Автореферат и диссертация по медицине (14.01.22) на тему:Клинико-диагностическое значение определения антител к эластину и эластазе у больных системной красной волчанкой с использованием иммобилизованной формы магниуправляемого сорбента

На правах рукописи

005001782

МАТАСОВА Наталья Алексеевна

КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИТЕЛ К ЭЛАСТИНУ И ЭЛАСТАЗЕ У БОЛЬНЫХ СИСТЕМНОЙ

КРАСНОЙ ВОЛЧАНКОЙ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ИММОБИЛИЗИРОВАННОЙ ФОРМЫ МАГНИТОУПРАВЛЯЕМОГО

СОРБЕНТА

(14.01.22 - Ревматология)

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

2 4 НОЯ 2011

Волгоград-2011

005001782

Работа выполнена в Учреждении Российской академии медицинских наук Научно-исследовательском институте клинической и экспериментальной ревматологии РАМН и Государственной бюджетной организации высшего профессионального образования «Волгоградском государственном медицинском университете» Минздравсоцразвития РФ

Научный руководитель: доктор медицинских наук,

профессор Гонтарь Илья Петрович.

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, Профессор Чижов Петр Александрович

доктор медицинских наук, профессор Заводовский Борис Валерьевич

Ведущая организация: ГБОУ ВПО «Российский

национальный исследовательский медицинский университет им. Н.И. Пирогова» Минздравсоцразвития РФ.

Защита состоится «_»_2011 г. в_часов на

заседании Специализированного Совета Д 208.008.02 Волгоградского государственного медицинского университета по адресу: 400131, г. Волгоград, пл. Павших борцов, 1.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГБОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет» Минздравсоцразвития России.

Автореферат разослан «_»_2011 г.

Ученый секретарь Диссертационного Совета Д.м.н., профессор

А. Р. Бабаева

Актуальность проблемы

По социально-экономическим последствиям системная красная волчанка (СКВ) занимает первое место в группе системных поражений соединительной ткани ввиду ее широкого распространения среди населения разных стран, преимущественного поражения лиц трудоспособного возраста и высокой инвалидизации. Распространенность СКВ находится в диапазоне от 0,13 до 1,22 случаев на 1000 населения, заболеваемость - от 1,8 до 27,1 случаев на 100 000 населения с большими различиями между популяциями. Так, в Европе около полумиллиона человек страдают СКВ, в США данный показатель приближается к 250 000. Большую часть пациентов составляют женщины детородного возраста (от 30 до 50 на 100 000 тысяч человек) [Bertsias G. et al., 2008; Hochberg M.C., 1990].

Последние пять десятилетий характеризуются увеличением продолжительности жизни больных системной красной волчанкой. Применение практически всего арсенала существующих в медицине противовоспалительных и цитотоксических препаратов в качестве основных элементов комплексной терапии позволило существенно улучшить прогноз при этом тяжелом заболевании и повысить пятилетнюю выживаемость пациентов до 90% [Клюквина Н.Г. и др., 2005; Лисицина Т.А., 2010; Соловьев С.К. и др., 2009; Doria A. et al., 2006]. Разработанные стратегии иммунологического вмешательства, связанные с тотальным облучением лимфоидной системы или костного мозга с последующей пересадкой стволовых клеток не только позволили продлить жизнь ранее безнадежным больным, но и добиться в ряде случаев стойкой ремиссии заболевания (Демин A.A. и др., 2010; Краснова Т.Н., 2008].

Несмотря на достигнутые успехи, частота смертельных исходов у больных СКВ в 3 - 5 раз выше по сравнению с общей популяцией. [РешетнякТ.М. и др., 2007, Hristea D. et al., 2007]. По данным аутопсий в Москве летальность от СКВ за 2002 год составила 12,7% среди всех смертельных исходов от ревматических заболеваний [Эрдес Ш. и др., 2003; Демина А.Б., 2005]. Причины этого многообразны. Увеличение продолжительности жизни больных на фоне иммуносупрессивной терапии сопровождается ростом числа кардиоваскулярных осложнений, в первую очередь связанных с развитием раннего атеросклероза [Насонов Е.Л., 2003; Ильина А.Е. и др., 2005; Roman M.J. et al., 2003]. Нельзя игнорировать и другие осложнения иммуносупрессивной терапии: опухолевый рост, оппортунистические инфекции (туберкулез, микозы), характеризующиеся стремительным развитием и неблагоприятным исходом [Решетняк Т.М. и др., 2007; Гульнева М.Ю. и др., 2008; Cervera R. et al., 2006; Bernatsky S. et al., 2006].

Показатели инвалидизации при СКВ остаются одними из самых высоких среди ревматических заболеваний. Ключевую роль играет и

мультисистемность поражения, приводящая к полиорганной недостаточности, и молодой возраст пациентов, требующий ускоренного проведения экспертизы трудоспособное™. Так, средний возраст больных СКВ к началу заболевания составляет 27,1 ±11,8, к моменту выхода на инвалидность - 34,0±10,4 [Фоломеева О.М. и др., 2001].

Курация пациентов с СКВ является экономической проблемой для здравоохранения развитых стран. Наряду с прямыми затратами, такими, как дорогостоящая диагностика, комплексное медикаментозное лечение, систематическое лабораторное и инструментальное обследование с целью коррекции терапии, существенный вес обретают и непрямые затраты: снижение и утрата трудоспособности, нередко - преждевременная смерть, вторичное бесплодие и т.д. [Зборовская И.А., 1999]. Исследования, проведенные одновременно в трех странах - США, Канаде и Великобритании показали, что прямые затраты на лечение больных СКВ практически не отличались, составляя около $5000 в год на одного больного, несмотря на существенные различия в организации и финансировании систем здравоохранения этих стран [Clarke А.Е. et al., 1999]. Непрямые ежегодные затраты, связанные с СКВ, могут превышать $22000 на одного больного [Clarke А.Е. et а!., 2000].

Разработка и совершенствование новых методов ранней диагностики и эффективной дифференциальной диагностики системных заболеваний соединительной ткани признана приоритетным направлением современной ревматологической науки. Основополагающими критериями подобных разработок является не только клиническая, но и экономическая эффективность и целесообразность [Насонова В.А., 2001].

Многочисленные исследования показали, что иммуноферментные методы анализа с использованием иммобилизированных гранулированных препаратов с магнитными свойствами на основе антигенов нуклеиновой, липидной и белковой природы в полной мере отвечают указанным требованиям. Преимущества метода заключаются, в первую очередь, в повышении стабильности иммобилизированного биополимера, а также возможности регенерации сорбента, что ведет к значительному экономическому эффекту. Кроме того, иммобилизация биологически активных веществ в поверхностном слое гранулы создает высокую концентрацию антигена именно в реакционно-активной зоне, что повышает чувствительность твердофазных методов анализа. Включение магнитного материала в гранулы дает возможность ускорить и упростить манипуляции на всех этапах исследования, улучшая качественные характеристики определений и увеличивая число обрабатываемых проб. Указанные преимущества делают этот

метод экономичным и легко применимым в практической медицине [Гонтарь И.П., 2006; Зборовский А.Б., 2001].

Гранулированные препараты с магнитными свойствами уже были использованы для усовершенствования иммунодиагностики СКВ и выявления антител к ДНК, РНК, каталазе, церулоплазмину, фибронектану и другим биополимерам. С помощью высокочувствительного метода специфические антитела обнаруживались уже на начальных стадиях заболевания, что позволило решить вопросы ранней диагностики и прогнозировать клинический вариант СКВ [Маслакова Л.А., 1999; Сущук Е.А., 2002; Кочнева Л.И., 2005].

Значение изучения эластина определяется большой распространенностью его в качестве основного белкового компонента эластических волокон в органах и тканях, подвергающихся большим деформациям под воздействием нагрузок (связки, кожа, легкие, сосуды). В катаболизме эластина принимают участие ферменты с широкой субстратной специфичностью - эластазы. Именно от равновесия системы эластин - эластаза зависит физиологическое функционирование органов и тканей, содержащих эластические волокна.

Антителообразование к эластину и эластазе при ревматических заболеваниях представляет собой малоизученную проблему. Предполагается, что при СКВ имеет место антителиндуцированное нарушение обмена эластина, приводящее к появлению измененных растворимых изоформ с последующим включением механизмов аутоиммунитета.

Имеющиеся в литературе данные об исследовании антител к эластину и эластазе при системной красной волчанке единичны и противоречивы [Gminski J. et al., 1990; Spronk F?.E. et al., 1996; Nishiya K. et a!., 1997; Zhao M.H. et al., 1998; Nassberger L. et al., 1990; Lyons R. et al„ 2005], а также не содержат анализа изучаемых аугоантител в зависимости от характера течения, активности и клинических форм заболевания. Не проводилось также изучения возможных корреляционных связей меяаду компонентами системы эластин - эластаза и антителами к ним при данном заболевании. В связи с этим, использование иммобипизированных форм эластина и эластазы в исследовании антителообразования к ним при СКВ представляется весьма актуальной задачей, направленной на улучшение качества иммунодиагностики этого заболевания и обозначающей перспективы изучения отдельных механизмов его патогенеза.

Цель работы

Целью настоящего исследования являлось усовершенствование иммунологической диагностики, дифференциальной диагностики и

прогнозирование клинического варианта течения системной красной волчанки с помощью иммобилизированных форм эластина и аласгазы.

