Автореферат и диссертация по медицине (14.01.04) на тему:Клинические особенности и молекулярно-генетические аспекты остеоартроза у больных с дисплазией соединительной ткани

На правах рукописи

Тюрин Антон Викторович

КЛИНИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ И МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ОСТЕОАРТРОЗА У БОЛЬНЫХ С ДИСПЛАЗИЕЙ СОЕДИНИТЕЛЬНОЙ ТКАНИ

14.01.04 - внутренние болезни 03.02.07 - генетика

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

28 ОКТ 2015

Москва-2015

005563737

Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Башкирский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации и

лаборатории молекулярной генетики человека Федерального государственного бюджетного учреждения науки Института биохимии и генетики Уфимского научного центра Российской академии наук

Научные руководители

Доктор медицинских наук, профессор Давлетшин Рашит Ахметович

Доктор биологических наук, доцент Хусаинова Рита Игоревна

Официальные оппоненты

Доктор медицинских наук, профессор, заведующая лабораторией остеоартроза ФГБНУ «НИИ

ревматологии им. В.А. Насоновой» Алексеева Людмила Ивановна

Доктор медицинских наук, профессор, заместитель директора по научной работе ФГБНУ «Медико-

генетический научный центр» Ижевская Вера Леонидовна

Ведущая организация

Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М.Сеченова» Министерства здравоохранения Российской Федерации

Защита диссертации состоится «26» ноября 2015 г. в 1300 часов на заседании диссертационного совета Д 212.203.18 при Федеральном государственном автономном образовательном учреждении высшего образования «Российский университет дружбы народов» (117292, г. Москва, ул. Вавилова д. 61, ГБУЗ ГКБ №64 ДЗМ)

С диссертацией можно ознакомиться в читальном зале УНИБЦ (Научная библиотека) РУДН по адресу: 117198, г. Москва, ул. Миклухо-Маклая, д. 6.

Автореферат разослан «_»_2015 г.

Ученый секретарь диссертационного совета,

доктор медицинских наук, профессор Киякбаев Гайрат Калуевич

Актуальность темы. Дисплазия соединительной ткани (ДСТ) — это полиорганная полисистемная патология с проградиентным течением, в основе которой лежат дефекты синтеза или катаболизма компонентов внеклеточного матрикса или регуляторов морфогенеза соединительной . ткани. Частота встречаемости ДСТ по разным данным колеблется от 10% до 22,5% [Кадурина с соавт., 2008; Тихомирова с соавт., 2015]. ДСТ рассматривается как фоновое состояние, способствующее развитию соматической патологии, в том числе -заболеваний опорно-двигательного аппарата, вызванных дисморфогенезом или дегенеративными процессами соединительной ткани. Одной из патологий, вероятно, ассоциированной с ДСТ, является остеоартроз (ОА) - гетерогенная группа заболеваний различной этиологии со сходными биологическими, морфологическими, клиническими проявлениями и исходом, в основе которых лежит поражение всех компонентов сустава, в первую очередь хряща, а также субхондральной кости, синовиальной оболочки, связок, капсулы околосуставных мышц [Алексеева с соавт., 2013; Bruyereetal., 2015]. Распространенность ОА среди населения России на 1997 год составляла 6,43%, увеличившись к 2008 году до 10-12% [Митрофанов с соавт., 2008]. Отмечается значительное увеличение доли пациентов трудоспособного (40-55 лет) возраста. Несмотря на то, что заболевание известно давно, этиология и патогенез ОА окончательно не выяснены. В ряду факторов риска упоминаются возраст, женский пол, избыточный вес тела и метаболический синдром, травмы, однако ни один из них не является ключевым и требуется дальнейшее исследование факторов, влияющих на возникновение и течение заболевания. В основе патогенеза ОА и ДСТ лежат изменения деструктивного характера в структуре соединительной ткани, в том числе и в суставном хряще. В современной литературе обсуждается изменение биохимических маркеров метаболизма хряща - повышение уровней оксипролина, гликозаминогликанов, хрящевого тромбоспондина (COMP) в сыворотке крови как при ДСТ, так и при ОА [Эверт с соавт., 2009]. На сегодняшний день проводятся исследования по поиску генетических факторов риска развития ОА. Установлено, что гены системы фибриллярных белков и регуляторных ферментов играют роль в формировании клинического фенотипа ОА в популяциях Европы [Chapmanetal., 2012; Hochbergetal., 2012]. Несмотря на значительный прогресс, достигнутый в понимании патогенеза и выявлении генетических факторов развития ОА, существуют противоречивые результаты, полученные разными группами исследователей, что, возможно, обусловлено различиями генетической структуры исследуемых популяций [Rodriguez-Fontenlaetal., 2015]. Чрезвычайно актуальным является внедрение в клиническую практику современных и эффективных методов ранней диагностики ОА, основанных на понимании биохимических и генетических механизмов развития заболевания, для разработки новых подходов к лечению и профилактике. На основании вышеизложенного были сформулированы цель и задачи исследования.

Цель работы: разработка клинических и биохимических критериев диагностики остеоартроза у женщин с дисплазией соединительной ткани и поиск генетических маркеров предрасположенности. Задачи исследования:

1. Исследовать распространенность ОА и ДСТ у пациенток терапевтического профиля в целом и в различных возрастных группах.

2. Исследовать распространенность отдельных фенотипических признаков ДСТ и провести поиск ассоциаций между фенотипическими проявлениями ДСТ и клиническими характеристиками ОА.

3. Провести оценку уровней сывороточных концентраций гликозаминогликанов (ГАГ), олигомерного матриксного белка хряща (COMP) аутоантител (AT) к коллагенам и С-реактивного белка (С-РБ) у пациентов с ОА и ДСТ и поиск ассоциаций с клиническими характеристиками ОА и ДСТ.

4. Провести поиск ассоциаций полиморфных вариантов генов VDR, COL2A1, GDF5, ММР1, ММРЗ, ММР13 с наличием ОА в целом и клиническими характеристиками ОА различных локализаций.

5. Провести поиск ассоциаций полиморфных вариантов генов VDR, COL2A1, GDF5, MMPI, ММРЗ, ММР13 с клиническими характеристиками ДСТ в целом и ее отдельными фенотипическими признаками.

6. Разработать прогностические модели диагностики ОА у женщин с ДСТ на основании клинических, биохимических и генетических критериев.

Научная новизна исследования. Впервые выявлена распространенность фенотипических признаков ДСТ у пациентов с ОА, а так же оценено влияние ДСТ на возраст дебюта и клиническое течение ОА. Установлены основные фенотипические признаки ДСТ, являющиеся маркерами неблагоприятного прогноза при ОА. Выявлена зависимость уровней COMP и ГАГ, а также аутоантител к коллагену, СОЭ и С-РБ от клинических характеристик ОА и ДСТ. Впервые выявлена роль полиморфных вариантов генов VDR, COL2AJ, GDF5, ММР1, ММРЗ, ММР13 в развитии ОА и ДСТ в целом, а так же с учетом локализации ОА, степени тяжести и отдельных фенотипических проявлений ДСТ, сочетания ОА с ДСТ у женщин из Республики Башкортостан с учетом их этнической принадлежности. Впервые разработаны прогностические модели диагностики ОА на основе клинических, биохимических и генетических критериев.

