Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Клинико-диагностическое значение определения иммуномодулирующих факторов крови и мочи при заболеваниях почек

.И V

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РСФСР

КУРСКИИ ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ ИНСТИТУТ

На правах рукописи

АФАНАСЬЕВ Владимир Алексеевич

КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ИММУНОМОДУЛИРУЮЩИХ ФАКТОРОВ КРОВИ И МОЧИ ПРИ ЗАБОЛЕВАНИЯХ ПОЧЕК

14.00.36 — Аллергология и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Курск — 1991

Работа выполнена е Курском ордена Трудового Красного Знамени государственном медицинском - институте

Научный руководитель:

— доктор медицинских наук, профессор Л. Г. Прокопенко

Г ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ:

— доктор медицинских наук Ю, А. Блинков

— кандидат медицинских наук В. И. Ишков

Ведущее учреждение: 2-й Московский ордена Ленина государственны!! медицинский-институт-им. Н.-И. Пнрогова, г. Москва.

Защита состоится « 21/ » ¿/¿¿2/-/6?_1991 г. в /Г час

на заседании специализированного совета К 084.57.01 при Курском ордена Трудорого Красного Знамени государственном медицинском институте (305033, г. Курск, ул. К. Маркса, 3).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Курского ордена Трудового Красного Знамени государственного медицинского

института.

Автореферат разослан « 2/ » 1991 Г.

Ученый секретарь специализированного совета, кандидат медицинских наук

ОБЩАЯ ШШШОТШ РАБОТЫ

IJ-'-t,-¡Г.ЦИЙ

Актуальность проблемы. Различные формы патологии почек характеризуются значительным наруиением иготунного статуса организма, выражающегося в снижении фагоцитарной активности полл-нохфноялерных лейкоцитов, уменьшении количества и угнётенпи функциональной активности Т-лимфоцитов, увеличении количества В-лигифоцитов, дисбалансе регуляторных субпопуляций шлмуноцитов а различных классов иммуноглобулинов, росте титров противопо-чечных антител и повышении содержания иммунных комплексов в периферической крови (Л. Т.Теблоева и др., 1986; Г.Н.Дранншс,1989; а. А.Коровина И др., 19" J; Havertjr И др., 1987).

При различных фортках гломерулонефрита, хронической почечной недостаточности (ХИН) и уремии в крови людей и животных натапливаются высокомолекулярные факторы, угнетающие розетко-образование ( líodai и др. ,I9SI;Ras)cova в др. ,1981), проли-£ератавную активность Т-лимфоцитов ( Raska , I983;Schnaper а др., 1985; Chena и др., 1989; Ramio и др., 1989), антите-юзавпсга.гуа и спонтанную цитотоксическую активность клеток крови { Raskova И др., 1981).

. Низкомолекулярнке итлмукосупрессорные факторы обнаруживается Б крови и моче больных ХПН ( Takaohi и др.,1979; Ка -sata, И др., 1933 ; Rol a-Ple звсгупэЬА п др., 1983; Hiese и ;р., 1986). Есть основания считать, что тшуноглодулирущие ректоры крови и мочи играют существенную роль в нарушении и№-(¡ункого статуса больных различными формами глонерулоне$рита.

Невпяснекш?.! остается вопрос о налнчзга ^.¡уяомодулпруто-5!х факторов в крови и моче больных пиелонефритом.

- Пельа габоти было выявление ишуномодулнруюетх факторов

в крови и ыоче больных хроническим глоыерулокефрктом и хроническим шелокефритом, выл снега а возможности использования этого признака для да@ерекцаальной диагностики указанных форм патологии почек.

Основные гзагачв работы; I) исследование влияния сыворотки крова и мочи больных хроническим гломерудонефрзтом и хроническим пиелонефритом на развитие различных форм табунного ответа у крыс Влстар; 2) исследование влияния белков сыворотки крови и ыочи болкннх хроническим гломерулонефритогл и 'хронически« пиелонефритом ва розексообрзаукщае свойства тккоцз:тов крыс Вистар; 3) выяснение хишческой природы и сопоставление антигенных свойств 11ммуномодул1!]пасаих факторов крови г. мочк боль-них; 4) репаняз вопроса о ди^ференциально-даагностаческой инфохштавноста тестов, оснсвашпо: на выявления в кровя и моче баяышх кмуномодулируъцш: ¿«кторов.

''луч; а я ковпаид» Установлено, что сыворотка крова и коча больных различными ¿¿оргааш хровяческого глснерулйШ'Лрита содержат автигсв№саецв&<чес!ки& фактор, супрессхруквди разштке гуморального яыцуиного ответа (ПК») " гнперчувстьктольнэсть зацадлекаого тенпа- (18?) у ксис Взмах"., к-ыунизпроваышх ах>ат-роцктамз бара»а (ЗЕ), л углога; -цп;: способность тз:.\:оцлтов крыс Вист-ар форшроьатьл--о^с1^! с ау^июгиадш.;:: згдтроцктана. Б кров» в мочэ йсшыхах хрокицосчзам ьиелоие^тол аналогичный во $ЛШ9Юц&ивщ свойствам тяумосупреосирува»а фактор не обка-руя

йакторц крови в моча ралыдо хрогтчееккм глс.-ч.рулоз!^-].:«-тои, супрессирувдие развитие различных «{юга ».цуыюго ответа при ксен'овоино;-,! переносо и улигсгвцио ро&егкосбразувдге овей-

сгва тиыоцигсз имеют молекулярную кассу, превнпетщую 150 кЦ и представляют собой глнкопротевды, близкие по антигенной специфичности.

