Автореферат и диссертация по медицине (14.00.09) на тему:Клинико-микробиологические аспекты инфекций мочевой системы у детей и действие низкомолекулярного пептидного комплекса на выделенные от больных урокультуры

На правах рукописи

КОСАРЕВА ПОЛИНА ВЛАДИМИРОВНА

КЛИНИКО-МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ИНФЕКЦИЙ МОЧЕВОЙ СИСТЕМЫ У ДЕТЕЙ И ДЕЙСТВИЕ НИЗКОМОЛЕКУЛЯРНОГО ПЕПТИДНОГО КОМПЛЕКСА НА ВЫДЕЛЕННЫЕ ОТ БОЛЬНЫХ УРОКУЛЬТУРЫ

14.00.09 - педиатрия 03.00.07 - микробиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

ПЕРМЬ 2004

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Пермская государственная медицинская академия Министерства Здравоохранения Российской Федерации» Научные руководители: доктор медицинских наук, профессор

Наталья Ивановна Аверьянова, кандидат медицинских наук Лариса Владимировна Волкова

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор

Нина Борисовна Мерзлова, кандидат медицинских наук, доцент Владимир Павлович Коробов

Ведущая организация: Уральская государственная медицинская академия, г. Екатеринбург

Защита состоится «_/£» _ 2004 года в_

часов на заседании диссертационного совета Д 208.067.02 при Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Пермская государственная медицинская академия Министерства здравоохранения Российской Федерации» по адресу: 614990, г. Пермь, ул. Куйбышева, 39.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Пермская государственная медицинская академия Министерства Здравоохранения Российской Федерации» по адресу: 614000, г. Пермь, ул. Коммунистическая, 26.

Автореферат разослан

2004 г.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук, профессор

В.В. Щекотов

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

АКТУАЛЬНОСТЬ. Уроренальные инфекции - самая распространенная патология органов мочевой системы в детском возрасте (Orellana P. et а1„ 2002; Коровина НА. с соавт., 2003). Умение диагностировать и лечить эту патологию - один из критериев подготовленности педиатра к практической деятельности (Малаховский Ю.Е. с соавт., 1998).

В настоящее время уровень заболеваемости инфекциями мочевой системы (ИМС) среди детского населения неуклонно увеличивается (Урывчиков ГА и др., 2002), нередко встречаются случаи их упорного, хронического течения, приводящие к инвалидизации ребенка (Игнатова М.С., 1998).

Несмотря на то, что этиология ИМС к настоящему времени достаточно хорошо изучена, вопрос о структуре уропатогенов является дискутабельным: работы многих авторов свидетельствуют о том, что наряду с традиционным высевом из мочи больных микроорганизмов вида Escherichia coli наблюдается рост грампозитивной кокковой флоры (Кухтевич А.В., 2002; Сафина, 2002; Gupta К., 2003; Ronald А., 2003; Kumamoto Y. et al., 2003). Также требует более детального изучения вопрос о взаимосвязи возбудителя и клинических проявлений ИМС (Гринбаум Н.В., 1987; Гриценко ВА, 1998; Адаменко О.Б., 2002).

В структуре средств, применяемых для этиотропной терапии инфекций мочевой системы, первыми по частоте использования стоят химически синтезированные антибиотики. Разнообразие нежелательных побочных эффектов, а также быстрое формирование резистентности бактерий к лекарственным антибактериальным средствам определяют постоянный интерес исследователей к поиску новых эффективных и безопасных антибактериальных препаратов.

Начало XX века отмечено открытием в нейтрофильных гранулоцитах млекопитающих антимикробных поликатионных субстанциий пептидной природы (Petterson А, 190S), несколько позже названных дефенсинами (Ganz Т. et al., 1985). В дальнейшем дефенсины и подобные им антибактериальные пептиды были обнаружены в различных тканях многоклеточных организмов (Nicolas P., Мог А., 1995; Lehrer R.I., 1996; Stabili L. et al., 1996; Taniai K. et al., 1996; Robert E.W. Hancock, 1997; Date A. et al., 1998; Кокряков B.H., 1999; Weng H.B. et al., 2002; Bowie J.H. et al., 2002; Andersson E. et al., 2002; Hagiwara. K. et al., 2003). Список их постоянно пополняется, и в настоящее время имеются предпосылки использования этих соединений в ближайшем будущем в качестве антибактериальных средств нового поколения, по

РОС национальная} БИБЛИОТЕКА J

i1

механизму действия и биологическим эффектам, от традиционно применяемых: антибиотиков.

В 80-х годах прошлого столетия пермскими учеными - С А Печеркиной, ЛИ. Малеевой, И.В. Щицыной, В.П. Коробовым - впервые был обнаружен феномен антибактериального действия препаратов человеческого лейкоцитарного интерферона. В последующие годы на базе отделения > интерферона филиала ФГУП < МЗ';. РФ" НПО «Микроген» «Пермское НПО Биомед» был. выделен» ассоциированный' с интерфероногенезом пептидный комплекс с молекулярной массой входящих в его состав пептидов не превышающей 2000 Да. Опираясь на их происхождение и низкий молекулярный вес, можно предполагать, что полученные пептиды - обладают антибактериальной активностью.

ЦЕЛЬ ДИССЕРТАЦИОННОЙ ? РАБОТЫ: изучение клинико-микробиологических аспектов > ИМС у детей и исследование действия низкомолекулярного > пептидного комплекса, ассоциированного с интерфероногенезом, на условно-патогенные и патогенные микроорганизмы, включая урокультуры, выделенные из мочи пациентов с микробно-воспалительными заболеваниями мочевой системы.

ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ:

1. Изучить микробный пейзаж мочи детей с инфекциями мочевой системы.

2. Определить особенности клинического течения инфекций мочевой системы у детей в зависимости от этиологического фактора.

3. Установить уровень антибиотикорезистентности выделенных штаммов уропатогенных микроорганизмов.

4. Исследовать низкомолекулярный пептидный- комплекс на* наличие антибактериального действия на примере «музейных» штаммов условно-патогенных и патогенных микроорганизмов.

5. Исследовать действие низкомолекулярного пептидного комплекса на культуры микроорганизмов, выделенные из мочи детей с инфекционно-воспалительными заболеваниями мочевой системы.

