Автореферат и диссертация по медицине (14.00.46) на тему:Клинико-диагностическое значение термостабильных тканевых белков

На правах рукописи

ПЕТРОВА ОЛЬГА ВЛАДИМИРОВНА

КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ ТЕРМОСГАБИЛЬНЫХ ТКАНЕВЫХ БЕЛКОВ

14 00 46 - клиническая лабораторная диагностика 03 00 04 - биохимия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Москва - 2008

003169346

Работа выполнена в государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Астраханская Государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Научные руководители:

доктор медицинских наук, профессор

кандидат медицинских наук, доцент

Тогузов Руслан Тимофеевич Никулина Дина Максимовна

Официальные оппоненты:

академик РАМН РФ, доктор медицинских наук,

профессор Панченко Леонид Федорович

ФГУ Национальный научный центр наркологии

доктор медицинских наук, профессор Ивков Николай Николаевич ГОУ ВПО РГМУ

Ведущая организация:

Федеральное государственное образовательное учреждение «Институт повышения квалификации Федерального медико-биологическош Агентства»

Защита состоится « » июня 2008 года в 14 00 часов на заседании диссертационного совета Д 208.072.08 при ГОУ ВПО Российском государственном медицинском университете по адресу 117997, Москва, ул Островитянова 1

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Российского государственного медицинского университета по адресу 117997, Москва, ул Островитянова 1

Автореферат разослан « 2 » мая 2008 г

Ученый секретарь Диссертационного совета

доктор медицинских наук, профессор А К Рылова

Общая характеристика работы

Актуальность исследования. На особом месте в клинике внутренних и хирургических болезней стоит проблема диагностики заболеваний, сопровождающихся деструкцией тканей.

Для диагностики степени воспалительно-деструктивных процессов чаще всего используют белки-маркеры острой фазы. С-реактивный белок, продукты деградации фибриногена, ферритин (Ф), связанный с беременностью альфа2-гликопротеин (СБАГ), и другие (Трубников Г А, Никулина Д М., Балашов В И. и соавт, 1971 - 2001, Балашов В И., 1975, Алешкин В А, 1988; Долгов В В., 1997, Камышников В.С, 2002, Титов В Н., 2004; Никулина Д М. и соавт, 1980 -2006)и другие.

Ф занимает особое место среди маркеров деструкции. Исследования, проведенные в разных областях медицины, показали значимость теста на Ф как маркера деструкции тканей при некоторых острых и хронических заболеваниях печени, воспалительных заболеваниях бронхолегочной, мочевыводящей, костной, пищеварительной и других систем (пневмония, пиелонефрит, остеомиелит и тд.), аутоиммунных процессах (ревматоидный артрит, системная красная волчанка), травмах, инфаркте миокарда (Грачева JI.H, 1981; Прокопенко П.Г, 1975, Blake D R, 1981; Jacobs А, 1981, Митерев Ю.Г, 1983, Левина А.А, 1984, Halliday J., 1984, Klockars М, 1985, Tamura S , 1988; Hann H W L, 1990, Кчибеков Э.А., 2005, Савенков M.C , 2006)

В настоящее время определение Ф при онкологических заболеваниях убедило клиницистов в том, что он, являясь неспецифическим показателем, достоверно отражает как активность опухолевого процесса, так и тяжесть состояния больного (Alpert, Е, 1978; Niitsu Y, 1978, Drysdale J.W, 1978; Bullock S , 1980; Arosio P., 1984; Komatsu M., 1987; Zavagno G , 1987, Tamura S., 1988; Yinno A , 1988, Грязно-ва И.М, 1990, Hann H W.L., 1990; Воробьев В.Г, 1991, Батов С.В., 1996).

Согласно литературным данным различают тканевой и сывороточный Ф (Worwood М, 1982). Несмотря на значительное число публикаций, посвященных сывороточному Ф при различной патологии, в литературе мало данных об определении тканевого Ф при диагностике заболеваний, сопровождающихся деструкцией тканей (Лебедев М.Ю , 2000; Трубников ГА, 2001) Поэтому изучение взаимосвязи

-чз

J

между тканевым и сывороточным Ф при патологических деструктивных состояниях, особенно в хирургической практике, представляет теоретический и практический интерес.

Следует также отметить, что в доступной литературе фактически нет сведений об особенностях распределения Ф в тканях в процессе эмбриогенеза, а также в дефинитивных и патологически измененных тканях.

Кроме того, в нашей лаборатории Д.М Никулиной с соавт (1985, 2000) описаны и частично изучены два термостабильных межорганных антигена, обозначенных как термостабильный межорганный антиген 1 (ТМ1) и термостабильный межорганный антиген 2 (ТМ2), диагностическое значение которых как маркеров деструктивных процессов в организме, показано лишь при некоторых травмах и опухолях (Никулина ДМ и соавт., 1985; Белопасов В В и соавт., 1988-2002).

Цель исследования:

Улучшение диагностики и оценки эффективности лечения заболеваний, сопровождающихся воспалительно-деструктивными процессами в тканях, на основе новых данных иммунохимического изучения Ф и других термостабильных тканевых белков в биологических субстратах в норме и патологии.

В задачи исследования входило:

1. Оптимизировать методы выделения и очистки термостабильных тканевых белков - Ф, ТМ1, ТМ2

2 Получить компоненты и смоделировать иммунохимические тест-системы на Ф, ТМ1,ТМ2.

3 Изучить распределение термостабильных тканевых белков (Ф, ТМ1, ТМ2) в тканях организма человека в онтогенезе

4. Определить клиническое значение количественных изменений термостабильных тканевых белков в биологических жидкостях и тканях при воспалительно-деструктивных и опухолевых заболеваниях

5. Изучить зависимость между уровнем Ф в сыворотке крови и в патологически измененных тканях при холециститах и синуи-тах

Положения, выносимые на защиту:

1 Модифицикация метода выделения и очистки Ф по Сгашск позволяет получать препарат этого белка достаточной степени чистоты для использования его в качестве антигена при получении соответствующих антисывороток

2. Ф выявлен во всех исследуемых тканях человека Наибольшее содержание Ф установлено в печени и селезенке новорожденных Содержание Ф в материнской части плаценты в разные сроки гестации выше, чем в ее плодной части.

3. Частота выявления ТМ1 и ТМ2 в тканевых экстрактах от 33,3 до 85,71% случаев свидетельствует о разной концентрации этих белков в различных органах Особенно это касается ТМ1.

