Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Клеточные механизмы и коррекция иммунодефицита при опухолевом росте
- Ученая степень
- доктора медицинских наук
- ВАК РФ
- 14.00.36
Автореферат диссертации по медицине на тему Клеточные механизмы и коррекция иммунодефицита при опухолевом росте
¿,1 I ^ о О
МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ ИНСТИТУТ ИММУНОЛОГИИ
На правах рукописи
АРИПОВА Тамара Уктамовна
КЛЕТОЧНЫЕ МЕХАНИЗМЫ И КОРРЕКЦИЯ ИММУНОДЕФИЦИТА ПРИ ОПУХОЛЕВОМ
РОСТЕ
14.00.36— Аллергология и иммунология
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук
Москва —1992
Работа выполнена в Институте иммунологии Минздрава Республики Узбекистан и Первом Ташкентском Государственном медицинском институте Минздрава Республики Узбекистан
НАУЧНЫЕ КОНСУЛЬТАНТЫ:
Член-корреспондент РАМЫ, академик АЕН Российской Федерации Р. М. Хаитов
Доктор медицинских наук, профессор К. Г. Уразметов
ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ:
Доктор медицинских наук, профессор Л. П. Алексеев
Доктор медицинских наук, профессор Э. Г. Кадагидзе
Доктор медицинских наук А. А. Иванов
ВЕДУЩЕЕ УЧРЕЖДЕНИЕ —
Российский Государственный медицинский Университет
Защита диссертации состоится «_»_19_г.
в__часов на заседании специализированного Совета
Д 074.09.01 при Институте иммунологии Минздрава Российской Федерации по адресу: 115478. Москва, Каширское шоссе, дом 27, корпус 2
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института иммунологии МЗ Российской Федерации.
Автореферат разослан «_»_19_г.
Ученый секретарь специализированного совета доктор медицинских наук
Л. С. СЕСЛАВИНА
> I—-- ..
Г ' ,
OEiliÂH ХАРШЕРИСТШ РАБОТУ
Актуальность теш. Проблема опухолевого роста - одна из важнейших в современной биологии и медицине. Это связало как с пароним распространением онкологических заболевания, так и отсутствием кардинальных методов их терапии.
Взаимоотношения опухолевого роста а шмунноП системы носят зложний характер а до конца не выяснены. Действительно, с одной зторош, иммунная система организма способна распознавать, разрушать и элиминировать из организма опухолевые клетки, с другой стороны,' сама опухолевая ткань на иммунную систему оказывает супрес-зивное влияние, что выражается в инволюции тимуса, гипопластичес-<их и атрофических процессах в периферических лшжЬоидннх органах, нарушении процессов миграции, функциональной активности, кооперации различных видов иммунокошетенишх меток, а такяе продукции диокшюв, результатом которых является, подавление иммунного омега на уровне целостного организма (Р.В. Петров, 1976; В.И. Говал-ю, 1977; Р.В. Петров, P.M. байтов, 1977; P.M. Хаитов, 1979; Т.Н. Зелезнеэа, Ю.А. Гриневич, 1980; Н.И, Белянчшсова и др., 1981; З.А. Уманский, В.Г. Пинчук, 1902; Ь.Б. Фуко, 1983; Б.Д. Брсццз, .987),
Процессы миграции кроветворных стволовых клеток, Т- и В-лгм-10циюв, их кооперативное взаимодействие„являются важнейшими эта-1ши в становлении иимушого ответа. Разработанные экспериментально метода оценки этих этапов (Р.В. Петров с сотрудниками, IS69-,975; Miller , Mitchell , 1968) широко применяются для характерис-ши различгшх ишуномодуляторов, а также для выявления нарушений :ри некоторых патологических состояниях, например, при эксперимеп-альных артрите, гломерулонефрите, сифилисе (У.В. Маджидов, 1980; !.Д. Уразметова, 1987; Э.Г. Ким, 1992). Установлено, что у животах с перевитыми опухолями все этапы аммунопоэза оказались нэру-в'яяыми (P.M. Хаитов и др., 1976; А.Ш. Норпмов, 1978). Однако, аибольший интерес вызывает изучение этих вопросоз при канцероге-езе, индуцированном химически»« агентами, так как оно позволило и характеризовать состояние отдельных звеньев тчунопоэза' на талах развития опухолевой ткани (латентный период, стадия воз-якновения опухоли и терминальная стадия).
Показано, что нарушение активности различиях субпопуляций
г V/V « -
иммуноког,¡патентных клеток при опухолевом процессе неоднозначно. Так, активность ЕК, Т-хелперов подавлена, а Т- и В-супрессоров и макрофагов-супрессоров - повышена (Р.В. Петров, P.M. Хаитов,1977; A.Iii. Норимов, 1978; Lennard et el. , 1984; Lotzova , 1984; P.И. Красин и др., 1985; Pope , 1985; Вогоз et al. , 1987; A.C. Сапа-ров и др., 1992).
Установление отого $акта открывает возможность целенаправлен кого, селективного воздействия на отдельные популяции клеток. Так с помощью алтисивороток к Т-супрассорам (М.С. Бляхер, 1987), идис типаг.) i-j их рецепторов (A.C. Алт и др., IS8S) или к антителам к идиотину i-d {Knv/asekt et al. , 1987) возможно блокирование ин дукцпи Т-супрессоров. Использование цитокинов (интерферон, интер-лейкин-2) позволяет повышать ЕК активность (В.Д. Соловьев, И.Г. Баландин, 1981; Schneider', 1986; З.Г. Кадагидэв и др., 1989; Balkvdll , 1989; Drews , I98S). Оказалось, что некоторые полиэлектролиты, в частности lie-5, повышают активность Т-хелпвров при снижении Т-клеточной супрессии иммунного ответа (Р.В. Петров и др., IS8I; A.iJ. Накштдинов, 1982).
Использование ыоноклональных антител, особенно гомологичных, открывает широкие возможности не только в диагностике, но и в активной иммунотерапии онкологических больных (Iieville et al., . 1982; Bouchsix , 1985; Carleson et al. , 1989; aenekov.'itech et al., 1989').
Следовательно, разработка методов селективного воздействия на отдельные субпопуляции лимфоцитов является одним из путей коррекции иммунологических.нарушении и чрезвычайно перспективным направлением в комплексной терапии больных со злокачественными заболеваниями.
Работа выполнена в рамках программа 0.69.07 "Исследовать генетические ц молекулярные механизмы нарушений иммунитета и наслед ственншс болезней и разработать на этой основе методы и способы их профилактики, диагностики и лечения", утвержденной постановлениями ГИСТ СССР и Госплана СССР № I8I/I28 от 16.07.81 г.
Цаль и задачи иссладования. Цель настоящей работы - вкспери-ментальнш анализ нарушений этапов иммунопоэза и функций отдельных субпопуляций иммунокомпетантных клеток при опухолевом росте различного ганезиса п на атой основе разработка подходов к селективной- иммунотерапии.
• В процессе реализаций поставленной цели решались следующие
конкретные задачи: '
1) произвести анализ нарушений основных этапов ишунопоэза (миграция, пролиферация к дифйерйнцировка кровотворннх стволовых клеток, миграция Т- и В-клегок и их кооперативное взаимодействие, взаимодействие Т^ и Тд-клеток, макрофагов с лимфоцитами) и иммунного ответа на уровне целостного организма у мышей с индуцированными канцерогенами и перевитыми опухолями; . .
2) изучить нарушения функциональной активности различных суь5— популяций лимфоцитов, играющих ключевую роль в системе иммунитета (Т-хелперы и й-предаеотвенники АОК, Т-супрессоры специфической и неспецифической природы, В-супрессоры, контрсупрессоры, Т-килле-ры, ЕК, а также некоторые продукции их функции - лимфокинн Т-кле-ток, Ш-1, ИЛ-2) у мышей с индуцированными и перевитым! опухолями;
3) произвести анализ структурных изменений в составе клеток лимфовдных органов (тимус, селезенка, лимфатические узлы) у мышей с перевитыми опухолями;
4) исследовать иммунные механизмы действия некоторых иммуно-модуляторов (фиосулон, вдтисупрессорная сыворотка) у интактных животных;
5) изучить эффективность тормозящего влияния на рост и развитие опухолевой ткали ряда препаратов различного механизма действия; ...
6) показать, что в основе тормозящего влияния на рост и развитие опухоли в организме некоторых изученных препаратов лежит
их корригирующее влияние на отдельные этапы иммуногенеза и/или функциональную активность различных субпопуляций лимфоцитов, нарушенные у животных с опухоляга:.
Научная новизна и практическая значимость работы» Впервые на большом оксперименташюм материале при опухолях различного генезиса проведен всесторонний анализ нарушений основных этапов им-вдноиоээа и функциональной активности различных субпопуляций лимфоцитов и макро^агоа. Так, показано, что опухолевой рост сопровождается усилением процессов миграции костномозговых стволовых клэтек, а также их способности образовывать КОЕ в организме сии-ташых облученных в летальной дозе реципиентов, которое при терминальной стадии сменяется шс подавлением. Напрааяение дифферен-цировки гешпоэгаческах элементов при опухолевом росте изменяется преимущественно в сторону зритропоэза, наиболее выраженное
среди стволовых элементов селезенки.
Показано, что при МП и ДЫБА. канцерогенезе разко подавлена шграция В- и Т-клеток, причем в последнем случае в большей степени. При ЫХТ канцарогенезо и перевитых опухолях эффект кооперации Т- и В-клеюк на только ингабирсван, но в некоторой мере вообще на проявлялся, в то время как в оштах с ДМБА этот эффект был сохранен, хотя и бия подавлен по отношению к контролю. Выявлено, что нарушение взаимодействия Т- и В-клеток обусловлено в основном подавлением функции Т-хвлперов.
На примера МХТ канцерогенеза установлено, что взаимодействие Tj- и Т2-клеток снижено только в стадии развития опухоли, а в терминальной стадии опухоленосигельства практически не нарушено.
Выявлено, что при опухолевом росте резко подавлено контактное взаимодействие макрофагов с тикоцигаш или клетками лимфатических узлов, что в большей степени зависит от макрофагов, нежели клеток лиыфовдной системы.
При опухоленосительстве, штудированном химическими канцеро-генаш и путем перевивки, активность специфических и неспецифических Т-супрессоров, а также В-супрессоров повшена. Клетки лимфатических узлов интактных мышей и мышей с опухолшли оказывают контр-супрессивнов действие на сингешше клетки селезенка (Т-супрессо-ры). Показано, что Г-суцрессоры у животных с опухолями теряют способность воспринимать сигналы от других клеток, в том числе от контрсупрессоров.
Активность Т-киллеров при опухолевом росте существенных изменений не претерпевает,. в то вреш как ЕК активность значительно угнетена. Продукция ИЛ-2 при химическом канцерогенезо на стадии опухоленосительства снижена примерно в 2 раза, а снижение продукции 1UI-I отмечалось только в оштах с {.КГ.
Опухолевой процесс в клеточном составе лимфовдных органов вызывает выраженные структурные изменения, свидетельствующие о вовлечении в процесс клеточных элементов, ответственных и за гуморальные, и за клеточные звенья иммунитета.
Показано, что целенаправленное, селективное воздействие на нарушенные еташ/ иммуновоэза и функции ишунокошетентных клеток, участвующих в иммунном ответе, оказывает тормозящее влияние на рост и развитие опухолевой ткана.-Так, противоопухолевой эффект "фяосулона, впервые изученного в атом аспекте наш, реализуется на уровне Г-супрессоров и Ж. Препарат полностью отменял эффект
Т-супрессоров и восстанавливая ЕК активность.
Противоопухолевой эффект КАСС, .пошел непосредственного влияния на циркулирущиэ Т-супрессоры, обусловлен влияшюм ее на процессы дкф$оренцировкп и пролиферации клеточных эломэнтов а лголфо-идных органах - усилением преимущественно клеточних факторов иммунитета.
