Автореферат и диссертация по медицине (14.01.22) на тему:Антибактериальные антитела при красной волчанке, склеродермии и ревматоидном артрите

КУЛИБИН Антон Юрьевич

АНТИБАКТЕРИАЛЬНЫЕ АНТИТЕЛА ПРИ КРАСНОЙ ВОЛЧАНКЕ, СКЛЕРОДЕРМИИ И РЕВМАТОИДНОМ АРТРИТЕ

14.01.22 - ревматология 14.03.09 - клиническая иммунология, аллергология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

3 МАЙ 2012

005016365

Ярославль — 2012

005016365

Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Ярославская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации

Научные руководители:

доктор медицинских наук, профессор

доктор медицинских наук, профессор

Шилкина Наталия Петровна Романов Виталий Александрович

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор кафедры терапии Института последипломного образования ГБОУ ВПО ЯГМА Минздравсоцразвития России

доктор медицинских наук, профессор, зав. отделом клеточной иммунологии ФГБУ «ГНЦ Институт иммунологии» ФМБА России

Марасаев Вячеслав Владимирович

Ярилин Александр Александрович

Ведущая организация: Первый Московский государственный медицинский университет им. И.М.Сеченова

Защита состоится « _» ¿¿-С&лЯ^ 2012 г. в /6 часов на заседании диссертационного совета Д 208.119.01 при ГБОУ ВПО ЯГМА Минздравсоцразвития России по адресу: 150000, Ярославль, ул. Революционная, 5.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГБОУ ВПО ЯГМА Минздравсоцразвития России по адресу 150000, Ярославль, ул. Революционная, 5.

Автореферат разослан «

»

2012г.

Ученый секретарь диссертационного совета

т

Чижов П.А.

Актуальность проблемы

Ревматические заболевания характеризуются широкой и все более возрастающей распространенностью, склонностью к хронизации и неуклонному прогрессированию, что существенно снижает трудоспособность и качество жизни пациентов (В.А. Насонова и соавт.,2008, 2009; О.М. Фоломеева и соавт., 2008; E.JI. Насонов, 2011). Несмотря на значительный прогресс в изучении этих болезней, этиология многих из них остается неясной, а механизмы развития, в частности, проблемы взаимоотношений микро- и макроорганизма на фоне дисбаланса иммунной системы, до конца не изученными (P.M. Балабанова, 2006; Б.С. Белов, 2008). Современные взгляды на развитие аутоиммунной патологии у человека предполагают участие разнообразных инфекционных агентов в качестве триггерных факторов, инициирующих развитие иммунного воспаления (Н. Amital, 2008; A. Cooke, 2008).

Инфекционные агенты определяют не только развитие, но и исходы ревматических заболеваний. В качестве причин летальности при системной красной волчанке инфекции занимают вторую позицию, уступая лишь активности болезни, и относятся к основным предикторам летального исхода ревматических заболеваний (М. Ramos-Casals, 2008). Получены убедительные данные об участии бактерий, вирусов, паразитов и грибов в механизмах развития ревматических заболеваний и их инфекционных осложнений (Б.С. Белов, 2008; C.D. Yang, 2006), что во многом основывается на данных определения уровня соответствующих антител.

При ревматических заболеваниях, наряду с патогенными микроорганизмами, условно-патогенные представители нормальной микрофлоры организма могут принимать участие в развитии иммунного воспаления (Н.Е. Ястребова, 2007). Описаны существенные изменения в составе нормальной микрофлоры при ряде ревматических заболеваний (М.Ю. Гульнева, 2011). Эти данные обосновывают роль некоторых условно-патогенных микроорганизмов как триггерных факторов в патогенезе ревматических болезней и свидетельствует об актуальности исследования при этой патологии спектра антибактериальных антител. Однако в литературе имеются лишь немногочисленные сообщения, касающиеся содержания антибактериальных антител, преимущественно к условно-патогенным микроорганизмам, у больных аутоиммунными ревматическими заболеваниями (S.Constantiniu, 2008; Т. Rashid, 2007). Комплексных работ по оценке широкого спектра антител к различным условно-патогенным, сапрофитным и патогенным микроорганизмам при системных болезнях соединительной ткани и их кожных

формах (интегументные формы красной волчанки, ограниченная склеродермия), а также при ревматоидном артрите, не проводилось. Изложенные аргументы послужили основанием для выполнения настоящей работы.