НАУЧНАЯ- НОВИЗНА ИССЛЕДОВАНИЯ. Впервые. доказано существование у низкомолекулярного пептидного комплекса, ассоциированного * с интерфероногенезом, антибактериального действия на примере «музейных» штаммов грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов: Stqphylococcus aureus, Streptococcus faecalis, Escherichia coli, Proteus mirabilis,. Klebsiel!apneumonium,>Pseudomonas aeruginosae: Установлено, что выраженность антибактериальной активности пептидного комплекса зависит; or количественных характеристик культур микроорганизмов (антибактериальное

действие выражено в большей степени при относительно низких концентрациях микроорганизмов в единице объема) и от ионной силы инкубационной среды (ее увеличение посредством добавления хлорида натрия приводит к снижению антибактериальной активности пептидного комплекса).

Выявлено антибактериальное действие пептидного комплекса, ассоциированного с интерфероногенезом, в отношении уропатогенных штаммов микроорганизмов родов Escherichia, Staphylococcus, Klebsiella и Proteus, выделенных из мочи детей с инфекциями мочевой системы Установлено, что микрофлора мочи детей с диагнозом «цистит» имеет к пептидному комплексу 100%-ную чувствительность. Полученные результаты обосновывают продолжение исследовательской работы в плане разработки на основе пептидного комплекса нового антибактериального препарата, предназначенного для терапии ИМС.

В ходе исследования определены современные тенденции в этиологии и клинике инфекций мочевой системы у детей. Показано, что помимо бактерий рода Escherichia, традиционно считающихся основным этиологическим фактором уроренальных инфекций, существенную роль в возникновении ИМС играют микроорганизмы рода Staphylococcus. Установлено, что имеются различия в структуре уропатогенов в разные возрастные периоды жизни ребенка, определены микроорганизмы, высев которых наиболее характерен для хронического течения микробно-воспалительного процесса в органах мочевой системы Показано, что более тяжелые варианты течения ИМС регистрируются при высеве из мочи пациентов уропатогенов, принадлежащих родам Escherichia и Proteus.

ТЕОРЕТИЧЕСКАЯ И ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ. Полученные результаты, свидетельствующие о том, что пептидный комплекс, ассоциированный с интерфероногенезом, обладает антибактериальной активностью, позволяют в целом расширить представление о механизмах врожденного иммунитета человека. Благодаря наличию антибактериального эффекта низкомолекулярного пептидного комплекса в отношении уропатогенных штаммов микроорганизмов, выделенных из мочи больных, дальнейшая исследовательская работа, конечная цель которой - создание нового эффективного и безопасного антибактериального средства для лечения инфекций мочевой системы, обоснована и целесообразна.

Выявленное в процессе бактериологических исследований разнообразие уропатогенных микроорганизмов, инициирующих ИМС, свидетельствует о необходимости назначения пациентам до получения результатов микробиологического исследования мочи современных антибактериальных средств широкого спектра действия, активных в отношении не только грамотрицательной, но и грамположительной флоры.

После выделения и идентификации возбудителя ИМС необходим дифференцированный подход к назначению этиотропной терапии с учетом выявленной антибиотикорезистентности уропатогенных микроорганизмов.

ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НАЗАЩИТУ:

1. В структуре уропатогенов наряду с традиционно высеваемой грамнегативной флорой отмечается увеличение доли грамположительных микроорганизмов, главным образом, за счет представителей рода Staphylococcus.

2. Особенности течения ИМС во многом обусловлены характером микрофлоры мочи пациентов, для разных возрастных периодов выявлены наиболее характерные виды возбудителей.

3. Уропатогенные штаммы, выделенные от больных с инфекциями мочевой системы, обладают множественной антибиотикорезистентностью.

4. Низкомолекулярный пептидный комплекс, продуцируемый лейкоцитами человека в процессе интерфероногенеза, имеет, вероятнее всего, суммарный положительный заряд, то есть пептиды, входящие в его состав, могут считаться катионными, и проявляет антибактериальную активность в отношении не только грамположительных микроорганизмов, что типично для катионных пептидов, но и в отношении представителей грамнегативной флоры: Escherichia coli, Proteus mirabilis, Klebsiellapneumonium, Pseudomonas aeruginosae.

5. Низкомолекулярный пептидный комплекс из лейкоцитов человека обладает антибактериальным действием в отношении изолированных из мочи больных уроренальными инфекциями культур микроорганизмов: Escherichia coli, Staphylococcus spp.Proteusspp,Klebsiellaspp, Pseudomonas aeruginosae.

ВНЕДРЕНИЕ В ПРАКТИКУ. Полученные результаты внедрены в учебный процесс на кафедре пропедевтики детских болезней, факультетской педиатрии и последипломного образования ГОУ ВПО «ПГМА МЗ РФ», включены в программу обучения врачей ФУВ. Данные по антибиотикорезистентности урокультур, выделенных из мочи больных нефрологического отделения ДГКБ им. П.И Пичугина г. Перми, используются в лечебной работе. Результаты исследований используются в научно-исследовательской работе лаборатории интерферона филиала Пермское НПО «Биомед».

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ И ПУБЛИКАЦИИ. Работа выполнена в соответствии с планом НИР ГОУ ВПО «Пермская государственная медицинская академия МЗ РФ. Результаты исследований доложены и обсуждены на Международной научно-практической конференции молодых ученых «Актуальные вопросы клинической и экспериментальной медицины - 2000» (Минск, 2000), П Межрегиональной научной

конференции молодых ученых «Современные проблемы экологии, микробиологии и иммунологии» (Пермь, 2002), диплом I степени; Региональной научно-практической конференции «Здоровье и образование ребенка» (Пермь, 2002); X Юбилейном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2003), диплом I степени, Юбилейной конференции, посвященной 105-летию ПНПО «Биомед», ежегодных научных сессиях ПГМА (Пермь, 2002, 2003 гг.), клинических конференциях ДГКБ им. П.И. Пичугина, IX Конгрессе педиатров России (Москва, 2004).

По теме диссертации опубликовано 23 работы.

ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ. Диссертация включает следующие разделы и главы: содержание, введение, обзор литературы, материалы и методы исследования, три главы собственных исследований, обсуждение результатов, выводы, практические рекомендации, список литературы. Материалы диссертации изложены на 159 печатных страницах, содержат 3 клинических примера, 12 таблиц, 36 рисунков, включают 182 литературных источника, из которых 106 - отечественных и 16 -иностранных авторов.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В период с июня 2002 по июль 2003 гг. бактериологически обследованы 990 детей с ИМС, при этом выделено 1202 урокультуры. В клиническое исследование взято 10 детей в возрасте от 3 месяцев до 15 лет (11 мальчиков и 59 девочек.), из мочи которых в диагностическом титре выделены микроорганизмы родов Escherichia и Staphylococcus, a также бактерии родов Klebsiella, Proteus и вида Pseudomonas aeruginosae в различных титрах.