Противоопухолевый пф|;9кт тактивина реализуется'на уровне восстановления рецепториого аппарата лимфоцитов. Зф|ект синтетических полимеров ШЗП и ПАК в восстановлении шлг/унного ответа опосредован их стимулирукщчм влиянием на проиесси миграции и пролиферации гемопоэтическлх стволовых клеток, На -5 - его способностью корригировать дефекты иммунной система на уровне взаимодействуя г.нкрофагов и лимфоцитов Т-клеточнои линии дпф$ерекцкровки, а такта подавлять активность специфических л неснецифгеескях Т-супрес-соров, Повышенную активность 3~супресссрсв при опухолевом росте удается икгибнровать с помогаю цпнлофосфамэда.
Практическое значения полученных результатов состоит и в тогл, что показана принципиальная возшгность путем селективной коррекции с помадью итауномодуляторов нарушенных этапов щ.т.уно-лоээа и функции отдельных кммунокомлетентных клеток активно тормозить рост и развитие опухолевой ткани. Следовательно, эти данные обосновывает целесообразность дальнейших исследований в этом направлении. __
Апробация работы. Материалы диссертации долоканы на: 5-й Республиканской конференции Щ1Л медвузов Узбекистана (Ташкент, 1981), 1-й Республиканской конференции по медпщиежой иммунологии (Ташкент, 1983), Бсесовзной научной конференции" "Современнне метода иммунотерапии" (Ташкент, 1984), конференции молодых учеянх Филиала института имнунологаи (Ташкент, КБ?), 1-м Зсесоэзном иммунологическом съезде (Сочи, 1289), 1-м Республиканском съезда иммунологов и аллергологов Узбекистана (Самарканд, 1291), Республиканском научном общества лм^/нолегов Узбекистана (Ташкент,1991) Ученом совете Института иммунология Ш РУз (Ташкент, 1992).
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 20 работ, получено I авторское свидетельство СССР.
Объем 'и структура диссертации. Диссертация изложена на З^сО страницах машинописи, из них страниц текста. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, глава "Материал и метода исследования", 2 глав собственных исследований, заклвчешгя, еыео-
дов, списка литературы, вклнчагацего ¡3$ отечественных и иностранных источников» Работа иллюстрирована 61 таблицей и 12 рисунками.
Личное участие в вшголнешюп работе. Основная часть исследований, статистическая обработка и обобщение результатов проведаны самостоятельно. В постановка некоторых сложных им,дологических опытов принишли участие сотрудники Проблемной НИЛ тканевой несовместимости Первого ТашГосМ. Цитологические исследования проведены совместно с Т.А. Абаевои.
СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ
Материал, методы постановки опытов и исследования
В экспериментах били использованы мши инбредных линий СМ (Н-2К), СВАТ6Т6, C57ßl/6(H-2Ö), СЗНА (Н-2К), а также гибриды первого поколения (CBAxC57BI/6) Fj,.полученные из питомника лабораторных тавотных "Столбовая" АШ СССР. Часть экспериментов была поставлена на равдомбредных белых мышах.
Канцерогенез у мышей индуцировали полициклическимн ароматическими утлеводородагл! 20-метилхолантреком (ИТ) и 9,10-диметил-I-2-бенэантраценом (.ВДБА). Препараты вводили однократно внутримышечно в область бедра в объеме 0,1 мл бензола в дозе 0,3 или 0,5 мг на мышь,
В части опытов опухоль ьызивали путем ее перевивки, В работе были использованы следующие виды опухолей, полученные из банка опухолевых штаммов ВОНЦ АШ СССР:
1) саркома МХт-П. Опухоль поддерживали еженедельными пассатами in vivo на мышах линии С57Б1/6. Опухоль перевивали подкож- . ним введением 2-Й6 клеток саркомы мышам C57BI/6 и (СБАхС57В1/б)Р, 100% гибель шшей-опухоленосителеи C57BI/6 наступала на 15-20, а Pj - на 21-28 сутки;
2) гепатома 22, Опухоль поддерживали на мышах линии СЗНА. Опухоль перэвивали подкожным введением мышам СЗНА клеток гепатомг 22 в дозе 2,Iû'''»I0C$ гибель мышей. наступала на 15-20 сутки;
■ 3) асцитная саркот 37 (АС 37) - саркома молочной келезы (мегастазирующая опухоль);
4) солидная саркош 37 (СС 37) - саркош молочной железы (нематастаэирующая опухоль).
При перевивке подопытным животным (беспородные мыши) асцит-
11ую :ещкость вводили в'брюшнуп полость в объема 0,3 мл, а гавесь клеток солидных опухолей - иодкокно'В объеме 0,5 мл в область правого бедра. Степень созревания перевитых новообразований оценивали по размеру солидных опухолей (диаметр в см) и количеству гад-кости в брюшной полости животных при асцитн.чх опухолях (мл). При этом выделяли 4 степени созревания: I) 0 - отсутствие опухоли или асцита; 2) 0 - опухоли до 0,5 см, объем асцита до 1,0 гм; 3) 0 -опухоли 0,6-2 см, объем асцита - 1,0-3,0 ш; 4) 0 опухоли больше 2 см, объем асцита - больше 3 ил.
Животных облучали на рентгеновской установке РУьИ7 или гач-ш-лучоми на установке "Стебель-ЗА". В зависимости от условий эксперимента хквотннх облучали либо тотально (в летальной пли сублетальной дозах), либо субтотально, экранируя участок костного мозга (ло 1/2 голени задней конечности) пли область тимуса. Использовали экран, состоящий из свинцового (7 ид) и алюминиевого (I ш) листов. Мощность дозы облучения - ВО р/шя, фильтры А1 - 0,5 мм, Си - 0,5 мм, фокусное расстояние - 30 см.
Во всех опытах попользовали ткмуезавиммй антиген - эритроциты барана ОБ). Юге точные взвеси тимуса, селезенки, лимфатических узлов и костного мозга готовили по общепринятой методике (Р.В. Петров, Ю..М. Зарецкал, 1365). Готовая к применению взвесь клеток костного мозга и лимфатических узлов содержала 75-80$, селезенки - 90-95;? жизнеспособных кариоцитов. Подоюпннх шгаей иммунизировали ЭБ в дозах 2«108, 5»108, 4«Ю3 клеток. Клетки лнмфощшнх органов животным вводили в различных дозах в зависимости от условий опыта.
С целью коррекции нарушений иммунного статуса животных с опухолями наш была изучена эффективность ряда препаратов: I) синтетические полизлектролигныа соединения полиакриловая кислота (ПАК) : ММ 80 тис. дальтон, изополимер акриловой кислоты и н-вшпшгар-рблидона (Нр-5) с Ш ГШ тыс. дальтон. Препараты синтезированы в Институте биофизики ¡.13 СССР; 2) флосулон, синтезирований в Глсти-гуте онкологии Ш Литовской ССР (канд.мед.наук Я.К. Диджяпетрене); 3) тактики; 4) БЦЕ; 5) циклофосфаивд; 6) интерферон; 7) антисуп-^ессоряая енвороткп, полученная в ШБВШ им. Г.Н. Габричевского .53 РСФСР (докт.мед.няук М.С. Еляхер). Препарат представляет собой шггаротку кроликов, Еммуиизированных клегааш селезенки мышей, ролерантных к бактериальным полисахаридам, т.е. клетками селезен-си, обогамешшг.щ Т-супресеораш, затем очищенных путем адсорбции
эритроцитами, сывороткой и кдаткаш селезенки интактных ыышей; 6) нормальная; кроличья сыворотка не пользовалась в качество контроля к антисупрессорной.
Иммунный ответ алвотных с опухолями на ЭБ определяли путем подсчета отдельных антителообразущих клеток (АОК) в селезенках иммунизированная животных в прямой реакции локального гемолиза в агаре или агарозе по методу Jerae , îïordin (1963). Для изучения функциональной способности селезеночных клеток вырабатывать антитела на г.-.одели адоптивного иммунитета клетки селезенки мышеи (1.IÛ7) вместе с ЗБ (2»Ю8) внутривенно вводили облученным в летальной доза спнгениш реципиентам, Количество АОК в селезенке реципиентов определяли на 8 сутки после переноса клеток.
Дня изучения способности ¡слеток селезенки формировать розетки с ЭБ интактных мншэй (Контроль) ц мшеи-онухоленоситвлей иммунизировали 30$ взвесью ЭБ в дозе 0,5 мл и через 5 сугок в их селезенках определяли число шлнушых розеткообразущах клеток (РОК). Спонтанные РОК определяли в селезенках нешдаунизированянх ¡кивот1-ных, Sa РОК считали клетки, прикрепляющие 3 и более ¡эритроцитов.
Для определения степени миграции кроветворных стволовых клеток (Р.З. Петров, F.Î.Î. Хаитов, 1972) шаек облучали в детальней дозе при экранировании 1/2 голени правой задней конечности, Через 7-8 суток подсчитывали количество дискретных колоши на поверхности селезенки (Ш1 , LicOailooh , I9SI), формирующихся за .счет цнграции из костного шзга в селезенку гемопозтпческих ство-лоеых клеток. Для оценки нолониаобразующей активности различных видов клеток облученным, в летальной дозе реципиентам трансплантировали спнгенныа клетки костного мозга (5-Ю4 или I• 10 ), селезенки (I*IûS), периферической крови (0,2 ил, содержащей 3-24-10^ клаток). "Число колоний в селезенках подсчитывали через 8 суток после переноса меток. При оценке эндогенного колониеобразования гатей облучали в сублетальной дозе (6,5 Гр) и через 9 суток в их селезенках, определяли число колоний, Б части опытов с использованием гястосошзстишх линий шшей СБА и СВАТ6Т6, клетки которых различимы на стадии штоза по хромосомным маркерам Î6T6, проводили цитогенетичебкпи анализ .клеток костного шзга, селезенки и селезеночных колоний по методу ïord (1566), Для изучения ди^ферен-. цировки колоний из селезенок после их стандартной гистологической обработки готовили серка срезов толщиной 5-7 мкм с интервалом 50-60 ыкм ыовщу срезами, что обеспечивало подсчет всех формирую-
перевитыми опухолями кооперативный эф$окт Т~ и В-клоток бил полностью отменен. Действительно, при переноса смоол Т- и В-клоток от.таких глвотних реципиенты давали талой яд йот даке болев низкий ответ, чем при переносе только B-клеток, У обработанных те Д/1ЕА ?лшей кооперация Т- л В-клоток была сохранена, хотя и в меньшей степени, чем у ¡штактннх етвотннх.
У млн ей различают тажга Т-р и Tg-клвтхи. Показано, что Tj~ клетки проявляют homing inafcinct в отношении селезенки, коротко-гавущие, не способны к рециркуляции, Тр-клетки проявляют hoains instinct в отношении лимфатических узлов, долгоживущие, активно рециркулируют, активны в FTIIX (itatt , Cnntor , 1971; Xigeiorx , Asofsky, 1973; Н.Г. Арцимовпч, H.H. Настоящая, 1976). Установлено, что развитие РТГ1Х требует кооперативного Ъзагалодейстгля Tj— и T2-1U5QTOK, при этом Т^-клетки кишвяот киллерную, а Tj-kjistki - амштфлкаторную роль, т.а, усиливают киллернш эффект Тp-iw.g-ТОК (Оспtor , Acofsky, 1970; Blcmgren , 1973; Tigalcc-r et rd. , ID75; С,С. Гамбапов и др., 1982).
