Автореферат и диссертация по медицине (14.00.02) на тему:Регионарные лимфатические узлы яичка в норме, при экспериментальном опухолевом росте в яичке и его лечении цитостатиками и фитопрепаратами

Направахрукописи

Мичурин Игорь Евгеньевич

РЕГИОНАРНЫЕ ЛИМФАТИЧЕСКИЕ УЗЛЫ ЯИЧКА

В НОРМЕ, ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ОПУХОЛЕВОМ РОСТЕ В ЯИЧКЕ И ЕГО ЛЕЧЕНИЕ ЦИТОСТАТИКАМИ И ФИТОПРЕПАРАТОМ

14.00.02- анатомия человека

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Новосибирск-2004

Работа выполнена в отделе профилактической и экологической лимфологии Новосибирского научно-исследовательского института клинической и экспериментальной лимфологии Сибирского отделения Российской академии медицинских наук.

Научный руководитель: доктор медицинских наук, профессор

Асташов Вадим Васильевич

Научный консультант: Академик СО РАМН,

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор

кандидат медицинских наук

Бородин Юрий Иванович

Шмерлинг Михаил Давыдович Овсянко Елена Владимировна

Ведущая организация:

Научно-исследовательский институт региональной патологии и патоморфо-логии Сибирского отделения академии медицинских наук Российской Федерации (г. Новосибирск).

Защита состоится « на заседании диссертацион-

ного совета Д 208.062.05 Новосибирской государственной медицинской академии (630091, г. Новосибирск, Красный проспект, 52)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Новосибирской государственной медицинской академии(630091, г. Новосибирск, Красный проспект, 52).

Автореферат разослан

»

2004 г.

Ученый секретарь диссертационного совета,

доктор медицинских наук

профессор

А.В.Волков

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Проблема лечения злокачественных новообразований является одной из наиболее актуальных в медицине в настоящее время. По данным статистики каждый пятый житель России заболевает в течение жизни одной из форм злокачественных опухолей. При этом отмечается постоянное, неуклонное увеличение онкологических больных, как в России, так и в других странах. По результатам исследования Госкомстата России, в 2000 г. количество больных, с установленным впервые в жизни диагнозом злокачественное новообразование составляло 309,9 на 100000 населения, увеличившись за 10 лет на 15%.

Большинство злокачественных опухолей на различных этапах своего развития метастазируют по лимфатической системе (Грех И.Ф. и др., 1966; Зербино Д.Д., 1974; Каралин Е.И. и др., Л.М.,1996). В условиях неопластического процесса в организме лимфатическая система обеспечивает не только поддержание постоянства внутренней среды, но и осуществляет дренажно-детоксикационную и лимфопоэтическую функции В структуре злокачественных опухолей половых органов - опухоли яичка встречаются достаточно редко и составляют 0,5-3% (Б.П. Матвеев и соавт., 1983; D. Shottenfeld, 1981; Н.А. Лопаткин и соавт., 1995), но среди причин смертности у мужчин, умерших во второй и третьей декадах жизни, в 11-13% случаев смерть обусловлена именно тестику-лярными опухолями ( A.M. Гарин., 1986).

Злокачественные опухоли яичка имеют тенденцию к быстрому ме-тастазированию. В первую очередь метастазами поражаются регионарные лимфатические узлы, расположенные в зоне эмбриональной закладки, в области почечных сосудов, спереди от аорты и нижней полой вены до уровня отхождения нижней брыжеечной артерии (Тиктинский О .Л., 1990). При некоторых формах опухолей яичка метастазы возникают так часто, что проблема лечения больного сводится в значительной степени к лечению метастазов (Чебан Н.Л., 1983). Einborn L.H. (1989) доказал, что именно герминогенные опухоли яичка уникально чувствительны к химиотерапевтическому лечению. Вместе с тем результаты терапии пациентов с запущенными формами рака яичка при наличии метастазов нередко являются неудовлетворительными. Необходимость создания новых противоопухолевых препаратов диктуется не только требованиями, предъявляемыми комбинированной химиотерапией, но и хорошо известными фактами наличия первичной и индуцирАПДННРй реф-

РОС. НАЦИОНАЛЬНАЯ ]

S^SKUli/1

рактерности, преодоление которой достигается путем изменения схем лечения, чередованием новых препаратов, применением различных модуляторов биологического эффекта (Акимов Л. А, 1994; Валякина Т.И., 2003; Монцевичуте-Эрпнгене Г.В., 1975). Кроме этого, одной из основных задач онкологии и фармакологии является создание новых препаратов, обладающих большей избирательностью противоопухолевого действия и меньшей токсичностью, так как многие из имеющихся цито-статиков оказывают повреждающие действие нате или иные жизненно важные органы, кроветворную ткань, иммунную систему (Ишбаева Г.Г., 1999). Поэтому использование лекарственных трав, с противоопухолевой активностью и с богатейшим набором биологически активных веществ, является неисчерпаемым источником такого рода препаратов.

Актуальным представляется изучение реактивной способности регионарных лимфатических узлов яичка при опухолевом росте и в условиях терапии различными противоопухолевыми препаратами-цитоста-тиками и фитосборами, а также непосредственное действие на первичную опухоль новых препаратов с предполагаемой цитостатической активностью.

Цель исследования. Выявить особенности структурно-клеточной организации почечных и подвздошных лимфатических узлов в физиологических условиях, экспериментальном опухолевом росте в яичке и при введении платиносодержащих цитостатиков в виде монотерапии и в сочетании с фитопрепаратами. Задачи исследования.

1. Изучить структурную организацию почечных и подвздошных лимфатических узлов в норме и при экспериментальном опухолевом росте в яичке.

2. Исследовать структурную организацию почечного и подвздошного лимфатических узлов в условиях опухолевого роста в яичке при его коррекции противоопухолевыми препаратами (цисплатином и «платисе-рином» в виде монотерапии).

3. Выявить структурную организацию почечного и подвздошного лимфатических узлов в условиях опухолевого роста в яичке при его коррекции противоопухолевыми препаратами (цисплатином и «платисерином» в сочетании с фитокоррекцией (биологически активной добавкой к пище «Бережник»).

