Автореферат и диссертация по медицине (14.00.39) на тему:Клинико-диагностическое значение исследования активности гуаниндезаминазы, гуанозиндезаминазы, пуриннуклеозидфосфорилазы и гуанозинфосфорилазы в лизатах лимфоцитов, эритроцитов и плазме крови больных системной склеродермией

На правах рукописи

ЕРМОЛАЕВА Наталья Александровна

КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ АКТИВНОСТИ ГУАНИНДЕЗАМИНАЗЫ, ГУАНОЗИНДЕЗАМИНАЗЫ, ПУРИННУКЛЕОЗИДФОСФОРИЛАЗЫ И ГУАНОЗИНФОСФОРИЛАЗЫ В ЛИЗАТАХ ЛИМФОЦИТОВ, ЭРИТРОЦИТОВ И ПЛАЗМЕ КРОВИ БОЛЬНЫХ СИСТЕМНОЙ СКЛЕРОДЕРМИЕЙ

14.00.39 - ревматология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Волгоград - 2007

□□30В053Б

003060536

Работа выполнена в ГУ «НИИ клинической и экспериментальной ревматологии РАМН» и ГОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет» Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию РФ

Научный руководитель доктор медицинских наук, профессор

МЛРТЕМЬЯНОВ Владислав Федорович

Официальные оппоненты.

доктор медицинских наук, профессор КУЛИЧЕНКО Людмила Леонидовна

Ведущая организация-

доктор медицинских наук, профессор ЧИЖОВ Петр Александрович

Оренбургская государственная медицинская академия

Защита состоится " 2007 г в_часов на заседа-

нии диссертационного совета Д 208 008.02 в ГОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет» Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию РФ (400131, г Волгоград, пл Павших борцов, 1)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет» Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию РФ (400131, г Волгоград, пл Павших борцов, 1)

Автореферат разослан " " ¡АлМ^_2007 г

Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук, профессор

А Р Бабаева

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность проблемы. Системная склеродермия (ССД) (по МКБ-10 . М34 Системный склероз) является типичным представителем склеродермической группы системных заболеваний соединительной ткани, и, несмотря на относительно редкую распространенность (первичная заболеваемость от 3,7 до 19 на 1 млн населения в год), характеризуется неуклонным прогрессирующим течением, частой и ранней инвалидизаци-ей лиц трудоспособного возраста, преимущественно женщин, значительно ухудшающим качество жизни и ее продолжительность, требующим высоких материальных затрат на лечение, и поэтому борьба с этим заболеванием является актуальной медико-социальной проблемой Трудности борьбы с этим заболеванием усугубляются неясностью отдельных звеньев патогенеза, дефицитом патогенетических средств лечения, способных оборвать прогрессирование «склеродермического» процесса и не допустить его рецидивов, сложностью первичной диагностики вследствие клинического полиморфизма и сходностью клинической симптоматики со мно! ими заболеваниями Кроме того, даже при точно установленном диагнозе ССД нередко бывает сложно разграничить фазу клинической ремиссии и обострение процесса, так как довольно часто (около 40-50%) это обострение протекает субклиннчески на фоне малоизмененных клинико-иммуно-биохимических показателей, что приводит к запоздалому назначению адекватной терапии, дальнейшему поражению внутренних органов Поэтому поиск и разработка новых параклинических методов распознавания минимальных проявлений активности «склеродермического» процесса является также актуальной задачей практической ревматологии

Существующие теории патогенеза ССД, в основном базируются на признании ведущей роли иммунных нарушений, но иммунные реакции развиваются на уже измененные компоненты соединительной ткани, причины изменений которых неизвестны. В ряде работ сообщается о многочисленных метаболических нарушениях при ССД (Лебедев Д , 1988, Бесе-дин А , 1991), но особый интерес представляют данные о нарушениях нуклеинового метаболизма, проявляющиеся дисбалансом адениловых и гуа-ниловых нуклеотидов и гиперпродукцией антител к ДНК и РНК (Сперанский А И., 1975, Насонова В.А., 1985)

Известно, что предшественниками и составными элементами нуклеиновых кислот являются пуриновые основания, и что метаболиты пуринов принимают активное участие в созревании, дифференциации и пролиферации лимфоцитов, отвечающих за выработку антител и иммунологическую реактивность (Филановская Л И. и др , 1986; Уманский В. и др, 1989). Исходя из этого, нам представляется достаточно перспективным направлением изучение активности энзимов, регулирующих содержание пуриновых мегаболитов. В связи с отсутствием в литературе сведений об

активности энзимов гуаниловой ветви пуринового метаболизма (ПМ) в лимфоцитах и эритроцитах больных ССД, нами были предприняты подобные исследования активности гуаниндезаминазы (ГДА), гуанозинде-заминазы (ГЗДА), гуанозинфосфорилазы (ГФ) и пуриннуклеозидфосфо-рилазы (ПНФ). Эти энзимы действуют на различных этапах ПМ, но являются звеньями одного цикла и по их активности представляется возможным суждение об изменениях I уаниловых метаболитов в пуриновом цикле

Цель исследования. Повышение качества диагностики активности патологического процесса при системной склеродермии, характера течения и стадии болезни, объективизации контроля эффективности лечения больных с использованием показателей активности ГДА, ГЗДА, ПНФ, ГФ и выяснение особенностей пуринового метаболизма, способствующих раскрытию патогенетических механизмов заболевания

Задачи исследования.

1 Отработать методы выделения лимфоцитов и эритроцитов из венозной крови и методы определения активности ГДА, ГЗДА, ГФ и ПНФ в лизатах лимфоцитов, эритроцитов и плазме крови здоровых людей, установить референтные величины (условную норму) активности этих энзимов, изучить зависимость энзимных показателей от пола и возраста

2 Изучить активность ГДА, ГЗДА, ПНФ и ГФ в лизатах лимфоцитов, эритроцитов и плазме крови больных в процессе стационарного лечения в зависимости от степени активности процесса, характера течения и стадии болезни при поступлении в стационар, через 10-12 дней лечения и по окончании стационарного лечения

3 Изучить корреляционные связи между активностью энзимов в плазме, эритроцитах, лимфоцитах у здоровых и больных ССД при различной активности патологического процесса

4 Выявить энзимологические особенности крови больных ССД, способствующие дифференциации степеней активности процесса, характера течения и стадии болезни

5 Выявить наиболее оптимальный набор энзимных показателей, способствующий определению минимальной активности патологического процесса при ССД

6 Оценить возможность использования энзимных показателей крови в качестве дополнительных объективных критериев эффективности проводимой терапии больных ССД

7 Выявить степень влияния на энзимные показатели крови больных ССД активности процесса, характера течения и стадии болезни

Научная новизна работы. Впервые у больных ССД в лизатах эритроцитов, лимфоцитов и плазме крови проведено комплексное исследование активности четырех энзимов пуринового метаболизма ГДА, ГЗДА,

ПНФ и ГФ в процессе стационарного лечения и показано, что изученные энзимные показатели в комплексе с клиническими данными способствуют уточнению степени активности патологического процесса, характера течения, стадии болезни и объективизации оценки эффективности проводимой терапии. Выявлены существенные нарушения пуринового метаболизма в клетках крови, способные оказать негативное влияние на функциональные свойства иммунокомпетентных клеток и рефляцию иммунных процессов при ССД, что можег составить одно из звеньев патогенетических механизмов ССД

Практическая значимость. Исследования активности ГДА, ГЗДА, ПНФ и ГФ в лизатах лимфоцитов, эритроцитов и плазме крови больных ССД в комплексе с клиническими данными могут быть использованы в клинической практике для выявления и уточнения степени активности патологического процесса, характера течения, стадии болезни, что способствует назначению индивидуализированной адекватной терапии В процессе лечения больных ССД контролирование динамики энзимных показателей способствует объективизации оценки эффективности проводимой терапии и прогнозированию ее длительности

Основные положения, выносимые на защиту. Показатели активности ГДА, ГЗДА, ПНФ и ГФ в лизатах лимфоцитов, эритроцитов и плазме крови больных ССД могут быть использованы в качестве дополнительных параклинических показателей для ранней диагностики минимальных проявлений обострения заболевания, уточнения степени активности патологического процесса, характера течения, стадии болезни, тяжести заболевания, объективизации оценки эффективности проводимой терапии и ее длительности

Внедрение в практику. Методы определения активности ГДА, ГЗДА, ПНФ и ГФ в лизатах лимфоцитов, эритроцитов и плазме крови с целью выявления и уточнения степени активности патологического процесса при ССД внедрены в практику работы МУЗ «Городская клиническая больница № 25» и МУЗ «Городская больница № 18» г Волгограда

С результатами энзимных исследований, возможностями энзимной диагностики ССД, их перспективой и значимостью систематически знакомятся студенты Волгоградского государственного медицинского университета, аспиранты, клинические ординаторы и практические врачи на лекциях, научно-практических и клинических конференциях

Публикации и апробация работы. Основные положения диссертации опубликованы в 10 печатных работах Материалы диссертации ежегодно докладывались на научно-практических конференциях ГУ НИИ клинической и экспериментальной ревматологии, Волгоградского государственного медицинского университета и заслушивались на заседаниях

ученого совета ГУ НИИ КиЭР РАМН совместно с кафедрой госпитальной терапии Волгоградского государственного медицинского университета

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 187 страницах компьютерного текста (шрифт гарнитуры Times New Roman кегля 14 пт с полуторным интервалом) и состоит из введения, части I — обзора литературы, представленного одной главой, содержащей основные сведения о медико-биологической роли пуринового метаболизма, некоторых физико-химических свойствах изучаемых ферментов и их использовании в клинической практике, части II — материалов собственных исследований, состоящей из 4 глав, включающих клиническую характеристику больных ССД, методы исследований, результаты исследований, обсуждение полученных результатов, выводы, практические результаты Диссертация иллюстрирована 47 таблицами, 14 рисунками, 3 выписками из историй болезни Библиографический указатель содержит 249 источников, из которых 100 отечественных и 149 зарубежных

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Под наблюдением в стационарных условиях находился 51 больной ССД, из которых 46 (90,2%) женщин и 5 (9,8%) мужчин. Средний возраст больных - 43,4±1,15 (а=8,2) лет, средняя продолжительность болезни -8,1±0,58 (ст=4,15) лет Основную прослойку составили больные в возрасте 41-50 (49%) лет и с длительностью болезни 6-10 (43,1%) лет

В соответствии с диагностическими критериями отечественной классификации ССД (II. Гусева, 1975, В А Насонова и др , 1989) I степень активности патологического процесса определялась у 17 (33,3%) больных, II степень - у 28 (54,9%) и III степень - у 6 (11,8%) больных, I стадия болезни - у 19 (37,3%), II стадия - у 32 (62,7%), хроническое течение заболевания - у 23 (45,1%), подострое - у 23 (45,1%) и острое течение - у 5 (9,8%) больных

Хроническое течение преобладало при I степени (82,4%), подострое - при II (67,9%) и острое течение - при III степени (83,3%) активности процесса При длительности болезни до 5 лет преобладала I стадия болезни (84,6%), свыше 10 лет - у всех больных определялась II стадия болезни

При поступлении в стационар наиболее часто определялись кожный синдром (100%), сосудистый синдром (88,2%) и суставной (82,4%), поражение сердца (72,5%), желудочно-кишечного тракта (70,6%), легких (66,6%), почек (27,5%).