4. Корреляционный анализ содержания Ф в тканях желчного пузыря и сыворотке крови больных холециститом указывает на прямую резко выраженную взаимосвязь (г = + 0,78) Наибольшая концентрация Ф в сыворотке крови и тканях желчного пузыря наблюдается при флегмонозном холецистите

5. Усиление активности воспалительно-деструктивных процессов в тканях гайморовой пазухи сопровождается увеличением средней концентрации Ф как в сыворотке крови, так и в экстрактах биопсийного материала Но при этом коэффициент корреляции содержания Ф составляет лишь + 0,25

6. Изменение содержания Ф в пунктатах кист молочных желез (свыше 8,0 мг/мл на 1 у.е. общего белка) может указывать на риск злокачественного перерождения.

7. Выявление антител к ТМ2 в сыворотке крови беременных с гес-тозом и больных с гломерулонефритом свидетельствует об усиленном катаболизме и нарушении элиминации этого белка из организма человека (частота выявления составила соответственно 100% и 89,5%)

Научная новизна:

Впервые получены результаты по содержанию Ф в дефинитивных тканях, позволяющие уточнить роль Ф в обмене железа.

Впервые получены результаты исследования Ф в различных структурно-функциональных частях плаценты в зависимости от сроков гестации

Впервые получены данные по содержанию Ф в тканях при гнойно-воспалительных заболеваниях в зависимости от степени выражен-

ности патологического процесса Получены убедительные доказательства корреляционной зависимости между уровнем Ф в сыворотке крови и в патологически измененных тканях

Впервые обоснованы подходы к формированию интегральной ИФА тест-системы на основе трех термостабильных тканевых белков для увеличения диагностической возможности теста на деструкцию тканей.

Научно-практическая значимость работы:

Разработанный метод выделения и очистки Ф из экстракта плаценты позволяет получить его препарат высокой степени чистоты без применения дефицитных реактивов.

Разработаны рекомендации по использованию иммунохимичес-ких тест-систем на термостабильные белки в клинической практике для оценки активности патологического процесса, сопровождающегося деструкцией тканей, а также для характеристики обмена железа в организме человека на разных этапах развития.

Иммунохимические тесты на термостабильные тканевые белки повышают точность диагностики в хирургии, онкологии, терапии, акушерстве и гинекологии, благодаря своевременному определению степени выраженности деструкции по изменению концентрации этих белков в биологических жидкостях и патологически измененных тканях, а также позволяют оценить эффективность лечения и прогноз течения заболевания.

Апробация работы

Материалы диссертации доложены на научно-практической конференции и школе-семинаре для молодых ученых с международным участием «Белки-маркеры патологических состояний», Астрахань, 2003, на научно-практической конференции с международным участием «Современные достижения фундаментальных наук в решении актуальных проблем медицины», Астрахань-Москва, 2004; на научно-практической конференции с международным участием «Современные достижения фундаментальных наук в решении актуальных проблем медицины», Астрахань-Волгоград-Москва, 2006; на VIII Международной научной конференции «Эколого-биологические проблемы бассейна Каспийского моря», Астрахань, 2005; на научно-практических конференциях АГМА, Астрахань, 2005, 2006, 2007, на заседании проблемной комиссии АГМА «Теоретическое и практическое изучение белков маркеров патологических состояний», 2004.

Результаты исследования используются в научной и практической работе кафедры биологической химии с курсом клинической лабораторной диагностики АГМА

Публикации: По теме диссертации опубликовано 15 научных работ, из них 1 в центральной печати.

Структура и объем работы: Диссертация изложена на 136 страницах, состоит из введения, обзора литературы, 3 глав результатов исследования и их обсуждения, заключения, выводов, списка литературы Иллюстрированный материал представлен 18 таблицами, 20 рисунками. Библиография включает в себя 120 отечественных и 109 зарубежных авторов.

Содержание работы Материалы и методы

Объектом лабораторного исследования явились образцы сыворотки крови с острым и хроническим холециститом, хроническим деструктивным синуитом, гломерулонефритом, беременных с физиологической и отягощенной беременностью, а также спинномозговая жидкость при заболеваниях головного мозга Объем исследований представлен в таблице 1.

Иммунохимическому исследованию также подвергали индивидуальные образцы плаценты разных сроков развития, полученные во время физиологических и преждевременных родов, прерывания беременности по медицинским показаниям, аутопсийные органы и ткани плодов и мертворожденных (абортивный материал - искусственное прерывание беременности по медицинским показаниям); аутопсийные органы и ткани новорожденных, погибших от асфиксии на третьи сутки жизни; аутопсийные органы и ткани детей первого года жизни с генетическими заболеваниями, аутопсийные органы и ткани взрослых, погибших от острой травмы, дефинитивные и патологически измененные ткани желчных пузырей и гайморовых пазух

Пунктаты кист молочных желез и гайморовых пазух, спинномозговую жидкость получали пункцией, выполненной по диагностическим и лечебным показаниям Ткани желчного пузыря получали после холецистэктомии по поводу острого и обострения хронического холецистита

В ходе работы были использованы биохимические и иммунохи-мические методы, экстракция, фракционирование белков высалива-

нием, диализом, препаративным электрофорезом в агаре; аналитический электрофорез в полиакриламидном геле, гельпроникающая хроматография, специфическое (характеристическое) окрашивание железосодержащих белков, определение общего белка в экстрактах, им-мунодиффузионный и иммуноферментный анализ

Таблица 1

Объем исследованного материала

№ п/п Исследуемый материал Количество образцов

1. Ткани органов плодов (18, 24, 30 - 31 недели эмбриогенеза): печень, почки, селезенка, легкие, миокард, головной мозг 108

2 Ткани органов новорожденных печень, почки, селезенка, легкие, миокард 30

3. Ткани органов детей первого года жизни печень, почки, селезенка, легкие, миокард, головной мозг 36

4 Дефинитивные ткани органов и биологические жидкости взрослого человека печень, почки, селезенка, легкие, миокард, желчный пузырь, слизистая оболочка гайморовых пазух, сыворотка крови доноров (мужчин и женщин), сыворотка крови женщин при физиологической беременности (36-40 нед), плацента, срок беременности 36-40 нед 159

5 Ткани органов и биологические жидкости при различных патологических процессах' желчный пузырь, плацента 18-35 нед срока беременности, сыворотка крови женщин с отягощенной беременностью, сыворотка крови больных острым и хроническим холециститом, сыворотка крови и пунктаты гайморовых пазух больных хроническим деструктивным синуитом, пунктаты кист молочных желез, сыворотка крови больных с почечной патологией, спинномозговая жидкость 679

Всего 1012

Практически все образцы клинического материала были протестированы на Ф, ТМ1 и ТМ2 иммунохимическими методами- иммуно-диффузионным (ИДА) и иммуноферментным анализом (ИФА). Для определения Ф в сыворотке крови использовали коммерческие имму-ноферментные тест-системы; в тканях и биологических жидкостях Ф,

ТМ1, TM2 определяли ИДА с помощью самостоятельно смоделированных тест-систем.

