Автореферат и диссертация по медицине (14.00.53) на тему:Клинико-генетические аспекты долгожительства в г. Новосибирске

На правах рукописи

Пентегова Валентина Александровна

КЛИНИКО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ДОЛГОЖИТЕЛЬСТВА В Г. НОВОСИБИРСКЕ

14.00.53 - геронтология и гериатрия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени кандидата медицинских наук

Новосибирск - 2004

Работа выполнена в Новосибирской государственной медицинской академии МЗ РФ и в Государственном учреждении Научно-исследовательский институт терапии Сибирского отделения Российской академии медицинских наук (г. Новосибирск)

Научные руководители:

доктор медицинских наук, профессор,

член-корреспондент РАМН Шабалин Алексей Васильевич

доктор медицинских наук,

профессор Воевода Михаил Иванович

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор

доктор медицинских наук, профессор

Верещагина Галина Николаевна Хаснулин Вячеслав Иванович

Ведущая организация:

Институт биорегуляции и геронтологии Северо-западного отделения Российской академии медицинских наук (г. Санкт-Петербург)

Защита диссертации состоится 30 ноября 2004г. в 1000 часов на заседании диссертационного совета Д 001.048.03 в Научном центре клинической и экспериментальной медицины Сибирского отделения Российской академии медицинских наук по адресу: ул. Академика Тимакова, 2, г. Новосибирск, 630117, тел/факс 8 (3832) 33-64-56.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГУ НЦКЭМ СО РАМН.

Автореферат разослан

2004 г.

Ученый секретарь диссертационного совета д.б.н.

СН.Кутина

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Развитие современной молекулярной биологии и генетики открыло новые перспективы в раскрытии наследственных основ патологии человека. В последние годы все большее внимание исследователей привлекают молекулярно-генетические исследования в области долгожительства с целью разработки профилактических и лечебных мероприятий для увеличения продолжительности активной жизни человека. Предполагается, что система генетического контроля продолжительности жизни включает большое число ло-кусов генома, в число которых входят и гены, определенные аллельные варианты и генотипы которых связаны с развитием возрастной патологии (гены ан-гиотензинпревращающего фермента, ангиотензиногена, рецепторов ангиотен-зина И, аполипопротеинов, метилентетрагидрофолатредуктазы и др.).

К настоящему времени накоплены данные, согласно которым структурная вариабельность гена ангиотензинпревращающего фермента, характеризующаяся вставкой 286 пар нуклеотидов в 16 интроне гена (инсерция) или ее отсутствием, ассоциируется с его функциональным состоянием [Rigat В. et al., 1990]. Инсерционно-делеционный полиморфизм гена ангиотензинпревращающего фермента ассоциирован с вариабельностью уровня как сывороточного, так и тканевого ангиотензинпревращающего фермента. Наиболее документирована связь полиморфизма гена ангиотензинпревращающего фермента с сердечнососудистой патологией. Большинством авторов отмечается связь гомозиготного делеционного генотипа с ишемической болезнью сердца [Гукова СП. и соавт., 1997; Hibi К. et al., 1997], артериальной гипертензией [Rotimi С. et al., 1996; Nakano Y. et al., 1998; Dengel D.R. et al., 2001] и цереброваскулярными заболеваниями [Sharma P. et al., 1994].

По данным многих исследователей аллель s4 гена аполипопротеина Е ассоциирован с развитием дислипидемий и атеросклероза [Corbo R.M. et al., 1997; Okumura К. et al., 1999; Hubacutecek J.A. et al., 2003], ишемической болезни сердца и инфаркта миокарда (ИМ) [Aalto-Setala К. et al., 1998; Мустафина О.Е. и соавт., 2002; Stephens J.W., Humphries S.E., 2003].

В последние годы большое значение в патогенезе ишемической болезни сердца придается повышенному уровню плазменного гомоцистеина. Имеются данные, согласно которым нарушение метаболизма фолиевой кислоты, приводящее к гипергомоцистеинемии, наблюдается у носителей аллеля 677Т гена ме-тилентетрагидрофолатредуктазы [Frosst P. et al., 1995]. По некоторым наблюдениям аллель 677Т гена метилентетрагидрофолатредуктазы является одним из независимых факторов риска развития ишемической болезни сердца и инфаркта миокарда [Nair K.G. et al., 2002]. Однако другие исследователи отрицают связь генотипов гена метилентетрагидрофолатредуктазы с развитием патологии сердечно-сосудистой системы [Spence M.S. et al., 2002]. По-видимому, сложность оценки ассоциации генотипа с развитием возрастной сердечнососудистой патологии связана с мультифакториальностью патогенеза этих заболеваний.

Открытым остается и вопрос об ассоциации генотипов ангиотензинпревра-щающего фермента, аполипопротеина Е и метилентетрагидрофолатредуктазы с продолжительностью жизни человека. Результаты исследований, посвященных решению этой проблемы, противоречивы. По некоторым данным, частоты распределения аллелей этих генов удолгожителей не ОТЛИЧАЮТСЯ от средних зна-

чений в популяции [Bladbjerg E.M. et al., 1999; Gizeszczak W., Misztalski Т., 2002]. Другие авторы выявили существенное изменение распределения аллель-ных вариантов и генотипов с возрастом [Schachter F. et al., 1994; Faure-Delanef L. et al., 1998; RahmutulaD. et al., 2002].

Известно, что продолжительность жизни современного человека лимитирована состоянием сердечно-сосудистой и центральной нервной систем [Котко Д.Н. и соавт., 1990]. Сердечно-сосудистые заболевания являются доминирующей причиной смерти в пожилом возрасте. В основе большинства заболеваний сердечно-сосудистой системы лежит атеросклеротическое поражение сосудов. Значительную роль в патогенезе атеросклероза занимают нарушения липидного обмена [Amarenco P. et al., 1994; Климов А.Н., Никульчева Н.Г., 1995], а также активация процессов перекисного окисления липидов [Yla-Herttuala S., 1991; Aviram M., 1995,1998]). Существенное значение в развитии атеросклероза имеет состояние антиоксидантной защиты организма [Gey K.F., Puska P., 1989]. Из всего вышесказанного следует, что выявление особенностей субфракционного состава липидов крови и окислительно-антиоксидантного потенциала липо-протеинов низкой плотности у лиц старше 90 лет, а также изучение ассоциации клинических, биохимических и молекулярно-генетических параметров является важным как для понимания механизмов феномена долгожительства, так и для решения вопроса о стратегии терапии, направленной на увеличение продолжительности активной жизни у лиц старшей возрастной группы.

Цель: изучить характер ассоциации между полиморфизмом гена ангиотен-зинпревращающего фермента и особенностями патологии сердечнососудистой системы у долгожителей г. Новосибирска.

Задачи:

1. Оценить частоту клинических проявлений патологии сердечнососудистой системы и изучить особенности ЭКГ у долгожителей в сравнении с лицами старческого возраста.

2. Изучить распределение генотипов генов ангиотензинпревращающего фермента, аполипопротеина Е и метилентетрагидрофолатредуктазы у долгожителей в сравнении с лицами среднего и старческого возраста той же популяции.

3. Исследовать особенности липидного профиля крови и содержания липо-фильных антиоксидантов у долгожителей в сравнении с лицами среднего и старческого возраста.

4. Оценить чувствительность липопротеинов низкой плотности к окислению in vitro у долгожителей в сравнении с лицами среднего и старческого возраста.

5. Исследовать характер ассоциации биохимических и клинических показателей с распределением генотипов гена ангиотензинпревращающего фермента у долгожителей и лиц старческого возраста.

