Экспериментальный пиелонефрит и его терапия

Логинова, Ирина Александровна

Диссертации по медицине → Патологическая физиология

Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Экспериментальный пиелонефрит и его терапия

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Логинова, Ирина Александровна Тюмень 2009 г.

Ученая степень: кандидата медицинских наук

ВАК РФ: 14.00.16

Автореферат диссертации по медицине на тему Экспериментальный пиелонефрит и его терапия

На правах рукописи

логинова ирина александровна

экспериментальный пиелонефрит и его терапия

14.00.16 - патологическая физиология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени

кандидата медицинских наук

7 ЛЕИ 2009

Тюмень - 2009

003490024

Работа выполнена на кафедре патологической физиологии Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Пермская государственная медицинская академия им. академика Е.А. Вагнера Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, Самоделкин Евгений Иванович, ГОУ ВПО Пермская государственная академия им. ак. Е.А.Вагнера Росздрава

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, доцент, Жданова Екатерина Васильевна, ГОУ ВПО Тюменская государственная медицинская академия Росздрава

доктор медицинских наук, профессор, Спицин Анатолий Павлович, ГОУ ВПО Кировская государственная медицинская академия Росздрава

Ведущая организация:

ГОУ ВПО «Российский государственный медицинский университет Росздрава», г. Москва

Защита диссертации состоится «24» декабря 2009г. на заседании диссертационного совета Д 208.101.01 ГОУ ВПО Тюменская государственная медицинская академия (г. Тюмень, ул. Одесская, 54).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО Тюменская государственная медицинская академия (г. Тюмень, ул. Одесская, 54).

Автореферат разослан «24» ноября 2009 г. Ученый секретарь

диссертационного совета Фролова О.И.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Проблема уроренальных инфекций - одна из наиболее актуальных из стоящих на сегодняшний день перед практическим здравоохранением. Широкая распространенность этой патологии, хронизация инфекционного процесса в почках, рецидивирование и прогрессирование с формированием нефросклероза и развитием хронической почечной недостаточности, приводящие к инвалидизации больного и требующие экстраординарных медицинских вмешательств, делают эту проблему особенно актуальной (ОгеИапа е1 а1., 2002; Коровина и др., 2003; Ботапп е! а1., 2003; Горяйновас соавт., 2008).

Традиционная терапия воспалительных заболеваний органов мочевыделительной системы включает применение антибиотиков и фитопрепаратов. С учетом того, что микробно-воспалительный процесс в почках и мочевыводящих путях нередко рецидивирует, пациентам требуется проведение повторных курсов антибактериальной химиотерапии (Коровина Н.А. с соавт., 2003). Между тем, современные антибактериальные средства зачастую обладают нежелательными побочными эффектами и иммуносупрессивным действием. К тому же, эффективность большинства антибиотиков имеет, как правило, тенденцию к быстрому снижению, что обусловлено появлением антибиотикорезистентных форм возбудителей в связи с активным распространением резистентных клонов микроорганизмов. Все это определяет постоянный интерес исследователей к поиску новых средств терапии пиелонефрита - не только этиотропных, но и патогенетических, направленных на коррекцию иммунного статуса и биохимических нарушений.

В сложившейся ситуации становится патогенетически обоснованным и назначение пациентам энзимных препаратов (Божков с соавт., 1996), поскольку энзимы обладают способностью ограничивать распространение воспалительного отека, улучшая при этом микроциркуляцию и противодействуя дальнейшему распространению патологического процесса, обладают иммуномодулирующим действием и потенцируют эффект антибактериальных средств (Ремезов и др., 2003).

Ферментный препарат «Вобэнзим» (МУКОС-Фарма, Германия) уже несколько лет успешно применяется для лечения и противорецидивной профилактики инфекций мочевыделительной системы, при этом данные о влиянии «Вобэнзима» на патоморфоз пиелонефрита получены в большинстве случаев на клиническом материале - результатах биохимических тестов, УЗИ-диагностики и пр. Все это определяет актуальность проведения исследования эффективности применения «Вобэнзима» при лечении экспериментального пиелонефрита с определением морфологических и микробиологических параметров.

Описанные в литературе многочисленные способы моделирования острого пиелонефрита имеют различные недостатки. В частности, при применении оперативного доступа к органам мочевыделительной системы у лабораторных крыс наблюдается не только развитие инфекционного процесса, но и нанесение им операционной травмы. Это искажает регистрируемые в эксперименте показатели, вызывает дополнительный стресс, и, тем самым, уменьшает чистоту эксперимента и достоверность полученных результатов. К тому же, при данных способах эксперимента нередко происходит развитие острого гнойного пиелонефрита, что нетипично для рядовой клинической ситуации. Способы гематогенного заражения подразумевают, как правило, использование в качестве инфекционного агента непатогенных, коллекционных штаммов, не имеющих тропности к уроэпителию, применение которых также не позволяет создать у животного типичной клиники острого пиелонефрита. Кроме того, при использовании данной модели гистологические признаки воспалительного процесса регистрируются в интерстициальной ткани почек и почечных канальцах и не выявляются в слизистой и строме лоханок и чашечек. Поэтому разработка экспериментальной модели острого пиелонефрита, максимально приближенной к реальным условиям, является актуальной научно-практической задачей.

Цель работы: разработать экспериментальную модель острого пиелонефрита и оценить эффективность применения в эксперименте препарата «Вобэнзим», представляющего собой сбалансированную смесь щдролаз животного и растительного происхождения.

Задачи исследования:

1. Разработать экспериментальную модель острого пиелонефрита, используя урокультуру условно-патогенных бактерий, выделенную от пациента.

•2. Изучить морфологические и морфометрические изменения ткани почек при экспериментальном пиелонефрите у лабораторных животных.

3. Охарактеризовать морфологические и морфометрические изменения органов иммунной системы экспериментальных животных при моделировании острого пиелонефрита.

4. Изучить влияние протеолитических энзимов на патоморфоз острого пиелонефрита в эксперименте.

5. Охарактеризовать динамику патоморфологических изменений в органах иммунной системы при включении в экспериментальную терапию комплекса протеолитических энзимов.

Положения, выносимые на защиту:

1. Использование для экспериментального моделирования острого пиелонефрита клинического штамма лактозонегативной Escherichia coli № 2899, выделенного из мочи пациента с острым пиелонефритом, позволяет получить воспалительные изменения в ткани почек экспериментальных животных, идентичные наблюдаемым в клинике.

2. При экспериментальном пиелонефрите, вызванном штаммом Escherichia coli № 2899, в центральных и периферических органах иммунной системы отмечаются пролиферативные процессы, свидетельствующие об интенсивном течении иммунных реакций.

3. Включение ферментного препарата «Вобэнзим» в состав экспериментальной терапии острого пиелонефрита способствует более эффективной регрессии воспалительных изменений в ткани почек и оптимальной регуляции иммунных реакций в организме.

Научная новизна. Разработана оригинальная методика экспериментального моделирования острого пиелонефрита, путем однократного интраперитонеального введения уропатогенного штамма Escherichia coli в концентрациях 10® КОЕ/мл и 10б КОЕ/мл (патент № 2349965).

Выделен и охарактеризован клинический штамм Escherichia coli № 2899, вызывающий развитие острого пиелонефрита у экспериментальных животных. Впервые выявлено, что введение животным штамма лактозонегативной Escherichia coli № 2899 вызывает ответную реакцию организма в виде пролиферативных изменений в органах иммунной системы животных.

Впервые установлены морфометрические закономерности динамики патологических процессов в почках и органах иммунной системы животных при моделировании острого пиелонефрита и при включении в его экспериментальную терапию комплекса протеолитических энзимов («Вобэнзим»).

В эксперименте установлено, что включение комплекса протеолитических энзимов («Вобэнзим») в терапию острого пиелонефрита потенцирует эффекты антибактериальных средств, что выражается в оптимальной регуляции иммунных реакций в организме животных и более эффективной регрессии воспалительных изменений в ткани почек. Полученные данные позволяют обосновать включение ферментного препарата «Вобэнзим» в комплексную терапию инфекционно-воспалительных заболеваний органов мочевыделительной системы.

Теоретическая и практическая значимость работы. Полученные результаты, свидетельствующие о роли уропатогенов в развитии не только воспалительных изменений в почках, но и реактивных изменений в органах иммунной системы, позволяют, в целом, расширить представление о патогенезе инфекционно-воспалительных заболеваний почек и мочевыводящих путей. Патоморфологически доказанный эффект применения ферментного препарата «Вобэнзим» при лечении пиелонефрита дает основания к широкому применению его в клинической практике.

Апробация диссертационного материала и публикации. Работа выполнена в соответствии с планом НИР ГОУ ВПО «Пермская государственная медицинская академия имени академика Е.А. Вагнера Росздрава». Результаты исследований доложены и обсуждены на Региональной конференции молодых ученых с международным участием «Современные проблемы экологии, микробиологии и иммунологии» (Пермь, 2007г.), LXVIII Всероссийской научно-практической конференции «Инновации и технологии - эффективному агропроизводству» 16-17 апреля 2008г. (Пермь); XI международной научно-практической конференции молодых ученых и специалистов 21-23 ноября 2007г., (Екатеринбург); Итоговой научной сессии ПГМА им. ак. Е.А. Вагнера Росздрава, (Пермь, 2008г.); Всероссийской научно-практической конференции, посвященной 90-летию сельскохозяйственного образования на Урале (Пермь, 2008г).

По теме диссертации опубликованы 11 печатных работ (в том числе 2 патента РФ на изобретения), из них 1 - в рецензируемом журнале ВАК РФ.

Внедрение в практику. Полученные в ходе экспериментальных и клинических исследований результаты внедрены в работу отдела морфологических и патофизиологических исследований ЦНИЛ ГОУ ВПО «ПГМА им. ак. Е.А. Вагнера Росздрава», используются в учебном процессе на кафедре нормальной, топографической и клинической анатомии и оперативной хирургии, кафедре гистологии, цитологии и эмбриологии, кафедре микробиологии и вирусологии и кафедре патологической физиологии ГОУ ВПО «ПГМА им. ак. Е.А. Вагнера Росздрава» при изучении вопросов этиологии и патогенеза заболеваний мочевыделительной системы человека.

Структура и объем работы. Диссертация включает следующие разделы и главы: содержание, введение, обзор литературы, материалы и методы исследования, три главы собственных исследований, обсуждение результатов, выводы, практические рекомендации, список литературы. Материалы диссертации на 124 печатных страницах, включают 22 рисунка, 20 таблиц, 180 литературных источников, из которых 88 - отечественных и 92 - иностранных авторов.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования

Для моделирования микробно-воспалительного поражения ткани почек и проведения экспериментальной терапии использовались нелинейные белые крысы (самцы и самки) в возрасте четырех месяцев, с массой тела 150-200 г, содержавшиеся в стандартных условиях вивария (свободный доступ к пище и воде и 12-14-часовой световой день). Эксперимент выполнен на 100 животных. Все экспериментальные животные получали типовой рацион вивария в соответствии с нормами, утвержденными приказом Министра здравоохранения СССР от 10 марта 1966г. № 163 и Приказом Минздрава СССР от 10.10.83 № 1179 (пункт 4.1).

Эксперименты выполнены на базе отдела морфологических и патофизиологических исследований (зав. отделом - к.м.н. П.В. Косарева) Центральной научно-исследовательской лаборатории Государственного учреждения высшего профессионального образования «Пермская государственная медицинская академия имени академика Е.А. Вагнера Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию», имеющего разрешение на работу с экспериментальными животными в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных» (Приложение к приказу Министерства здравоохранения СССР от 12.08.1977 г. N 755) и «Европейской конвенцией о защите позвоночных животных, используемых для экспериментов или в иных научных целях» от 18 марта 1986 г.