Научно-практическая значимость. Представленные в работе результаты расширяют представления о патогенезе и молекулярно-генетических основах развития ОА и ДСТ, служат основой для разработки диагностического комплекса, позволяющего проведение ранней диагностики ОА у женщин с ДСТ, с целью проведения превентивного лечения и разработки принципов профилактики заболевания.

Апробация результатов. Результаты исследования представлены на VIII и IX Национальных конгрессах терапевтов (Москва, 2013, 2014), 76-80 Республиканских научно-практической конференциях молодых учёных «Вопросы теоретической и практической медицины» (Уфа, 2011-2015), II Международной Олимпиаде молодых ученых «Терапия XXI век: Upgrade» (Саратов, 2010), 9 Международной Пироговской научной медицинской конференции студентов и молодых ученых (Москва, 2014), конференции Европейского общества генетиков человека (Глазго, 2015), VII Съезде Всероссийского общества медицинских генетиков (Санкт-Петербург, 2015). Публикации. По теме диссертации опубликовано 18 научных работ, из них 7 - в рецензируемых журналах, рекомендованных ВАК. Положения, выносимые на защиту.

1. Дисплазия соединительной ткани широко встречается у пациенток с терапевтической патологией.

2. Дисплазия соединительной ткани в целом и ее отдельные фенотипические признаки ассоциированы с развитием остеоатроза и его клиническим течением.

3. Биохимические маркеры, в том числе хрящевой матриксный белок, с высокой чувствительностью отражают дегенерацию соединительной ткани и суставного хряща.

4. Генетическая составляющая играет существенную роль в патогенезе остеоартроза и дисплазии соединительной ткани. Развитие данных состояний ассоциированы с полиморфными вариантами генов, кодирующих структурные компоненты и ферменты метаболизма соединительной ткани.

5. Фенотипические и генетические маркеры ДСТ могут быть использованы для разработки прогностической модели риска развития OA у женщин.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 195 страницах машинописного текста, иллюстрирована 8 рисунками и 22 таблицами, состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов, трех глав собственных исследований и обсуждений, заключения, выводов, практических рекомендаций, приложений, списка литературы, включающего 229 источников.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ Проведено скрининговое обследование 600 женщин, находившихся на стационарном лечении в терапевтическом отделении ГКБ №18 г. Уфы, а также обратившихся за амбулаторной помощью в поликлиники № 18, 38, 2 г. Уфы с широким спектром жалоб, в том числе группа женщин с болями в суставах. Все женщины обследованы на наличие признаков ДСТ и OA. После осмотра и опроса по специально разработанным нами протоколам были привлечены 333 человека, подписавшие информированное согласие на участие в исследовании (рис. 1).

Обследование 600 женщин

Отбор 333 женщин для включения в исследование

-XX-

Рисунок 1. Основные этапы и содержание исследования.

Критериями включения женщин в группу больных ОА являлись: возраст от 18 до 65 лет, дебют заболевания в возрасте до 55 лет, наличие у пациенток остеоартроза в соответствии с критериями Американской ассоциации ревматологов (1995) и рентгенологическое подтверждение диагноза. Критериями исключения были: системные заболевания соединительной ткани, возраст более 65 лет, активная бактериальная или вирусная инфекция, травматические повреждения суставов в анамнезе, беременные или кормящие женщины, отказ от участия в исследовании

Критериями включения женщин в группу с ДСТ являлись: возраст от 18 до 65 лет, наличие фенотипических признаков ДСТ и сумма балов по таблице Т.И. Кадуриной более 8. При сумме баллов от 9 до 14 баллов определялась ДСТ легкой степени, свыше 15 баллов - выраженная ДСТ. Критериями исключения были: наличие установленной ранее моногенной формы ДСТ, отказ от участия в исследовании. Характеристика исследуемых групп представлена в табл. 1. ОА был диагностирован у 158 женщин, что составляет 26,3% от общего числа осмотренных. Из них полиостеоартроз (ПОА) диагностирован у 37 женщин (23,4%), гонартроз (ГА) у 80 женщин (50,6%), коксоартроз у 41 женщины (26%). Рентгенологическая стадия II (по

Kellgrene-Lawrence) была у 97 пациенток (61,4%), III - у 40 (25,3%), IV - у 21 (13,3%). Длительность заболевания составила от 3 до 18 лет (в среднем 4,7±1,8 года).

Симптомокомплекс ДСТ был выявлен у 156 человек, что составляет 26% от общего числа обследованных. ДСТ легкой степени отмечалась у 125 человек (80,1%), тяжелой степени - у 31 человека (19,9%).

Таблица 1 - Основные характеристики исследуемых групп

Группы N Возраст Тип исследования

М±т Min Мах Биохимический Генетический

Общая группа 333 50,13±12,60 15 65 88 333

ОА в целом 158 54,72±8,50 20 65 51 155

КА 37 53,66±9,57 28 65 12 36

ГА 80 55,64±8,15 26 65 25 80

ПОА 41 53,07±8,78 20 65 15 41

ДСТ в целом 156 49,46± 12,94 15 65 50 156

ДСТ легкая 125 49,44± 12,76 15 65 32 119

ДСТ выраженная 31 48,19±14,30 18 65 18 31

о+д+ 92 54,40±9,56 20 65 32 92

о+д- 66 42,35±13,89 40 65 18 66

0-Д+ 64 54,51 ±7,29 15 64 17 64

Контроль (0-Д-) 111 47,09±10,95 19 65 20 111

Примечание: «+» означает наличие признака, «-» отсутствие признака, п - количество индивидов, М±т - среднее значение и стандартная ошибка. Min - минимум, Мах - максимум.

По этническому составу выборка состояла из 121 (36,3%) русской, 130 (39%) татарок, 82 (24,7%) метисов и женщин других этнических групп.

Для проведения исследования пациенты были распределены на три группы в зависимости от наличия у них ДСТ и ОА. В первую группу были включены 92 женщины с сочетанием ОА и ДСТ (ОА+ДСТ+), во вторую - 66 пациенток с изолированным ОА (ОА+ДСТ-), в третью - 64 женщины с изолированной ДСТ (ОА-ДСТ+). Группу контроля составили 111 женщин без признаков ОА и ДСТ (ОА-ДСТ-).

Концентрацию СОМР, С-РБ, аутоантител к коллагену в сыворотке крови оценивали методом иммуноферментного анализа на аппарате 8га1Рах 2002, с помощью диагностического набора фирмы 1ттсо (США), Вектор-бест, Имтек (Россия). ГАГ определялись карбазольной реакцией по методу Косягиной Е.А.

ДНК выделяли из периферической крови стандартным методом фенольно-хлороформной экстракции [МаЛе\уе1а1., 1984].

Амплификацию изученных полиморфных вариантов 799750 (с.-1673с1е1С) гена ММР1, к35068180 (е.-1671_-1670^1) гена ММРЗ, г¡2252070 (с.-1050А) гена МНР 13, пбЗ 118460 (с.1531-108А>О и гх2276455 (с.2304+148С>Т) гена СО 12А1. «143383 (&5017С>Т) гена СО/о, м1544410 (с.1024+283С>А; В$т1), гз7975232 (,с.1025-490Т; Ара!), «731236 (с.1056Т>С, Тещ!) и гб2228570 (с.2Т>А/С/С, p.Metl/Lys/Arg/Thr; Рок1, г.ч10735810) гена КОД проводили с помощью метода

полимеразной цепной реакции (ПЦР) синтеза ДНК на амплификаторе "2720 ThermalCycler" производства компании «AppliedBiosystems».