Научная новизна. Впервые оценены особенности распределения генотипов и аллелей генов ангиотензинпревращающего фермента, аполипопротеина Е, метилентетрагидрофолатредуктазы у долгожителей Новосибирской популяции в сравнении с лицами старческого и среднего возраста, проявляющиеся в увеличении «частоты встречаемости» гомозиготного инсерционного генотипа гена ангиотензинпревращающего фермента и отсутствии достоверных изменений распределения частот генотипов и аллелей генов аполипопротеина Е и мети-лентетрагидрофолатредуктазы. Показано, что у лиц старческого возраста Новосибирской популяции в сравнении с лицами среднего возраста наблюдается достоверное уменьшение «частоты встречаемости» е4-аллеля гена аполипопро-

теина Е при отсутствии достоверных изменений распределения частот генотипов и аллелей генов ангиотензинпревращающего фермента и метил ентетрагид-рофолатредуктазы. Впервые изучена «частота встречаемости» возрастной патологии сердечно-сосудистой системы у лиц старшей возрастной группы в г. Новосибирске, показано, что частота выявления ишемической болезни сердца у долгожителей достоверно ниже, чем у лиц старческого возраста. Выявлены особенности показателей ЭКГ у долгожителей г. Новосибирска, заключающиеся в достоверном увеличении «частоты встречаемости» нарушений внутриже-лудочковой проводимости и признаков гипертрофии левого желудочка. Впервые проведено сравнение липидного профиля крови и резистентности липопро-теинов низкой плотности к окислению in vitro у долгожителей, пациентов старческого и среднего возраста. Показано, что у пациентов старших возрастных групп гомозиготный делеционный генотип гена ангиотензинпревращающего фермента ассоциирует с низким содержанием холестерина липопротеинов высокой плотности и липофильных антиоксидантов, меньшей резистентностью липопротеинов низкой плотности сыворотки крови к окислению in vitro и высокой частотой наличия возрастной патологии сердечно-сосудистой системы.

Практическая значимость. Выявленные особенности частоты клинических проявлений патологии сердечно-сосудистой системы и изменений на ЭКГ у пациентов старших возрастных групп, заключающиеся в более высокой частоте клинических проявлений ишемической болезни сердца у лиц старческого возраста по сравнению с долгожителями, достоверном возрастании среди долгожителей пациентов с признаками нарушений внутрижелудочковой проводимости и гипертрофии левого желудочка, целесообразно использовать как в оценке состояния системы органов кровообращения, так и при проведении профилактических мероприятий у лиц старческого возраста и долгожителей. Оценка ли-пидного профиля крови и состояния резистентности липопротеинов низкой плотности сыворотки крови к окислению in vitro у пациентов старших возрастных групп перспективна для разработки регионарных нормативов состояния метаболизма у долгожителей и лиц старческого возраста. Наличие клинико-генетических параллелей у лиц старческого возраста и долгожителей определяется частотой встречаемости в этих популяциях генотипов гена ангиотензин-превращающего фермента, что необходимо учитывать при проведении дифференцированных лечебных и профилактических мероприятий у пациентов старших возрастных групп. Результаты исследования используются в качестве методических рекомендаций на курсе геронтологии и гериатрии кафедры терапии факультета усовершенствования врачей Новосибирской государственной медицинской академии МЗ РФ.

Положения, выносимые на защиту:

1. Клинические проявления патологии сердечно-сосудистой системы у лиц старческого возраста обнаруживаются достоверно чаще, чем в группе долгожителей, и определяется достоверная связь между частотой сердечно-сосудистой патологии и носительством D — аллеля гена ангиотензинпревращающего фермента.

2. У обследованных лиц старческого возраста и долгожителей г. Новосибирска имеются значимые различия в «частоте встречаемости» генотипов и аллелей генов ангиотензинпревращающего фермента и аполипопротеина Е в сравнении с новосибирской популяцией среднего возраста. Различий в частоте

встречаемости генотипов и аллелей гена метилентетрагидрофолатредуктазы у обследованных групп не обнаружено.

3. Особенностями липидного профиля крови лиц старческого возраста и долгожителей являются: пониженное, по сравнению с условной нормой, содержание холестерина липопротеинов высокой плотности без существенных сдвигов концентрации общего холестерина сыворотки крови; снижение содержания холестерина липопротеинов высокой плотности у долгожителей ассоциировано со сниженной антиоксидантной активностью; содержание продуктов перекисного окисления липидов в группе долгожителей характеризуется исходно высокими его показателями, а индуцированное окисление липопротеинов низкой плотности сыворотки крови in vitro - замедленной скоростью в сравнении с людьми среднего возраста.

4. Клинико-биохимическая ассоциация патологии сердечно-сосудистой системы у долгожителей и лиц старческого возраста характеризуется положительной корреляцией между гомозиготным DD-генотипом, снижением уровня холестерина липопротеинов высокой плотности, низким содержанием липофиль-ных антиоксидантов в сыворотке крови и более активным индуцированным окислением липопротеинов низкой плотности сыворотки крови in vitro.

Апробация материалов диссертации:

Основные положения работы доложены и обсуждены на I краевой геронто-логической конференции (Хабаровск, 2000), I Съезде геронтологов и гериатров Сибири и Дальнего Востока (2000), конференции молодых ученых НГМА (Новосибирск, 2000), VI Сибирской научно-практической конференции (Красноярск, 2001), VI Европейском Конгрессе по проблемам клинической геронтологии (Москва, 2002), региональной конференции «Гериатрическая кардиология» (Барнаул, 2002), II Съезде геронтологов и гериатров России (Москва, 2003).

Публикации:

По теме диссертации опубликовано 13 печатных работ, из них 3 статьи.

Объем и структура диссертации:

Диссертационная работа содержит введение, б глав, состоящих из литературного обзора, главы «Материал и методы исследования», 3 глав результатов собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводы и указатель литературы. Текст диссертации изложен на 155 страницах машинописного текста. Работа иллюстрирована 8 рисунками, 28 таблицами. Список литературы включает 280 источников, из которых 87 - отечественных и 193 -зарубежных авторов.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Общая характеристика обследованных пациентов

Для выполнения работы обследовано 100 человек в возрасте от 83 до 105 лет (средний возраст составил 93,0±3,7 года): жители Калининского, Дзержинского, Ленинского, Кировского районов г. Новосибирска, пациенты домов-интернатов для престарелых, больные кардиологических отделений Дорожной клинической больницы №1, Муниципальной клинической больницы №25 г. Новосибирска. Среди обследованных было 29 мужчин, 71 женщина. В соответствии с поставленными задачами обследованные были разделены на 2 основные группы. Группу долгожителей составили 65 человек в возрасте от 91 года до 105 лет (в среднем 93,7±2,0 года). В группу лиц старческого возраста было

включено 35 человек в возрасте от 83 до 90 лет (в среднем 88,3±1,9 года). Обследованные пациенты распределялись по группам методом случайной выборки.

Группу сравнения составили 95 мужчин в возрасте от 36 до 59 лет (в среднем 50,0±7,0 лет), которые считались практически здоровыми людьми: популя-ционная выборка мужчин из неорганизованного населения Октябрьского района г. Новосибирска без факторов риска сердечно-сосудистых заболеваний -дислипопротеинемии, артериальной гипертензии, сахарного диабета, имеющие индекс массы тела, соответствующий нормальным значениям (<25 кг/м2) (данные скрининга НИИ терапии СО РАМН; руководитель скрининга - д.м.н., проф. Малютина С.К.). Обследованные группы сравнения не имели признаков сердечно-сосудистых заболеваний согласно клиническим и ЭКГ данным. Распределение пациентов по группам представлено в таблице 1.

Таблица 1

Группы обследованных

Старческий возраст Долгожители Группа сравнения (средний возраст)

Общее число обследованных, чел. 35 65 95

Средний возраст, лет 88,3±1,9 93,7±2,0 50,0±7,0

Распределение по полу, чел. Муж. 14(40%) 15 (23%) 95(100%)

Жен. 21 (60%) " 50 (77%) -

По данным клинического обследования и анализа материалов амбулаторных карт пациентов старческого возраста и долгожителей, большинство из них имело различную сопутствующую патологию. Среди сопутствующей патологии лидирующее место занимали дегенеративные заболевания опорно-двигательного аппарата, которые наблюдали у 71,4% пациентов старческого возраста и у 73,8% долгожителей. Хронические неспецифические заболевания легких наблюдали у 28,6% лиц старческого возраста и 27,7% долгожителей, хронический холецистит - у 17,1% пациентов старческого возраста и 16,9% долгожителей. Среди пациентов старческого возраста достоверно (р<0,001) чаще, чем среди долгожителей, наблюдались случаи заболевания сахарным диабетом II типа (37,1% и 12,3%, соответственно).

Методы исследования Клиническое обследование пациентов осуществлялось в процессе визита врача-кардиолога и гериатра на дом. Пациенты заранее оповещались об этом по телефону. В перечень клинического обследования входило заполнение индивидуальной карты, разработанной Институтом геронтологии и гериатрии АМН СССР (г. Киев, 1990), измерение артериального давления (АД), запись и оценка ЭКГ.