Задачи исследования

1. Получить иммобилизированные формы эластина и эластазы, изучить их физико-химические свойства;

2. Адагтторовать иммуноферментный метод анализа с использованием иммобилизированных форм эластина и эластазы к изучению образования антителкним;

3. Изучить содержание антител к зластану и эласгазе у больных системной красной волчанкой и здоровых лиц. Исследовать данные показатели и корреляционные связи между ними у больных СКВ в зависимости от активности патологического процесса, длительности, характера течения и клинических вариантов заболевания;

4. Исследовать взаимосвязь процессов аугоантителогенеза к апастину и эласгазе у больных СКВ;

5. Изучить содержание антител к эластину и эласгазе в сыворотке крови больных ревматоидным артритом, болезнью Шегрена, системными васкулитами, включенных в контрольную группу, и оценить значение изучаемых показателей для дифференциальной диагностики ревматических заболеваний.

Научная новизна работы

Впервые для диагностики СКВ созданы и применены в варианте иммуноферментшго метода анализа иммобилизированные препараты эластина и эластазы, подобраны оптимальные концентрации антигенов и определены условия проведения ИФА с использованием ИГАП.

В ходе работы в сыворотках крови больных СКВ обнаружены антитела к эластину и эласгазе. Показано, что их уровень достоверно отличается от содержания данных антител в сыворотке крови здоровых лиц и лиц контрольной группы. Выявлена корреляция между уровнем антител к эластину и эластазе и значениями индексов активности SLAM и SLEDAI. Установлено, что максимальные значения исследуемых антител наблюдаются при поражении кожи, суставов и волчаночной васкулопатии.

Практич еская ценность

Разработана доступная для применения в клинических лабораториях методика иммуноферментного определения уровня антител к эластину и эластазе на основе иммобилизированных гранулированных препаратов с магнитными свойствами. Выявление антител к эластину и эластазе в предложенной методике ИФА может быть использовано в качестве дополнительного теста для диагностики и дифференциальной диагностики системной красной волчанки, оценки активности и прогнозирования клинического варианта заболевания.

Основные положения, выносимые на защиту

На защиту выносится положение о возможности определения антител к эластину и эластазе с помощью методов иммуноферментного анализа на основе иммобилизированных антигенных препаратов с магнитными свойствами у больных СКВ. Исследование антител к эластину и эластазе может быть использовано в качестве дополнительного теста для диагностики и дифференциальной диагностики системной красной волчанки, оценки активности и прогнозирования клинического варианта заболевания.

Публикации

Основные положения диссертации изложены в 11 печатных работах, из которых 6 - в местной печати и 5 - в центральной, в том числе 4 - в изданиях, рекомендованных ВАК.

Апробация работы

Материалы диссертации были представлены на ежегодной научной конференции молодых ученых и студентов с международным участием «Актуальные проблемы экспериментальной и клинической медицины» ВолГМУ (2009 - 2011 г.г.); конференции «Актуальные проблемы современной кардиологии и терапии». - Киров, 2009 г.

Первичная экспертиза диссертации была проведена на совместном заседании Учреждения Российской академии медицинских наук Научно-исследовательского института клинической и экспериментальной ревматологии РАМН и кафедры госпитальной терапии ГБОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет» Минздравсоцразвития РФ 9 сентября 2011 года (протокол №4).

Внедрение в практику

Методы определения антител к эластину и эластазе иммуноферментным методом с использованием иммобилизированных антигенных препаратов с магнитными свойствами внедрены в практику работы МУЗ ГКБ СМП №25 г. Волгограда.

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 157 страницах машинописного текста и состоит из введения, 5 глав, содержащих обзор литературы, клиническую характеристику исследуемых групп, методы исследования, результаты собственных исследований, их обсуждение, выводы, практические рекомендации и приложения. Диссертация иллюстрирована 22 таблицами и 11 рисунками, приведено 3 выписки из историй болезни. Указатель литературы

содержит 353 источника, в том числе 131 - отечественных и 222 -зарубежных.

Методы исследования

Исследование проводилось в соответствии с принципами Хельсинкской декларации Международной медицинской ассоциации, принятой в 1996 году, и рекомендациями по этике биомедицинских исследований. Соблюдение требований биоэтики подтверждено результатами экспертизы Регионального этического комитета.

Для выполнения поставленных задач были сформированы группа больных с верифицированной СКВ и контрольная группа. В состав последней были включены пациенты с ревматическими заболеваниями, которые наиболее часто вызывают затруднения при дифференциальной диагностике с СКВ: ревматоидный артрит, болезнь Шегрена и системные васкулиты [Клюквина Н.Г., 2006; Насонов E.J1., 2009]. Отбор больных в обе группы производили среди пациентов, находившихся на стационарном лечении с марта 2007 года по ноябрь 2009 года в ревматологических отделениях МУЗ «Городская клиническая больница №25» г. Волгограда и «Городская клиническая больница №1 им. С.З. Фишера» г. Волжского.

Критерии включения для больных СКВ

1. Возраст: 18 лет и старше;

2. Наличие информированного согласия на включение в исследование;

3. Наличие 4 и более диагностических критериев СКВ по классификации ACR в редакции 1997 г.;

4. Срок, прошедший с момента установления диагноза СКВ - не менее 6 месяцев.

Критерии исключения для больных СКВ

1. Лекарственно-индуцированная волчанка;

2. Беременность и лактация;

3. Алкогольная и наркотическая зависимость;

4. Наличие злокачественного новообразования любой локализации;

5. Наличие тяжелых сопутствующих заболеваний: терминальная почечная недостаточность, сахарный диабет с декомпенсацией углеводного обмена, хроническая сердечная недостаточность III - IV функциональных классов или III стадии по классификации Стражеско и Василенко, хроническая дыхательная недостаточность III степени, выраженное нарушение функции печени.

Критерии исключения из контрольной группы совпадали с таковыми для больных СКВ, кроме пункта №1.

Верификацию диагноза у больных контрольной группы производили с помощью общепринятых критериев: для ревматоидного артрита - по международным диагностическим критериям ACR [Arnett F.C. et al., 1988], для системных васкулитов - по международным критериям ACR 1990 г. с учетом номенклатуры, разработанной на Чапел-Хиллской Международной согласительной конференции в 1994 г. [Arend W.P. et al., 1990; Lightfoot Jr R.W. et al„ 1990; Hunder G.G. et al„ 1990; Masi A.T. et al., 1990; Jennette J.C. et al„ 1994], для болезни Шегрена - по Европейским критериям 1993 г. [Vitali С. et al., 1993].

Из совокупности больных СКВ 72 пациента удовлетворяли критериям включения, из них 7 (9,7%) удовлетворяли критериям исключения. При формировании контрольной группы критериям включения соответствовали 63 человека, из них 6 (9,5%) удовлетворяли критериям исключения. Всего для исследования было отобрано 65 больных СКВ и 57 человек другими ревматическими заболеваниями, составившими контрольную группу.

Диагноз СКВ верифицировался с помощью диагностических критериев ACR в редакции 1997 года. Активность и течение СКВ определяли по клиническим и лабораторным критериям, предложенным В.А.Насоновой (1972г.), в соответствии с рабочей классификацией клинических вариантов течения СКВ. Также для оценки активности СКВ применяли валидные и верифицированные индексы Systemic Lupus Activity Measure (SLAM) и Systemic Lupus Erythematosus Disease Activity Index (SLEDAI), рекомендованные к использованию при проведении исследований и клинических испытаний у больных СКВ [Isenberg D., 1999, Wluka А.Е., 1997). Оценку необратимого ущерба для здоровья производили с помощью индекса Systemic Lupus International Collaborating Clinics / American College of Rheumatology Damage Index (SLICC/ACR DI) [Gladman D. et al„ 1996; 1997].

Для установления нормальных характеристик изучаемых лабораторных показателей использовали референтную группу, состоящую из 30 практически здоровых лиц - доноров Волгоградской областной станции переливания крови (19 женщин и 11 мужчин в возрасте от 22 до 50 лет), прошедших тщательное медицинское обследование.

Обработка полученных результатов проводилась с использованием программных пакетов «EXCEL 5,0», «STATISTICA 6,0» и «SPSS 12.0» for Windows, а также по оригинальным программам с использованием формул, приведенных в соответствующих руководствах [Зайцев В.М. и др., 2003].

В качестве антигенов были использованы коммерческие препараты компании «SIGMA-ALDRICH» (США): препарат эластазы

панкреатической из панкреатической железы свиньи (Elastase pancreatic from porcine pancreas, Cat. № E1250) и препарат эластина из легкого человека (Elastin from human lung, Cat. № E7152).

Антитела к эластину и эластазе определялись твердофазным иммуноферментным методом с использованием иммобилизированных гранулированных препаратов (ИГАП). Иммобилизацию производили методом эмульсионной полимеризации в потоке газообразного азота с включением магнитного материала в структуру полиакриламидного геля [Зборовский А.Б., Гонтарь И.П., 2001]. Результаты учитывали на ИФА-ридере Multiskan EX (Thermo Electron Corporation, Шанхай, КНР) при длине волны 490 нм. Полученные значения выражали в условных единицах оптической плотности (е.о.п.), которые вычисляли как разность между средним значением оптических плотностей исследуемого образца и средним значением фона.

В ходе измерения использовали найденные нами оптимальные уровни концентрации иммобилизированных эластина (1,5 мкг/мл), эластазы (2,5 мкг/мл) и рабочего разведения сыворотки (1:200). Результат измерения считали положительным при превышении точки разделения, вычисленной при сопоставлении значений доноров и больных СКВ посредством ROC-анализа (программа SPSS 12,0 for Windows, SPSS Inc., США, 2003 г.). В случае превышения точки разделения 0,104 е.о.п. для антител к эластину и 0,113 е.о.п. для антител к эластазе значения оптической плотности считали отражающими концентрацию изучаемых антител, в противном случае результат считали отрицательным.

Клиническая характеристика исследуемых групп

В результате отбора были сформированы две группы. Основную группу составили 65 больных СКВ, контрольную - 57 больных другими ревматическими заболеваниями: ревматоидным артритом, болезнью Шегрена, системными васкулитами (рис.1).