Для определения нуклеотидных замен проводили гидролиз амплифицированных фрагментов соответствующей эндонуклеазой рестрикции производства Fermentas, согласно протоколу производителя. Рестрикцию полиморфных локусов rs1799750 гена MMPl,rs35068180 гена ММРЗ, rs2252070 гена ММР13, rs63118460 и rs2276455 reuaCOIJA I, rs143383 гена GDF5, rs1544410 и rs7975232 гена VDR проводили эндонуклеазами Alul, TthlII, BstNl, Pvull, Hindlll, BsiEI соответственно, при температуре 37°C, рестрикцию полиморфных вариантов rs2228570 и rs731236 гена VDR проводили рестриктазами BseGI и Taql, соответственно, при температуре 55°С.

Разделение фрагментов ДНК после амплификации и рестрикции проводили при помощи электрофореза в 7% полиакриламидном геле (ПААГ), окрашивали раствором 5%-ного бромистого этидия и визуализировали в проходящем ультрафиолетовом свете. Документирование результатов электрофореза проводили с использованием видеогельдокументирующей системы «Geldokulant» (Франция).

Статистическая обработка полученных данных проведена на основании общепринятых методов описательной и вариационной статистики с использованием стандартных пакетов Microsoft Excel 2007, Statistica 6,0, MedCalc. Межгрупповое сравнение полученных данных проводилось с учетом объема и нормальности распределения данных с применением параметрических (t-критерий Стьюдента) и непараметрических критериев (х с поправкой Йетса на непрерывность, H критерий Краскелла-Уоллиса). Связь между признаками оценивалась с помощью корреляционного анализа с расчетом коэффициента корреляции по Спирмену (К). Степень ассоциаций оценивали в значениях показателя отношения шансов odds ratio (OR) по формуле: OR = (а х d)/(b х с), где а - частота признака в выборке больных, b -частота признака в контрольной выборке, с - сумма частот остальных признаков в выборке больных, d - сумма частот остальных признаков в контрольной выборке. Анализ неравновесия по сцеплению и гаплотипический анализ проведен с помощью программы Haploview 4.2. Частоты гаплотипов оценивались с помощью ЕМ-алгоритма, неравновесие по сцеплению (LD) между парами ОНП оценивалось с помощью коэффициента D', предложенного Левонтином, и коэффициента корреляции г2 Пирсона, предусмотренных программным обеспечением Haploview 4.2 (http://www.chgb.org.cn/lda/lda.htm). Построение прогностических моделей производилось с использованием метода многофакторной логистической регрессии с построением ROC-кривых.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ Исследование распространенности фенотипических признаков дисплазии соединительной ткани Симптомокомплекс ДСТ был выявлен у 156 человек из 600 обследованных (26%). Группу сравнения составили 177 женщин без наличия ДСТ, сопоставимые по

возрасту. Результаты оценки частот встречаемости фенотипических признаков ДСТ представлены на рис. 2.Частота фенотипических признаков была выше в группе женщин с ДСТ. различия достигли уровня статистической значимости (р<0,05) для каждого признака, кроме патологии парадонта (х2=0,02; р=0,869). Вероятно, данный признак не является значимым диагностическим маркером ДСТ.

Рисунок 2. Частота встречаемости фенотипических признаков ДСТ в исследованных

группах.

Оценка распространенности ОА у лиц с ДСТ в различных возрастных группах

Результаты оценки частот встречаемости ОА и ДСТ в различных возрастных группах представлены в табл. 2. Частота встречаемости ОА у женщин с ДСТ увеличивается с возрастом и имеет характер стойкой тенденции - от 22.8 % в группе младше 40 лет, до 90 % в старшей возрастной группе. Частота встречаемости ОА у женщин без ДСТ также повышается с возрастом, отражая таковую в общей популяции, однако она статистически значимо ниже, чем у женщин с ДСТ во всех возрастных группах (р<0,05 для каждой возрастной группы). Таким образом, ДСТ, вероятно, не является единственной и основополагающей причиной ОА, что соответствует имеющимся данным о том, что ОА- заболевание полиэтиологическое. В раннем возрасте (40-50 лет) роль ДСТ наиболее существенна для развития ОА.

Таблица 2 - Частота встречаемости ОА у женщин в зависимости от наличия ДСТ

различных возрастных группах

Возрастные группы N Исследуемые группы

Наличие ДСТ Отсутствие ДСТ

ОА + ОА- Р ОА + ОА- Р

До 40 лет 52 8(0,228) 27(0,772) <0.05 0 17(1,000) <0,05

40-49 лет 66 11(0,570) 8(0.430) <0,05 14(0,297) 33(0,703) <0,05

50-59 лет 140 44(0,620) 26(0,380) <0,05 26(0,371) 44(0,629) <0,05

60-65 лет 65 29(0,900) 3(0,100) <0,05 23(0,696) 10(0,304) <0,05

Примечание: частота встречаемости признаков приведена в абсолютных числах, в скобках -удельный вес

Оценка днспластической стигматизации при различной локализацией ОА

Проведено исследование спектра и частоты встречаемости фенотипических признаков ДСТ у пациентов с ОА в зависимости от локализации патологического процесса. Статистически значимые результаты представлены в табл. 3. Таблица 3 - Частота встречаемости фенотипических признаков ДСТ у пациенток с ОА

различной локализации

Признак КА ГА ПОА Контроль

ГЭК легкой степени 10(0,125) 5(0,138) 11 (0,268)* 18(0,102)

Геморрагический синдром 35 (0,437) 16(0,440) 23 (0,561)* 63 (0,360)

ИМТ< 15 9(0,112)* 4(0,111)* 7(0,170)* 64 (0,365)

Висцероптозы 26 (0,325)* 6(0,166) 7(0,170) 25 (0,142)

Варикозная болезнь вен 37 (0,462) 19 (0,527)* 20 (0,487) 47 (0,268)

Миопия тяжелой степени 6 (0,075) 3 (0,083) 6(0,146)* 7 (0,040)

Хруст В ЧС 27 (0,037) 11 (0,305) 21 (0,512)* 47 (0,268)

Плоскостопие 26 (0,325) 18(0,500)** 18 (0,439)** 52 (0,297)

Вальгусная установка стоп 31 (0,387) 13(0,361) 19(0,463)** 55(0,314)

Хруст суставов 60 (0,750)* 29 (0,800)* 30(0,731)* 94 (0,537)

Гиперкифоз/лордоз 12(0,150) 9 (0,250)* 5(0,122) 17(0,097)

Примечание: приведены в абсолютные значения частот, в скобках-удельный вес; знаком *

(р<0,05) и ** (0.05<р<0,08) обозначены статистически значимые различия Некоторые фенотипические признаки ДСТ ассоциированы с наличием ОА различных локализаций. Среди них уже известные в качестве предикторов повышенная масса тела и хруст в суставах (для ОА в целом), а также висцероптозы (для КА), варикозная болезнь нижних конечностей, плоскостопие, деформации позвоночника (для ГА), кожная гиперэластичность, геморрагический синдром, тяжелая миопия, хруст височно-нижнечелюстного сустава, плоскостопие и вальгусная установки стоп (для ПОА). Выявленные ассоциации могут способствовать определению риска развития ОА у лиц с ДСТ.