Для моделирования острого пиелонефрита в эксперименте использовали клинический штамм лактозонегативной Escherichia coli № 2899, выделенный из мочи пациента с типичной клинической картиной острого пиелонефрита, подтвержденного данными лабораторных и инструментальных исследований, проведенных в условиях специализированного стационара. Штамм выделен в бактериологической лаборатории МУЗ ГКБ № 7 г. Перми (заведующая микробиологической лабораторией Н.С. Авдеева). Клинический изолят лактозонегативной Escherichia coli, использованный для воспроизведения острого пиелонефрита в эксперименте на животных, охарактеризован в Лаборатории биохимии развития микроорганизмов Института экологии и генетики микроорганизмов УрО РАН (зав. лабораторией к.м.н., доцент В.П. Коробов, директор Института д.м.н ., профессор В.А. Демаков). Штамму присвоен номер № 2899.

Моделирование экспериментального пиелонефрита осуществляли по разработанной оригинальной методике. Животным однократно интраперитонеально под легким эфирным наркозом вводили в объеме 400 мкл суточную бульонную культуру лахтозонегативного штамма Escherichia coli №2899. Культуру вводили в концентрациях 109И 106 КОЕ/мл, стандартизированных нефелометрическим методом. При этом оптическую плотность

микробной суспензии, соответствующую заданной концентрации, определяли эмпирически (Е.Ф. Веслополова, 1995).

Для проведения этиотропной терапии экспериментального пиелонефрита использовали цефазолин (Balkanpharma, Болгария) - цефалоспориновый антибиотик I поколения широкого спектра действия для парентерального применения, к которому штамм Escherichia coli Ns2899 был чувствителен по результатам антибиотикограммы. Экспериментальную терапию начинали спустя 48 часов после заражения. Цефазолин вводили интраперитонеально 1 раз в сутки, в течение 8 дней из расчета 50 мг/кг, растворяя его в 0,5 мл стерильного изотонического раствора хлорида натрия для инъекций. Ферментный препарат «Вобэнзим» (МУКОС-Фарма, Германия) применяли также спустя 48 часов после заражения. «Вобэнзим» животным вводили перорально 1 раз в сутки, в течение 8 дней в дозе 0,1 таблетки (2,4 мг трипсина, 0,1 мгхимотрипсина, 1,0 мг амилазы, 1,0 мг липазы, 4,5 мг бромелаина, 6,0 мг папаина, 10,0 мг панкреатина, 5,0 мг рутозида), растворяя суточную дозу в 400 мкл физиологического раствора.

С учетом поставленных задач сформировали 5 экспериментальных групп.

1. Контрольная группа (интактные животные), находящиеся на стандартном рационе вивария, п=20.

2. Моделирование пиелонефрита путем интраперитонеального инфицирования животных уропатогенным штаммом Escherichia coli, концентрация культуры бактерий - 10® КОЕ/мл, стандартный рацион вивария, п=20.

3. Моделирование пиелонефрита путем интраперитонеального инфицирования животных уропатогенным штаммом Escherichia coli, концентрация культуры бактерий - 106 КОЕ/мл, стандартный рацион вивария, п=20.

4. Моделирование пиелонефрита путем интраперитонеального инфицирования животных уропатогенным штаммом Escherichia coli, концентрация культуры бактерий - 10® КОЕ/мл, экспериментальная терапия - цефазолин, стандартный рацион вивария, п=20.

5. Моделирование пиелонефрита путем интраперитонеального инфицирования животных уропатогенным штаммом Escherichia coli, концентрация культуры бактерий - 10® КОЕ/мл, экспериментальная терапия — сочетанное применение цефазолина и вобэнзима, стандартный рацион вивария, п=20.

По окончании исследований (на 14-е сутки от заражения) животных выводили из эксперимента путем перерезки спинного мозга под эфирным наркозом с соблюдением правил эвтаназии. Экспериментальный материал, полученный при аутопсии забирали, для проведения бактериологического исследования в асептических условиях. Выделенные

чистые культуры идентифицировали по стандартным схемам (Приказ МЗ СССР № 535,1985) и при помощи системы одноразового использования для дифференциации микроорганизмов семейства энтеробактерий «ЭНТЕРОтест 24» (производство PLIVA-Lachema Diagnostica s.r.o., г. Москва). Микробиологические исследования экспериментального материала проведены в микробиологической лаборатории ЦНИЛ Пермской государственной медицинской академии им. ак. Е.А. Вагнера (зав. лабораторией профессор Ю.Н. Маслов).

Для проведения гистологического исследования забирали образцы ткани почек, печени, тимуса, селезенки, тонкой кишки с пейеровыми бляшками. Препараты готовили по стандартным методикам. Срезы окрашивали гематоксилином и эозином, пикрофуксином по ван Гизону. Ткань почек дополнительно окрашивали нитратом серебра по Футу для лучшей визуализации гломерулярной базальной мембраны. Ткань селезенки и подвздошную кишку с пейеровыми бляшками окрашивали также нитратом серебра по Футу для изучения ретикулярных волокон и метиловым зеленым-пиронином по Браше с целью выявления РНК в клетках. Микроскопию препаратов проводили в проходящем свете светового микроскопа Micros, Австрия. Захват изображений осуществляли при помощи цифровой камеры для микроскопа САМ V200, Vision (Австрия). Морфометрические операции осуществляли с использованием программного пакета BioVision, versión 4,0 (Австрия).

При проведении морфометрических исследований ткани почек учитывали толщину гломерулярной базальной мембраны и базальной мембраны проксимальных извитых канальцев, измеряемые при увеличении х 1500 и импрегнации гистологических срезов нитратом серебра по Футу, а также площадь мочевого пространства на срезах, проходящих по максимальному диаметру почечного тельца, и площадь поперечного сечения капилляров клубочков. Осуществляли не менее 50 измерений в каждом гистологическом препарате. Выраженность воспалительной инфильтрации оценивали при помощи функций меню «Сегментация по гистограмме» и «Сетка», используя масштаб 20x20.

При проведении морфометрического анализа органов иммунной системы экспериментальных животных учитывали данные морфометрических исследований ткани тимуса, селезенки и стенки тонкой кишки с пейеровыми бляшками. В селезенке определяли относительный объем белой пульпы, относительный объем периартериальных лимфоидных муфт (ПАЛМ) и относительный объем светлых центров в лимфатических узелках. В ткани тимуса исследовали относительный объем коркового и мозгового вещества в дольках. При проведении морфометрических исследований тонкой кишки экспериментальных животных учитывали количество клеток Панета в дне кишечных крипт, определяя их число в поперечном срезе крипты и подсчитывая количество поперечно срезанных крипт, содержащих дегранулирующие клетки Панета. Морфометрические исследования проводили

при увеличении микроскопа х 600 не менее чем в 10 полях зрения в каждом гистологическом препарате. Также определяли относительный объем светлых центров в лимфатических узелках пейеровых бляшек.

Результаты исследований подвергали статистической обработке с применением программы Microsoft Excel и программного пакета Biostat. При проведении статистической обработки результатов вычисляли среднее арифметическое и стандартное отклонение, сравнение между собой двух выборок проводили при помощи критерия Стьюдента (Гланц, 1999). Анализируя результаты повторных измерений, пользовались критерием Уилкоксона. При определении исходных показателей полученные данные сравнивали со средними популяционными колебаниями.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

В эксперименте на белых крысах обоего пола было изучено влияние различных доз возбудителя - клинического изолята Escherichia coli № 2899, выделенного из мочи пациента с острым пиелонефритом, подтвержденным клиническими и лабораторными данными.

При проведении бактериологического исследования аутопсийного материала культура Escherichia coli по свойствам идентичная штамму, использованному для заражения, была изолирована из ткани почек, селезенки и печени животных, которым внутрибрюшинно вводили урокультуру Escherichia coli в концентрации 109 КОЕ/мл, в 100% случаев в титре, превышающем 105 КОЕ/мл. В опытной группе, зараженной урокультурой Escherichia coli в концентрации 106 КОЕ/мл, положительные результаты бактериологического исследования были получены в статистически достоверно меньшем проценте случаев (таблица 1).

Проведенные гистологические исследования показали, что у всех животных, зараженных уропатогенной культурой Escherichia coli в концентрации 109 КОЕ/мл, к 14-м суткам эксперимента в ткани почек отмечены сосудистые расстройства в виде отека межуточной ткани, полнокровия дуговых и междольковых артерий и вен, тромбов в просветах сосудов, пропитывания интерстициальной ткани белками плазмы (рис. 1). В паренхиме почки выявлены участки зернистой дистрофии эпителия проксимальных извитых канальцев. В межуточной ткани почек и слизистой и подслизистой оболочках почечных лоханок обнаружена выраженная воспалительная инфильтрация, представленная 10

лимфоцитами, полиморфноядерными лейкоцитами и макрофагами. Воспалительные изменения у части животных отмечены также и в стенке мочеточника.

Таблица 1

Результаты бактериологического исследования аутопсийного материала, полученного от животных, зараженных урокультурой Escherichia coli в концентрациях 109 и106 КОЕ/мл

Исследуемый материал Заражение Escherichia coli 109 КОЕ/мл Заражение Escherichia coli 106 КОЕ/мл

Процент животных, от которых были получены положительные результаты бактериологического исследования Концентрация выделенной культуры Escherichia coli, КОЕ/г Процент животных, от которых были получены положительные результаты бактериологического исследования Концентрация выделенной культуры Escherichia coli, КОЕ/г

Почки 100% >105 60%* <103'

Печень 100% >105 50%* <103'

Селезенка 100% >105 40%* <103'

Примечание: * - достоверность различий по отношению к группе, зараженной урокультурой Escherichia coli в концентрации 109 КОЕ/мл (р<0,05)

У животных, зараженных урокультурой Escherichia coli в концентрации 106 КОЕ/мл, к 14-м суткам эксперимента в почках также отмечены патоморфологические изменения, выявленные в опытной группе, зараженной урокультурой Escherichia coli в концентрации 109 КОЕ/мл, но у меньшего количества животных и выраженные в меньшей степени (рис. 1). Так, полнокровие сосудов у животных данной группы выявлено в 70% случаев, воспалительная инфильтрация межуточной ткани почек - также в 70% случаев, инфильтрация стенки мочеточника - в 40%, зернистая дистрофия эпителиоцитов проксимальных извитых канальцев - в 60% случаев (рис. 1).

Полнокровие перитубулярных капилляров, капилляров клубочков

Пропитывание интерстиция ткани белками плазмы

Воспалительная инфильтрация стенки мочеточника

Воспалительная инфильтрация межуточной ткани почек

Зернистая дистрофия эпителия канальцев

Полнокровие дуговых и междольковых сосудов, тромбы

0% 20% 40% 60% 80% 100% 120%

[р Высокая концентрация культурШизкая концентрация культурь|

Рис. 1. Характер патологических изменений в ткани почек экспериментальных животных, зараженных штаммом лактозонегативной Escherichia coli № 2899.

При окраске пикрофуксином по Ван Гизону к 14-м суткам от заражения новообразования соединительной ткани в интерстициальной ткани почек и стенках почечных лоханок как у животных, зараженных высокой дозой возбудителя (109 КОЕ/мл), так и у животных, зараженных низкой дозой урокультуры Escherichia coli (106 КОЕ/мл), выявлено не было.

В ткани тимуса у 80% животных, зараженных урокультурой Escherichia coli в концентрации 10' КОЕ/мл, отмечены отек, разреженность коркового вещества, границы коркового и мозгового вещества прослеживаются нечетко (рис. 2). В корковом веществе тимуса 50% животных данной экспериментальной группы выявлены участки гибели лимфоцитов. В сосудах отмечаются набухание и десквамация эндотелиоцитов. В мозговом веществе тимуса 70% животных выявлен отек и выраженную сосудистую реакцию в форме расширения и полнокровия сосудов. В венулах отмечено полнокровие и краевое стояние лейкоцитов (рис. 2). В опытной группе, зараженной урокультурой Escherichia coli в концентрации 106 КОЕ/мл, данные патологические изменения отмечены в меньшем проценте случаев (рис. 2).