Ilm«! на примере ДОЕЛ канцерогенеза был изучен хоопс-
рздая Ту- и Tg-iaoTOK прл развитии локальной ^сргя! РТПХ в жзлТл-тичеоких уздах шией (Cxi<ucC57Bl/6) при переносе им глоток t'тi— tn°>i родительского гшгстппа CßA. Результаты этих пссладс.тнн:8 показали, что на латентной стадии ощрсолоойразсвалил коэгго-рации Tj~ ¡1 Т2~ платеж был щп!б!:рсвач по отлогой?.» к ксятроля а. 1,8-2,2 раза, а з стадии опуход«моси*ельства (с0-120 дня) практически но опд иарздаси, уотя и отглочалось иохоторсз скишше sJI'Cn-
При этом ни в одам срок исследования фун::цяовдлы«?л а".тнх~ месть i'j- и Tg-клеток сама по себэ на была наруионз.
Активное участие цэкрофагов в становлении яуглуняого отвс*та. п. том число п при опухолевом роста, показано оогпмя последовать-
(р.в. Петров, 1970; Lennara et el. , 1584; Н..М. Еорй'Мяя и др., IC0G; В.К. Новиков, I98G). По данным Holden nb «а Л1976), КиезоХ et al. (1977), Wood , Gollahon (1978) n'isqiapru является ocHoBmnsi глотком: срганкзга, шфиьтрярувиимч олухолэлуэ ткань, л их .содержание в л ei i достигает 50$ всех клеток.
Коктаятзое взашодейсшю иакрофагоз с да'^огшяд'Л кйвтка-ш, видедэпнш.ш от i.moit с гепатоглой 22, изучали в тесто "грозда-' образования" in vitro . Бмо показено, что'у waieil со сфзршшо-вакглмися опухолями (15 к 20- супа цосяо ипокуляцяа меток. Г9Н&-теш 22) уоитактаое взаимодействие мекро^агов с ташаиш било
ломанной U.U. UotipuBCKoü и др. (1965).
' Стагастичоску» обработку полученных цифровых данных проводили методом вариационной статистики с использованием критерия достоверности по Стьюденту-Фишеру (И.Л. Ойвин, I960; И.II. Ааш~ рин, A.A. ¡Воробьев, 11362). Достоверными различиями считали те, при которых значение Р было равно пли меньше ü,05 (Р 0,05).
OCHUiiiiiE РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЩШАШИ И ill ОЕСУЩШЕ
Провед&шше исследования позволили eJopi.;„ даровать и представить для запиты следуюцне положения, отраяьшщае основное со~ деркапие работи.
I. Иммунологическая недостаточность при онухоновом росте является результатом нарулешц в основных этажа мюгунопоэза -процессов миграции, пролатерац:;;:, дпф|орвишровки и кооперативного взаимодействия различных клеток щл.рлшой систем.
В многочисленных работах показано, что у оксщымштшшх животных с перевитыми и шшуцпров&нныш; х^шчэскимп агентами опухолями наблюдается подавлений iii/siyuiioro огьета (S fc jei-nword , 1966; Б. Ботев и др., 1972; Baldwin et ol. , 1073; Л.В. Якмш~ КО, 1975; P.M. Хаитов, I97S; Okuda et al., IS62} IIat;j et ol. , 1985). Если при химическом канцерогенеза подавленно ш.ацуаиого • ответа на начальной стадии связано о пш.уносупрессивним действием самих канцерогенов (ötjermvärd , 13<>ö; «.А, Умансклй, 1975), то в терминальной отадка и, при перевитых опухолях ~ с пымуносу-прессивнын влиянием опухолевых антигенов и супрессоршш выцуно-регуляторным фактором, выделяемым опухолевым клеткапя (1*и1ш<м , Roth, 1985).
Результаты наших опытов по изучении игл.©иного ответа ьивот-них при опухолевой рейте полностью совпадают с ииторатурниш дан ныш. Так, количество АОК в селезенках иммунизированных ЭБ шлеи в различные сроки опыта по отношении к контролю составило: при ЩТ канцерогенезе 16,0-68,6; при Д!ЖА канцерогенезе 1,2-5,2; при перевивке MX-Il'y мышей C57BI/6 47,0-60,5, а у мшей (CBAxC57i3/6) Fj 33,6-66,0; при перевивке генатош 22 у мшыи СЗКА 17,8-77,1/$ (см. рис.).
Снижение способности клеток селезенки нш;ии о опухолями к антителообразованию било продемонстрировано п на шдевп адоитив-
а
/ли поело гндуктши ти кчокулчияи ГЦ - УлТ ЕЗ - №-П у иксе!! СП7В1/6
П - £'ГЛ ИЗ - ¡К-П у юте!» (СВАхС57В1/б)Г-
(4:1 - гепяго-п Г.2
Дчн переноса клеток сепезетги
Влнчнке спузюязпого роста ня ш^яо ДОК п селозе:ют эт.погнгк при га нгыуниэации ЗБ (а) и при ядоптишом
гл-уип'.^то (б), % к коетрокв.
SO
иммунного ответа реципиентов, получавших вместе с ЭБ клетки селезенки пшериммунвзйроБанных сингешшх доноров (индуцированных ЭБ Т-супрессоров). Еило установлено, что у обработанных ДДЕА мышей линии СЗА до 30-го дня посла индукции опухоли супрессивной активность клеток селезенки вообще не проявлялась, что такке мо-¡кат быть связано с супрессивным влиянием данного канцерогена на все клетки, в том числе и на Т-еуарессоры. Действительно, именно при ДМБА канцерогенезе отмечалось наиболее сильное подавление и АОК. Однако это обстоятельство ыокет бить связано с тем, что эффект Т-супрессоров в отличие от аффекта Т-хелчеров имеет не лилейную, а пороговую зависимость от их количества, иначе говоря, юс тормозящее 'влияние не проявляется до тех пор, пока число Т-супрессоров не достигнет пороговой величины (Б.Д. Брондз, 1987). На стадии созревания и носителъства опухолевой ткани (60 и 120 дни) клетки селезенка подопытных юшотных оказывали супрессивный в$фокт на иммунный ответ реципиентов, однако в меньшей степени, чем клетки патентных хшкотных. Аналогичные результата били получены С.А, Кусмаруевш (IS8S) при ДЛБА индуцированном канцерогенезе у мышей линии C573I/S.
У Ktujsil C57i!l/G и (CBAxC57Bl/£) fj с перевитой саркомой ИХ-II эффект супрессии проявляйся ужа на 2-е сутки после инокуляции опухолевых клеток, который постепенно нарастал по мере прогресса-рования опухолевой ткани.
Полученные данные убедительно свидетельствуют о том, что при новообразованиях в организме происходит активация клеток-су-црессоров Т-линии диффйршцировки, и их индукции связана именно с антигенами опухолевых клеток. Показано, что клвиси-сулрессоры в организме реципиентов после перевивки опухоли появляются уже чареа 16 часов (Kirchuer et ai., 1975), через *24 часа и на 5-й день (i'ujinioto et el. , 1976; Argyris , 1978).
Показано, что Т-гсупрессоры, в свою очередь, находятся под контролем других идаунорегулирувщдх клеток-коятрсупрессоров (С.С, Гамбарсв, 1979, 1980; Cerahon ot nl.; 1981). Одна из отличительных черт Т-супреасороо от гсошрсупреосоров состоит в том, что парша активируются низкой или высокой дозой антигена, а контр-суярессоры ~ прогдакуточной (Green et al, 1961). Клетки лимфатическое узлов родительской линяя, трансплантированные в организм " гибридов шесте с клетками селезенки за неделю до ах шпмуниза-цаи ЭБ, в зависимости от дозн либо отменяют супрессивны!; эффект
* - t
тигенами, но и потерей части лимфоцитов рецепторов в связи с более глубокими нарушениями в их йупкции, в частности, метаболических процессов и биосинтеза бе.таз.
Известно, что становление иммунного ответа зависит от отдельных этапов иммунопооза -. миграции гемопоэтических стволовых клеток, Т- и В-лимфоцитов, кооперативного взаимодействия различных клеток иммунной системы (liossal et el., 1968} tilller , Mitchell , ■1969; P.B, Петров, 1970; P.iM. Хаитов, 1972, 1975; У.А. Арлпов я др., 1975; К.Г. Уразметов, 1983; 11.Д. Уразметова, 1987), Поскольку было установлено резкое сяикение шатунного ответа животных с' опухолями мы попытались проанализировать влияние опухолевого роста в динамике на отдельные этапы иммунопооза.
Было показано, что у обработанных 'ЛХТ милей в латентный период опухолеобразования (10-45 дни) наблюдается усиление (процент стимуляции в пределах 16,0-189,2), а у обработанных ДМВА мышей (15-60 дни) подавление миграции кроветворных стволовых клеток (процент пнгибицяи в пределах 61,7-78,6). При этом происходит на только количественное изменение выброса кроветворных стволовых клеток из костного мозга, но и их-пролйферативной активности. Так, при переносе клеток костного мозга облученным в летальной дозе сингеиным реципиентам в их селезенках при ЖГ канцерогенезе обнаруживалось больше (на 15-11 день процент стимуляции 63,6), а при .ЩЖА. канцерогенеза - меньше колоний (процент ингиби-ции в сроки 15-90 дни в пределах 23,6-53,6), чем при переносе клеток костного мозга ингактных животных.
У мыаей с образ оравшимися опухолями миграция гемопоэтических стволовых клеток и их иролиферативная активность при МХТ канцерогенезе были достоверно снижены (соответственно процент ингябицш на 120-й день 62,4 и на 65-й день 13,4), а при ДМБА канцерогенезе усилены (на 120-й день процент стимуляции соотватственно более 150 л 149,6).
Усиление шграции кроветворных стволовых клеток было показано я в опытах с перепитой саркомой MX-IjU Так, в селезенках милей C57BI/6, подвергнутых облучения на 2-е н 5-е сутки после инокуляции опухолевых клеток, обнаруживалось.при какроучете соответственно в 1,8 и 1,7 раза, а при'мякроучете - в 1,6.к 1,8 раза боль-ае колоний, чем в контроле. Причем увеличение числа коложи! происходило з большей степени из-за колоний ври^оидаого, чем грану-
лрцвтариого чипов (возрастание отаавеяия Э/Г соответственно до 2,20 и против 1,16 в контроле). • '
У ¡.ш:„зл С5751/6 с перевитой саркомой Ж-П колониеобрЕоую-щая споссйюсть ¡слеток костного- мозга ка 2~8 сутки посла инокуляции опухолевых клеток была усилена (в 2,2-1,7 раза), а у мшен (СНЛхС5?и1/6) — подавлена (в 1,3-1,7 раза) с восстановлением до уровня контроля к концу опыта у обоих видов животных*
' Способность стволовых клеток селезенки формировать колонии у мышеи С57.В1/6 постепенно снижалась но мере роста опухолевой ткали (на 14-е сутки - в 1,6 раза)', а у шаей (С£АхС5?В1/6) ^ колебалась на уровне контроля.
Способность стволовых клеток периферической крови форшро-вать колонии у шаей С57В1/0 постепенно возрастала по море роста опухоли (на В-е сутки в 1,8 раза), затем снижалась до уровня контроля, а у мышей (СШхС57п1/6) отмечалось незначительное повышенно-в конце эксперимента»
Необходимо отметить, что'изменение общего числа колоний б селезенках реципиентов1 независимо от вида стволовых клеток (костного шага, селезенки и периферической щрови) происходило в основном. за счет эритроидных и- гранулоцитарных типов, причем прирост первых преобладал над вторим. Это особенно ярко проявлялось в отношении стволовых элементов селезенки - отношение 3/Г у мышей С57В1/6 возрастало до 4,21 против 3,57, а у имен (СМх057В 1/6) - до 5,38 против 2,84 в контроле. Следовательно, опухолевой процесс меняет направление дифференцировки стволовш: элементов в сторону эритропоэза. Это кокет быть'связано с влиянием антигенов опухолевой ткани как непосредственно на стволовые эло~ 1 менты, тале и на их микроокружоние.