Научная новизна. Получены дополнительные данные о строении и структурно-функциональной организации почечного и подвздошного лим-

фатических узлов в физиологических условиях, а также о преобразованиях, происходящих в лимфатических узлах при экспериментальном опухолевом процессе в яичке.

Показано, что коррекция экспериментального опухолевого роста в яичке новым противоопухолевым препаратом «платисерин», разработанным на кафедре неорганической химии Новосибирского государственного университета, оказывает более выраженное действие на опухолевую ткань в сравнении с цисплатином.

Практическая значимость исследования. Выявленыые структурные изменения, происходящие в лимфатическом узле при моделировании опухолевого процесса в яичке, помогут лучше понять механизм неопластического процесса в яичке и особенности метастазирования злокачественных опухолей данной локализации.

Детальное изучение преобразований, происходящих в почем ном и подвздошном лимфатических узлах при экспериментальном опухолевом росте в яичке, поможет глубже понять роль и функции лимфатических узлов при данном патологическом процессе.

Сравнительный анализ структурных изменений в лимфатических узлах при экспериментальном опухолевом росте в условиях коррекции различными препаратами платины позволит более дифференцированно подходить к выбору противоопухолевого препарата при лечении опухолей яичка. Изучение морфофункциональных преобразований лимфатических узлов при введении противоопухолевых препаратов платины в виде монотерапии и в комбинации с БАД к пище «Бережник» и их сравнительная оценка позволит на практике создать более эффективные схе -мы противоопухолевой терапии злокачественных новообразований яичка.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. В нормальных условиях гемо- лимфоциркуляции у экспериментальных животных(мыши) почечный лимфатический узел является регионарным лимфатическим узлом 1-го порядка для яичка, а подвздошный регионарным лимфатическим узлом 2-го порядка.

2. Экспериментальный опухолевый рост в яичке вызывает характерные структурно-функциональные преобразования в регионарных лимфатических узлах, зависящие от их анатомической локализации: для почечного лимфатического узла характерны изменения в периферических отделах коркового вещества, а для подвздошного лимфатического узла характерны изменения в глубоких отделах.

3. Введение препаратов платины (цисплатин, «платисерин») при экс-

пери ментальном опухолевом росте в яичке вызывает деструктивные изменения в ткани опухоли (некроз, изменение стромалыю-паренхима-тозного соотношения) и структурные преобразования в региональных лимфатических узлах, зависящие от их локализации, причем использование «платисерина» вызывает более выраженный эффект.

4. Сочетание препаратов платины и фитокоррекции (БАД к пище «Бе-режник») при экспериментальном опухолевом росте в яичке приводит к увел имению размеров Т и В-зависимых зон в регионарных лимфатических узлах и активации лимфопролиферативных процессов.

Внедрение результатов исследования. По результатам исследования разработана схема комбинированной химиотерапии больных со злокачественными опухолями яичка, используемая в урологических отделениях МУЗ ГКБ№1 г. Новосибирска для лечения пациентов с подобной патологией. Разработанный, описанный и использованный в работе способ моделирования экспериментального опухолевого роста в яичке применяется в отделе профилактической и экологической лимфологии научно—исследовательского института клинической и экспериментальной лимфологии СО РАМН (г. Новосибирск).

Апробация результатов исследования. Основные положения диссертации доложены на межрегиональной конференции «Проблемы экс-пери ментальной, клинической и профилактической лимфологии» (Новосибирск, 2002); ежегодной конференции молодых ученых и студентов (Новосибирск, 2002). По теме диссертации опубликовано 5 печатных работ.

Структура и объем диссертации. Диссертационная работа изложена на 161 странице машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, глав - материалы и методы исследования, собственные результаты, обсуждение, выводы, приложения. Работа иллюстрирована 16 таблицами, 28 рисунками и 14 графиками. Библиографический указатель включает 97 работ отечественных и 53 — иностранных авторов.

Материал и методы исследования. Для исследования в качестве экспериментального животного были выбраны беспородные белые мыши-самцы с исходной массой 17-20 г. (возраст животных 3-4 месяца). Количество животных, используемых в эксперименте - 180.

Все животные были разделены на 6 групп. 1-ая группа - интактные животные. 2-ая группа—животные с индуцированным опухолевым ростом в правом яичке. 3-я и 4-ая группы - животные с индуцированной опухолью яичка, которым вводился цисплатин и «платисерин» в каче-

стве монотерапии соответственно. 5-ая и 6-ая группы - животные с индуцированной опухолью яичка, которым вводился цисплатин и «платисе-рин» в комбинации с биологически активной добавкой к пище «Береж-ник» соответственно.

Создание экспериментального опухолевого роста производилось следующим образом. Перед операцией у мыши - носителя опухоли Эрлиха, аспирировалось 0,375 мл асцитической жидкости. Далее определялась концентрация в 1 мл клеток опухоли Эрлиха, и опытным путем была выведена концентрация в 250000 клеток опухоли Эрлиха в 1 мл. Подобная концентрация позволяет быть уверенным в том, что опухоль индуцирована и обеспечивает необходимую продолжительность жизни экспериментальных животных. Далее в паренхиму яичка экспериментальной группы животных вводится 0,075 мл асцитической жидкости. На описанный метод создания опухолевого процесса в яичке получен патент на изобретение №2220458 от 27 декабря 2003 года.

Экспериментальная опухоль прививалась в правое яичко, поэтому объектом исследования были выбраны правое яичко, правые подвздошный и почечный лимфатические узлы. Почечный и подвздошный лимфатические узлы являются регионарным к моделируемой опухоли, что подтверждено инъекционным методом.