Индивидуальная карта обследования включала в себя 2 раздела - социальные данные (пол, возраст, национальность родителей, образование, характер труда в течение жизни, семейное положение) и данные медицинского осмотра (оценка общего состояния, телосложения, состояния питания и сердечнососудистой системы обследуемого на основании жалоб и данных объективного осмотра, регистрация данных АД и ЭКГ, клинический диагноз).

АД измеряли трижды на правой руке с интервалом 5 минут, после чего определяли среднее АД по формуле Измерение АД проводили в теплой комнате с постоянной температурой воздуха. За 1 час до обследования пациенты не выполняли тяжелых физических нагрузок, не принимали пищи или лекарств, оказывающих влияние на АД, не курили. Артериальной гипертензией (АГ) считали регистрацию систолического АД (САД) 140 мм рт. ст. и более, или диастолического АД (ДАД) 90 мм рт.ст. и выше, или любые цифры АД на фоне приема гипотензивных препаратов в течение последних 2-х недель (ВОЗ, 1999). Лиц, получавших гипотензивные препараты в течение двух предшествовавших исследованию недель, включали в группу пациентов с повышенным АД.

Электрокардиограмму (ЭКГ) покоя записывали с помощью трехканапьного аппарата Fukuda 326FX (Japan) в положении пациента лежа, в 12 общепринятых стандартных отведениях со скоростью движения ленты 50 мм/сек. Проводили мануальное измерение ЭКГ интервалов, оценивали частоту сердечных сокращений (ЧСС): ЧСС менее 60 расценивали как брадикардию, более 90 - тахикардию. Положение электрической оси сердца измеряли в градусах (Za, "). Значения считали патологическими при его величине

Продолжительность зубца Р измеряли в секундах, амплитуду зубца Р - в миллиметрах по II, III стандартных отведениях, двухфазность зубца Р - в отведении Патологически измененным зубец Р считали при увеличении его амплитуды во II и III стандартных отведениях более 2,5 мм, увеличении ширины во II стандартном отведении более 0,1 Г, преобладании амплитуды отрицательной фазы зубца Р в отведении V].

Продолжительность интервала PQn и комплекса QRSn определяли в секундах. Измененными считали PQ<0,12", PQ>0,20", QRS_0,12". Ширину зубца Q измеряли в секундах, амплитуду зубцов Q, R и S - в миллиметрах во всех 12 стандартных отведениях. Грудные отведения ЭКГ, где амплитуда зубцов R и S была приблизительно одинакова, расценивали как переходную зону. Сдвигом переходной зоны вправо считали ее наличие в V|-Vj отведениях, сдвигом влево - BV5-V6 отведениях.

Расположение сегмента ST на ЭКГ отмечали относительно изоэлекгриче-ской линии. Началом сегмента ST считали точку концом - начало зубца Т. Депрессию сегмента ST в любом или нескольких из 12 стандартных отведений считали при величине > 0,5 мм и подъем - > 1 мм в V2-V3. Величину амплитуды зубцов Т и U определяли во всех 12 отведениях. Наличие отрицательных зубцов Т отмечали при его глубине > 1 мм, а зубца U - при его глубине > 0,5 мм.

Длительность интервала QT оценивали не менее, чем в трех последовательных циклах, в каждом из 12 отведений, исключая отведения с нечеткой дифференциацией зубца Т. За начало интервала QT считали самую раннюю точку комплекса QRS (место перехода изоэлектрической линии сегмента PQ (R) в зубец Q (R)), окончание - максимально позднюю точку зубца Т (место его перехода в изоэлектрическую линию ТР).

Для констатации признаков гипертрофии миокарда левого желудочка (ГЛЖ) использовали критерий М. Sokolow - Т. Lyon (1949): Svi+Rvs^)'* 35 ММ. Гипертрофию миокарда правого желудочка (ГПЖ) выявляли с помощью критерия D. Sodi- Pollaris( 1995): Rvi+Sv5 или RVi+SV6>10,5 мм.

Биохимическое обследование пациентов, проводимое на базе биохимической лаборатории НИИ терапии СО РАМН г. Новосибирска, включало в себя исследование липидного профиля сыворотки крови: определение содержания общего холестерина (ОХС), триглицеридов (ТГ), холестерина липопротеинов высокой плотности (ХС-ЛПВП), холестерина липопротеинов низкой плотности (ХС-ЛНП), определение содержания липофильных антиоксидантов, определение исходного уровня продуктов перекисного окисления липидов (ПОЛ) в ЛНП по содержанию малонового диальдегида (МДА) и оценку резистентности ЛНП сыворотки крови к окислению in vitro.

Содержание в сыворотке крови ОХС, ТГ и ХС-ЛПВП определяли ферментативными методами с использованием стандартных реактивов «Boehringer Mannheim» (Германия), Biosub CHOL, Biosub TG и ХС-ЛПВП (Herbos dijag-nostika) на химических автоанализаторах FP-901 Labsystem-Oy (Финляндия) и «Корона». Содержание ХС-ЛНП рассчитывали по формуле Friedewald W.T.

Содержание липофильных витаминов ( -токоферола, ретинола и каротина) в сыворотке крови определяли на базе Научного центра клинической и экспериментальной медицины СО РАМН (д.м.н. И.Д. Сафронов, д.м.н. Л.Б. Ким) методом высокоэффективной жидкостной хроматографии на отечественном микроколоночном хроматографе «Милихром» с ультрафиолетовой спектрометрической регистрацией (Микичур Н.И. и соавт., 1988).

Исходный уровень ПОЛ в ЛНП и резистентность ЛНП к окислению оценивали по содержанию МДА в сыворотке крови по способу, разработанному в НИИ терапии СО РАМН (Рагино Ю.И. и соавт., 1998). Оценивали степень окислительной модификации ЛНП in vitro по концентрации МДА в ЛНП и сыворотке крови флуорометрическим методом на спектро-флоуриметре Hitachi F-300 при длине волны 553 нм (длина волны возбуждающего света 515 нм) 4-кратно - исходный уровень, через 0,5 ч, 1 ч и 2 ч после начала инкубации ЛНП in vitro в присутствии ионов

Молекулярно-генетические исследования осуществляли на базе ИЦиГ СО РАН. Анализ полиморфизма генов ангиотензинпревращающего фермента (АПФ), аполипопротеина Е (АпоЕ) и метилентетрагидрофолатредуктазы (МТГФР) проводили с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР) с применением соответствующих праймеров. Определение частот аллелей генов проводили по данным о частотах генотипов, используя стандартную формулу (частота аллелей каждого типа = частота индивидуумов, гомозиготных по данному аллелю, + 1/2 частоты гетерозигот по этому аллелю).

Статистическую обработку полученных данных проводили с помощью пакета прикладных статистических программ SPSS for Windows 10.0. Применяли стандартные методы вариационной статистики: вычисление средних величин, стандартных ошибок, 95% доверительного интервала; достоверность

определяли с помощью критерия t Стьюдента для независимых выборок и кри-2

терия для пропорций.

ПОЛУЧЕННЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Частота клинических проявлений сердечно-сосудистых заболеваний у долгожителей и лиц старческого возраста г. Новосибирска

По результатам проведенного клинического обследования долгожителей и пациентов старческого возраста, АГ была выявлена у 52 человек, что составило 52% от общего числа обследованных. Максимальные цифры САД составили 210 мм рт.ст., максимальный подъем ДАД зарегистрирован до 130 мм рт.ст. Средние показатели АД у пациентов старших возрастных групп представлены в таблице 2.

В группе пациентов старческого возраста колебания САД составили от 100 до 200 мм рт.ст. (в среднем 147,5±25,2 мм рт.ст.). ДАД у представителей этой группы зафиксировано в пределах от 60 до 100 мм рт.ст. (средние значения -83,2±11,8 мм рт.ст.). В группе долгожителей зарегистрированы следующие показатели: СДЦ изменялось от 100 до 210 мм рт.ст. (в среднем - 142,0±25,7 мм рт.ст.), ДАД - от 60 до 130 мм рт.ст. (средние значения - 80,5+11,6 мм рт.ст.). Статистически достоверных различий между средними значениями АД у пациентов старших возрастных групп зафиксировано не было.

Таблица 2

Показатели артериального давления в группах обследованных (М±т)

Существует широко распространенное мнение, что максимальный уровень САД достигается к 65 - 70 годам, после чего отмечается его относительное снижение (Мазур Н.А., 1996). По нашим данным, среди пациентов старческого возраста по сравнению с долгожителями АГ наблюдалась в 60% и 47,69%, соответственно (различия статистически не достоверны - }£2=2,899; р>0,05). Частота выявления клинических признаков заболеваний сердечно-сосудистой системы в группах обследованных представлена в таблице 3.