Известно, что колонии- в селезенках у облученных в летальной ■ дозе реципиентов формируются исключительно за счет осевших в них трансплантированных стволовых элементов (экзогенные КОЕ), а у облученных в летальной деза при экранировании участка костного мозга хивотных - за счет мигрировавших в селезенку стволовых элементов костного мозга (эндогенные КОЕ). При облучении в сублетальной дозе 6,5 Гр) в селезенках шшей также формируются колония, Образуется ли они за счет местных, селезеночных стволовых элементов или в этом принимают участие и стволовых элементы костного мозга, сохранившиеся при сублетальном облучении.
В специально поставленных опытах с использованием облучен-
шх з детальней дозе Парабшнтоз (СВЛхСВЛГоТб), а так'~п о трансплантацией клеток костного мозга «ушей CI3ATGTG яеоблучгшшч д otí-лучзшшм з сублеталъяои дозе роципиентпч СБА при цитсгзнетическом анализе колонии бил получен однозначный ответ, что при сублетальном облучении КОЕ в селезенках клюют исключительно мэстноз, селезеночное происхождение.
При изучении влияния перевитых опухолей MX-II на эндогешюэ клонирование было установлено, что у мыией C57BI/6 наблюдалось резкое увеличение числа колоний в селезенках до 8 суток после инокуляции опухолевых клеток (в 3,8-5,7 раза) с последующим их подавлением (на 14 сутки в 4,1 раза). У мышей (CBAxC57BI/6) Fj эндогенное клонирование было стимулировано во все сроки исследования (в 6,6-9,4 раза). Необходимо отметить, что у шиеи C57BI/6 увеличение числа колоний происходило в основном за счет эрптроид-пого типа, а у /жшей (CBAxC57BI/6) £¡- за счет увеличения колоний всех типов, хотя и в этом случае преобладал прирост колоний эри-тровдяого типа,
Таким образом, исследования покааачи, что независимо от генезиса опухолевой рост вызгаает выра-ейяые нарушения в процессах миграция, пролиферации л дифференцировки кроветворных стволовых элементов. Эти нарушения выражались в стимуляции выброса кроветворных стволовых клеток из костного мозга и пролиферативной активности,. которые в конечном итоге могут привести к истощенно . костного мозга, а такте в изменении направления ди<1<1еренцировки стволовых элементов (особенно селезенки) в сторону эратропоэза.
Обнаруженные отличия в исследуемых показателях, видимо, обусловлены как определенными свойствами самих канцерогенов, так п степенью антксавдойГКчуяероцпостз) инициированных и перевитых опухолей конкретно для данного вида животных.
Важным этапом дммунопоэза являстся миграция В-лимфоцитов из костного мозга в периферические лш^оаднне органы (амоц » Hich-ter , 1969; Brshla , Osreond , 1970; Botó еЛ al. , 1973; Sprent, i'ilier , 1974; P.U. Хаитов, 2975; К.Г. /разметов, IS3I).
Проведенные исследования доказали, что у обработанных МХТ швей миграция В-нлеток из костного козга снижена (процент идги-биции в пределах 66,3-36,8), причел: в лахэнтшй период в большей степени, чем в период опухоленосательства. У мышей, обработанных ДЦБА, чем Ш„Т, миграция З-клезок была подавлена сильнее (процент ишгибиадш в пределах 95,1-78,5), причем в латентный период также
в большей степени.
При нормальном лвддфопоэзе î-клетки постоянно мигрируют из тимуса и расселяются в Т-эонах периферических лимфоидных органов (Weieaman ,. I9S7; Engeset , SchowXey , 1968; Parrott , de Souea, 1971),
Результаты нашрх исследований показали, что. миграция Т-дшм-фоцлтов из тонуса как при 1ЯТ, так и Л'*1БА канцерогенезе была ш-гибпрована, причем в последнем случае в большей степени. У обработанных Ж1 животных процент ингибиции миграции Т-клаток колебался в пределах 20,7-47,0, а у обработанных- ДЖА мышей - 45,4-. S6,4.
Такиы образом, полученные конкретные данные позволяют полагать, что одной из причин нарушенного шлмунопоэза при химическом канцерогенеза является торыокенке расселения В- и Т~лимфоцитов из центральных в периферические лимфовдша органы, в частности, в селезенку. Действительно, при ИБА канцерогенезе обнаруживалось более выраженное угнетение шграШш В- и Г~лимроцитов, а так&е более назкий шллунный ответ, чем при-ЖГ канцерогенезе. Следовательно, променивается прямая зависимость высоты ш.аунцо-го ответа от степени угнетения миграции à- и Т-лиыфоцитов,
Одним из важнейших этапов иг.ьгунопоэза является кооперативное взаимодействие Т- и B-лимфоцитов (Hill er , Mitchell, 1969; -Claaan , Chaperoa ,'1969; P.B. Петров, Ï97Û; И Л. Чертков, A.B. Фрвденштейн, IS72). Показано, что угнетение кооперации Т- и В-клеток наблюдается и при опухолевом росте, возникшем спонтанно или при перешвка злокачественных клеток (P.M. Хаитов, 19-75; KhBitoV et el., 1976; А.Ш. Норимов а др., 1976).
■ Наши исследования показали, что при канцерогенезе, вызванном 1ЛХТ и даБА, кооперативный эффект Г- и В-кЛеток.при реализации иммунного ответа на ЭБ подавлен как в латентный период, так и на стадии опухоленоситеяьства. Так, у обрабогалных МХГ мышей кооперативный аффект Т~ и В-лимфоцитов в различные сроки после индукции опухояеобразованид был ингабйрован в 1,3-10,5 раза, у обработанных JMEA »¡квотных - в 1,7-3,9 раза. У мышей C57BI/6 с перевитой саркомой Ж-П кооперативный эффект Т- и В-лимфощиов в различные сроки после инокуляции опухолевых клеток был подавлен в 6,7-11,0, а у шаей (СйАхС5731/б) fj - в 4,7-10,4 раза.
Интересно, что у обработанных ЖТ мышей, а также teiefi с
перевитыми опухолями кооперативный эффект Т- и В-клоток был полностью отменен. Действительно, при гериюоэ смеси Т- к В-клоток от таких яивотиых рецшшеитн давали такой по или доже более низкий отпет, чем при переносе только В-клето". У обработанных ко Д--1БА шзей кооперация Т- и В-кдеток била сохранена, хотя и в меньшей стевоия, чем у интактних животных.
У мдшеи различают tokeq Tj- и Т2-клэтки. Показано, что Tj-к сетки ироявляят hcrainß Inatinot в отношении селезенки, коротко-ЮГОУСКО, НО способна К рОЦПркулЯЦИИ, Тр-нлетхн ПКЖБЯЯЭТ hemi;:.: inetinet в отношении лимфатических узлов, долгокиву^» активно рециркулируат, активны в РТПХ (üntt , Cnntor , I97X; Tjrjelanr , Anofsky, 1973; Я.Г. Арцимович, H.H. Настоящая, I37G). Установлено, что развитие РТПХ требует кооперативного взаимодействия Tj~ и Т2-клеток, при этом Т2~клетки выполняют киллерхгуя, а т-рклотки - аигогификаторную роль, т.е. усиливают киллзрннй эффект Tq-fjig-ток (Cantor f Asofзку, 1970; Blongren. , 1973; Tigelcor et~al. , 1075; CeC. Гамбаров и др., 1262)..
Наш на примере Д'ХБА канцерогенеза был изучен эффект кооперации Tj- и Tg-xweTOK при развитии локальной фор:,а РТПХ в лимфатических узлах шлей (СУАх.С57В1/6) Pj при переносе км клеток ни-!Uf?ii родительского генотипа С ЗА, Результаты этих исследсваш'Л показали, что на латентной стадии опухолеббразевания о^окт кооперации и Т2~ метоп бил инги&грован по отноиению к контроля в, 1,8-2,2 раза, а в стадии оггухолеиоситвльстЕд (€0-120 дня) практически но бил нарушен, хотя и отмечаюсь некоторое скияэиио оф^ок-та. При этом ни в один срок исследования функциональная активность Tj— и Tg-клеток сама по себо на была иарушона.
.Активное уччеткэ макрофагов в становлении иммунного ответа, в том числе я при опухолевом росте, показано г.ногл.и исследователя.::? (P.B. Петров, I97G; Xeanerd et al. , 1084; й,/.!, Береадея и ,7р., 19Cö; В.¡5. Hoptoob, IS8G). По даяннм Holden ot п1/Г37б), Hussel et al.(1977), «ood , Soliahon (1978) макрофаги являются ссждошш .клотклгл! сргйкйзш., шфяльтрхфувщнш ткань,
я их .содержание в лед достигает 50$ всех клеток.
Контактное взаимодействие макрофагов с л::г,к|шдгщ:щ клетками, выделенными or ttütreii с гепатоыой 22, поучав! в 70СТ0 "грозде-' образования" in vitro . Было показано, что*у дааей со с$ор?.яро-ваввгишея овузеоляки (15 к 20 сутзи восле шокуляцяя ллохок. гот-TCf.'Ji 22) контактное ззаииодойотвие какрофегоз с тзяттодя било
подавлено соответственно в 8,4 и 6,3 раза, а с клетками лимфатических узлов - в 4,6 н 5,9 раза. При анализе активности макрофагов и лдмфовдкых клеток шаей с опухолями при совместном культивировании с соответотвувщкш клетками инхактных животных было выявлено, что б процессе роста опухолевой ткани (до 8 суток) спосо; ность вступать в контактное взаимодействие как макрофагов, так п клеток тимуса и лимфатических узлов' поЕшена, а на терминальной стадии подавлена» Причем независимо от сроков исследования ь большей степени была нарушена функциональная активность макрофагов, летам лкмфоидных клеток.
2. Рост опухолевой ткани в организме происходит на фоне выраженных нарушений функциональной активности различных суб-копуляду.Г: клеток и продукции цктоккнов мятпюй скстшш.
В многочисленных экспериментах доказано, что популяции Ти В-клеток весьма гетерогешш и ешючшт несколько суОпопуляцкй, отличающихся по ряду поверхностных маркеров. Неоднородность этих клеток обусловлена множеством выполняемых ими функций, кавдая из которых реализуется с помощь» специальных механизмов (tiller , 1972,. 1375; Gsrahon , 1975; Р.В. Петров, 197 b, 1976; Р.И. Хаитов, 1975; Б.Д. Брондз, Ш7; M.G. Бляхер, IS87).
Б своих исследованиях ш попытались проанализировать влияние опухолевого роста различного генезиса на функциональное состояние некоторых субпоцуляцкй' Т- и В-лхний дифференцкроькк клеток.
Как было показано, при опухолевом росте наблюдается угнетение кооперативного взаимодействия Т-'е Б-клеток, которое шкет быть следствием функционального поракения клеток или снижения Х!Х количества. Возник вопрос, наруоенке Т- и В-взакмодействия происходит за счет дефектности обеих популяций ьли ке только одной из них? Для ответа на этот вопрос были проведены эксперимента, в которых нормальные клетки кнтактних хквотных смешивали с клетками квотянх с опухолями и трансплантировали сингенным реципиентам, облученным в летальной доза. Результаты этих исследований показали, что:как у тавотных, обработанных МХТ, так и у ыышей С57В1?6 с (СМхС^?В1/6) Fj с перевитой, саркомой MX-II функция'Т-клеток, ешолнящех ь данной системе хелперную роль, резко подавлена независимо от стадии развития опухолевой ткана. Способность • Ь-прйдщественнкков АОК вступать в'кооперативное взаимодействие на латентной стадии была не изменена .(МЕГ канцерогенез) или по«
Павлома в позначительней степени (перепитые опухоли), а на стадии оиухоленоситольства оказалась гакжо лодаашшоЗ, однако о слен'.;;:е-'1 степени,, чеч функция Г-холцеров, Следовательно, хэлпор-нат функция Т-клэток лрп опухолевом росте страдает п большой степени независимо от стадия процесса, чем функция Б-нродзэствзнш!-ков ДОК, до|'-зкгность которых в основном проявляется на стадии опухолемосптольства, 3 то гд врем есть данные, что В-клетки по-ражавтея раньаэ, чом Т-клетка, например, у .vicieii с перевитой опухолью Са-755 (Khnitev ct r.l., I97G), Видимо, степень поражения 7- и Г-клеток зависит от антлгенпасти ц злокачественности тоЗ • или иной перевитой опухоли для данного конкретного вида еивотных.