В качестве противоопухолевых агентов использовались: фармакопейный препарат «цисплатин» и бисеринатплатина 2, условное название «пла-тисерин», новый, раннее не использовавшийся для лечения опухолей препарат, разработанный на кафедре неорганической химии Новосибирского государственного университета д.м.н. Л.Ф. Крыловой. В качестве вспомогательного средства экспериментальные животные получали фитопрепарат - БАД к пище «Бережник», разработанный в НИИКиЭЛ СО_РАМН. Введение цитостатиков и БАД к пище «Бережник» проводилось в стадии сформированной опухоли, для максимального приближения эксперимента к условиям клиники. Лекарственные препараты («цисплатин» и «платисерин») вводились ежедневно один раз в сутки в течение 7-ми дней, начиная с 8-го дня после индуцирования опухолевого процесса в правом яичке. «Цисплатин» вводили в дозе 2мг/кг, ссылаясь на рекомендации Н.Г. Захарьевича (1993). «Платисерин» вводили в такой же дозе - 2мг/кг веса животного, внутрибрюшинно. БАД к пище «Бе-режник» экспериментальные животные получали в виде порошка смешанного с пищей, в дозе 1,5 мг на мышь один раз в сутки, параллельно с введением цитостатиков.

Для изучения особенностей структуры и функциональных характеристик почечного и подвздошного лимфатических узлов, яичка и сыворотки крови были использованы следующие методы:

1. Морфометрия гистологических срезов лимфатических узлов.

2. Изучение клеточного состава в отдельных структурно-функциональных зонах лимфатических узлов, определение ядерно-цитоплазма-тического и стромально-паренхиматозного соотношений ткани яичка методом световой микроскопии.

3. Аналитические методы для определения уровня концентрации микроэлементов в ткани яичка и сыворотке крови.

Материал забирали и обрабатывали по общепринятой методике: фиксация в растворе Телесницкого, обезвоживание в серии спиртов возрастающей концентрации. Органы заключали в парафиновые блоки, с которых делали серийные срезы на ротационном микротоме "Reichert" вдоль продольной оси органа. Для морфометрии структурно-функциональных зон лимфатических узлов готовили срезы 7 мкм, для анализа клеточного состава узлов и ткани яичка с опухолью готовили срезы толщиной 5 мкм. Для морфометрического исследования применяли окраску гематоксилином Майера и эозином, для цитологического исследования - окраску азур 2-эозином.

Определение стромально-паренхиматозного соотношения в опухолевой ткани яичка производили методом «полей» (Автандилов Г.Г., 1981; Краевский СП., 1993) с помощью стандартной окулярной сетки-вставки с 25-ю равноудаленными точками. Ядерно-цитоплазматическое соотношение в опухолевых клетках определяли по аналогичной схеме с использованием окуляра 100.

Все полученные данные обрабатывались методом вариационной статистики Стьюдента-Фишера (Лакин Г.Ф., 1980) с определением средней арифметической, ее ошибки и доверительного интервала с надежностью р - 95%. В таблицах приведены значения М±т, указана достоверность различий между показателями по t-критерию Стьюдента.

Результаты собственных исследований.

1. Результаты гистологических и морфометрических исследований выявили, что в физиологических условиях структура почечного и подвздошного лимфатических узлов белых беспородных мышей характеризуется преобладанием коркового вещества над мозговым, и оба узла по структурно-функциональной специализации являются компактными (корково-мозговой индекс у почечного лимфатического узла составляет

2,6, у подвздошного 2,5). Значительную площадь коркового вещества занимает «глубокая кора» - паракортикальная зона, сопоставимая у сравниваемых узлов. Относительные площади, занимаемые первичными лим-фоидными узелками несколько больше у почечного лимфатического узла, в то время как площади вторичных лимфоидных узелков больше в подвздошном лимфатическом узле и в их структуре заметное место занимает мантийная зона. Для клеточного состава обоих узлов в центрах размножения вторичных лимфоидных узелков и паракортикальной зоны характерно преобладание малых и средних лимфоцитов, в мозговых тяжах и синусах доминируют зрелые плазматические клетки. Следует отметить в обоих узлах хорошее развитие капсулы, и достаточно широкий краевой синус в почечном лимфатическом узле, что свидетельствует о дополнительном депонировании афферентной лимфы в условиях физиологического почечного кровотока.

2. В условиях развития любого патологического процесса в организме преимущественную антигенную нагрузку принимают регионарные к патологическому очагу лимфатические узлы, где совершаются все процесса биохимической, биофизической и иммунной обработки поступающего материала (Бородин Ю.И., 2000). По данным авторов, исследовавших перевиваемые опухоли, особенно опухоль Эрлиха (Афанасьева О.Г, 2001, Исакова Н.Б, 2002, Валякина Т.И., 2003) показано, что 15-е сутки опухолевого роста являются критическими именно для перевиваемых опухолей. Большинство авторов свидетельствует о стереотипной реакции лимфатических узлов в условиях опухолевой агрессии (Бадриева Э.А., 1979, Мастихина И.В., 1999, Цыплакова Д.Э., 1988, TarШюn Р.,1997), однако в нашем исследовании выявлены своеобразные отличия морфофункцио-нальных изменений в почечном и в подвздошном лимфатических узлах при развитии экспериментальной опухоли яичка. В проведенном исследовании регионарными лимфатическими узлами являются почечные лимфатические узлы, соответственно и максимальные морфофункци-ональные изменения отмечены именно в почечных лимфатических узлах. На 15-е сутки опухолевого роста отмечены изменения преимущественно в корковом веществе узла - увеличены в 2,4 раза относительные площади, занимаемые вторичными лимфоидными узелками, в которых значительно увеличиваются центры размножения, в цитоархитек-тонике последних следует выделить значительное увеличение относительного количества макрофагов (в 4 раза), ретикулярных клеток (клеток «памяти» об антигене) в 3,4 раза, и средних лимфоцитов (в 2,4 раза).