Угнетение розегкообраэувдих свойств таюцптов крив под влиянием мочи болькнх является информативным лаборатории?.! признаком, позволяемом дифференцировать хронический гломеру-лонефрит и хронический пиелонефрит.

Практическая значимость. Разработан объективный способ учета выуаяенносга I3T, основанный на измерении сопротивления постоянному току мягких тканей конечностей экспериментальных животных, позволяющий учитывать развитие I3T в динамике. Способ применяется для оценки реакции ШГ в научных исследованиях на кафедрах микробиологии, биохимии, общей гигиены и в ЦШИ Курского медицинского института.

Предложен способ дифференциальной диагностики хронического гломерулонефрита и хронического пиелонефрита, оснований! ка угнетении розоткосбразующих свойств тямоцитов крыс Вистар под влиянием белкоз ночи больных. Новизна и полезность способа подтверждены положительным решенном по заявке ка изобретение. Способ используется ка кафедрах терапии и педиатрии Курского медицинского института и в клинических лабораториях базовых больниц города Курска. -

Апробация работы, ¡материалы исследования обсуждены на конференции молодых ученых Курского ордена Трудового Красного Знамени государственного медицинского института (I98S, 1987, 1988), Всероссийской конференции "Проблемы аллергических заболеваний" (Казань, I9SS), на научно-практической конференции "Актуальные вопросы практической педиатрии и детской хирур-

гии" (Орал, 1989).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 7 работ.

Объем и структура работы. Диссертация состоит из введения, обзора литература (главы I и 2), описания использованного материала и методов (глава 3), изложения собственных исследований (главы 4-6), заключения и синодов, Материалы диссертации изложены на 130 страницах машинописи, включая 28 таблиц, 5 рисунков, указатель использованной литература, содержащий 82 источника отечественной и 186 источников зарубежной литературы.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы исследования

Клинико-лабораторкие наблюдения осуществляли на здоровых донорах добровольцах (35 человек) и больных хроническими за-болеванияш почек (143 человека).

Экспериментальные исследования выполнены на 1040 кявот-нпх, в том числе на 1020 крисах Бистар массой 120-200 г а 20 беспороднях кролш-Ах кассой 3,0-3,0 кг.

Объектами исследования служили кровь к моча ладей, кровь, ткань селезенки, лимфоузлов и тимуса лабораторных жшотапх. Мочу бсишшх и здоровых людей стблралп из утренней порции, пропускала через бактериальные (ркльтри к доводили концентра-«а> белка до 0,2-0,5 мг/кя концелтрировокис:.! ь целлофане под вентилятором, после чего диолизовалк против 100-критиого об^с-!,5а 0,05 и фосфахного буфера, приготовленного па С, 15 .; ;.ло-ристом па^рик в точение 12-15 часов.

Концентрацию белка в сыворотке крови определяли биурехо-вш методом (В.3.Меньшиков в др., 1987), а в моче и хромато-графкческах фракциях но Брэдфорд (С.С.Шяшаан, 1932). Белки сыворотки крови разделяли солевым методом. Белки, внпадашие в осадок (ОБ), и белки, остающиеся в нздосадочной жвдкости (НБ) при 50$ насыщении сернокислым аммонием, диализовали аналогично моче. ОБ фракционировали на хроматографических колонках 1гКВ-2137, заполненных себадеясом С-150, НБ разделяли аналогично нп колонках, заполненных сефацексом 8--75. Фракции собирали на коллекторе фракций ультра-РАК-2 (Ь КВ). Выход белка из колонок контролировала регистратором самопишущим [.КВ-2210.

Для оценки молекулярной массы {м.м.) сывороточных белков, выделенных при фракционировании т сефадексе, определяли объем выхода белков с известной м.м. - кристаллического бычьего сывороточного альбумина, кристаллического овальбутяша, ингибитора трипсина, РНКазы (Г.Детермая, 1970).

Зйектрофорешческое разделение белков сыворотки крови и мочи проводили с помощь» диск-электрофореза в полиакрилашд-нон геле на приборе для электрофореза и злектрофокусировагош СРеанал, ВНР) (Л.А.Остерыай, 1981).

йчл^уномодулирзшщую активность хрома тографических фракций определяли путем однократного вяутрибршинвого введения их внтактшм животным в объеме, содержащем 0,5 иг белка на 0,1 кг масса тела о одновременной инъекцией антигена - ЭБ.