Рисунок 1. Нозологическая структура контрольной группы.

29.:

□ Ревматоидный артрит Ш Системный васкулит ■ Болезнь Шегрена

Сравнение наиболее важных параметров основной и контрольной групп представлено в таблице 1.

Таблица 1. Сравнительная характеристика основной и контрольной групп___________

Показатель Больные СКВ (п=65) Контрольная группа (п=57) Р

1. Пол, п (%) Женщины Мужчины 60(92,3%) 5(7,7%) 52(91,2%) 5(8,8%) 0,621 0,984

2. Средний возраст, лет; M (s) 42,5 (12,1) 50,6(28,3) 0,054

3. Средняя длительность болезни, лет; M(s) 8,4(6,7) 7,4(6,1) 0,657

4. Средний возраст на момент начала заболевания, лет; M (s) 29,6 (10,5) 35,0(14,8) 0,346

5. Инвалидность, п (%) Нет III группа II группа I группа 17(26,2%) 21(32,3%) 27(41,5%) 0(0,0%) 17(47,4%) 19(33,3%) 20(17,5%) 1(1,8%) 0,959 0,347 0,0642 0,975

6. Активность заболевания, п (%) Минимальная Умеренная Высокая 18(27,7%) 40(61,5%) 7(10,8%) 19(33,3%) 32(56,1%) 6(10,6%) 0,946 0,748 0,882

M - выборочное среднее, s - выборочное стандартное отклонение.

Достоверных различий между больными СКВ и контрольной группой по рассматриваемым параметрам выявлено не было.

Среди больных СКВ было 60 женщин (92,3%) и 5 мужчин (7,7%) в возрасте от 18 до 68 лет. Средний возраст больных составил 42,5±12,1 лет. Инвалидность по основному заболеванию имели 48 человек, что составило 73,9% от общего числа пациентов.

Минимальная активность заболевания выявлена у 18 человек (27,7%), умеренная - у 40 (61,5%), высокая - у 7(10,8%) пациентов. Среднее значение индекса SLAM у больных исследуемой группы составило 10,2 ± 6,7 (диапазон значений от 2 до 28), для индекса SLEDAI - 5,1 ± 3,4 (диапазон от 0 до 23).

При оценке течения СКВ по критериям В.А. Насоновой были получены следующие результаты: у 7 пациентов (10,8%) имело место острое течение СКВ, у 47 (72,3%) - подострое и у 11 (16,9%) -хроническое.

и

Среднее значение индекса БЫСС/АСЯ 01 составило 3,6 балла (диапазон значений от 1 до 14 баллов).

Медиана продолжительности болезни в наблюдаемой группе составила 8,4±6,7 лет (диапазон от 1 до 29 лет).

Поражение кожных покровов было самым распространенным клиническим проявлением СКВ в опытной группе - 81,5% от общего числа обследованных. Классические изменения в виде скуловой эритемы выявлялись у 31 пациента (47,7%). Дискоидные очаги обнаруживались у 13,8% наблюдаемых. Фотосенсибилизация отмечена у 41,5% больных. Поражение слизистых оболочек в виде рецидивирующего афтозного стоматита, хейлита и энантемы диагностировано у 26,1% обследованных.

Из проявлений поражения костно-мышечной системы наиболее часто встречался суставной синдром (81,5% от общего числа больных), миалгии и миозиты наблюдались у 38 пациентов (58,5%), тендиниты - у 3 человек (4,6%).

Вовлечение в патологический процесс центральной нервной системы наблюдалось у 40% больных.

Серозиты (плеврит, перикардит) выявлялись у 23 больных. В половине случаев они носили бессимптомный характер, являясь диагностической находкой при ЭхоКГ - исследовании (расслоение листков перикарда) и рентгенографии органов грудной клетки (утолщение междолевой плевры).

Поражение сердца в виде миокардита, проявлявшегося типичными изменениями ЭКГ, кардиалгиями, нарушениями ритма и проводимости наблюдалось у 11 пациентов (16,9%), однако, недостаточность кровообращения выше II ФК не развивалась. Поражение клапанного аппарата сердца (недостаточность и пролапс митрального клапана, недостаточность аортального клапана) обнаружены у 9 (13,8%) пациентов опытной группы.

Волчаночная нефропатия была диагностирована в 46,5% случаев, преимущественно у больных с острым и подострым течением заболевания. Нефротический синдром наблюдался у 7 пациентов.

По данным рентгенологического исследования и анамнестически легкие вовлекались в патологический процесс в 16,9% случаев. В основном, был диагностирован локальный и диффузный пневмосклероз, реже - пневмонит, клинически характеризующийся рецидивирующей дыхательной недостаточностью.

Поражение сосудов в опытной группе преимущественно характеризовалось явлениями артериальной недостаточности (синдром Рейно), который наблюдался у 41,5 % больных. Капилляриты, сетчатое ливедо, геморрагический и язвенно-некротический васкулит имели место у 18 человек (27,6%).

Синдром Шегрена был диагностирован у 5 пациентов опытной группы.

Гепатомегалия отмечалась у 12,3 % больных.

Цитопенический синдром (анемия и/или лейкопения, и/или тромбоцитопения) наблюдался у 35 пациентов.

Подавляющее большинство больных СКВ - 63 человека (96,9%) принимали ГКС системного действия. Пульс-терапию с использованием метилпреднизолона получали 7 из них. У принимавших ГКС per os средняя доза в пересчете на преднизолон составляла 20-25 мг/сутки (от 5 до 60 мг/сутки). Антималярийные препараты (плаквенил 200 и 400 мг/сут.) получали 2 пациентки. Цитостатические препараты: (азатиоприн, метотрексат, циклофосфамид) в дополнение к ГКС и в качестве монотерапии (в одном случае) принимали 27,6% больных. В качестве средств симптоматической терапии в опытной группе применялись НПВП, дезагреганты, ангиопротекторы, бисфосфонаты, метаболиты, диуретики, гипотензивные и гиполипидемические средства.

Медиана продолжительности госпитализации составила 35 дней (диапазон от 14 до 62 дней).

Результаты собственных исследований и их обсуждение

Содержание антител к эластину

При исследовании сывороток крови лиц референтной группы на наличие антител к эластину распределение оптической плотности соответствовало нормальному типу: коэффициент Колмогорова-Смирнова - 0,704 при р=0,604. Среднее значение М составило для группы в целом - 0,050 е.о.п., стандартное отклонение SD (а) - 0,027 е.о.п., ошибка репрезентативности m - 0,004 е.о.п., 95% доверительный интервал для М (95% ДИ) - 0,039-0,063 е.о.п. Достоверных различий в содержании антител в зависимости от пола и возраста в рассматриваемой группе выявлено не было.

Среднее значение антител к эластину у лиц контрольной группы составило 0,088±0,031е.о.п., 95% ДИ: 0,074-0,095 е.о.п. Частота выявления антител для группы в целом -17,3%. Частота выявления антител к эластину и их концентрация не демонстрировали статистически значимых изменений в зависимости от пола и возраста (р>0,05).

Антитела к эластину были выявлены у 27 (41,5%) больных основной группы, составляя в среднем 0,135±0,077 е.о.п., 95% ДИ для М - 0,126-0,147 е.о.п. Отмечены статистически значимые различия в исследуемом показателе у больных СКВ по сравнению с лицами контрольной и референтной групп (р<0,05).

Достоверных различий в частоте выявления исследуемых антител и их концентрации в зависимости от пола и возраста больных СКВ выявлено не было (табл.2).

Таблица 2. Антитела к эластину в зависимости от возраста и пола больных СКВ

Показатель Пол Возраст, лет

Женщины Мужчины Менее 31 31-40 Более 40

Число наблюдений, п 60 5 22 21 22

Частота АТ к эластину, % 41,7% 40,0% 40,9% 38,1% 45,5%

Концентрация АТ к эластину, е.о.п. М о т 0,136 0,080 0,005 0,133 0,075 0,006 0,139 0,067 0,005 0,134 0,073 0,007 0,135 0,078 0,004

Нами были проанализированы изменения концентрации антител к эластину у больных с различной степенью активности СКВ, оцененной по шкалам SLAM, SLEDAI и с использованием критериев В.А. Насоновой. В таблице 3 представлено содержание антител к эластину у больных СКВ в зависимости от активности заболевания (по критериям В.А. Насоновой) на различных этапах лечения.

Повышение уровня антител к эластину выявлено у 33,3% больных СКВ с I степенью активности патологического процесса (6 человек), 42,5% со II степенью активности (17 человек) и у 57,2% с максимальной степенью активности (4 человека). Подобные закономерности выявлены и при использовании шкал SLAM и SLEDAI, что обусловлено тесной корреляционной связью между имеющимися способами оценки активности воспалительного процесса.

Концентрация антител к эластину у больных СКВ при поступлении в стационар была достоверно выше уровня аналогичного показателя у доноров (р<0,001) и лиц контрольной группы (р<0,05). Статистически значимые различия (р<0,05) выявлены и между группами больных СКВ с различной степенью активности заболевания, при этом отмечалось повышение уровня антител по мере ее возрастания. Выявлена прямая корреляция между уровнем антител к эластину и значениями индексов активности SLAM (г=0,379, р=0,03) и SLEDAI (г=0,427, р<0,01).

Анализ динамики изучаемых показателей в процессе лечения не показал статистически значимых изменений антител к эластину перед выпиской из стационара (р>0,05). В ряде случаев наметилась тенденция к нормализации уровня исследуемых антител, но ни в одной из групп они не достигли нормальных концентраций за весь период наблюдения.

Таблица 3. Влияние активности СКВ на частоту выявления и концентрацию антител к эластину

Контингент, Частота Антитела к эластину, е.о.п.