Известно, что важную роль в регуляции йммуш^х реакций nv-рзют Т-клетки-супрессоры, которые оказывают антигенспсдлфпческоэ н антигонноспэци^ичэскоэ угнэтам'дее действие (ишег , 1972,13755 Kntz, Bcimoerott, 1972; Oerahon , 1975; I'nda et nl., 1975; Argy-ria, 1978; Aknsft et nl, 1982; Pope, 1985; Korio et nl.» 1983; Tcge et rd., 1900).
Б своих исследованиях об активности носпеццфзчоских Т~сутн рсссоров судили по количеству АОК в солезежахдг.мушгзировашшх ЭБ реципиентов (CBAxC57BI/6) Pj при трансплантации пи клеток селезенки родительского генотипа СВА или C57BI/G, Было выявлено, что при MKT канцерогенез я. на латентной стадии (через 10-15 дней после введения МХТ) происходит некоторое угнетение, а затем усиленно активности Т-'супрессоров, что выражалось в более сильном подавлении иммунного ответа реципиентов по сравнению о клетками селезенки штактних кивотних. Такое различие в изменении активности Т-супрессоров, по-видимому, связано, с тем, что в ранние сроки эти клетки также подвергаются ингпбирующецу действию MKT, й в более позднио сроки происходит их активация под влиянием возникающих опухолевых антигенов. Действительно, в опытах с переносом мышам (CiAxC57BI/6) Pj клеток имей C57BI/6 с перевитой саркомой AIX-II, когда опухолевые длетдн в организме доноров присутствуют с момента перевивки, уже с 2-х суток отмечалась активация Т-супреосоров, которая постепенно уаияявшгась по иэро роста опухолевой ткани. Неспоцифическое угнетение иммунного ответа при опухолевой росте показано радом авторов (С„С. Гамйаров и др., 1975; Klmitov etnl, I97S;'loshinurn et nl'. , 1988).
Об активности специфических Т-супрессоров судили по высоте
иммунного ответа реципиентов, получаьиих вместо с ЭБ клочки селезенки шперимиунизйрованных сшгешых доноров (индуцированных ЭБ Т-супрессоров), Еило установлено, что у обработанных &МБА. мышей. линии СЗА до 30~го дня после индукции опухоли супрессивная активность клеток селезенки вообще не проявлялась, что также мо~ аат быть связано с супрессавнш влиянием данного кенцерогеаа аа все клетки, в том числа и на Т-сунреосорц. Действительно, именно при Д'ЛЕА канцерогенезе отмечалось наиболее сальное подавление и АОК. Однако это обстоятельство мокот бить связано с тем, что факт Т-супрассоров в отличие от эффекта Т-хелчеров имеет не линейную, а пороговую зависимость от их количества, иначе говоря, их тормозящее 'влияние не проявляется до тех пор, пока число Т~ супроссоров не достигнет пороговой величины (Б.Д. Брондэ, 1987). На стадии созревания и носительства опухолевой ткани (60 и 120 дни) клетки селезенки подопытных мтотных оказывали суврессивиЕЙ аффект на иммунный ответ реципионтов, однако в меньшей степени, чаи клетки интактных швотных. Аналогичные результаты были получены С.А« Кусыаруевш! (1983) при .ДДБА штудированном канцерогенезе у мышей линии С57В1/Б.
У шшей 067^1/6 и (СВАхС57В1/5) с перевитой саркомой 1.1Х-II эффект супрессии проявлялся уко на 2-е сутки после инокуляции овухолевах клеток, которш постепенно нарастал но маре прогресси-Р'оешия опухолевой ткани.
Полученные данные убедительно свидетельствуют о том, что при новообразованиях в организме происходит активации клеток-су-прессоров Г~линни диффбрвнцнровки, и их индукция связана именно с антигенами опухолевых клеток. Показано, что клеткн-супрессоры в организме реципиентов после перевивки опухоли появляются уже чераа 16 часов (£1го1шег ег е1., 1975), через часа и на 5-й день (Яи^тоЪ а1. , 1976; АгеуПе , 1978).
Показано, что Т-супрессоры, в свою очередь, находятся под контролем других ¡¡ш.^норбгулк^уицг.х клеток-контрсупрассоров {С.С, Гамбаров, 1979, 1980; ОегаЬоп оЬ в1.; 1981). Одна из отличительных черт Т-супрассоров от контрсупрессоров состоит в том, что первые активируются низкой или высокой дозой антигена, а коятр-супрессорн - промецуточной (йгееп вt а1, 1961). Клетка лимфатических узлов родительской лиши, .трансплантированные в организм ' гибридов шесте с клетка:,иг селезенки за неделю до ах иммуниаа---.ции ЭБ, в зависимости от дозн либо отменяют оуяресснвиы'ч эф|<жт
клеток селезенки (контрсупрессоры), либо усиливают его (амгошфай-орн).
Нами было показано, что клетки лимфатических узлов имей С57В1/6 с саркомой МХ-И отменяли супрессивный эффект клеток селезенки интактных мпшей в той не мере, что и клетки лимфатических узлов интактных мышей. Однако, если в качестве супрессоров выступают клетки селезенки мышей - опухоленосителей, то контрсупрессивный эффект меток лимфатических узлов (интактных шшеЗ и мышей-опухоленосителей) не проявлялся. Можно предположить, что при опухолевом процессе клетки-супрессоры, по-видимому, теряют способность воспринимать сигналы от других клеток, в частности, от контр-сунрэссоров. Однако данный эффект может быть связан с восстановлением функции Т-хелперов, ингибированных Т-супрессорами, у интактных штотных и отсутствием такового у мншей-опухоленоситэлей, так как способность контролировать функцию Т-супрессоров связана не с прямым влиянием контрсупрессоров на них, а с защитой Т-хелперов от супрессивного влияния Т-клеток (Б.Д. Брондз, 1987).
Известно, что в регуляции иммунного ответа принимают участие и субпопуляции В-лимфоцитов, в частности, В-супрессоры (КаЪг еЬ а1., 1974; 2 ешь а! в е* а1., 1976; Р.В. Петров и др., 1977; Р.?.!. Хаитов и др., 1977; Б.Б. 1укс и др., 1978). Предварительная обработка клеток костного мозга анти-1е-сывороткой и Комплементов или • анти-ывЬА -сывороткой и коштлементом отменяют эффект супрессии. Это доказывает, что супрессия иммунного ответа зависит именно от В-клеток.
Наши исследования показали, что перенос клеток лимфатических узлов (В-сулроссоров) интактных сингенкых доноров реципиентам при их иммунизации ЭБ приводит к супрессии иммунного ответа последних. Перенос клеток лимфатических узлов кншей с опухолями, индуцированными ЖТ или Д'.ГБА, а такие мышей С57В1/6 и (СВАхС57В1/6) с перевитыми опухолями сингешшм реципиентам при их иммунизации ЭБ также приводит к супрессии иммунного ответа последних. Причем по сравнении с контролем (клетки лимфатических узлов интактных мышей) эффект супрессии был достоверно более выражен при ЖГ канцерогенезе с 30-го, ДЖА канцерогенеза с 60-го дня посла индукции опухоли, а у мышей с перевитыми опухолями - в тершналь-ной стадии опухоленоситольства. Следовательно, по мера развития опухолевой ткани происходит усиление активности В-супрессоров.
¡¡-клеточное происхождение супрессивных клеток в данной зкс-
лэрпменташшй система такхз доказано опктя с переносом фрак-цнД Ï- и Е-лакфоциов, полученных разными «эгидами (Р,В. Петров и др., 1976; .А,Л. Батырбеков, 1977). Обработка доноров клаток л&.лфатическлх узлоз цккяафзсфамщоы в дозе, избирательно злшиш-рущзй Б-клзтки, оменязг эффект супрессия.
Глллерную активность Т-лиыфоцитоа определяли по способности клеток лг!л?|атических узлоз шией родительского генотипа СБА инак-тивлровать кроветворше кологии в селезенке облученных, в сублз-телькой доза реципиентов (CBAxC57BI/6) Fj- (Р.В. Петров и др., 1970). Е 3'ioii системе инактивация гемопоэтнческих колоний опосредуется Т-каплерныма клетками 1Р.В, Петров в др., 1976).
Надш исследования показали, что на латентной стадии развития опухоли кяллинг-эффек? ï-клеюк был либо саикен (15 день при ММ' канцерогенезе), либо вообще из проявлялся (I& и 30 дни при Д.1БА канцерогенезе), что ыозет быть связано с супрессивным аффектом самих канцерогенов. В дальнейшем происходило восстановление кил-лерной активности клеток лимфатических узлов, практически до уровня контроля, Следова1ельно, мокко.заключить, что в период опу-холеноситедьства кшшнг-зфф;ект, Т-клеток либо не нарушав, либо снижен незначительно. Наин результаты совпадают с данными P.M. Аачтова в др. (1975), показавших, что и при перевитых опухолях функция Т-кпллеров не нарушается. ;
Большею роль в. падите организма на ранних стадиях развития опухолей играю? естественные киллеры (НО - уникальная популяция крупных гранулярных лимфоцитов, осуществляющая "первую лини» защите" (Baldííin , 1977; Б.Б. Фуко, 1983; Lotzovz , 1984), а на поздних стадиях и наличии метастазов активность LK снижена (Р.И. Красий à др., 1985; Boros et el. , 1987)..
. Активность Ж в организме регулируется семейством иммуноре-гуляторшх цитокшов, в частности МЛ-I, интерфероном (Е.Г.
Славина, IS84; Domzig et al., 1934; Boineo , 1986;Lnngo et ni. 1987). . •
Наши исследования показали, что на латентной стадии MIT канцерогенеза активность Ш, определенная в ыембранотоксическом тесте in vitro , повышена, а при ДЦБА канцерогенезе - снижена, что может быть следствием токсического влияния последнего на КК. В период формирования, опухоли (45-30 дна) незагшелмо от вада канцерогенеза активность № была, повуиеяа, а в период опуу,олепоси~ тельства - снижена, причем при ü'1L;A канцерогенезе в больиеН сте-
пени (65,7$ к уровню контроля). Однако при определении активности iuK на уровне единичных клеток при №3 канцерогенезе было установлено, что она независимо от стаяш заоолевания снижена. Гак, процент инглбиции всей популяции ЕК колебался в пределах 17,5-' 52,5, а зрелых Hi - в пределах 15,0—й,Б%.
Hosho предположить, что выявленная в кеибрвнотоксаческоч тесте погашенная активность Ш в пресопухолеваЦ период при уменьшении -их числа коже« бить следствием компенсатораого повышения Р--циклкнга ЪК. В.Н. i-зль и др. (I&S9) показала, что снижение ЕК т-тивности у инией OSHA с перевитой гепатоыой ¿2 и индуцированной Ш1 опухолью являемся результатом кооперативного эффекта - оупрэо-сивного влияния на LH Т-кдетон и макрофагов.
Показано, что канцерогенез, вызванный хккачеснш! arcaiaai, оказывает влияние также на продукций интерлейхана-! (Ш1-1) в ин-терлейкиаа-й (MJL-ü). Так, выработка йЛ-I на 7-й день после индукции опухолеобразованпя была ингпбирована, а на 30-й день - резко стимулирована (при ßilfcA канцерогенезе 415, при I.ÜT канцерогенезе 3505i к контролю). В период одухолеяосительства уровень Шь! у обработанных IJXT животных была подавлена (60$), а у обработанных' ДС'ЛЬА киботянх оказался на уровне контроля.