ТермоустоЙчивость определяли прогреванием актлвтк хрома то графических фракций при 56° или 60°С в течение I ч.

Химическую природу изучала ферлентацпей трипсином, папни-ном, нейраминэдазой и РНКазой при 37°С в точение I ч.

Лимфоциты сепарировали в градиенте йиколл-взрограйина (А.Н.Чередоев, 1976), определяли'количество Т-, В-, Д-, О-лим-фоцитов (Т.И.Гришина, СЛ«!юллер, 1978} и количество лимфоцитов, выявляемых в непрямой реакции мембранной пм^офлиоресцекцгш, с моноклоналышмн антителами ИКО- 12, 31, 86, 8? ( В.Шторх, Й.Эммрих, 1987). Концентрация иммуноглобулинов определялась методом радиальной игл»уирдиф<5узии ( b'ancini и др. , 1970).

В качестве тем антигена использовали ЗБ. При изучении

, о

ГШ у крис вводили однократно внутрпбркшшно в дозе 2,0x10 клеток ua 0,1 кг массы тела. Выраженность ШО после иммунизации оценивали по количеству антителообразувдих и розеткообра-зувщ:х меток СА.0К и РОК) в селезенке на 5 .сутки'после иммунизации. Число АОК устанавливали методом локального гемолиза по Хеше (ISS3), РОК - по Jonclai с ссавг. (1972).

ГЗТ у-крис нвдуцировали введением ЗБ. Выраженноетъ реакции в раде олитоь оцмшвали с помощью предложенного нами способа, ссиованного на учете разницы в сопротивления мягких тканой контрольной и опытной лапок крысц постоянно,электрическое току (З.А.Афанасьев, А..П.Конопля, "Способ определения гапорчувствп'х'олыгос:?]; замедленного типа" - рзц. предлокекне отраслевого значения li ¿>-3544 ох 16 марта IS90. г. ) с применении.; для а того специального электрода .и прибора (В,А. Афанасьев, А.И.Конопля, "Электрод для опредачекня гаг.зрчуьстзитель-костн замедленного типа у лаборатория: жюзотннх", "Ожотр-прцсзэдка к лабораторному рн-метру-милл^воль'х'мет'ру р1!-1Л" -рац. нродлсаония Je 726 и й 735 от IS шолл 1988 г.).

Для определения числа тагоцитов-, образуми^х роауки! с йутолоп;ч1П1"»: &ритрсцатами, кснолкзсшала тимовдя; spucu до и

после обработки сывороткой крови или диализата: мочи человека.

Для получения кроличьей антисыворотки использовался разработанный нами-способ (Л.И.Конопля, Я.Г.Прокопенко, Б.А.Афанасьев "Способ получения ангвсывороткя к иммуностимулирующему фактору" - рацпредложение £ 753-88 от 12 mom IS88 г.). В качестве антигена использовали активную иимупосулрессируйцую фракцию белков мочи, полученную при гельхроматографпи на ft- 150. Титры антител в полученной антисыворотке определяли реакцией непрямой гемагглютикации (Е.Кэбот, М.Мейер, 1988). Содержание антител, являющихся , определяли после разрушения IQM 0,2 М расгзором 2-меркаптоэтанола. Перед постанов-

о

кой реакции, сыворотки ик2кптфовали прогреванием при 56°С в течете 0,5 ч. Реакцию гемаггдюгпнации сгавнли в микротиг-рагоре си с теш Такачи.

Статистическую обработку цифрового материала проводили путем вычисления средней арифметической Ш) и среднеквадра-тического отклонения ( Б )• Существенность различий сред1шх ■ величин оценивали по кри теряю Стьвдента (Г.Ф.Лакин, 1973) и Вилкоксона-Манна-Уитни (Е.В.Хублер, 1978). Существенность разделения по диапазонам в рядах признаков'хронического плело-и глоиерулонефрнта оценивали по критерию Колмогорова-Смирнова, дифференциально-диагностическую информативность признаков -на основе информационной меры Кульбэха (E.B.iy&iep, 1978).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Клиническая характеристика наблюдавшихся больных

Под наблвдением находилось 143 больных с заболеваниями почек, в том числе 82 больных с- хроническим гломерулонефри-

том, 61 больной с хроническим пиелонефритом. Все больше обследованы в период обострения заболевания, а 17 больных обследовались повторно, в фазу ремиссии. Среди бальных с глоые-рулонефритоы преобладали гипертонический (33 случая), нефро-тячесгнй (12 случаев) и сиеиашшй (12) варианты. Среди обсле-доваюшх наш больных ХПН констатирована у 45 больных хроническим глоыерулонефрмом (ХШ I ст. - 29 больных, ХПН 2 ств-Д1лш - II больных, терминальная - 5 больных) куб больных хроническим пиелонефритом.

Сопутствующая яатсдогия других органов и систем выявлена у 68 бедьншг {в основном яесаедафзтаскиа заболевания респираторного тракта - 33 бояьннх).