Полученные результаты лабораторных исследований обработаны статистическими методами с использованием пакета статистического анализа Statistica 6, SPSS V 10.0.5., программ «STATLAND», «EXCEL-97», «Basic Statistic» на PC.

Результаты исследования и их обсуждение

Научное исследование состояло из 3 последовательных этапов, каждый из которых соответствовал поставленным задачам:

- выделение и очистка Ф, ТМ1 и ТМ2, разработка иммунохими-ческих тест-систем на Ф, ТМ1, ТМ2;

- изучение термостабильных тканевых белков при физиологических состояниях;

- изучение термостабильных тканевых белков в крови и тканях человека при некоторых заболеваниях, сопровождающихся деструкцией тканей.

На первом этапе исследования при выделении Ф из плаценты по методу Granick на ПААГ электрофореграмме выделенного препарата было выявлено от 3 до 6 белковых фракций, одной из которых был Ф (рис.1), что подтверждалось характеристическим окрашиванием.

Данный факт послужил предпосылкой для поиска дополнительных методов очистки и выделения Ф более высокой степени чистоты. Приняв метод Granick за первый этап очистки и учитывая физико-химические свойства Ф, мы провели доочистку первого препарата Ф методом гель-проникающей хроматографии.

Рис. 1. Определение чистоты полученных препаратов Ф методом электрофореза в ПААГ.

1 - Ф, выделенный по методу Огатк (окраска амии-довым черным); 2 - Ф, выделенный по методу йгамк с использованием гель-проникающей хроматографии (окраска амидовым черным); 3 - Ф, выделенный по методу вгашк с использованием гель-проникающей хроматографии (характеристическая окраска на фер-ропротеиды).

1 2 3

I-

■

Анализ чистоты второго препарата Ф (после гель-проникающей хроматографии) проводили методом иммуноэлектрофореза с антисывороткой на эту термостабильную фракцию, который показал наличие кроме Ф двух дополнительных линий преципитации (рис.2). +

Рис.2. Иммуноэлектрофорграмма фракций гельхроматографии.

Б - сыворотка донора; 1 - Ф, выделенный по Бгатк; 2,3 - фракции гель-проникающей хроматографии, содержащие Ф; а - антисыворотка на белки сыворотки человека; ангисыворотка на Ф до (в) и после (б) ее истощения сухой плазмой донора.

Возникло предположение, что эти две линии преципитации могут являться фрагментами Ф, образующимися в результате термической обработки данного белка. Однако специфическое окрашивание линий преципитации иммуноэлектрофореграммы этого препарата Ф выявило содержание железа только в одном компоненте. При электрофорезе в ПААГ фракции гель-хроматографии, содержащей Ф, выявлены дополнительные 2 компонента, которые не дают характеристических реакций на Ф и иммунохимически не идентичны ему.

Проведенное сравнительное исследование физико-химических и иммунохимических свойств этих термостабильных компонентов позволило нам предположить, что они являются белками, которые в 1985 году Д.М. Никулина с соавт. идентифицировали и обозначили как ТМ1 и ТМ2 (рис.3).

.3. Определение электрофоретической подвижности ТМ1и ТМ2 методом иммуноэлектрофореза (данные Д.М. Никулиной).

1 - сыворотка крови человека (донорская); 2 - термостабильная фракция экстракта почки; 3 - экстракт нативной почки; 4 - антисыворотка на белки сыворотки человека; 5 - антисыворотка против термостабильной фракции почки; 6 - антисыворотка против нативного экстракта почки.

+

Полученные результаты позволили сформировать алгоритм одномоментного выделения Ф, ТМ1 и ТМ2 для получения антисывороток и моделирования тест-систем на эти белки.

Антисыворотки на исследуемые белки получали иммунизацией кроликов возрастающими дозами антигена от 4 до 20 мг белка через день в течение месяца. В качестве антигена использовали гель-хроматографические фракции, содержащие Ф. Всего животным во время иммунизации вводили 180-190 мг белка. Реиммунизацию проводили в два дня с введением 100-120 мг белка в возрастающих дозах тремя инъекциями: подкожной, внутримышечной и внутривенной. Кровь у кроликов брали на 7-8 день после заключительного введения антигена из краевой вены уха по 40-50 мл.

Качество полученной антисыворотки проверяли методом ИДА. Сопоставление самостоятельно смоделированных моноспецифических тест-систем на Ф со стандартными тест-системами на Ф показало их полную иммунохимическую идентичность (рис.4).

Содержание Ф в биологических жидкостях и тканях органов человека определяли методом иммунодиффузионного титрования в агаре со стандартной тест-системой с последующей полуколичественной оценкой результатов реакции. Тест-антигеном служил препарат Ф в эквивалентном разведении 1/8. Для идентификации Ф в исследуемом материале использовали вариант метода со штампом «семерка» (рис.6).

Аг - тест - антиген Ф по Сгатск, в разведении 1/8, Аэ - антисыворотка против Ф; 1 - экстракт желчного пузыря; 2 - экстракт легкого; 3 - экстракт легкого; 4 - экстракт миокарда; 5 - экстракт печени; 6 - экстракт головного мозга; 7 - экстракт легкого; 8 - экстракт селезенки; 9 - экстракт селезенки; 10 - экстракт почки; 11 - экстракт печени; 12 - экстракт желчного пузыря.

Рис.4. Иммунодиффузионный анализ качества полученной антисыворотки против Ф со стандартной тест-системой.

1 - стандартная антисыворотка против Ф;

2 - стандартный тест-антиген;

3 - Ф выделенный по Огатск в разведении 1/8;

4 - авторские антисыворотки против Ф.

Рис.6. Иммунодиффузионный анализ выявления Ф, ТМ1, ТМ2 в экстрактах тканей органов человека со стандартной тест - системой на Ф.

