-326.
217. Szuba, A. Presence of functional axillary lymph nodes and lymph drainage within arms in women with and without breast cancer-related lymphedema / A. Szuba , A. Pyszel, D. Jedrzejuk et al. // Lymphology. 2007. - №40(2). - P.816.
218. Tabibiazar, R. Inflammatory Manifestations of Experimental Lymphatic Insufficiency / R. Tabibiazar, L. Cheung, J. Han et al. //Ann Surg. 2006. - № 243(3). P. 313-315.
219. Tomita, S. Autologous transplantation of bone marrow cells improves damaged heart function / S. Tomita, R.K. Li, R.D. Weisel et al.// Circulation. — 1999.-№100.-P.247-256.
220. Villavicencio, J.L. Последние достижения в терапии отеков / J.L. Villavicencio, A.R. Hargens, E. Pikoulicz// Phlebolymphology. 1996. - №10,4. -P. 314-319.
221. Warren, A.G. Lymphedema: a comprehensive review / A.G. Warren, H. Brorson, L.J. Borud et al. // Harvard Medical School, Boston, MA, USA.Ann Plast Surg. 2008. - №60(2). P. 228.
222. Watanabe, Т. Artificial lymph nodes induce potent secondary immune responses in naive and immunodeficient mice / T. Watanabe, N. Okamoto, R.Chihara et al.// J Clin Invest. 2007. - № 117(4).- P. 997-1007.
223. Wilson, S.F. Histopathologic improvement with lymphedema management / S.F. Wilson// Emerg Infect Dis.- 2004. №10. P. 1938-1946.
224. Yoffey, J.M. Lymph and the Lymphomyeloid Complex / J.M. Yoffey, F.C. Courtice// Lymphatics, Academic Press. 1970.