Исходя из формулировки клинического диагноза, все больные были разделены на четыре группы: первую составили дети, имеющие поражение верхних отделов мочевого тракта (острый пиелонефрит и активная фаза хронического пиелонефрита) - 26 больных, вторую - дети с поражением нижних мочевых путей (острый, рецидивирующий или хронический цистит в период обострения) - 13 больных, третью - дети, имеющие сочетанное поражение верхних и нижних отделов мочевого тракта (19 пациентов), и четвертую - дети с асимптоматической бактериурией - 12 человек.

Низкомолекулярный пептидный комплекс, продуцируемый лейкоцитами человека в процессе интерфероногенеза, антибактериальная активность которого, в том числе, в отношении уропатогенной микрофлоры была установлена в рамках настоящего исследования, получен в отделении интерферона филиала ФГУП МЗ РФ НПО «Микроген» «Пермское НПО Биомед».

Тестируемый пептидный комплекс обладал следующими характеристиками: молекулярная масса входящих в его состав пептидов - до 2000 Да, содержание хлоридов в различных образцах - от 0,005% до 0,9%. Содержание белка в препарате (по методу Лоури) - от 100 мкг/мл до 1431 мкг/мл. Аминокислотный состав пептидов представлен в таблице 1.

Таблица 1. Аминокислотный состав препарата низкомолекулярных пептидов, продуцируемых лейкоцитами человека в процессе интерфероногенеза (данные предоставлены отделением интерферона филиала ФГУП МЗ РФ НПО «Микроген» «Пермское НПО Биомед»)

Наэвалие аминокислоты Процентное содержание

Лизни 5,772

Гисгидни 1,364

Аргинин 7,136

Аспарагия 1,955

Треонин 6,045

Серии 1,591

Глутамин 48,364

Пронин 2,318

Глицин 1,136

Алания 1,364

Валют 6,182

Мепгоння 1,000

Изо лейцин 6,182

Лейцин 6,955

Тирозин 0,273

Фснилаланин 2,091

Всем больным проводили полное клинико-лабораторное обследование, включая рентгенологические методы - экскреторную урографию и микционную цистографию. Уропатогенные штаммы микроорганизмов из мочи пациентов выделяли при помощи метода секторных посевов. При интерпретации полученных результатов руководствовались приказом МЗ РФ от 1985 г. (Приказ МЗ СССР № 535), и рекомендациями ВОЗ 1991 г. (Vandepitte J. et al., 1991). В качестве диагностического принимали во внимание титр 1*10 колониеобразующих единиц в 1,0 мл мочи для микроорганизмов вида Escherichia coli и грамположительных кокков (Приказ МЗ СССР № 535; Vandepitte J. et al., 1991). Высев микроорганизмов рода Klebsiella, рода Proteus и вида Pseudomonas aeruginosa принимали за диагностический при любой степени бактериурии в виду их высокой патогенности (Эрман М.В., 1997; Мазурин АВ., 2000; Beisel В. et al., 2002; Dwyer PL., O'Reilly M., 2002). Выделенную чистую культуру идентифицировали микроскопией мазка, окрашенного по Граму, и изучением культуральных свойств. Исследование биохимических свойств возбудителя проводили, используя стандартные биохимические тесты (Приказ МЗ СССР № 535).

Чувствительность клинических изолятов к антибактериальным препаратам была исследована дискодиффузионным методом на среде АГВ с применением стандартных бумажных дисков, пропитанных раствором антибиотика, и интерпретацией результатов в соответствии с инструкциями фирмы-производителя. Выбор антибактериальных препаратов, по отношению к которым определялась чувствительность микроорганизмов, был осуществлен в соответствие с рекомендациями Л.З. Скала и соавт., 1997: пенициллин, амикацин, ципрофлоксацин, ампициллин, доксициклин и фурагин.

Антибактериальное действие низкомолекулярного пептидного комплекса в отношении тестируемых штаммов (как «музейных», так и выделенных от больных) определяли микрометодом серийных разведений (Коробов В.П., 1988). Готовили серии двойных разведений пептидного комплекса (активность - 4000 - 8000 единиц разведения против референтного штамма Staphylococcus epidermidis, объем - 100 мкл) в лунках планшета для иммунологических реакций (Санкт-Петербургский завод медицинских полимеров), используя для разведения 100 мкл мясопептонного бульона с низким содержанием хлоридов (0,05 - 0,075%).

Суточные бульонные культуры микроорганизмов брали в исследование в концентрации 1-Ю6 и МО' колониеобразующих единиц в 1,0 мл (КОЕ/мл), что соответствовало их- оптической плотности, определяемой на приборе «фотометр фотоэлектрический КФК-3» при длине волны 540 нм, 0,0015 и 0,015 (Веслополова Е.Ф., 1995). По требованиям National Committee for Clinical Standards, 1993 (США), при определении минимальной подавляющей концентрации антибактериальных препаратов используется концентрация 106 колониеобразующих единиц в 1,0 мл (Сидоренко СВ. с соавт., 1998).

Культуру вносили в лунки планшета в объеме 10 мкл и инкубировали в термостате в течение 18-24 часов при температуре 37° С. По истечении срока инкубации, осуществляли регистрацию результатов. Отсутствие роста в лунках планшета расценивали как проявление антибактериального действия пептидного комплекса ; в • отношении тестируемой культуры в соответствующем разведении препарата.

Результаты исследований были подвергнуты статистической обработке с применением компьютерной программы Microsoft Excel.

Проводя характеристику выборки, осуществляли группировку больных по ряду признаков. При этом в группах определяли средние величины и долю больных от общего числа больных в группе, обладающих данным признаком. Оценку существования связи между признаками проводили на основе анализа таблиц сопряженности и расчета статистики %* • которая была сопоставлена с теоретическими значениями (Айвазян СА,

1985). Для характеристики чувствительности тестируемых культур микроорганизмов к катионному пептидному комплексу строили функции распределения, результаты отображали графически.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ В период с июня 2002 г. по июль 2003 г. бактериологически обследованы 990 детей с ИМС, находившиеся в нефрологическом отделении ДГКБ им. П.И. Пичугина (главный врач — А.С. Елисеев, зав. нефрологическим отделением — Л.А. Кичигина). Высеваемость составила 78,2%, что согласуется с показателями, фиксированными в современных отечественных и зарубежных литературных источниках (Альбот В.В. и др., 2002; Cuпie M.L. et я1., 2003). При этом выделено 1202 урокультуры, так как от одного больного нередко выделяли более одного штамма.