1 1 1 100% 100% 100%

170%

1 !0%

] 90%

60%

40%

170%

60%

190%

~ " ]90%

1 1 1 1

Ш Высокая концентрация культуры И Низкая концентрация культуры

Отек коркового Наличие вещества участков

тимуса гибели

лимфоцитов корковом веществе

Отек мозгового вещества, полнокровие сосудов

Рис. 2. Характер патологических изменений в ткани тимуса у животных, зараженных урокультурой Escherichia coli в концентрации 109 КОЕ/мл и 106 КОЕ/мл.

При гистологическом исследовании ткани селезенки животных опытных групп выявлены увеличение селезенки в объеме за счет отека, набухание ее капсулы, набухание эндотелия капилляров красной пульпы и маргинальной зоны, увеличение объема белой пульпы (рис. 3). Большая часть лимфоидных узелков активна и содержит светлые центры, в них уменьшается по сравнению с контролем содержание малых и средних лимфоцитов на фоне увеличения количества макрофагов и бластов.

стояние пеикоцитоа в венулах

Появление светлых центров в лимфатических узелках

Набухание эндотелия капилляров в красной пульпе

Увеличение объема белой пульпы

Отек (набухание) капсулы селезенки

Отек паренхимы селезенки

, - . -,

20%

J ^ ;,:,;.., I...t3

]70%

О Высокая концентрация культуры □ Низкая концентрация культуры _

Рис. 3. Характер патологических изменений в селезенке животных, зараженных урокультурой Escherichia coli в концентрации 109 КОЕ/мл и 106 КОЕ/мл.

В опытной группе, зараженной урокультурой Escherichia coli в концентрации 106 КОЕ/мл, выявленные изменения отмечаются с достоверно меньшей частотой (рис. 3).

В препаратах тонкой кишки животных опытных групп (рис.4) отмечена выраженная воспалительная инфильтрация собственной пластинки слизистой оболочки лейкоцитами, преимущественно малыми лимфоцитами, в дне крипт Либерюона выявлены многочисленные дегранулирующие клетки Панета. В собственной пластинке слизистой оболочки подвздошной кишки крысы кишечно-ассоциированная лимфоидная ткань представлена пейеровыми бляшками, в которых отмечаются пролиферативные процессы в виде формирования в большинстве узелков светлых центров; в реактивных центрах -пролиферация клеток лимфоидного ряда; межузелковые зоны были расширены и содержат большое количество клеток лимфоидного ряда и макрофагов. Подобные изменения в меньшей степени отмечены у животных, зараженных урокультурой Escherichia coli в концентрации 106 КОЕ/мл, чему животных, зараженных урокультурой Escherichia coli в концентрации 109 КОЕ/мл.

Увеличение числа клеток Панета в дне крипт

Воспалительная инфильтрация собств пластинки слизистой подвздош кишки

Увеличение размеров лимф узелков, пейеровых бляшек, формирование светлых центров

60%

....... ......

- 80%

§||§щ(| fJ50%

Ш ' ГПМйГП IÜ . 1эо%

— -J- —А--1-1-

00%

20% 40% 60% 80%

100%

□ Высокая коцентрация культуры В Низкая концентрация культуры

Рис. 4. Характер патологических изменений в тонкой кишке животных, зараженных урокультурой Escherichia coli в концентрации 109 КОЕ/мл и 106 КОЕ/мл

При исследовании ткани печени экспериментальных животных, зараженных урокультурой Escherichia coli в концентрации 109 КОЕ/мл, в дольках выявлены полнокровные центральные вены (100%), вокруг которых у 90% животных группы обнаружены воспалительные инфильтраты, небольшие по размеру и представленные нейтрофильными гранулоцитами и клетками лимфоидного ряда (рис. 5). В паренхиме печени выявлены участки вакуольной дистрофии гепатоцитов (90%). У всех животных данной группы отмечено полнокровие синусоидных капилляров. В группе животных, зараженных урокультурой Escherichia coli в концентрации 10® КОЕ/мл, выявленные изменения отмечены в меньшем проценте случаев (рис. 5).

□ Вакуольная дистрофия гепатоцитов

П Полнокровие центральных вен и синусоидов

■ Воспалительная инфильтрация междольковой соединительной ткани

Воспалительная инфильтрация внутри долек (вокруг центральных вен)

Высокая концентрация Низкая концентрация культуры культуры

Рис. 5. Характер патологических изменений в ткани печени экспериментальных животных, зараженных урокультурой Escherichia coli в концентрации 109 КОЕ/мл и 106 КОЕ/мл

Таким образом, проведенные исследования показали, что использование максимальной концентрации инфицирующего агента (клинического штамма лактозонегативной Escherichia coliNi 2899) - 109 КОЕ/мл - является оптимальным в плане создания адекватной модели острого пиелонефрита в эксперименте.

При проведении экспериментальной терапии были получены следующие результаты бактериологического исследования аутопсийного материала, полученного от животных, зараженных урокультурой Escherichia coli в концентрации ¡О9 КОЕ/мл (таблица 2).

Таблица 2

Результаты бактериологического исследования аутопсийного материала

Комбинированная терапия цефазолином и «Вобэнзимом» Монотерапия цефазолином

Исследуемый материал Процент животных, от которых были получены высевы Концентрация выделенной культуры Escherichia coli, КОЕ/г Процент животных, от которых были получены высевы Концентрация выделенной культуры Escherichia coli, КОЕ/г

Почки 10% <102 60%* <103'

Печень 10% <102 50%* <103'

Селезенка 10% <102 40%* <W

Примечание: * отмечена достоверность различий по отношению к группе, зараженной урокультурой Escherichia coli в концентрации 109 КОЕ/мл (р<0,05)

Таким образом, при заражении животных урокультурой Escherichia coli в концентрации 10' КОЕ/мл и проведении монотерапии цефазолином у части животных, использованных в эксперименте, сохранялась бактериемия, обусловившая развитие бактериального воспаления в ткани почек, что подтверждено результатами бактериологического исследования.

В экспериментальной группе, получавшей помимо инъекций цефазолина «Вобэнзим» перорально, высев Escherichia coli, идентичной по морфологическим, культуральным и биохимическим свойствам штамму, использованному для заражения, выделен лишь от 10% животных в концентрации <102 КОЕ/г. Полученные результаты достоверно (р<0,05) отличаются от результатов, полученных в предыдущей группе, что также подтверждается бактериологическими методами исследования.

Данные гистологического исследования свидетельствуют о том, что у животных опытных групп, зараженных уропатогенным штаммом Escherichia coli и получавших экспериментальную терапию цефазолином, воспалительные изменения в почках были выражены в значительно меньшей степени, чем у животных, не получавших терапию. При этом результаты, полученные в группе с применением «Вобэнзима», достоверно отличались от результатов, полученных при проведении монотерапии цефазолином: в данной экспериментальной группе процент выявления патологических изменений был достоверно меньше (рис. 6).

Воспалительная инфильтрация стенки лоханки и ингерст. ткани

Полнокровие и тромбы в просвете сосудов

Пропитывание ингерстиция белками плазмы

Зернистая дистрофия эпителия проксимал. канальцев

_0% 20% 40% _60% 80%

II Комбинированная терапия цефазопином и вобэнзимом □ Терапия цефазолином_

Рис.6. Характер патологических изменений в ткани почки после экспериментальной терапии

При гистологическом исследовании органов иммунной системы животных, получавших экспериментальную терапию, установлено, что в центральных и периферических органах иммуногенеза при включении в состав экспериментальной терапии ферментного препарата «Вобэнзим» отмечаются более выраженные пролиферативные изменения, свидетельствующие о более интенсивном течении иммунных реакций и более адекватном иммунном ответе на инфекционный процесс. При этом наиболее выраженные изменения отмечены в Т-зависимых зонах.

Актуальность изучения морфометрических параметров базальных мембран (гломерулярной и канальцевой) определялась тем, что именно эти структуры в первую очередь страдают от проникновения микроорганизмов в почку гематогенным путем. С другой стороны, согласно литературным данным, у пациентов с пиелонефритом одновременно с увеличением площади почечного клубочка увеличивается площадь поперечного сечения капилляров и уменьшается объем (а, значит, и площадь поперечного сечения) мочевого пространства (Кравцов, 2006), что также определяет необходимость проведения морфометрических измерений данных показателей. Результаты морфометрических исследований аутопсийного материала представлены в таблице 3.

Таблица 3

Результаты морфометрического исследования аутопсийного материала

Экспериментальный пиелонефрит

Контрольная группа (интактные животные)

Без коррекции Монотерапия цефазолином Комбинированная терапия цефазолином и «Вобэнзимом»

Толщина

гломерулярной 10,37±0,864 19,01±1,641* 14,52±1,212* 12,85±0,754

базальной

мембраны, мкм

Толщина базальной мембраны проксимальных извитых канальцев, мкм 34,68±7,038 47,5±3,501* 38,79±6,32 35,51±4,087

Площадь

мочевого пространства в почечном тельце, мкм2 1582,9±386,4 1090,034±394,4* 1443±483,9 1522±235,5

Площадь

поперечного сечения капилляров в почечном тельце, мкм2 16,24±2,85 49,71±10,05* 23,66±2,902 21,96±1,242

Примечание: * отмечены величины достоверно отличающиеся от контрольных (р<0,05)

Таким образом, результаты проведенных морфометрических исследований свидетельствуют о том, что в ткани почек экспериментальных животных при воспалении, вызванном инъекцией урокультуры Escherichia coli, отмечается утолщение гломерулярных базальных мембран и базальной мембраны проксимальных извитых канальцев, уменьшение объема мочевого пространства и расширение просвета клубочковых капилляров. Данные изменения претерпевают обратное развитие при проведении экспериментальной терапии, 18

причем, наиболее оптимальная редукция выявленных патологических изменений отмечается в экспериментальной группе, получавшей помимо традиционно используемой этиотропной терапии антибиотиком, «Вобэнзим» в качестве средства патогенетической терапии. Кроме того, при добавлении в состав экспериментальной терапии «Вобэнзима» отмечается максимальное уменьшение воспалительной инфильтрации в ткани почек, также подтверждаемое морфометричсскими исследованиями (табл.4).

Таблица 4

Степень выраженности воспалительной инфильтрации в ткани почки экспериментальных животных при помощи функции «Сегментация по гистограмме» (%).

Контрольная группа (интактные животные) Экспериментальный пиелонефрит

Без терапии Монотерапия цефазолином Комбинированная терапия цефазолином и вобэнзимом

Площадь сечения в препарате, занимаемая воспалительной инфильтрацией, % 0 26,27±4,7 8,942±1,144* 3,504±0,667*

Примечание: * отмечены величины, достоверно отличающиеся от контрольных (р<0,05)

Согласно результатам морфометрического анализа объем белой пульпы в селезенке интактных животных составил в среднем 30,18±2,69% (табл. 5). При внутрибрюшинном введении экспериментальным животным урокультуры Escherichia coli в концентрации 109 КОЕ/мл отмечалось достоверное по сравнению с контролем увеличение относительного объема белой пульпы. При этому животных, получавших в качестве экспериментальной терапии только цефазолин, увеличение объема белой пульпы было умеренным; у животных, дополнительно получавших «Вобэнзим», увеличение относительного объема белой пульпы было максимальным

Также было проведено исследование относительного объема периартериальных лимфоидных муфт (ПАЛМ) в белой пульпе селезенки экспериментальных животных как критерий пролиферации клеток лимфоидного ряда в Т- зависимой зоне и относительного объема светлых центров в лимфоидных узелках - как критерий пролиферации клеток в В-зависимой зоне (табл.5). В экспериментальной группе у животных, зараженных урокультурой Escherichia coli, но не получавших лечение, отмечено достоверное увеличение удельного объема ПАЛМ в селезенке (Т-зависимой зоны) и достоверное уменьшение удельного объема светлых центров (B-зависимой зоны), что соответствует картине острого бактериального воспаления. При экспериментальной терапии отмечено как увеличение удельного объема ПАЛМ, так и светлых центров, более равномерное в экспериментальной

группе, получавшей комбинированную терапию, что объясняется, вероятно, тем, что протеолитические ферменты, составляющие основу препарата «Вобэнзим», оказывают регулирующее действие на все звенья иммунной системы (Мазуров, 1996).