?1ь!;з!ческсо обследование больных показало некоторую стертость клинической картины, что обуславливало трудность ди^фе-рогаиачъкого диагноза хрошческого гломерулонефрлта и пиелонефрита .

Анализ данных лабораторных методов исследований показал, что в некоторых случаях (по нашим данным до ЗС$ больных) ба-зогыо иотодн, такие как общий анализ мочи, интенсивность про-теикурии, селективность протеинурии и другие, не позволяют достоверно дифференцировать хронический гломоруло- и пиелонефрит. При биохимическом исследовании крови больных установлено, что у больных со смешанным и нофротичоскиы вариантами хронического глоыерулонофрита отменаэтся существенное снижение общего белка, диспротеинемия" с увеличенном ельфе-2-фрак-гаперхйлестеринеюш. У больных другими клиническими ьз-риантаим глоыерулонофрита досгэвор;щх изменений в биосами чеком статусе не выявлено. У больных хроническим пиелонефритом

в крови определялась гапергашаглобулянешя.

Изучен иммунологический статус больных. хроническим гломе-руло- а пиелонефритом. Установлено, что у больных хроническим глмедаоивфригои снижено количество Т-лкмфоцитов при нормальном содертатш В-, Д-, О-лимфоцитов, умеиьиено количество лимфоцитов, выявляемых моноклоналышми антителами ШЮ-87 (Т-клетки) и ЖО-31 (Т-судрессоры). и увеличено количество клеток, инденти-флцнруемнх антителам ЙКО-8б(1-хелперы) Уровень В-лимфоцитов, определяет антителами ЖО-12, оставался в пределах нор;,«. Концентрация иг-ауноглобулянов у больных хроническим глог.-сруло-нефритом не отличалась от концентрации в сыворотке здоровых людей. В имйуногрзмме -больных хроническим пиелонефритом существенных изменений клеточного звена иммунитета на выявлено, по отмечено повышение концентрации в еыворотке хсрови.

Полученные на?ш результаты показывают, что несмотря на статистически значимые нзг.генегшя биохимического и иммунологического статуса у больных хроническим гломеруло- и пиелонефритом, дифференциальный диагноз данных форм, по этим показателям эатрудщтелен из-за значительных индивидуальных колебаний в показателях.

Иммуногло^улирующие свойства снворотки крови и мочи при заболеваниях почек

Нарушение иммунного статуса больных с различными формами патологии почек может быть обусловлено появлением в их крови субстанций, обладающих иммуносупрессирующиш свойства.'«. Такие субстанции выявлены у больных ХПН и при длительном•течении некоторых форд гломерулоиефрита. Неяашм остается вопрос

о наличии имыуносупрессорных соединений в крови больных гломе-рулонефритом без ХЕШ, лщ длительно болеющих пиелонефритом.

Учитывая это, было исследовано влияние диализатов мочи, сывороток крови и их белковых фракций ка развитие ГЛО в ШГ, индуцированных ЭБ у крыс Вистар. Исследуемые сыворотки и диализаты мочи объединялись в пулы, включающие материал от 5-7 больных с различной почечной патологией - при определении влияния на ШО, или материал от каадого больного вводили 1-2 живот нш - при исследования влияния на развитие IST у крыс.

Установлено, что сыворотки крови - здоровых ладей и больных пиелонефритом не оказывают влияния на развитие ШО и IST у крыс. -Сыворотки же болышх с хроническим гломерулонефритом существенно угнетали выраженность обеих форы иммунного ответа у животлых. сто позволяет считать, что в сыворотке крови больных гломерулонефритом имеется видонеспецифическкй фактор (или фактора), обладающий ишлукосупрессоркшлк свойства!,«.

Исследования иммуномодулирующего эффекта диализатов мочи болишх с патологией почек показал;!, что диализаты здоровых лвдей и бслвных хроническим га;елонефритоы не оказывали существенного влияния на развитее F3T и Г» 10 у крис. Введение диализатов мочи болышх хроническим гдомарулонефритоы существенно снижало выраженность обеих форм иммунного ответа у крыс,- что свидетельствует о наличии в них нмлукосупрессирукда: факторов.

Химическая хаоаг.ториотака имт-укосупросструввих Факторов CUBOnCTKiy УПОЗИ ]; ;,;0ЧИ болышх хпоничоским гло.м5ПУ7.оло;Ьрпто?.;

Для реисния этого вопроса исгохчьзоваиа сыворогкс крови и моча 8 больных гломерулонефритом и 2 больных лиолокефрито.м.

Белки сыворотки крови фракционировали путем 50^-ного насыщения сернокислым аммонием. Иммуносупроссирутацая активность выявлялась в 0Б-50 только у больных гломерулонефритом. НБ-50 больных гломеруло- и ■ пиелонефритом отлиуномодулярующей активностью не обладали. 0Б-50 больных гломерулонефритом фракционировали на сефадексе £-150, при этом получено 2 белковые фракции. Иглмуносупрессирующей активностью обладала только фракция I,. выходиввая в объеме 35-45 мл (около 7С$ белка с молекулярной массой более 150 кД). Фракция Л при ксеногенном переносе не оказывала влияния на развитие ИЮ и 13Г. КБ-50 больных гломерулонефритом подвергала разделению на сефадексе S--75. При этом получены 3 фракции, которче при введении интактным жпвот-шил не влияли на развитие' ГОО и 1ST.