Необходимо отметить, что при этом учитывался любой титр выделенной уропатогенной микрофлоры, включая и высев со среды обогащения. Параллельно проанализирован спектр урокультур, выделенных от больных в диагностическом титре -^ КОЕ/мл и более. Результаты сопоставления диагностически значимого высева уропатогенов и высева без учета титра приведены на рис. 1.

В высев без учета титра ■диагностически значимый высев

Рас. 1. Соотношение диагностически значимого высева» уроаатогенных микроорганизмов ■ высева без учета титра

Несмотря на то, что в структуре диагностически значимых уропатогенов преобладают микроорганизмы вида Escherichia coll (40%), достаточно большой процент

принадлежит представителям грампозитивной флоры - бактериям родов Staphylococcus (14,5%) и Streptococcus (13,3%). Доля микроорганизмов рода Klebsiella составляет 10,4%, рода Proteus - 5,2%. Подобный тип таксономического распределения уропатогенных штаммов соответствует данным научных публикаций последнего времени (Гриценко ВА, 1998; Утц ИА., 2001; Кухтевич А.В., 2002; Сафина, 2002; Урывчиков ГА, 2002; Адаменко О.Б., 2002; Gupta К., 2003; Ronald А., 2003; Kumamoto Y. et al., 2003).

Структура уропатогенных штаммов, выделенных от находящихся под наблюдением пациентов (с учетом данных ранее условий), выглядела следующим образом: 35,7% принадлежало виду Escherichia coli, 25,7% - роду Klebsiella, 17,1% - микроорганизмам рода Staphylococcus, 18,6% - рода Proteus', и доля микроорганизмов вида Pseudomonas aeruginosae составила 2,9% (рис.2).

2.9*

25,7%

П Escherichia сой ■Klebsiella Я Proteus О Staphylococcus О Pseudomonas aeruginosa»

Рис. 2. Структура уропятогевов, выделенных из мочи больных, вдетых в исследование

При проведении клинического, лабораторного и инструментального обследования больных установлено:

• Отягощенная наследственность по заболеваниям органов мочевой системы имеет место в 41,4% случаев, преимущественно (24,3%) - по материнской линии (хронический или гестационный пиелонефрит у матери).

• Среди сопутствующей патологии у больных инфекциями мочевой системы преобладает патология ЛОР-органов (51,4%), органов пищеварения (32,9%), частые ОРВИ (20%) и вульвовагиниты у девочек (11,4%).

• Среди невоспалительной патологии органов мочевой системы (ОМС) у наблюдаемых пациентов достаточно часто регистрируются калико- и пиелоэктазии (32,9%) и энурез (8,6%).

• У больных пиелонефритом достоверно чаще регистрируется ускорение СОЭ (38,5%) (р<0,01) и лейкоцитоз периферической крови (15,38%) (р<0,05), нежели у больных циститом (7,7% и 0% соответственно).

• У пациентов с уроренальными инфекциями достаточно часто регистрируется бактериурия в разовой порции мочи (60-75% случаев), при этом различия в ее выраженности между группами недостоверны.

• Степень выраженности лейкоцитурии, характерной для всех наблюдаемых больных, зависит от уровня поражения ОМС: лейкоцитурия высоких степеней достоверно чаще (57,6%) регистрируется при пиелонефрите (р<0,05).

• Показатели ионограммы и уровень креатинина сыворотки крови у всех больных соответствуют нормальным показателям. В то же время, у части детей выявлены парциальные нарушения функции почек в виде изостенурии (22,8%) и гипостенурии (7,1%), причем, с высоким уровнем достоверности оба эти явления сопутствуют друг другу (р<0,001).

• У 11,5% больных пиелонефритом зарегистрирована повышенная экскреция фосфатов с суточной мочой.

• При проведении ультразвуковых и рентгенологических методов обследования грубых морфологических изменений у большинства, пациентов не выявлено. По результатам УЗИ у 53,8% больных пиелонефритами и 42,1% пациентов с сочетанным поражением ОМС отмечены пиелоэктазии, у части больных (3,8% в группе пациентов с пиелонефритами и 7,7% в группе с сочетанным поражением ОМС) выявлено удвоение чашечно-лоханочной системы. У детей с циститами достоверно чаще (р<0,05), чем у детей с пиелонефритами, регистрируется наличие остаточной мочи в мочевом пузыре (38,5% и 7,7% соответственно), что свидетельствует о нарушении его тонуса.

• Данные экскреторной урографии, в основном, подтверждают данные УЗИ почек. Выявлено уменьшение размеров почек у 11,5% больных I и у 5,3% больных Ш групп.

• При проведении микционной цистографии зарегистрирован пузырно-мочеточниковый рефлюкс только у двух больных из группы детей с сочетанным поражением ОМС.

В соответствие с поставленными задачами определены закономерности течения уроренальных инфекций в зависимости от таксономической принадлежности микроорганизмов, выделенных из мочи больных. В частности, при цистите в 46% случаев высеваются бактерии вида Escherichia coli, в меньшем проценте случаев -микроорганизмы родов Klebsiella и Staphylococcus (по 23%). Пиелонефрит примерно в равных соотношениях был вызван микроорганизмами родов Escherichia, Staphylococcus,

Klebsiella и Proteus (23-27%). Однако при сочетанном поражении органов мочевой системы в подавляющем большинстве случаев (58%) отмечается высев бактерий вида Escherichia coli. Высев микроорганизмов вида Pseudomonas aeruginosae из мочи детей с ИМВП встретился только у двух пациентов с циститами (2,8%). Результаты статистического анализа подтверждают наличие связи между таксономической принадлежностью возбудителя и нозологической формой заболевания на уровне значимости р<0,05.