Концентрацию Ф в сыворотке крови определяли методом ИФА в нг/мл с тест-системой фирмы Hofmann-La Roche

На втором этапе исследования было проведено изучение распределения Ф, ТМ] и ТМ2 в дефинитивных тканях органов человека При изучении содержания Ф в тканях органов в разные сроки онтогенеза обнаружили, что средние величины содержания Ф в органах (печени, селезенке, почке, миокарде, легком, головном мозге) новорожденных выше, чем в органах плодов сроком гестации 18, 24 и 31 недель, детей первого года жизни и взрослых (табл 2)

Таблица 2

Содержание Ф (М±ш) в тканях человека в различные сроки онтогенеза

Орган Содержание Ф (мг/л на 1 у е общего белка) в тканях

плода плода 30-31 новорож- детей 1-го взрослых

18 нед 24 нед неделя денных года жизни

п = 6 п = 6 п = 6 п=6 п = 6 п = 6

Миокард 5,2±1,3 6,33±0,3 3,8±0,2 13,33±4,3 4,8±0,65 1,73±0,36

Селезенка 8,55±1,8 11,50±2,3 8,3±1,3 25,66±9,6 14,43±0,9 2,35±0,48

Печень 12,07±2,3 16,57±0,9 10,87±1,6 37,5±4,9* 13,3±0,7 2,87±0,43

Легкие 8,32±2,6 5,0±1,15 3,2±0,15 12,4±4,3 4,34±1,2 1,7±0,5

Головной мозг 3,43±1,8 3,16±0,8 - - 3,33±0,7 1,9±0,6

Почка 8,46±0,9 10,7±1,9 5,4±1,6 17,2±3,8 11,33±0,7 0,55±0,15

Примечание * - р<0,001- по отношению к плодам 18,24,30-31 недель развития, взрослым

Возможно, факт высокого содержания Ф в органах новорожденных связан с периодом максимального депонирования железа, необходимого для нужд организма в постнатальном периоде.

При сравнении содержания Ф в органах на разных этапах онтогенеза выявлены наиболее высокие концентрации Ф в печени и селезенке по сравнению с другими органами (почки, сердце, легкие, головной мозг)

Изучение содержания Ф в различных структурно-функциональных частях плаценты показало, что его содержание в 38-40 недель гестации достоверно выше в материнской (р<0,05), чем в плодной части (табл.3) Также можно отметить, что содержания Ф в материнской части плаценты в 38-40 и 18-35 недель практически одинаково. В плодной части плаценты при 18-35 неделях развития содержание Ф незначительно больше, чем в 38-40 недель. Это может быть обусловлено тем, что в 18-35 недель гестации железо расходуется на усилен-

ный клеточный метаболизм интенсивно растущего плода и увеличивающейся в объеме плаценты

Таблица 3

Содержание Ф в материнской и плодной частях плаценты

Срок гестации л Содержание Ф мг/л на 1 у е ОБ, (М±т) в плаценте Р

Материнская часть Плодная часть

38-40 недель 25 10,55±1,03 5,92±0,75 р<0,05*

18-35 недель 10 10,18±1,07 7,69±0,82 р>0,05*

* достоверность отличия между материнской и плод ной частями

Таким образом, определение содержания Ф в материнской и плодной частях плаценты при углубленном изучении с использованием гистохимических методов может быть использовано как показатель регуляторно-метаболитических процессов в фетоплацентарной системе.

Изучение распределения ТМ1 и ТМ2 в тканях органов взрослого человека показало, что ТМ1 и ТМ2 в органах взрослого человека выявляется с частотой от 33,3 до 85,71%. ТМ1 не был обнаружен в миокарде, ТМ2 - в головном мозге Вероятно, наблюдаемый результат зависит от предела чувствительности метода В данном случае, если концентрация выявляемого белка в указанных органах ниже 5 мг/л

На третьем этапе для определения диагностической значимости Ф, ТМ1 и ТМ2 было проведено их изучение в крови и тканях человека при некоторых заболеваниях, сопровождающихся деструкцией тканей

В сыворотке крови у больных с острым и хроническим холециститом показатели сывороточного Ф составили: при катаральном холецистите - 55,1±13,74 нг/мл, при флегмонозном - 306,0±62,3 нг/мл, при гангренозном - 78,3±21,73 нг/мл, при хроническом - 59,3±15,23 нг/мл. Показатели концентрации Ф в тканях желчного пузыря составили. при катаральном холецистите - 2,85±1,86 мг/л на 1 у.е. ОБ, при флегмонозном - 7,03±2,42 мг/л на 1 у е. ОБ, при гангренозном -0,86±0,61 мг/л на 1 у е ОБ, при хроническом - 0,81 ±0,7 мг/л на 1 у.е ОБ (табл.5).

Проведенный корреляционный анализ содержания Ф в тканях желчного пузыря и сыворотке крови при холецистите указывает на

прямую резко выраженную взаимосвязь между содержанием Ф в тканях желчного пузыря и в сыворотке крови (г = + 0,78). Эти результаты подтверждают возможность использования теста на Ф в качестве дополнительного дифференциально-диагностического критерия формы и степени поражения желчного пузыря

Таблица 5

Частота обнаружения и концентрация (М±т) Ф в сыворотке крови и экстрактах желчного пузыря в зависимости от формы холецистита

Форма Частота обнаруже- Концентрация Ф в Концентрация Ф

холецистита п ния Ф в экстрактах экстрактах желчных в сыворотке

желчных пузырей пузырей (ИДА), крови, (ИФА),

п % мг/л на 1 у е ОБ нг/мл

Хронический 10 6 60 0,81±0,7 59,3±15,23 р4

Катаральный 7 6 85,7 2,85±1,68 55,1±13,74р,

Флегмонозный 15 15 100 7,03±2,42 306,0±62,3 р2

Гангренозный 7 5 71,4 0,86±0,61 78,3±21,73 р3

Контроль 10 - - 0 21,941,35

Примечание р1 <0,05, р2<0,01, р3<0,05, р4<0,05- по отношению к контролю

Содержание Ф в сыворотке крови больных при хронических деструктивных синуитах составило: при 1-ой степени деструкции -37,27±6,95 нг/мл, при 2-ой степени деструкции - 55,48±5,82 нг/мл, при третьей степени деструкции - 85,42±18,7 нг/мл (р<0,02 к первой группе). Средние показатели Ф в экстрактах биопсийного материала соответственно составили: 1,57±0,30 мг/л на 1 у е. ОБ, 5,31±1,2 мг/л на 1 у.е ОБ и 8,9±3,3 мг/л на 1 у.е. ОБ (р<0,05 к первой группе), (табл 6)

Было установлено, что нарастание воспалительно-деструктивных процессов в тканях гайморовой пазухи сопровождается увеличением концентрации Ф как в сыворотке крови, так и в экстрактах биопсийного материала. Однако коэффициент корреляции содержания Ф в тканях гайморовой пазухи и сыворотке крови равен г = + 0,25, что указывает на слабую связь между этими показателями

При сравнении средних значений Ф в тканях при холециститах и синуитах можно отметить, что средние значения Ф в тканях при холециститах (5,67 мг/л на 1 у е. ОБ) незначительно выше, чем при синуитах (4,3 мг/л на 1 у е ОБ) А среднее содержание Ф в сыворотке крови при холециститах (251,32 нг/мл) в 4,54 раза выше, чем при синуитах (55,41 нг/мл).