число наблюдений выявления До лечения, После

(п) антител к М лечения,

эластину, о М

п(%) т о

т

Больные с 1

степенью активности 6(33,3%) 0,109 0,107

заболевания 0,053 0,049

(18) 0,010 0,008

Больные со II

степенью активности 17(42,5%) 0,137 0,140

заболевания 0,072 0,068

(40) 0,006 0,007

Больные с III

степенью активности 4(57,1%) 0,164 0,149

заболевания 0,082 0,065

(7) 0,004 0,004

Все больные СКВ

(65) 27(41,5%) 0,135 0,134

0,077 0,069

0,009 0,007

Контрольная группа

(57) 10(17,5%) 0,088 0,084

0,031 0,038

0,008 0,005

Вариабельность частоты выявления и концентрации антител к эластину оценивали в зависимости от показателей, характеризующих развитие патологического процесса на всем его протяжении, включая продолжительность основного заболевания, характер течения СКВ (по классификации В.А. Насоновой) и количество баллов по шкале

БИСС/АСР 01, отражающее объем необратимого повреждения организма вследствие заболевания.

Данные о содержании антител к эластину при различных вариантах течения СКВ представлены в таблице 4. Как видно из таблицы, повышение уровня антител к эластину наблюдалось у 4 больных с острым течением заболевания (57,1%), 19 - с подострым течением (40,4%) и 4 - с хроническим (36,4%). При анализе количественных показателей выявлено, что средняя концентрация антител к эластину во всех группах превышала рассчитанную границу нормы и была достоверно выше, чем в контрольной группе (р<0,001). Разница между показателями антител к эластину в группах с различным течением СКВ также была статистически достоверной, что обусловлено тесной корреляцией между степенями активности и характером течения СКВ.

Таблица 4. Влияние характера течения СКВ на частоту выявления и концентрацию антител к эластину

Контингент, Частота Антитела к эластину, е.о.п.

число наблюдений выявления До лечения, После

(Л) антител к М лечения, М

эластину, о о

л(%) т т

Больные с

хроническим 0,107 0,108

течением 4(36,4%) 0,028 0,023

(11) 0,009 0,005

Больные с

подострым 0,138 0,129

течением 19(40,4%) 0,042 0,021

(47) 0,007 0,007

Больные с острым

течением 0,164 0,149

(7) 4(57,1%) 0,082 0,065

0,004 0,004

Все больные СКВ

(65) 27(41,5%) 0,135 0,134

0,077 0,069

0,009 0,007

Контрольная 0,084

группа 10(17,5%) 0,088

(57) 0,031 0,038

0,008 0,005

Уровень антител к эластину в представленных группах, как в начале лечения, так и перед выпиской из стационара колебался в небольших пределах, что не обусловило статистически достоверных различий (р>0,05). Несмотря на тенденцию к снижению содержания исследуемых антител в отдельных подгруппах и в группе больных СКВ в целом, нормализации данных показателей в процессе лечения выявлено не было.

Больные СКВ с наличием антител к эластину не демонстрировали достоверных отличий от пациентов без указанных антител по длительности заболевания. При анализе статистической взаимосвязи продолжительности болезни с исследуемым показателем достоверной корреляции у больных СКВ обнаружить не удалось (табл. 5). Также не отмечено статистически значимых изменений индекса БИСС/АСК 01, ассоциированных с наличием антител к эластину.

Таблица 5. Влияние продолжительности заболевания на частоту выявления и концентрацию антител к эластину

Показатель Продолжительность заболевания

Менее 5 лет 5-10 лет 10-15 лет 15-20 Лет Более 20 лет

п 14 26 13 8 4

Частота выявления антител к эластину, п(%) 6(42,8%) 11(42,3%) 5 (38,5%) 3(37,5%) 2(50%)

Уровень антител к эластину,е.о.п. М о т 0,140 0,063 0,007 0,134 0,051 0,011 0,136 0,053 0,008 0,131 0,031 0,005 0,133 0,048 0,013

Взаимосвязь между выявлением антител к эластину и наличием определенного клинико-иммунологического варианта СКВ исследовали, характеризуя последний в соответствии со спектром поражения органов.

В группе пациентов, положительных по антителам к эластину, наиболее частыми клиническими проявлениями были: поражение кожи - 26 человек (96,3%), суставов - 25 (92,6%), мышц - 15 (55,6%), АНФ - 17 (60,7%), АТ к дсДНК - 20 (74,1%) и васкулит - 16 (59,3%). Однако в большинстве из перечисленных групп данный показатель не существенно отличался от частоты выявляемое™ антител к эластину

в группе больных без соответствующего клинического признака. В связи с этим, только увеличение частоты васкулопатии являлось статистически достоверным (р<0,001).

Таблица 6. Различия спектра поражения отдельных органов в зависимости от наличия антител к эластину у больных СКВ

Орган (система) или клинический признак Частота поражения органа, п (%)

При наличии АТ к эластину При отсутствии АТ к эластину

Кожа 26(96,3%) 27(71,1%)

Суставы 25(92,6%) 28(73,7%)

Мышцы 15(55,6%) 23(60,5%)

Васкулит 16(59,3%) 2(5,3%)

Серозные оболочки 10(37,3%) 13(34,2%)

Легкие 5(18,5%) 6(15,8%)

Эндокард и миокард 9(33,3%) 9(23,7%)

Нервная система 12(42,9%) 14(36,8%)

Почки 14(50,0%) 16(42,1%)

Анемия 9(32,1%) 13(34,2%)

Лейкопения 12(42,8%) 16(42,1%)

Тромбоцитопения 2(7,1%) 6(15,7%)

АФС 5(17,9%) 3(7,9%)

Синдром Рейно 14(50,0%) 13(34,2%)

Синдром Шегрена 1(3,6%) 4(10,5%)

Гепатомегапия 3(10,7%) 5(13,2%)

Антинуклеарные антитела 17(60,7%) 20(52,6%)

Антитела к дсДНК 20(74,1%) 33(86,8%)

В таблице 7 представлены описательные характеристики групп больных СКВ, имеющих различные клинические признаки заболевания, с указанием уровня значимости различия с группой больных СКВ без соответствующего проявления. Анализ результатов показал, что статистически значимое повышение концентрации антител к эластину также выявляется только в группе больных с сосудистыми поражениями (р<0,05).

Таблица 7. Концентрация антител к эластину в зависимости от наличия клинико-иммунологических проявлений у больных СКВ

Орган (система) или клинический признак Концентрация антител к эластину, е.о.п. М+ЭО Уровень значимости, Р

Больные с наличием проявления Больные без проявления

Кожа 0,152±0,082 0,129±0,078 0,052

Суставы 0,133+0,071 0,137 ±0,082 0,078

Мышцы 0,130±0,061 0,138+0,098 0,061

Васкулит 0,161±0,099 0,101+0,070 0,002

Серозные оболочки 0,12910,067 0,152±0,093 0,056

Легкие 0,132+0,071 0,137±0,064 0,074

Эндокард и миокард 0,136±0,074 0,134 ±0,087 0,072

Нервная система 0,134±0,093 0,138±0,087 0,065

Почки 0,143±0,091 0,128±0,097 0,058

Анемия 0,133±0,071 0,139±0,092 0,060

Лейкопения 0,134 ±0,084 0,138±0,071 0,063

Тромбоцитопения 0,146±0,088 0,122±0,054 0,057

АФС 0,137±0,076 0,133±0,083 0,067

Синдром Рейно 0,120+0,101 0,156+0,064 0,053

Синдром Шегрена 0,133±0,054 0,139±0,071 0,069

Гепатомегалия 0,148±0,085 0,121+0,054 0,055

Антинуклеарные антитела 0,144+0,064 0,126±0,076 0,054

Антитела к дсДНК 0,132±0,072 0,138±0,082 0,066

Анализ взаимосвязи между содержанием антител к эластину и дебютом заболевания был проведен с целью выявления зависимости развития определенного клинико-иммунологического варианта СКВ от наличия исследуемых антител. Как видно из представленных в таблице 8 данных, при СКВ отмечается высокая частота и повышение концентрации антител к эластину у больных с «поздним» (старше 40 лет) дебютом заболевания. Однако ввиду малой численности данной подгруппы изменения были статистически недостоверными (р>0,05). В контрольной группе подобные закономерности выявлены не были.

Таблица 8. Влияние дебюта СКВ на частоту выявления и концентрацию антител к эластину

Показатель Возраст к началу заболевания, лет

До 20 21-30 31-40 41-50 Старше

лет лет лет лет 50 лет

п 7 33 17 7 1

Частота

выявления

антител к эластину, "(%) 3(42,9%) 12(36,4%) 5 (29,4%) 6(85,7%) 1(100%)

Уровень

антител к

эластину,е.о.п. М 0,124 0,132 0,128 0,148 0,145

о 0,023 0,018 0,024 0,016 0,020

т 0,009 0,010 0,007 0,012 0,014

Содержание антител к эластазе Исследование сывороток крови здоровых лиц на наличие антител к эластазе показало, что распределение оптической плотности изучаемого показателя у лиц референтной группы соответствует нормальному типу: коэффициент Колмогорова-Смирнова - 0,990 при р=0,281. Не характерных для нормального распределения частот, которые могли быть обусловлены наличием специфических антител, выявить в референтной группе не удалось. Среднее значение антител к эластазе (М) составило 0,095 е.о.п., стандартное отклонение о (БЭ) - 0,009 е.о.п., ошибка репрезентативности т - 0,004 е.о.п., 95% доверительный интервал для М (95% ДИ) - 0,090-0,100 е.о.п.

Среднее значение антител к эластазе у лиц контрольной группы составило 0,104±0,043е.о.п„ 95% ДИ: 0,094-0,115 е.о.п. Частота обнаружения антител к эластазе для группы в целом составила 21,1% (12 человек). Анализ частоты выявления и уровня антител к эластазе в зависимости от нозологической группы не проводился ввиду малого числа наблюдений отдельных заболеваний. Не было выявлено статистически значимых изменений изучаемого показателя в зависимости от пола и возраста больных контрольной группы (р>0,01).