Цель исследования

Выявление спектра и уровней антител к условно-патогенным, патогенным бактериям и их токсинам у больных системной и дискоидной красной волчанкой, системной и ограниченной склеродермией, ревматоидным артритом.

Задачи исследования

1. Изучить содержание агглютининов к условно-патогенным и патогенным бактериям у больных системной и дискоидной красной волчанкой, системной и ограниченной склеродермией, ревматоидным артритом.

2. Изучить уровни IgG антител к условно-патогенным бактериям у больных ревматическими заболеваниями.

3. Установить наличие и концентрацию антител к дифтерийному и столбнячному токсину, стрептолизину-О у больных ревматическими заболеваниями и их кожными формами.

4. Проанализировать зависимости между уровнями выявленных антител и нозологической формой, активностью и течением патологического процесса у больных ревматическими заболеваниями.

Научная новизна

1. Впервые изучен широкий спектр антител к условно-патогенным и патогенным бактериям, к некоторым их антигенам и токсинам (суммарно 46 антигенов) у больных системной и дискоидной красной волчанкой, системной и ограниченной склеродермией, ревматоидным артритом. Наличие, уровни и частота встречаемости антибактериальных антител у обследованных пациентов зависят от вида микроорганизма, нозологической формы, а при системных формах - от активности процесса.

2. Впервые установлено повышение уровней антител к 6 видам условно-патогенных бактерий (Е. coli, Е. aerogenes, К. pneumoniae, Р. vulgaris,S. aureus, S. epidermidis) при системной красной волчанке, к 4 (Е. coli, Р. vulgaris, S. aureus, S.saprophytics) при системной склеродермии, к 2 (Е. coli, К. pneumoniae) при ревматоидном артрите. Все аутоиммунные системные ревматические заболевания характеризуются увеличением содержания

антител к 5 видам патогенных энтеробактерий (S. flexneri 1-5, S. typhi, S. paratyphi A, S. enteritidis, S. typhimurium). У больных дискоидной красной волчанкой документированы более высокие уровни антител к 3 видам условно-патогенных (Е. coli, К. pneumoniae, S. aureus) и ни к одному виду патогенных микроорганизмов. При очаговой склеродермии повышения титров антибактериальных антител не выявлено.

3. Впервые исследовано состояние антитоксического противодифтерийного и противостолбнячного иммунитета у больных системной красной волчанкой, системной склеродермией, ревматоидным артритом, дискоидной красной волчанкой и ограниченной склеродермией. Продемонстрировано снижение уровня антитоксических антител и частоты встречаемости их защитного титра у больных системными ревматическими заболеваниями.

Практическая значимость

1. При аутоиммунных ревматических заболеваниях целесообразно исследование широкого спектра антибактериальных антител в качестве дополнительного лабораторного теста, позволяющего на основании выявления повышенных уровней антител диагностировать степень активности системной красной волчанки и системной склеродермии, дифференцировать системную красную волчанку от дискоидной красной волчанки, системную склеродермию от очаговой склеродермии, а также оценить функциональное состояние B-системы иммунитета.

2. Низкий уровень антитоксических противостолбнячных и противодифтерийных антител у больных системной красной волчанкой, системной склеродермией и ревматоидным артритом позволяет отнести этих пациентов в группу риска по столбняку и дифтерии, что необходимо учитывать при проведении профилактики и лечения указанных инфекций.

3. Выполнение скрининговых исследований по определению антитоксических противодифтерийных и противостолбнячных антител у больных системными ревматическими заболеваниями, позволяет выявить пациентов с отсутствием антитоксического иммунитета или его низким уровнем, что обосновывает применение методов иммунопрофилактики для предупреждения дифтерии и столбняка.

4. Результаты выполненной работы необходимы для дальнейшей разработки исследований, направленных на формирование концепции патогенетической роли условно-патогенных микроорганизмов в развитии системных аутоиммунных ревматических заболеваний, а так же их участия в развитии ифекционных осложнений у данных больных.

Положения, выдвигаемые на защиту

1. При системных заболеваниях соединительной ткани, их кожных формах и ревматоидном артрите наблюдается увеличение уровня агглютининов к ряду условно-патогенных и патогенных микроорганизмов с повышением содержания ¡^-антител к нескольким видам условно-патогенных бактерий.

2. Наличие, уровни и частота встречаемости антибактериальных антител у больных системной красной волчанкой и дискоидной красной волчанкой, системной склеродермией и ограниченной склеродермией, ревматоидным артритом зависят от вида микроорганизма, нозологической формы, а при системных формах - от активности процесса.