Из мочи больных хроническим пиелонефритом в 41,7% случаев высеваются микроорганизмы рода Staphylococcus. Полученные результаты совпадают с данными А.И. Сафиной (2002). Второе место в структуре возбудителей хронического пиелонефрита принадлежит микроорганизмам рода Escherichia - 33,3%, третье - рода Proteus (25%), что подтверждает классические представления о роли протея в этиологии хронического пиелонефрита (Калугина Т.В., 1993; Sabbuba NA et al., 2003). Острый пиелонефрит может быть вызван бактериями родов Klebsiella (38,5%), Escherichia (30,8%) и Proteus (23,1%). Стафилококк значительно реже (в 7,7% случаев) вызывает острый воспалительный процесс в ткани почек. При хроническом воспалительном процессе в мочевом пузыре из мочи 50% больных высеваются бактерии рода Escherichia. Ylo 25% в структуре возбудителей хронических и рецидивирующих циститов приходится на микроорганизмы родов Staphylococcus и Klebsiella. Закономерностей, влияющих на микробиологический профиль мочи детей с циститом, выявлено не было, за исключением того, что во всей наблюдаемой выборке зарегистрировано два высева бактерий вида Pseudomonas aeruginosae, и оба - от больных острым циститом. Вместе с тем, результаты статистического анализа подтверждают наличие связи между этиологическим фактором и характером инфекционно-воспалительного процесса (р<0,05).

Установлено, что ИМС в грудном и раннем возрасте вызываются микроорганизмами родов Klebsiella (47%) и Proteus (33%), в дошкольном и школьном - вида Escherichia coli (52-55%). Кроме того, в старшем возрасте в генезе ИМС возрастает роль бактерий рода Staphylococcus (30%), что соответствует результатам работ современных отечественных и зарубежных авторов (Сафина А.И. с соавт., 2002; Gupta К., 2003; Ronald A., 2003; Kumamoto Y. et al., 2003). Достоверность полученных результатов подтверждается . статистически на уровне значимости р<0,05.

У больных с высевом из мочи микроорганизмов родов Escherichia и Proteus выявлены лихорадка, головные боли (как проявление интоксикации), боли в животе (р<0,05) и высокая активность воспалительного процесса (ускорение СОЭ, лейкоцитоз периферической крови и сдвиг лейкоформулы в сторону незрелых форм лейкоцитов)

(р<0,05). Дизурические расстройства достоверно чаще (56%) отмечаются при циститах, обусловленных микроорганизмами вида Escherichia coli (p<0,05).

Следующим этапом работы явилось изучение антибиотикорезистентности выделенных урокультур.

Оптимальная чувствительность всех уропатогенов зарегистрирована к фурагину (81% всех урокультур), причем более всего к нему чувствительны микроорганизмы вида Escherichia coli (94%). Наименьшая чувствительность к фурагину (44%) отмечена у представителей родаРго1еш,

Выявлена высокая чувствительность протея к ципрофлоксацину (89%) и амикацину (78%). Микроорганизмы рода Klebsiella также проявляли чувствительность к этим препаратам (100% и 56% соответственно). В то же время штаммы Escherichia coli чувствительны к ципрофлоксацину только в 62,5% и к амикацину - в 50% случаев. Применение фторхинолонов с целью терапии ИМС рекомендовано многими отечественными и зарубежными авторами (Деревянко И.И. и др., 2002; Коровина Н. А. и др., 1998; Croom K.F., Goa K.L. 2003; Park J.H. et al. 2003; Wagenlehner F.M. et al., 2003) в связи с широким их спектром действия (в том числе и в отношении стафилококков) (Коровина НА. и др., 1998) и преимущественном пути выведения почками (Мыльникова И.С., 2001). До недавнего времени использование фторированных хинолонов и, в частности, ципрофлоксацина, в детской практике было возможно только по жизненным показаниям (Коровина НА, 1998). Вместе с тем, существуют работы, доказывающие безопасность их применения в педиатрии (Burstein G.R. et al., 2002), но при этом многие авторы отмечают высокую резистентность к фторхинолоновому ряду не только грамположительной, но и грамотрицательной микрофлоры (Hawkew P.M., 2003; Sheng W.H., 2002; Eom J.S., 2002).

Такой препарат, как доксициклин, оказался эффективным лишь в отношении стафилококка (86%). Все другие тестируемые культуры к доксциклину, напротив, проявляли устойчивость. К действию пенициллина - оказались резистентны 82% тестируемых штаммов, включая и бактерии рода Staphylococcus, что согласуется с результатами других авторов (Сафина А.И. и др., 2002, Швырев А.П. и др., 2002).

Проведенные исследования свидетельствуют о том, что наЛ сегодняшний день подобрать «универсальный» антибиотик для терапии ИМС крайне сложно. Поэтому проблема поиска новых эффективных и нетоксичных антибактериальных препаратов для лечения уроренальных инфекций у детей стоит достаточно остро.

Все это побудило нас к поиску нового эффективного антибактериального препарата, предназначенного для терапии уроренальных инфекций в детском возрасте. Исходя из

физико-химических характеристик полученного на базе отделения интерферона филиала ФГУП МЗ РФ НПО «Микроген» «Пермское НПО Биомед» ассоциированного с интерфероногенезом пептидного комплекса, можно было предполагать наличие у него антибактериальных свойств.

Трудами многих зарубежных и отечественных авторов было показано, что для проявления антибактериальной активности белку необходим основный характер молекул. Положительный заряд молекул белков и пептидов определяется присутствием в их составе необходимого количества основных аминокислот - лизина и аргинина (Ашмарин И.П. с соавт., 1995; Hancock R., 1997). Поскольку значения рКй (рКй = - Ig Kt где Кй -константа диссоциации) лизина и аргинина лежат в щелочной области, прирН, близком к 7,0 и выше, их катионогенные группы почти полностью находятся в диссоциированном (заряженном) состоянии (Мушкамбаров Н.Н., 1996). Низкомолекулярный пептидный комплекс из лейкоцитов человека содержит 5,8% лизина и 7,2% аргинина, что составляет в пересчете на молярное содержание 0,039 Моль и 0,041 Моль соответственно, в сумме -0,08 Моль. Донорами анионогенных групп в молекулах протеинов являются глутаминовая, аспарагиновая кислоты, цистеин и тирозин. Из всех перечисленных аминокислот, обеспечивающих молекуле белка свойства аниона, исследуемый пептидный комплекс содержит только тирозин в количестве 0,273%, что в пересчете на молярное содержание составляет 0,0016 Моль; и это значение (так же, как и процентное содержание) значительно меньше общего молярного содержания аминокислот, являющихся донорами катионогенных групп.

Таким образом, мы пришли к выводу о том, что полученный в филиале ФГУП МЗ РФ НПО «Микроген» «Пермское НПО Биомед» из лейкоцитов человека низкомолекулярный пептидный комплекс обладает суммарным положительным зарядом в сыворотхе крови со слабощелочным значением рН - 7,34. Проведение электрофореза препарата пептидного комплекса- выявило его движение к катоду, что также свидетельствует в пользу катионного характера его молекул (рис. 3).