В подвздошном лимфатическом узле площадь герминативных центров увеличилась в 2,32 раза, в цитологическом составе превалируют лимфобласты и средние лимфоциты, в то время как, относительное количество ретикулоцитов, наоборот, даже уменьшается. Сравнивая с данными литературы (Цыплаков Д.Э, Петров С.В, 1995) можно предположить, что вторичные лимфоидные узелки в почечном лимфатическом узле относятся к фолликулам 1 -го и 2-го типов по их классификации, а в подвздошном лимфатическом узле скорее к 3-му типу фолликулов. Если первые 2 типа - являются типичными В-клеточными образованиями и встречаются в подавляющем большинстве наблюдений, то лимфоид-ные фолликулы 3-го типа (Т-клеточные) встречаются намного реже, но именно для них характерно наличие большого количество лимфоблас-тов и в большинстве случаев она совпадает с активной паракортикаль-ной гиперплазией, подобные изменения характерны и в нашем исследовании для подвздошного лимфатического узла. Площади первичных лим-фоидных узелков и коркового плато в обоих узлах уменьшаются. На 15-е сутки опухолевого роста отмечена выраженная гиперплазия паракор-тикальной зоны в подвздошном лимфатическом узле (43,6%) против некоторого (17,6%) в почечном лимфатическом узле, что, соответственно, приводит к достоверному увеличению размеров Т-зависимой зоны в подвздошном лимфатическом узле, а в почечном лимфатическом узле аналогичный показатель достоверно не изменился. Однако в цитологическом составе «глубокой» коры произошли более выраженные изменения именно в почечном лимфатическом узле - так же, как и в центрах размножения вторичных лимфоидных узелков - отмечены максимальные достоверные изменения относительного количества макрофагов и ретикулярных клеток. В почечном лимфатическом узле реагирует более выражено и мозговое вещество, причем преимущественно мозговые синусы с выраженным синусным гистиоцитозом с преимущественной «плазматизацией». Отмечается также значительное увеличение суммы площадей синусов - краевого и мозговых, при достоверно не изменившемся показателе мозгового вещества и его составляющих в подвздошном лимфатическом узле. По структурно-функциональной специализации почечный лимфатический узел в условиях развития опухолевого роста становится промежуточным, в то время как подвздошный узел не меняет своей специализации. Таким образом, на фоне развития в организме опухолевого процесса и имея во многом сходное строение в физиологических условиях, почечный и подвздошный лимфатические узлы

реагируют на опухолевый процесс в яичке по-разному. Подобные изменения в реакциях подвздошного и почечного лимфатических узлов на 15-е сутки опухолевого роста, по всей видимости, связаны со многими причинами: отдаленностью и/или регионарностью узлов к очагу опухолевого роста, поздним периодом злокачественного процесса в организме, когда регионарный (почечный) лимфатический узел исчерпывает свои детоксикационные ресурсы, в то время как в отдаленных лимфатических узлах организма еще происходят ярко выраженные процессы, свидетельствующие об активации их дренажно-детоксикационных функций. На 15-е сутки опухолевого роста в яичке обнаружена картина выраженного тканевого и клеточного атипизма - структурные компоненты яичка практически полностью замещены полями атипичных опухолевых клеток. Опухолевые клетки неправильной формы с обильной цитоплазмой и округлым ядром, встречаются многоядерные клетки, клетки с уродливыми ядрами. Крайне редко встречаются склерозированные извитые семенные канальца. Большинство кровеносных и лимфатических сосудов значительно расширены, вены полнокровны. Стромально-парен-химатозный индекс опухолевой ткани равен 0,17±0,021, ядерно-цитоп-лазматический индекс равен 3,39±0,041.

3. Использование цитостатической терапии - препаратов платины приводит к своеобразным изменениям в лимфатических узлах на 15-е сутки развития экспериментального канцерогенеза. При коррекции цис-платипом в почечном лимфатическом узле наиболее значимые изменения произошли в корковом веществе узла - значительно уменьшились площади вторичных лимфоидных узелков, преимущественно за счет редукции центров размножения, в которых значительно уменьшается количество ретикулярных клеток. Это происходит на фоне увеличения площади паракортикальной зоны узла, в которой увеличивается численность незрелых лимфоидных клеток. На фоне коррекции цисплатином значительно сокращается синусная система узла - как краевые, так и мозговые синусы, в которых достоверно уменьшается количество макрофагов. Сравнивая изменения по зонам, следует отметить, что в почечном лимфатическом узле на фоне коррекции цисплатином наиболее значимые изменения претерпевает Т-зависимая зона(увеличивается ее размер на 13%). Все вышеперечисленные изменения, особенно клеточного состава узла, свидетельствуют о том, что использование цисплатина, как цитостатического препарата вызывает в регионарном лимфатическом узле изменения, свидетельствующие о значительном уменьшении

антигенной нагрузки на узел. Подобные изменения получены так же в работах Афанасьевой О.Г. (2001). В подвздошном лимфатическом узле на фойе коррекции цисплатинам наиболее значимые изменения произошли, наоборот, в В-зависимой зоне, причем преимущественно за счет уменьшения площадей вторичных лимфоидных узелков, в которых уменьшаются размеры центров размножения. Значительно увеличивается на фоне коррекции цитостатиком размеры краевого синуса и несколько увеличиваются мозговые. В цитоархитектонике узла практически во всех зонах происходят однонаправленные изменения - уменьшение на фоне коррекции бластных форм клеток и увеличение зрелых. Однако, так же, как и в регионарном почечном лимфатическом узле - в паракортикаль-кой зоне остается большое число макрофагов и ретикулярных клеток. Подобные изменения свидетельствуют о том, что относительно отдаленный от очага поражения лимфатический узел остается более сохранным и выявленные в нем морфофункциональные изменения, отражают системную реакцию лимфоидной ткани на неопластический процесс в организме, что подтверждается многими авторами (Цыплаков Д.Э., 1995, Dworak О., 1991, Sugio К., 1993). На фоне коррекции опухоли яичка цис-платином в тканях яичка макроскопически выявлено значительное размягчение опухолевого узла, уменьшение размеров (в среднем на 25%) пораженного яичка в сравнении с нелеченными животными. Микроскопически наблюдались участки замещения опухолевой ткани жировой тканью, иногда определялись участки некроза. Стромально-паренхима-тозный индекс увеличился на 5,68% в сравнении с нелеченными животными, а ядерно-цитоплазматический, наоборот, уменьшился на 16,68%.