3. Низкий уровень противодифтерийных и противостолбнячных антител или их полное отсутствие в сыворотке крови у значительного числа больных системными ревматическими заболеваниями относит данных пациентов к группе высокого риска развития дифтерии и столбняка.

4. Определение уровня антител к условно-патогенным и патогенным бактериям может быть использовано в качестве дополнительного лабораторного критерия активности патологического процесса при системной красной волчанке и системной склеродермии, а также для дифференциальной диагностики системных ревматических заболеваний с их кожными формами.

Апробация результатов работы

Апробация диссертационной работы состоялась на межкафедральной научной конференции кафедр терапии ИПДО, пропедевтики внутренних болезней, факультетской терапии с курсом ВПТ, микробиологии с вирусологией и иммунологией, клинической лабораторной диагностики, кожных и венерических болезней Ярославской государственной медицинской академии, протокол № 5 от 21 февраля 2012года.

Основные положения работы доложены и обсуждены на пятом съезде общества биотехнологов России имени Ю.А. Овчинникова (Москва, 2008), межрегиональной научно-практической конференции (Ярославль, 2008), X Международном конгрессе «Современные проблемы аллергологии, иммунологии и иммунофармакологии» (Казань, 2009), VI национальном конгрессе терапевтов (Москва, 2011), V международной телеконференции «Фундаментальные науки и практика» (Томск, 2011), конференции «Актуальные проблемы эпидемиологии на современном этапе» (Москва, 2011), научных студенческих конференциях ЯГМА (Ярославль, 2008, 2009).

Внедрение результатов исследования в практику

Результаты проведенного исследования внедрены в работу межкафедралыюй научно-исследовательской лаборатории на базе кафедры микробиологии с вирусологией и иммунологией ЯГМА, полученные данные используются при чтении лекций и проведении практических занятий для интернов, ординаторов, слушателей факультета последипломного образования и студентов всех факультетов ЯГМА.

Публикации

По теме диссертации опубликовано 14 научных работ, из них 7 - в центральной печати, в том числе 4 статьи в изданиях, рекомендуемых ВАК РФ.

Объем и структура диссертации

Диссертационная работа изложена на русском языке на 150 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, главы «Материалы и методы исследования», 3 глав собственных исследований, заключения и выводов. Указатель литературы включает 214 источников, в том числе 78 отечественных и 136 иностранных. Диссертация иллюстрирована 48 таблицами, 13 рисунками.

Материалы и методы исследования

Клиническая часть работы выполнялась на базах отделений терапии государственного учреждения здравоохранения клинической больницы № 8 г. Ярославля. Иммунологические исследования проведены на кафедре микробиологии с вирусологией и иммунологией ГБОУ ВПО ЯГМА Минздравсоцразвития России. Обследовано 180 пациентов, в том числе - 50 (21,73%) СКВ, 30 (13,05%) - ССД, 50 (21,73%) РА, 20 (8,69%) - ДКВ, 30 (13,05%) - ОСД. Возраст больных варьировал от 19 до 65 лет. Давность заболевания на момент обследования у пациентов с ревматическими заболеваниями составляла от 2 до 15 лет. Половой состав пациентов имел определенные отличия. Так, при ССД, ОСД и ДКВ все больные (100%) являлись лицами женского пола, при СКВ женщины составляли 94%, тогда как при РА женщин было 76%. Группу сравнения составили 50 практически здоровых доноров идентичных по полу и возрасту. Все больные были обследованы в 1- 2 сутки пребывания в стационаре (таблица 1).

Критерии включения в исследуемые группы больных: наличие классификационных критериев для каждого заболевания, пациенты с системной красной волчанкой 1 и 2 степени активности с подострым и хроническим течением, системной склеродермией 1 и 2 степени активности с

подострим и хроническим течением, ревматоидным артритом с низкой и средней активностью, пациенты с кожными формами красной волчанки и ограниченной склеродермией.

Критерии исключения из исследования: высокая степень активности и острое течение системной красной волчанки, системной склеродермии и ревматоидного артрита, наличие интеркуррентных, кишечных и острых респираторных инфекций, гнойно-воспалительных заболеваний, проведение курсов пульс-терапии в течение года до момента обследования.