В дальнейшем исследовали термоустойчивоетъ и химическую природу выявляемых факторов. С этой целью фракцию I ОБ-50 больных гломерулонефритом прогревали в' точение I часа при 56°С или 60°С, или инкубировали с ферментами.■Установлено, что после прогревания фракция при 56°С активность ее существенно не изменялась, а после прогревагая при 60°С фракция становилась' неактивной. Фракция I'теряла лммуносупрессярующую активность после инкубации о папалнс-м, трипсином и нёйрамшшдазой, но сохраняла ее после инкубации с РНК-азой (таблД). Аналогичные результаты получены при исследовании белковых фракций ночи больных гломерулонефритом.

Результаты прсшедоншх исследований позволяет сделать вывод о том, что при хроническом гломерулонефрпте в крови и моче больных содержится недиалнзуеыый, относительно термостабялышй !!1.п.1уч:осупроссидувдй гликспротеид.

Ишуномодулирующая активность хроыатографнческой фракции I 0Б-50 больных хроническим гдоаерулонефритом после прогревания и обработки ферментами

№ пп

Условия опыта

:Число !крыс

• Количество

т,

тыс/орган

РОК, млн/орган

1. Контроль (без введения белковой фракции)

2. Введение фракции Г СБ-50 бальных хроническим гло-ыерулопсфритоц

3. Введение фракции I 0Б-50 после прогревания:

при' 56°С I ч

при 60°С I ч

4. Введение фракции I 0Б-50 после инкубации с:

папаиноц

трипсином

РНК-асо2

нейрашнадазой

9 21,9+2,2

10 5,4+0,7 Рт<0,05

4,8+0,9 Pj^Ö.05

22,4+2,9

, 9 10

'0,05

19,8+2,4 PI>'G,Ö5

20,9+2,2 PI>Ö,05

6,7+1,1 Pt^Ö,G5

10 21,2+3,7 Рг>0,05

120,7+13,8

26,7+7,2 PjCO',05

26,7+6,5 Pj^oTüö

104,1+10,2 PI>0,05

112,3+10,1 Pj>o7O5

106,6+8,2 Pj^OiOö

24,8+5,2 Pj<0,ö5

IC2,S^8,4 -p2>0,05

9

8

Серологическая характеристика пмнун осупресеп\rn~m" факторов сыворотки крови я мочи больных хроническим глоглоталоиойрито»

Для решения вопроса об антигенном сходстве итагуиосупрес-сирувдах факторов сыворотки крови и моча больных хроническим гломерулонефритом получена кроличья актисшюротка к белковой фракции мочи больных хроническим гломерулонефритоа, содержащей :;:.:иуносулрессирувщий фактор (ACIE), и антисыворотка к аналогичной по молекулярной масса фракции белксв больных хроническим пиелонефритом (АСГШ). Татр антител з обеих антисыворотках равнялся 1:256 - 1:512. Исследована возможность связывания им-муносуирессорного фактора фракции I OB-50 сыворотки больных хроническим глоыерулс;.- "оптом антителами ACHI и АСШ. С этой цель» фрзкциг.:. белков сыворотки больных двдей смешивали с ан-тиснвороткат.гй з соотнесении 1:5, 1:1. Оказалось, что зведешш ЛСГН не влияло на развитие ишузтого ответа у крыс» иммунизированных ЗБ. Орашхля I 0Б-50 сыворотки больных хроническим глокерулонефритом поел» инкубации с АСХН в соотношении 1:5 полностью теряло свойство супрессировать развитие шмунного ответа у крыс. Поело, инкубации с АСГН в соотношении 1:1 данная фракция частично теряла иммуносупрессируищие свойства (табл.2). Вероятно,, з порвем случае происходила полная, а во второй частичная нейтрализация антителами детврггинант супресслруацаго Фактора. Инкубация фракции I 0В-50 сыворотка больных хроническим- глоиерулснвфритсы с А.-СПН не вляяла ка аклуносуяросск-рухцую активность белков крови больных-хрокачесякл 'глшоруло-йсфрйтсм«

Для ярозорю! специфтостл действия АСШ ее источали ЭЯ, кагрухогаез.и беляамя фрездзк Г иочя беегьнцх xprmnonivm тло-

Влияние АСИ.на иммуномодулирувщее действие белков сыворотки крови больных хроническим гломерулонефритом и хроническим