Таблица 5

Результаты морфометрического исследования аутопсийного материала

Контрольная группа (интактные животные) Экспериментальный пиелонефрит

без лечения монотерапия цефазолином комбинированная терапия цефазолином и «Вобэнзимом»

Удельный объем белой пульпы селезенки (%) 32,26±3,42 44,88±3,85* 37,51±1,83* 47,71±4,82*

Удельный объем периартериальных лимфоидных муфт в белой пульпе селезенки (%) 12,72±2,45 33,33±2,98* 40,14±3,86* 30,51±3,94*

Удельный объем светлых центров в белой пульпе селезенки (%) 8,9±1,25 3,99±0,52* 13,18±2,68* 15,84±2,51*

Удельный объем мозгового вещества в дольках тимуса (%) 35,19±5,72 24,05±2,38* 47,52±3,55* 73,84±6,98*

Количество дегранулирующих клеток Панета (%) 0,7±0,051 4,б±0,883* 1,6±0,043 4,37±0,181*

Удельный объем светлых центров лимфатических узелков пейеровых бляшек тонкой кишки (%) 20,01±2,52 37,24±2,49* 31,61±1,35* 35,17±3,97*

Примечание: * отмечены величины, достоверно отличающиеся от контрольных (р<0,05)

У экспериментальных животных, зараженных урокультурой Escherichia coli, но не получавших лечения, отмечено достоверное уменьшение удельного объема мозгового вещества в дольках тимуса. Вместе с тем, при проведении животным экспериментальной терапии этот показатель увеличивается, причем, в группе, получавшей «Вобэнзим» наряду с цефазолином, отмечен рост данного показателя в 2 раза (табл. 5).

Клетки Панета обеспечивают, в основном, антибактериальную защиту, выделяя при контакте с бактериями или бактериальными антигенами (липополисахарид, мурамил дипептид илилипидА ) альфа-дефензины (антимикробные катионные пептиды) и, кроме того, лизоцим и фосфолипазу А2 (Ganz , 2000; van der Flier et al., 2009). Поэтому количество

дегранулирукмцих клеток Панета возрастает при бактериальных инфекциях. Поскольку максимальное количество клеток Панета находится в слизистой гонкой кишки, анатомически связанной с подлежащей лимфоидной тканью в виде пейеровых бляшек, становится понятным возрастание количества дегранулирующих клеток Панета у животных, получавших, помимо антибактериальной терапии, иммуномодулирующий препарат «Вобэнзим» (табл.5).

Таким образом, результаты проведенных морфометрических исследований органов иммунной защиты экспериментальных животных свидетельствуют о том, что «Вобэнзим» оказывает стимулирующее влияние на органы иммунной защиты экспериментальных животных, что подтверждено в нашем исследовании результатами не только рутинных гистологических методов, ной морфометрических методик. Влияние протеолитических энзимов на иммунную систему осуществляется посредством стимуляции специализированных функций моноцитов-макрофагов, естественных киллеров, цитотоксических Т-лимфоцитов, регуляции уровня цитокинов, снижении продукции иммунных комплексов, поддерживающих воспалительный процесс, регуляции уровня адгезивных молекул (Мазуров с соавт, 1999).

ВЫВОДЫ:

1. Однократное внутрибрюшинное введение лабораторным крысам клинического изолята «дикого» штамма Escherichia coli в концентрации 109 КОЕ/мл, выделенного из мочи пациента с острым пиелонефритом, подтвержденным клиническими и лабораторными данными, позволяет воспроизвести в эксперименте острый пиелонефрит с характерными патоморфологическими изменениями в ткани почек.

2. Гистологические исследования ткани почек животных с экспериментальным пиелонефритом подтвердили, что к 14-м суткам в ткани почек животных формируются изменения, типичные для острого микробно-воспалительного процесса, причем, у животных, зараженных урокультурой Escherichia coli в концентрации 109 КОЕ/мл, более выраженные, чем в группе, зараженной урокультурой Escherichia coli в концентрации 106 КОЕ/мл.

3. При экспериментальном пиелонефрите в центральных (тимус) и периферических органах иммунной системы (селезенка, пейеровы бляшки тонкой кишки) активируются пролиферативные процессы, что проявляется увеличением количества клеток лимфоидного ряда в Т - и B-зависимых зонах и формированием светлых

центров в лимфоидных узелках селезенки и пейеровых бляшек.

4. Включение в терапию острого пиелонефрита комплекса протеолитических энзимов в виде препарата «Вобэнзим» способствует оптимальной регрессии морфологических признаков воспаления в почке по результатам морфометрических сравнений толщины гломерулярной базальной мембраны и базальной мембраны проксимальных извитых канальцев, площади мочевого пространства и просвета клубочковых капилляров, степени выраженности воспалительной инфильтрации до и после лечения, а также по сравнению с монотерапией антибактериальным препаратом (цефазолином).

5. Ферментный препарат «Вобэнзим» оказывает интенсивное иммуномодулирующее влияние на органы иммунной системы животных с экспериментальным пиелонефритом, что подтверждается более выраженными пролиферативными изменениями в них при комбинированной терапии цефазолином и «Вобэнзимом», чем при монотерапии цефазолином, по результатам морфометрических исследований.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Для моделирования острого пиелонефрита возможно однократное внутрибрюшинное введение лабораторным животным клинического штамма лактозонегативной Escherichia coli № 2899 концентрации 109 КОЕ/мл, выделенного из мочи пациента с острым пиелонефритом, подтвержденного клиническими и лабораторными данными.

2. Целесообразно включение в комплексную терапию острого пиелонефрита ферментного препарата «Вобэнзим», представляющего собой смесь гидролаз растительного и животного происхождения.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Логинова И.А. Применение комплекса антибактериальных пептидов и цитокинов в терапии экспериментального пиелонефрита / И.А. Логинова, Н.А. Метлушко, Л.Г.Балуева, А.С. Лиманский, О.М. Пушкарева // «Современные проблемы экологии, микробиологии и иммунологии» Институт генетики и экологии микроорганизмов УРоРАН, Пермь, - 2007 г. - С. 70-72.

2. Зимушкина, Н.А. Гистологические изменения у лабораторных животных при коррекции экспериментального пиелонефрита комплексом природных антибактериальных пептидов и цитокинов / Н.А. Зимушкина, Е.И.

Самоделкин, T.B. Кочинова, Н.И. Аверьянова, П.В. Косарева, И.Ф. Елькин, Ф.А. Шилова, И.А. Логинова // Материалы XI международной научно-практич. конф. молодых ученых и специалистов - Екатеринбург, 2007 г. - С. 24-29.

3. Способ моделирования острого пиелонефрита / Н.И. Аверьянова, В.В. Звездаков, H.A. Зимушкина, П.В. Косарева, И.А. Логинова, Е.И. Самоделкин, О.С. Суринова, В. А. Черешнев, А.В . Чигалейчик // Патент РФ на изобретение № 2349965 - 2007127373/17; Заявлено 17.07.2007; Опубл. 20.03.09. Бюлл. N 8 // Открытия. Изобретения. -2009,- N 15.

4. Косарева, П.В. Воспроизведение в эксперименте острого гематогенного пиелонефрита / П.В. Косарева, В.А. Черешнев, Е.И. Самоделкин, H.A. Зимушкина, И.А. Логинова, Н.И. Аверьянова // Успехи современного естествознания. - М.: «Академия естествознания», 2008. - № 2. - С. 99-101.

5. Зимушкина, H.A. Изменения гематологических показателей у белых крыс при экспериментальном пиелонефрите и его терапии комплексом природных антибактериальных пептидов и цитокинов / H.A. Зимушкина, П.В. Косарева, И.А. Логинова, Н.И . Аверьянова // Материалы юбилейной научной сессии ПГМА - Пермь, 2008. - Т. 1. - С. 309-311.

6. Логинова, И.А. Патофизиологические изменения при экспериментальном пиелонефрите и изучение эффективности его терапии протеолитическими энзимами / И.А. Логинова, Е.И. Самоделкин, H.A. Зимушкина, Т.В. Кочинова, П.В. Косарева, И.Ф. Елькин // Сборник науч. трудов LXVIII Всероссийской научно-практической конф. «Инновации и технологии - эффективному агропроизводству». - Пермь, 2008. - Ч. 1. - С. 208-213.

7. Способ моделирования острого пиелонефрита на фоне холодового стресса / Н.И. Аверьянова, H.A. Зимушкина, П.В. Косарева, Т.В. Кочинова, И.А. Логинова, В.А. Черешнев // Патент РФ№ 2368016 по заявке № 2008100590/14; Заявлено 09.01.2008; Опубл. 20.09.09. Бюлл. N 26//Открытия. Изобретения. -

8. Способ моделирования острого пиелонефрита на фоне криогенного воздействия / Н.И. Аверьянова, H.A. Зимушкина, П.В. Косарева, И.А. Логинова, В.А. Черешнев // Получено положительное решение от 22.10.2008 г. о результате формальной экспертизы по заявке № 2008125356/14. Уведомление о рассмотрении ходатайства о проведении экспертизы по существует 10.12.08. Получено положительное решение о выдаче патента.

9. Черешнев, В.А. Морфологические и гематологические критерии эффективности лечения экспериментального пиелонефрита комплексом природных цитокинов

и антибактериальных пептидов / В.А. Черешнев, П.В. Косарева, Н.И. Аверьянова, Ф.А. Шилова, H.A. Зимушкина, И.А. Логинова // Пермский медицинский журнал, том XXV № 2. - Пермь, 2008 г. - С. 5-13.

10. Зимушкина, H.A. Изменение патоморфологических показателей при экспериментальном пиелонефрите и изучение эффективности его терапии комплексом природных антибактериальных пептидов и цитокинов / H.A. Зимушкина, Е.И. Самоделкин, Т.В. Кочинова, П.В. Косарева, Н.И. Аверьянова, Ф.А. Шилова, И.Ф. Елькин, И.А. Логинова // Материалы Всероссийской научно-практической конференции, посвященной 90-летию сельскохозяйственного образования на Урале. - Пермь, 2008. - С. 150-153.

11. Зимушкина, H.A. Патоморфологические изменения внутренних органов и показателей крови белых крыс при экспериментальном пиелонефрите / H.A. Зимушкина, Е.И. Самоделкин, П.В. Косарева и др.// Современные научные тенденции в животноводстве. Часть 2. Ветеринарная медицина. Сборник статей Международной научно-практической конференции, посвященной 100-летию со дня рождения П.Г. Петского. 16-17 апреля 2009г., Вятская ГСХА Киров, 2009. -С. 54-61.

Отпечатано: ООО "РПЦ "Июль" г. Тюмень, ул. 30 лет Победы, 38, стр. 10 тел. (3452) 26-19-29 Тираж 100 экз.

Оглавление диссертации Логинова, Ирина Александровна :: 2009 :: Тюмень

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ДАННЫХ ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Роль инфекционного агента и иммунологических нарушений в развитии микробно-воспалительного процесса в органах мочевыделителыюй системы.