Таблица 1

Распределение обследованных по нозологическим формам, полу, _возрасту н длительности заболевания (п = 230)

Нозологическая форма N Возраст (годы) (M±SD) Длительность заболевания (годы) (M±SD) Пол

Муж. абс. (%) Жен. абс. (%)

СКВ 50 40±П 8±7 3(6) 47 (94)

сед 30 47±15 9±5 0(0) 30 (100)

РА 50 45±14 8±6 12 (24) 38 (76)

осд 30 43±12 9±6 0 30 (100)

ДКВ 20 42±10 9±6 0 30 (100)

Группа сравнения 50 43±13 - 6(12) 44(88)

Методы исследования

Наличие и уровни антител к музейным штаммам Escherichia coli, Enterobacter aerogenes, Klebsiella pneumoniae, Enterobacter cloacae, Serratia marcescens, Proteus vulgaris, Pseudomonas aeuruginosa, Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus saprophyticus, Micrococcus luteus, Hafaia alvei, Escherichia coli 0-55, Shigella dysenteriae O-l, Shigella boydii в сыворотке крови больных и лиц группы сравнения исследовали с помощью развернутой реакции агглютинации.

Наличие и уровень антител к Salmonella typhi, Salmonella paratyphi A, Salmonella paratyphi B, Salmonella choleraesuis, Salmonella enteritidis, Salmonella typhimurium, Bordetella parapertussis, Brucella melitensis, Francisella tularensis и Ricketsia prowazekii в сыворотке крови больных и лиц группы сравнения исследовали с помощью развернутой реакции агглютинации с использованием стандартных коммерческих диагностикумов.

Наличие и уровень антител к сальмонеллезному Vi — антигену, S. flexneri 1-5, S. flexneri 6, S. sonne, N. meningitidis А и N. meningitidis В, выявляли с помощью реакции пассивной гемагглютинации (РПГА) с использованием стандартных коммерческих эритроцитарных диагностикумов.

Определение антитоксических противодифтерийных и противостолбнячных антител проводилось в РПГА с эритроцитарным диагн ости кумом.

Выявление антител к условно-патогенным бактериям проведено иммуноферментным методом (ИФА) на основании одновременного определения IgG антител к бактериальным антигенам, полученным из клеток микроорганизмов: Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus saprophyticus, Streptococcus pneumoniae, Streptococcus spp., Micrococcus luteus, Pseudomonas aeuruginosa, Escherichia coli, Proteus vulgaris, Salmonella (0-12), Haemophilus influenzae, Klebsiella pneumoniae. В ИФА использована скрининговая иммуноферментная система для определения антител к условно-патогенным бактериям производства НИИ вакцин и сывороток им. И.И.Мечникова РАМН.

Методы статистического анализа

Статистическая обработка материала проводилась на персональном компьютере типа IBM PC/AT с использованием пакета прикладных программ STATISTIC A® (Data analysis software system, StatSoft) релиз 7.O., Primer of Biostatistics (версия 4.03), электронных таблиц Excel 2007. Расчеты выполнены в соответствии с рекомендациями О.Ю. Ребровой (2002) по обработке численных результатов экспериментов в медицине.

Результаты исследования и их обсуждение

У больных СКВ обнаружены достоверно более высокие титры агглютининов и частоты их выявления к Е. coli, Е. aerogenes, К. pneumonia, Р. vulgaris, S. aureus и S. epidermidis (р<0,05). При ДКВ повышенные титры агглютининов найдены только к Е. coli, К. pneumoniae и S. aureus (р<0,05). У больных ССД достоверное увеличение уровней антител выявлено к Е. coli, Р. vulgaris, S. aureus, S.saprophyticus; при ОСД разницы в титрах агглютининов по сравнению с показателями здоровых лиц не наблюдалось. У больных РА более высокие титры антибактериальных антител обнаружены только к Е. coli и К. pneumoniae (р<0,05, табл. 2).

У больных системными ревматическими заболеваниями (СКВ, ССД, РА) обнаружены достоверно более высокие титры антител к 5 видам патогенных микроорганизмов (S. flexneri 1-5, S. typhi, S. paratyphi A, S. enteritidis, S.

typhimurium; р<0,05), тогда как при ДКВ и ОСД титры антител не отличались от аналогичных показателей группы сравнения.

У больных СКВ со II степенью активности процесса уровни антител к Е. coli, К. pneumonia, S. aureus, S.flexneri 1-5, S. typhi, S. enteritidis и S. typhimurium были достоверно выше, чем при I степени активности (р<0,05). У больных ССД со степенью активности II уровни антител к Е. coli, Р. vulgaris и S. aureus были достоверно выше, чем при активности I (р<0,05).