Контрольную группу составили 35 практически здоровых людей (доноры станции переливания крови), средний возраст которых составил 37,9±3,6 лет

Выделение клеток (лимфоциты, эритроциты) из венозной крови проводилось по методике Boyum (1980) с использованием лимфосепа (JCN Biomedical) с плотностью раствора 1,077-1,079 г/мл Лизаты клеток готовили путем замораживания - оттаивания - центрифугирования Активность энзимов в лизатах клеток рассчитывалась для лимфоцитов на 1 мл, содержащий (до лизиса) 1 х 107 клеток, для эритроцитов - 1*108 клеток и выражалась в нмоль/мин/мл Активность ГДА и ГЗДА определялась фе-нолгипохлоритным методом (Caraway W , 1966), ГФ - по приросту содержания гуанина (Yamada M. et al, 1989) и ПНФ - кинетическим методом (Robertson В et al, 1973) Статистическая обработка данных проводилась с использованием программного пакета STATIST ICA 6,0 для Windows с вычислением средней арифметической (М), ошибки средней (ш), стандартного отклонения средней (а), достоверности различий с использованием t-критерия Стьюдента, коэффициента корреляции (г) по Пирсону Для всех видов анализа различия считали достоверными при р<0,05

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Существенных различий показателей активностей ГДА, ГЗДА, ПНФ и ГФ в лизатах лимфоцитов, эритроцитах и плазме крови у здоровых людей в зависимости от пола и возраста выявлено не было и поэтому в дальнейшем при анализе энзимных показателей у больных ССД эти факторы не учитывались

У больных ССД (всей группы - 51 чел) при поступлении на лечение, по сравнению со здоровыми (табл 1), в плазме выше активность ГДА, ПНФ (все р<0,001) и незначительно выше ГЗДА и ГФ (р>0,05), в лизатах эритроцитов ниже активность ГДА, ГЗДА, ПНФ (все р<0,001) и выше ГФ (р<0,001), в лимфоцитах ниже активность ГДА, ПНФ (все р<0,001) и выше ГЗДА, ГФ (все р<0,001).

Через 10-12 дней лечения, наряду с некоторым улучшением клинического состояния больных, в плазме крови наблюдалось снижение активности ПНФ (р<0,01) и тенденция к снижению активности ГДА, ГЗДА и ГФ (все р>0,05), в эритроцитах повысилась ранее сниженная активность ПНФ (р<0,001), снизилась ГФ (р<0,001) и наметилась тенденция к повышению активности ГДА и ГЗДА (р>0,05), в лимфоцитах повысилась активность ГДА (р<0,001), снизилась акшвность ГЗДА (р<0,001), ГФ (р<0,01), определилась тенденция к повышению активности ПНФ (р>0,05)

По окончании курса стационарного лечения наблюдалось дальнейшее улучшение клинического состояния больных и положительная динамика всех изученных энзимных показателей (табл 2). В плазме снизилась активность всех энзимов- ГДА - на 20,4% (р<0,001), ГЗДА - на 8,4% (р<0,01), ПНФ - на 18,8% (р<0,001) и ГФ - на 12,5% (р<0,001), в лизатах

эритроцитов повысилась активность ГДА на 25,6% (р<0,001), ГЗДА на 15,3% (р<0,001), ПНФ на 191,9% (р<0,001) и снизилась активность ГФ на 47,5% (р<0,001), в лизатах лимфоцитов повысилась активность ГДА на 66,1% (р<0,001), ПНФ на 13,2% (р<0,001), снизилась активность ГЗДА на 31,1% (р<0,001) и ГФ на 21,4% (р<0,001)

За период проведенного лечения, практически, нормализовались активности ГДА, ГЗДА, ГФ в плазме, и только осталась повышенной активность ПНФ (р<0,05), в эритроцитах нормализовалась активность ГЗДА, но остались сниженными активности ГДА (р<0,01), ПНФ (р<0,001) и повышенной активность ГФ (р<0,001), в лимфоцитах нормализации активности энзимов не произошло, остались сниженными активности ГДА (р<0,001), ПНФ (р<0,001) и повышенными активности ГЗДА (р<0,001) и ГФ (р<0,01)

У больных с хроническим течением заболевания (всей группы), по сравнению со здоровыми (табл 1), в плазме существенных энзимных различий не определялось (все р>0,05), в эритроцитах ниже активность ГДА (р<0,05), ПНФ (р<0,001), и выше ГФ (р<0,001), в лимфоцитах ниже активность ГДА (р<0,001), ПНФ (р<0,001), выше ГЗДА (р<0,001) и ГФ (р<0,01)

У больных ССД с подострым течением, по сравнению со здоровыми (табл. 1), в плазме выше активность всех энзимов ГДА, ПНФ, ГФ (все р<0,001) и ГЗДА (р<0,05), в эритроцитах ниже активность ГДА, ГЗДА, ПНФ (все р<0,001) и выше ГФ (р<0,001), в лимфоцитах ниже активность ГДА, ПНФ, выше активность ГЗДА и ГФ (все р<0,001)

У больных с острым течением, по сравнению со здоровыми (табл 1), в плазме выше активность ГДА (р<0,05), ПНФ (р<0,001), ГФ (р<0,01), в эритроцитах ниже активность ГДА, ГЗДА, ПНФ (все р<0,001) и выше ГФ (р<0,001), в лимфоцитах ниже активность ГДА, ПНФ и выше ГЗДА, ГФ (все р<0,001)

Между всеми вариантами течения заболевания выявлены существенные энзимные различия Так, у больных с хроническим течением, по сравнению с подострым, в плазме ниже активность всех энзимов (р<0,001), в эритроцитах выше активность ГДА, ГЗДА, ПНФ и ниже активность ГФ (все р<0,001), в лимфоцитах выше активность ГДА, ПНФ и ниже ГЗДА (все р<0,001), по сравнению с острым течением, в плазме ниже активность ГДА, ПНФ, ГФ и выше ГЗДА (все р<0,001), в эритроцитах выше активность ГДА, ГЗДА, ПНФ и ниже активность ГФ (все р<0,001), в лимфоцитах выше активность ГДА, ПНФ, но ниже активность ГЗДА (все р<0,001)

Таблица I

Энзимные показатели здоровых и больных ССД при поступлении на лечение_

Контингент Стат Плазма Эритроциты 1 Лимфоциты

пок ГДЛ ГЗДА ПНФ ГФ ГДА ГЗДА ПНФ ГФ ГДА ГЗДА ПНФ ГФ

М 1,18 2,15 0,83 0,99 16,9 11,7 179,4 4,72 11,8 8,17 34,6 11,9

Здоровые, п"3 5 ст 0,59 1,01 0,31 0,47 1,89 3,02 18,6 0,52 1,18 1,07 3,08 2,60

ш 0,10 0,17 0,05 0,08 0,38 0,51 3,15 0,09 0,2 0,18 0,52 0,44

Больные ССД (вся группа), п=51 М 1,62 2,26 1,17 1,12 ¡2,5 9,45 46,9 12,1 6,38 13,8 28,0 17,3

ст 0,47 0,32 0,25 0,18 3,36 2,37 15,9 2,46 0,61 1,64 2,50 1,92

ГП 0,07 0,05 0,04 0,03 0,47 0,33 2,22 0,34 0,09 0,23 0,35 0,27

М 1,35 2,19 0,95 0,95 16,2 12,1 64,5 9,62 7,07 12,1 30,4 15,1

ССД, I степень, п=17 ст 0,51 0,39 0,26 0,05 1,67 0,44 14,2 0,88 0,46 0,67 0,97 1,30

m 0,12 0,10 0,06 0,01 0,40 0,11 3,43 0,21 0,11 0,16 0,24 0,32

ССД, II степень, п=28 М 1,80 2,40 1,25 1,17 11,4 8,78 40,1 12,6 6,14 14,3 27,5 18,1

ст 0,41 0,16 0,16 0,14 1,98 1,20 5,40 1,29 0,25 0,77 1,26 0,57

m 0,08 0,03 0,03 0,03 0,38 0,23 1,02 0,24 0,05 0,15 0,24 0,11

М 1,78 1,69 1,61 1,55 7,18 5,22 28,5 16,3 5,60 16,6 23,2 19,9

ССД, III степень, п=6 ст 0,17 0,16 0,17 0,15 0,38 0,74 1,76 0,91 0,09 0,95 1,19 1,06

m 0,07 0,06 0,07 0,06 0,16 0,30 0,72 0,37 0,04 0,39 [jvIL 0,43

ССД, хроническое течение, п~23 М 1,24 2,15 0,93 0,95 15,4 11,3 59,0 10,1 6,89 12,5 30,0 15,8