12 3

+

Рис. 3. Электрофоре! образцов; препарата пептидного комплекса: на ацетат-целлюлозной мембране (1-активность 4000 УЕ/мл, хлориды - 0,9%, белок - 245 мкг/мл; 2-

активность 4000 УЕ/мл, хлориды - 0,075%, белок - 1437 мкг/мл; 3-активность 8000 УЕ/мл, хлориды - 0,9%, белок - 562 мкг/мл)

Известно, что неполярные аминокислоты, такие, как изолейцин, лейцин и валин (а также пролин, метионин, триптофан, аланин и фенилаланин), определяют гидрофобные, амфипатические свойства молекул антибактериальных пептидов, обеспечивающие сродство к фосфолипидам мембран бактерий (Gale E.F. at al., 1972; Nicolas P., Мог А., 1995). Исследуемый пептидный комплекс содержит эти аминокислоты в достаточном количестве - их общее содержание в аминокислотном составе пептидного комплекса составляет около 20%, что достаточно для обеспечения гидрофобных свойств молекулам пептидов.

Первоначально была установлена антибактериальная активность пептидного комплекса в отношении «музейных» культур микроорганизмов Staphylococcus aureus, Streptococcus faecalis, Escherichia colt, Kkbsiella pneumonium, Proteus mirabilis, Pseudomonas aeruginosae. К пептидному комплексу в концентрации 4000 УЕ/мл были чувствительны все тестируемые микроорганизмы, при этом максимальную чувствительность проявляли представители грампозитивной флоры. Активность антибактериальных пептидов в отношении грамположительных микроорганизмов является их типичным свойством. Также пептидный комплекс оказался активен и в отношении грамнегативной флоры, причем, большую чувствительность к нему проявляли микроорганизмы рода Klebsiella (рис. 4).

125 250 500 1000 2000 4000

Рис. 4. Функция распределения чувствительности микроорганизмов к пептидному комплексу

Установлено, что проявление антибактериальной активности пептидного комплекса зависит от количественных характеристик тестируемых культур: лучший результат

Рве. 5. Зависимость выраженности антибактериального действии пептидного -комплекса от количественных характеристик культур

Кроме того, определенное влияние оказывает ионная сила инкубационной среды -при ее увеличении посредством добавления к среде роста хлорида: натрия до концентрации 0,5% антибактериальная активность пептидного комплекса, как и большинства антибактериальных пептидов, снижается: в присутствии хлорида натрия при концентрации пептидного комплекса 2000 УЕ/мл инактивируется 50% культур, той же концентрации препарата в отсутствии хлоридов в среде роста достаточно для подавления 86% культур (рис. 6).

100% 90% 80% 70% 60% £0% 40% 30% 20% 10% 0%

М.5% Г*'

■Г :

у /

м,г% /

1 ■ • хлориды | отсутствуют 1 • ■■В.. хлориды 1 присутствуют

V

36,5% ^

15.5* 150,» ..126.7% м>.....________________________

-"•¡дар"«''*» ..................

125

4000

250 500 1000 2000 Кощвнтряция, ед. разведения/мл

Рис. 6. Зависимость выраженности антибактериального действия пептидного комплекса от ионной силы инкубационной среды (присутствия хлорида натрия)

Далее антибактериальное действие пептидного комплекса было изучено на урокультурах микроорганизмов рода Staphylococcus, вида Escherichia colt, родов Klebsiella и Proteus, выделенных из мочи 59 детей, страдающих инфекциями мочевой системы, поскольку эти микроорганизмы являются лидерами в структуре уропатогенов.

К пептидному комплексу из лейкоцитов человека были чувствительны 83% протестированных «клинических» штаммов. Примечательно, что для прекращения роста 81% уропатогенов достаточно действия пептидного комплекса в концентрации 4 000 УЕ/мл. Дальнейшее увеличение концентрации до 8 000 УЕ/мл не дает сколько-нибудь значимого увеличения чувствительности; и 17% уропатогенов к пептидному комплексу либо нечувствительны, либо их чувствительность лежит в области более высоких концентраций препарата (рис. 7).

250 500 1000 2000 4000 8000 нечувств.

Концентрация, •д.раэввдвння/мл

Рис. 7. Функция распределения чувствительности урокультур к антибактериальному пептидному комплексу

Установлено, что при концентрации пептидного комплекса 4 000 УЕ/мл 100% протестированных стафилококков прекращают рост в мясо-пептонном бульоне. При этой же концентрации инактивируются только 78,5% грамотрицательных микроорганизмов, и 19,6% грамотрицательных уропатогенов резистентны к действию пептидного комплекса (рис. 8). Таким образом, грамположительные уропатогены в значительной степени более чувствительны к антибактериальному действию катионного пептидного комплекса, нежели грамотрицательные, что подтверждает литературные данные и данные собственных исследований в отношении «музейных» культур.

Концентра ед.разведения/мл

Рис. 8. Функция распределения чувствительности к пептидному комплексу грамположительных и грамотрицательных уропатогенов

При анализе чувствительности отдельно взятых грамотрицательных уропатогенов максимальная чувствительность к пептидному комплексу была выявлена, у микроорганизмов рода Klebsiella, что совпадает с полученными ранее результатами на «музейных» культурах микроорганизмов (рис. 9).

230 500 1000 2000 «00 6000 тчукт*. Концентрация, едраэведешн/мл

Рис. 9. Функция распределения чувствительности грамотрицательных уропатогенов к пептидному комплексу

Анализ чувствительности к пептидному' комплексу уропатогенных штаммов, выделенных из мочи больных с различными нозологическими формами, показал, что для подавления роста 100% микроорганизмов, высеваемых из мочи больных циститом, достаточно концентрации пептидного комплекса, равной 4 000 УЕ/мл. Для подавления роста уропатогенов, выделенных из мочи больных пиелонефритом и сочетанными

формами поражения мочевого тракта, в 17,4% и 25% случаев соответственно недостаточно максимальной концентрации (8 000 УЕ/мл) (рис. 10).

Таким образом, как «музейные» штаммы микроорганизмов родов Staphylococcus, Streptococcus, Escherichia, Klsbsiella, Proteus и вида Pseudomonas aeruginosae, так и урокультуры микроорганизмов родов Escherichia, Staphylococcus, Klebsiella и Proteus чувствительны к ассоциированному с интерфероногенезом низкомолекулярному пептидному комплексу.