Из 65 находившихся под нашим наблюдением больных СКВ антитела к эластазе были обнаружены у 78,5% (51 человек). Среднее их значение составило 0,158±0,067 е.о.п., 95% ДИ для М - 0,143-0,177 е.о.п. Достоверных различий в частоте выявления исследуемых

антител и их концентрации в зависимости от пола и возраста больных СКВ выявлено не было (р>0,01) (табл.9).

Отмечены статистически значимые различия в исследуемом показателе у больных СКВ по сравнению с лицами контрольной группы (р<0,01).

Таблица 9. Антитела к эластазе в зависимости от возраста и пола больных СКВ

Показатель Пол Возраст, лет

Женщины Мужчины Менее 31 31-40 Более 40

Число наблюдений, п 60 5 22 21 22

Частота AT к эластазе, % 78,3% 80,0% 77,2% 80,9% 77,2%

Концентрация AT к эластазе, е.о.п. М о т 0,158 0,071 0,002 0,159 0,017 0,008 0,156 0,030 0,004 0,160 0,082 0,006 0,157 0,078 0,003

При сравнении групп больных СКВ с различной степенью активности патологического процесса и референтной группы методом дисперсионного анализа были выявлены статистически значимые различия для антител к эластазе (р<0,001).

Концентрация антител к эластазе на различных этапах лечения и частота их выявления в зависимости от степени активности заболевания (по критериям В.А. Насоновой) представлены в табл. 10.

Повышение уровня антител к эластазе выявлено у 72,2% больных СКВ с I степенью активности патологического процесса (13 человек), 80,0% со II степенью активности (32 человека) и у 85,7% с максимальной степенью активности (6 человек). Концентрация антител к эластазе у больных СКВ при поступлении в стационар была достоверно выше уровня аналогичного показателя в контрольной группе (р<0,01). Статистически значимые различия (р<0,05) выявлены и между фуппами больных СКВ с различной степенью активности заболевания, при этом отмечалось повышение уровня исследуемых антител по мере ее возрастания. Выявлена прямая корреляция между уровнем антител к эластазе и значениями индексов активности SLAM (г=0,352, р<0,05) и SLEDAI (г=0,414, р<0,01).

Патогенетически выявленные закономерности объясняются значительной В-клональной экспансией у больных СКВ по мере повышения активности патологического процесса. Иммунологически на данном этапе наблюдается гиперпродукция аутоантител к различным антигенам, в том числе к эластину и эластазе, приводящая к аутоиммунному повреждению органов и тканей. Не случайно отдельные нарушения манифестируют именно на пике активности заболевания, завершая печальную картину полиорганного поражения.

Таблица 10. Влияние активности СКВ на частоту выявления и концентрацию антител к эластазе

Контингент, число наблюдений (п) Частота выявления антител к эластазе, «(%) Антитела к эластазе. е.о.п.

До лечения, М о т После лечения, М о т

Больные с I степенью активности заболевания (18) 13(72,2%) 0,123 0,047 0,008 0,127 0,051 0,003

Больные со II степенью активности заболевания (40) 32(80,0%) 0,159 0,094 0,007 0,156 0,075 0,008

Больные с III степенью активности заболевания (7) 6(85,7%) 0,185 0,102 0,008 0,179 0,085 0,009

Все больные СКВ (65) 51(78,5%) 0,158 0,067 0,008 0,154 0,039 0,006

Контрольная группа (57) 12(21,1%) 0,104 0,043 0,009 0,102 0,041 0,006

Анализ динамики антител к эластазе в процессе лечения не показал статистически достоверных изменений изучаемого показателя (р>0,05). Исходя из этого, можно предположить, что антитела к

эластину и эластазе не относятся к динамическим показателям, подвергающимся значимым изменениям в процессе кратковременной иммуносупрессивной терапии и не могут быть использованы как критерии эффективности лечения на стационарном этапе. В то же время выявленная взаимосвязь между исследуемыми показателями и активностью заболевания предполагает снижение антител в процессе лечения, возможно, это происходит в более поздние сроки, что требует дальнейшего наблюдения за их уровнем.

Данные о частоте выявления и уровне антител к эластазе в зависимости от характера течения СКВ представлены в табл. 11.

Таблица 11. Влияние характера течения СКВ на частоту выявления и концентрацию антител к эластазе

Контингент, Частота Антитела к эластазе, е.о.п.

число наблюдений выявления До лечения, После

(п) антител к M лечения, М

эластазе, a о

п(%) m т

Больные с

хроническим 0,152 0,149

течением 8(72,7%) 0,042 0,044

(11) 0,006 0,008

Больные с

подострым 0,154 0,148

течением 37(78,7%) 0,062 0,046

(47) 0,004 0,005

Больные с острым

течением 0,185 0,179

(7) 6(85,7%) 0,102 0,085

0,008 0,009

Все больные СКВ

(65) 51(78,5%) 0,158 0,154

0,067 0,039

0,008 0,006

Контрольная 0,Ю2

группа 12(21,1%) 0,104

(57) 0,043 0,041

0,009 0,006

Повышение уровня антител к эластазе наблюдалось у 6 больных с острым течением заболевания (85,7%), 37 - с подострым течением (78,7%) и 8 - с хроническим (72,7%). При анализе количественных

показателей выявлено, что средняя концентрация антител к эластазе во всех группах превышала рассчитанную границу нормы и была достоверно выше, чем в контрольной группе (р<0,001).

Между фуппами с хроническим и подострым течением СКВ не обнаружено достоверных различий по содержанию антител к эластазе (р>0,05), в то время как у больных с острым течением исследуемый показатель был достоверно выше, чем в указанных группах (р<0,01). Несмотря на тенденцию к снижению содержания исследуемых антител в процессе лечения, нормализации данных показателей перед выпиской из стационара выявлено не было.

При анализе статистической взаимосвязи продолжительности болезни с исследуемым показателем достоверной корреляции у больных СКВ обнаружить не удалось (табл. 12). Также не отмечено статистически значимых изменений индекса ЭИСС/АСЯ 01, ассоциированных с наличием антител к эластазе.

Таблица 12. Влияние продолжительности заболевания на частоту выявления и концентрацию антител к эластазе

Показатель Продолжительность заболевания

Менее 5 лет 5-10 лет 10-15 лет 15-20 лет Более 20 лет

п 14 26 13 8 4

Частота выявления антител к эластазе, п(%) 11(78,5%) 20(76,9%) 10(76,9%) 7(87,5%) 3(75%)

Уровень антител к эластазе,е.о.п. М о т 0,154 0,056 0,004 0,159 0,073 0,006 0,160 0,084 0,005 0,155 0,061 0,006 0,157 0,069 0,008

Анализ содержания антител к эластазе был проведен в соответствии с наличием или отсутсвием того или иного клинико-лабораторного проявления СКВ. Необходимость подобного анализа определена важностью прогнозирования конкретного клинического варианта заболевания, поскольку чувствительноть висцеральных проявлений к терапии глюкокортикоидами, цитостатическими препаратами и хинолиновыми производными различается. Отрицательная динамика иммунологических показателей на этапе слабовыраженных проявлений нарушений функции отдельных

органов и систем в дебюте заболевания или в период стойкой ремиссии в ряде случаев дает толчок к ужесточению терапевтической тактики, способствуя торможению аутоиммунного поражения систем и прогрессирования органной недостаточное™. Подобная предупредительная тактика дает возможность не только назначить (усилить) органоспецифическое иммуносупрессивное лечение, используя меньшие дозы препаратов, тем самым снизив частоту побочных эффектов терапии, но и сократить сроки достижения ремиссии, избежать экстренной госпитализации и назначения дорогостоящей симптоматической терапии.

Таблица 13. Различия спектра поражения отдельных органов в зависимости от наличия антител к эластазе у больных СКВ

Орган (система) или клинический признак Частота поражения органа, п (%)

При наличии АТ к эластазе При отсутствии АТ к эластазе

Кожа 50(98,0%) 3(21,4%)

Суставы 49(96,1%) 4(28,6%) •

Мышцы 30(58,8%) 8(57,1%)

Васкулит 17(33,3%) 1(7,1%)

Серозные оболочки 17(33,3%) 6(42,8%)

Легкие 9(17,6%) 2(14,3%)

Эндокард и миокард 14(27,5%) 4(28,6%)

Нервная система 21(41,2%) 5(35,7%)

Почки 23(45,1%) 7(50,0%)

Анемия 16(31,3%) 6(42,8%)

Лейкопения 21(41,2%) 7(50,0%)

Тромбоцитопения 6(11,8%) 2(14,3%)

АФС 7(13,7%) 2(14,3%)

Синдром Рейно 20(39,2%) 7(50,0%)

Синдром Шегрена 4(7,8%) 1(7,1%)

Гепатомегалия 6(11,8%) 2(14,3%)

Антинуклеарные антитела 28(54,9%) 9(64,2%)

Антитела к дсДНК 41(80,3%) 12(85,7%)

В группе пациентов, положительных по антителам к эластазе (51 человек), наиболее частыми клиническими проявлениями были-поражение кожи 50 (98,0%), суставов - 49 (96,1%), мышц - 30 (58,8%), почек - 23 (45,1%), нервной системы - 21 (41,2%). Наличие васкулита и полисерозитов отмечалось у 17 человек (33,3%), анемии - у 16 (31,3%), лейкопении - у 21 (41,2%), синдрома Рейно - у 20 (39,2%). АНФ выявлялся у 28 (54,9%), антитела к дсДНК - у 41 (80,3%) пациентов. Однако статистически значимое различие с негативной по антителам к эластазе группой больных СКВ (р<0,01) было отмечено лишь при наличии поражения кожи, суставов и васкулопатии.