ст 0,21 0,28 0,15 0,06 1,92 1,23 15,3 1,15 0,50 0,92 1,18 4,80

m 0,04 0,06 0,03 0,01 0,40 0,26 3,19 0,24 0,11 0,19 0,25 1,60

ССД, подострое течение, п_23 М 2,02 2,48 1,35 1,23 10,7 8,54 38,8 12,9 6,06 14,6 27,0 S 18,2

ст 0,38 0,19 0,10 0,10 1,79 1,42 6,13 1,38 0,24 0,86 1,30 0,71

m 0,08 0,04 0,02 0,02 0,37 0,30 1,28 0,29 0,05 0,18 0,27 0,15

ССД, острое течение, п=5 М 1,83 1,63 1,67 1,59 7,06 4,96 28,2 16,6 5,58 16,7 23,0 20,1

ст 0,15 0,10 0,11 0,11 0,26 0,43 1,78 0,67 0,08 0,97 1,13 1,13

m 0,07 0,04 0,05 0,05 0,12 0,19 0,80 0,30 0,04 0,43 0,50 0,51

Таблица 2

Энзимные показатели здоровых и больных ССД по окончании лечения_

Контингент Стат пок Плазма Эритроциты Лимфоциты

ГДА ГЗДА ПНФ ГФ ГДА ГЗДА ПНФ ГФ ГДА ГЗДА ПНФ ГФ

Здоровые, п=35 М 1,18 2,15 0,83 0,99 16,9 11,7 179,4 4,72 11,8 8,17 34,6 11,9

ст 0,59 1,01 0,31 0,47 1,89 3,02 18,6 0,52 1,18 1,07 3,08 2,6

m 0,10 0,17 0,05 0,08 0,38 0,51 3,15 0,09 0,2 0,18 0,52 0,44

Больные ССД (вся группа), п=51 М 1,29 2,07 0,95 0,98 15,7 10,9 136,9 6,35 10,6 9,51 31,7 13,6

ст 0,22 0,22 0,24 0,04 1,56 0,77 19,3 1,33 0,72 0,74 1,34 0,65

m 0,03 0,03 0,03 0,01 0,22 0,11 2,70 0,19 0,10 0,10 0,19 0,09

ССД, I степень, п=17 М 1,16 2,09 0,83 0,99 17,2 11,4 157,6 5,44 11,1 8,88 32,9 12,9

ст 0,14 0,21 0,09 0,02 0,53 0,12 13,8 0,50 0,29 0,25 0,47 0,40

m 0,03 0,05 0,02 0,005 0,13 0,03 3,34 0,12 0,07 0,06 0,11 0,10

ССД, II степень, п=28 М 1,28 2,16 0,90 0,98 15,4 10,9 129,7 6,48 10,5 9,75 31,3 13,8

CT 0,16 0,07 0,04 0,05 1,19 0,56 9,44 1,13 0,80 0,75 1,10 0,38

m 0,03 0,01 0,008 0,01 0,22 0,11 1,78 0,21 0,15 0,14 0,21 0,07

ССД, III степень, п=6 М 1,26 1,98 1,05 1,17 13,3 9,33 111,7 8,32 9,95 10,2 30,0 14,4

CT 0,04 0,08 0,03 0,03 0,70 0,59 11,0 1,52 0,21 0,19 1,17 0,55

ш 0,02 0,03 0,01 0,01 0,28 0,24 4,48 0,62 0,09 0,08 0,48 0,22

ССД, хроническое течение, п=23 М 1,12 2,09 0,83 0,96 17,0 11,4 149,0 5,60 10,7 9,07 32,7 13,1

CT 0,09 0,17 0,07 0,05 0,60 0,10 16,5 0,86 0,70 0,45 0,72 0,55

m 0,02 0,04 0,01 0,01 0,12 0,02 3,44 0,18 0,15 0,10 0,15 0,11

ССД, подострое течение, п=23 М 1,35 2,19 0,93 1,01 15,0 10,8 130,8 6,57 10,7 9,81 31,0 13,8

CT 0,13 0,07 0,05 0,04 1,18 0,58 13,5 1,02 0,73 0,80 1,08 0,42

m 0,03 0,01 0,009 0,007 0,25 0,12 2,82 0,21 0,15 0,17 0,23 0,09

ССД, острое течение, п=5 M 1,28 1,95 1,06 1,18 13,3 9,20 108,4 8,78 9,88 10,2 30,1 14,5

CT 0,03 0,06 0,03 0,02 0,74 0,55 8,31 1,13 0,13 0,21 1,28 0,39

m 0,01 0,03 0,01 0,007 0,33 0,24 3,72 0,51 0,06 0,09 0,57 0,17

У больных с подоетрым течением по сравнению с острым, в плазме выше активность ГЗДА (р<0,001), но ниже ПНФ и ГФ (р<0,001), в эритроцитах выше активность ГДА, ГЗДА, ПНФ и ниже активность ГФ (все р<0,001), в лимфоцитах выше активность ГДА, ППФ (р<0,001) и ниже активность ГЗДА, ГФ (р<0,001)

Ниже представлен анализ энзимных показателей в зависимости от стадии болезни

У больных с I стадией болезни, по сравнению со здоровыми, в плазме выше активность ПНФ (р<0,05), в эритроцитах ниже активность ГДА (р<0,001), ПНФ (р<0,001) и выше ГФ (р<0,001), в лимфоцитах ниже активность ГДА, ПНФ и выше ГЗДА, ГФ (все р<0,001)

У больных с II стадией, по сравнению со здоровыми, в плазме выше активность ГДА, ПНФ и ГФ (все р<0,001), в эритроцитах ниже активность ГДА, ГЗДА, ПНФ и выше ГФ (все р<0,001), в лимфоцитах ниже активность ГДА, ПНФ и выше ГЗДА, ГФ (все р<0,001)

У больных ССД с I стадией болезни, по сравнению с II стадией, в плазме ниже активность ГДА, ПНФ и ГФ (все р<0,001), в эритроцитах выше активность ГДА, ГЗДА, ПНФ и ниже ГФ (все р<0,001), в лимфоцитах выше активность ГДА, ПНФ, ниже активность ГЗДА и ГФ (все р<0,001)

Таким образом, проведенные исследования выявили существенные изменения активности ГДА, ГЗДА, ПНФ и ГФ в крови больных ССД, наиболее выраженные в лимфоцитах и эритроцитах Активность энзимов во многом зависела от характера течения, стадии болезни и меняющеюся клинического состояния больных в процессе лечения В то же время проведенный анализ не учитывал влияния активности «склеродермического» процесса на энзимные показатели (в группе были больные с различной степенью активности) Поэтому ниже представлены результаты исследования энзимных показателей в зависимости от степени активности процесса

Г степень активности. При поступление на лечение, по сравнению со здоровыми (табл 1), у больных ССД в плазме крови не выявлено существенных энзимных различий, в эритроцитах ниже активность ПНФ и выше ГФ (р<0,001), в лимфоцитах ниже активность ГДА, ПНФ и выше активность ГЗДА, ГФ (все р<0,001).

Если же ориешироваться не на среднестатистические величины активности энзимов, а на индивидуальные энзимные показатели, то в плазме крови за пределы условной нормы (референтные величины у здоровых), рассчитанной по формуле М±2о (95% вероятность), активности ГЗДА и ГФ не выходили ни у одного больного (0%), ГДА - у одного больного (5,9%), а активность ПНФ была выше верхней границы нормы в 17,6% случаев, в лизатах эритроцитов показатели активности ГДА и ГЗДА ни у

одного больного не выходили за границы нормы, но активность ПНФ в 100% случаев была ниже, а ГФ выше (100%) границ нормы, в лизатах лимфоцитов активности ПНФ и ГФ ни у одного больного не выходили за пределы референтных величин здоровых (0%), но активность ГДА в 100% случаев была ниже, а активность ГЗДА в 100% случаев выше уровня нормы

В то же время у этих же больных среди общепринятых клинико-иммуно-биохимических показателей, отражающих активность иммуно-воспалительного процесса при ССД, отклонения от уровня здоровых лиц для СОЭ и сиаловых кислот отмечались в 17,6% случаев, фибриногена, СРБ и ЦИК - в 23,5%, гамма-глобулинов, иммуноглобулинов в - в 29,4%, иммуноглобулинов М и АНФ - в 47,1%, иммуноглобулинов А - в 41,2% случаев То есть, показатели активности ПНФ и ГФ в эритроцитах, ГДА и ГЗДА в лимфоцитах отличались более значительной информативностью и чувствительностью в индикации минимальной активности «склеродермического» процесса, чем самые демонстративные в этом плане вышеуказанные клинико-иммуно-биохимические показатели

Анализ корреляционных связей между активностями энзимов в плазме выявил в большинстве случаев слабые связи, только между ГДА и ПНФ определялись прямые средней силы связи (г=0,39) По сравнению со здоровыми, при I степени обратные связи между ГДА - ПНФ, ГЗДА -ПНФ поменялись на прямые В эритроцитах сильная обратная связь определялась между ПНФ - ГФ, умеренная обратная связь - между ГДА -ПНФ, ГДА - ГФ, прямая умеренная - между ГЗДА - ГФ. Остальные связи были малозначительными По сравнению со здоровыми, изменились направления связей между ГДА - ПНФ, ГДА - ГФ с прямых на обрагные В лимфоцитах между всеми энзимами определялись связи средней силы прочности между ГДА - ПНФ и ГЗДА - ГФ - прямые, между другими -обратные По сравнению со здоровыми, прямые связи между ГДА - ГФ стали обратными, а обратные связи между ГЗДА - ГФ поменялись на прямые

Корреляционный анализ между активностью одного и того же энзима в различных средах исследований показал, что если у здоровых связи в большинстве случаев (58,3%) были слабыми, то при I степени в 91,7% случаев связи были умеренными, а между ГФэр и ГФлимф определялась прямая сильная связь (г=0,73) Кроме того, при I степени, по сравнению со здоровыми, изменились направления связей между ГЗДАпл - ГЗДАэр, ГДАпл - ГДАлимф , ПНФпл - ПНФлимф , ГФпл - ГФлимф , а остальные связи упрочились

Через 10-12 дней лечения, наряду с некоторым улучшением клинического состояния у большинства больных ССД, наблюдалась и определенная положительная динамика некоторых энзимных показателей в 12