4. Анализируя данные по использованию нового цитостатического препарата платины - «платисерина» выявлено, что в почечном лимфатическом узле происходят своеобразные, несколько отличающиеся от группы с использованием цисплатина морфофункциональные изменения. Так же, как и в группе с использованием цисплатина отмечено уменьшение относительной площади, занимаемой вторичными лимфоидными узелками, уменьшаются центры размножения, но судя по цитологической картине центров размножения можно свидетельствовать о том, что на фоне «платисерина» происходит более выраженная лимфоцито-лим-фобластная гиперплазия (по B.Leiber) лимфоидных узелков. «Глубокая кора», наоборот, на фоне использования «платисерина» выглядит более сохранной, с достоверным уменьшением, как относительной численности макрофагов, так и ретикулярных клеток. Синусный «гистиоцитоз» лим-

фатического узла сохраняется, особенно мозговые синусы остаются более широкими, заполненными макрофагами и незрелыми формами плазматических клеток.

Следует отметить, что в группе с использованием «платисерина» в качестве противоопухолевого препарата в структуре подвздошного лимфатического узла произошли минимальные и стереотипные мор-фофункциональные изменения, отражающие наличие в организме неопластического процесса. Подвздошный лимфатический узел по сравнению с почечным в этой же группе коррекции выглядит более «сохранным» и преимущественные изменения произошли только в соединительно-тканных компонентах узла - выявлено на фоне коррекции «платисе-рином» уменьшение явлений отека капсулы и трабекул. В ткани яичка наблюдалось замещение опухолевой ткани обширными полями некроза, участками разрастания соединительной ткани. На цитологическом уровне характерен лизис ядер, но патологические митозы опухолевых клеток еще встречаются. Стромально-паренхиматозный индекс возрос относительно нелеченных животных на 7,39%. Ядерно-цитоплазматический индекс стал меньше на 21,89% относительно нелеченных животных и на 6,05% в сравнении с животными, которым вводился цисплатин.

5. Как уже упоминалось, по данным многих авторов считается, что 15-е сутки опухолевого роста являются критическими, как для выявления морфофункциональных изменений лимфатических узлов, так и для выявления физиологических критериев выживаемости/летальности экспериментальных животных. В нашем исследовании выявлено, что при развитии экспериментальной опухоли яичка без лечения -смертность у животных составила 33% в среднем на 10-12-е сутки, такой высокий показатель вполне совпадает с полученными ранее по перевиваемым опухолям Эрлиха данными (Афанасьева О.Г., 2000, Исакова Н.Б., 2002, Валякина Т.И., 2003). Использование только цитостатической терапии у животных с введением цисплатина приводило к 18% гибели животных на 11-13-е сутки; у животных с введением «платисерина» гибель составила 15% на 11-13-е сутки эксперимента. Комплексное использование цитостатической терапии и БАД к пище «Бережник» у животных с использование цисплатина приводила к 6% летальности на 14-е сутки, а в группе с использованием «платисерина» и БАД к пище «Бережник» гибели животных до 15-х суток не выявлено. По всей видимости, комплексное использование цитостатической терапии и БАД к пище «Береж-ник» повышает адаптационные ресурсы организма, уменьшает явления

эндогенной интоксикации, обязательно присутствующей при неопластическом процессе и уменьшает побочные эффекты действия цитостати-ческого препарата на организм.

Анализируя морфофункциональные изменения лимфатических узлов на фоне комплексного использование БАД к пище «Бережник» одновременно с цитостатической терапией (цисплатин), показано, что подобное сочетание влияет преимущественно на изменения «глубокой коры» регионарного к опухоли почечного лимфатического узла. Достоверно значительно уменьшается относительная площадь паракортикальной зоны( на 18%), причем только на фоне использования цисплатина таких изменений не выявлено, однако в цитологическом составе зоны достоверных отличий по сравнению как с нелеченными животными, так и в условиях коррекции только цисплатином обнаружено не было. Кроме паракортикальной зоны, значительным изменениям на фоне коррекции цисплатином в сочетании с БАД «Бережник» по сравнению с монотерапией цисплатином подвержено мозговое вещество почечного лимфатического узла и преимущественно мозговые тяжи, которые значительно увеличиваются, но в цитоархитектонике которых так же, как и в пара-кортикальной зоне выраженных изменений не обнаружено - сохраняется высокое количество незрелых форм клеток, плазмобластов. В подвздошном лимфатическом узле произошли совсем другие изменения, чем в структуре почечного в таких же, комбинированных условиях коррекции. Показано, что использование БАД в сочетании с цисплатином оказывает выраженное влияние на синусный и стромальный компоненты лимфатического узла. По сравнению с нелеченными животными и монотерапией только цисплатином значительно увеличиваются и краевой, и, особенно мозговые синусы. Значительно уменьшаются размеры капсулы, по всей видимости, за счет уменьшения отека на фоне показанной активации дренажной системы и на фоне улучшения циркуляции лимфы внутри узла уменьшается и относительная площадь трабекул. При коррекции экспериментальной опухоли яичка цисплатином в сочетании с БАД «Бережник» в ткани яичка наблюдалось некоторая сохранность структур яичка, местами определялся относительно сохранный сперматогенный эпителий. В некоторых полях зрения опухолевая ткань замещена полями некроза и здесь же участки разрастания соединительной ткани. Встречаются патологические митозы опухолевых клеток. Стромально-паренхиматозный индекс возрос относительно неле-ченных животных на 28,6% и на 11,9% в сравнении с группой коррекции

только цисплатином. Ядерно-цитоплазматический индекс стал меньше на 26,1% относительно нелеченных животных и на 9,1% в сравнении с животными, которым вводился только цисплатин.

6. Использование «платисерина» в комбинации с БАД приводило к своеобразным изменениям в структуре регионарного к опухолевому очагу почечного лимфатического узла.. Выраженные изменения произошли в мозговом веществе узла - на фоне дополнительного использования БАД - значительно увеличились относительные площади мозговых тяжей, в которых особенно изменилось содержание бластных форм клеток (в 4,6 раза). Вообще, следует отметить, что на фоне дополнительного к цитостатической терапии введения БАД по всем зонам почечного лимфатического узла увеличивается численность именно бластных форм клеток, незрелых плазмоцитов, средних лимфоцитов. Кроме мозговых тяжей, значительные преобразования претерпевает и синусная система узла - значительно уменьшаются как краевой, так и особенно, мозговые синусы, в клеточном составе которых по сравнению с монотерапией цитостатиком стало значительно меньше макрофагов, средних и малых лимфоцитов. Все это свидетельствует о том, что дополнительный к цитостатической терапии прием БАД к пище «Бережник», по всей видимости, способствует стимуляции В клеточного гуморального иммунитета на фоне активных Т- клеточных иммунных реакций.