Таблица 14. Колебания концентрации антител к эластазе в зависимости от наличия клинико-иммунологических проявлений у различных подгрупп больных СКВ

Орган (система) или клинический признак Концентрация антител к эластазе, е.о.п. M±SD Уровень значимости, Р

Больные с наличием проявления Больные без проявления

Кожа 0,179±0,102 0,13210,068 0,018

Суставы 0,175+0,077 0,13810,072 0,021

Мышцы 0,162±0,091 0,150±0,082 0,069

Васкулит 0,186±0,098 0,10810,064 0,001

Серозные оболочки 0,144±0,085 0,16910,103 0,062

Легкие 0,14910,071 0,16410,078 0,057

Эндокард и миокард 0,15710,088 0,158+0,092 0,077

Нервная система 0,16510,089 0,14910,102 0,060

Почки 0,14510,086 0,16310,084 0,068

Анемия 0,15910,062 0,15710,086 0,074

Лейкопения 0,155Ю,079 0,16010,106 0,063

Тромбоцитопения 0,16010,078 0,154+0,108 0,063

АФС 0,153+0,084 0,16110,094 0,058

Синдром Рейно 0,14710,108 0,16410,074 0,072

Синдром Шегрена 0,14910,074 0,16610,104 0,059

Гепатомегалия 0,15410,075 0,16010,112 0,065

Антинукпеарные антитела 0,15910,076 0,15510,086 0,071

Антитела к дсДНК 0,139±0,064 0,17110,057 0,055

В таблице 14 представлены описательные характеристики групп больных СКВ, имеющих различные клинические признаки заболевания, с указанием уровня значимости различия с группами больных СКВ без соответствующего проявления.

Анализ содержания концентрации антител к эластазе у больных СКВ с поражением различных органов и систем показал, что достоверное их повышение наблюдается во всех рассматриваемых группах, превышая медиану значений исследуемого показателя в контрольной группе (р<0,01).

Наиболее высокие уровни исследуемых антител, статистически достоверно превосходящие данные показатели в группах с другими клинико-лабораторными признаками, отмечались у пациентов с поражением суставов и васкулитами (р<0,01). Помимо этого, отмечено достоверное различие по концентрации антител к эластазе между пациентами с кожной, суставной симптоматикой и васкулитами и больными, у которых указанные проявления отсутствовали (р<0,001).

Выявленные закономерности, по-видимому, обусловлены несколькими механизмами: во-первых, прямым повреждающим действием антител к эластину на органы, функциональная недостаточность' которых тесно связана с несостоятельностью системы эластических волокон; во-вторых, инактивацией активных центров эластазы специфическими антителами, что приводит к нарушению физиологической деградации эластина, "старению" тканей и повышению их чувствительности к различным физическим воздействиям (например, фотосенсибилизация). Очевидно, что "дефектный" эластин обладает большей иммуногенностью и играет роль стимулятора аутоантителогенеза.

Вовлечение в патологический процесс органов, богатых эластином (связочного аппарата, суставов, кожи и сосудов), наблюдавшееся у больных опытной группы, сопровождалось в большинстве случаев повышением антител как к эластину, так и эластазе. Среди больных с васкулопатиями, положительными по исследуемым антителам, часто имело место сочетание различных проявлений сосудистой патологии: капилляритов и язвенно-некротического васкулита, сетчатого ливедо и аортита и т.д. Это свидетельствует не только о комбинации различных механизмов в развитии аутоиммунных васкулопатий - эндотелиальной дисфункции, повышенного тромбообразования и раннего атерогенеза, но и об определенной роли специфических аутоантител, вызывающих нарушение структуры и эластичности сосудистой стенки. Способствуя возникновению и усугублению всех выше названных механизмов, антитела к эластину и эластазе являются своеобразными предикторами развития сосудистой патологии при СКВ.

Анализ взаимосвязи между содержанием антител к эластазе и дебютом заболевания не выявил достоверных различий между

рассматриваемыми группами (р>0,05). Повышение медианы значений изучаемых антител отмечалось в группе больных старше 40 лет, однако ввиду малой численности данной подгруппы изменения были статистически недостоверными.

В соответствии с полученными результатами была проведена количественная оценка эффективности использования определения антител к эластину и эластазе для дифференциальной диагностики СКВ с другими аутоиммунными ревматическими заболеваниями. Характеристические кривые исследуемых параметров показали удовлетворительные параметры для использования их в качестве диагностических тестов (рис. 2,3).

Площадь под кривой (AUC) для антител к эластазе составила 0,967 (95% ДИ 0,849 - 0,978), для антител к эластину - 0,938 (95%ДИ 0,912 - 0,957). Для обеих переменных отличие кривых от диагонали (AUC=0,5, диагностически незначимый тест) было статистически значимым (р<0,001).

Рисунок 2. Характеристическая (ROC) кривая антител к эластазе в диагностике СКВ.

Поиск точек разделения между исследуемыми группами производили, руководствуясь максимальной суммой значений чувствительности и специфичности. Точкой разделения, удовлетворяющей этому требованию, для антител к эластазе являлось значение 0,113 е.о.п. (при этом чувствительность составила 85,0%, специфичность - 91,2%), а для антител к эластину - 0,104 е.о.п., (чувствительность - 36,4 %, специфичность - 78%).

Рисунок 3. Характеристическая (ROC) кривая антител к эластину

в диагностике СКВ.

Принимая во внимание достоверные отличия характеристических кривых от диагонали (А11С=0,5) и наличие точек разделения с пригодными для использования операционными характеристиками, возможно сравнение тестов по определению антител к эластину и эластазе с общепризнанными маркерами СКВ (табл.15).

Таблица 15. Сопоставление чувствительности и специфичности диагностических тестов.

Маркер Чувствительность, % Специфичность, %

Антитнуклеарные антитела 93% 49%

Антитела к нДНК 54-57% 84-98%

Антитела к Бт- 30% 96%

антигену

Антитела к эластину 36% 78%

Антитела к эластазе 85% 91,2%

Таким образом, ИФА-исследование антител к эластину и эластазе при СКВ по специфичности и чувствительности сопоставимо с широко используемыми тестами диагностики данного заболевания.

Образование антител к эластину и эластазе у больных СКВ представляет интерес как проявление аутоагрессии при классическом аутоиммунном заболевании. Антителиндуцированное нарушение координации в системе эластин - эластаза может вызывать дезорганизацию эластических волокон (вследствие повышенного разрушения эластина) или их преждевременное старение (при инактивации эластаз, участвующих в катаболизме эластина). Дефекты структуры влекут за собой нарушение функций органов, содержащих эластические волокна, обуславливая наряду с другими патогенетическими факторами полиморфизм клинических проявлений волчанки. Изучение вопросов антителообразования к эластину -одному из основных компонентов соединительнотканного матрикса, и эластазе - участнику деградации эластина и медиатору воспалительных реакций, представляется актуальной задачей на пути совершенствования иммунологической диагностики СКВ.

Как уже было отмечено, иммунные механизмы являются ключевым звеном в патогенезе СКВ, поэтому иммунологическим методам придается особое значение в диагностике этого заболевания. Используемые для объективизации диагноза, они не только позволяют верифицировать заболевание, но и прогнозировать характер его течения, клинический вариант и выбрать оптимальную терапевтическую тактику. Повышение чувствительности и специфичности иммунологических методов диагностики аутоиммунных заболеваний, а также совершенствование технических аспектов постановки реакций является важным методическим направлением современной ревматологии.

Для выявления специфических антител в сыворотках крови больных СКВ нами был выбран иммуноферментный метод анализа с использованием иммобилизированных гранулированных антигенных препаратов с магнитными свойствами. ИФА, будучи высокоспецифичным и чувствительным, является наиболее информативным методом в диагностике диффузных болезней соединительной ткани, а применение иммобилизированных биополимеров дает ему целый ряд неоспоримых преимуществ. Механическая прочность, устойчивость сорбентов к различным физико-химическим и биологическим воздействиям, а также возможность их неоднократного применения после проведения регенерации позволяет добиться значительного экономического эффекта.

Для совершенствования иммунологической диагностики СКВ нами были разработаны и целенаправленно апробированы при выявлении специфических антител у 65 больных СКВ, 57 больных с различными ревматическими заболеваниями (ревматоидный артрит, системные васкулиты, болезнь Шегрена) и 30 здоровых лиц иммобилизированные гранулированные антигенные препараты на основе эластина и эластазы. Унифицированный способ получения полиакриламидных гранул позволил качественно и количественно увеличить сорбционную емкость препарата. Применение метода эмульсионной полимеризации, при котором водорастворимые антигены фиксируются в пространственную решетку полиакриламидного геля методом "механического" включения без образования ковалентных связей, позволяет сохранить антигены в максимально нативном состоянии, а иммобилизация биополимеров в поверхностном слое "двойной" гранулы создает высокую концентрацию антигена в реакционно-активной зоне, что значительно повышает чувствительность ИФА. Включение магнитного материала дает возможность ускорить и упростить ряд манипуляций в твердофазных методах анализа, улучшить качественные характеристики определений и увеличить число обрабатываемых проб, что создает необходимые условия для разработки автоматизированных систем диагностики.

Выводы

1. Разработаны и апробированы в варианте непрямого иммуноферментного анализа иммобилизированные гранулированные антигенные препараты (ИГАП) с магнитными свойствами на основе эластина и эластазы. Полученные антигенные препараты применены для исследования специфических антител у здоровых лиц и у больных системной красной волчанкой, ревматоидным артритом, системными васкулитами и болезнью Шегрена.

2. Антитела к эластину и эластазе обнаружены методом ИФА с применением ИГАП в сыворотках крови значительной часта обследованных больных.