Исследования маркеров дегенерации суставного хряща Нами были определены сывороточные концентрации COMP и ГАГ у женщин с ОА и ДСТ, результаты представлены на рис. З.Уровень COMP был повышен при изолированной ДСТ по сравнению с группой контроля (14,32±3,96 нг/мл и 11,31±4,25 нг/мл соответственно), однако различие не достигло уровня статистической значимости (Н=1,629, р=0,089). У пациенток, страдающих ОА, концентрация COMP в сыворотке была статистически значимо повышена по сравнению с контрольной группой как в группе с отсутствием (18,26±6,35 нг/мл), так и с наличием (24,15±11,35 нг/мл) ДСТ (Н=3,43, р=0,034 и Н=6,12, р=0,012, соответственно). Наличие фоновой ДСТ у пациенток с ОА характеризовалось статистически значимым повышением концентрации COMP в группе с сочетанной патологией по сравнению с женщинами с изолированным О А (Н=4,02 р=0,021), что свидетельствует об усилении процессов дегенерации соединительной ткани преимущественно у пациенток с сочетанием ОА и ДСТ (рис.3)

ОА»ДСТ* ОА-ДСТ'

ОА+ДСТ- Комтропь

ОА.ДСТ

о**дст.

Рисунок 3. Концентрации COMP (А) и ГАГ (Б) в исследованных группа Концентрация ГАГ у женщин с изолированной ДСТ была сопоставима с таковой в группе контроля (29,11±11,5 мкм/л и 28,±9±12,9 мкм/л, Н=0,202, р=0,79). У пациентов с изолированным ОА сывороточные концентрации ГАГ были статистически значимо выше (46,96±15,82 мкм/л), чем в группах с изолированной ДСТ и контроля (Н=3,35, р=0,028 и Н=3,32, р=0,032, соответственно). Максимальные уровни ГАГ отмечались у женщин с сочетанной патологией (53,65±21,5 мкм/л), значения также были статистически значимо выше контрольной группы (Н=6,12, р=0,012). Показатели сывороточных концентраций ГАГ в группах с изолированным ОА и сочетанной патологией отличались незначительно (Н=0,39, р=0,34). Таким образом, ДСТ ускоряет дегенерацию суставного хряща у больных с ОА. COMP является маркером данного процесса, что согласуется с имеющимися результатами исследований [Гнилорыбов с соавт., 2004; Saberi etal, 2015]

Оценка маркеров воспаления при ОА и ДСТ Проведено исследование сывороточных аутоантител к коллагенам I и II типов во всех исследуемых группах. Обнаружены аутоантитела к коллагену I типа в группах женщин с изолированной ДСТ и сочетанием ДСТ и ОА, при этом в группе пациенток с изолированным ОА и в группе контроля аутоантитела не регистрировались. Аутоантитела к коллагену II типа были обнаружены у женщин всех трех исследуемых групп, в контроле результат был отрицательным. Средний уровень изменения оптической плотности образцов в группах с изолированным ОА и сочетанной патологией был сопоставим и превышал таковую при изолированной ДСТ. Результаты представлены в табл. 4,

Таблица 4 - Уровни аутоантител к коллагенам I и II в сыворотке крови

Показатель Исследуемые группы

ОА + ДСТ + ОА+ ДСТ - ОА- ДСТ + Контроль

AT к коллагену I типа ++/+ - ++/+ -

AT к коллагену II типа +++ +++ ++/+ -

Примечание: - АТотсутствуют, + концентрация слабая, + +концентрация средняя, + + + концентрация высокая

Результаты исследования показателей воспаления путем определения С-РБ и СОЭ представлены на рис. 4.

-С-ГЬакепя,

Уроамк СОЭ а исслажумьл г^ггглг

Рисунок 4. Уровни С-РБ (А) и СОЭ (Б) в исследованных группах.

При оценке уровня воспаления показатель СОЭ в группах пациенток с ОА был повышен как относительно контрольной группы (7,78±2,73 мм/ч), так и относительно группы с изолированной ДСТ (10±3,52 мм/ч), различия достигли уровня статистической значимости (Н=4,39, р=0,020 и Н=3,97, р=0,025, соответственно). Существенного влияния наличия признаков ДСТ на уровень СОЭ у больных ОА выявлено не было, средние величины в группе с изолированным ОА составила 14,52±4,6 мм/ч, с сочетанием ОА и ДСТ - 16±3,5 мм/ч, различия статистически незначимы (К= 0,45, р=0,78). Концентрации С-РБ в группе с изолированным ОА (25,8±6,4 нг/мл) были статистически значимо выше, чем в группе контроля (9,7±5,18 нг/мл) и в группе с изолированной ДСТ (13,8±3,34 нг/мл, Н=12,11, р=0,009 и Н=7,39, р=0,01, соответственно). В группе женшин с сочетанной патологией концентрации С-РБ также были статистически значимо выше, чем в группе контроля и в группе с изолированной ДСТ (35,3±4.4 нг/мл, Н=18,78, р=0,001 и Н=11,14, р=0,006, соответственно). Сывороточные концентрации С-РБ в группе с сочетанной патологией были статистически значимо выше, чем в группе с изолированным ОА (Н=3,44, р=0,021).

Все пациенты с ОА были обследованы на наличие синовита. Клинически синовит наблюдался у 48 (30,5%) пациенток. Частота встречаемости ДСТ в группе больных с синовитом была несколько выше (43,8%), чем в группе больных без синовита (37,1%), но различия не достигли уровня статистической значимости (р=0,082). Результаты определения СОЭ и С-РБ у женщин с наличием и отсутствием синовита представлены на рис. 5. У больных ОА с клиническими проявлениями синовита выявлено повышение уровня СОЭ в сыворотке крови (23,2±2,81 мм/ч), статистически значимо превышая аналогичные как в группе больных ОА без признаков синовита (8,2±2,22 мм/ч), так и в контрольной группе (7,4±2,92 мм/ч, Н=9,17, р=0,014 и Н=8,89, р=0,011, соответственно).

Уровни СОЭ в исследуемых группах

-г-

m т.

i

с

Рисунок 5. Уровень С-РБ (А) и СОЭ (Б) в исследованных группах.

Уровень С-РБ в данной группе (35,3±4,5 мкм/л) также статистически значимо превышал таковые в группе с ОА без синовита (25,3±3,74 мкм/л) и контрольной группе (9,66±5,52 мкм/л, Н=13,17, р=0.001 и Н=4,11, р=0,018, соответственно). У пациентов с ОА без клинических признаков синовита уровни СОЭ были сопоставимы с таковыми в контрольной группе, при определении С-РБ отмечалось статистически значимое повышение его концентрации по сравнению с контрольной группой (Н=7,36, р=0,015).

Были определены сывороточные концентрации СОМР у больных ОА в зависимости от наличия клинически выраженного синовита и уровней С-РБ в сыворотке крови, результаты представлены на рис. 6.

COMP V бопььы* ОА

А Б

Рисунок 6. Уровни COMP в зависимости от характеристик синовита (А) и

корреляционный анализ уровней С-РБ и COMP у больных с ОА (Б). Максимальный уровень сывороточной концентрации COMP наблюдался у больных с клинически выраженным синовитом (26,22± 1,85 нг/мл), статистически значимо различаясь по сравнению с контролем (12±3,7 нг/мл) и больными с нормальными уровнями С-РБ (13,7±2,4 нг/мл, Н=10,17,р=0,005 и Н=9,48, р=0,008, соответственно). Различия между группой пациентов с клинически выраженным синовитом и больными с повышенным уровнем С-РБ (21,88±2,14 нг/мл) не были статистически достоверны, однако отмечалась тенденция к повышению уровней COMP в группе с клиническим синовитом (р=0.073). Также уровень COMP был

повышен у больных ОА без клинических признаков синовита, но с увеличенным уровнем С-РБ, различия достигли уровня статистической значимости между группой контроля и больными без повышения С-РБ (Н=8,11, р=0,012 и Н=7,40, р=0,021. соответственно). Отмечалась положительная корреляция между уровнем С-РБ и COMP (К=0,622498, р<0,05). Таким образом, воспаление играет существенную роль в патогенезе ОА и усиливает повреждение суставного хряща. Чувствительным маркером является С-РБ. его уровни максимальны у лиц с сочетанием ОА и ДСТ.