1.2. Патогенетическая целесообразность применения протеолитических энзимов в составе комплексной терапии пиелонефрита; иммуномодулирующие эффекты протеолитических энзимов.

1.3. Моделирование острого пиелонефрита в эксперименте.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Общая характеристика материалов исследования.

2.2. Основные методы исследования.

2.2.1. Бактериологические методы исследования.

2.2.2. Оригинальная методика экспериментального пиелонефрита.

2.2.3. Гистологические и морфометрические методы исследования.

2.3. Методы статистической обработки.

ГЛАВА 3. ВОСПРОИЗВЕДЕНИЕ ОСТРОГО МИКРОБНО-ВОСПАЛИТЕЛЪНОГО ПОРАЖЕНИЯ ТКАНИ ПОЧЕК В ЭКСПЕРИМЕНТЕ.

3.1. Результаты бактериологического исследования.

3.1.1. Результаты бактериологического исследования аутопсийного материала, полученного от экспериментальных животных, зараженных урокультурой Escherichia coli в концентрации 109 КОЕ/мл.

3.1.2. Результаты бактериологического исследования аутопсийного материала, полученного от экспериментальных животных, зараженных урокультурой Escherichia coli в концентрации 10б КОЕ/мл.

3.2. Результаты гистологического исследования ткани почек.

3.2.1. Результаты гистологического исследования ткани почек интактных животных.

3.2.2. Результаты гистологического исследования аутопсийного материала, полученного от экспериментальных животных, зараженных урокультурой Escherichia coli в концентрации 109 КОЕ/мл.

3.2.3. Результаты гистологического исследования ткани почек экспериментальных животных, зараженных урокультурой

Escherichia coli в концентрации 106 КОЕ/мл.

3.3. Результаты гистологического исследования органов иммунной защиты и ткани печени экспериментальных животных.

3.3.1. Результаты гистологического исследования органов иммунной защиты и ткани печени интактных животных.

3.3.2. Результаты гистологического исследования органов иммунной защиты и ткани печени экспериментальных животных с острым пиелонефритом, зараженных урокультурой Escherichia coli в концентрации 109 КОЕ/мл.

3.3.3. Результаты гистологического исследования органов иммунной защиты и ткани печени экспериментальных животных с острым пиелонефритом, зараженных урокультурой Escherichia coli в концентрации 106 КОЕ/мл.

ГЛАВА 4. РЕЗУЛЬТАТЫ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ТЕРАПИИ ОСТРОГО ПИЕЛОНЕФРИТА КОМПЛЕКСОМ

ПРОТЕОЛИТИЧЕСКИХ ЭНЗИМОВ.

4.1.Результаты бактериологического исследования ткани почек животных с острым пиелонефритом, получавших монотерапию цефазолином и комбинированную терапию цефазолином и «Вобэнзимом».

4.2. Результаты гистологического исследования ткани почек животных с экспериментальным пиелонефритом, получавших монотерапию цефазолином и комбинированную терапию цефазолином и «Вобэнзимом».

4.3. Результаты гистологического исследования органов иммунной защиты и ткани печени животных, зараженных урокультурой

Escherichia coli и получавших экспериментальную терапию.

ГЛАВА 5. РЕЗУЛЬТАТЫ МОРФОМЕТРИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ ОРГАНОВ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ ЖИВОТНЫХ ПРИ МОДЕЛИРОВАНИИ ОСТРОГО ПИЕЛОНЕФРИТА

И ПРОВЕДЕНИИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ТЕРАПИИ.

5.1. Результаты морфометрических исследований ткани почек интактных животных, при моделировании острого пиелонефрита и проведении экспериментальной терапии.

5.2. Результаты морфометрических исследований органов иммунной системы интактных животных при моделировании острого пиелонефрита и проведении экспериментальной терапии.

5.2.1. Результаты морфометрических исследований ткани селезенки интактных животных, при моделировании острого пиелонефрита и проведении экспериментальной терапии.

5.2.2. Результаты морфометрических исследований ткани тимуса интактных животных, при моделировании острого пиелонефрита и проведении экспериментальной терапии.

5.2.3. Результаты морфометрических исследований стенки тонкой кишки и пейеровых бляшек интактных животных, при моделировании острого пиелонефрита и проведении экспериментальной терапии.

Введение диссертации по теме "Патологическая физиология", Логинова, Ирина Александровна, автореферат

Актуальность проблемы. Инфекционно-воспалительные заболевания почек и мочевыводящих путей — одна из наиболее актуальных проблем практического здравоохранения. Помимо того, что инфекционно-воспалительные заболевания органов мочевыводящей системы являются достаточно часто встречающейся патологией, хронизация инфекционного процесса, рецидивирование и прогрессирование с формированием нефросклероза и развитием хронической почечной недостаточности, приводящие к инвалидизации больного и требующие экстраординарных медицинских вмешательств (программный гемодиализ, трансплантация почки) (Вялкова, 1997; Папаян с соавт., 1997; Зверев, 1998), делают эту проблему особенно актуальной. По данным ВОЗ, в числе умерших от «инфекции почек» значительную долю составляют больные хроническим пиелонефритом (Зоркин с соавт., 1998).

Микробно-воспалительные заболевания органов мочевыводящей системы - одна из причин хронической почечной недостаточности (Игнатова, 1998; Зыкова, 1998), что определяет важность их своевременного лечения и качественной профилактики. Традиционная терапия воспалительных заболеваний органов мочевыводящей системы включает антибактериальную химиотерапию и применение фитопрепаратов. С учетом того, что микробно-воспалительный процесс в органах мочевыводящей системы нередко рецидивирует, пациентам требуется ' проведение повторных курсов антибактериальной терапии (Коровина с соавт., 2003). Между тем, современные антибактериальные средства зачастую обладают выраженными побочными реакциями и иммуносупрессивным действием. К тому же, эффективность большинства антибиотиков имеет, как правило, тенденцию к быстрому снижению. Это явление во многом обусловлено появлением антибиотикорезистентных форм возбудителей в связи с активным распространением резистентных клонов микроорганизмов, поэтому внедрение в лечебную практику новых антибиотиков характеризуется относительной кратковременностью периода сравнительно высокой их эффективности, и затраты на их получение, изучение механизма действия, доклинические и клинические испытания нередко становятся нерентабельными (Bassetti, 2002; Kimura, 2003; Nathwani, 2003). Все это определяет постоянный интерес исследователей к поиску новых средств терапии уроренальных инфекций — не только этиотропных, но и патогенетических, направленных на коррекцию иммунного статуса и биохимических нарушений. В сложившейся ситуации становится патогенетически обоснованным и назначение пациентам с инфекционно-воспалительными заболеваниями органов мочевыводящей системы энзимных препаратов (Божков с соавт., 1996), поскольку энзимы обладают способностью ограничивать распространение воспалительного отека, улучшая при этом микроциркуляцию и противодействуя дальнейшему распространению патологического процесса (Barsom et al., 1983; Riede et al., 1989), обладают иммуномодулирующим действием (Рансбергер et al., 1994) и потенцируют эффект антибактериальных средств (Ремезов с соавт., 2003).

Ферментный препарат «Вобэнзим» (МУКОС-Фарма, Германия) уже несколько лет успешно применяется для лечения и противорецидивной профилактики инфекций мочевыводящей системы, при этом данные о влиянии «Вобэнзима» на патоморфоз пиелонефрита получены в большинстве случаев на клиническом материале — результатах биохимических тестов, УЗИ-диагностики и пр. Кроме того, в клинике ферментные препараты применяются, как правило, только в сочетании с антибиотиком. Все это определяет актуальность проведения исследования эффективности применения «Вобэнзима» при лечении экспериментального пиелонефрита с определением морфологических и микробиологических параметров.

Цель работы: разработать экспериментальную модель острого пиелонефрита и оценить эффективность применения в эксперименте препарата «Вобэнзим», представляющего собой сбалансированную смесь гидролаз животного и растительного происхождения.

Задачи исследования:

1. Разработать экспериментальную модель острого пиелонефрита, используя урокультуру условно-патогенных бактерий, изолированную от пациента.

2. Изучить морфологические и морфометрические изменения ткани почек при экспериментальном пиелонефрите у лабораторных животных.

4. Изучить влияние протеолитических энзимов на патоморфоз острого пиелонефрита в эксперименте.

Положения, выносимые на защиту:

Научная новизна. Разработана оригинальная методика экспериментального моделирования острого пиелонефрита (патент №2349965), путем однократного интраперитонеального введения уропатогенного штамма Escherichia coli в концентрациях 109 КОЕ/мл и 106 КОЕ/мл.

Г4"

Росздрава». Результаты исследований доложены и обсуждены на Региональной конференции молодых ученых с международным участием «Современные проблемы экологии, микробиологии и иммунологии» (Пермь, 2007г.), LXVIII Всероссийской научно-практической конференции «Инновации и технологии — эффективному агропроизводству» 16-17 апреля 2008г. (Пермь); XI международной научно-практической конференции молодых ученых и специалистов 21-23 ноября 2007г., (Екатеринбург); Итоговой научной сессии ПГМА им. ак. Е.А. Вагнера Росздрава, (Пермь, 2008г.); Всероссийской научно-практической конференции, посвященной 90-летию сельскохозяйственного образования на Урале (Пермь, 2008г).

По теме диссертации опубликованы 11 печатных работ (в том числе 2 патента РФ на изобретения), из них 1 — в рецензируемом журнале ВАК.

Заключение диссертационного исследования на тему "Экспериментальный пиелонефрит и его терапия"

выводы

2. Гистологические исследования ткани почек животных с экспериментальным пиелонефритом подтвердили, что к 14-м суткам в ткани почек животных формируются изменения, типичные для острого f микробно-воспалительного процесса, причем, у животных, зараженных урокультурой Escherichia coli в концентрации 109 КОЕ/мл, более выраженные, чем в группе, зараженной урокультурой Escherichia coli в концентрации 106 КОЕ/мл.

3. При экспериментальном пиелонефрите в центральных (тимус) и периферических органах иммунной системы (селезенка, пейеровы бляшки тонкой кишки) активируются пролиферативные процессы, что. проявляется увеличением количества клеток лимфоидного ряда в Т- и В-зависимых зонах и формированием светлых центров в лимфоидных узелках селезенки и пейеровых бляшек.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2009 года, Логинова, Ирина Александровна

1. Аверьянова Н.И. К вопросу о видовом спектре уропатогенов / Н.И. Аверьянова, Н.С. Авдеева, П.В. Косарева, Т.А. Пухова // Материалы VI Международной научной конференции «Здоровье семьи — XXI век». -Пермь-Дубай, 2002. С. 10.

2. Аверьянова Н.И. Микрофлора мочи как фактор, определяющий характер течения уроренальной инфекции / Н.И. Аверьянова, П.В. Косарева, Л.А. Кичигина // Материалы IX конгресса педиатров России «Актуальные проблемы педиатрии». Москва, 2004. - С. 7.

3. Адаменко О.Б. Этиология первичного и обструктивного пиелонефрита у детей / О.Б. Адаменко, Ф.К. Манеров, О.Ю. Иогина // Современные технологии в педиатрии и детской хирургии: Материалы I Всероссийского конгресса. — Москва, 2002. С. 210.

4. Буглова Е.С. Коррекция иммунодефицитных состояний у больных острым гнойным пиелонефритом / Е.С. Буглова, С.О. Плисан // Урология и нефрология. 1991. - № 2. - С. 17-21.

5. Бухарин О.В. Клинико-микробиологическое обоснование ранней диагностики пиелонефрита у детей / О.В. Бухарин, А. А. Вялкова,

6. B.А. Гриценко // Российский педиатрический журнал. — 2003. № 2. —1. C. 42-47.

7. Воробьев А. А. Иммуносупрессивное действие патогенных грамотрицательных бактерий / А.А. Воробьев, Е.В. Борисова, О.С. Моложавая и др. // Вестник РАМН. 2001. - № 2. - С. 21-25.