пиелонефритом

Условия опыта Число : ; Количество

пп крыс : АОК, :тыс/орган РОК, : млн/оргзн

I. Контроль (без введения балксв

сыворотки крози) 9 23,6+2,7 94,8+10,2

2. Введение фракции I 0Б-50 боль- 8 21,8+2,2 92,5+9,7

ных хроническим пиелонефритом Pj>0,05 Pj^Ö.05

3. Вводе: ше АСЛ5 8 25,0+2,8 98,3+11,3

4. Введение фракции I 05-50 боль- 8 Р1>0,05 24,8+3,0 Рд- >0,05 96,8+10,8

ших хроническим пиелонефритом,

инкубированной с АСШ в cooiv Pj- >0,05 Pj>0,05

ношеник 1:5

5. Введение фракции I 0Б-50 бодв-нкх хроническим пиелонефритом, 8 22,9+2,8 91,7+10,0

инкубированной с ДСП! й соот- Pj>0,05 Рт>0,О5

ношении 1:1

6. Бзедезизе фракции I 05-50 боль- 10 11,5+1,3 . 50,8+5,6

ных хроническим гломерудонеф-ритои Р:<0,05 Pj<0,05

'7 • # Ззедонпо сракой I.0B-50 боль-хроническим гдс^ор^лонзфря- ю 22,3+2,5 93,0+9,2

том, иикублровагшой с АСШ,в- Рт>0,С5 Pj^O.05

соотношении 1:5

8. Введении I OB-SO соль- 16,4+1,8 77,6+8,4

нпл- хрозс:«:ес-:й.': ТО . ?т у-0,05 PI>0.05 P6>C,05

ркгом, с ЛСП; в cooTüf.aeinji: 1:1 г

мерулонефритом и хроническим пиелонефритом. В первом случав наблюдалось полное исчезновение антител (титр в реакад::: пассивной гемагглютинащш 1:2), во втором случае титры антител снижались до 1:16 - 1:32. После истощения АСШ белками мочи больных хроническим гломерулокефритом она теряла свойство влиять на иммуноыодудирувщую активность фракции I 0В-50 сыворотки больных хроническим гломерудопефритом, а после истощения белками мочи больных хроническим пиелонефритом А«И сохраняла свойство блокировать ншуносупрессируащке свойства болков крови больных, хроническим гломерулонефрятом.

Результаты этих экспериментов вполне убедительно доказывает антигенное сходство ишуносупрессируюддах субстанций, обнаруживаемых в крови и моче больных хроническим гломерулонеф-ритом.

Имьуносупрессицувдгю факторы сиворотки крови и мота как дг/ффеоетвдалько-диагностичосгдй признак

Наличие ишуносулресрируюпщх белков в крови и моче больных хроническим глоиерулонефритом и отсутствие таких субстанций в крови и моче большое пиелонефритом свидетельствует о возмоаиости использования этого признака для дифференциальной диагностики указанных заболеваний. Учитывая это, было исследовано влияние сыворотки крови и мочи больных хроническим гломеруло- и пиалокофритом на образование тимоцитами крыс Вис-тар розеток с аутологйчными эритроцитами. Исследована активность сыворотки.кровь, подученной с? 15 болышх гломерулонагра тон, 18 больных пиелонефритом и 20 здоровых лиц. Установло-по, что сыворотки крови здоровых лиц и большое пиелонефритом

не влияют ка свойство тимоцигов крыс формировать розетки с аутологичными эригроцихаж, а сыворотки' крови больных гломе-рулонефритом угнетают розеткообразовакие.

Исследовано ташке влияние мочн больных на розеисообразо-вание гкмоцитами крыс Висгар. Установлено, что диализат мочи здоровых ладей и бальных хроническим пиелонефритом не влиял на число розеток, образуемых тшоцитами крыс с аутологичными эритроцитам. Вместо с тем,, яшодигы крыс, обработанные иочой больных гломерулснефритом, формировали меньшее количество ауто-РОК чем тиноциты, не инкубированные с мочой. Наибольший супрессорный зффокт отмечен"при исследовании мочи больных с нефротическим вариантом хронического гломерулонефрита (табл. 3).

Учитывая эти данные, ааыи предложен способ дифференциальной диагностики хронического гломерулонефрита и хронического пиелонефрита, заключающийся в том, что в диализате мочи больного инкубируют ишоциты крысы Вкстар. Обработанные и необработаннее таким образом теыоцятк используют для постановки реакции -розеткооСразования с аугологичпьш эритроцитами. Уменьшение кодичесгга формирующихся ауто-РОК до 10-14$ по сравне-' ¡с!» с Ц-22$ в контроле свидетельствует о заболевании хронически.«.; гломерулонефритсы (а.с. В 1594428).

Возможность применения предложенного нами. способа для да^чфеидаялгшй диагностика указанных форм патологии ставит вопрос об относительной дагфференць-^ьно-диагностичесной информативности этого признака в'ряду гутах признаков, оцени-эае:л!Х при д^кеоекцгольнон дпагкоотаг.о отпх заболеваний.