В структуре подвздошного лимфатического узла на фоне дополнительного приема БАД «Бережник» в значительной степени стимулируется мозговое вещество, и, что характерно именно для подвздошного лимфатического узла - именно мозговые тяжи. Только в условиях коррекции опухолевого роста комбинированным способом - цитостатик и БАД «Бережник» - подвздошный лимфатический узел меняет свою функциональную специализацию и становится промежуточным ( корково-мозговой индекс составляет 1,4). В синусной системе узла также произошли своеобразные изменения - на фоне приема БАД - в отличие от монотерапии цитостатиком также увеличиваются мозговые синусы, но сокращается краевой, что свидетельствует о дополнительном перераспределении лимфы внутри узла. По всем зонам узла так же, как и в структурах почечного лимфатического узла отмечается значительное увеличение бластных форм клеток, средних лимфоцитов и в большей степени уменьшается количество ретикулярных клеток, как в центрах размножения, так и мозговых тяжах. Все вышеперечисленное свидетельствует о стереотипном ответе лимфатических узлов независимо от

отдаленности к очагу поражения на дополнительное к цитостатической терапии введение БАД к пище, характеризующееся активацией дренажной системы узлов и активной бласттрансформацией клеток лимфоид-ного ряда. В ткани яички наблюдалась сохранность эпителиальных структур, сперматогенного эпителия. Очаги замещения опухолевой ткани соединительной или жировой тканью сочетались с небольшими полями некроза. Патологические митозы опухолевых клеток заметно меньше. Стромально-паренхиматозный индекс возрос относительно нелечен-ных животных на 33,1 % и на 9,2% в сравнении с группой коррекции только платисерином. Ядерно-цитоплазматический индекс стал меньше на 24,6% относительно нелеченных животных и на 14,2% в сравнении с животными, которым вводился только платисерин.

7. Исследование ряда микроэлементов в опухолевой ткани и сыворотке крови экспериментальных животных выявило значительное увеличение концентрации цинка и магния, особенно в группах с сочетанной коррекцией (цитостатики и БАД «Бережник»). Своеобразные изменения выявлены для железа. Из литературы известно, что опухоли синтезируют повышенное количество трансферрина, соответственно, в организме при неоплазиях в повышенном количестве утилизируется железо, происходит подавление синтеза ферритина и активизация синтеза трансфер-рина, что приводит к увеличению концентрации сывороточного железа и уменьшению его тканевого депо. В нашем исследовании выявлено, что уровень железа в сыворотке крови в динамике опухолевого роста и его коррекции не меняется, оставаясь высоким на протяжении всего эксперимента, а в ткани яичка уменьшается и самое минимальное содержание выявлено при коррекции цисплатином и в сочетании с БАД «Береж-ник». В ткани яичка отмечается высокое содержание кальция во всех группах с коррекцией, превышая показатель у интактных животных на фоне уменьшения его концентрации в сыворотке. В опухолевой ткани при коррекции новым препаратом «платисерином», как в виде монотерапии, так и в группе с сочетанной коррекцией отмечено значительное (в 21,1 раза) накопление платины. Следует отметить, что, сравнивая содержание микро-макроэлементов сыворотки крови в группах с коррекцией цисплатином и платисерином, достоверных отличий между группами по большинству элементов не выявлено, за исключением содержания платины и кальция. Таким образом, полученные результаты свидетельствуют об очень сложной специфике минерального и микроэлементного состава при экспериментальном опухолевом росте.

Полученные данные свидетельствуют, что морфофункциональные изменения в почечном лимфатическом узле являются маркером изменений, происходящих в лимфатическом регионе при экспериментальной опухоли яичка. Новый препарат «платисерин» обладает более выраженным противоопухолевым действием по сравнению с цисплатином, по-видимому, за счет увеличения биодоступности платины для экспериментальной опухоли. Фитосбор, представленный в БАД к пище «Бережник», усиливает противоопухолевое действие цитостатиков, уменьшая явления эндогенной интоксикации, всегда определяющейся при опухолевом росте.

Большинство онкологов склоняется к мнению, что ведущую роль в сдерживании онкологической смертности в 2004 году будут играть не только новые синтезируемые химиопрепараты, но и изменение навыков питания и использование диеты.

Выводы.

К Выявлено, что почечный и подвздошный лимфатические узлы экспериментальных животных (мыши) в нормальных условиях гемо- лим-фоциркуляции являются регионарными лимфатическими узлами яичка, причем почечный лимфатический узел является регионарным лимфатическим узлом первого порядка, а подвздошный лимфатический узел -регионарным лимфатическим узлом второго порядка. Почечный и подвздошный лимфатические узлы по своей структурно-функциональной специализации относятся к узлам компактного типа.

2. Разработана модель экспериментального опухолевого роста в яичке, получаемая путем введения клеточной культуры опухолевых клеток Эрлиха в паренхиму яичка, позволяющая проводить исследование регионарного лимфатического русла с сохранением его топографо-анатоми-ческих соотношений. Экспериментальная опухоль представлена опухолевым узлом, по периферии выявлены явления выраженного лимфоста-за, расширение прелимфатических пространств.

3. На 15-е сутки экспериментального опухолевого роста в яичке возникают характерные структурно-клеточные преобразования в почечном и подвздошном лимфатических узлах:

В почечном лимфатическом узле наблюдается увеличение размеров коркового вещества, вторичных лимфоидных узелков; во всех структурно-функциональных зонах узла выявлено увеличение количества макрофагов и ретикулярных клеток.