плазме лишь наметилась тенденция к снижению активности ГДА, ГЗДА, ПНФ и повышению ГФ (все р>0,05), в эритроцитах повысилась ранее сниженная активность ПНФ (р<0,001) и снизилась ГФ (р<0,001), в лимфоцитах повысилась активность ГДА (р<0,001), ПНФ (р<0,05) и снизилась активность ГЗДА (р<0,001)

Перед выпиской из стационара, по сравнению с начальным этапом (габл 2), в плазме крови повысилась активность ГФ (р<0,01), в эритроцитах повысилась активность ГДА (р<0,05), ПНФ (р<0,001), снизилась активность ГЗДА (р<0,001) и ГФ (р<0,001), в лимфоцитах повысилась активность ГДА, ПНФ, снизилась активность ГЗДА, ГФ (все р<0,001)

После проведенного курса стационарного лечения у больных ССД, исходя из среднестатистических величин активности энзимов, в плазме нормализовалась активность всех энзимов, в эритроцитах — активность ГДА, ГЗДА, но осталась сниженной активность ПНФ (р<0,001) и повышенной ГФ (р<0,001), в лимфоцитах нормализовалась только активность ГФ, но осталась повышенной активность ГЗДА (р<0,01) и сниженными активности ПНФ (р<0,05) и ГДА (р<0,001)

Выше нами были показаны особенности энзимного профиля крови при различных вариантах течения заболевания и стадиях болезни, но при этом не учитывался фактор активности процесса Поэтому ниже представлены результаты исследования энзимной активности при различных вариантах течения и стадиях болезни, но при одной (I) степени активности процесса, что позволяет нивелировать влияние активности процесса

У больных с хроническим течением заболевания, по сравнению со здоровыми, при поступлении на лечение (табл 3) в плазме существенных энзимных различий не выявлено, в эритроцитах ниже активность ППФ и выше ГФ (р<0,001), в лимфоцитах ниже активность ГДА, ПНФ, выше активность ГЗДА и ГФ (все р<0,001) Через 10-12 дней лечения в плазме существенных изменений активности энзимов не произошло, в эритроцитах повысилась активность ПНФ и снизилась ГФ (все р<0,001), в лимфоцитах повысилась активность ГДА (р<0,001), ПНФ (р<0,05), снизилась активность ГЗДА (р<0,001)

По окончании курса стационарного лечения, по сравнению с начальным этапом, в плазме повысилась активность ГФ (р<0,001), в эритроцитах снизилась активность ГЗДА, ГФ (р<0,001), повысилась ранее сниженная активность ПНФ (р<0,001), в лимфоцитах повысилась активность ГДА, ПНФ и снизилась ГЗДА, ГФ (все р<0,001) Перед выпиской из стационара нормализовались в плазме активности всех энзимов, в эритроцитах - ГДА, ГЗДА, но осталась сниженной активность ПНФ и повышенной ГФ (р<0,001), в лимфоцитах нормализовалась активность ПНФ, ГФ, но осталась сниженной активность ГДА (р<0,05) и повышенной ГЗДА (р<0,05)

-ь.

Таблица 3

Энзимные показатели больных ССД при поступлении на лечение

Контингент Стат Плазма Эритроциты Лимфоциты

пок ГДА ГЗДА ПНФ 1 ГФ ГДА ГЗДА ПНФ ГФ ГДА ГЗДА ПНФ ГФ

I степень активности

Хроническое тече- М 1Д2 2,08 0,83 0,93 16,5 12,2 67,6 9,35 7,19 11,9 30,8 14,7

ние, п=14 т 0,03 0,09 0,02 0,009 0,38 0,07 3,68 0,19 0,11 0,17 0,20 0,31

Подострое течение, М 2,40 2,70 1,47 1,02 13,8 11,4 50,3 10,9 6,47 11,4 29,0 16,7

п=3 т 0,01 0,06 0,01 0,009 0,38 0,31 0,35 0,03 0,03 0,31 0,20 0,13

I стадия болезни, М 1,14 2,12 0,87 0,92 16,2 12,1 69,3 9,54 7,25 11,9 30,4 14,9

п=12 т 0,04 0,10 0,04 0,01 0,38 0,08 4,11 0,22 0,12 0,20 0,23 0,38

И стадия болезни, М 1Д9 2,15 0,94 0,96 15,8 11,2 50,8 10,1 6,54 12,7 30,2 15,7

п=5 т 0,04 0,12 0,08 0,01 1,01 0,72 2,36 0,67 0,10 0,24 0,76 0,71

II степень активности

Хроническое тече- М 1,43 2,26 1,07 0,99 13,7 10,0 45,6 11,3 6,41 13,4 28,8 17,4

ние, п=9 ш 0,07 0,03 0,04 0,02 0,39 0,28 0,91 0,08 0,05 0,09 0,16 0,07

Подострое течение, М 1,98 2,47 1,34 1,25 10,4 8,20 37,4 13,2 6,01 14,8 26,8 18,4

п=19 т 0,08 0,03 0,02 0,01 0,30 0,20 0,96 0,27 0,04 0,11 0,23 0,08

I стадия болезни, п~6 М 1,60 2,45 1,26 1,13 11,9 9,45 43,2 11,6 6,27 14,2 28,1 17,7

т 0,06 0,04 0,01 0,03 0,70 0,64 2,90 0,26 0,11 0,52 0,33 0,37

II стадия болезни, М 1,99 2,43 1,29 1,20 11,2 8,74 39,1 12,8 6,10 14,4 27,2 18,2

п=22 га 0,09 0,05 0,04 0,03 0,46 0,28 1,24 0,30 0,06 0,16 0,32 0,13

У больных с подострьш течением при поступлении на лечение, по сравнению со здоровыми (табл 3), в плазме выше активность ГДА (р<0,01) и ППФ (р<0,001), в эритроцитах ниже активность ГДА (р<0,05), ПНФ (р<0,001) и выше ГФ (р<0,001), в лимфоцитах ниже активность ГДА (р<0,001), ПНФ (р<0,01), выше активность ГЗДА (р<0,001) и ГФ (р<0,01)

По окончании курса стационарного лечения, по сравнению с исходным фоном, в плазме произошло значительное снижение активности ГДА, ГЗДА, ПНФ (все р<0,001), в эритроцитах повысилась активность ГДА (р<0,01), ПНФ (р<0,001) и снизилась ГФ (р<0,001), в лимфоцитах повысилась активность I ДА, ПНФ и снизилась активность ГФ (р<0,001) За этот период отмечалась нормализация активности всех энзимов в плазме, в эритроцитах - активности ГДА и ГЗДА, но осталась сниженной активность ПНФ (р<0,05) и повышенной ГФ (р<0,001), в лимфоцитах - активности ГДА, ПНФ, ГФ, но ос1алась повышенной активность ГЗДА (р<0,001)

У больных с хроническим течением, по сравнению с подострым, в плазме ниже активность всех энзимов (все р<0,001), в эритроцитах выше акшвность ГДА (р<0,01) и ГФ (р<0,001), в лимфоцитах выше активность ГДА (р<0,05), ПНФ (р<0,01) и ниже ГФ (р<0,001)

У больных ССД с I стадией болезни, по сравнению со здоровыми (табл 3), в плазме существенных энзимных различий не выявлено, в эритроцитах ниже активность ПНФ и выше ГФ (р<0,001), в лимфоцитах ниже активность ГДА, ПНФ, выше активность ГЗДА, ГФ (все р<0,001).

У больных ССД с II стадией, по сравнению со здоровыми (табл 3), в плазме существенных энзимных различий не выявлено, в эритроцитах ниже активность ПНФ и выше ГФ (р<0,001), в лимфоцитах ниже активность ГДА (р<0,001), ПНФ (р<0,01), выше активность ГЗДА (р<0,001) и ГФ (р<0,01)

Сравнительный анализ показал, что у больных ССД с I стадией болезни, но сравнению с II, в плазме ниже активность ГФ (р<0,05), в эритроцитах выше активность ПНФ (р<0,05), в лимфоцитах выше активность ГДА (р<0,01), ниже ГЗДА (р<0,05)

То есть, проведенные исследования у больных ССД с I степенью выявили существенные различия между всеми вариантами течения, особенно выраженные в лизатах лимфоцитов и эритроцитов Между стадиями болезни энзимные различия менее выражены, что, вероятно, можно объяснить тем, что среди больных с I и II стадиями имелись больные с различными вариантами течения, но в обеих группах преобладало хроническое течение заболевания

II С1впень активности. При поступлении на лечение, по сравнению со здоровыми (табл 1), в плазме выше активность ГДА (р<0,001), ПНФ (р<0,001) и ГФ (р<0,05), в эритроцитах ниже активность ГДА, ГЗДА, ПНФ

и выше ГФ (все р<0,001), в лимфоцитах ниже активность ГДА, ПНФ, выше ГЗДА и ГФ (все р<0,001)

Анализ корреляционных связей между энзимами выявил в плазме наличие прямых средней прочности связей между всеми энзимами, за исключением связи между ПНФ - ГФ, где определялись прямые сильные связи (г=0,71) В лимфоцитах между всеми ферментами определялись сильные связи, за исключением связи между ГШФ - ГФ, где выявлена умеренная обратная связь В эритроцитах также определялись сильные связи между всеми энзимами, за исключением связи между ГЗДА - ПНФ (г=0,56)

Через 10-12 дней лечения в плазме снизилась активность ГЗДА (р<0,05), ПНФ (р<0,01), в эритроцитах повысилась ранее сниженная активность ПНФ (р<0,001), снизилась ГФ (р<0,001), в лимфоцитах повысилась активность ГДА (р<0,001), ПНФ (р<0,05), снизилась активность ГЗДА и ГФ (р<0,001)

По окончании курса лечения, по сравнению с начальным этапом (табл 2), в плазме снизилась активность всех энзимов ГДА, ГЗДА, ПНФ (все р<0,001) и ГФ (р<0,01), в эритроцитах повысилась активность ГДА, ГЗДА, ПНФ и снизилась активность ГФ (все р<0,001), в лимфоцитах повысилась активность ГДА, ПНФ, снизилась ГЗДА и ГФ (все р<0,001) За этот период лечения нормализовалась в плазме активность всех энзимов, в эритроцитах — только активность ГЗДА, но остались сниженными активное™ ГДА (р<0,01), ПНФ (р<0,001) и повышенной активность ГФ (р<0,001), в лимфоцитах не выявлено нормализации ни одного энзима остались сниженными активности ГДА, ПНФ, повышенными активности ГЗДА и ГФ (все р<0,001).