Способность мочи больных с различной почечной патологией подавлять образование тимовдгамя крысы розеток с аутоло-гичныыи эритроцитам

Характеристика доноров пп' мочи

ЯКОДЯЧОСТВО

: доноров : ко чи

Ауто-РОК,

X. Здоровые люди; 18

2. Больные хроническим 44

пиелонефритом

3« Больше хроническим гломеру- 26 лонефрктом (гипертонический вариант)

4. Болыше хроническим гломеру-- 16 лонефритом (латентный период)

5. Больные хроническим гломеру- ^ лонефритом (нефротический. вариант)

6. Больные хронически!.; гломеру- 7 лонефритом (смешанный вариант)

19,6+0,8 19,0^0,7 ?2>0,05

14,8+0,6

Рх<0,05

15,£¡¿0,6

11,7+0,5 Р^О.О!

?4<0,05

13,0+0,3 ?1<С,05

Примечание: необработанные диализатом нот такогяти образовывала 2й,2%±0,8 розеток с аутадагсчшш

признаков оценена ла основе инфорлацноиксЛ н&г^' ^уьй-^са, Вн--сокош^адрыатнвиыш по юша данным оказалась 4 яогазат&гч: концентрации белка в мсч<э» оу?сч;ая прогогауряя, отеки, боли в поясничной области (соотво^стзьико - 5,6; £■; 3,7; 3,2). Информативность таких показателей, кай.лейкохс^лял«- артериальное давление, относительно низ:-з (ссютасгстлелно 2,6 п 2,4), непнформакшнкы оказалось определение ка-сглеетаз згпт-

роцитов в моче '(информативность 0,8} , что, видимо, можно связать с налагаем большого числа больных с вторичным пиелонефритом.

Информативность предложенного наш способа определения икмупосупррссирувдего фактора в кече больных гломерулонефри-том, основанного на угнетении способности тимоцитов крысы образовывать розетки после их обработки мочой больных, оказалась равной 4,5, что позволяет отнести его к - высокоинформативным спосооам.

С целью оптимизации дифференциально-диагностического процесса нам:: разработка специальная таблица, диагностический поиск по которой ведут до достижения определенного порога , после достижения которого решение принимается с заданной-вероятностью в пользу одного из дифференцируемых заболеваний, в нагем 'случае хронического гломерулс- или пиелонефрита.

Предложенный нами способ дифференциальной диагностики можно отнести к ьысококнфориат.таным, однако различие числа розеток, образуемых тгиоцитама крысы с аутологичными эритроцитами, после обработки их мочой больных хроническим гломеруло-и лиелокеооитом невелико. С целью усиления феномена угнетений розеткообразованкя нами использована АСГН. Зри этом исходил* из того., что инкубируя обработанные мочой больного гломерулояефритом тимоциты с сильно разведенной АЙН, получи« экранирование ка гишоитах ^ьцопторов к ауталогичным гргтлоцитам, за счет образуем'.« имм/н.-л комплексов. Полученные результаты сьлдетелъст,чу»г о тем, ч.'О к«;/аззеденн8Я АСГц :мк*б-.,Г'Овачкпл с обработанными мочой вольных тимошггэды вы-

Влияние АСШ на образование ауто-РОК тимоцитамп крыс инкубированными с мочой больных хроническим глсмерулонофритои и хрокичемжи ялелонефритом

Тклоцц ты, использованные для поста-: Число до-': хш:новки реакции розеткообразованпя норов мочи:

Количество. ауто-РОК, $

1. Тимоциты, необтаботанньге мочой и АСШ

2. Тимоциты, инкубированные с мочой больных хроническим гло:.юрулонс1:ритом 15

3. Тимоциты, обработанные керезведйеной 'АСШ " '

4. Тимоциты, шгыубя: ..за ннце с мочой 15 болыжс глайацулонефвнтэлг I! обработанные норазведенной АСШ

5« Тимоциты, нккубиооза'кше с г.точол

больных глсйерулонефитсг.! и обтабо- 15 танпыо АСШ, разведешой в 5 раз

6. Тимоцятц, авизированные с мочой больных ГДОМв¿»улоне&рптои л обркбо- 15 тайные АСШ, разведёнкой з Ю-pao

7. Тимоциты, инкубированные с ?,:очой больных тло.-ер/лодефрнто;.! л обрабо- 15 такнке- АСШ, разведенной в ICO раз

8. Тимоциты, инкубированные с мочой бодьких паадскефригоа я обработан- 15 ные неразведенпои АСШ

0. Ъиоцкты, ИНХП'бИТЮЕОККЦе с мсчой

Солг-;шх пиелонефритом и обвзботзн- 15 ни о АСШ, разведенной в 5 раз

10. Тнмоцнти, ннкуСягюъаптю с мочой больных яаолопе5хитсм и- обработан- 15 кие ACHÍ, разведённой а 1С раз

11. нгкуенг.мгпшо с мо-'сн больных га;0Л0::аГ:Ьг.;'0д1 обработан- 15 кыо ACHI, разведенной л JGC ans

21,3+1,0

13,7+0,4 Р^О.05

20,1+0,8 Pj- >0,05

слипание тамоцлтов

слипание тинотдатов

7,6+1,0 Pj<' 0,05

o,4z0,9 ?2< 0,05

22,4+1.1 ?т>0,05

20,6+0,9 Рг>5,05

20,0+0,9 ?т>0,05

21,4+1,1 Pj>0,05

эывала слипание последних, если же перед инкубацией ACIH разводили в 10 или 100 раз, го происходило усиление феномена угнетения розеткообразования. Обработка тимоцитиь ыочой больных пиелонефритом и последующая их инкубация.с АСШ - не влияла на способность тимоцигов к розеткообразованшэ (табл.4)• Это свидетельствует о. специфичности усиления феномена угнетения розеткообразования для гломерулонефрита. Таким образом, применение АСГН позволяет существенно увеличить интервал между числом розеток при гломерулонефриге и при пиелонефрите в предложенном наг»га тесте. Вследствие этого информативность теста повышается.