По данным ИФА сывороточные IgG-антитела ко всем антигенам условно-патогенных микроорганизмов (рис.1) обнаруживались достоверно чаще при ревматических заболеваниях (у 51% больных СКВ, 64,6% - ССД, 45,8% - РА), чем у здоровых лиц (37,8%).

При СКВ достоверно наиболее часто встречались антитела к К. pneumoniae, Streptococcus spp., Е. coli, реже к S. aureus и родоспецифическому антигену Salmonella (рис. 2). Вместе с тем, у больных СКВ была снижена частота обнаружения IgG-антител к S. epidermidis, а к S. saprophyticus антитела не были выявлены (р<0,05).

При ССД с более высокой частотой, встречались IgG-антитела к S. saprophyticus, S. pneumoniae, Е. coli, несколько реже — к S. aureus, Р. vulgaris и родоспецифическому антигену Salmonella (р<0,05, рис. 3).

У больных РА антитела к Е. coli, родоспецифическому антигену Salmonella, Н. influenzae и К. pneumoniae были выявлены в 100% случаев, в то время как у лиц группы сравнения частота обнаружения этих антител была существенно ниже (рис. 4). В то же время у больных РА существенно реже определялись антитела к S. epidermidis и не обнаруживались антитела к S. saprophyticus (р<0,05).

По данным ИФА у больных СКВ был достоверно увеличен уровень IgG-антител к антигенам S. aureus, S. epidermidis, Е. coli и К. pneumoniae (рис. 5), в то время как к антигенам S. pneumoniae уровень антител был снижен, а к антигенам S. saprophyticus антитела у пациентов не выявлялись (р<0,05).

У больных ССД высокий уровень антител был отмечен к антигенам Р. vulgaris и родоспецифическому антигену Salmonella (рис. 6). Наряду с этим содержание антител к Streptococcus spp. было снижено и не обнаруживались антитела к Р. aeruginosa (р<0,05).

У больных РА наблюдалось достоверное увеличение уровня антител к Streptococcus spp., Е. coli и К. pneumoniae (рис. 7) на фоне отсутствия антител к S. saprophyticus, S. pneumoniae, P. aeuruginosa (p<0,05).

Таблица 2

Антитела к условно-патогенным и патогенным микроорганизмам в группах обследованных (п = 230)

MHKpoopraiiH3Mbi Больные СКВ (п=50) Больные ДКВ (п=20) Больные сед (п=30) Больные ОСД (п=30) Больные РА (п=50) Группа сравнения (п=50)

Титр антител М ± SD

E. coli 35±19р1 33±18р1 37±16р1 19±9р3 45±20р1 17±8

E. aerogenes 12±4р1 7±4р2 6±2 8±4 6±4 7±4

K. pneumoniae 11±5р| 12±6р1 8±5 8±5 14±7р| 7±4

P. vulgaris 18±10р1 10±4р2 21±10р1 10±6р3 12±8 11±5

S. aureus 16±10р1 17±10р1 19±9Pi 9±5р3 9±5 8±4

S. epidermidis 7±5р1 5±1 р2 4±2 5±2 4±1 5±2

S. saprophyticus 2±1 2±1 4±1р| 2±1р3 2±1 2±1

S. flexneri 1-5 338±164р| 203±112р2 324±164р1 223±114р3 325±172р1 214±128

S. sonne 280±166 236±141 228±133 232±151 276±167 246±167

S. typhi 30±19р! 22±11р2 30±17р| 24±12р3 32±15р1 20±10

S. paratyphi A 9±4р1 6±4р2 9±4р| 8±4 11±4р| 6±3

S. enteritidis 18±10р| 13±10р2 20±10р1 14±10р3 22±10р1 13±9

S. typhimurium 67±38р| 41±29р2 71±32р1 44±31р3 77±37р| 42±27

р1 - достоверность различий с группой сравнения (р<0,05) р2 - достоверность различий между группами с СКВ и ДКВ (р<0,05) рЗ - достоверность различий между группами с ССД и ОСД (р<0,05)

ш

I

^ ¿V Ш

К 5

I *

а» 3

? £ о га и га т

□ СКВ ЕПССД ЙРА

□ Доноры

Группы обследованных - достоверность различия с донорами (р<0,05)

Рисунок 1. Частота выявления ^в-антител в сыворотках крови больных

СКВ, ССД и РА

100*

0СКВ Н Доноры

Микроорганизмы * - достоверность различия с донорами ¡р<0,05)

Рисунок 2. Частота обнаружения ^О-антител к бактериальным антигенам

у больных СКВ

5 I

Ш

О.