Молекулярно-генетическое исследование остеоартроза у пациентов с ДСТ

Проведено исследование 10 полиморфных вариантов 6 кандидатных генов О А и поиск ассоциаций изученных локусов с локализацией патологического процесса, с возрастом манифестации заболевания, с наличием признаков ДСТ и различными фенотипическими проявлениями ДСТ. В качестве кандидатных генов исследованы гены матриксной протеиназы 1 (ММР1), матриксной протеиназы 3 (ММРЗ), матриксной протеиназы 13 (ММР13), коллагена II типа (COL2A1), фактора роста и диффренцировки 5 (GDF5) и рецептора витамина Д (VDR). Данные кандидатные гены выбраны для исследования на основании их патогенетического действия на соединительную ткань, которое может влиять на развитие как ДСТ, так и ОА.

Распределение частот аллелей и генотипов изученных локусов соответствовало равновесию Харди-Вайнберга (р>0,05) для всех исследованных локусов, кроме rs1544410, rs7975232 и rs35068180. Для локуса rs1544410 фактическая частота гетерозигот превышала ожидаемую, в локусах rs7975232 и rs35068180 она была ниже ожидаемой. Подробная характеристика изученных локусов представлена в табл. 5. Частоты минорных аллелей варьировали от 0,314 в локусе rsl43383 до 0,479 в локусе rs35068180 (c.l025-49G>T, Apal).

Таблица 5 - Характеристики исследуемых локусов кандидатных генов

№ Локус Ген Хромосомная локализация Hpj-ed Hobs HWpval MAF

1 rsl43383 GDF5 20q 11.22 0.481 0.481 0.217 0.402

2 rs731236 VDR 12q 13.11 0.408 0.431 0.462 0.314

3 rs 7975232 VDR 12ql3.11 0.587 0.495 0.004 0.448

4 rs1544410 VDR 12ql3.11 0.385 0.467 0.001 0.371

5 rs2228570 VDR 12ql3.11 0.456 0.474 0.636 0.386

6 rs2276455 COL2A1 12q13.11 0.401 0.450 0.062 0.343

7 rs63118460 COL2A1 12ql3.11 0.472 0.492 0.513 0.437

8 rs1799750 MM PI 1 lq22.2 0.520 0.494 0.415 0.445

9 rs2252070 MMP13 1 lq22.2 0.464 0.440 0.425 0.327

19 rs35068180 MMP3 1 lq22.2 0.429 0.499 0.015 0.479

Примечание:Н0ь5 - наблюдаемая гетерозиготность, Hpreij - ожидаемая гетерозиготность. HWpmi - показатель р для оценки соответствия равновесию Харди-Вайнберга (поддерживалось при уровне р>0.05), MAF - частота минорного аплеля

В группе контроля генетическое равновесие соответствовало закону Харди-Вайнберга для всех локусов, что свидетельствует о достаточной генетической гетерогенности исследуемой выборки и об отсутствии ошибок при формировании выборок и генотипировании.

Поиск генетических маркеров остеоартроза Проведен поиск ассоциаций полиморфных вариантов генов ММР1, ММРЗ, ММР13, С012А1,СВР5 и \ЪЯс наличием или отсутствием О А в целом. Выявлена ассоциация аплеля *С полиморфного локуса г$15444Ю гена УйЯ с повышенным риском развития ОА (х2=4,20, р=0,04; ОЯ=1,47, 95% ДИ 1,01-2,13).

Мы разделили выборку на группы сравнения с учетом локализации патологического процесса с целью поиска специфических генетических маркеров. Результаты представлены на рис. 7.

Рисунок 7. Маркеры повышенного риска развития ОА различной локализации.

Аллель *Т полиморфного варианта «63/18460 гена СОПА1 ассоциирован с повышенным риском развития ОА тазобедренных суставов (X 6,38, р=0,011;ОЯ=1,95, 95%ДИ 1,01-3,70). Риск развития ПОА повышается у носителей генотипа *С*С локуса «143383 гена СОР5 (х2=6,38, р=0,011;ОЯ=1,95, 95%ДИ 1,013,70), аллеля *0(х2=7,16, р=0,007;0а=2,25,95%ди 1,2-4,32) и генотипа ЮЮ (х2=5,25, р=0,021;0я=3,02, 95% ДИ 1,19-7,68) локуса ™1544410 гена УйЯ. Результаты имеющихся исследований противоречивы, в частности, риск развития ОА был ассоциирован с аллелем *Т локуса гз143383 гена СИР5 [Та\¥опзашаЦ-ике1а1.. 2011]. исследования локусов генов КШ и СОЬ2А1 имели результаты, сопоставимые с полученными нами данными РнИгагаБйа!., 2006; ХиегаЬ, 2011].

Поиск молекулярно-генетических маркеров дисплазии соединительной ткани Проведено изучение распределения частот изученных аллелей и генотипов полиморфных вариантов кандидатных генов в зависимости от наличия или отсутствия ДСТ в целом, а также в зависимости от степени ее выраженности, результаты представлены на рис. 8.

Рисунок 8. Маркеры повышенного риска развития ДСТ различной степени тяжести.

Аллель *G полиморфного варианта rsl5444l0 гена VDR является маркером риска формирования ДСТ в целом 0f=9,36, р=0,002; OR=l,77, 95% ДИ 1,22-2,56), генотип *G*G повышает (х2=5,97, р=0,Ol;OR=2,76,95% ДИ 1,19-6,39), а генотип *G*A снижает риск формирования ДСТ тяжелой степени (х2=5,65, p=0,01;OR=0,30, 95% ДИ 0,1-0,84). У носителей генотипа *Т*Т полиморфного варианта rs7975232 гена VDR снижен риск формирования ДСТ в целом (х2=4,44, p=0,035;OR=0,50, 95% ДИ 0,290,96). В доступной литературе отсутствуют данные о роли гена VDR в формировании ДСТ.