ВЫВОДЫ

1. Крепь а ыоча иийыщх хроническим гломерулонефритом содержит факторы, антигеннеспецифически супрессирувдие развитие rao и IST кцдуцированные ЭБ.у крас Вистар. В крови и моче больных хроническим пиелонефритом аналогичные факторы не обнаружены»

2. Шшушсупрессирующие факторы крови и мочи больных хроническим глоыерулонефритом не диализуются, относительно терлсн. стабшаш, инактивируются па па ином, трипсином и нейрашнида-зой, но не чувствительны к действию ИЖ-азы.

3« Кроличья антясыворотка к ишуносупрессирующей фракции белков мочи больных хроническим глоыерулокефритом специфически блокирует активность имцукосупр^сируювдх факторов крови п чочи больных хронически?,: глоыерулонепритом.

4. Сыворотка крови а моча бельяых хроническим гломерулонефриге;,: угнотаат способность гинсцитсв крыс Зистар форгл!ро-

вать розетки с аутодогичными эритроцитами. Сывороткз крови и моча больных хроническим пиелонефритом но влияют на образование тимоцитами крыс розеток с аутологичннмя эритроцитами. Вн-ражекность феномена угнетения розеткообразовазгая маяет быть увеличена.с помощью АС1Н.

5. Угнетение способности тимоцитоз формировать розетки с аутологачными эритроцитами под влиянием сыворотки крови и моча больных хроническим гломерулонефритом и усиление этого феномена под влиянием кроличьей анткскворотки к белкам мочи болышх хроническим гломерулонефрнтоы мояет быть использовано в качестве диффере1П51ально-диагностических признаков для разграничения хронического гломерудонефрита и хронического пиелонефрита.

6, Дцффсренцнально-диагностичосгсая информативность тестов, основанных ка угнетении аутологичного розеткообсозовЕ-кня, соизмерима с информативностью другш: лабораторных тестов, часто используемых в настоящее время при дифференцировании хро1шческого гдомврулонефрита а хронического ппелокоф-рита.

Работа, опубликованные по теме диссертации

1. йлмуксмоду^ирута^пе факторы мочи болышх гломерулонсй-ритом. Депонирована в ВИНИТИ 4.05.87. 'Л ЗП5-В87, Курск, 1937-, 10 с. (в соавторстве с 0.А.Афанасьевой).

2. ¡кпяние спзороткл I' мочи болышх хровдчес::им гло?.:ору-лонефритом па аллергические реакции у лабораторных жгастних

/ ?сэ.до:«. Всоро-з.глиф. ал,\орг::чзс:-уо. саболс-вота*.".

*ци.'— С. 3—4.

3. Способ диффершоргальной диагностики хронического гло~ мсгулонефрита и пиелонефрита. Сборник "Ученке вузов Курска -народно:,?;,' хозяйству". ItypcK. - 1S88. - С. 110 (в соавторство

с A.Z.Конопля, Л.Г.Прокопенко, А.С,Афанасьевым).

4. И'л'укосупрессирукзщие факторы крови и мочи больных гло^ерулонефрнтом и пиелонефритам. Род.журн. "Тер. архив". i-I., I93S, 13 с. (Деп. в ШО "СЬюэ«единфоргли S.02.I989.

I7II7) (в соавторстве с А.И.Конопля, Л.Г.Прокопенко).

5. 1умэральный днп:битор в сыворотке крови к моче детей, боды-iüx хроническим гломеруло- и пиелонефритом. Тез. докл. ■цоучнэ-празткческой конференции "Актуальные вопросы практической педиатрии ¡: детской хирургии", Орал, IS89, - С.66-67 (в соавторстве с А. й. Коноши, Л.Г.Прокопенко).

6. :&тс;ла?вчоская оценка дифференциально-диагностической информативности признаков заболеваний. Методические рекоыен-;;ац:г.: для студентов к врачей различного профиля / Под ред. Л.Г.прокопекко, А.С.Афанасьева. - Курск, 1989. - 15 с. (в сойзгорстзэ с 2.Н.Конопля и И.Л.Ласковой).

7. A.c. I204425 (СССР) "Способ дифференциальной диагностики хронического глогзерулонефрита к хронического гкело-

' 01 .4 33/53 (в соавторство с А.К.Конопля, Л.Г. Лрокопекхо, А.С.Афанасьевым).