Продукция Ш-х при ГШ" канцерогенеае на 15-й день после индукции опухолеобразоьаакя была повышена (1£7% к. контролю)',- а с 60-го дня до конца эксперимента (ь>0-й день) подавлена (57$). При ЖКА кшщерогенезе выработка i'üi-г сила cisuseaa с 45-го дня, при это;.! с-гс гуроьень колебался в пределах 57-66$ к контролю.
Показано, что при IШ' и ДЕА канцерогенезе киграцая лейкоцитов периферической кроьи ыышеп in vitro подавлена, причем в боль-пей степени на латентной стадии (15-30 дни), чем в период олухо-леносительства. Можно предположить, что при канцерогенезе происходит сенсибилизация вновь вознилаэташ антыгеНЕ'лп Г-клетон, которые вырабатывает фактор, йнгнбируе'цяЙ шградаи лейкоцитов. Причем внесение в систему in vitro митогена Кон А на латентной стадий оггухолгобразования усиливало эффект Т-клегок. Интересно, в период форнироганзд опухолевой ткани (60-й день) в сыьорохке крова газетных определялся фактор, сгимулир/гаий кшрадар лейкоцитов. Ecsmosho, i» »ivo этот ф.актор блокирует рецепторы па 'Г-клетках, Тем с амии, лашая их.способности нормально.функцконирова^ь.
lernt образом, проведенные воследованая показали, что процесс индукции, формирования и период оаухоленосшелвства в oprs-
низме приводит к выраженным нарушениям этапов шмунопоэза, функциональной активности различных субпопуляций клеток и продукции цнтокшюв иммунной системы (см. табл.). '
Следовательно, состояние иммунологической недостаточности, развивающееся при опухолевом'росте, обусловлено нарушением множества факторов, сложное взаимодействие которых обеспечиваем нормальное функционирование системы иммунитета и организма в целом.
3«, |Гт)оиосс.опухопеебразрвши-'я гчзыпает выраженные сдвиге в клеточном соотагз л г? ;сор тык х органов, являющихся структурно*' основой -спстемч пммупп^ета.
ЬМопши исследователями показано,-что индуцированные химическими агентами или перевитые опухоли в клеточном составе лямфоад-нах органов пшотнух вызывают сдвиги, причем они выявляется как в тимусе, так и в периферических органах - селезенке и лимфатических узлах (Barony et oi, 1976; Т.Н. Селезнева, Ю.Д. Гриневпч,
■ 1980; ¿es ; Rosse , 1981j B.B. Яковлева и др., 1982; И.Н. Ковальская, В.М, Бухман, IS82; Я.И, Балянчнкова г. др., 1987).
Наши исследования, проведенные на примере перевитых асцитной (АС 37) и солидной сарком 37'(СС 37), показали, что в клеточном репертуаре л&чфоиддаазс органов'происходят определенные изменения, вдраясеняость которых зависела от ¿ада перевиваемой опухоли. Так, . появление ретикулярных клеток в тимусе н лимфатических узлах отмечалось при перевивка СС 37, но не АС 37, Если в селезенке шшей с AG 37 прирост ретикулярных клеток, отмечался во все сроки, то у мышей с CG 37 - только на 6-й день опыта. Появление или увеличение общего количества плазматических клеток (плазмобласты, про-
■ плазмоцпты и плазыоцнты) отмечалось во всех органах при перевивке обоих опухолей, причем в большей степени при перевивке Iü 37, что, водима, связало со способностью этой опухоли к метастазяро-ванию, в том числе в в лиыфондяые органы.
В тимусе и лимфатических узлах (наиболее выраженяо) обнаруживалось увеличение общего числа молодых форм лимфощцшх клеток (лкмфобластоз и пролшфоцатсв) при снижения .кровяя зрелых лимфо-цатов, что вело к изленояв» соогцовешш клеток лимфоадно рада и сдвигу вх "влево11. В селезенке жв отмечалось снижение всех клеточ ли.\'4оздного ряда, причем сдвиг 1,елзво" гакке не обнаруживался. ■Уровень шюловднах клеток в больпей степени был повышен у шшей с перевитой CG 37. Ъ мЩоедных органах ыыаей с перевитой АС 37 вы-
Анализ оэдедгшх зтадов ыгкунодоэза и функциональной активности различных-шпудядий меток систеш иммунитета ярк опухолевом росте
иицща
Наименование зтадов-иьшунопээза и функции клеток
Канцерогенов : • Дереаитие опухоли
МХТ ; .ДйБА . уС57ВХ/6 'ВД-П у Г^ ¡Геягтсша 22
О
б
а
б
а.
: б
а
-2-1.1-1.1 5 _ :_ _6____7_
Инг Инг Инг Инг - Инг. ■ Инг Стим Инг Инг С там
Стим Инг Инг . Сейм Стим -Сиш С тт.! Инг Инг. Ст щ Стим На изм
. _8_ Инг
11яг
10_ _11 ИНг Инг
'Иммунный омет к ЭБ
Ашжтелагенез в, системе адоптивного иммунитета
Сдоаташше РОК Кммушшо РОК Муггрятя гамппоэтичаских стволовых юшток
■Проякфаративная адтовность гзюпоэтаяееткх столовых клеток КМ
ЕсссшйесатиБяая аетивдость гёмояоэтагеесдих стволовых клеток садеесики
.¡адогешюе кжшиераанае селезенки
Миградют 3-югеток из костного мозга
киграцкя Т-клсток из тимуса
Кооперация.Т- и Б-клеток
Способность Т-клеток вступать во взаимодействие с внтактнши З-клеткамд
Инг
. Стим
Инг ' Инг Инг Инг
Инг Инг Инг Инг Инг Инг Инг Инг Инг 'Инг Инг Не нзы Не изм Инг
Инг Инг
Инг Инг
Инг Инг
Инг Инг
Инг Инг Инг Инг
' Инг Стим Не изм Не изм Стим Стим
Инг Инг Инг Инг
1
а
а
9 : 10
.II
Способность В-клеток вступать во взаимодействие с иятаоткы-ш Х-клеакама
Взаимодействие Тг- и То-клеток
Взаимодействие макрофагов с тшоциталя ила клетками лимфатических узлов
Способность макрофагов вступать во взаимодействие с лшроцятзаш
Способность лим&ощггов всту-' пать во взаимодействие с макро&агагла
Суякцая неспедафетесках Х-суцреоооров
функция сяепи&аческих Т-суареосоров
Взаимодействие супоессоров я коцтрсупресссров
Сункдая В-супрессоров Стим
5уякцпя Т-кшшеррв Не изм
Естественные киллера Сиш
Продукция ИЛ-1 Стод
.Поодукция М-ь Незяач
сигм
Не Незная изм шг
Не изи
Ияг
Ияг Стен
Не нам
Незная
. инг
Нззна^з акт
Инг
Незаач
ИНГ
Кит
Ияг
Стш Сит Не изн Инг Инг Стим Инг ' Ствм Ияг Е1е изи
¿шйгдкина Т-клэток (фактор, угнетающий дигпалию лейкоцитов)___________
Примечание: а - латентная
Сгва
Стш
Инг
liar
Кат
Cm: Инг Стш
Ипг
,Стш Hs нем Нз кал ИНГ
Не ига
Инг
Стаи Схям ИЕГ
Сиш
О)
Негпач стж: .
Не Ее
CTEM '
Сж
Стш Инг Стен Ияг стадия, б - стадая опухолеаосдтельства, Инг - КЕгабидоя, Стим - стимуляция
Н7
являлись опухолевые клеит, оаносгаельное содершиис ко-горих л конце кипераиенга ссмакило в тйлусе 9,4',»; в селезенке - 21,0,2; з лс'.кгагпчоских узлах - 7,4%,
Мзг.екеиия в клеточном составе хкмфоацннх органов, по-видило-!'У, яиг-пася й^1унобполорачзокша сдвигами зсцшгдого хих-яера. од этом свадеуельскзует увеличение числа .'.¡пелоздшх д реишуллр-ш2 клэхок, 'коюрне б определенных условиях могуг дайререяцзрсе:.-»*-ся в накродггц (М.П. ПокрОЕСхеш « др., 19Е5; Л.К. Лгвеа, 1Э73), псзшзешю уровня «ододнх форм клеток ли^оадного ряда, которые проявляй? исскоз Ц'ГД в отношения. опухолевых клеток, особенно да раиш1Х стадиях ншунного ответа (г,'а1к1пааЬат/ , 1ШЗ; С.И, Буковская и др., 1885). Вотам»! е-Ь ей.(198?) показали, что В-ли.фоблсс-тн, но не покоящиеся В-клетка, хакйе обладают ДТ.Д в отпсг:са'т опухолевых клеток, В то кз г,ро;.;я црч шрпжеиной ялазиоаяегепаоц реич-или во всех л2»тойлйых органах иата исследования доказала резкое угнетение плпушюго ответа кквэтшх с опухаллги. Данное обстоятельство, по-грдсмому, связано с повреждение;,! клеток, о^мтезируп» егах 193 един ела, а илазкоцдац йогу? представлять клочка, сшгеаа-рувдие ?3-ечгигела, осуществляете епсЬепсегае^ ех'Гесг я способствующие интенсивному росту опухоли (К.Л. Гудим-Левксвич и др., 1975).
4. Коррекция яарупввних показателей скс?еш,,.^У^ета
отазизав» ?01Ж0аявч>е г-яготяяе на роб? и ряапнурэ опухмяыя уч;;;;.
Нрошрзойухолезув активность ряда препаратов и г-ЭДека .и но-.-бияировашюго прп^ензшьт оценивала по срока/, 1 возникновения опухолей у подовшш и у всех дивотшх, размерам опухолевой гк^яа в динамика ее развития у шеей, обработанных Шт. ймо показано, -по препараты отодвигали среда? время появления опухолей у всех :да~ вотшх и их гибель, а г атасе сникали средние размеры опухолей соответственно: Ш? в дозе 10-20 едЛ-лаь на 13,3 и 7,й дня, 7,4;ь; На -5 в дозе I иг/шпь - 0 и 1,7 дня, 31,7?} ЭД£ з доза 0,2 ил/ ишь при однократен введении - на 21,3 и 18,1 дня, и при двукратном введении - на '¿,0 п 6,2 дня,, причем размеры опухолей в перйом случае бнлк увеличены на 0,1, во взором - на 41,2$; комбинация ¡0 и ^о-Ь в тех ке дозах - на 19,2 и 27,2 дня, 32,-.$; БЦН а На-5 - на 7,2 и 6,2 дня, 15,5$; БЦД (двукратно) а н». -5 - на 10,3 а 14,8 дня, 28,3?.
!Ш канцерогенез на 120-3 день после инлукцим опухоли визы-
вал гибель 70$ животных. Флосулон в дозе 100 (иг/кг массы тела сникал ее до 31,2, тактивин в дозе 0,1 ад/мышь - до 60 и БЩ( -до 40$; комбинация твктивина и флосулона (6С$), БЦ1 и флосулона (70$) практически не меняла этот показатель.
На 120-Й день ЮТ вызывал опухолеобразование у всех мышей (100$). При применении флосулона этот показатель снижался до 62,5, тактивида - до 80, БЦЕ - до -80; комбинации БЦЖ и флосулона - до. 90 и тактивина и флосулона - до 90$.
Кроличья антисупрессорная сыворотка (КАСС) при введении в дозе 0,2 мл в день' и через два дня после инокуляции опухолевых клеток у мышей с перевитой асцитной саркомой 37 (АС 37) снижала процент животных с опухолями до 55,5 против 100% - в контроле, а накопление в брюшяай полости асцитической жидкости - на 60,4$. Препарат у мышей с перевитой солидной саркомой 37 (СС 37) процент животных с опухолями снижал до 58,3 против 88,0$ - в контроле, а размерь! опухолей - На 57,9$,
Анализ полученных дашшх показал, что все изученные наш. препараты обнаруживают в той ила иной степени выраженности противоопухолевую активность, из них наиболее активными оказались фло-сулон и КАСС, которые в дальнейшем.были изучены более подробно.