У больных с хроническим течением, по сравнению со здоровыми (табл 3), в плазме выше активность ПНФ (р<0,05), в эритроцитах ниже активность ГДА, ПНФ и выше ГФ (все р<0,001), в лимфоцитах ниже активность ГДА, ПНФ и выше ГЗДА, ГФ (все р<0,001)

После проведенного курса лечения в плазме нормализовалась активность всех энзимов, в эритроцитах - активность ГДА и ГЗДА, но осталась сниженной активность ПНФ (р<0,001) и повышенной ГФ (р<0,001), в лимфоцитах нормализовалась активность ГФ, но остались сниженными активности ГДА (р<0,001), ПНФ (р<0,05) и повышенной ГЗДА (р<0,01)

У больных с подострым течением, по сравнению со здоровыми (табл 3), в плазме выше активность ГДА (р<0,001), ГЗДА (р<0,05), ПНФ (р<0,001) и ГФ (р<0,05), в эритроцитах ниже активность ГДА, ГЗДА, ПНФ и выше ГФ (все р<0,001), в лимфоцитах ниже активность ГДА, ПНФ, выше ГЗДА и ГФ (все р<0,001)

После проведенного курса лечения отмечалась существенная положительная динамика всех энзимных показателей и наблюдалась нормали-

16

зация активности всех энзимов в плазме, в эритроци гах - только ГЗДЛ, но остались сниженными активности ГДА, ППФ и повышенной активность ГФ (все р<0,001), в лимфоцитах гак и остались сниженными активности ГДА, ПНФ (р<0,001) и повышенными активноеш ГЗДА (р<0,001) и ГФ (р<0,01)

Между вариантами течения заболевания выявлены существенные энзимные различия у больных с хроническим течением, по сравнению с подострым, в плазме ниже активность всех энзимов (р<0,001), в эритроцитах выше активность ГДА, ГЗДА, ПНФ и ниже ГФ (все р<0,001), в лимфоцитах выше активность ПНФ, ГДА и ниже активность ГЗДА, ГФ (все р<0,001)

У больных ССД с I стадией болезни, по сравнению со здоровыми (табл 3), в плазме выше активность ПНФ (р<0,01), в лимфоцитах ниже активность ГДА, ПНФ, выше ГЗДА и ГФ (все р<0,001), в эритроцитах ниже активность ГДА, ПНФ и выше ГФ (все р<0,001)

У больных с II стадией, по сравнению со здоровыми (табл 3), в плазме выше активность ГДА, ПНФ, ГФ (р<0,001), в эритроцитах ниже активность ГДА, ГЗДА, ПНФ и выше ГФ (р<0,001), в лимфоцитах ниже активность ГДА, ПНФ, выше ГЗДА и ГФ (р<0,001)

У больных с I стадией болезни, по сравнению с II, в плазме ниже активность ГДА (р<0,05), а в лизатах эритроцитов и лимфоцитов существенных энзимных различий не выявлено (р>0,05)

То есть, при II степени активности процесса, как и при I степени, выявлены выраженные существенные различия между вариантами течения заболевания и минимальные энзимные различия (только по плазменной активности ГДА) между стадиями болезни Вероятно, малые различия между стадиями можно объяснить преобладанием у больных ССД при I и II стадии одного и того же варианта течения - подострого и менее выраженным влиянием на энзимные показатели стадии, чем характера течения болезни

III степень активности. При поступлении на лечение, по сравнению со здоровыми (табл 1), в плазме выше активность ГДА (р<0,05), ПИФ (р<0,001), ГФ (р<0,01) и ниже ГЗДА (р<0,01), б эритроцитах ниже активность ГДА, ГЗДА, ПНФ и выше ГФ (все р<0,001), в лимфоцитах ниже акшвность ГДА, ПНФ и выше ГЗДА, ГФ (все р<0,001) Через 10-12 дней лечения в плазме снизилась активность ГДА и ПНФ (р<0,05), в эритроцитах повысилась активность ГДА (р<0,05), ГЗДА (р<0,01), ПНФ (р<0,001) и снизилась активность ГФ (р<0,001), в лимфоцитах повысилась активность ГДА (р<0,001), ПНФ (р<0,05), снизилась ГЗДА (р<0,01) После проведенного курса лечения отмечалось значительное улучшение клинического состояния больных, выраженная положительная динамика всех энзимных показателей (табл 2) нормализовалась активность всех эн-

зимов в плазме, в эритроцитах - активность ГЗДА, но остались сниженными активности ГДА, ПНФ и повышенной активность ГФ (все р<0,001), в лимфоцитах не наблюдалось нормализации активности ни одного энзима и остались сниженными активности ГДА, ПНФ (р<0,001), повышенными активности ГЗДА (р<0,001) и ГФ (р<0,05)

Нами были проведены сравнительные исследования энзимных показателей между всеми степенями активности процесса при ССД

У больных ССД с I степенью активности процесса, по сравнению с больными с II степенью, в плазме ниже активность всех энзимов- ГДА (р<0,01), ГЗДА (р<0,05), ПНФ и ГФ (р<0,001), в эритроцитах выше активность ГДА, ГЗДА, ПНФ (все р<0,001) и ниже ГФ (р<0,001), в лимфоцитах выше активность ГДА, ПНФ и ниже активность ГЗДА, ГФ (р<0,001), по сравнению с III степенью, в плазме выше активность ГЗДА (р<0,01), ниже ПНФ и ГФ (р<0,001), в эритроцитах выше активность ГДА, ГЗДА, ПНФ и ниже ГФ (все р<0,001), в лимфоцитах выше активность ГДА, ПНФ и ниже активность ГЗДА, ГФ (все р<0,001)

У больных ССД с II степенью, по сравнению с III степенью, в плазме крови выше активность ГЗДА, ниже ПНФ и ГФ (все р<0,001), в эритроцитах выше активность ГДА, ГЗДА, ПНФ и ниже ГФ (все р<0,001), в лимфоцитах выше активность ГДА, ПНФ, ниже ГЗДА и ГФ (все р<0,001)

То есть, между всеми степенями активности процесса при ССД определяются выраженные энзимные различия, способствующие их дифференциации

Выше нами было показано, что как при одной и той же степени активности процесса, так и независимо от степени активности процесса, выявлены существенные энзимные отличия между различными вариантами течения заболевания Возникает естественный вопрос, что же в большей степени влияет на энзимные показатели крови - характер течения или активность процесса9 Для решения этого вопроса мы провели сравнительные исследования энзимного профиля крови при одном характере течения, но разной активности процесса Результаты исследования показали, что у больных с хроническим течением и I степенью, по сравнению с больными с хроническим течением и II степенью, в плазме ниже активность всех энзимов, в эритроцитах выше активность ГДА, ГЗДА, ПНФ и ниже ГФ (р<0,001), в лимфоцитах выше активность ГДА, ПНФ и ниже ГЗДА и ГФ (р<0,001). Аналогичные различия были выявлены и для подо-строго течения при различной активности процесса

То есть, были выявлены энзимные различия, характерные для различий между I и II степенями активности процесса, независимо от характера течения заболевания, что доказывает значительно более выраженное влияние активности процесса на энзимные показатели, чем характера течения. Путем подобного сравнительного исследования было доказано 18

также более значшельное влияние на энзимные показатели активности процесса, чем стадии болезни

Таким образом, проведенные нами исследования выявили существенные изменения активности ГДА, ГЗДА, ПНФ и ГФ, особенно выраженные в лимфоцитах и эритроцитах, зависящие в большей степени от активности патологическою процесса и в меньшей степени от характера течения и стадии болезни Это имеет важное практическое значение, так как независимо от характера течения и стадии болезни, представляется возможность более четко определять степень активности «склеродермиче-ского» процесса и назначать адекватную терапию

Анализируя результаты энзимных исследований у больных ССД во всех трех средах с учетом степени активности патологического процесса, можно выявить некоторые достаточно выраженные закономерности В плазме крови чем выше степень активности процесса, тем выше активность ГДА, ПНФ, ГФ, а активность ГЗДА повышается при I—II степени, но при III степени снижается В эритроцитах чем выше степень активности процесса, тем выше активность ГФ, ГЗДА и ниже активность ГДА и ПНФ В лимфоцитах чем выше активность процесса, тем ниже активность ГДА, ПНФ и выше активность ГЗДА и 1 Ф

Изученные нами энзимы являются ферментами гуаниловой ветви ПМ, и все они взаимосвязаны Изменение активности даже одного энзима ведет к изменениям активности других энзимов, о чем свидетельствуют результаты корреляционного анализа Понять смысл изменений активности энзимов при ССД можно исходя из биологической роли этих энзимов

Из всех изученных нами энзимов наиболее известно о важной роли ПНФ в регуляции иммунных процессов, нарушение которой имеет определенное место в патогенезе ССД В наших исследованиях получены данные о снижении активности ПНФ в лимфоцитах при ССД Анализируя дефицит ПНФ в лимфоцитах с биохимических позиций, следует ожидать накопления в клетках естественного субстрата дезоксигуанозина, являющегося сильным ингибитором рибонуклеотидредуктазы, что влечет за собой снижение синтеза ДНК в Т-лимфоцитах (Karson D. et al, 1982, North M et al, 1980) Анализ ДНК у больных с дефицитом ПНФ выявил замену гуаниновою основания на адениновое в третьем аксоне, что приводит к нарушению структуры ПНФ и потере ею каталитических свойств (Marcert М et al, 1997) Не исключено также, что при ССД имеет место подобный феномен Дефицит ПНФ в лимфоците приводит к накоплению в клетках дезоксигуанозина, который обладает цитотоксическим действием на лимфоциты, нарушает процессы созревания, пролиферации и дифференциации особенно Т-лимфоцитов, потере ими иммуносупрессорного воздействия на В-лимфоциты и других функциональных свойств, что может обусловить дискоординацию иммунорегуляторных процессов при ССД Ис-

ходя из этого, мы предполагаем, что в основе патогенетических механизмов ССД могут иметь место нарушения ПМ, влекущие за собой различные иммунные нарушения. Вследствие этого нам представляются весьма перспективными новые подходы к патогенетическому лечению ССД с помощью коррекции нарушений ПМ и, в частности, нормализации активности ПНФ с использованием ее естественных активаторов В литературе имеются единичные работы, свидетельствующие о положительном эффекте лечения некоторых заболеваний с дефицитом ПНФ при введении пациентам смеси ПНФ и эритроцитов периферической крови, а также трансплантации костного мозга, что проявлялось нормализацией количества

Т-лимфоцитов и активности ПНФ (Broome С et al, 1996) Поиск препаратов, способствующих нормализации активности ПНФ в клетках крови, представляется нам весьма актуальным и перспективным направлением в лечении многих ревматических заболеваний, сопровождающихся дефицитом ПНФ

ВЫВОДЫ

1 В лизатах лимфоцитов, эритроцитов и плазме крови больных ССД выявлены существенные изменения активности энзимов пуринового метаболизма ГДА, ГЗДД, ПНФ и ГФ, зависящие от активности патологического процесса, характера течения и стадии болезни.