Поиск ассоциаций полиморфных локусов кандидатных генов с отдельными фенотипическими признаками ДСТ

При анализе распределения частот аллелей и генотипов полиморфных локусов кандидатных генов у женщин с наличием определенных фенотипических признаков ДСТ, выявлен ряд ассоциаций. Развитие деформаций желчного пузыря ассоциировано с локусами rs1799750 гена ММ PI (х2=6,7; р=0,009;(Ж=2,58; 95% ДИ 1,23-5,4) и rs2252070 гена ММР13 (х2=4,92; р=0,02;(Ж=1,8; 95% ДИ 1,0-3,08), ГМС - с локусами rs1799750 гена ММР1 (х2=6,5; p=0,01;OR=3,4; 95% ДИ 1,25-7,84), rs7975232 гена VDR (Х2=4,08; р=0,043;OR= 1,52; 95% ДИ 1,01-2,28), rs2276455 гена COL2A1 (х2=7,35; p=0,006;OR=3,3; 95% ДИ 1,3-8,18), артериальной гипотензии -rs2276455 (х2=4,71; p=0,029;OR=2,0; 95% ДИ 1,06-3,76) и rs63118460 (х2=5,81; р=0,01;(Ж=1,98; 95% ДИ 1,13-3,49) гена COL2A, висцероптозов - rsl544410 (х2=9,56; p=0,001;OR=2,75; 95% ДИ 1,42-5,32) и rs731236 (х2=8,04; p=0,008;OR=2,54; 95% ДИ 1,31-4,93) гена VDR, патологии скелета (деформации грудной клетки и позвоночника, долихостеномелии) -rs63118460 гена COL2A1 (х2=5,81; p=0,01;C)R=l,98; 95% ДИ 1,13-3,49), rs7975232 (Х2=4,74; p=0,02;OR=3,09; 95% ДИ 1,16-8,22) и rsl544410 (х2=9,56; р=0,001;(Ж=2,75; 95% ДИ 1,42-5,32) гена VDR, грыжевой болезни - rs2252070 гена ММР13 (х2=6,83; p=0,008;OR=2,79; 95% ДИ 1,26-6,18), на развитие геморрагического синдрома -rs2276455 гена COL2A1 (х2=3,99; p=0,045;C>R=l,88; 95% ДИ 1,0-3,52), ГЭРБ- локус rs2252070 гена ММР13 (х2=6,09; p=0,01;OR=3,66; 95% ДИ 1,22-10,9). В литературе встречаются результаты исследования генетических основ различных состояний, входящих в симптомокомплекс ДСТ. Наиболее значимые ассоциации получены для локусов генов матриксных металлопротеиназ с такими признаками, как миопия, ГЭРБ, патология аорты, тазового дна, позвоночника [Deguaraetal., 2007; Schacheetal., 2012; Ferrarietal., 2012; Cheungetal., 2012; Omairetal., 2013], что согласуется с полученными нами данными.

Поиск ассоциаций кандидатных генов с ОА и ДСТ в различных этнических группах Республики Башкортостан Учитывая многофакторную природу ОА и ДСТ, мы рассмотрели наши выборки с учетом этнического фактора и провели поиск ассоциаций изученных локусов в наиболее представительных группах женщин русской и татарской этнической принадлежности. Результаты представлены в табл. 6.

Таблица 6 - Ассоциации изученных локусов кандидатных генов с ОА и ДСТ в

Признак Локус, (ген) Маркер т,р, (ОЛ (95% ДИ))

ДСТ у татар гя35068180 (ММРЗ) *5А *5А 4,49; 0,03, (0.57;(0,33-0,98))

ДСТ у русских к2252070 (ММР13) *А*С 4,26; 0,03; (1.58; (1,01-2,47))

и2276455 (СОЬ2А1) *0*0 7,02; 0,008; (1.74; (1,18-2,58))

«1544410 (УОК) *А*А 3,93; 0,04; (0.3; (0,13-0,98))

г.57975232 (УОР) *в*Т 4,45; 0,03; (1.65; (1,0 -2,72))

ОА у татар г.<;143383((]ОГ5) *С 4,24; 0,03; (1.36; (1,01-1,83))

(статистически значимый при р<0,05);С>Я - относительный риск.

Таким образом, у женщин татарской этнической принадлежности генотип *5А5А полиморфного варианта г.<>35068180 гена ММРЗ снижает риск развития ДСТ (СЖ=0,57;95% ДИ 0,33-0,98), аллель *С полиморфного варианта гз143383 гена С/Ж5 повышает риск развития ОА (011=1,36; 95% ДИ 1,01-1,83). Риск формирования ДСТ у женщин русской этнической принадлежности повышается при наличии генотипа *АЮ полиморфного варианта «2252070 гена ММР13 (011=1,58; 95% ДИ 1,01-2,47), генотипа *С*С полиморфного варианта г52276455 гена СОЬ2А1 (ОЯ=1,74;95% ДИ 1,18-2,58) и генотипа полиморфного варианта «7975252 гена УйЯ (ОЯ=1,65;

95% ДИ 1,0 -2,72). Генотип *С*Т полиморфного варианта гз1544410 гена напротив, снижает риск формирования ДСТ у женщин русской этнической группы (011=0,3; 95% ДИ 0,13-0,98)

Молекулярно-генетические аспекты коморбидности ОА и ДСТ

Проведено исследование распределения частот аллелей и генотипов изученных локусов кандидатных генов в группах женщин в зависимости от наличия ОА в сочетании с ДСТ. Генотип *С*С полиморфного варианта гхбЗ 118460 гена СОЬ2А1 снижает риск развития изолированного ОА (х2=4,2; р=0,04; 011=0,5; 95% ДИ 0,260,99), генотип *С*С полиморфного варианта гя 1544410 и генотип *С*Т полиморфного варианта ^7975232 гена УОЯ повышают риск развития ОА и ДСТ в сочетании (х2=4,2; р-0,04;0я=0,5; 95% ДИ 0,26-0,99 и х2=3,80; р=0,049;0к=1,9; 95% ДИ 1,01-3,63, соответственно) (рис. 9).

7975232 УРЯ

* гб1544410

О

1.9(1.01-3.63)

т

Д 1.5"(1.09-2.26)

0 0.5 ,1 1.5 2

Ст(95%ДИ)

Рисунок 9. Маркеры повышенного риска развития коморбидной патологии. Поиск ассоциаций гаплотипов кандидатных генов с развитием ОА и ДСТ

Эффекты отдельных маркеров, выявляемые при классическом анализе ассоциаций, как правило, невелики и могут быть связаны не с самим изучаемым маркером, а со сцепленным с ним функционально значимым вариантом. В силу этого

анализ ассоциаций на уровне гаплотипов может оказаться более мощным и информативным средством, чем изучение отдельных маркеров. Мы провели оценку неравновесия по сцеплению изученных локусов генов VDR, COL2A1, ММР1, ММРЗ, ММР13, GDF5 с последующим сравнительным анализом гаплотипов. Выявлено, что полиморфные варианты rsl544410, rs7975232 и rs731236 гена VDR находятся в неравновесии по сцеплению (D">0,75) и составляют один кластер, полиморфные варианты rs63118460, rs2276455 гена COL2A1 составляют второй кластер (рис. 10)

эч-э^вчс яшяяшнявяшшшшшшшшшшшшж

ятяшяшшттттттшяшшШтшяшшя * j

п..™. 1 f i

OK

*AC , В *CGA " '< К ■ *1"ГЛ ■ *CTG « 4 ■ ! /V

1 КОЯ

Рисунок 10. Анализ гаплотипов изученных локусов кандидатных генов.

Гаплотип *СТА полиморфных вариантов к 1544410, гз7975232, г$731236 гена VIснижает риск развития ОА в целом (х2=8,16: р=0,004, 0я=0.27; 95% ДИ 0,110,68) и риск развития ОА у женщин русской этнической принадлежности (%2=4,91; р=0,026; 011=0,28; 95% ДИ 0,07-0.99), а также ОА коленных (х2=4,99; р=0,025; 011=0,28; 95% ДИ 0,08-0,91) суставов, уменьшает риск формирования симптомокомплекса ДСТ в целом (х2=10,45; р=0,001; 0к=0,27; 95% ДИ 0,11-0,65), а также грыжевой болезни (х2=3,92; р=0,047; ОЯ=0,04; 95% ДИ 0,01-0,99).