Оказалось, что флосулон у мнтрктных иммунизированных ЭБ животных в исследованной дозе в зависимости от схемы введения' (-5, -3, -2t 0, +2 дни в отношений иммунизации) подавляет иммунный ответ на 64,9; 45,9; 25,4 И 41,3$. Препарат ингибаровел миграцию В-клеток из костного мозга на 27,6; Т-клеток из тимуса - на 36,9; кооперативный эффект Т- и В-лимфоцитов на 42,4$, при втом функциональная активность В-предшественшков АОК была вдгибирована на 53,2; Т-хелперов - на 61,1$, флосулон полностью отменял активность специфических Т-супрессоров, но не влиял на активность ЕК. В то ss время препарат у мышей с МХГ канцерогенезом независимо от стадии заболевания полностью восстанавливал активность ЕК. Следовательно, противоопухолевая активность флосулона, по-видимому, реализуется в основном на уровне ЕК и Т-супрессоров,
КАСС в тимусе у интактных шией обуславливала появление ретикулярных а плазматических клеток всех степеней зрелости (плаз-ыобластн, проплазиоцатн и плазмоцитн) в основном в конце эксперимента (10 и 14 дни), увеличение числа лимф°бластов в 2,6-3,1, пролш4оцитов - в 1,7-2,9 раза при снижении уровня зрелых лимфоцитов - в 1,9-4,4 раза и шелоидных клеток в начале опыта. Лзма-
меток селезенки (контрсупрессоры), либо усиливают его (амплифай-еры).
Наш было показано, что клетки лимфатических узлов мышей .. C57BI/6 с саркомой Ж-П отменяли супрессивный эффект клеток селезенки интактшх шшей в той же мере, что и клетки.лимфатических узлов интактных мшей. Однако, если в качестве супрессоров выступают клетки селезенки мышей - опухоленосителей, то контрсупрессивный эффект клеток лимфатических узлов (интактных мышей и мшеи-опухоленосителей) не проявлялся. Мойно предположить, что при опухолевом процессе клатки-супрессоры, по-видимому, теряют способность воспринимать сигналы от других клеток, в частности, от контр-супрессоров. Однако данный эффект может быть связан с восстановлением функции Т-хелперов, ингибированных Т-супрессораш, у интактных животных и отсутствие« такового у мншей-опухоленосителей, так как способность контролировать (|ункцио Т-супрессоров связана не с прямым влиянием контрсупрессоров на ник, а с защитой Т-хелперов от супрессивного влияния Т-клеток (Б.Д. Бровдз, 1987).
Известно, что в регуляции иммунного ответа принимают участие и субпопуляции В-лимфоцитов, в частности, В-супрессоры (Katz et al., 1974; z embaí a et al., 1976; P.B, Петров и др., 1977; Р.¡Л. Хаитов и др., 1977; Б.Е. Зукс и др., 1978). Предварительная обработка клеток костного мозга анти-^в-сывороткой и Комплементов или антл-шхл -сывороткой и коыплекентоы отменяют эффект супрессии. Это доказывает, что супрессия иммунного ответа зависит именно от В-клетоя,
Наши исследования показали, что перенос клеток лимфатических узлов (В-судрессоров) интактяых сингеикых доноров реципиентам при их иммунизации ЭБ приводит к супрессии иммунного ответа,последних. Перенос клеток лимфатических узлов кыш ей с опухолями, индуцированным! Ш или Ш.1БА, а также кшцей C573I/6 и (CfiAxC57BI/6) fj с перевнтш.ш опухолями сингеанш реципиентам при их иммунизации ЭБ также приводит к супрессии иммунного ответа последних. Причем по сравнению с контролем (клетки лимфатических узлов интакт- ' них шшей) э<1<$ект супрессии был достоверно более выражен при МИ канцерогенезе с ЗО-го, ДЖА канцерогенезе с £0-го дня после индукции опухоли, а у мшей с перевитыми опухоли»,® - в терминальной стадии снухолеиоситольства. Следовательно, по мере развития опухолевой ткани происходит усиление активности В-супрессоров.
¡¿-клеточное происхождение супрессивных клеток в данной экс-
вотннх с; перевитой опухолью.
Таким образом, КЛО^ вызывает сдвиги в клеточном составе лиы-фоянных органов шшеИ с перевитыми опухолями, меняя направление дг4'|еренцирорки и степень пролиферации в них. Учитывая, что рети-кулярше клетки могут дифференцироваться в макрофаги, Сластше клетки оказывают цитотоксическое действие на опухолевие клетка, миелоиднне клетки принимают активное участие в иммунологических реакциях tU.II. Покровская и др., ШИЗ; В.К, Огреба и др., 1902; Толвока et si. , 1982; Walkingshcw , 1983; С.Н. Бчконокая И др., 1985), можно констатировать, что противоопухолевой эффект КАСС, кроме непосредственного янгиоирукщего влияния на Т-супрессора, обусловлен усилением клеточных факторов иммунитета.
Интересно, что нормашш кроличья сыворотка (ИКС) так.?е оказывала незначительное тормозящее влияние па рост опухолевом ткани. При анализе изменений в составе клеток лигфэщпшх органов нами сделан внеся о том, что противоопухолевой эффект ШЙ обусловлен усилением преимущественно гуморальных факторов иммунитета, морфологическим признаком' которых являлось повышение плазшклеточной реакции по сравнение с контролем (>-,.шт.чпе с опухолями). Однако, отчасти это макет бить следствием влишш! ИКС- непосредственно на опухолевые клейся, тазе itas она обладает нрот'шоопуходепоп активностью, специфичность которой аналогична епешфииэоти шршшх Ж Cironberg et v.l. , IS30). Показано, что тактивни оказняает выраженное стнмудируюыеа влияние на способность клеток селезенки шгсей (СВАхС57В1/6) ij- с перевитой саркомой ilv-II формировать хдоушшо розетки с SB, причем независима от с хеш введения (в пень пммунн-запш! или на пике иммунного ответа). Следовательно, тактивин восстанавливает рецепторячй аппарат лимфоцитов, возш.тяо за счет экспрессии новнх рецепторов или их освобождения от блокнрупдо антигенов опухолевой ткачи, Цолотптелышй аффект гормонов ишуса, в том числе и тактивина, в эксперименте и в комплексной терапии больных с опухолевыми заболеваниями показан рялоы авторов (Ю.А. Гриневич и др., 1979; ЕЛ. Амосова, К.В. Яременко, К'ЗЬ; ¡0.1,1. Лопухин и др., 1966; Н.П. Нападаов п яр., J SI'S; b.Il. Кузнш; и др., 1S39).
Наш было установлено, чте опухолевой рост в организме приводит к нарушения пропосеоа нигропии и пролйерацич. гемоиозтичэс-ких клеток костного мозга. При изучшш вознсгеностн рлияягл на атх процесса £iao показано, что уГА (С;,Ш кл сгппм'ртшго раство-
рз), ШШ и ИАК (I мг/шаь) при однократном введении ойдучаншп при экранирование участка костного «лозга г> летальной дозе гллаам стимулируют процесса миграции КОЕ из костного мозга соответственно в 3,0, 5,Ь ц 6,3 раза, у тотально облучешых в-доае 7,0 Гр ш-шец стимулируют (соответственно в 3,<г, 3,4 и 3,8 раза) процесан пролиферации исключительно меотнах селезеночных КОЕ, а у облученных в дозе 5,0 кашей оказывают стимулирующее влияние как на пролиферацию селезеночных КОЕ, так а на ылграци"» КОЕ пэ костного мозга. Следовательно, получзиьне результаты показывав! возможность коррекции им?.',умного ответа и на уровне миграций и пролиферации кроветворных стволовых клеток,
При изучении контактного взаимодействия пакрофагов ¡1 тл:.;оци--тов било установлено, что соисшаиер Иа-5 усиливав? сффект взаимодействия в раза в огигеиаой и ь 4,8-7,6 раза в иесияген-йой системах (в реиипрокшх сочетаниях макрофагов а тимоцитоп иы-вей СБА, 05?Ы/6, ОС57В , вА1В/с). При озом если препарат в сии-генпои ештьие .[аттически из влшл на число макрофагов, учаозвуй-цих в "грозцеобразовашш", то при рецппрокних сочетаниях увеличивал их количество до уровня, наблвдаекого в сиягенной систем. Аналогичные результата били получеш и при изучении влияния иа~5 на контактное взаимодействие макрофагов с клетке;.;;! лкыфзтпчесжих узлов. ¡1 в зтш,| случае препарат отменял генетически ограниченное вэаааоаейс-свц« ¡слеток, восстанавливай их до уровня, цаблмдаемого в оингенной системе.
11з лриперо перевитой саркош ИА-11 у шыий С57Ы/6 било усга-цовлеич, что «а-5 нацпыяот активное гь еншфачеекмх ¡1 песпециф-л-ческих Т-супресссров, повышая ш.чушшй ответ реципиентов соответственно в 2,1—1,1) и 2,6-3,0 раза в различный стации оаухолеиооа-тельота по сравневм» с »{фактом "¡-супрессоров, не по.двергиутнх воздействию препарат-!. Интересно, что при ото;.! оффокт отлеш) ин~ гибнцин Т-оущесоорачя ииушюго ответа рецшпептоа под влиянием Па-5 а 11АК (в 1,3-Т,1з раза г,;ен1Шо, чем у Па-5) раалнауатся исключительно на уровне ¿слеток .селезенки, но аз лш.и-а^пчесних узлов (контрсунрессоров). Ьогьохцо, способность Исг-5 з»»еклгь в определенной С'/енеиа функцию Т-хелпьров (А.П. ¡кшяадшнов, [¿82) связано с кпгибирущим вявчаиеи препарата шешю на Т-супредоори, чго в конечном счете надет к пошдонип иммунного ответа.
Оледосшелбио, в установленной шиш противоопухолевои 5ф;ок-13 ¡¡а-5, япцпмо, определенную роль кграег способность препарата
низме приводят к выражении нарушениям этапов шмунопоэза, функциональной активности различных субпопуляций клеток и продукции цитокшюв шмуяной системы (см. табл.).
Следовательно, состояние иммунологической недостаточности, развивающееся при опухолевом росте, обусловлено нарушением мнз-кества факторов, сложное взаимодействие которых обеспечивает нормальное функционирование системы иммунитета и организма в целом.
3. Процесс опухолеобразованйч называет выраженные сдвиги в г-латочио-м состава жмйощюх органов, являющихся структурной основой систеш иммунитета.
Гаюгаш исследователями показано,-что индуцированные химическими агентами дли перевитые опухоли в платочном составе лимфозд-ш органов животных .Еизаваот сдвиги, причем они выявляются как в тимусе, так и в периферических органах - селезенке и лимфатических узлах (зexony et al, 1976; Т.Н. Селезнева, К),Д. Гриневнч, •1980; Ьео f Róese , 1981; Б.В. Яковлева и др., 1902; ИЛ, Ковальская, В.ГЛ. Бухмаа, ISS2; H.I!. Балянчикова и др., 1987).
Haosi исследования, проведенные на примере перевитых есцитной (АС 37) и солидной сарком 37 (СС 37), показали, что в клеточном рзпергуерз ЛЕифоадаых органов'цроасходяг определеннее изменения, - шршекдссть которых оасдсела от ¿дда перевиваемой опухоли» Так, хгоявлеяде регикудяршх глею;; в гямуое и лимфатических узлах отмечалось при перевдЕКЗ СС 37, но по АС 37. Если в селезенке шшей с АО 37 прирост ретикулярных меток отмечался во все сроки, то у кншзй с СС 37 - только на 6-й день опыта. Появление или увеличение обцего количества плазматических клеток (плазмобластн, про-• плазмоцам si плаемоциты) отмечалось во всех органах при перевив-кз обоих опухолей, причем в большей степени при перевивке АС 37, что, видимо, связало со способностью этой опухоли к метастазиро-вашш, в том числе и в ллм^овдные органы.