2 У больных ССД (всей группы) при поступлении на лечение в плазме крови выявлено повышение активности ГДА, ПНФ, в эритроцитах — снижение активности ГДА, ГЗДА, ПНФ и повышение активности ГФ, в лимфоцитах — снижение активности ГДА, ПНФ, повышение активности ГЗДА и ГФ

3 У больных ССД с I степенью активности патологического процесса, по сравнению со здоровыми, в плазме крови не выявлено существенных энзимных различий, в эритроцитах — ниже активность ПНФ и выше ГФ, в лимфоцитах — ниже активность ГДА, ПНФ и выше активность ГЗДА, ГФ

4 У больных ССД с II степенью активности, по сравнению со здоровыми, в плазме крови выше активность ГДА, ПНФ, ГФ, в эритроцитах ниже активность ГДА, ГЗДА, ПНФ и выше ГФ, в лимфоцитах ниже активность ГДА, ПНФ, выше активность ГЗДА и ГФ

5 У больных ССД с III степенью, по сравнению со здоровыми, в плазме крови выше активность ГДА, ПНФ, ГФ и ниже ГЗДА, в эритроцитах ниже активность ГДА, ГЗДА, ПНФ и выше ГФ, в лимфоцитах ниже активность ГДА, ПНФ и выше активность ГЗДА, ГФ

6 Между всеми степенями активности патологического процесса выявлены существенные энзимные различия. У больных ССД с I степенью,

по сравнению с II, в плазме крови ниже активность всех изученных энзимов, в эритроцитах выше активность ГДА, ГЗДА, ПНФ и ниже ГФ, в лимфоцитах выше активность ГДА, ПНФ и ниже Г ЗДА и ГФ, по сравнению с III степенью, в плазме выше активность ГЗДА, ниже ПНФ и ГФ, в эритроцитах выше активность ГДА, ГЗДА, ППФ и ниже ГФ, в лимфоцитах выше активность ГДА, ПНФ, ниже ГЗДА и ГФ При II степени, по сравнению с III, в плазме крови выше активность ГЗДА, ниже ПНФ и ГФ, в эритроцитах выше активность ГДА, ГЗДА, ППФ и ниже ГФ, в лимфоцитах выше активность ГДА, ПНФ, ниже ГЗДА и ГФ

Показатели активности ПНФ, ГФ в эритроцитах, ГДА и ГЗДА в лимфоцитах оказались значительно более информативными в индикации минимальной активности процесса при ССД, чем общепринятые кли-нико-иммуно-биохимическис показатели Если вышеуказанные энзимные показатели при I степени в 100% случаев имели отклонения от уровня здоровых (М±2о), то СОЭ и сиаловыс кислоты у этих же больных — только в 17,6% случаев, СРБ и ЦИК — в 23,5%, гамма-i лобулины и иммуноглобулины G — в 29,4%, АНФ — в 47,1% случаев

Между всеми вариантами течения выявлены существенные энзимные различия. У больных ССД (всей группы) с хроническим течением, по сравнению с подострым, в плазме крови ниже активность всех энзимов, в эритроцитах выше активность ГДА, ГЗДА, ПНФ и ниже ГФ, в лимфоцитах выше активность ГДА, ПНФ ниже активность ГЗДА, по сравнению с острым течением, в плазме ниже активность ГДА, ПНФ, ГФ и выше активность ГЗДА, в эритроцитах выше активность ГДА, ГЗДА, ПНФ и ниже активность ГФ, в лимфоцитах выше активность ГДА, ПНФ, ниже активность ГЗДА У больных с подострым течением, по сравнению с острым, в плазме выше активность ГЗДА, ниже активность ПНФ и ГФ, в эритроцитах выше активность ГДА, ГЗДА, ПНФ и ниже активность ГФ, в лимфоцитах выше активность ГДА, ПНФ и ниже активность ГЗДА, ГФ

Выявлены существенные энзимные различия между стадиями болезни У больных ССД с I стадией, по сравнению с II, в плазме крови ниже активность ГДА, ПНФ, ГФ, в эритроцитах выше активность ГДА, ГЗДА, ПНФ и ниже активность ГФ, в лимфоцитах выше активность ГДА, ПНФ, ниже активность ГЗДА и ГФ

В процессе лечения больных ССД в случаях клинического улучшения состояния больных определяется четкая тенденция энзимных показателей крови к нормализации, в случаях ухудшения — обратная тенденция, и, вследс!вие этого, контроль динамики энзимных показате-

лей в комплексе с клиническими данными может способствовать объективизации оценки эффективности проводимой терапии больных

11 Анализ корреляционных связей между активностью энзимов при I степени в плазме больных ССД выявил наличие малозначимых связей между всеми энзимами, в лимфоцитах — прямых умеренных связей между ГДА—ПНФ, ГЗДА—ГФ и обратных умеренных связей между другими энзимами, в эритроцитах — прямых умеренных связей между ГЗДА—ГФ, сильных обратных связей между ПНФ—ГФ, умеренных обратных связей между ГДА—ПНФ и ГДА—ГФ При II степени в плазме выявлены прямые умеренные связи между всеми энзимами, за исключением связей между ПНФ—ГФ, где определялись прямые сильные связи, в лимфоцитах — сильные связи между всеми энзимами, за исключением обратных умеренных связей между ПНФ—ГФ, в эритроцитах — сильные связи между всеми энзимами, за исключением прямых умеренных связей между ГЗДА—ПНФ При III степени в плазме обнаружено наличие высокопрочных прямых связей между ГДА—ПНФ, ГДА—ГФ, ПНФ—ГФ, умеренных обратных связей между ГЗДА—ПИФ и ГЗДА—ГФ, в эритроцитах и лимфоцитах, по сравнению с II степенью, направления связей не изменились, и они еще более упрочились

12 Исследования активности ГДА, ГЗДА, ПНФ и ГФ в лизатах лимфоцитов, эритроцитов и плазме крови больных ССД в комплексе с клиническими данными способствуют улучшению диагностики степени активности патологического процесса, характера течения, стадии болезни и уточнению роли энзимов пуринового метаболизма в патогенезе ССД

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1 При определении границ условной нормы (референтных пределов) активности энзимов в крови здоровых людей использовалась формула М±2ст, исходя из которой 95% возможных результатов не должны выходить за эти границы. Исходя из этого, нормальные величины активности энзимов (нмоль/мин/мл) в плазме крови для ГДА составили 0-2,4, ГЗДА - 0,1-4,2, ПНФ - 0,2-1,45, ГФ - 0,05-1,93, в лизатах эритроцитов ГДА - 13,1-20,7, ГЗДА - 5,6-17,7; ПНФ - 144-217, ГФ - 3,65,8, в лизатах лимфоцитов ГДА - 9,4-14,2, ГЗДА - 6,0-10,3, ПНФ -28,4-40,8, ГФ-6,7-17,1

2 Для уточнения степени активности патологического процесса при ССД в комплексе с клиническими данными следует ориентироваться на следующие величины активности энзимов (нмоль/мин/мл) При I степени активности патологического процесса в лизатах эритроцитов активность ПНФ находится в пределах 140-50, ГФ — 6,0-11,0, в лиза-

тах лимфоцитов активность ГДА — 9,3-6,7, ГЗДА — 10,4-13,0 При II степени в лизатах эритроцитов активность ГДА находится в пределах 8,3-13,0, ПНФ — 31,3-49,0, ГФ — 11,1-16,0, в лимфоцитах активность ГДА — 6,6-5,8, ГЗДА — 13,1-15,9, ПНФ — 28,3-25,1, ГФ — 17,2-19,2 При III степени в плазме активность ГЗДА выше 1,52, в эритроцитах активность ГДА менее 8,3, ГЗДА менее 5,6, ПНФ менее 31,3 и ГФ выше 16,0, в лимфоцитах активность ГДА менее 5,8, ГЗДА выше 16,0, ПНФ менее 25,1 и ГФ выше 19,2 нмоль/мин/мл Активность энзимов в плазме крови при I-II степени в большинстве случаев не выходит за пределы нормы

3 При контроле за эффективностью лечения в первые 10 дней, помимо клинического состояния, целесообразно ориентироваться на динамику активности всех энзимов в лимфоцитах и активность ПНФ и ГФ в эритроцитах, а период наступающей клинической ремиссии совпадает с нормализацией активности всех энзимов в плазме, ГФ в лимфоцитах и ГЗДА в эритроцитах Активность других энзимов за период стационарного лечения чаще всего уровня здоровых не достигает, что указывает на необходимость продолжения терапии в амбулаторных условиях

ПУБЛИКАЦИИ

1 Ермолаева Н.А , Стажаров М.Ю , Зборовский А Б , Мартемьянов В Ф Клинико-диагностическое значение исследования активности гуаназы в лимфоцитах крови у больных системной склеродермией // Актуальные проблемы современной ревматологии Сб науч работ / Под ред акад РАМН А.Б. Зборовского. — Вып XXII. — Волгоград, 2005 — С 44-45.