Гаплотип *СЮ увеличивает риск развития ПОА (х2=3,76, р=0,052; ОЯ=1.88.95% ДИ 1,01-3,59). У носителей гаплотипа *ССС повышен риск формирования симптомокомплекса ДСТ в целом (х2=4,83, р=0,027; ОЯ=1,48,95% ДИ 1,04-2,12), у носителей гаплотипа *АС- артериальной гипотензии (х2=3,22, р=0,048; ОЯ=1,41,95% ДИ 1,01-2,01), хруста ВЧС (х2=3,38, р=0.011; ОЯ=1,81,95% ДИ 1,121,88) и ГМС тяжелой степени (х2=6,01, р=0,014; ОЯ=2,09,95% ДИ 1,15-3,77). Гаплотип *7Х4снижает риск формирования артериальной гипотензии (х2=3,59, р=0,05; ОЯ=0,64,95% ДИ 0.41-0.99) и увеличивает риск развития патологии парадонта (Х2=5,24, р=0,022; ОЯ=2,25.95% ДИ 1,13-4,49)

Клинико-генетические модели прогнозирования риска развития раннего ОА С целью объединения клинических и молекулярно-генетических предикторов риска развития ОА были разработаны прогностические модели с использованием метода многофакторной логистической регрессии (таблица 7). Состоятельность полученных моделей проверялась с помощью ЯОС-анализа и вычисления АиС

(площади под кривой), показатель которого в диапазоне 0,6-0,7 считался средним, 0,7-0,8 - хорошим, 0,8-0,9 - очень хорошим).

Таблица 7 - Клинико-генетические модели прогнозирования риска развития ОА_

Модель 1

Модель 2

Модель 3

Кокосоаротроз

Гонартроз

Полиостеоартроз

Кифоз/лордоз

Варикозная болезнь

ГЭРБ

Птозы

ММРВ

СОЬ2А1

ДСТ

Варикозная болезнь ГЭРБ

Кифоз/лордоз С О НА 1 СИР5

ДСТ ГЭРБ

Миопия тяжелая Кифоз/лордоз Деформации ЖП Хруст ВЧС 1Ш и СД«

X = 16,93 Р=0,039 АиС=0,686

X =23,43 Р=0,009 АЦС=0,707

X =41,89 Р=0,000079 АиС=0,842

Примечания: / - критерий «хи-квадрат» Пирсона; р - достигаемый уровень значимости (статистически значимый при р<0,05);А11С - площадь под кривой

Получены три модели, прогнозирующие риск развития КА, ГА и ПОА. Характеристики моделей представлены в табл. 7. Модели для диагностики ПОА и ГА включали такой критерий, как «ДСТ в целом», в то время как модель для КА не содержала данного критерия. Наибольшей прогностической состоятельностью обладала модель для диагностики ПОА, Модели для диагностики ГА и КА также были статистически значимы, однако их прогностическая ценность была меньше.

Выводы

1. Установлено, что у 26,3% пациенток терапевтического профиля встречается остеоартроз и у 26% - дисплазия соединительной ткани. Частота встречаемости остеоартроза у женщин с дисплазией соединительной ткани составила 58,9%, увеличиваясь с возрастом от 22,8% у лиц моложе 40 лет до 90% у лиц старше 60 лет.

2. Показано, что висцероптозы являются маркерами риска развития коксоартроза, варикозная болезнь нижних конечностей, плоскостопие, деформации позвоночника -гонартроза, кожная гиперэластичность, геморрагический синдром, тяжелая миопия,

хруст височно-нижнечелюстного сустава, плоскостопие и вальгусная установки стоп -полиостеоартроза.

3. Обнаружено повышение уровня аутоантител к коллагену I и II типа при дисплазии соединительной ткани. Выявлено повышенное содержание аутоантител к коллагену II типа, COMP, ГАГ, С-РБ при остеоартрозе. Уровень COMP у пациенток с остеоартрозом был выше при наличии дисплазии соединительной ткани и положительно коррелировал с уровнем С-РБ, что свидетельствует о неблагоприятном влиянии дисплазии соединительной ткани на дегенерацию суставного хряща.

4. Установлено, что в формировании деформаций желчного пузыря вовлечены полиморфные варианты генов MMPI, ММР13; гипермобильности суставов -ММР1, COL2A1; грыжевой болезни, варикозной болезни, ГЭРБ -MMPI3; артериальной гипотензии -COL2A1; деформаций грудной клетки, позвоночника и долихостеномелии - COL2A1, VDR; висцероптозов - VDR.

5. Выявлена ассоциация полиморфных вариантов rsl43383 (GDF5) и rs73I236 (VDR) с развитием OA, полиморфного варианта rs35068180 (ММРЗ) с формированием ДСТ у женщин татарской этнической принадлежности; rs2252070 (ММР13), rs2276455(COL2A 1), rsl544410 и rs7975232 (VDR) с формированием ДСТ у женщин русской этнической принадлежности.

6. Обнаружена ассоциация полиморфных вариантов rsl544410 и rs7975232 (VDR) с развитием остеоартроза в сочетании с дисплазией соединительной ткани.

7. Разработаны клинико-генетические модели прогнозирования риска развития раннего остеоартроза различной локализации у женщин с дисплазией соединительной ткани.

Практические рекомендации

1. Рекомендуется проводить скрининговую диагностику дисплазии соединительной ткани у пациенток терапевтического профиля с использованием диагностической таблицы Т.Н. Кадуриной.

2. При обнаружении фенотипических признаков дисплазии соединительной ткани, таких как висцероптозы, варикозная болезнь нижних конечностей, плоскостопие, вальгусная установки стоп, деформации позвоночника, кожная гиперэластичность, геморрагический синдром, тяжелая миопия, хруст височно-нижнечелюстного сустава необходимо проводить профилактику OA локализации, соответствующей маркерам риска.

3. У пациентов с остеоатрозом рекомендуется определять уровни С-реактивного белка и хрящевого матриксного белка (COMP) для оценки активности процесса вне зависимости от наличия клинического синовита.

4. Необходимо проводить молекулярно-генетическое обследование пациентов с фенотипическими признаками ДСТ с целью определения риска развития

и прогрессирования остеоатроза в молодом возрасте и проведения профилактических

мероприятий.

Список публикаций по теме работы

1. Современные представления о патогенезе и генетике остеоартрита / А.В.Тюрин, Р.И. Хусаинова, Р.А.Давлетшин, Э.К.Хуснутдинова // Медицинская генетика -2013.-Т. 12, №3(129).-С. 3-10.

2. Тюрин, A.B. К вопросам патогенеза остеоартрита и дисплазии соединительной ткани / А.В.Тюрин, Р.А.Давлетшин // Медицинский вестник Башкортостана. - 2013. - Т. 8, № 4. - С. 80-83.

3. Уровни аутоантител к коллагенам I, II типа у женщин с синдромом гипермобильности суставов и остеоартритом / А.В.Тюрин, Р.А.Давлетшин, Р.Р.Фархутдинов, Р.М.Зарипова // Вестник Челябинского государственного университета. - 2013. -№ 7 (298). - С. 36-37.

4. Поиск ассоциаций полиморфных вариантов гена рецептора витамина D (VDR) с остеоартритом и дисплазией соединительной ткани / А.В.Тюрин, Р.И.Хусаинова, Н.Н.Хуснутдинова [и др.] // Медицинская генетика. - 2014. - Т. 13, № 9 (147). - С. 18-27.