8. Вялкова А.А. Ранняя диагностика инфекции мочевой системы у детей: клинико-лабораторные и микробиологические подходы / А.А. Вялкова, JI.M. Гордиенко, Г.Г. Громова и др. // Методические рекомендации № 95/31. — Оренбург. — 1997. — 36 с.

9. Драник Г.Н. Иммунонефрология / Г.Н. Драник. — Киев: «Здоровья», 1989.-С. 138-155.

10. Есилевский Ю.М. Способ моделирования необструктивного пиелонефрита /Ю.М. Есилевский, Ю.А. Пытель, И.И. Золотарев, А.Г. Уфимцева, М.А. Пальцев // А.с. 1097633 СССР. БИ, 1984, № 22.

11. Ефименко Н.А. Полиферментные препараты в гнойной хирургии: методические рекомендации / Н.А. Ефименко. М., 2005. — 32 с.

12. Загайнова Е.В. Этиопатогенетические варианты расстройства мочеиспускания у детей / Е.В. Загайнова, И.Г. Шиленок, C.JI. Нестеров // Педиатрия. 2002. - № 2. - С. 21-26.

13. Землякова Э.И. Диагностика пиелонефрита у детей / Э.И. Землякова, Р.Г. Кошалова // Казанский медицинский журнал. 1992. -№4.-С. 19-21.

14. Зоркин С.Н. Роль микрофлоры кишечника в развитии пиелонефрита у детей с пузырно-мочеточниковым рефлюксом / С.Н. Зоркин, Т.Б. Сенцова

15. Детская хирургия. 1998. - № 4. - С. 17-21.

16. Зоркин С.Н. Острофазовые белки сыворотки крови у детей с хроническим обструктивным пиелонефритом / С.Н. Зоркин, Т.Б. Сенцова, Ю.А. Ахмедов, К.М. Мадибраимов // Детская хирургия. 1999. - № 2. -С. 15-19.

17. Зыкова, JI.C. Факторы персистенции уропатогенов в диагностике, прогнозировании и лечении пиелонефрита у детей: Автореф. дис. . д-ра мед. наук. Оренбург, 1998. - 42 с.

18. Зуй О.Г. Патогенетические и клинико-иммунологические особенности пиелонефрита у детей: Дис. . канд. мед. наук / Киров, гос. мед. ин-т. Киров, 1994. - 111 с.

19. Игнатова М.С. Дискуссионные вопросы статьи Ю.Е. Малаховского и соавт. «О некоторых подходах к диагностике и терапии инфекций мочевыводящих путей у детей» / М.С. Игнатова // Педиатрия. 1998. - № 3. — С. 104-106.

20. Игнатова М.С. Детская нефрология / М.С. Игнатова, Ю.Е. Вельтищев: Ленинград, 1989. 455 с.

21. Игнатова М.С. . Актуальные проблемы нефрологии детского возраста: прошлое, настоящее и будущее / М.С. Игнатова // Российский вестник перинатологии и педиатрии. — 2006. № 6. — С. 52-57.

22. Илек Я.Ю. Динамика показателей неспецифического иммунитета при лимфотропной терапии у детей с острым пиелонефритом / Я.Ю. Илек, О.Г. Зуй, М.Ш. Ганиева // Урология и нефрология. 1993. - № 5. С. 15-17.

23. Игглек Я.Ю. Иммунные нарушения у детей с острым пиелонефритом / Я.Ю. Иллек, М.Ш. Ганиева, О.Г. Зуй // Российский вестник перинатологии и педиатрии. -1995. Т.40. - №2. - С. 53-54.

24. Иллек Я.Ю. Диагностика и лечение первичных нефритов у детей/ Я.Ю. Иллек, Г.А. Зайцева, О.Г. Сизова, Е.Ю. Тарасова, М.Н. Чуканин: Киров, 1998.-271 с.

25. Иллек Я.Ю. Особенности иммунных нарушений при разном характере течения пиелонефрита у детей / Я.Ю. Иллек, О.Г. Сизова, Г.А. Зайцева, Е.Ю. Тарасова // Пермский медицинский журнал. 1998. - № 2. -С. 39-41.

26. Иллек Я.Ю. Основные синдромы и симптомы заболеваний почек в детском возрасте/ Я.Ю. Иллек, А.В. Галанина, С.М. Рамазанова: Киров, 2008. 100 с.

27. Каприн А.Д. Пиелонефрит: клиника, диагностика и лечение /

28. A.Д. Каприн, Р.А. Гафанов, К.Н. Миленин // Лечащий врач. 2002. - №11. -С. 14-18.

29. Кириллов В.И. Клинико-патогенетическое обоснование иммунокорригирующей терапии пиелонефрита у детей раннего возраста /

30. B.И. Кириллов //Педиатрия. 1990. 2. С. 24-31.

31. Кнорринг Г.Ю. Новые подходы к потенцированию эффекта антибактериальных препаратов / Г.Ю. Кнорринг, А.П. Ремезов // Уральский медицинский журнал. 2003. - № 1. - С. 34-36.

32. Кнорринг Г.Ю. Механизмы действия препаратов системной энзимотерапии в клинике детских болезней / Г.Ю. Кнорринг // Тезисы док. Научно-практической конференции «Системная энзимотерапия в клинике детских болезней» М., 2005.1. C. 16-19.

33. Козлова В.В. Клинико-этиопатогенетические особенности пиелонефрита у детей и пути повышения эффективности лечения: Автореф. дис. . канд. мед. наук. Пермь, 2007. - 26 с.

34. Коровина И. А. Диагностическое значение лабораторных и инструментальных методов исследования при пиелонефрите у детей раннего возраста / И.А. Коровина, А.А. Астафьев, И.А. Машковцева // Педиатрия. -1993.-№3.-С. 89-93.

35. Коровина Н.А. Диагностика и лечение пиелонефрита у детей (пособие для врачей) / Н.А. Коровина, И.Н. Захарова, Э.Б. Мумладзе и др. // Нефрология и диализ. 2003. - Т. 5, № 2. - С. 170-177.

36. Коровина Н.А. Диагностика и лечение пиелонефрита у детей / Н.А. Коровина, И.Н.Захарова, Э.Б. Мумладзе, Л.П. Гаврюшова: М., 2007. -43 с.

37. Косарева П.В. Структура уропатогенов на современном этапе / П.В. Косарева // Сборник материалов научной конференции «Современные проблемы и новые технологии в педиатрии, акушерстве и гинекологии». -Пермь, 2001.-С. 103-105.

38. Кухтевич А.В. Пиелонефрит / А.В. Кухтевич, Н.Б. Гордовская, Н.Л. Козловская и др. // Русский медицинский журнал. 2002. Т.5, № 23. С. 26-29.

39. Косарева П.В. Клинико-микробиологическая характеристика инфекций мочевой системы у детей и перспективы их этиотропной терапии: Автореф. дис. . канд. мед. наук. Пермь. - 2004. - 24 с.

40. Кузнецова А.А. Осморегулирукяцая функция почки и экскреция с мочой простагландина Е2 при остром пиелонефрите / А.А. Кузнецова, Ю.В. Наточин // Педиатрия. 2002. - № 2. - С. 13-17.

41. Летифов Г.М. К патогенезу пиелонефрита у детей / Г.Н. Летифов, Г.В. Хорунжий, Р.А. Беловолова и др. // Педиатрия. 1997. - № 3. -С. 39-41.

42. Литвинов В.А. Хронические пиелонефриты: проблемы иммунопатогенеза и иммунодиагностики / В.А. Литвинов, Б.В. Пинегин, И.А. Матушевский и др. // Медицинская иммунология. — 2003. — Т. 5. -№ 3-4.-С. 302-303.

43. Лукьянов А.В. Моделирование острого пиелонефрита у животных различного вида / А.В. Лукьянов, В.Т. Долгих, Э.Г. Потиевский и др. // Бюллетень сибирской медицины, 2004. № 6. - С. 42-46.

44. Мазуров В.И. Системная энзимотерапия: современные подходы и перспективы / В.И. Мазуров, A.M. Лила, Ю.Н. Алешин и др. // СПб: Некоммерческое Партнерство издателей Санкт-Петербурга, 1999. — 224 с.

45. Майданник В.Г. Результаты противорецидивного лечения пиелонефрита у детей / В.Г. Майданник, В.В. Корнейчук // Педиатрия. 1991.- № 5. С. 96-99.

46. Маркова И.В. Лечение заболеваний почек у детей / И.В. Маркова, М.В. Невенцев, А.В. Папаян: СПб., 1994. 400 с.

47. Макарова Т.П. Иммунологические особенности при различных вариантах нефропатий у детей / Т.П. Макарова, С.В. Мальцев, Е.В. Агафонова и др. // Нижегородский медицинский журнал. — 2004. № 1. — С. 67.

48. Насонова В.А. Системная энзимотерапия: практическое руководство для врачей / В.А. Насонова, В.И. Мазуров и др. // СПб.: издательство «Интермедика», 2003. 32 с.

49. Москалец О.В. Патогенез синдрома вторичной иммунной недостаточности и подход к его лечению / О.В. Москалец, Ф.Н. Палеев, А.А. Котова и др. // Клиническая медицина. 2002. - № 11. — С. 18-23.

50. Маянский А.Н. Патогенетическая микробиология / А.Н. Маянский.- Нижний Новгород: Изд-во НГМА, 2006. 519 с.

51. Наумова В.И. Роль фимбриальных адгезинов в продукции некоторых ферментов E.coli в развитии пиелонефрита у детей / В.И. Наумова, Т.Б. Сенцова // Вопросы охраны материнства и детства. 1991. -№ 9. - С. 54-59.

52. Неймарк А.И. Коррекция иммунных нарушений у больных хроническим пиелонефритом и хронической почечной недостаточностью / А.И. Неймарк, Я.В. Яковец // Урология и нефрология. 1994. - № 5. — С. 22-24.

53. Папаян А.В. Клиническая нефология детского возраста / А.В. Папаян, Н.Д. Савенкова. СПб., 1997. - 717 с.

54. Пармон Э.М. Изменение активности ферментов и спектра белков мочи при моделировании острого пиелонефрита / Э.М. Пармон,

55. B.C. Камышников, Е.Т. Зубовская, JI.K. Суркова, Т.А. Тимошенко, Т.В. Коваленко // рецензируемый научно-практический ежегодник «Достижения медицинской науки Беларуси». 2004, Internet-версия: http://www.med.by/dn.htm.

56. Паунова С.С. Роль цитокинов в развитии нефропатий у детей /

57. C.С. Паунова, А.Г. Кучеренко, Х.М. Марков // Нефрология и диализ. 1999. -Т. 1. - № 2-3. - С. 21-24.

58. Пекарева Н.А. Патогенетическое значение динамики цитокинов при хроническом обструктивном пиелонефрите у детей / Н.А. Пекарева, А.В. Чупрова, С.А. Лоскутова и др. // Педиатрия. — Т 87. № 3. - 2008. -С. 23-27.

59. Перепёлкина Н.Ю. Нефрологическая заболеваемость и инвалидность детей Оренбургской области / Н.Ю. Перепёлкина // Педиатрия. -2003. -№ 4. -С. 63-68.

60. Петрушина А. Д. Клинико-иммунологические особенности пиелонефрита у детей в зависимости от характера бактериурии / А.Д. Петрушина, В.И. Крылова, Г.К. Границ // Педиатрия. 1986. - № 1. -С. 18-21.

61. Петров Р.В. Оценка иммунного статуса человека в норме и при патологии/ Р.В. Петров, P.M. Хаитов, Б.В. Пинегин // Иммунология. 1994. -№6. - С. 6-9.