Таким образом, определение содержания Ф в сыворотке крови больных острым и хроническим холециститом имеет большее диагностическое значение, чем при хронических деструктивных синуи-тах

Таблица 6

Частота обнаружения и концентрация Ф в экстрактах биопсийного материала в зависимости от степени деструктивного процесса при синуитах

Группы больных п Частота обнаружения Ф в экстрактах биопсийного материала Концепт] 5ация Ф, М±т

в сыворотке крови (ИФА), нг/мл экстрактах биопс материала (ИДА), мг/л на 1 у е ОБ

п (%)

1 - степень деструкции 24 16 66,67 37,27±6,95 1,57±0,3

2 - степень деструкции 14 12 85,17 55,48±5,82 5,31±1,2

3 - степень деструкции 8 6 75,0 85,42±18,7* 8,9±3,3**

Контроль 6 0 0 21,9±1,35 0

Примечание * - р<0,02 - к первой группе, ** - р<0,05 - к первой группе.

Проведено определение Ф в 30 пунктатах молочных желез женщин с кистозно-фиброзными мастопатиями для оценки возможности применения данного теста в прогнозе исхода заболеваний. Оказалось, что уровень Ф в различных образцах пунктатов довольно широко варьирует (от 0 до 26 мг/мл на 1 у е ОБ), (табл.7). В зависимости от уровня Ф все пациентки были разделены на 3 исследуемые группы 1-ая группа - пациентки, в биопунктатах которых Ф не обнаружен - 11 случаев (36,7%), 2-ая группа - пациенты с концентрацией Ф от 3,6 до 7,2 мг/л - 13 случаев (43,3%); 3-ая группа - пациенты с высоким содержанием Ф в пунктатах (от 8,0 до 16,0 мг/л) - 6 случаев (20%).

Таблица 7

Распределения больных по уровню содержания Ф (мг/л на 1 у.е.ОБ) в пунктатах молочных желез ИДА

№ класса Ранговый интервал по уровню Ф Частота выявления

Абсолютная, п Относительная, (%)

0 0 11 36,7

1 3,6-5,6 7 43,3

2 5,7-7,7 6

3 7,8-9,8 2 20

4 9,9-11,9 0

5 12,0-14,0 1

6 14,1 и более 3

Средний возраст женщин с увеличением номера группы также возрастал- 1 группа - 44 года, 2 группа - 47 лет; 3 группа - 50 лет.

И только в 3-й группе при цитологическом исследовании пунк-тата кисты молочной железы были выявлены признаки активного воспалительного процесса Кроме этого, у двух из шести (33,3%) больных этой группы с высоким содержанием Ф (13,8 и 16,0 мг/л) были диагностированы опухолевые заболевания матки (миома матки и рак шейки матки) В 1 и 2 группах сопутствующие воспалительные заболевания встречались реже Содержание Ф в пунктатах молочных желез свыше 8 мг/л на 1 у е ОБ отражает воспалительный процесс, а также может указывать на риск злокачественного перерождения Полученные результаты могут лечь в основу самостоятельного исследования ценности иммунохимических критериев в диагностике деструктивных и воспалительных процессов в молочной железе

Изучение Ф, ТМ1 и ТМ2 в СМЖ при заболеваниях головного мозга показало, что при опухолях частота выявления ТМ1 составляет 29,8%, ТМ2 - 13,6%, Ф - 10,0%; при воспалительных заболеваниях выявление ТМ1 составило 18,7%, ТМ2 - 12,0%, Ф - 6,2%; при тяжелой черепно-мозговой травме ТМ1 определяли в 5,4%, ТМ2 - 6,7% , Ф - 20,3% (табл 8)

Показатели частоты выявления Ф, ТМ1 и ТМ2 в СМЖ и их соотношение между собой при опухолях и воспалении диаметрально противоположны таковым при травме, что может свидетельствовать о связи этих белков с разными патогенетическими звеньями деструкции при воспалении и опухолях и травматической деструкции .

Таблица 8

Частота выявления тканевых термостабильных белков в СМЖ при заболеваниях головного мозга

Заболевания Количество Частота определения

головного мозга проб антигенов (%), ИДА

Ф ТМ1 ТМ2

Опухоли 191 10,0 29,8 13,6

Воспалительные заболевания 112 6,2 18,7 12,0

Тяжелая черепно-мозговая травма 74 20,3 5,4 6,7

Полученные результаты по изучению термостабильных тканевых белков (Ф, ТМ1 и ТМ2) в СМЖ могут лечь в основу разработки иммунохимических дифференциально-диагностических критериев заболеваний головного мозга, имеющих разные патогенетические звенья.

Для уточнения биологических свойств или поведения в биологических жидкостях ТМ1 и ТМ2 изучению были подвергнуты образцы сыворотки крови доноров (женщин), беременных с физиологической и отягощенной беременностью гестозом, больных гломеруло-нефритом (табл.9, рис.7).

Таблица 9

Частота выявления ТМ1, ТМ2 и антител к: ТМ2 в сыворотке крови доноров, беременных и больных гломерулонефритом

п Частота выявления ТМ1 и Частота выявления

Сыворотка крови ТМ2 (ИДА) антител к ТМ2,

ТМ1 ТМ2 (ИДА)

п % п % п %

доноров 30 2 6,2 3 10,0 - -

беременных без осложнений 30 10 33,33 15 50,0 - -

беременных с гестозом 30 ¡7 56,7 30 ¡00 30 100

больных гломерунефритом 30 6 20,0 19 63,33 17 89,5

Анализ полученных результатов показал, что частота обнаружения ТМ1 в сыворотке крови доноров (женщин) составила 6,2%, в сыворотке крови беременных с физиологическим течением беременности -33,33%, в сыворотке крови беременных с гестозом - 56,7%, в сыворотке крови больных гломерулонефритом - 20%.

Частота обнаружения ТМ2 в сыворотке крови доноров-женщин составила 10%, в сыворотке крови беременных с физиологическим течением беременности - 50%, в сыворотке крови беременных с гестозом - 100%, в сыворотке крови больных гломерулонефритом -63,33%.

На наш взгляд интересен факт обнаружения антител к ТМ2 в сыворотке крови беременных с гестозом (100%) и больных гломерулонефритом (89,5%).

1 - тест - антиген; 2 - антисыворотка на ТМ1, ТМ2; 3, 6 - сыворотка крови беременных с гестозом; 4,5 - сыворотка крови больных гломерулонефритом.

Рис.7. Выявление ТМ1 и антител к ТМ2 в сыворотке крови беременных с гестозом и больных гломерулонефритом.