Таблица 3

Частота клинических проявлений сердечно-сосудистых заболеваний среди долгожителей и лиц старческого возраста (%)

Группы Нозология

обследованных АГ ИБС ИМ

Старческий 60,00 68,57* 17,14

возраст (п=35) (п=21) (п=24) (п=6)

Долгожители 47,69 47,69 13,85

(п=65) (п=31) (п=31) (п=9)

Примечание: * - достоверность различий (р<0,005).

Согласно литературным данным, частота выявления изолированной систолической гипертонии среди пациентов пожилого возраста составляет от 10 до 23% (Bots M.L. et al., 1996; Кобалава Ж.Д., 2001). По результатам нашего ис-

следования, изолированная систолическая АГ (САГ) была выявлена у 41 человека, что составило 78,8% от общего числа пациентов с АГ. В группе лиц старческого возраста изолированная САГ наблюдалась у 15 человек, что составило 42,9% от общего числа обследованных в этой группе или 71,4 % от числа пациентов старческого возраста, страдающих АГ. В группе долгожителей частота выявления изолированной САГ составила 42,0% от общего числа пациентов (у 26 долгожителей) или 83,9 % от числа долгожителей с АГ. Различия в частоте выявления изолированной САГ между группами обследованных были статистически не достоверными (х2=0,020; р>0,05). Частота выявления различных видов АГ у пациентов старших возрастных групп представлена в таблице 4.

Изолированная диастолическая АГ (ДАГ) наблюдалась у одного пациента из группы долгожителей (1,5% от общего числа пациентов в данной группе). В группе лиц старческого возраста случаев выявления изолированной ДАГ не было.

Систоло-диастолическая АГ была выявлена у 4 долгожителей и 6 пациентов старческого возраста, что, соответственно, составило 6,2.% и 17,1% от общего числа пациентов в группах. Различия в частоте выявления систоло-диастол и ческой АГ в старших возрастных группах были статистически достоверными (х2=5,944; р<0,05).

Таблица 4

Частота выявления различных видов артериальной гипертензии у пациентов старших возрастных групп (%)

Группы Изолированная Изолированная Систоло-

обследованных САГ ДАГ диастолическая АГ

Старческий 42,9% - 17,1%*

возраст' (п=15) (п=6)

Долгожители 40,0% 1,5% 6,2%

(п=26) (п=1) (п=4)

Примечание: * - различия статистически достоверны (р<0,05).

Ишемическую болезнь сердца (ИБС) в виде стабильной стенокардии напряжения II и Ш функционального класса наблюдали у 55 человек, что составило 55% от общего числа обследованных. В группе лиц старческого возраста стенокардия диагностировалась достоверно чаще (х2=9,082; р<0,005), чем у долгожителей (68,57% и 47,69% соответственно).

Инфаркт миокарда (ИМ) в анамнезе был отмечен у 15 пациентов, что составило 15% от общего количества обследованных. Частота ИМ в анамнезе в старших возрастных группах различалась незначительно и составила 17,14% в группе лиц старческого возраста и 13,85% в группе долгожителей (величина критерия х2 составила 0,344; р>0,05).

Изучение ассоциации генетических параметров долгожителей и клинико-лабораторных данных является важным для оценки ассоциации генотипа с продолжительностью жизни. Нами была исследована распространенность возрастной патологии сердечно-сосудистой системы среди пациентов старческого возраста и долгожителей в связи с их принадлежностью к различным генотипам гена АПФ.

Данные о связи I/D полиморфизма гена АПФ и возрастной АГ неоднозначны. Ряд исследователей полагает, что I/D полиморфизм гена АПФ не имеет связи с АГ (Chiang F.T. et аЦ 1997; Долгих М.М., 1998; Воевода М.И., 2001). В то же время исследования других авторов показали, что I/D полиморфизм достоверно связан с наличием возрастной гипертонии (Rotimi С. et al., 1996; Nakano Y.etal., 1998).

Проведенные исследования показали, что в группе лиц старческого возраста АГ достоверно чаще наблюдается у носителей делеционного аллеля гена АПФ при сравнении с данными подгруппы гетерозигот по гену АПФ; х2 = 44,806 при сравнении с данными подгруппы гомозиготных носителей 1-аллеля; р<0,001).

Так, у носителей DD-генотипа повышенный уровень АД зарегистрирован в 87,5% случаев, что в 2 раза выше, чем у носителей И-генотипа (42,9% обследованных). Частота клинических проявлений заболеваний сердечно-сосудистой системы у лиц старшей возрастной группы в зависимости от генотипа по Alu-инсерционному полиморфизму гена АПФ представлена в таблице 5.

Таблица 5

Частота клинических проявлений сердечно-сосудистых заболеваний для разных

Заболевания Группы обследованных

Старческий возраст Долгожители

II-генотип (п=7) ID-генотип (п=20) DD-генотип (п=8) II-генотип (п=22) ID-генотип (п=32) DD-генотип (п=П)

АГ 42,9 (п=3) 55,0 (п=11) 87,5*** (п=7) 45,5 (п=10) 53,1 (п=17) 36,4* (п=4)

ИБС 42,9 (п=3) 70,0 (п-14) 87,5*** (п=7) 45,5 (п=10) 34,4 (п=11) 90,9*** (п=10)

ИМ 28,6** (п=2) 15,0 (п=3) 12,5 (п=1) 18,2 (п=4) 9,4 (п=3) 18,2 (п=2)

Примечание: достоверность различий - * - р<0,05; ** - р<0,01; *** - р<0,001.

Средний уровень САД у пациентов старческого возраста, являющихся гомозиготными носителями делеционного аллеля гена АПФ, составил 165,2±21,3 мм рт.ст. У представителей гетерозиготного ГО-генотипа в этой группе средние значения САД составили 155,5±24,1 мм рт.ст.. Минимальные средние значения САД зафиксированы у лиц старческого возраста - гомозиготных носителей I-аллеля гена АПФ (145,7±26,0 мм рт.ст.). Из-за относительно небольшого объема обследованных групп эти различия не достигали уровня статистической значимости.

Статистически достоверных различий в средней величине САД и ДАД у представителей различных генотипов гена АПФ в группе долгожителей выявлено не было.

Полученные данные согласуются с результатами исследования С.А. Бойцова (2002), который предположил, что носительство делеционного аллеля гена

АПФ ассоциирует с наличием АГ, однако большинство представителей гомозиготного DD-генотипа, вероятно, не доживает до пожилого возраста, что и приводит к меньшей частоте их выявляемости среди гипертоников «со стажем» (Бойцов СЛ., 2002).

ИБС в обеих возрастных группах достоверно чаще (р<0,001) выявлялась у носителей D-аллеля гена АПФ. Так, в группе долгожителей из 11 человек -представителей DD-генотипа ИБС страдало 10 человек, что составило 90,9%. У представителей II-генотипа в группе долгожителей клинические проявления ИБС отмечались в 2 раза реже - в 45,5% случаев (величина критерия х2 составила 46,924; р<0,001), еще ниже этот показатель у представителей ID-генотипа - 34,4% обследованных (х2=69,312; р<0,001).

В группе лиц старческого возраста различия в частоте проявлений ИБС между представителями различных генотипов гена АПФ также значительны выражены. У носителей И-генотипа ИБС выявлялась в 42,86% случаев, DD-генотипа - в 87,5% случаев (х2=44,806; р<0,001). У представителей гетерозиготного генотипа по гену АПФ в группе лиц старческого возраста частота клинических проявлений ИБС составила 70,0%, что было достоверно выше величины этого же показателя у гомозигот - носителей П-генотипа в данной группе обследованных (х2==14,831; р<0,001). Различия в частоте выявления ИБС у пациентов старческого возраста, являющихся гетерозиготами по гену АПФ, и представителей DD-генотипа также были статистически достоверны (х2=9,150; р<0,005).

ИМ в анамнезе зафиксирован в наибольшем количестве случаев в группе лиц старческого возраста среди представителей П-генотипа - у 28,57% обследованных. Этот показатель среди лиц старческого возраста - носителей других генотипов был достоверно ниже - ИМ в анамнезе выявлен у 12,5% представителей DD-генотипа (х2=7,715; р<0,01) и у 15,0% носителей гетерозиготного генотипа в группе лиц старческого возраста (х2—5,711; р<0,05).