2 Мартемьянов В Ф , Ермолаева Н А , Левкина М В , Стажаров М Ю. Активность гуанозиндезаминазы в лимфоцитах крови больных системной склеродермией // Актуальные проблемы современной ревматологии Сб науч работ / Под ред акад РАМН А Б. Зборовского — Вып XXII — Волгоград, 2005 — С 93-94

3 Мозговая Е Э , Ермолаева Н А , Чернов А С , Мартемьянов В Ф Клинико-диагностическое значение исследования активности пуриннук-леозидфосфорилазы и гуанозинфосфорилазы в лимфоцитах крови больных системной склеродермией // Актуальные проблемы современной ревматологии. Сб. науч работ / Под ред акад. РАМН А Б Зборовского. —Вып. XXII. —Волгоград, 2005 — С 103-104

4 Ермолаева Н А , Зборовский А Б , Мартемьянов В.Ф., Мозговая Е Э , Стажаров М.Ю Активность энзимов обмена гуаниловых нуклеотидов у больных системной склеродермией // Состояние здоровья населения Волгоградской области и современные медицинские технологии его

коррекции Мат науч-практич. коиф — Волгоград, 2005. — С 194195

5 Ермолаева ПА, Хортиева С С , Стажаров М Ю, Мартемьянов В Ф Активность гуаниндезаминазы в лизатах эритроцитов и плазме крови больных системной склеродермией // Актуальные проблемы современной ревматологии Сб науч работ / Под ред акад РАМН А Б Зборовского — Вып XXIII — Волгоград, 2006. — С 46-47

6 Ермолаева Н А , Стажаров М Ю , Шилова Л Н , Мартемьянов В Ф Клинико-диагностическое значение исследования активности гуано-зинфосфорилзы в эритроцитах и плазме крови больных системной склеродермией // Актуальные проблемы современной ревматологии Сб науч работ / Под ред акад РАМН А Б Зборовского — Вып XXIII — Волгоград, 2006 — С 47-48

7 Мартемьянов В Ф , Ермолаева Н А , Левкина М В , Стажаров М Ю Активность гуанозиндезаминазы в эритроцитах и плазме больных системной склеродермией // Актуальные проблемы современной ревматологии Сб науч работ / Под ред акад РАМН А.Б Зборовского — Вып XXIII — Волгоград, 2006 —С. 89-90

8 Стажаров М Ю , Ермолаева Н А , Чернов А С , Мартемьянов В Ф Активность пуриннуклеозидфосфрилазы в эритроцитах и плазме крови больных системной склеродермией // Актуальные проблемы современной ревматологии Сб науч работ / Под ред акад РАМН А Б Зборовского —Вып XXIII — Волгоград, 2006 — С 125-126

9 Ермолаева Н А , Мозговая Е Э Активность некоторых энзимов гуани-ловой ветви пуринового метаболизма в лизатах лимфоцитов, эритроцитов и плазме крови больных системной склеродермией // Актуальные проблемы экспериментальной и клинической медицины. Мат 64-й открытой итоговой науч конф молодых ученых и студентов ВолГМУ / Под ред акад РАМН В И Петрова — Волгоград, 2006 — С 99.

10 Ермолаева Н А , Мартемьянов В Ф Клинико-диагностическое значение показателей энзимов пуринового метаболизма в лизатах лимфоцитов больных системной склеродермией // Вестник ВолГМУ (Приложение) — 2007. —№ 1 —С 10-13

Актуальность проблемы. Системная склеродермия (ССД) является типичным представителем системных заболеваний соединительной ткани, характеризующаяся генерализованным дегенеративно-склеротическим поражением кожи, опорно-двигательного аппарата, сосудов, внутренних органов, прогрессирующим течением, поражающим преимущественно женщин в трудоспособном возрасте (30-50 лет), частой и ранней инвалидиза-цией, значительно сокращающей продолжительность жизни, требующей больших материальных затрат на лечение, и поэтому борьба с этим заболеванием является актуальной медико-социалыюй проблемой. Эффективность этой борьбы во многом зависит от решения, как минимум, пяти задач: выяснение этиопатогенеза, своевременной и ранней диагностики, создание эффективных этиопатогенетических методов терапии, контроля ее эффективности, методов профилактики. К сожалению, ни одна из этих задач полностью не решена, и до настоящего времени терапия способна лишь затормозить прогрессирование болезни, но не ликвидировать полностью патологический процесс и его последствия. Нередко даже при точно установленном диагнозе ССД сложно разграничить фазу клинической ремиссии и обострение «склеродермического» процесса, так как довольно часто это обострение протекает субклинически на фоне малоизмененных или вообще неизменных клинико-иммуно-биохимических показателей, что приводит к несвоевременному назначению адекватной терапии. Поэтому поиск и разработка новых параклинических методов распознавания минимальных проявлений активности патологического процесса также является актуальной задачей практической ревматологии.

Существующие теории патогенеза ССД, в основном, базируются на признании ведущей роли иммунных нарушений (22, 42, 54, 66). Но иммунные реакции развиваются на уже измененные компоненты соединительной ткани, причины изменений которых не известны. В ряде работ сообщается о многочисленных метаболических нарушениях при ССД (10, 43, 63). Особый интерес представляют данные о нарушениях нуклеинового метаболизма, проявляющиеся дисбалансом адениловых и гуаниловых нуклеоти-дов и гиперпродукцией антител к ДНК и РНК (43, 46, 54, 61, 63, 72, 84). Известно, что предшественниками и составными элементами нуклеиновых кислот являются пуриновые основания, и что метаболиты пуринов принимают активное участие в созревании, дифференциации и пролиферации лимфоцитов, отвечающих за выработку антител и иммунологическую реактивность (28, 83, 86). Исходя из этого, нам представляется достаточно перспективным направлением изучение активности энзимов, регулирующих содержание пуриновых метаболитов. В связи с тем, что в литературе отсутствуют сведения об активности энзимов гуаниловой ветви пуриново-го метаболизма при ССД в лимфоцитах и эритроцитах, нами предприняты исследования активности гуаниндезаминады (ГДА), гуанозиндезаминазы (ГЗДА), гуанозинфосфорилазы (ГФ) и пуриннуклеозидфосфорилазы (ПНФ), действующих на различных этапах пуринового метаболизма, но в то же время взаимосвязанных.

Цель исследования. Повышение качества диагностики активности патологического процесса при системной склеродермии, характера течения и стадии болезни, объективизации контроля эффективности лечения больных с использованием показателей активности ГДА, ГЗДА, ПНФ, ГФ и выяснение особенностей пуринового метаболизма, способствующих раскрытию патогенетических механизмов заболевания.

Задачи исследования.

1. Отработать методы выделения лимфоцитов и эритроцитов из венозной крови и методы определения активности ГДА, ГЗДА, ГФ и ПНФ в лизатах лимфоцитов, эритроцитов и плазме крови здоровых людей, установить референтные величины (условную норму) активности этих энзимов, изучить зависимость энзимных показателей от пола и возраста.

2. Изучить активность ГДА, ГЗДА, ПНФ и ГФ в лизатах лимфоцитов, эритроцитов и плазме крови больных в процессе стационарного лечения в зависимости от степени активности процесса, характера течения и стадии болезни при поступлении в стационар, через 10-12 дней лечения и по окончании стационарного лечения.

3. Изучить корреляционные связи между активностью энзимов в плазме, эритроцитах, лимфоцитах у здоровых и больных ССД при различной активности патологического процесса.

4. Выявить энзимологические особенности крови больных ССД, способствующие дифференциации степеней активности процесса, характера течения и стадии болезни.

5. Выявить наиболее оптимальный набор энзимных показателей, способствующий определению минимальной активности патологического процесса при ССД.

6. Оценить возможность использования энзимных показателей крови в качестве дополнительных объективных критериев эффективности проводимой терапии больных ССД.

7. Выявить степень влияния на энзимные показатели крови больных ССД активности процесса, характера течения и стадии болезни.

Научная новизна работы.

Впервые у больных ССД в лизатах эритроцитов, лимфоцитов и плазме крови проведено комплексное исследование активности четырех энзимов пуринового метаболизма: ГДА, ГЗДА, ПНФ и ГФ в процессе стационарного лечения и показано, что изученные энзимные показатели в комплексе с клиническими данными способствуют уточнению степени активности патологического процесса, характера течения, стадии болезни и объективизации оценки эффективности проводимой терапии. Выявлены существенные нарушения пуринового метаболизма в клетках крови, способные оказать негативное влияние на функциональные свойства иммуно-компетентных клеток и регуляцию иммунных процессов при ССД, что может составить одно из звеньев патогенетических механизмов ССД.

Практическая значимость.

Исследования активности ГДА, ГЗДА, ПНФ и ГФ в лизатах лимфоцитов, эритроцитов и плазме крови больных СССД в комплексе с клиническими данными могут быть использованы в клинической практике для выявления и уточнения степени активности патологического процесса, характера течения, стадии болезни, что способствует назначению индивидуализированной адекватной терапии. В процессе лечения больных ССД контролирование динамики энзимных показателей способствует объективизации оценки эффективности проводимой терапии и прогнозированию ее длительности.

Основные положения, выносимые на защиту.

Показатели активности ГДА, ГЗДА, ПНФ и ГФ в лизатах лимфоцитов, эритроцитов и плазме крови больных ССД могут быть использованы в качестве дополнительных параклинических показателей для ранней диагностики минимальных проявлений обострения заболевания, уточнения степени активности патологического процесса, характера течения, стадии болезни, тяжести заболевания, объективизации оценки эффективности проводимой терапии и ее длительности.

Внедрение в практику.

Методы определения активности ГДА, ГЗДА, ПНФ и ГФ в лизатах лимфоцитов, эритроцитах и плазме крови с целыо выявления и уточнения степени активности патологического процесса при ССД внедрены в практику работы МУЗ «Городская клиническая больница № 25» г. Волгограда.