ВЫВОДЫ

1. В этиологии инфекций мочевой системы отчетливо выявляется тенденция к снижению значимости бактерий вида. Escherichia coli и возрастанию роли микроорганизмов рода Staphylococcus. Для возникновения инфекционно-воспалительных заболеваний ОМС в грудном и раннем возрасте имеют значение, в основном, бактерии родов Klebsiella и Proteus. Роль микроорганизмов родов Escherichia и Proteus в генезе уроренальных инфекций возрастает в дошкольном и школьном возрасте.

2. Выявлена зависимость между нозологической формой и таксономической принадлежностью выделяемого из мочи больных инфекционного фактора. При циститах из мочи больных в 50% случаев высеваются бактерии рода Escherichia. При пиелонефритах в моче больных с равной вероятностью обнаруживаются микроорганизмы родов Staphylococcus, Escherichia, Klebsiella и Proteus.

3. Основные клинические проявления уроренальной инфекции (лихорадка, интоксикация, боли в животе и дизурия) так же, как и выраженность воспалительных изменений периферической крови наиболее ярко выражены у больных с высевом из мочи

бактерий родов Escherichia и Proteus, в меньшей степени - при высеве бактерий рода Staphylococcus.

4. Выявлена высокая резистентность выделенных уропатогенных штаммов, в том числе, грамположительных кокков, к пенициллину. Показано, что наибольшим антибактериальным действием на уропатогены обладают фурагин и ципрофлоксацин.

5. Ассоциированный с интерфероногенезом низкомолекулярный пептидный комплекс подавляет in vitro рост «музейных» культур Staphylococcus aureus, Streptococcus

faecalis, Escherichia coli, Klebsiellapneumonium, Proteus mirabilis, Pseudomonas aeruginosae в концентрации 4000 УЕ/мл, проявляя максимальную антибактериальную активность в отношении микроорганизмов Staphylococcus aureus и Klebsiella pneumonium.

6. Низкомолекулярный пептидный комплекс проявляет антибактериальное действие в отношении уропатогенной микрофлоры, выделенной от больных инфекциями мочевой системы. Максимальная чувствительность к пептидному комплексу зарегистрирована у урокультур микроорганизмов родов Staphylococcus и Klebsiella. Для подавления роста 100% микроорганизмов, высеваемых из мочи больных циститами, достаточно концентрации пептидного комплекса, равной 4 000 УЕ/ мл.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. В связи с существующей в настоящее время тенденцией к смене микробиологического пейзажа мочи до получения результатов бактериологического исследования целесообразно назначение антибактериальных препаратов широкого спектра действия, активных как в отношении грамнегативной, так и грампозитивной уропатогенной микрофлоры. Оптимальным в сложившейся ситуации становится использование «защищенных» пенициллинов, эффективность которых в отношении уропатогенных штаммов доказана другими исследователями (Коровина Н.А. с соавт., 1998; Аверьянова Н.И. с соавт., 2001), а при нетяжелых формах - фурагина.

2. До получения результатов посева мочи при постановке клинического диагноза необходимо учитывать следующие диагностические критерии: лейкоцитурия, выраженность интоксикации, продолжительность лихорадочного периода, воспалительный характер изменений периферической крови.

3. После выделения и идентификации возбудителя необходим дифференцированный подход к назначению этиотропной терапии: уропатогенные Escherichia coli, Proteus, Klebsiella чувствительны к фурагину, что делает его незаменимым для терапии ИМС с нетяжелым течением, амикацину и ципрофлоксацину, применение которого в детской практике ограничено. При ИМС стафилококковой

этиологии возможно применение доксициклина в связи с относительно высокой чувствительностью уропатогенных штаммов рода Staphylococcus к этому препарату.

4. В связи с наличием у низкомолекулярного пептидного комплекса из лейкоцитов человека антибактериальной активности в отношении грамположительных и грамотрицательных уропатогенных микроорганизмов перспективно дальнейшее исследование его свойств с целью создания на его основе нового этиотропного средства терапии инфекций мочевой системы у детей.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. К вопросу об уточнении нормативных показателей суточной экскреции мочевой кислоты у детей школьного возраста. // Вестник международной академии наук экологии и безопасности жизнедеятельности. - №6 (30). - 2000. - С. 12-15. (Соавт. Н.И. Аверьянова, Л.А. Кичигина).

2. Влияние факторов вирулентности уропатогенной Escherichia coli на клиническую картину инфекции мочевых путей у детей. // Межд. науч. конф. молодых ученых «Актуальные вопросы клинической и экспериментальной медицины-2000»: Тез. докл. - Минск, 2000. - С. 27-28. (Соавт. А.Е. Жуйков, Е.Г. Чурина).

3. Особенности клинической картины эшерихиозной инфекции мочевыводящих путей у детей в зависимости от гемолитической активности возбудителя. // II Российская конференция молодых ученых «Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины»: Сб. материалов. - Москва, 2001. - С. 111. (Соавт. А.Е. Жуйков, Е.Г. Чурина).

4. Некоторые тенденции в формировании видового спектра уропатогенов на современном этапе. // V Межд. конф. «Проблемы загрязнения окружающей среды-2001»: Тез. докл. - Волгоград-Пермь, Россия, 2001. - С. 50. (Соавт. НИ. Аверьянова, ИА Шипулина, Н.Ю. Коломеец, Е.Г. Чурина).

5. Структура уропатогенов на современном этапе. // Науч. конф. «Современные проблемы и новые технологии в педиатрии, акушерстве и гинекологии»: Сб. материалов. - Пермь, 2001. - С. 103-105.

6. Перспективные направления в изучении влияния факторов персистенции и адгезивных свойств энтеробактерий на возникновение и развитие инфекций мочевыводящих путей у детей. // V Межд. науч. конф. «Проблемы здоровья семьи-2000»: Сб. материалов. - Пермь-Мармарис, 2001. - С. 106-107. (Соавт. НИ. Аверьянова, И.А. Шипулина, Ю.Н Маслов, Е.Г. Чурина, А.Е. Жуйков).

7. Структура инфекций мочевыводящих путей у детей по данным бактериологической лаборатории ГКБ №7 г. Перми. // V Межд, науч. конф. «Проблемы здоровья семьи-2000»: Сб. материалов. - Пермь-Мармарис, 2001. - С. 107-108. (Соавт. Н.И. Аверьянова, НА. Шипулина, Н.С. Авдеева, Е.Г. Чурина, Т.В. Панышева).