Среди долгожителей частота выявления ИМ у представителей II- и DD-генотипов оказалась одинаковой и составила 18,2%. У представителей гетерозиготного генотипа ID в данной группе ИМ в анамнезе был выявлен в 9,4% случаев. Различия в частоте выявления ИМ между подгруппами в группе долгожителей статистически недостоверны (величина критерия х2 составила 3,468; р>0,05).

Снижение количества носителей делеционного аллеля гена АПФ среди долгожителей, перенесших ИМ, можно объяснить различиями в уровне смертности от ОИМ среди представителей различных генотипов. В настоящее время DD-генотип называется некоторыми авторами одним из факторов риска смерти в остром периоде ИМ (Cambien F. et a!., 1994; Гукова СП. и соавт., 1997; Tiret L. et al., 1998), что обусловлено повышенной активностью ренин-ангиотензиновой системы у таких пациентов.

Таким образом, проведенное обследование пациентов показало более высокую частоту проявлений возрастной патологии сердечно-сосудистой системы среди лиц старческого возраста по сравнению с долгожителями. При этом среди гомозигот - носителей делеционного аллеля гена АПФ в группе лиц старческого возраста повышенные цифры АД регистрировались достоверно чаще, чем у представителей других генотипов в этой группе. Частота клинических проявлений ИБС в обеих старших возрастных группах среди носителей гомозиготного DD-генотипа гена АПФ была в 2 раза выше в сравнении с другими генотипами.

В то же время в группе долгожителей количество пациентов с АГ было достоверно ниже среди гомозиготных носителей делеционного аллеля гена АПФ.

Сравнительная оценка состояния сердечно-сосудистой системы у долгожителей и лиц старческого возраста г. Новосибирска по данным ЭКГ

Происходящие по мере старения организма изменения в структуре и метаболизме тканей неизбежно отражаются в той или иной степени на функции ряда органов и систем, а, следовательно, и на количественных показателях, выявляемых при лабораторно-инструментальных обследованиях (Дворецкий Л.И., 1997).

Нарушения сердечного ритма были выявлены нами по данным ЭКГ у 17 пациентов старческого возраста (48,6% от общего числа обследованных в этой группе) и у 28 долгожителей (43,1% от их числа; различия статистически не достоверны).

В группе лиц старческого возраста выявлено достоверно большее число пациентов с синусовой брадикардией по сравнению с данными группы долгожителей - 25,2% и 6,2%, соответственно (х2=13,781; р<0,001). Число пациентов с синусовой тахикардией и норсосистолической формой мерцательной аритмии достоверно не отличалось в обследуемых группах пациентов. Тахисистоличе-ская форма мерцания/грепетания предсердий достоверно чаще выявлялась в группе долгожителей - у 18,6% от общего числа обследованных в этой группе по сравнению с частотой выявления данной патологии у лиц старческого возраста).

Анализ показателей ЭКГ свидетельствует, что для пациентов старческого возраста характерны достоверное уменьшение ЧСС и увеличение продолжительности зубцов и интервалов по сравнению с показателями средневозрастной группы.

У пациентов группы долгожителей выявлены следующие особенности: достоверное (р<0,05) уменьшение длительности интервала RR до 0,76+0,06" и, соответственно, достоверное (р<0,01) возрастание ЧСС - до 78,24+1,57 в 1 мин по сравнению с другими анализируемыми группами. По сравнению с лицами среднего и старческого возраста отмечалось недостоверное уменьшение продолжительности QRSn (до 0,07+0,02") и достоверное (р<0,01) уменьшение продолжительности При этом у 40% пациентов в группе долгожителей по ЭКГ наблюдались признаки нарушения внутрижелудочковой проводимости (при отсутствии патологического увеличения длительности QRS и QT). В группе лиц старческого возраста нарушения внутрижглудочковой проводимости были выявлены по ЭКГ у 17,4% пациентов (различия между данными для старших возрастных групп были статистически достоверны - = 3,954; р<0,05).

С возрастом также отмечалось значительное увеличение числа лиц, у которых выявлялась гипертрофия левого желудочка. Так, ЭКГ-критерии гипертрофии левого желудочка (М. Sokolow - Т. Lyon) были выявлены нами всего у 2,7% пациентов среднего возраста. Среди лиц старческого возраста ГЛЖ выявлялась достоверно чаще - в 11,4% случаев (х2=4,916; р<0,05). В возрасте старше 90 лет ГЛЖ встречалась уже более чем у половины обследованных (в 52.3%), что достоверно превышало показатели, зафиксированные в группе лиц старческого возраста (% =38,953; р<0,001) и группе сравнения (х"=60,213; р<0,001). Полученные результаты согласуются с данными эпидемиологических исследований (Bots M.L. et al., 1996).

Положение -электрической оси сердца (ЭОС) по данным ЭКГ пациентов различных возрастных групп также имело свои особенности. Так, средняя величина ¿а составила у мужчин группы сравнения 38,7±2,6°, у пациентов старческого возраста и долгожителей средние значения 2а соответствовали горизонтальному положению ЭОС - 14,5±3,3° и 12,2±3,5°, соответственно.

Данные молекулярно-генетического обследования долгожителей и лиц старческого возраста г. Новосибирска Результаты проведенного молекулярно-генетического исследования в популяции долгожителей г. Новосибирска свидетельствуют о существенном изменении частот генотипов и аллелей А1и-инсерционного полиморфизма гена АПФ по сравнению с другими возрастными группами. Отмечено достоверное возрастание «частоты встречаемости» аллеля I и его гомозиготного генотипа и снижение «частоты встречаемости» аллеля В и соответствующих генотипов. Распределение аллельных вариантов гена АПФ в группе долгожителей выглядело следующим образом: 1-аллель - у 41,5%, В-аллель - у 58,5% обследованных. В то же время данные для группы сравнения и группы лиц старческого возраста были практически идентичными (в группе сравнения число носителей 1-аллеля составило 46,8%, в группе лиц старческого возраста - 49,0%).

Количество представителей П-генотипа среди долгожителей в 1,6 раза превышало этот показатель в группе сравнения (33,9% и 21,1% соответственно). Уменьшение «частоты встречаемости» другого гомозиготного генотипа (ВВ) с возрастом происходило в той же пропорции - в 1,6 раза (27,3% в группе сравнения,, 16,9% среди долгожителей). Распределение частот генотипов гена АПФ в группе лиц старческого возраста существенно не отличалось от данных, полученных для группы сравнения (рис. 1).

Исследование полиморфизма гена АпоЕ в группе долгожителей и у лиц старческого возраста показало, что он был представлен лишь 3 генотипами из 6 возможных вариантов: гетерозиготные генотипы е2/еЗ и еЗ/е4 и гомозиготный еЗ/еЗ генотип, тогда как в группе сравнения были выявлены гомозиготные е2/е2 и е4/е4 генотипы и гетерозиготный е2/е4 генотип (1,1%, 2,1% и 1,1% соответственно), т.е. представители тех генотипических вариантов, которые не встречались в обследованных старших возрастных группах.

В старших возрастных группах было отмечено существенное изменение распределения частот генотипов и аллелей гена АпоЕ по сравнению с более молодыми индивидами. Происходило снижение «частоты встречаемости» аллеля е4 и гетерозиготного генотипа еЗ/е4 и возрастание аллеля в2 и гетерозиготного генотипа е2/еЗ. С возрастом количество носителей г е н о т и^йЗу в е -

Рис. 1. Распределение генотипов гена АПФ в различных возрастных популяциях г. Новосибирска (* - р<0,05)

личилось в 2 раза и составило 20,0% в группе лиц старческого возраста и 18,4% у долгожителей (в группе сравнения этот показатель составил 9,5%). Различия в «частоте встречаемости» е2/еЗ генотипа среди лиц старческого возраста и группы сравнения были статистически достоверны (х1 ~ 3,922; р<0,05). Число представителей генотипа бЗ/е4 среди лиц среднего возраста (16,8%) было больше этого показателя для группы лиц старческого возраста в 2 раза (8,6%) и в 1,6 раза для группы долгожителей (10,8%). Количество гомозиготных носителей ЕЗ-аллеля гена АпоЕ во всех обследованных группах оказалось практически одинаковым (69,4% в группе сравнения, 71,4% в группе лиц старческого возраста и 70,8% среди долгожителей). Различия в «частоте встречаемости» £3/е4 и генотипов гена АпоЕ в различных возрастных группах были статистически не достоверными.