На основании полученных результатов можно предположить, что ТМ2 выполняет роль аутоантигенов в развитии почечной патологии и высокая частота выявления его в сыворотке крови беременных с гестозом и больных гломерулонефритом свидетельствует о нарушении элиминации этого белка из организма и выработке аутоантител с образованием аутоиммунных комплексов (рис 7)

ВЫВОДЫ

1. Разработанная модифицикация метода выделения и очистки ферритина позволяет получать препарат этого белка высокой степени чистоты для использования его в качестве антигена при получении соответствующих антисывороток.

2. Впервые установлено распределение ферритина в тканях органов человека в разные сроки онтогенеза. Определено, что содержание ферритина в органах плодов в 38-40 недель гестации выше, чем в органах плодов 18-31 недель развития, детей первого года жизни и взрослых.

3. Показано, что содержание ферритина в материнской части плаценты в разные сроки гестации выше, чем в плодной На основании этого Ф может быть использован в качестве индикатора метаболических процессов в фетоплацентарной системе и маркера развития плода

4. Доказана корреляция между содержанием ферритина в сыворотке крови и его уровнем в патологически измененных тканях желчного пузыря. Определены диагностические значения концентрации ферритина в крови при различных формах острого холецистита: при флегмонозном холецистите в 5,55 раз выше, чем при катаральном, в 3,9 раз выше, чем при гангренозном, и в 5,2 раза выше, чем при хроническом холецистите

5. Установлено, что неидентичная частота выявления Ф, ТМ1 и ТМ2 в СМЖ при опухолях, воспалении и травмах головного мозга свидетельствует об их связи с разными патогенетическими звеньями. При травматической деструкции преобладает выявление ферритина, а при опухолях и воспалительных заболеваниях - ТМ1 и ТМ2.

6 Получены данные по выявлению антител к ТМ2 в сыворотке крови беременных с тяжелой формой гестоза (100%) и больных с гломерулонефритом (89,5%). Факт накопления аутоантител может свидетельствовать о нарушении элиминации этого белка из организма при заболеваниях, сопровождающихся нарушением функции почек

Практические рекомендации

Полученные результаты позволяют расширить спектр иммуно-химических исследований в лабораторной практике хирургических клиник и отделений.

Иммунохимический тест на Ф в сыворотке крови рекомендуется использовать в лабораториях хирургических клиник и отделений как дополнительный критерий диагностики формы острого холецистита.

Сформированы положения, свидетельствующие о возможности использования комплексной иммунохимической тест-системы на Ф, ТМ1 и ТМ2, для определения степени деструктивных изменений в тканях.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Никулина ДМ, Кчибеков ЭА, Кутуков ВЕ, Кривенцев Ю.А., Петрова О.В. / Мониторинг острофазовых белков при холециститах // Научно-практическая конференция с международным участием и школа-семинар для молодых ученых «Современные достижения фундаментальных наук в решении актуальных проблем медицины»: мат-лы конф. - Астрахань - Москва, 2004. - С. 106-109.

2 Петрова О.В., Лапин А.А., Матвеева Н Ф., Балашов В И / Изучение содержания ферритина в тканях больных алкогольной энцефалопатией // VIII Международная научная конференция «Эколого-биологические проблемы бассейна Каспийского моря». мат-лы конф. - Астрахань, 2005.- С.175-177

3 Петрова О.В., Балашов В И., Лещев В.В. / Количественное определение ферритина в содержимом кист молочных желез //

Труды Астраханской государственной медицинской академии. Тезисы докладов - Астрахань, 2005 -Т 31 (LV) -С 181-183

4 Петрова О.В., Сентюрова Л.Г, Шварц Р Н , Илов Н.Н , Матвеева Н.Ф., Балашов ВН. / Содержание ферритина в различных структурно-функциональных частях плаценты // VIII Международная научная конференция «Эколого-биологические проблемы бассейна Каспийского моря», мат-лы конф. - Астрахань, 2005 -С 197-199.

5 Анохина И Ю., Борщигов М.М , Матвеева Н.Ф., Шумелен-ков В Ю, Петрова О.В. / Определение содержания и частоты обнаружения ферритина в экстрактах желчного пузыря при различных формах холецистита И Научно-практическая конференция Курской Государственной медицинской академии- Тезисы докладов. - Курск, 2005.- 53 с.

6. Ларченко Е.В , Петрова О.В., Шпотин В П, Иванов П.А. / Диагностическая ценность фактора некроза опухоли и ферритина при хронических деструктивных синуитах // Труды Астраханской государственной медицинской академии: Тезисы докладов - Астрахань, 2006. - Т. 33 (LVII) - С. 331-334.

7. Ларченко Е.В., Петрова О.В., Проскурин А.И., Балашов В.И. / Значение ферритина в диагностике хронических деструктивных синуитов II Вестник оториноларингологии - 2006 - №5 - С.243-244.

8 Савенков М.С , Петрова О.В., Бисалиева Р А., Никулина ДМ/ Комплексная лабораторная оценка выраженности воспалительных изменений при обструктивном холецистите // Бюллетень Волгоградского научного центра РАМН и Администрации Волгоградской области: Тезисы доклада.- Волгоград, 2006.-51 с

9. Анохина И.Ю , Петрова О.В., Кубенко С.В , Царев А Н, Шумеленков В Ю , Матвеева Н.Ф., Балашов В И. / Концентрация ферритина в тканях в различные сроки онтогенеза // Ежегодная междисциплинарная научно-практическая конференция стран СНГ «Перспективы и пути развития неотложной педиатрии». мат-лы конф. - Санкт - Петербург, 2006 - С.38-41.

10 Петрова О.В., Щербинина АН., Прилучный СВ, Яровой С Н., Качиури A.C., Матвеева Н Ф , Балашов В И. / Определение ферритина в плаценте как маркера фетоплацентарной недоста-

точности и гипоксического состояния новорожденного // Ежегодная междисциплинарная научно-практическая конференция стран СНГ «Перспективы и пути развития неотложной педиатрии»: мат-лы конф. - Санкт - Петербург, 2006 - С 170-173.

11. Савенков М.С, Петрова О.В., Кчибеков ЭА., Оганесян А А., Балашов В И. / Определение содержания ферритина в различных морфологически измененных зонах желчного пузыря при остром холецистите // Научно-практическая конференция с международным участием «Достижения фундаментальных наук в решении актуальных проблем медицины», мат-лы конф - Астрахань - Волгоград - Москва, 2006. - С. 85-87.