62. Полунин А.И. Активность иммуносупрессивных клеток при пиелонефрите у детей / А.И. Полунин, Л.Т. Теблоева, В.И. Кириллов // Педиатрия. 1986. - № 2. - С. 16-19.

63. Приказ МЗ СССР «Об унификации микробиологических (бактериологических) методов исследования, применяемых в клинико-диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений» № 535.-М., 1985- 126 с.

64. Пугачёв А.Г. Интермиттирующий пузырно-мочеточниковый рефлюкс у детей / А.Г. Пугачёв, Н.Г. Москалёва // Урология. 2003. - № 2. -С. 42-46.

65. Ребенок А.Ж. Значение интерлейкина-8 и дефензинов в патогенезе хронического гломерулонефрита и пиелонефрита / А.Ж. Ребенок, И.И. Тихонов, А.С. Чиж // Терапевтический архив 1999. № 8. - С. 62-67.

66. Ремезов А.П. Системная энзимотерапия как способ потенцирования эффекта антибактериальных средств / А.П. Ремезов, Г.Ю. Кнорринг // Антибиотики и химиотерапия. 2003. — Т. 48. - № 3. - С. 30-33.

67. Ройт А.А. Иммунология / А.А. Ройт, Дж. Бростофф, Д. Мейл // Пер. с англ. М., 2000, 592 с.

68. Савельев B.C. Системная энзимотерапия: опыт и перспективы /

69. B.C. Савельев, В.И. Кулакова, В.А. Насонова // СПб., 2004. 264 с.

70. Самсыгин С.А. Индукторно-регулирующая роль нейтрофилов и природных клеток киллеров (NK-клеток) в сохранении собственного гомеостаза человека / С.А. Самсыгин // Детская хирургия. 2000. - № 6.1. C. 45-49.

71. Санникова А.А. Влияние природных цитокинов ксеноселезенки на иммунные процессы и функциональное состояние почек у больных с хроническим пиелонефритом / А.А. Санникова // Казанский медицинский журнал. 2002. - № 1.-С. 41-44.

72. Сафина А.И. Этиотропная терапия пиелонефритов у детей / А.И. Сафина, С.В. Мальцев // Современные методы диагностики и лечения в детской нефрологии и урологии: Материалы II Всероссийского конгресса. -М., 2002. С. 120.

73. Синюхин В.Н. Иммунологические аспекты острого пиелонефрита / В.Н. Синюхин, JI.B. Ковальчук, Л.А. Ходырева, Н.В. Чирун // Урология. -2002. -№ 1.-С. 7-11.

74. Сидоренко С.В. Перспективы применения моксифлоксацина для лечения инфекций мочеполовых путей / С.В. Сидоренко // Антибиотики и химиотерапия. 2002. - Т. 47, № 1. - С. 36-42.

75. Симченко Н. О бактериологическом исследовании мочи при пиелонефрите / Н.Симченко, О. Быков // Врач. 2000. - № 7. - С. 39.

76. Синюхин В.Н. Иммунологические аспекты острого пиелонефрита / В.Н. Синюхин, Л.В. Ковальчук, Л.А. Ходырева, Н.В. Чирун // Урология. -2002.-№ 1. С. 7-11.

77. Стефани Д.В. Иммунология и иммунопатология детского возраста / Д.В. Стефани, Ю.В. Вельтищев. М., 1996. - 384 с.

78. Тареева И.Е. Нефрология: руководство для врачей / И.Е. Тареева. — М.: Медицина, 2000. С. 228-231.

79. Теблоева Л.Т. Иммунологические основы развития и течения пиелонефрита у детей : Дис. . д-ра. мед. наук. — М., 1985. 284 с.

80. Теблоева Л.Т. Бактериологические и иммунологические проблемы пиелонефрита / Л.Т. Теблоева, М.Б. Цванг, В.И. Кириллов // Советская педиатрия (под ред. М.Я. Студеникина). -М., 1988. С. 47-64.

81. Ткачук В.Н. Иммуномодулирующая терапия больных хроническим пиелонефритом / В.Н. Ткачук, Г.Е. Аркадьева, А.Х. Харфуш // Урология и нефрология. 1987. - № 1. - С. 8-11.

82. Хрущева Н.А. Ранняя диагностика заболеваний почек у детей; современные технологии терапии (Учебно-методические рекомендации) / Н.А. Хрущева, О.А. Синявская, С.Н. Козлова и др. Екатеринбург, 2001. -77 с.

83. Чулкова В.М. Циркулирующие иммунные комплексы в крови и моче при пиелонефрите у детей раннего возраста / В.М. Чулкова, А.И. Козлова, И.И. Ковгунова // Российский педиатрический журнал.2001.-№6. С. 13-15.

84. Швед Н.И. Клинико-лабораторная эффективность Вобэнзима у больных хроническим пиелонефритом / Н.И. Швед, Л.П. Мартынюк // Врачебная практика. 1997. - № 4. - С. 38-42.

85. Ющук Н.Д. Динамика цитокинов у больных с геморрагической лихорадкой с почечным синдромом / Н.Д. Ющук, Д. А. Валишин, Г.В. Сахаутдинова, С.В. Сибиряк // Эпидемиология и инфекционные болезни. 1999. - № 5. - С. 36-37.

86. Alverdy J.C. Influence of the critically ill state on host-pathogen interactions within the intestine: gut-derived sepsis redefined / J.C. Alverdy, R.S. Laughlin, L. Wu // Crit. Care Med. 2003. - Feb; Vol. 31. № 2.- P. 59-60.

87. Auterhoff, H. Lehrbuch der pharmazeutischen Chemie / H.Auterhoff, J. Knabe // 11 vyd., Wissensch. Verlagsges, m.b.H., Stuttgart 1983. -P. 18-20.

88. Barsom, S. Zur Behandlung von Zystitiden und Zystopyelitiden mit hydrolytischen Enzymen / S. Barsom, K. Sasse-Rollenhagen, A. Bettermann // Acta Med. Emp. 1983. - Vol. 32. - P. 125.

89. Bartoli F. Renal expression of monocyte chemotactic protein-1 epidermal growth factor in children with obstructive hydronephrosis / F. Bartoli, L. Gesualdo, G. Paradies, E. Caldarulo // J. Pediatr. Surg. 2000. - Vol. 35. - № 4.- P. 69-72.

90. Benador N. Evolving role of nuclear medicine for the diagnosis and management of urinary tract infection / N. Benado r// J. of Pediatrics. 1994. -Vol. 124. -№ 1. - P. 87-92.

91. Berg B. Long-Term Follow up Renal Morphology and Function in Children with Reccurent Pyelonephritis // J. of Urology. 1992. - V. 148. - № 5. -part 2 of 2.-P. 18-20.

92. Biziulevicius GA. Where do the immunostimulatory effects of oral proteolytic enzymes ('systemic enzyme therapy') come from? Microbial proteolysis as a possible starting point / GA. Biziulevicius // Med. Hypotheses. 2006. — Vol. 67. -№6.-P. 86-88.

93. Bogdanos D.P. Association between the primary biliary cirrhosis specific anti-splOO antibodies and recurrent urinary tract infection / D.P. Bogdanos, H. Baum, P. Butler et al. // Dig Liver Dis. 2003. - Nov; Vol. 35. № 11. -P. 81-85.

94. Desser, L. Cytokine synthesis in human peripheral blood mononuclear cells after oral administration of polyenzyme preparations / L. Desser, A. Rehberger A., E. Kokron, W. Paukovits // Oncology. 1993. - Vol. 50. -P. 43-47.

95. Desser, L. Proteolytic enzymes and amylase induce cytokine production in human peripheral blood mononuclear cells in vitro / L. Desser, A. Rehberger, W. Paukovits // Cancer Biotherapy. 1994. - Vol. 9. -№ 3. - P. 53-63.

96. Fine R.N. The impact of recombinant human growth hormone treatment during chronic renal insufficiency on renal transplant recipients / R.N. Fine, E.K. Sillivan, J. Kuntze // J. of Pediatrics. 2000. - Vol. 136. - № 3. -P. 76-82.

97. Eimes, J.J. On the fibrinolytic system in aged rats, and its reactivity to endotoxin and cytokines / J.J. Eimes, M.E. Brouwer, J. Barelds et al. // Thrombosis and Haemostasis. 1992. - Vol. 67. - № 6. - P. 69-71.

98. Engelmann H. Antibodies to a soluble form of a tumor necrosis factor (TNF) receptor have TNF-like activity / Engelmann H., H. Holtmann, C. Brakebuch et al. // Journal of Biological Chemistry. 1990. - Vol. 265. - № 24. -P. 44-55.

99. Eskild-Jensen A. Reduced number of glomerular in kidneys with neonatally induced partial ureteropelvic in pigs / A. Eskil-Jensen, J. Frokider, J.C. Djurhuus, T.M. Jorgeness // J. Urol. (Baltimore). 2002. - Vol. 167.1. P. 35-39.

100. Foxman B. Epidemiology of the urinary tract infections: incidence, morbility and economic costs / B. Foxman // Dis. Mon. 2003. - February; Vol. 49. - № 2. - P. 53-70.

101. Frankel D.G. Imading of children with chronic renal failure / D.G. Frankel, D. Naria // J. of Pediatrics. 1996. - part 2. - Vol. 129. - № 2. - P. 33-38.

102. Gaggi, R. Pharmacologic study of Wobenzym / R. Gaggi, G.L. Biaggi // Bologna: Instituto di farmacologia Publ., 1985.

103. Gal, P. Systemic enzyme therapy in the treatment of supracondylar fractures of the humerus in children / P. Gal, F. Tecl, J. Skotakova, V. Mach // Rozhl. Chir. 1998, Dec. - Vol. 77. - № 12. - P. 74-76.

104. Ganz T. Paneth cells guardians of the gut cell. Nature immunol. — 2000. -Vol. l.-P. 99-100.

105. Garbin, F. Bromelain proteinase F9 augments human lymphocyte-mediated growth inhibition of various tumor cells in vitro / F. Garbin, T. Harrach, K. Eckert, H.R. Maurer // International Journal of Oncology. 1994. - Vol. 5. -P. 19-23.

106. Glimaker M. Septicemia caused by Staphylococcus saprophytics / M. Glimaker, C. Granert , A. Krook // Scand J Infect Dis. 1988. -Vol. 20. № 3. -P. 47-48.

107. Ginis, I. Hypoxia induces lymphocyte adhesion to human mesenchymal cells via an LFA-1-dependent mechanism / I. Ginis, S.J. Mentzer, D.V. Faller // American Journal of Physiology. 1993. - Vol. 264. - P. 17-24.

108. Gober R. Premature urachal closure induced hydroureteronephrosis in male fetuses/ R. Gober, J. Bleakley, C.A. Peters // J. Urol. (Baltimore). 1998. -Vol. 160. - P. 43-47.

109. Goluzsko, P. Development of Experimental Model of Chronic Pyelonephritis with Escherichia coli 075:K5:H-bearing Dr Fimbriae / P. Goluzsko, S.L. Moseley, D.T. Luan et al. // J. Clin. Invest. 1997, April. - Vol. 99.-№7.-P. 62-72.

110. Guidoni E.B. Urinary infection in adolescents / E.B. Guidoni, J.J. Toporovski // Pediatr. (Rio J.). 2001. Nov, 77. -Suppl 2. P. 165-169.

111. Gupta K. Addressing antibiotic resistance / K. Gupta // Dis. Mon. 2003. Feb; Vol. 49. - № 2. - P. 99-110.

112. Hall D.E. Staphylococcus epidermidis as a cause of urinary tract infections in children / D.E. Hall, J.A. Snizer III // J. of Pediatrics. 1994. - Vol. 124. -№3.- P. 37-38.

113. Hausmann, R. Interaction of papain-digested HLA class I molecules with human alloreactive cytotoxic T-lymphocytes / R. Hausmann, N. Zavazava, J. Steinmann et al. // Clin. Exp. Immunol. 1993. — Vol. 91. — P. 13-18.