5. Особенности метаболизма межклеточного вещества у пациенток с остеоартритом и дисплазией соединительной ткани / А.В.Тюрин, Р.А.Давлетшин, P.P. Фархутдинов [и др.] // Клиницист. - 2014. -№ 2. - С. 33-38.

6. Тюрин, A.B. Роль фенотипов дисплазии соединительной ткани в оценке риска развития соматической патологии / А.В.Тюрин, Р.А.Давлетшин, Р.М.Муратова // Казанский медицинский журнал. - 2014. - Т. 95, № 4. - С. 501-505.

7. Анализ ассоциаций полиморфных вариантов гена рецептора витамина Д (VDR) у пациенток с остеоартритом в различных возрастных группах/ A.B. Тюрин, Р.И.Хусаинова, Р.А.Давлетшин, Э.К.Хуснутдинова // Ученые записки Орловского государственного университета. - 2014. -№7 (63). - С. 261-263.

8. Тюрин, A.B. Клинические проявления дисплазии соединительной ткани среди стационарных пациентов, эпидемиология и диагностика / A.B. Тюрин, Р.М.Муратова, Р.А.Давлетшин // Физиология и медицина: материалы II Международной конференции. — СПб., 2010. - С. 241-243.

9. Тюрин, A.B. Клинические особенности течения остеоартроза у больных с фенотипическими признаками дисплазии соединительной ткани / A.B. Тюрин // Терапия XXI век: Upgrade: сборник материалов II Международной Олимпиады молодых ученых. - Саратов, 2010. - С. 84.

10. Тюрин, A.B. Клиническая диагностика дисплазии соединительной ткани/ A.B. Тюрин, Р.М.Муратова, Р.А.Давлетшин // Вопросы теоретической и практической медицины: материалы 76-й Республиканской научно-практической конференции молодых учёных. - Уфа, 2011- C.20I-205.

11. Тюрин, A.B. Поиск клинико-генетических ассоциаций полиморфных вариантов гена VDR с остеоартритом и дисплазией соединительной ткани / A.B. Тюрин, P.A. Давлетшин // Сборник материалов VIII Национального конгресса терапевтов. - М., 2013.-С. 93-95.

12. Тюрин, A.B. Фенотипические признаки дисплазии соединительной ткани у пациенток с остеоартритом / A.B. Тюрин // Завадские чтения: сборник материалов

VIII научно-практической конференции с международным участием. - Ростов на Дону/Д, 2013.-С. 128.

13. Тюрин, A.B. С-реактивный белок как маркер синовита у больных с остеоартритом коленного сустава/ A.B. Тюрин, P.A. Давлетшин // Инновационные технологии в диáгнocтикe и терапии внутренних болезней: сборник материалов республиканской научно-практической конференции. - Астана, 2013. - С. 201.

14. Тюрин, A.B. Маркеры остеоартрита у лиц с дисплазией соединительной ткани / A.B. Тюрин, Р.А.Давлетшин // Сборник материалов IX Национального конгресса терапевтов. - М., 2014. -С. 60-61.

15. Тюрин, A.B. Роль полиморфных вариантов гена рецептора витамина Д в развитии остеоартрита / A.B. Тюрин, P.A. Давлетшин // Завадские чтения: материалы IX научно-практической конференции молодых учёных с международным участием. - Ростов-на-Дону/Д, 2014. - С. 196.

16. Тюрин, A.B. Влияние синовита на разрушение суставного хряща у больных остеоартритом / A.B. Тюрин, P.A. Давлетшин // Вестник Башкирского государственного медицинского университета. - 2014. - №3 (приложение). - С. 1156-1161.

17. Тюрин, A.B. Поиск ассоциаций полиморфных вариантов гена рецептора витамина Д (VDR) с фенотипическими признаками дисплазии соединительной ткани / A.B. Тюрин // Вестник Башкирского государственного медицинского университета. - 2015. - №2 (приложение). - С. 379-384.

18. Поиск маркеров генетической предрасположенности к остеоартриту у женщин с фенотипическими признаками дисплазии соединительной ткани/ A.B. Тюрин, Р.И.Хусаинова, Р.А.Давлетшин, Э.К.Хуснутдинова // Медицинская генетика. -2015. - Т. 14, №4 (154):Тезисы VII Съезда Российского общества медицинских генетиков. - С. 58.

COMP ГАГ VDR GDF5

OA

ДСТ

ГА

КА

ПОА

OR (Odds Ratio)

Список условных обозначений и сокращений

Остеоартроз

Дисплазия соединительной ткани

Гонартроз

Коксоартроз

Полиостеоартроз

Относительный риск

Олигомерный матриксный белок хряща

ГЭРБ ГМС

MMPI3

ИМ PI ММРЗ

COL2A1

Гликозаминогликаны

Ген рецептора витамина Д

Ген фактора роста и дифференцировки 5

Ген коллагена 2 типа

Ген матриксной металлопротеиназы 1

Ген матриксной металлопротеиназы 3

Ген матриксной металлопротеиназы 13

Гастроэзофагеальнаярефлюксная болезнь

Гипермобильность суставов

Тюрин Антон Викторович (Российская Федерация) Клинические особенности и молекулярно-генетические маркеры остеоартроза у больных с дисплазией соединительной ткани

В результате проведенных исследований выявлена распространенность фенотипических признаков ДСТ у пациентов с OA, а так же оценено влияние ДСТ на возраст дебюта и клиническое течение OA. Установлены основные фенотипические признаки ДСТ, являющиеся маркерами неблагоприятного прогноза при OA. Выявлена зависимость уровней СОМР и ГАГ, а так же аутоантител к коллагену, СОЭ и С-РБ от клинических характеристик OA и ДСТ. Впервые выявлена роль полиморфных вариантов генов VDR, COL2A1, GDF5, ММР1, ММРЗ, ММР13 в развитии OA и ДСТ в целом, а так же с учетом локализации OA, степени тяжести и отдельных фенотипических проявлений ДСТ, сочетания OA с ДСТ у женщин из Республики Башкортостан с учетом их этнической принадлежности. Разработаны прогностические модели диагностики OA на основе клинических, биохимических и генетических критериев.

Anton Tyurin (Russia) Clinical features and molecular genetic markers of osteoarthritis in patients with connective tissue dysplasia

The studies, revealed the prevalence of phenotypic traits of CTD in patients with OA, as well as evaluated the impact of CTD on the age of the debut, and the clinical course of OA. The basic phenotypic traits of CTD, which are markers of bad prognosis in OA. The dependence of the COMP and GAG levels, as well as autoantibodies to collagen, ESR and CRP on the clinical characteristics of OA and CTD was identified. The role of polymorphic variants of the genes VDR, COL2A1, GDF5, MMP1, ММРЗ, MMP13 in the development of OA and CTD was revealed for the first time as a whole, as well as taking into account the localization of OA severity and specific phenotypic manifestations of the CTD, the combination of OA and CTD women from the Republic of Bashkortostan based on their ethnicity. Predictive models of diagnosis of OA on the basis of clinical, biochemical and genetic criteria were developed.

Формат 60x90/16. Заказ 1295. Тираж 100 экз. Печать офсетная. Бумага для множительных аппаратов. Отпечатано в ООО "ФЭД+", Москва, Ленинский пр. 42, тел. (495)774-26-96