В подвздошном лимфатическом узле показано значительное увеличение площади паракортикальной зоны. В цитоархитектонике узла во всех

зонах преобладают и незрелые клетки лимфоидного ряда (увеличение числа лимфобластов и средних лимфоцитов).

4. Введение препаратов платины при экспериментальном опухолевом росте в яичке приводит к деструкции опухолевого узла- появлению в опухолевом узле многочисленных очагов некроза, частичному замещению опухолевой ткани соединительной или жировой тканью, увеличению стромально-паренхиматозного и уменьшению ядерно-цитоплазма-тического соотношений. При использовании «платисерина» увеличивается область деструкции опухолевого узла и стромально-паренхиматоз-ное соотношение.

5. Введение цисплатина при экспериментальном опухолевом росте в яичке вызывает в почечном лимфатическом узле выраженную активацию Т-зависимой зоны - увеличение площади паракортикальной зоны, уменьшение размеров лимфоидных узелков и синусной системы узла на фоне уменьшения по всем зонам относительного количества макрофагов и ретикулоцитов. При использовании цисплатина в подвздошном лимфатическом узле выявлена выраженная активация В-зависимой зоны узла.

6. Введение «платисерина» при экспериментальном опухолевом росте в яичке в почечном лимфатическом узле вызывает активацию Т-зави-симой зоны - увеличение площади паракортикальной зоны, уменьшение размеров лимфоидных узелков и синусной системы узла на фоне уменьшения по всем зонам относительного количества макрофагов и ретику-лоцитов, а также увеличение бластных форм клеток по всем зонам узла. В подвздошном лимфатическом узле отмечается значительное уменьшение размеров соединительно-тканных структур (капсула, трабекулы).

7. Сочетанное использование препаратов платины и фитокоррекции (БАД к пище «Бережник») при экспериментальном опухолевом росте в яичке способствует уменьшению летальности, уменьшению ядерно-ци-топлазмотического соотношения, увеличению стромально-паренхима-тозного соотношения в опухоли. Одновременное использование циспла-тина и фитокоррекции в приводит к увеличению размеров как Т-, так и В-зависимой зон почечного и подвздошного узлов. Одновременное использование «платисерина» и фитокоррекции приводит в подвздошном лимфатическом узле к значительному увеличению мозгового вещества и увеличение числа незрелых лимфоидных клеток в структурно-функциональных зонах лимфатического узла.

8. В условиях развития неопластического процесса в яичке наибольшим колебаниям подвергается содержание следующих элементов: цинк,

железо, магний, кальций. Выявлено, что цинк и кальций накапливаются в опухолевой ткани. При использовании препаратов платины, особенно «платисерина» как в ткани яичка, так и в крови значительно увеличивается содержание платины.

Практические рекомендации

1. Способ создания экспериментального опухолевого роста в яичке может использоваться для изучения регионарного лимфатического русла органа в условиях неопластического процесса в нем и первичного отбора противоопухолевых препаратов.

2. Совместное использование БАД к пище «Бережник» и цитостати-ков на основе платины эффективно и позволяет снизить явления интоксикации и приводит к активации лимфопролиферативных процессов.

Список изобретений и работ, опубликованных по теме диссертации

1. Патент на изобретение. Способ моделирования опухолевого процесса яичка, применяемый для исследования его регионарного лимфатического русла. №2220458 от 27 декабря 2003 года (соавт. Бородин Ю.И., Асташов В.В., Исаенко В.И., Ларионов П.М., Малыгин М.В.)

2. Моделирования опухолевого роста в яичке с целью изучения состояния регионарного лимфатического русла и противоопухолевой активности новых цитостатиков // Бюллетень СО РАМН, 2002 - №4. - С. 82-86 (соавт. Бородин Ю.И., Асташов В.В., Исаенко В.И., Старкова Е.В.)

3. Лечение экспериментальной опухоли яичка цитостатиками на основе платины и фитопрепаратами//Тезисы межрегиональной конференции — проблемы экспериментальной, клинической и профилактической лимфалогии: Труды НИИКиЭл СО РАМН, Новосибирск -Т.9.-С.32-35 (соавт. Асташов В.В., Исаенко В.И.)

4. Способ моделирования опухолевого процесса в яичке, применяемый для изучения противоопухолевой активности новых цитостатиков и регионарного русла яичка в условиях опухолевого роста // Тезисы межрегиональной конференции — проблемы экспериментальной, клинической и профилактической лимфалогии: Труды НИИКиЭл СО РАМН, Новосибирск, 2002 - Т.9. - С. 36-38. (соавт. Асташов В.В., Исаенко В.И.)

5. Способ моделирования опухолевого процесса в яичке // Тезисы докладов 63-й сессии студентов и молодых ученых 24 апреля 2002 года, Новосибирск. - С. 241-242. (соавт. Асташов В.В., Исаенко В.И., Титяев И.И., Гайтан А.С.)

!>-27ее

Фермат 60Ч84'/16. Тираж 100. Усл. печ.л. 1,0. Заказ №7.

Отпечатано в тип. СО РАМН 630117, г. Новосибирск, ул. Академика Тимакова, 2/12

АКТУАЛЬНОСТЬ ТЕМЫ.

Проблема лечения злокачественных новообразований является одной из наиболее актуальных в медицине в настоящее время. По данным статистики каждый пятый житель России заболевает в течение жизни одной из форм злокачественных опухолей. При этом отмечается постоянное, неуклонное увеличение онкологических больных, как в России, так и в других странах. По результатам исследования Госкомстата России в 1990 количество больных выявленных с установленным впервые в жизни диагнозом злокачественное новообразование составляло 264,5 на 100000 населения, а в 2000 году аналогичный показатель составил 309,9, увеличившись за 10 лет на 15%.

Статистические данные свидетельствуют о необходимости и актуальности проведения фундаментальных исследований, направленных на распознавание причин, механизмов развития и распространения злокачественных опухолей и в итоге к совершенствованию методов их профилактики и лечения.