114. Hertting, O. Enhanced chemokine response in experimental acute Escherichia coli pyelonephritis in IL-1 beta-deficient mice / O. Hertting,

115. A. Khalil, G. Jaremko // Clin. Exp. Immunol. 2003, Feb. - Vol. 131. - № 2. -P. 25-33.

116. Kadurugamuwa, J.L. Noninvasive Biophotonic Imaging for Monitoring of Catheter-Associated Urinary Tract Infections and Therapy in Mice/ J.L. Kadurugamuwa, K. Modi, J. Yu et al. // Infection and Immunity. 2005, July. -Vol. 73.-№7.-P. 78-87.

117. Kajiwara M. The micturition habits and prevalence of daytime urinary incontinence in Japanese primary school children / M. Kajiwara, K. Inoue, A. Usui et al. // J. Urol. 2004. - Jan; 171 (1). - P. 43-47.

118. Khalil, A. Cytokine gene expression during experimental Escherichia coli pyelonephritis in mice / A. Khalil, A. Brauner, M. Bakhiet et al. // J. Urol. 1997, Oct. - Vol. 158. - № 4. - P. 76-80.

119. Khalil, A. Renal cytokine responses in acute Escherichia coli pyelonephritis in IL-6-deficient mice / A. Khalil, K. Tullus, T. Bartfai // Clin. Exp. Immunol. 2000. - Vol. 122. - № 2. - P. 20-26.

120. Khalil, A. Angiotensin II type 1 receptor antagonist (losartan) down-regulates transforming growth factor-beta in experimental acute pyelonephritis / A. Khalil, K. Tullus, M. Bakhiet et al. // J. Urol. 2000. - Vol. 164. - № 1. -P. 16-19.

121. Kim, J.P. Effect on rosette forming T-lymphocyte level in immunochemotherapy using picibanil and WOBE-MUGOS in gastric cancer patients / J.P. Kim, W.S. Wa, S.J. Kim // J. Korean Surg. Soc. 1991. - Vol. 23. -P. 12.

122. Kimura T. Detection of macrolide resistanse in streptococcus pneumoniae / T. Kimura, T. Horle, M. Morita et al. // Chemotherapy. 2003. -Vol 49. № 1-2.-P. 56-61.

123. Kleine, M.-W. Die Wirkung einer oralen Enzymtherapie auf experimentell ereugte Hamatome / M.-W. Kleine, H. Pabst // Forum Prakt. U. Allgemeinarztes. 1988. - Vol. 27. - P. 42.

124. Krishnamurthy Sriram. Pyelonephritis Presenting with Severe Acute Renal Failure / Sriram Krishnamurthy, Pankaj Hari , Smriti Hari, Alok Sharma, Arvind Bagga // Indian J. of Pediatrics. 2008. - Vol. 75. - № 9. -P. 61-63.

125. Kunin C.M. Priorities in the prevention of Pyelonephritis / C.M. Kunin // Am. J. Dis. Child. 1997. - Vol. 156. - P. 81-82.

126. Lanchava, N. Wobenzym in treatment of recurrent obstructive bronchitis in children / N. Lanchava, K. Nemsadze, I. Chkhaidze // Georgian Med. News. -2005. Vol. 127, Oct. - P. 50-53.

127. Larsson, P. An experimental model for ascending acute pyelonephritis caused by Escherichia coli or proteus in rats / P. Larsson, В Kaijser, I.M. Baltzer, S. Oiling // Journal of Clinical Pathology. 1980. - Vol. 33. - P. 40-41.

128. McLaughlin, T.G. Antibiotic resistance patterns of uropathogenes in pediatric emergency department patients / T.G. McLaughlin, M.M. Joseph // Acad. Emerg. Med.-2003.-Vol. 10. -№4.-P. 47-51.

129. Leskovar, P. AIDS: Neuartige Therapiekonzepte / P. Leskovar // Dtch. Zeitschr. Onkol. 1990. - Vol. 18. - P. 20-24.

130. Mandell J. Principles and Practice of Infectious Diseases / Mandell J., Mancini G., Carbonare V.G. et al. // Edinburg, 5th ed. 2000.

131. Matsumoto, T. Prevention of Renal Scarring Following Bacterial Pyelonephritis / T. Matsumoto, K. Takahashi // Infect. Urol. 2000. - Vol. 13. -№ 5a. - P. 19-21.

132. Maxwell H. Effect of recombinant human grown horvone on renal function in children with renal transplants / H. Maxwell, R.N. Dalton,

133. D.R. Nair, C. Turner // J. of Pediatrics. 1996. - Vol. 128. - № 2. - P. 77-83.

134. Menzel, J. Resorptionsstudie Wobenzym in 6 Kaninchen in Leber und Lunge / J. Menzel, W. Werk // Institut fur Immunologic der Universitat Wien und der Medizinischen Enzymoforschungsgesellschaft e.V., Munchen, 1978.

135. Munzing, E. Bromelain protease F9 reduces the CD44 mediated adhesion of human peripheral blood lymphocytes to human umbilical vein endothelial cells /

136. E. Munzing, T. Harrach, K. Eckert et al. // FEBS Letters. 1994. - Vol. 351. -P. 25-28.

137. Narhi, L.W. The limited proteolysis of tumor necrosis factor-a / L.W. Narhi, М/F/ Rhode, P. Hunt, T. Arakawa // Journal of Protein Chemistry. 1989. -Vol. 8. -№5.-P. 69-77.

138. Nelson, D.J. Pocket book of Pediatric Antimicrobial Therapy / D.J. Nelson. Dallas, Texas: Williams and Wilkins, A Waverly company, 1996-1997. -P. 123.

139. Nguyen H-T. High urinary flow accelerates renal injury in young rats with partial unilateral obstruction / H-T. Nguyen, H-Y. Wu, L.S. Baskin, B.A. Kogan // J. Urol. (Baltimore). 2000. - Vol. 163. - P. 14-17.

140. Okada T. Pulsed Doppler sonography of the hilar renal artery: Differentiation of obstructive from monobstructive hydronephrosis in children / T. Okada, H. Yoshida, J. Iwai // J. Pediatr. Surg. 2001. - Vol. 36. - № 3.1. P. 16-20.

141. Oldham, R.K. Principles of Cancer Biotherapy / R.K. Oldham // Raven Press, New York. 1991.

142. Onen A. Long-Term Followup of Prenatally Detected Severe Bilateral Newborn Hydronephrosis Initially Managed Monoperatively / A. Onen, V.R. Javanthy, S.A. Koff// J. Urol. (Baltimore). 2002. - Vol. 168. -№3.- P. 18-20.

143. Orellana P. Rick factors for permanent kidney damage in children with urinary tract infection / P. Orellana, F. Cavagnaro, P. Baquedano et al. // Rev Med. Chil. 2002. - Oct- Vol. 130. № 10. (Epud ahead of print).

144. Patterson L.T. Acquired versus congenital renal scarring after childhood urinary tract infection / L.T. Patterson, C.F. Strife // J. of Pediatrics. 2000. - Vol. -136. -№ l.-P. 22-24.

145. Pereira J.A. Biotyping and resistotyping for epidemiological tracing of the fecal origin of Klebsiella pneumoniae in urinary infections / J.A. Pereira, I. Suassuna // Mem Inst Oswaldo Cruz. 1985. - Jul-Sep; - Vol. 80. - № 3. -P. 13-20.

146. Randrianirina, F. Antimicrobal resistance among uropathogenes that cause community-acquired urinary tract infections in Antanarivo, Madagascar / F. Randrianirina, J.L. Soares, J.F. Carod et al. // J. Antimicrob. Chemother. 2007. -Vol. 59.-№2.-P. 9-12.

147. Roberts J.A. Experimental pyelonephritis in the monkey. VI. Infection of infants versus adults / J.A., P. // Invest Urol. 1978/ Sep;- Vol. 16. № 2. P. 28-30.

148. Ronald A. The etiology of urinary tract infection: traditional and emerging pathogens / A. Ronald // Dis. Mon. 2003. - Feb - Vol. 49. - № 2. -P. 71-82.

149. Sabbuba N.A. Molecular epidemiology of Proteus mirabilis infections of the catheterized urinary tract / N.A. Sabbuba, E. Mahenthiralingam, D.J. Stickler // J. Clin. Microbiol. 2003. Nov Vol. 41. -№ 11. - P. 61-65.

150. Seifert, J. Die Resorption eines proteolytischen Enzyms pflanzlichen Ursprungs aus dem Magen-Darm-Tract in das Blut und die Lymphe von erwachsenen Ratten / J. Seifert, R. Ganser, W. Brendel // Z. Gastroenterol. — 1979. -Vol. 17.-P. 11.

151. Seifert, J. Zusammenstellung der Versuchsergebnisse zur Resorption von 1251-markierten Verdauungsenzymen / J. Seifert // Institut fur experimentelle Chirurgie der Universitat Kiel, 1988.

152. Singal, A.K. Blockade of Rennin-Angiotensin system blunts the flbrotic response in experimental acute pyelonephritis / Singal A.K., M. Bajpai, AK. Dinda // Journal of Indian Association of Pediatric Surgeons. 2005. - Vol. 10. - № 1. -P. 20-24.

153. Schaier M. Retinoid Agonist Isotretionoin Ameliorates Obstructive Renal Injury / M. Schaier, T. Jocks, H-J. Crone, E. Ritz // J. Urol. (Baltimore). 2003. -Vol. 170.-№4.-P. 39-42.

154. Springall, T. Epithelial secretion of C3 promotes colonization of the upper urinary tract by Escherichia coli / T. Springall, N.S. Sheerin, K. Abe et al. // Nature Medicine. 2001. -Vol. 7. - P. 81-86.j

155. Steffen, C. Untersuchungen iiber intestinale resorption mit H-markiertem Enzymgemish (Wobenzym) / C. Steffen, J. Menzel, J. Stolen // Acta Med. Austriaca. 1979. - Vol. 13. - P. 41-42.

156. Steffen, С. Grundlagenuntersuchung zur Enzymtherapie bei Immunkomplexen / C. Steffen, Menzel J. // Wiener. Klin. Wschr. 1985. — Vol. 97.-P. 76.

157. Trulzsch K. Highly resistant metabolically deficient dwarf mutant of Escherichia coli is the cause of a chronic urinary tract infection / K. Trulzsch, H. Hoffmann, C. Keller et al. // J. Clin. Microbiol. -2003. Dec- Vol. 41. - № 12. -P. 89-94.

158. Tullus, K. Interleukin-1 alpha and interleukin-6 in the urine, kidney, and bladder of mice inoculated with Escherichia coli / K. Tullus, J.A. Wang, Y. Lu, L.G. Burman, A. Brauner // Pediatr. Nephrol. 1996, Aug. -Vol. 10.-№4.-P. 53-57.

159. Turi S. Исследование циркулирующих иммунных комплексов и органоспецифических антител у детей с гломерулонефритом и пиелонефритом/ S. Turi, J. Hudak, L. Varga // Медицинский реферативный журнал. 1983. - № 6. - С. 53.

160. Uncu Y. Should asymptomatic bacteriuria be screened in pregnancy? / Y. Uncu, G. Uncu, A. Esmer et al. // Clin. Exp. Obstet. Gynecol. 2002. - Vol. 29. - №4.-P. 81-85.

161. Virgin, H.W. Immune complexes suppress cellular immunity / H.W. Virgin, E.R. Unanue // Ann. New York Acad. Sci. P. 16-27.

162. Wennerstrom M. Primary and acquired renal scarring in boys and girls with urinary tract infection / M. Wennerstrom, S. Hanson, U. Jodal, E. Stokland // J. of Pediatrics. 2000. - Vol. 136. - № 1. - P. 27-29.