Частота выявления и уровень исследуемых антител у больных СКВ были достоверно выше, чем в контрольной группе: антитела к эластину выявлены у 41,5%, антитела к злаетазе - у 78,5% больных СКВ.

3. Выявлена зависимость уровня исследуемых антител от активности, характера течения и клинических проявлений СКВ. Установлено, что максимальное значение антител к эластину наблюдается при васкулопатиях, антител к эластазе - при поражении кожи, сосудов и суставном синчроме.

4. Обнаружена прямая корреляционная связь между уровнем антител к эластину и эластазе, свидетельствующая о стимуляции антителообразования к эластину при нарушении иммунного ответа к эластазе.

5. Определение антител к эластазе и, в меньшей степени, к эластину методом ИФА с использованием ИГАП является чувствительным и высокоспецифичным тестом, сравнимым с общепринятыми иммунологическими тестами.

Практические рекомендации

1. Полученные иммобилизированные гранулированные антигенные препараты с магнитными свойствами на основе эластина и эластазы рекомендуется использовать для выявления антител к ним у больных СКВ в разработанном варианте иммуноферментного анализа.

2. При определении антител к эластину и эластазе иммуноферментным методом с использованием ИГАП за границы нормы следует считать: 0,104 е.о.п. - для антител к эластину, 0,113 е.о.п. - для антител к эластазе.

3. Определение антител к эластину и эластазе в сыворотке крови рекомендуется применять в комплексе с традиционными критериями для диагностики системной красной волчанки и дифференциальной диагностики СКВ с другими ревматическими заболеваниями.

4. Рекомендуется использовать одновременное определение уровня антител к эластину и эластазе в сыворотке крови в качестве критерия активности заболевания, а также как прогностического теста в отношении клинических вариантов СКВ.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ:

Статьи в научных журналах и изданиях, рекомендованных ВАК

РФ

1. Александров A.B., Алехина И.Ю., Шилова Л.Н., Маслова-Сорокина Е.В., Махачев М.А., Матасова H.A., Емельянов Н.И. Современные биотехнологии в лабораторной диагностике ревматических заболеваний: иммунологические аспекты поражения сосудов у больных системной красной волчанкой и системной склеродермией II Аллергология и иммунология. -2008. -Т.9, №3. - С.334.

2. Александров A.B., Макарова Т.е., Курбанова Р.Д., Алехина И.Ю., Матасова H.A., Емельянова О.И. Новые медицинские технологии в иммунодиагностике поражения сосудов у больных системной красной волчанкой. II Профилактическая медицина. - 2010, том 13, № 3. - С. 53.

3. Гонтарь И.П., Сычева Г.Ф., Александров A.B., Шилова Л.Н., Симакова Е.С., Емельянов H.H., Матасова H.A., Маслакова Л.А., Зборовский А.Б. Эмульсионная полимеризация как метод, модифицирующий ферменты с сохранением биологических свойств их наноструктур. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2010, №12. - С. 715 - 719.

4. Матасова H.A. Антителогенез к системе эластин-эластаза у больных системной красной волчанкой. II Врач-Аспирант. -2011, №1.2(44).-С.276-281.

Статьи в научных сборниках и журналах

5. Ненашева Н.В., Матасова H.A., Кочнева Л.И., Сычева Г.Ф., Емельянова О.И., Зборовская И.А. Уровень антител к эластину в сыворотке крови практически здоровых людей. II Актуальные проблемы современной ревматологии. Сборник научных работ / под ред. Академика РАМН А.Б.Зборовского/. - Вып. XXV, Волгоград, ООО «Царицынская Полиграфическая компания», 2008. с.77-78.

6. Ненашева Н.В., Матасова H.A., Кочнева Л.И., Аветисова Э.Р., Зборовский А.Б.. Антителообразование к системе эластин-эластаза у больных ревматоидным артритом, системной красной волчанкой и системной склеродермией. II Актуальные проблемы современной ревматологии. Сборник научных работ / под ред. Академика РАМН А.Б.Зборовского/. - Вып. XXVI, Волгоград, ООО «Царицынская Полиграфическая компания», 2009. с.57-58.

7. Ненашева Н.В., Матасова H.A., Аветисова Э.Р., Кочнева Л.И., Гонтарь И. П. Гуморальный ответ на эластин и эластазу у больных ревматоидным артритом, системной красной волчанкой, системной склеродермией. // Материалы конф. «Актуальные проблемы современной кардиологии и терапии». - Киров, 2009. - С.119-121.

8. Ненашева Н.В., Матасова H.A., Кочнева Л.И., Аветисова Э.Р. Изучение антителогенеза к эластину и эластазе у больных ревматоидным артритом, системной красной волчанкой, системной склеродермией. // Материалы 67-й открытой науч-пракг. конф. молодых ученых и студентов с международным участием «Актуальные проблемы экспериментальной и клинической медицины»., 22-24 апреля 2009 г. - Волгоград: Изд-во ВолГМУ. - С 123-124.

9. Ненашева Н.В., Матасова H.A., Кочнева Л.И., Аветисова Э.Р. Образование аугоантител к эластину и эластазе у больных ревматоидным артритом, системной красной волчанкой, системной склеродермией. // Материалы 68-й открытой науч-пракг. конф. молодых ученых и студентов с международным участием «Актуальные проблемы экспериментальной и клинической медицины»., 13-15 сентября 2010 г. - Волгоград: Изд-во ВолГМУ. -С 128-129.

10. Матасова H.A., Ненашева Н.В., Кочнева Л.И., Аветисова Э.Р. Аутоиммунитет к эластину и эластазе у больных системной красной волчанкой и системной склеродермией. //Актуальные проблемы современной ревматологии. Сборник научных работ / под ред. Академика РАМН А.Б.Зборовского/. - Вып. XXVII, Волгоград, ООО «Царицынская Полиграфическая компания», 2010. с.64-65.

Н.Матасова H.A., Аветисова Э.Р., Парамонова О.В., Емельянова О.И., Трубенко Ю.А., Зборовская И.А. Особенности антителогенеза к эластину и эластазе у больных диффузными заболеваниями соединительной ткани в зависимости от активности воспалительного процесса. //Актуальные проблемы современной ревматологии. Сборник научных работ / под ред. Академика РАМН АБ.Зборовского/. - Вып. XXVIII, Волгоград, ООО «Царицынская Полиграфическая компания», 2011. с.65-66.

МАТАСОВА Наталья Алексеевна

КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИТЕЛ К ЭЛАСТИНУ И ЭЛАСТАЗЕ У БОЛЬНЫХ СИСТЕМНОЙ КРАСНОЙ ВОХМАНКОЙ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ИМИОБИЛИЗИРОВАННОЙ ФОРМЫ МАГНИТОУПРАВЛЯЕМОГО СОРБЕНТА

14.01.22 - Ревматология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Подписано к печати 01.11.2011 г. Формат 60x84/16. Бум офс. Усл.-печ. л. 1,4. Тираж 110 экз. Заказ 251. Отпечатано с готового оригинал-макета в типографии издательства «Перемена», 400131, г.Волгоград, пр. им. В.И.Ленина, 27

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ

По социально-экономическим последствиям системная красная волчанка занимает первое место в группе системных поражений соединительной ткани ввиду ее широкого распространения среди населения разных стран, преимущественного' поражения лиц трудоспособного возраста и высокой инвалидизации. Распространенность СКВ находится в диапазоне от 0,13 до 1,22 случаев на 1000 населения, заболеваемость —от 1,8 до 27,1 случаев на 100000 населения с большими различиями между популяциями: Так, в Европе около полумиллиона человек страдают СКВ; в США, данный показатель приближается' к 250000. Большую часть пациентов составляют женщины детородного возраста (от 30 до 50 на 100 000 тысяч человек), [205,283,228,348];

Последние пять десятилетий: характеризуются': увеличением продолжительности жизни больных системной! красной- волчанкой: Применение практически всего; арсенала существующих в медицине: противовоспалительных и цитотоксических препаратов в качестве основных . элементов; комплексной терапии, позволило существенно улучшить прогноз при этом, тяжелом заболевании и повысить пятилетнюю выживаемость пациентов до 90% [66,65,79,116,253,259,340]. Разработанные стратегии иммунологического вмешательства^ связанные с тотальным, облучением лимфоидной системы или костного: мозга4 с последующей пересадкой стволовых клеток не только позволили продлить жизнь ранее безнадежным больным, но и добиться в ряде случаев? стойкой ремиссии заболевания [25,72].

Несмотря на достигнутые успехи, частота смертельных исходов! у больных СКВ" в 3 - 5 раз. выше по сравнению с общей популяцией. [9,205,318]. По данным аутопсий в Москве летальность от СКВ за 2002 год составила 12,7% среди всех смертельных исходов от ревматических заболеваний [4,35]. Причины этого многообразны. Увеличение продолжительности жизни больных на фоне иммуносупрессивной терапии сопровождается ростом числа кардиоваскулярных осложнений, в первую очередь связанных с развитием раннего атеросклероза [51,87,174,252,296,298]. Нельзя игнорировать и другие осложнения иммуносупрессивной терапии: опухолевый рост, оппортунистические инфекции (туберкулез, микозы), характеризующиеся стремительным развитием и неблагоприятным исходом [9,30,35,279,280].

Показатели инвалидизации при СКВ остаются одними из* самых высоких среди ревматических заболеваний. Ключевую- роль- играет мультисистемность поражения; приводящая^ к полиорганной, недостаточности, и молодой возраст пациентов, требующий. ускоренного проведения экспертизы трудоспособности. Так, средний, возраст больных СКВ к началу заболевания составляет 27,1±11,8, к моменту выхода на инвалидность - 34±10,4 [54].