1 з "8 I

га 5 н га

е

га X

Рисунок 3. Частота обнаружения ^(¡-антител к бактериальным антигенам

у больных ССД

Ш

4го

«V"- /Р Ч»® .¡¡^ [V

и- ЛГ АГ

/ / ✓ /

/ ^ / у </

РА ЕЗ Доноры

микроорганизмы

: - достоверность различия с донорами (р<0,05}

■ ССД

. е>" .е>" * * & в Доноры

/ / * ^ /

V

микроорганизмы * - достоверность различия с донорами (р<0,05)

Рисунок 4. Частота обнаружения 1§С-антител к бактериальным антигенам

у больных РА

микроорганизмы * - достоверность различия с донорами (р<0,05)

Рисунок 5: Уровень 1дС-антител к бактериальным антигенам у больных СКВ

микроорганизмы * - достоверность различия с донорами (р<0,05)

Рисунок 6. Уровень ^С-атгител к бактериальным антигенам у больных ССД

микроорганизмы

* - достоверность различия с донорами (р<0,05)

Рисунок 7. Уровень 1«С-ан ги гсл к бактериальным антигенам у больных РА

В таблице 3 представлены результаты изучения антитоксических сывороточных противодифтерийных антител. Установлено достоверное снижение не только их среднего титра у больных системными ревматическими заболеваниями, но и значительное уменьшение числа лиц с высоким уровнем антитоксического иммунитета (р<0,05). При ревматических заболеваниях выявлен достоверно высокий процент пациентов с низким защитным титром дифтерийного антитоксина или с его отсутствием, тогда как у лиц группы сравнения все пробы крови содержали антитела в высоких и средних титрах (р<0,05).Все пациенты, страдающие дискоидной красной волчанкой и ограниченной склеродермией, обладали защитным титром антител (р<0,05).

Как видно из таблицы 4, у больных системными ревматическими заболеваниями наблюдалось достоверное снижение не только среднего титра противостолбнячных антитоксических антител, но и значительное уменьшение числа лиц с высоким уровнем антитоксического иммунитета по сравнению с донорами (р<0,05). При ревматических заболеваниях выявлен достоверно высокий процент пациентов с низким защитным титром столбнячного антитоксина или с его отсутствием, тогда как у лиц группы сравнения все пробы крови содержали антитела в высоких и средних титрах (р<0,05). При дискоидной красной волчанке и ограниченной склеродермии все пациенты обладали защитным титром противостолбнячных антител.

Таблица 3

Частоты обнаружения различных титров антитоксических противодифтерийных антител у больных СКВ, ДКВ, ССД, ОСД и РА

Титр антител Группы обследованных (п=230)

Больные СКВ (п=50) Больные ДКВ (п=20) Больные ССД (11=30) Больные ОСД (11=30) Больные РА (п=50) Группа сравнения (п=50)

Частота встречаемости

абс. % абс. % абс. % абс. % абс. % абс. %

1:320 и выше 15 30* 11 55 9 30* 18 60 29 58* 39 78

1:80-1:160 13 26 7 45 9 30 9 30 9 18 11 22

1:40 6 12* 2 10 6 20* 3 10 7 14* 0 0

ниже 1:40 16 32* 0 0 6 20* 0 0 5 10* 0 0

М±50 618±515* 992±411 635±501* 934±532 . 788±557* 1081±684

* - достоверность различий с группой сравнения (р<0,05)

Таблица 4

Частоты обнаружения различных титров антитоксических противостолбнячных антител у больных СКВ, ДКВ, ССД, ОСД и РА

Титр антител Группы обследованных(п=230)

Больные СКВ (п=50) Больные ДКВ (п=20) Больные ССД (п=30) Больные ОСД (п=30) Больные РА (п=50) Группа сравнения (п=50)

Частота встречаемости

абс. % абс. % абс. % абс. % абс. % абс, %

1:320 и выше 8 16* 10 50 8 27* 19 63 26 52* 37 74

1:80-1:160 16 32 9 45 14 47* 10 34 12 24 13 26

1:20-1:40 4 8* 1 5 4 13* 1 3 6 12* 0 0

ниже 1:20 12 24* 0 0 4 13* 0 0 6 12* 0 0

М ± ББ 439±219* 811±209 542±326* 771±331 679±322* 835±436

* - достоверность различий с группой сравнения (р<0,05)

Выводы

1. У больных системной красной волчанкой, дискоидной красной волчанкой, системной склеродермией, ограниченной склеродермией, ревматоидным артритом, а также у здоровых лиц выявлены антибактериальные антитела к 46 антигенам различных видов и серовариантов условно-патогенных и патогенных микроорганизмов, взятых в исследование. Уровень и частота обнаружения антибактериальных антител у пациентов зависят от вида и сероварианта микроорганизма, нозологической формы и активности системного патологического процесса.