12 Петрова О.В., Савенков MC., Кчибеков ЭА., Балашов В.И, Никулина Д.М., Мустафин Д.Г. / Определение взаимосвязи между ферритином в тканях и белками острой фазы сыворотки крови при остром холецистите // Труды Астраханской государственной медицинской академии. Тезисы докладов. - Астрахань, 2006. - Т. 33 (LVII) - С. 301-304.

13 Петрова О.В., Лещев ВВ, Егорова Т.Г, Кадышева ЕН, Балашов В И / Содержание ферритина в пунктате молочных желез // Научно-практическая конференция с международным участием «Достижения фундаментальных наук в решении актуальных проблем медицины»- мат-лы конф. — Астрахань - Волгоград - Москва, 2006. - С. 78-81.

14 Ларченко Е В., Петрова О.В., Проскурин А.И., Никулина Д.М, Балашов В И / Фактор некроза опухоли и ферритин в диагностике остеомиелитов верхней челюсти // Материалы П-й научно-практической конференции оториноларингологов Южного Федерального округа, мат-лы конф - Майкоп, 2006. - С 107— 109.

15. Петрова О.В., Анохина И.Ю , Матвеева Н.Ф, Батуев Д Г , Бредихин Д Е, Балашов В И. / Ферритин в тканях организма человека в разные сроки онтогенеза // Научно-практическая конференция с международным участием «Достижения фундаментальных наук в решении актуальных проблем медицины»: мат-лы конф - Астрахань-Волгоград - Москва, 2006. - С. 75-78

Список сокращений

ИФА - иммуноферментный анализ ИЭФ - иммуноэлектрофорез ОБ - общий белок ПААГ - полиакриламидный гель СРБ - С - реактивный белок

СБАГ - связанный с беременностью альфа2-гликопротеин

СМЖ - спинномозговая жидкость

СФ - сывороточный ферритин

ТМ1 - термостабильный межорганный белок 1

ТМ2 - термостабильный межорганный белок 2

Ф - ферритин

ЭФ - электрофорез

ЭФ в ПААГ - электрофорез в полиакриламидном геле у е - условная единица (оптическая плотность)

ПЕТРОВА Ольга Владимировна

КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ ТЕРМО СТАБИЛЬНЫХ ТКАНЕВЫХ БЕЛКОВ

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Подписано в печать 27.12 2007. Тираж 100 эка Зак. № 2157.

Издано ГОУ ВПО Астраханской государственной медицинской академии, 414000, г Астрахань, ул Бакинская, 121.

Отпечатано в типографии ГОУ ВПО Астраханской государственной медицинской академии, 414000, г Астрахань, ул Бакинская, 121

Актуальность. На особом месте в клинике внутренних и хирургических болезней стоит проблема диагностики заболеваний, сопровождающихся деструкцией тканей.

Деструкция - (лат. destruction) разрушение тканевых, клеточных и субклеточных структур [8, 120]. Ее причинами могут быть патологические и физиологические процессы. При росте и формировании организма в онтогенезе и при обновлении тканей взрослого организма реализуется запрограммированная смерть клетки (апоптоз), сопровождающаяся ее полным разрушением [33, 77, 78, 79, 88]. Из патологических процессов, характеризующихся выраженными деструктивными изменениями, наиболее часто встречается синдром системного воспалительного ответа (ССВО) [102]. Системный воспалительный .ответ представляет собой совокупность локальных и системных реакций организма на тканевое повреждение, вызванное различными причинами - инфекцией, токсической или аллергической реакцией^ физической и химической травмой; воспалением, опухолевым ростом. Однотипность клинических, проявлений ССВО при разных видах патологии определяется общими патогенетическими механизмами развития тканевого повреждения, повреждающие воздействие разнообразных патогенов (экзогенного и эндогенного происхождения) приводят к запуску практически идентичных патологических реакций с общими молекулярными каскадами1 [1,3, 10, 102, 111, 112].

На сегодняшний день оценить степень деструктивных изменений в тканях можно с помощью морфологических признаков после оперативных вмешательств, либо после смерти больного. Однако несомненно, что в клиническом плане представляет интерес определение степени деструкций тканей-в организме человека при различных патологических процессах на момент поступления больного в стационар и в процессе лечения.

В настоящее время большое внимание исследователей и клиницистов привлек поиск биохимических маркеров деструкции тканей и разработка методов' их детекции, среди которых наиболее специфическими и чувствительными являются иммунохимические методы. Использование иммунохимичес-ких методов качественного и количественного определения маркеров воспалительно-деструктивных процессов позволило бы решить как задачи диагностики, так и выбора тактики лечения, оценки динамики заболевания и контроля эффективности проводимой терапии. Несмотря на то, что в этой области достигнуты значительные положительные результаты, нельзя считать эту задачу полностью решенной.

Для диагностики степени воспалительно-деструктивных процессов чаще всего используются белки-маркеры острой фазы: СРБ, продукты деградации фибриногена, СБАГ, Ф и др. [3, 30; 39, 47, 48, 64, 72, 74, 94, 101, 103, 106, 107].

Ф занимает особое место среди маркеров деструкции. Согласно литературным данным-различают тканевой и сывороточный Ф [124, 139, 144, 169, 173, 189, 223, 224]. В настоящее время определение Ф в сыворотке крови при онкологических заболеваниях убедило специалистов в том, что он Ф, являясь неспецифическим показателем, достоверно отражает как активность опухолевого процесса, так и тяжесть состояния больного [9, 16, 24, 50, 53, 123, 126, 132, 133, 134, 147,153, 158, 161, 166, 168, 171, 179, 183, 184, 186, 187, 190, 191, 192, 194, 220, 227].

Работы, проведенные в разных областях медицины, показали значимость теста на Ф в сыворотке крови как маркера деструкции тканей при некоторых острых и хронических заболеваниях печени, воспалительных заболеваниях бронхолегочной, мочевыводящей, костной, пищеварительной и других систем (пневмония, пиелонефрит, остеомиелит и т.д.), аутоиммунных процессах (ревматоидный артрит, системная красная волчанка), травмах, инфаркте миокарда [21, 22, 23, 29, 36, 37, 40, 49, 50, 65, 74, 84, 94, 106, 107, 131, 137, 138, 142, 150, 160, 161, 162; 163, 172, 175,176, 185, 186, 198, 207,211,212].

Несмотря на значительное число публикаций, посвященных Ф в сыворотке крови при различной патологии, в литературе мало данных о значении тканевого Ф в диагностике заболеваний, сопровождающихся деструкцией тканей [49, 106, 107, 169, 189, 203, 223, 224]. Представляет интерес изучение взаимосвязи между тканевым и сывороточным Ф при патологических состояниях, сопровождающихся* деструкцией тканей, особенно в хирургической практике.