Изменения в распределении аллельных вариантов гена АпоЕ в различных возрастных группах новосибирской популяции коснулись -аллелей (рис. 2).

Количество носителей е2-аллеля среди лиц среднего возраста составило 6,32% от общего числа обследованных, а в старших возрастных группах увеличилось -в 1,6 раза в группе лиц старческого возраста (10%) и в 1,5 раза в группе долгожителей (9,23%). Различия в количестве носителей £2-аллеля гена АпоЕ в изучаемых нами группах не были статистически достоверными. Частота встречаемости -аллеля этого гена уменьшилась с 11,06% в группе сравнения до 4,29% в группе лиц старческого возраста (в 2,6 раза меньше; различия статистически достоверны - = 4,348; р<0,05) и 5,38% среди долгожителей (в 2 раза меньше показателей группы сравнения; различия статистически не достоверны).

Анализ распределения аллель-ных вариантов гена МТГФР в различных возрастных популяциях г. Новосибирска показал, что с возрастом соотношение частот аллелей и генотипов не претерпело существенных изменений. Наибольшим оказалось количество носителей мутантного 677Т-аллеля этого гена в группе лиц старческого возраста -31,43%, наименьшим - в группе сравнения (28,42%). Количество долгожителей - носителей 677Т-аллеля занимает промежуточное положение - 29,23% из числа обследованных. Различия в распределении частот аллелей гена МТГФР в группах обследованных нами пациентов были статистически не достоверными.

Предполагая, что частоты аллелей и генотипов, наблюдаемые в репродуктивном возрасте, реально передаются между поколениями, их изменения в старшей возрастной группе, по-видимому, в основном обусловлены различиями в уровне смертности между различными генотипическими классами (Воевода М.И., 2002), поскольку известно, что наиболее частой причиной смерти в стар-

Е2-аллепь Е4-аллель

Рис. 2. Распределение и -аллелей гена АпоЕ в различных возрастных популяциях г. Новосибирска (* -различия статистически достоверны -р<0,05 - по отношению к группе сравнения)

ших возрастных группах являются сердечно-сосудистые заболевания. Исходя из этого, уменьшение количества носителей D-аллеля гена АПФ и е4-аллеля гена АпоЕ в популяции долгожителей представляется логичным, так как большинством отечественных и зарубежных авторов поддерживается гипотеза об ассоциации этих генов с наличием возрастной патологии сердечно-сосудистой системы (Гукова СП. и соавт., 1997; Кобалава Ж.Д. и соавт., 1998; Киселев В.И. и соавт., 1998; Воевода М.И., 2001; Бойцов СА., 2002; Малышина Н.А и соавт., 2002; Andersson В., Sylven С, 1996; Krege J.H. et al., 1997; Aalto-Setala К. et al., 1998; Joseph A. et al., 1998; Mayer В., Schunkert H., 2000; Mayer N.J. et al., 2002).

Особенности липидного профиля крови у долгожителей и лиц старческого возраста г. Новосибирска

Исследование липидного профиля крови лиц старческого возраста и долгожителей г. Новосибирска показало, что по основным показателям липидного обмена (содержание ОХС, ХС-ЛНП, ТГ для группы долгожителей) он существенно не отличался от соответствующих величин, выявленных в группе сравнения (таблица 10). Однако содержание в крови антиатерогенного ХС-ЛПВП у представителей групп долгожителей и старческого возраста в среднем составило 33,61+6,77 мг/дл и 34,39+9,11 мг/дл, соответственно, что достоверно ниже (р<0,05) этого показателя у здоровых людей группы сравнения и позволяет отнести пациентов старших возрастных групп к группе риска возникновения ИБС. Согласно литературным данным, существует обратная связь между содержанием ЛПВП и частотой развития ИБС (снижение уровня ЛПВП на каждые 5 мг/дл ниже 35 мг/дл повышает риск развития ИБС на 25%). Определение концентрации ЛПВП сыворотки крови в высокой степени способствует выявлению риска развития ИБС (Меньшиков В.В., 1997). Полученные нами данные подтверждают широко распространенное мнение о существовании тенденции к снижению уровня ОХС у пациентов в возрасте старше 75 лет (Отева ЭА, 1988; Atzmon G. et al., 2002).

Данные об особенностях липидного профиля пациентов старших возрастных групп, являющихся представителями различных генотипов гена АПФ, более показательны. Нами выявлено, что у гомозиготных носителей инсерционного аллеля гена АПФ отмечается более низкий средний уровень ОХС, ТГ и ХС-ЛНП по сравнению с представителями других генотипов. При этом различия в уровне ОХС и ХС-ЛНП у представителей И-генотипа в группе лиц старческого возраста были статистически достоверными по сравнению с другими подгруппами (р<0,05).

Распределение пациентов в соответствии с генотипами гена АПФ показало, что пониженные показатели уровня ХС-ЛПВП в старших возрастных группах могут быть обусловлены низким количеством а-холестерина у носителей деле-ционного аллеля гена АПФ, что оказало влияние на характер распределения этого показателя в группах в целом. Так, сниженный уровень ХС-ЛПВП был выявлен среди обследованных нами пациентов у представителей И-генотипа группы долгожителей (33,2±5,6 мг/дл), в обеих старших возрастных группах у представителей гетерозиготного генотипа (33,0±6,7 мг/дл и 34,8+8,1 мг/дл, соответственно), а наиболее выраженное снижение этого показателя зарегистрировано у гомозиготных носителей D-аллеля в группе долгожителей (31,2+4,9 мг/дл). Полученные данные коррелируют с результатами клинического обсле-

дования пациентов - в обеих старших возрастных группах частота клинических проявлений ИБС достоверно выше среди представителей гомозиготного ВВ-генотипа. В подгруппе долгожителей - гомозиготных носителей делеционного аллеля гена АПФ частота выявления ИБС составила 90,9%.

Таблица 6

Липидный состав сыворотки крови в различных возрастных группах (М±т)

Группы обследованных ОХС, мг/дп ТГ, мг/дл ХС-ЛПВП, мг/дл ХС-ЛНП, мг/дл

Старческий возраст (п=35) 176,77±23,1 6 92,36±7,80* 34,39±9,11* 122,99±14,68

Долгожители (п=65) 165,58+18,9 2 99,99+13,52 33,61+6,77* 111,97115,32

Группа сравнения 182,15±30,2 7 116,53±11,14 53,44±8,02 105,40+17,46

Примечание: * - р<0,05 по сравнению с группой сравнения.

Таким образом, исследование липидного профиля крови пациентов старших возрастных групп показало, что по ряду липидных параметров (содержание ОХС, ХС-ЛНП, ТГ для группы долгожителей) состав сыворотки крови существенно не отличался от соответствующих показателей для здоровых лиц средневозрастной группы. Анализ параметров липидного профиля крови у лиц старших возрастных групп в зависимости от Alu-инсерционного полиморфизма гена АПФ показал, что исследованные нами показатели (ОХС, ХС-ЛПВП, ХС-ЛНП и ТГ) у гомозигот - носителей I-аллеля ниже, чем у представителей других генотипов. В группе лиц старческого возраста эти различия более выражены, что в большей степени касается концентрации ОХС и ХС-ЛНП в сыворотке крови. По этим липидным параметрам различия между носителями I- и D-аллелей гена АПФ в группе лиц старческого возраста статистически значимы (р<0,05).

Содержание жирорастворимых антиоксидантов и резистентность ЛНП к окислению in vitro у долгожителей и пациентов старческого возраста С целью оценки состояния антиоксидантной защиты организма у лиц старческого возраста и долгожителей и выяснения возможной ассоциации его с продолжительностью жизни пациентов нами было проведено исследование содержания липофильных антиоксидантов в сыворотке крови, а также изучена спонтанная и индуцированная активность процессов ПОЛ.

Антиоксидантная активность сыворотки крови долгожителей была достоверно ниже по всем исследуемым параметрам (содержание липофильных анти-оксидантов - ретинола, а-токоферола и Р-каротина), чем в других группах обследованных, а процессы ПОЛ характеризовались большей активностью, что подтверждалось достоверно более высоким исходным содержанием МДА в ЛНП сыворотки крови. В то же время содержание липофильных антиоксидан-

тов в сыворотке крови лиц старческого возраста было достоверно меньше показателей группы сравнения лишь по количеству р-каротина.