Курация пациентов с СКВ является1 экономической проблемой- для здравоохранения развитых стран. Наряду с прямыми* затратами, такими; как дорогостоящая диагностика, комплексное медикаментозное лечение, систематическое лабораторное и инструментальное обследование с целью коррекции терапии, существенный вес обретают и непрямые затраты: снижение и утрата трудоспособности, нередко — преждевременная смерть, вторичное бесплодие и т.д. [44]. Исследования, проведенные одновременно в трех странах - США, Канаде и Великобритании показали, что прямые затраты на лечение больных СКВ практически не отличались, составляя около $5000 в год на одного больного, несмотря на существенные различия в организации и финансировании систем здравоохранения этих стран [145]. Непрямые ежегодные затраты, связанные с СКВ, могут превышать $22000 на одного больного [338].

Разработка и совершенствование новых методов ранней диагностики и эффективной дифференциальной диагностики системных заболеваний соединительной ткани признана приоритетным направлением современной ревматологической науки. Основополагающими критериями подобных разработок является не только клиническая, но и экономическая эффективность и целесообразность [95].

Многочисленные исследования показали, что иммуноферментные методы анализа с использованием иммобилизированных гранулированных препаратов с магнитными свойствами на основе антигенов нуклеиновой, липидной и белковой природы в полной мере отвечают указанным требованиям. Преимущества метода заключаются, в первую- очередь, в повышении стабильности иммобилизированного биополимера, а также возможности регенерирации сорбента; что ведет к значительному экономическому эффекту. Кроме того,, иммобилизация биологически активных веществ в поверхностном слое гранулы создает высокую концентрацию антигена именно в реакционно-активной зоне, что повышает чувствительность твердофазных методов1 анализа. Включение- магнитного материала в гранулы дает возможность ускорить и упростить манипуляции на всех этапах исследования, улучшая качественные характеристики определений и- увеличивая число обрабатываемых проб. Указанные преимущества делают этот метод экономичным, и легко применимым в практической,медицине [28,39,46].

Гранулированные препараты с магнитными свойствами, уже- были использованы, для усовершенствования иммунодиагностики СКВ. и выявления антител к ДНК, РНК, каталазе, церулоплазмину, фибронектину и другим биополимерам. С помощью высокочувствительного метода специфические антитела обнаруживались уже на, начальных стадиях заболевания, что позволило решить вопросы ранней диагностики и прогнозировать клинический вариант СКВ'[28,70,81,121].

Значение изучения эластина определяется большой распространенностью его в качестве основного белкового компонента эластических волокон в органах и тканях, подвергающихся большим деформациям под воздействием нагрузок (связки, кожа, легкие, сосуды). В, катаболизме эластина принимают участие ферменты с широкой субстратной специфичностью — эластазы. Именно от равновесия в системе эластин -эластаза зависит физиологическое функционирование органов и тканей, содержащих эластические волокна [15,17,38,201,202].

Антителообразование к эластину и эластазе при ревматических заболеваниях представляет собой малоизученную проблему. Предполагается, что при СКВ имеет место антителиндуцированное нарушение обмена' эластина, приводящее к появлению измененных растворимых изоформ с последующим включением механизмов аутоиммунитета.

Имеющиеся' в* литературе данные об исследовании' антител к эластину и эластазе при системной' красной волчанке единичны, [152,158,160,161,171,200] и противоречивы, а также не содержат анализа изучаемых аутоантител в зависимости от характера течения,' активности и клинических форм заболевания. Не проводилось также изучения возможных корреляционных связей между компонентами.системы эластин - эластаза и антителами к ним при данном заболевании; В связи с этим, использование иммобилизированных форм эластина и эластазы в исследовании антителообразования к ним при СКВ представляется весьма актуальной задачей, направленной на улучшение качества иммунодиагностики этого заболевания, и обозначающей перспективы изучения отдельных механизмов его патогенеза.

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ

Целью настоящего исследования являлось усовершенствование иммунологической диагностики, дифференциальной диагностики и прогнозирование клинического варианта течения системной, красной волчанки с помощью иммобилизированных форм эластина и эластазы.

Для достижения поставленной цели были сформулированы следующие задачи: 1. Получить иммобилизированные формы эластина и эластазы, изучить их физико-химические свойства;

2. Адаптировать иммуиоферментный метод анализа с использованием иммобилизированных форм эластина и эластазы к изучению образования антител к ним;

3. Изучить содержание антител к эластину и эластазе у больных системной красной волчанкой и здоровых лиц. Исследовать данные показатели и корреляционные связи между ними у больных СКВ в зависимости от активности патологического процесса, длительности, характера течения и клинических вариантов заболевания;

4. Исследовать взаимосвязь процессов аутоантителогенеза к эластину и эластазе1 у. больных СКВ;

5. Изучить содержание антител? к эластину и эластазе в сыворотке крови больных ревматоидным' артритом, болезнью < Шегрена, системными* васкулитами, включенных в контрольную группу, и оценить, значение изучаемых показателей для дифференциальной диагностики* ревматических заболеваний.

НАУЧ11АЯ НОВИЗНА

Впервые для диагностики СКВ созданы и применены в варианте иммуноферментного метода анализа иммобилизированные препараты эластина и1 эластазы, подобраны оптимальные концентрации антигенов и определены условия проведения ИФА с использованием ИГАП;

В ходе работы в сыворотках крови больных СКВ обнаружены антитела к эластину и эластазе. Показано, что их уровень достоверно отличается от содержания данных антител в сыворотке крови здоровых лиц» и лиц контрольной группы. Выявлена корреляция между уровнем антител к эластазе и эластину и значениями индексов активности SLAM и SLEDAI: Установлено^ что максимальные значения исследуемых антител наблюдаются при поражении кожи, суставов и волчаночной -васкулопатии.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЦЕННОСТЬ

Разработана доступная для применения в клинических лабораториях методика иммуноферментного определения уровня антител к эластину и эластазе на основе иммобилизированных гранулированных препаратов с магнитными свойствами. Выявление антител к эластину и эластазе в предложенной методике ИФА может быть использовано, в. качестве дополнительного теста для диагностики и дифференциальной« диагностики системной красной волчанки, оценки активности и- прогнозирования клинического варианта заболевания.

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ

На защиту выносится положение о возможности определения*антител к эластину и эластазе с помощью, методов- иммуноферментного анализа на< основе иммобилизированных антигенных препаратов с магнитными свойствами у больных СКВ. Исследование антител к эластину и эластазе может быть использовано в качестве дополнительного теста для> диагностики, и дифференциальной диагностики системной! красной- волчанки,, оценки * активности и прогнозирования клинического варианта заболевания.

ПУБЛИКАЦИИ

Основные положения диссертации' изложены^ 11 печатных работах, из которых 6 — в местной печати и 5 — в центральной, в том числе 4 — в изданиях, рецензируемых ВАК. Материалы диссертации' были представлены на ежегодной научной конференции молодых ученых и студентов с международным участием «Актуальные проблемы экспериментальной, и клинической медицины» ВолГМУ (2009' -201'1г.г.); конференции «Актуальные проблемы современной кардиологии» и терапии». — Киров; 2009г.

Первичная экспертиза диссертации была проведена на совместном заседании Учреждения Российской академии медицинских наук Научноисследовательского института клинической и экспериментальной ревматологии РАМН и кафедры госпитальной терапии ГБОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет» Минздравсоцразвития РФ 9 сентября 2011 года (протокол №4).

ВНЕДРЕНИЕ В ПРАКТИКУ

Методы определения антител к эластину и эластазе иммуноферментным методом с использованием иммобилизированных антигенных препаратов с магнитными свойствами внедрены в практику работы МУЗ ГКБ СМП №25 г. Волгограда.

ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ

ВЫВОДЫ

1. Разработаны и апробированы в варианте непрямого иммуноферментнош анализа иммобилизированные гранулированные антигенные препараты (ИГАП) с магнитными свойствами на основе эластина и эластазы. Полученные антигенные препараты применены для исследования специфических антител у здоровых лиц и у больных системной красной волчанкой, ревматоидным артритом, системными васкулитами и болезнью Шегрена.

2. Антитела к эластину и эластазе обнаружены методом ИФА с применением ИГАП в сыворотках крови значительной части обследованных больных. Частота выявления и уровень исследуемых антител у больных СКВ были достоверно выше, чем в контрольной группе: антитела к эластину выявлены у 41,5%, антитела к эластазе—у 78,5% больных СКВ.

3. Выявлена зависимость уровня исследуемых антител от активности, характера течения и клинических проявлений СКВ. Установлено, что максимальное значение антител к эластину наблюдается при васкулопатиях, антител к эластазе — при поражении кожи, сосудов и суставном синдроме.

4. Обнаружена прямая корреляционная связь между уровнем антител к эластину и эластазе, свидетельствующая о стимуляции антителообразования к эластину при нарушении иммунного ответа к эластазе.

5. Определение антител к эластазе и, в меньшей степени, к эластину методом ИФА с использованием ИГАП является чувствительным и высокоспецифичным тестом, сравнимым с общепринятыми иммунологическими тестами.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Полученные иммобилизированные гранулированные антигенные препараты с магнитными свойствами на основе эластина и эластазы рекомендуется использовать для выявления антител к ним у больных СКВ в разработанном варианте иммуноферментного анализа.

2. При определении антител к эластину и эластазе иммуноферментным методом с использованием ИГАП за границы нормы следует считать: 0,104 е.о.п. - для антител к эластину, 0,113 е.о.п. - для антител к эластазе.

3. Определение антител к эластину и эластазе в сыворотке крови рекомендуется применять в комплексе с традиционными критериями для диагностики системной красной волчанки и дифференциальной диагностики СКВ с другими ревматическими заболеваниями.

4. Рекомендуется использовать одновременное определение уровня антител к эластину и эластазе в сыворотке крови в качестве критерия активности заболевания, а также как прогностического теста в отношении клинических вариантов СКВ.

Ill