2. При системной красной волчанке обнаружено увеличение уровня антибактериальных антител к шести видам условно-патогенных бактерий (Е. coli, Е. aerogenes, К. pneumoniae, Р. vulgaris, S. aureus, S. epidermidis; 13% от числа всех взятых в исследование антигенов), при системной склеродермии - к четырем (Е. coli, Р. vulgaris, S. aureus, S.saprophyticus; 8,7%), при ревматоидном артрите - к двум (Е. coli и К. pneumoniae; 4,3%). При всех системных ревматических заболеваниях констатировано увеличение уровня антител к 5 видам патогенных энтеробактерий (S. flexneri 1-5, S. typhi, S. paratyphi A, S. enteritidis, S. typhimurium; 10,9%). У больных дискоидной красной волчанкой повышение уровня антител выявлено к трем видам условно-патогенных бактерий (Е. coli, К. pneumoniae, S. aureus; 6,5%) на фоне отсутствия изменений титра антител к патогенным микроорганизмам. При ограниченной склеродермии увеличения содержания антител к условно-патогенным и патогенным микроорганизмам не выявлено.

3. Снижение уровня и частоты выявления антибактериальных антител констатировано только по данным иммуноферментного анализа к двум видам микроорганизмов (S. saprophytics, S. pneumoniae) при системной красной волчанке, к двум (Streptococcus spp., P. aeuruginosa) - при системной склеродемии, к трем (S. saprophyticus, S. pneumoniae, P. aeuruginosa) - при ревматоидном артрите.

4. Спектр, уровень и частота выявления антибактериальных антител у больных системной красной волчанкой и системной склеродермией определяется активностью патологического процесса. У больных системной красной волчанкой со степенью активности II уровни антител к Е. coli, К. pneumoniae, S. aureus, S.flexneri 1-5, S. typhi, S. enteritidis и S. typhimurium достоверно выше, чем при активности I. У больных системной склеродемией со степенью активности II уровни антител к Е. coli, Р. vulgaris и S. aureus достоверно превышают титры пациентов с активностью I.

5. У больных системной красной волчанкой, системной склеродермией, ревматоидным артритом, констатировано выраженное снижение уровня антитоксических противодифтерийных и противостолбнячных антител и частоты встречаемости их защитного титра. Все пациенты с дискоидной красной волчанкой и ограниченной склеродермией обладают защитным титром антитоксических противодифтерийных и противостолбнячных антител.

Практические рекомендации

1. При ревматических заболеваниях целесообразно исследование широкого спектра антибактериальных антител, как дополнительного лабораторного теста, позволяющего на основании изменения титров антител диагностировать степень активности СКВ и ССД, дифференцировать системную красную волчанку от дискоидной красной волчанки, системную склеродермию от ограниченной склеродермии, а также оценить функциональное состояние B-системы иммунитета. В качестве антигенов рекомендуются 7 видов условно-патогенных и сапрофитных (Е. coli, Е. aerogenes, К. pneumoniae, Р. vulgaris, S. aureus, S. epidermidis и S.saprophyticus) и 5 видов (S. flexneri 1-5, S. typhi, S. paratyphi A, S. enteritidis, S. typhimurium) патогенных микроорганизмов. Для выявления антител целесообразно использовать доступные серологические реакции -реакция аглютинации, РПГА и ИФА.

2. Низкий уровень противодифтерийного и противостолбнячного антитоксического иммунитета у больных системными ревматическими заболеваниями позволяет отнести их в группы риска в отношении дифтерии и столбняка. Это позволяет рекомендовать применение анатоксинов, антитоксических сывороток и иммуноглобулинов для профилактики и лечения указанных инфекций при системной красной волчанке, системной склеродермии и ревматоидном артрите.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Кулибин А.Ю., Шилкина Н.П., Романов В. А. Уровень антител к некоторым представителям семейства Enterobacteriaceae у больных ревматоидным артритом, системной красной волчанкой и системной склеродермией // Материалы пятого съезда общества биотехнологов России имени Ю.А. Овчинникова. - Москва, 2008. - С. 229 - 230.