Кроме того, в нашей лаборатории Д.М. Никулиной с соавт. (1985, 1995, 2000) описаны и изучены два термостабильных межорганных антигена, обозначенные как ТМ1 и ТМ2, диагностическое значение которых, как маркеров деструктивных процессов в организме показано лишь при некоторых травмах и опухолях [17, 71, 188]. То есть, сведения о* диагностической значимости этих белков крайне ограничены.

Следует также отметить, что, несмотря на значительное число публикаций, посвященных изучению Ф при различной патологии, в доступной литературе фактически нет сведений об особенностях распределения Ф в тканях в процессе эмбриогенеза, а также в дефинитивных и патологически измененных тканях.

Исходя из этого, дальнейшее изучение Ф представляет как теоретический; так и практический интерес.

Цель исследования:

Улучшение диагностики и оценки эффективности лечения заболеваний, сопровождающихся воспалительно-деструктивными процессами в тканях, на основе новых данных иммунохимического изучения Ф и других термостабильных тканевых белков в биологических субстратах в норме и патологии.

Задачи исследования:

1. Оптимизировать методы выделения и очистки термостабильных тканевых белков - Ф, ТМ1 ,ТМ2.

2. Получить компоненты и смоделировать иммунохимические тест-системы на Ф, ТМ1/ГМ2.

3. Изучить распределение термостабильных тканевых белков (Ф, ТМ1, ТМ2) в тканях организма человека в онтогенезе.

4. Определить клиническое значение количественных изменений уровня термостабильных тканевых белков , в биологических жидкостях и тканях при воспалительных, опухолевых заболеваниях и травмах.

5. Изучить взаимосвязь между уровнем Ф в сыворотке крови и в патологически измененных тканях при холециститах и синуитах.

Новизна исследования

1. Впервые получены результаты по содержанию Ф в, дефинитивных тканях, позволяющие уточнить роль Ф в обмене железа.

2. Впервые получены результаты исследования Ф в различных структурно-функциональных частях плаценты в зависимости от сроков гестации .

3. Впервые получены данные по содержанию Ф в тканях при гнойно-воспалительных заболеваниях в зависимости от степени выраженности патологического процесса. Получены убедительные доказательства корреляционной зависимости между уровнем Ф в сыворотке крови и в патологически измененных тканях.

4. Впервые обоснованы подходы к формированию комплексной ИФА тест-системы на основе трех термостабильных тканевых белков для увеличения диагностической возможности теста на деструкцию тканей.

Научно-практическая значимость работы

Разработанный метод выделения и очистки Ф из экстракта плаценты позволяет получить его препарат достаточно высокой степени чистоты, без применения дефицитных реактивов.

Даны рекомендации по использованию иммунохимической тест-системы на термостабильные белки в клинической практике для. оценки активности патологического процесса, сопровождающегося деструкцией.

Иммунохимические тесты на термостабильные тканевые белки повышают точность диагностики в хирургии, онкологии, терапии, акушерстве и гинекологии, благодаря своевременному определению степени выраженности деструкции тканей по изменению концентрации этих белков в биологических жидкостях и патологически измененных тканях, а также позволяют оценить эффективность лечения и прогноз течения заболевания.

Внедрение результатов в практику

Материалы диссертации доложены на научно-практической конференции и школе-семинаре с международным участием «Белки-маркеры патологических состояний» (Астрахань, 2003), на научно-практической конференции^ школе-семинаре с международным участием «Современные достижения фундаментальных наук в решении актуальных проблем медицины» (Астрахань-Волгоград, 2004), на научно-практической конференции и школе-семинаре с международным участием «Современные достижения фундаментальных наук в решении актуальных проблем медицины» (Астрахань-Волгоград-Москва, 2006), на VIII Международной научной конференции «Эколого-биологические проблемы бассейна Каспийского моря» (Астрахань, 2005), на научно-практических конференциях посвященных 87, 88, 89 - годовщине АГМА (Астрахань, 2005, 2006, 2007), на заседании проблемной комиссии АГМА «Теоретическое и практическое изучение белков маркеров патологических состояний» (2004).

Результаты исследования используются в научной и практической работе кафедры биологической химии с курсом клинической лабораторной диагностики АГМА.

Диссертация изложена на 136 страницах, состоит из введения, обзора литературы, 3 глав результатов исследования и их обсуждения, заключения, выводов, практических рекомендаций, списка литературы. Иллюстрированный материал представлен 18 таблицами, 20 рисунками. Библиография включает в себя 120 отечественных и 109 зарубежных авторов.

ВЫВОДЫ

1. Разработанная модифицикация метода выделения и очистки Ф позволяет получать препарат этого белка высокой степени чистоты для использования его в качестве антигена при получении соответствующих антисывороток.

2. Впервые установлено, распределение Ф в тканях органов человека в разные сроки онтогенеза. Определено, что содержание Ф в органах плодов в 38-40 недель гестации выше, чем в органах плодов 18-31 недель развития, детей первого года жизни и взрослых.

3. Показано, что содержание Ф в материнской части плаценты1 в разА ные сроки гестации выше, чем в плодной. На основании этого Ф может быть использован в качестве индикатора метаболических процессов в фе-топлацентарной системе и маркера развития плода.

4. Доказана корреляция между-содержанием Ф в сыворотке крови и его уровнем в патологически- измененных тканях желчного пузыря: Определены диагностические значения концентрации Ф в крови при различных формах острого холецистита: при флегмонозном холецистите в 5,55 раз выше, чем при катаральном, в 3,9 раз выше, чем при гангренозном, и в 5,2 раза выше, чем при хроническом холецистите.

5. Установлено, что неидентичная частота выявления Ф, ТМ1 и ТМ2 в СМЖ при опухолях, воспалении и травмах головного мозга свидетельствует об их связи с разными патогенетическими звеньями. При травматической деструкции преобладает выявление ферритина; а при опухолях и воспалительных заболеваниях - ТМ1 иТМ2.

6. Получены данные по выявлению антител к ТМ2 в сыворотке крови беременных с тяжелой формой гестоза (100%) и больных гломерулонефритом (89,5%). Факт накопления аутоантител может свидетельствовать о нарушении элиминации этого белка из организма при заболеваниях, сопровождающихся нарушением функции почек.

Практические рекомендации

Полученные результаты позволяют расширить спектр иммунохимичес-ких исследований в лабораторной практике хирургических клиник и отделений.

Иммунохимический тест на Ф в сыворотке крови рекомендуется использовать в лабораториях хирургических клиник и отделений как дополнительный критерий диагностики формы острого холецистита.

Сформированы положения, свидетельствующие о возможности использования комплексной иммунохимической тест-системы на Ф, ТМ1 и ТМ2, для определения степени деструктивных изменений в тканях.