Исследование содержания сывороточных липофильных антиоксидантов у пациентов старших возрастных групп с учетом данных молекулярно-генетического исследования показало, что наименьшие значения всех исследуемых параметров антиоксидантной защиты (а-токоферол, Р-каротин, ретинол) выявлены у долгожителей, являющихся гомозиготными носителями деле-ционного аллеля гена АПФ. Напротив, в группе лиц старческого возраста более низкое содержание липофильных антиоксидантов в сыворотке крови выявлено у представителей другого гомозиготного генотипа - И. Различия в содержании антиоксидантов в группе лиц старческого возраста в зависимости от генотипа по гену АПФ выражены в меньшей степени, чем среди долгожителей.

Несмотря на то, что исходно отмечается большая интенсивность процессов ПОЛ в сыворотке крови лиц старшей возрастной группы, исследование резистентности ЛНП к окислению показало, что при проведении инкубации ЛНП в присутствии ионов Си2+ содержание МДА в ЛНП у долгожителей и лиц старческого возраста возрастает более медленно по сравнению с результатами группы сравнения (рис. 3).

Так, в группе сравнения прирост содержания МДА через 0,5 часа после начала исследования составил 85,71%, а в группах лиц старческого возраста и долгожителей - 5,55% и 4,46% соответственно. Через 1 час после начала инкубации ЛНП в присутствии ионов Си2+ содержание МДА в сыворотке пациентов группы сравнения было уже в 3 раза больше исходного, а в старших возрастных группах прирост этого показателя составил 17,85% для группы лиц старческого возраста и 15,75% для долгожителей. Уровень МДА через 2 часа после начала индукции процессов ПОЛ in vitro увеличился в сыворотке крови пациентов старческого возраста на 31,45% от исходного, у долгожителей - на 34,91%, а у здоровых пациентов группы сравнения - на 528,57% от начальных показателей.

Полученные нами данные о частоте проявлений возрастной патологии сердечно-сосудистой системы у долгожителей, а также выявленные особенности количественного содержания липофильных антиоксидантов сыворотки крови у лиц старших возрастных групп с использованием данных молекулярно-генетического исследования позволили предположить наличие связи между функциональным состоянием системы антиоксидантной защиты организма и полиморфизмом гена АПФ.

Содержание МДА

15 т

i12,5 с;

I 10

I7,5

J ч

К 5 о

1ад

А

t * -о—старческий j возраст | —о—долгожители группа сравнения

i—

/

>

0 0,5 1,0 2,0 аремя, ч

Рис. 3. Спонтанная и индуцированная активность процессов ПОЛ в сыворотке крови обследованных (* - р<0,05 по отношению к группе сравнения)

Исследование окислительной резистентности ЛНП сыворотки крови лиц старческого возраста и долгожителей г. Новосибирска с учетом их принадлежности к определенным генотипам гена АПФ показало, что наиболее высокое исходное количество продуктов ПОЛ содержится в сыворотке крови пациентов, являющихся гомозиготными носителями инсерционного аллеля гена АПФ. Вышеописанная тенденция в содержании продуктов ПОЛ сохранилась и через 0,5 часа после начала инкубации ЛНП в присутствии ионов Си2+. Наибольшее содержание МДА в обеих старших возрастных группах отмечалось у представителей П-генотипа. Максимальный прирост содержания продуктов ПОЛ отмечался у представителей П-генотипа в группе лиц старческого возраста - на 5,66% от исходного уровня МДА, минимальный (на 3,83% от исходного) - у гетерозиготных носителей делеционного аллеля гена АПФ в группе долгожителей, что в графическом виде представлено на рисунке 4.

Старческий возраст Долгожители

Рис. 4. Спонтанная и индуцированная активность процессов ПОЛ в сыворотке крови обследованных с учетом их генотипа по гену АПФ (* - р<0,05 по сравнению с другими генотипами)

Важно подчеркнуть, что на следующей временной отметке - через 1 час после начала инкубации ЛНП в присутствии ионов Си2+ - наибольшее содержание МДА отмечалось также у представителей П-генотипа в группе лиц старческого возраста. Достоверных различий количественного содержания МДА в зависимости от полиморфизма гена АПФ через 1 час после начала инкубации ЛНП в присутствии ионов Си2+ в группе долгожителей выявлено не было. Однако у представителей DD-генотипа отмечался максимальный прирост данного показателя - на 18,65% от исходного количества МДА. Минимальный прирост количественного содержания продуктов ПОЛ на этой временной отметке (на 14,22% от исходного уровня) был отмечен у долгожителей, являющихся гомозиготными носителями инсерционного аллеля гена АПФ.

Оценка уровня МДА, проведенная через 2 часа после начала инкубации ЛНП в присутствии ионов Си" , показала, что максимальный прирост этого показателя также отмечается у носителей делеционного аллеля гена АПФ в группе долгожителей - 41,89% от исходной величины этого показателя. Максимальное количество МДА через 2 часа после начала индукции ПОЛ по-прежнему определялось у представителей П-генотипа в группе лиц старческого возраста, однако в этой подгруппе отмечался минимальный прирост исследуемого продукта (28,80%).

Таким образом, исследование окислительной резистентности ЛНП сыворотки крови показало, что, несмотря на то, что исходное содержание продуктов ПОЛ (МДА) в группах сравнения было наибольшим у гомозиготных носителей инсерционного аллеля гена АПФ, у этих пациентов отмечается более медленный прирост исследуемого показателя на фоне индукции ПОЛ. Напротив, более интенсивная продукция МДА при инкубации ЛНП в присутствии ионов Си2+ отмечается в обеих старших возрастных группах у носителей делеционного ал-леля гена АПФ, в особенности у пациентов, являющихся гомозиготными представителями DD-генотипа.

Полученные данные свидетельствуют о том, что существуют особенности антиоксидантной защиты организма, ассоциированные с полиморфизмом гена АПФ у пациентов старших возрастных групп, что согласуется с данными их клинического обследования. Наибольшая частота ИБС была выявлена нами именно среди пациентов, являющихся гомозиготными носителями D-аллеля гена АПФ. У долгожителей - представителей DD-генотипа также отмечается более низкая активность систем антиоксидантной защиты организма, что проявляется более низким содержанием липофильных антиоксидантов сыворотки крови и более активной индуцированной наработкой продуктов ПОЛ. Вышеперечисленные факты подтверждают наличие положительной корреляционной связи между полиморфизмом гена АПФ и активностью антиоксидантной защиты организма.

В целом, можно констатировать, что в обследованной популяции полиморфизм гена АПФ может быть ассоциированным с долголетием. Носители деле-ционного аллеля гена АПФ, встречаемые среди долгожителей реже, могут являться объектом более ранних и более активных воздействий, направленных на увеличение продолжительности активной жизни.

Выводы

1. Частота клинических проявлений ИБС среди обследованных лиц старческого возраста г. Новосибирска достоверно выше (в 1,4 раза) в сравнении с долгожителями той же популяции. «Частота встречаемости» нарушений внутриже-лудочковой проводимости у обследованных долгожителей составила 40%, признаков гипертрофии левого желудочка - 52,3%,

2. В возрасте старше 90 лет «частота встречаемости» гомозиготного инсер-ционного генотипа гена АПФ среди обследованных жителей г. Новосибирска в 1,6 раза выше, чем среди лиц среднего возраста. В распределении генотипов и аллелей гена АПФ у лиц старческого возраста не отмечено достоверных разли-

чий в сравнении их с аналогичными показателями лиц среднего возраста. Существенных изменений распределения аллелей гена метилентетрагидрофолат-редуктазы с возрастом среди жителей г. Новосибирска не выявлено.

3. Распределение частот генотипов и аллелей гена АпоЕ у долгожителей не имело статистически достоверных различий по сравнению с показателями популяции среднего возраста, тогда как у лиц старческого возраста «частота встречаемости» £4-аллеля гена АпоЕ была достоверно ниже аналогичного показателя средневозрастной группы (в 2,6 раза).

4. У лиц старческого возраста и долгожителей липидный профиль крови существенно не отличался от параметров, выявляемых у условно здоровых лиц среднего возраста, за исключением сниженного содержания ХС-ЛПВП, при более высокой резистентности ЛНП к окислению in vitro.

5. У пациентов старших возрастных групп DD-генотип гена АПФ ассоциирует с неблагоприятными изменениями биохимических параметров крови (низким содержанием ХС-ЛПВП и липофильных антиоксидантов, низкой резистентностью ЛНП к окислению in vitro) и высокой частотой наличия возрастной патологии сердечно-сосудистой системы.