8. Взаимосвязь микрофлоры кишечника и мочевых путей при ИМВП у детей первого года жизни по данным нефрологического отделения. // Вторые Пичугинские чтения, посвященные 80-летию старейшей на Западном Урале клиники детских болезней: Сб. материалов. - Пермь, 2002. - С. 117-121. (Соавт. И.В. Еремеева, Л.А. Кичигина, Е.Г. Лузина, Е.Г. Чурина).

9. Значение факторов вирулентности Escherichia coli при уроренальных инфекциях у детей. // Вторые Пичугинские чтения, посвященные 80-летию старейшей на Западном Урале клиники детских болезней: Сб. материалов. - Пермь, 2002. - С. 125-129. (Соавт. Н.И. Аверьянова, Н.С. Авдеева, И.В. Ермеева, Е.Г. Чурина).

10. Особенности структуры возбудителей уроренальных инфекций на современном этапе. // Вторые Пичугинские чтения, посвященные 80-летию старейшей на Западном Урале клиники детских болезней: Сб. материалов. - Пермь, 2002. - С. 135-138. (Соавт. Н.И. Аверьянова, НС. Авдеева, И.В. Еремеева, Е.Г. Чурина).

11. К вопросу о видовом спектре уропатогенов. // VI Межд. науч. конф. «Здоровье семьи-XXI век»: Сб. материалов. - Пермь-Дубай, 2002. - С. 10. (Соавт. Н.И. Аверьянова, Н.С. Авдеева, Т.А. Пухова, Е.Г. Чурина).

12. Структура уропатогенов на современном этапе. // Указатель депонированных рукописей по медицине и здравоохранению ЩНМБ. - № Д-27214 от 1.11.2002 г. (Соавт. Н.И. Аверьянова, Л.В. Волкова).

13. Использование препарата лейкоцитарного интерферона в комплексной терапии пиелонефритов у детей. //1 Всероссийский конгресс «Современные технологии в педиатрии и детской хирургии»: Сб. материалов. - Москва, 2002. - С. 210. (Соавт. Н.И. Аверьянова, И.В. Еремеева, Е.Г. Чурина).

14. Структура уропатогенной микрофлоры на современном этапе. //1 Всероссийский конгресс - «Современные; технологии в педиатрии и детской хирургии»: Сб. материалов. - Москва, 2002. - С. 210. (Соавт. Н.И. Аверьянова, И.В. Еремеева, Н Ю . Коломеец, Е.В. Свечникова).

15. Диагностика пузырно-мочеточникового рефлюкса у детей. // П Российский конгресс «Современные методы диагностики и лечения в детской нефрологии и

урологии»: Сб. материалов. - Москва, 2002. - С. 96. (Соавт. Н.И. Аверьянова, И.В. Еремеева, Н.Ю. Коломеец, Е.В. Свечникова).

16. Инфекция мочевыводящих путей как спутник пузырно-мочеточникового рефлюкса. // II Российский конгресс «Современные методы диагностики и лечения в детской нефрологии и урологии»: Сб. материалов. - Москва, 2002. - С. 97. (Соавт. Н.И. Аверьянова).

17. Клинические особенности ИМВП, обусловленные факторами вирулентности уропатогенной Escherichia coli у детей. // II Российский конгресс «Современные методы диагностики и лечения в детской нефрологии и урологии»: Сб. материалов. - Москва, 2002. - С. 114. (Соавт. НИ. Аверьянова, А.Е. Жуйков, Н.Ю. Коломеец, Е.В. Свечникова, И.В. Еремеева).

18. Спектр антимикробной активности низкомолекулярного катионного пептидного комплекса. // Межрегиональная конф. молодых ученых «Современные проблемы экологии, микробиологии и иммунологии»: Тез. докл. - Пермь, 2002. - С. 44-46.

19. К вопросу о резистентности уропатогенов семейства Enterobacteriacea к антибактериальным химиопрепаратам. // Пермский мед. журнал. - 2003. №2. - С. 98-100 (Соавт. ЕЙ. Аверьянова, НЮ. Зарницына).

20. Антимикробное действие низкомолекулярного катионного пептидного комплекса, синтезированного в процессе интерфероногенеза. // X Российский национальный конгресс «Человек и лекарство»: Тез. докл. - Москва, 2003. - С. 591. (Соавт. НИ. Аверьянова, Л.В. Волкова).

21. Антибактериальное действие низкомолекулярного катионного пептидного комплекса из лейкоцитов человека. // Межд. конгресс «Ликвидация и элиминация инфекционных болезней - прогресс и проблемы»: Тез. докл. - Санкт-Петербург, Россия, 2003. - С. 155. (Соавт. Л.В. Волкова, Н.И. Аверьянова, Т.В. Полюдова, Л.М. Лемкина).

22. Микрофлора мочи как фактор, определяющий характер течения уроренальной инфекции. // ГХ Конгресс педиатров России «Актуальные проблемы педиатрии»: Сб. материалов. - Москва, 2004. - С. 7. (Соавт. Н.И. Аверьянова, Л.А. Кичигина).

23. Исследование антибактериального действия низкомолекулярного пептидного комплекса из лейкоцитов человека в отношении уропатогенных микроорганизмов, выделенных из мочи детей с уроренальными инфекциями. // IX Конгресс педиатров России «Актуальные проблемы педиатрии»: Сб. материалов. - Москва, 2004.-С. 529.

КОСАРЕВА ПОЛИНА ВЛАДИМИРОВНА

КЛИНИКО-МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ИНФЕКЦИЙ МОЧЕВОЙ СИСТЕМЫ У ДЕТЕЙ И ДЕЙСТВИЕ НИЗКОМОЛЕКУЛЯРНОГО ПЕПТИДНОГО КОМПЛЕКСА НА ВЫДЕЛЕННЫЕ ОТБОЛЬНЫХ УРОКУЛЬТУРЫС

АВТОРЕФЕРАТ

Лицензия ПД-11-0002 от 15.12.99

Подписано в печать 09.03.2004. Формат 60X84/16. Набор компьютерный. Тираж 100 экз. Усл.печ. л. 1,0. Заказ № 137/2004.

Отпечатано на ризографе в отделе Электронных издательских систем ОЦНИТ Пермского государственного технического университета 614600, г. Пермь, Комсомольский пр., 29а, к. 113, т.(3422) 198-033

€ 4 7 91