С результатами энзимных исследовании, возможностями энзимной диагностики ССД, их перспективой и значимостью систематически знакомятся студенты Волгоградского государственного медицинского университета, аспиранты, клинические ординаторы и практические врачи на лекциях, научно-практических и клинических конференциях.

Публикации н апробация работы.

Основные положения диссертации опубликованы в 10 печатных работах. Материалы диссертации ежегодно докладывались на научно-практических конференциях ГУ НИИ клинической и экспериментальной ревматологии, Волгоградского государственного медицинского университета и заслушивались на заседаниях ученого совета ГУ НИИ КиЭР РАМН совместно с кафедрой госпитальной терапии Волгоградского государственного медицинского университета.

Объем и структура диссертации.

Диссертация изложена на 187 страницах компьютерного текста (шрифт гарнитуры Times New Roman кегля 14 пт с полуторным интервалом) и состоит из введения, части I — обзора литературы, представленного одной главой, содержащей основные сведения о медико-биологической роли пуринового метаболизма, некоторых физико-химических свойствах изучаемых ферментов и их использовании в клинической практике; части II — материалов собственных исследований, состоящей из 4 глав, включающих клиническую характеристику больных ССД, методы исследова

ВЫВОДЫ

1. В лизатах лимфоцитов, эритроцитов и плазме крови больных ССД выявлены существенные изменения активности энзимов пуринового метаболизма: ГДА, ГЗДА, ПНФ и ГФ, зависящие от активности патологического процесса, характера течения и стадии болезни.

2. У больных ССД (всей группы) при поступлении на лечение в плазме крови выявлено повышение активности ГДА, ПНФ, в эритроцитах — снижение активности ГДА, ГЗДА, ПНФ и повышение активности ГФ, в лимфоцитах — снижение активности ГДА, ПНФ, повышение активности ГЗДА и ГФ.

3. У больных ССД с I степенью активности патологического процесса, по сравнению со здоровыми, в плазме крови не выявлено существенных энзимных различий, в эритроцитах — ниже активность ПНФ и выше ГФ, в лимфоцитах — ниже активность ГДА, ПНФ и выше активность ГЗДА, ГФ.

4. У больных ССД с II степенью активности, по сравнению со здоровыми, в плазме крови выше активность ГДА, ПНФ, ГФ, в эритроцитах ниже активность ГДА, ГЗДА, ПНФ и выше ГФ, в лимфоцитах ниже активность ГДА, ПНФ, выше активность ГЗДА и ГФ.

5. У больных ССД с III степенью, по сравнению со здоровыми, в плазме крови выше активность ГДА, ПНФ, ГФ и ниже ГЗДА, в эритроцитах ниже активность ГДА, ГЗДА, ПНФ и выше ГФ, в лимфоцитах ниже активность ГДА, ПНФ и выше активность ГЗДА, ГФ.

6. Между всеми степенями активности патологического процесса выявлены существенные энзимные различия. У больных ССД с I степенью, по сравнению с II, в плазме крови ниже активность всех изученных энзимов, в эритроцитах выше активность ГДА, ГЗДА, ПНФ и ниже ГФ, в лимфоцитах выше активность ГДА, ПНФ и ниже ГЗДА и ГФ; по сравнению с III степенью, в плазме выше активность ГЗДА, ниже ПНФ и ГФ, в эритроцитах выше активность ГДА, ГЗДА, ПНФ и ниже ГФ, в лимфоцитах выше активность ГДА, ПНФ, ниже ГЗДА и ГФ. При II степени, по сравнению с III, в плазме крови выше активность ГЗДА, ниже ПНФ и ГФ, в эритроцитах выше активность ГДА, ГЗДА, ПНФ и ниже ГФ, в лимфоцитах выше активность ГДА, ПНФ, ниже ГЗДА и ГФ.

7. Показатели активности ПНФ, ГФ в эритроцитах, ГДА и ГЗДА в лимфоцитах оказались значительно более информативными в индикации минимальной активности процесса при ССД, чем общепринятые кли-нико-иммуно-биохимические показатели. Если вышеуказанные энзимные показатели при I степени в 100% случаев имели отклонения от уровня здоровых (М±2ст), то СОЭ и сиаловые кислоты у этих же больных — только в 17,6% случаев, СРБ и ЦИК — в 23,5%, гамма-глобулины и иммуноглобулины G — в 29,4%, АНФ — в 47,1% случаев.

8. Между всеми вариантами течения выявлены существенные энзимные различия. У больных ССД (всей группы) с хроническим течением, по сравнению с подострым, в плазме крови ниже активность всех энзимов, в эритроцитах выше активность ГДА, ГЗДА, ПНФ и ниже ГФ, в лимфоцитах выше активность ГДА, ПНФ ниже активность ГЗДА; по сравнению с острым течением, в плазме ниже активность ГДА, ПНФ, ГФ и выше активность ГЗДА, в эритроцитах выше активность ГДА, ГЗДА, ПНФ и ниже активность ГФ, в лимфоцитах выше активность ГДА, ПНФ, ниже активность ГЗДА. У больных с подострым течением, по сравнению с острым, в плазме выше активность ГЗДА, ниже активность ПНФ и ГФ, в эритроцитах выше активность ГДА, ГЗДА, ПНФ и ниже активность ГФ, в лимфоцитах выше активность ГДА, ПНФ и ниже активность ГЗДА, ГФ.

9. Выявлены существенные энзимные различия между стадиями болезни. У больных ССД с I стадией, по сравнению с II, в плазме крови ниже активность ГДА, ПНФ, ГФ, в эритроцитах выше активность ГДА, ГЗДА, ПНФ и ниже активность ГФ, в лимфоцитах выше активность ГДА, ПНФ, ниже активность ГЗДА и ГФ.

10. В процессе лечения больных ССД в случаях клинического улучшения состояния больных определяется четкая тенденция энзимных показателей крови к нормализации, в случаях ухудшения — обратная тенденция, и, вследствие этого, контроль динамики энзимных показателей в комплексе с клиническими данными может способствовать объективизации оценки эффективности проводимой терапии больных.

11. Анализ корреляционных связей между активностью энзимов при I степени в плазме больных ССД выявил наличие малозначимых связей между всеми энзимами, в лимфоцитах — прямых умеренных связей между ГДА—ПНФ, ГЗДА—ГФ и обратных умеренных связей между другими энзимами, в эритроцитах — прямых умеренных связей между ГЗДА—ГФ, сильных обратных связей между ПНФ—ГФ, умеренных обратных связей между ГДА—ПНФ и ГДА—ГФ. При II степени в плазме выявлены прямые умеренные связи между всеми энзимами, за исключением связей между ПНФ—ГФ, где определялись прямые сильные связи, в лимфоцитах — сильные связи между всеми энзимами, за исключением обратных умеренных связей между ПНФ—ГФ, в эритроцитах — сильные связи между всеми энзимами, за исключением прямых умеренных связей между ГЗДА—ПНФ. При III степени в плазме обнаружено наличие высокопрочных прямых связей между ГДА—ПНФ, ГДА—ГФ, ПНФ—ГФ, умеренных обратных связей между ГЗДА—ПНФ и ГЗДА—ГФ, в эритроцитах и лимфоцитах, по сравнению с II степенью, направления связей не изменились, и они еще более упрочились.

12. Исследования активности ГДА, ГЗДА, ПНФ и ГФ в лизатах лимфоцитов, эритроцитов и плазме крови больных ССД в комплексе с клиническими данными способствуют улучшению диагностики степени активности патологического процесса, характера течения, стадии болезни и уточнению роли энзимов пуринового метаболизма в патогенезе ССД.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. При определении границ условной нормы (референтных пределов) активности энзимов в крови здоровых людей использовалась формула: М±2а, исходя из которой 95% возможных результатов не должны выходить за эти границы. Исходя из этого, нормальные величины активности энзимов (нмоль/мин/мл) в плазме крови для ГДА составили 02,4; ГЗДА - 0,1-4,2; ПНФ - 0,2-1,45; ГФ - 0,05-1,93; в лизатах эритроцитов: ГДА - 13,1-20,7; ГЗДА - 5,6-17,7; ПНФ - 144-217; ГФ-3,6-5,8; в лизатах лимфоцитов: ГДА - 9,4-14,2; ГЗДА - 6,0-10,3; ПНФ - 28,440,8; ГФ-6,7-17,1.

2. Для уточнения степени активности патологического процесса при ССД в комплексе с клиническими данными следует ориентироваться на следующие величины активности энзимов (нмоль/мин/мл). При I степени активности патологического процесса в лизатах эритроцитов активность ПНФ находится в пределах 140-50, ГФ — 6,0-11,0; в лизатах лимфоцитов активность ГДА — 9,3-6,7, ГЗДА — 10,4-13,0. При II степени в лизатах эритроцитов активность ГДА находится в пределах 8,3-13,0, ПНФ — 31,3-49,0, ГФ — 11,1-16,0; в лимфоцитах активность ГДА — 6,6-5,8, ГЗДА — 13,1-15,9, ПНФ — 28,3-25,1, ГФ — 17,2-19,2. При III степени в плазме активность ГЗДА выше 1,52, в эритроцитах активность ГДА менее 8,3, ГЗДА менее 5,6, ПНФ менее 31,3 и ГФ выше 16,0; в лимфоцитах активность ГДА менее 5,8, ГЗДА выше 16,0, ПНФ менее 25,1 и ГФ выше 19,2 нмоль/мин/мл. Активность энзимов в плазме крови при 1-Й степени в большинстве случаев не выходит за пределы нормы.

3. При контроле за эффективностью лечения в первые 10 дней, помимо клинического состояния, целесообразно ориентироваться на динамику активности всех энзимов в лимфоцитах и активность ПНФ и ГФ в эритроцитах, а период наступающей клинической ремиссии совпадает с нормализацией активности всех энзимов в плазме, ГФ в лимфоцитах и ГЗДА в эритроцитах. Активность других энзимов за период стационарного лечения чаще всего уровня здоровых не достигает, что указывает на необходимость продолжения терапии в амбулаторных условиях.