Практические рекомендации

1. В клинической практике проведение молекулярно-генетического обследования пациентов среднего возраста (в частности, определение генотипической принадлежности по генам АПФ, АпоЕ, МТГФР) целесообразно для раннего выявления наследственной предрасположенности к развитию возрастной патологии сердечно-сосудистой системы.

2. С целью определения показаний к проведению антиоксидантной терапии у пациентов старших возрастных групп в перечень параклинического обследования может быть рекомендовано включение исследования резистентности ЛНП к окислению in vitro. Исследование данного показателя в динамике может быть критерием эффективности антиоксидантной терапии.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Влияние полиморфизма гена ангиотензин-превращающего фермента на заболеваемость ИБС и артериальной гипертензией у долгожителей города Новосибирска // Актуальные вопросы современной медицины: тез. докл. 10-й научно-практической конференции - Новосибирск, 2000.- С..314 (Наумова В.А., Шабалин А.В., Долгих М.М., Воевода М.И., Ромашенко А.Г., Пятницкий Б.П.).

2. Полиморфизм гена ангиотензин-превращающего фермента у долгожителей города Новосибирска // "Здоровье пожилых людей: проблемы, пути решения": материалы 1-ой Хабаровской краевой геронтологической конф. - Хабаровск, 2000. - С. 204-205 (Шабалин А.В., Воевода М.И., Наумова В А, Долгих ММ, Пятницкий Б.М.).

3. Полиморфизм гена ангиотензин-превращающего фермента, окислительная способность липопротеинов низкой плотности и концентрация жирорастворимых антиоксидантов у пожилых и долгожителей г. Новосибирска // "Пожилой больной. Качество жизни": Тез. докл. Международной конф. М, 2000.-

С. 68 (Шабалин А.В., Пентегова ВА, Воевода М.И., Долгих М.М., Рагино Ю.И., Сафронов И.Д.).

4. Полиморфизм гена ангиотензин-превращающего фермента у престарелых и долгожителей г. Новосибирска и его влияние на сердечно-сосудистую патологию и окислительную способность липопротеинов низкой плотности (ЛНП) и концентрацию жирорастворимых антиоксидантов // 1-й съезд геронтологов и гериатров Сибири и Дальнего Востока: тез. докл. - Новосибирск, 2000.- С. 270-272 (А.В. Шабалин, ВА Пентегова, МИ. Воевода, ММ. Долгих, Ю.И. Рагино, И.Д. Сафронов).

5. Study of changes in oxidative/antioxidative status of low density lipoproteins in middle aged, elderly and long-living men in Novosibirsk // Atherosclerosis. - 2001. -Vol. 2/2. -P. 58 (Yu. Ragino, V. Pentegova, E. Berezovskaja, A. Shabalin).

6. Полиморфизм некоторых генов у пожилых и долгожителей города Новосибирска // Пожилой больной. Качество жизни: тез. докл. международной конф. М, 2001.- // Клиническая геронтология. - Т.7, №8- С.82 (Шабалин А.В., Воевода М.И., Пентегова ВА, Максимов В.Н., Юдин Н.С., Устинов С.Н., Михайлова СВ., Высоцкий В.В.).

7. Полиморфизм ряда генов у пожилых и долгожителей города Новосибирска // 6 Сибирская научно-практическая конференция "Актуальные вопросы консервативной и инвазивной кардиологии", г. Красноярск, ноябрь 2001 г, тез. докл. - С.184-185 (Шабачин А.В., Воевода М.И., Максимов В.Н., Пентегова ВА, Юдин Н.С., Устинов С.Н., Михайлова СВ., Ромащенко А.Г., Куликов И..В., Гончарова Т.М., Кузнецова Т.Н.).

8. Клинико-генетические аспекты долгожительства. Медико-социальные исследования, возрастная патология и продолжительность жизни, ассоциированные с генотипом ангиотензинпревращающего фермента // Клин, геронтология. - 2001. - Т.7. - №10. - С. 33-37 (Шабалин А.В., Пентегова ВА, Воевода М.И., Долгих М.М.).

9. Oxidative resistance and liposoluble antioxidants oflow density lipoproteins in old people and long-living people in Novosibirsk // VI European congress of Clinical Gerontology. -Moscow. - 2002. - P. S15 ( Shabalin A, Ragino Yu., Pentegova V., Kashtanova E., Nikitin Yu.).

10.Полиморфизм некоторых генов у долгожителей города Новосибирска // Проблемы кардиологии пожилого и старческого возраста: тез. докл. Сибирской научно-практической конференции. - Барнаул, 2002 г.- С.138-139 (Шабалин А.В., Воевода М.И., Максимов В.Н., Пентегова В.А., Юдин Н.С., Устинов С.Н., Михайлова СВ., Ромащенко А. Г., Куликов И.В., Кузнецова Т.Н., Гончарова Т.М., Шахтшнейдер Е, Долгих М.М., Курова Ю.А.).

11.Окислительная резистентность липопротеинов низкой плотности, концентрация жирорастворимых антиоксидантов у людей старческого возраста и долгожителей г. Новосибирска // Проблемы кардиологии пожилого и старческого возраста: тез. докл. Сибирской научно-практической конференции. - Барнаул, 2002 г.- С.140-141 (Шабалин А.В., Рагино Ю.И., Воевода М..И., Максимов В.Н., Каштанова Е.В., Пентегова В.А., Курова Ю.А.).

12.Липиды крови, окислительная резистентность липопротеинов низкой плотности, концентрация жирорастворимых антиоксидантов у людей старческого возраста и долгожителей г. Новосибирска // Успехи геронтологии. - 2002.

- №10. - С.64-68 (Шабалин А.В., Никитин Ю.П., Рагино Ю.И., Каштанова Е.В., Пентегова В. А.).

П.Полиморфизм гена АПФ и гена АпоЕ у долгожителей города Новосибирска // Успехи геронтологии. -2003. - Т. 12. - 77-81 (Шабалин А.В., Максимов

B.Н., Долгих М.М., Куликов И.В., Пентегова ВА, Шахтшнейдер Е.В., Устинов

C.Н., Иванова М.В., Кобзев В.Ф., Ромашенко А. Г., Воевода М.И., Никитин Ю.П.). Н.Особенности полиморфизма гена АПФ и гена АПО-Е у долгожителей г.

Новосибирска // II съезд геронтологов и гериатров России - тез. докл. «Клиническая геронтология». М., - 2003. - С. 23 (Шабалин А.В., Максимов В.Н., Долгих М..М, Куликов И.В., Пентегова ВА, Шахтшнейдер Е.В., Устинов С.Н., Иванова М.В., Кобзев В.Ф., Ромащенко А.Г., Воевода М.И., Никитин Ю.П.).

15.Полиморфизм генов АПФ, АПО-Е и метилентетрагидрофолатредуктазы у долгожителей Новосибирска // Наследственные болезни и патология человека.

- тез. докл. Сибирской науч.-практ. конф. - Новосибирск.. 2003. - - С. 118-123 (Шабалин А.В., Воевода М.И., Ромащенко А.Г., Максимов В.Н., Пентегова ВА, Куликов И.В., Шахтшнейдер Е.В., Долгих М..М.).

Список сокращений: АГ - артериальная гипертензия АД - артериальное давление АпоЕ - аполипопротеин Е АПФ - ангиотензин-превращающий фермент ГЛЖ - гипертрофия левого желудочка ГПЖ - гипертрофия правого желудочка ДАГ - диастолическая АГ ДАД - диастолическое АД ИБС - ишемическая болезнь сердца ИМ - инфаркт миокарда ИМТ - индекс массы тела ЛПВП -липопротеины высокой плотности ЛНП - липопротеины низкой плотности ЛОНП - липопротеины очень низкой плотности МДА - малоновый диальдегид МТГФР - метилентетрагидрофолатредуктаза ОХС - общий холестерин ПОЛ - перекисное окисление липидов САГ - систолическая АГ САД - систолическое АД СД - сахарный диабет ТБК -тиобарбитуровая кислота ХС - холестерин ЭКГ - электрокардиография

Соискатель

Пентегова В.А.

Подписано в печать 21.10 04 г. Формат 60 х 84 /16 Усл. печ. л. 1.0. Тираж 100 экз. Заказ № П0-п

Отпечатано в типографии издательства «Сибмедиздат»

630091, г. Новосибирск, ул. Красный проспект, 52. Тел.: (383-2) 29-10-83'. E-mail: sibmedisdat@rambler ru

3 2 3