2. Кулибин А.Ю., Шилкина Н.П., Романов В.А. Антитела к некоторым энтеробактериям у больных системной красной волчанкой. // Российский иммунологический журнал, 2008. - Т. 2. - № 11. - С. 144.

3. Кулибин А.Ю., Шилкина Н.П., Романов В.А. Уровень антител к некоторым представителям семейства Enterobacteriaceae у больных ревматоидным артритом, системной красной волчанкой и системной склеродермией // Современные возможности КДЛ в клинико-диагностическом процессе. Сборник работ межрегиональной научно-практической конференции. -Ярославль, 2008. - С. 46 - 48.

4. Кулибин А.Ю. Уровень антител к некоторым представителям Enterobacteriaceae у больных ревматоидным артритом. Сборник научных работ студентов и молодых ученых ЯГМА. - Ярославль, 2008. - С. 55 - 56.

5. Кулибин А.Ю., Шилкина Н.П., Романов В.А.Уровень антител к некоторым видам сальмонелл у больных системной красной волчанкой // Сборник трудов X Международного конгресса «Современные проблемы аллергологии, иммунологии и иммунофармакологии». - Казань, 2009. — С.361.

6. Кулибин А.Ю. Состояние противодифтерийного антитоксического иммунитета у больных системной красной волчанкой // Сборник научных

работ студентов и молодых ученых Всероссийской конференции с международным участием. Актуальные вопросы медицинской науки. -Ярославль, 2009. - С. 75 - 76.

7. Романов В.А., Кулибии А.Ю., Зайцева И.П. Антибактериальные антитела в иммуноглобулинах и сыворотках крови человека: прошлое и настоящее // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии — 2010,—№5.-С.41—44.

8. Кулибин А.Ю., Романов В.А., Дульчевский А.Ю., Цветков A.B. Антитела к дифтерийному и столбнячному токсинам в крови больных ревматическими заболеваниями // Современный мир, природа и человек. Межвузовский сборник научных работ с материалами трудов участников V международной телеконференции «Фундаментальные науки и практика». -Томск, 2011 - Т.2 - №12. - С.12.

9. Романов В.А., Кулибин А.Ю. Антибактериальные антитела к некоторым патогенным и условно-патогенным энтеробактериям в коммерческих иммуноглобулинах // Материалы всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Актуальные проблемы эпидемиологии на современном этапе». - Москва, 2011. - С. 338 - 339.

10. Кулибин А.Ю., Романов В.А. Антибактериальные антитела у больных системной склеродермией // Сборник трудов VI Национального конгресса терапевтов.-Москва, 2011.-С.113 - 114.

11. Кулибин А.Ю., Романов В.А. Антитела к дифтерийному токсину в крови больных аутоиммунными ревматическими заболеваниями // Вестник уральской медицинской академической науки. - 2011- № 2 - Т. 1. - С. 161 -162.

12. Гульнева М.Ю., Малафеева Э.В., Кулибин А.Ю. Антитела к тейхоевым кислотам стафилококка у больных ревматическими заболеваниями // Актуальные проблемы современной ревматологии. Сборник научных работ. - Волгоград, 2011. - С. 35 - 36.

13. Романов В.А., Малафеева Э.В., Гульнева М.Ю., Кулибин А.Ю. Антитела к условно-патогенным микроорганизмам у больных ревматическими заболеваниями // Фундаментальные исследования. - 2011. -№ 3. — С. 57 - 60.

14. Романов В.А., Зайцева И.П., Кулибин А.Ю. Нормальные и анамнестические антитела в крови здоровых людей при различных физиологических состояниях // Иммунология. - 2012. — №2. - С. 82 - 86.

Список сокращений

ДКВ - дискоидная красная волчанка

ИФА - иммуноферментный анализ

ОСД - ограниченная склеродермия

РА - ревматоидный артрит

РПГА - реакция пассивной гемагглютинации

РСК - реакция связывания комплемента

СКВ - системная красная волчанка

сед - системная склеродермия

Отпечатано в ООО «Аверс Плюс» 150040, г. Ярославль, пр. Октября, 34/21. Тел. 97-69-22 Тираж 100 экз. Подписано в печать 10.04.2012 г. Усл. п.л. 1. Заказ № 109.