В ткмусе и лимфатических узлах: (наиболее выракенно) обнаруживалось увеличение обдего числа молодых форм лимфоццных клеток (димфобдаэтоз и пролшйоцихев) при снижении кровня зрелых лимфа-цатов, что вело к изменении соотношения клеток лимфоидно ряда и сдвигу их "влево". В селезенке j:o отмечалось ешкенде всех клеток ли'4оздногэ ряда, прачем сдвиг "влево" такне не обнаруживался. Уровень шелоидных клеток в больней степени был повышен у мышей с дереввзой СС 37. Ъ ящъо^ти. органах маыей с перевитой АС 37 вы-
животных, обработанных ДАБА - только ослаблен. Кооперативный эффект Т-р а Т^-лиыфоцдтов при канцерогенезе (ДУБА) инглбиравал только на латентной стадии без нарушения функциональной активности кооперирующих клеток. Контактное взаимодействие макрофагов и лимфоцитов (клеток тимуса и лимфатических узлов) на стадии опухо-лепосительства подавлено, при этом способность вступать во взаимодействие нарувгена в большей степени у макрофагов, чем лимфоцитов.
4. При опухолевом росте, индуцированном МХТ или путем перевивки (саркома МХ-П), функция Т-хелперов подавлена независимо от стадии, а функция В-предшественников АОН страдает в основном на терминальной стадии опухоленосительства.
5. МХТ канцерогенез и перевитые опухоли индуцирую появление специфических и неспецифических Т-супрессоров, активность которых усиливается по мере роста опухолевой ткани. При ,ЩБА канцерогенезе активность Т-супрессоров была вы разке на в меньшей степени. Т-супрессоры при опухолевом росте теряют способность воспринимать сигналы от других меток, в частности, от коитрсупрес-соров.
6. Независимо от генезиса шстивность В-супрессоров усиливается по мере роста и развития опухолевой ткани,
7. Активность Т-киллеров на стадии опухоленосительства практически не нарушена, а ЕС активность ингибирована.
8. Продукция ИЛ-2 на стадии опухоленосительства была подавлена и при МХТ, и при Д1БА канцерогенезе, а ЙЛ-1 - только при МХТ канцерогенезе.
9. Перевивка асцитной и солидной сарком 37 в клеточном составе тимуса а лимфатических узлов подопытных животных вызывает увеличение общего числа лимфобяастов и пролимфоцатов на фоне уменьшения зрелых лимфоцитов, а в селезенке - уменьшение всех видов клеток лимфовдяого ряда, Для асщшюй саркомы характерны резко выраженная плазкйклеточная реакция, являющаяся монологическим субстратом гуморальных факторов иммунитета, и появление опухолевых клеток; для солидной саркомы - появление ретикулярных клеток и резкое увеличение числа ыиелоищшх клеток.
10. Иммунологическая недостаточность при опухолевом росте, что выражалось в подавлении иммунного ответа подопытных животных и снижении числа клеток, способных к. антителообразовшшю а формированию розеток с эритроцитами барана, является суммарным ре-
зультатом нарушений процессов миграций, пролиферации, дифференцк-ровки, кооперации и функциональной активности различных иммуно-кошетентных клеток, участвующих в ишуяном ответе.
11, Противоопухолевый эффект фласулона обусловлен его способностью подавлять активность Т-супрессоров и восстанавливать ЕК активность.
12. Антисупрессорная сыворотка оказывает определенное тормозящее влияние на рост и развитие перевитых оаухолей - как их солидной, так и асцитной форм, что выражалось и л уменьшении числа опухолевых клеток в лммфовдшгх органах, вплоть до полной их элиминации (лимфатические узлн). В основе механизма действия аятису-прессорной сыворотки лежат количественные я качественные изменения в составе клеток лимфовдных органов - увеличение числа ретикулярных и молодых форм лямфоидных и в отделышх органах и миело-идных клеток, что, свидетельствует об усилении преимущественно клеточных факторов иммунитета.
13. Одним из механизмов действия -5 в противоопухолевом иммунитете является его способность днгибировать активность специфических и яеспецифмческих Т-суирёоооров а восстанавливать вэа-ш,содействие макрофагов с лимфоцит ши Т-клемчиой дифференциации,
14, Противоопухолевый эффект д'активина связан с восстановлением рецодторяого аппарата лимфоцитов, даклофосфамвда ~ с подавлением активности Е-супрессороз.
Список работ, опубликованных по теме диссертации
1. Хаитов P.M., Арипова 1.7. Взаимодействие и миграция Ти Б-Л1щфоцитов в .ишунаом ответе при канцерогенезе, индуцированном метилхолантреном // Бюлл.экспер.бяол. и мед.-1977.-J! 10,-
С. 4S4-466.
2. Аридова Т.У., Уразметова !.1.Д. Функциональная активность Т-клеток-супрессоров мышей с индуцированными метилхолантреном опуходтми // Докл.АН УзССР.-1978.-№ З.-С. 58-59.
3. Арипова Т.У. Функц&оначьвая активность и миграция кроветворных стеоловых клеток при химическом канцерогенезе // Производим е госсшола как икмуносупрессорн: Матер. Ш сшпоз. по применению госсипола и его производных в медицине.-Ташкент: Фан, I97S.-C. 164-167.
4. Уразмегова П.Л., Арипова Т.У. йилушшй ответ у мышей при
'имнческом канцерогенезе, вызванном мзталхолантреном // Производив госсипола как кшуносупрессоры: Матер. Ш симлоз. по пршене-ню госсшола и его производим* в медицине. - Ташкент: Фан, 1978.
С. 167—171.
5. Арнпова Т. 7. Киллерпая активность Т-лшлфоцдтов у мышей в роцессе аддукции и роста опухоли, вызванной 1ДТ // У Республ. онф. ЦШЛ медвузов Узбекистана: Тез. докл. - Ташкент, 1980. -
. 3.
6. Хаитов P.M., Арипова 'Г.У. Происховделде стволовых клеток, бразувщцх эндогенные колоши в селезенке облученных мышей // адиобаология. - 1982. - Т. 22, № С. - С. 7S6-80I.
7. Батырбеков A.A., Арипова Т.У., Ислашва Н.Т. Влияние опу-олевого роста на пролиферацию и дифференцировку стволовых кле-ок // Докл. АН УзССР. - 1983. - Л 8. - С. 48-50. •
8. Горбачева Л.Д., Арипова Т.У., Исламова Н.Т. Коррекция со-олшлером акриловой кислоты и -винллпирролвдона контактного заимодействия макрофагов с несингеяшми лимфоидними клетками // агол. физиология и экспер. терапия. - IS83. - & 4. - С. 35-36.
9. Хаитов P.M., Арипова Т.У., Гариб Ф.Ю. и др. Способ опре-еления токсемии: Авторское свидетельство СССР Я 1099726 от ¿.02.1984.
10. Горбачева Д.Д., Исламова Н.Т., Арипова Т.У. Коррекция по-иыеркыми соединениями взаимодействия макрофагов с лимфоцитами
ри опухолевом росте // Современные методы иммунотерапии: Тез. окл. научн. конф. - Ташкент, 24-26 окг. 1984. - М.-Ташкент,1984.
С, 264-265.
11. Батарбеков A.A., Арипова Г.У., Исламова Н.Т. Иролнфера-ая и дифференцировка гемопоэтических стволовых клеток при опухо-эвом росте // Экспериментальная онкология. - 1985. - Т. 7, is I.
С. 46-48.
12. Исламоэа Н.Т., Аршова Г,У. Привитая опухоль как модель яя изучения коррекции иммунного ответа // Вопроси траиспланто-згии и ишунокорригирувщей терапии: Сб, научн. Трупов. - Таш-знт, IS86. - С. 23-26.
13. Арипова Т.У., Алимбекова М,Г. Ишуаорег/ляторша субпо-рллцид лимфоцитов и цитокшш иммунной системы при экспершлен-¿льнам каяцерогенезе // I Всесовз. иммунологический съезд: Тез. зил. Сочи 15-17 ноября 1939. - И., 1389. - Т. 2. - С. II.
14. Арипова Т.У., Миркамаяова Л. П., Над'ад и в A.D. !.!лграц;:он-
ная и функциональная активность лейкоцитов при экспериментальном канцерогенезе // Докл. АН УзССР. - 1991. - Ii 6. ~ С. 54-5?.
15. Арипова Т.У., Камалов З.С., Исламова Н.Т. Продукция ИЛ—I и ИЛ-2 при химическом канцерогенезе // Актуальные вопросы клинической иммунологии и регионарной аллерголопш: Тез. докл. I Рес-публ. съезда иммунологов и аллергологов УзССР. - Ташкент: Узбе-кистон, 19Э1. - С. 247-248.
16. ArlpovB Т., KaneloT 2. IL-1 and lb-2 production during chimical csncerogeneeia // 8№ International Congress of iamuno-logy. - Budepest, Hunhary, 1992.. - P. 418.
17. Уразметов К.Г., Абаева Т.А., Арипова Т.У, Влияние анти-супрессорной сыворотки на клеточный состав лимфоидных органов натекших мышей // Вторичные шмунодефмцатные состояния: Сб. научн, тр. - Ташкент, 1992.
18. Арипова Т.У., Уразмеюв К.Г., Батырбеков A.A., Исламова Н.Т. Кммуншй ответ и состояние этапов иммуногенеза у мышей с ощ холями различного генезиса // Материалы итоговой научной конферв! цйи Первого Tamlbcffil, - Ташкент, 1992.
19. "/разметов К,Г., Красмша H.A., Арипова Т.У, и др. Изучение противоопухолевого эффекта антисупресоорной сыворотки у маша! с перевитой солидной саркомой 37 // Ызд. журнал Узбекистана (в печати).
20. Уразаетов К.Г., Абаева Т.А., Арипова Т.У., Уразметова М.Д, Противоопухолевый вф|)ект антисупрессорной сыворотки. I. Влш яие на рост и развитее опухоли // Док.л. АН Республики Узбекистан (в печати).
21. Уразметов К.Г., Абаева Т.А., Арипова Т.У. Противоопухолевый эффект антисупрессорной сыворотки.,П. Влияние на клеточный состав лЕмфовдных органов мышей с опухолями // Докл. АН Республики Узбекистан 1в Печати)...
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
АО!? - антителообразующая клетка
АС 37 - асцитаая саркома 37, метасзазлруюцая опухоль молочной кзлезы
БЦЕ (вса - ВасШиа Са1ше1^е-3иег:1п) - бацилла Кальыетт-Керена
ДДБА - диметилбензамрацен ЕК - естественные киллеры ИЛ-1 - интерлейкш-1 ИЛ-2 - иятерлейкин-2 ЙФ , - интерферон.
КАСС - кроличья антисупрессорная сыворотка КОЕ - колокиеобразущая единица МХТ - метилхолатрек
ЮС-П - индуцированная мезйлхолантреноы саркома, поддерживаемая нй мышах линии С57В1/6
На~5 - сополимер акриловой кислоты а и -виншширролидоаа
НКС - нормальная кроличья сыворотка
ЛАК - полиакриловая кислота
ПВП - лоли-4-виниляиридщ
РОК - розеткообразующая метка
РТПХ ~ реакция "трансплантат против хозяина"
СС 37 - солидная саркома 37, нематастазирувдвя опухоль молочной яелезы
ФГА -. фитогемагглютинин
ЦТД - цитохимическое действие
ЗБ - эритроциты барана