Большинство злокачественных опухолей на различных этапах своего развития метастазируют по лимфатической системе (Грех И.Ф. и др., 1966; Зербино Д.Д., 1974; Каралин Е.И. и др., JIM., 1996). Роль лимфатической системы в организме - под держание постоянства внутренней среды, в том числе и осуществление дренажно-детоксикационной и лимфопоэтической функций (Бородин Ю.И., 1999).

В структуре злокачественных опухолей половых органов - опухоли яичка встречаются достаточно редко и составляют 0,5-3% (Б.П. Матвеев и соавт., 1983; D. Shottenfeld, 1981; H.A. Лопаткин и соавт., 1995), но среди причин смертности у мужчин, умерших во второй и третьей декадах жизни, в 11-13% случаев смерть обусловлена именно тестикулярными опухолями ( A.M. Гарин., 1986).

Злокачественные опухоли яичка имеют тенденцию к быстрому метастазированию. В первую очередь метастазами поражаются регионарные лимфатические узлы, расположенные в зоне эмбриональной закладки, в области почечных сосудов, спереди от аорты и нижней полой вены до уровня отхождения нижней брыжеечной артерии (Тиктинский О. Л. ,1990). В литературе отсутствует подробное описание путей оттока лимфы из яичка при опухолевом росте в нем и особенности реакции лимфатического узла на неопластический процесс в данном органе. При некоторых формах опухолей яичка метастазы возникают так часто, что проблема лечения больного сводится в значительной степени к лечению метастазов (Чебан Н.Л., 1983). ЕтЬогп Ь.Н.,(1989) доказал, что именно герминогенные опухоли яичка уникально чувствительны к химиотерапевтическому лечению и, поэтому цитостатики, в том числе на основе платины являются обязательными составляющими схем химиотерапии при лечении всех стадий заболевания. Вместе с тем результаты терапии пациентов с запущенными формами рака яичка при наличии метастазов нередко являются неудовлетворительными. Необходимость создания новых противоопухолевых препаратов диктуется не только требованиями, предъявляемыми комбинированной химиотерапией, но и хорошо известными фактами наличия первичной и индуцированной рефрактерности, преодоление которой достигается путем изменения схем лечения, чередованием новых препаратов, применением различных модуляторов биологического эффекта (Акимов Л.А, 1994, Валякина Т.И., 2003, Монцевичуте-Эрпнгене Г.В., 1975). Кроме этого, одной из основных задач онкологии является создание новых препаратов, обладающих большей избирательностью противоопухолевого действия и меньшей токсичностью, так как многие из имеющихся цитостатиков оказывают повреждающие действие на те или иные жизненно важные органы, кроветворную ткань, иммунную систему (Ишбаева Г.Г.,1999). Поэтому использование лекарственных трав, с противоопухолевой активностью и с богатейшим набором биологически активных веществ, является неисчерпаемым источником такого рода препаратов.

Актуальным представляется изучение реактивной способности регионарных лимфатических узлов яичка при опухолевом росте и в условиях терапии различными противоопухолевыми препаратами -цитостатиками и фитосборами, а также непосредственное действие на первичную опухоль новых препаратов с предполагаемой цитостатической активностью.

ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Выявить особенности структурно-клеточной организации почечных и подвздошных лимфатических узлов в физиологических условиях, экспериментальном опухолевом росте в яичке и при введении платиносодержащих цитостатиков в виде монотерапии и в сочетании с фитопрепаратами.

ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ.

1. Изучить структурную организацию почечных и подвздошных лимфатических узлов в норме и при экспериментальном опухолевом росте в яичке.

2. Исследовать структурную организацию почечного и подвздошного лимфатических узлов в условиях опухолевого роста в яичке при его коррекции противоопухолевыми препаратами (цисплатином и «платисерином» в виде монотерапии).

3. Выявить структурную организацию почечного и подвздошного лимфатических узлов в условиях опухолевого роста в яичке при его коррекции противоопухолевыми препаратами (цисплатином и «платисерином» в сочетании с фитокоррекцией (биологически активной добавкой к пище «Бережник»)

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Выявленные структурные изменения, происходящие в лимфатическом узле при моделировании опухолевого процесса в яичке, помогут лучше понять механизм неопластического процесса в яичке и особенности метастазирования злокачественных опухолей данной локализации.

Детальное изучение преобразований, происходящих в почечном и подвздошном лимфатических узлах при экспериментальном опухолевом росте в яичке, поможет глубже понять роль и функции лимфатических узлов при данном патологическом процессе.

Сравнительный анализ структурных изменений в лимфатических узлах при экспериментальном опухолевом росте в условиях коррекции различными препаратами платины позволит более дифференцированно подходить к выбору противоопухолевого препарата при лечении опухолей яичка. Изучение морфофункциональных преобразований лимфатических узлов при введении противоопухолевых препаратов платины в виде монотерапии и в комбинации с БАД к пище «Бережник» и их сравнительная оценка позволит на практике создать более эффективные схемы противоопухолевой терапии злокачественных новообразований яичка.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА.

Получены дополнительные данные о строении и структурно-функциональной организации почечного и подвздошного лимфатических узлов в физиологических условиях.

Получены дополнительные данные о структурно - функциональных преобразованиях, происходящих в почечном и подвздошном лимфатических узлах при экспериментальном опухолевом процессе в яичке.

Показано, что коррекция экспериментального опухолевого роста в яичке новым противоопухолевым препаратом «платисерин», разработанным на кафедре неорганической химии Новосибирского Государственного университета, оказывает более выраженное действие на опухолевую ткань в сравнении с цисплатином.

ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ.

1. В нормальных условиях гемо- лимфоциркуляции у экспериментальных животных(мыши) почечный лимфатический узел является регионарным лимфатическим узлом 1-го порядка для яичка, а подвздошный регтонарным лимфатическим узлом 2-го порядка.

2. Экспериментальный опухолевый рост в яичке вызывает характерные структурно-функциональные преобразования в регионарных лимфатических узлах, зависящие от их анатомической локализации: для почечного лимфатического узла характерны изменения в периферических отделах коркового вещества, а для подвздошного лимфатического узла характерны изменения в глубоких отделах коркового вещества.

3. Введение препаратов платины (цисплатин, «платисерин») при экспериментальном опухолевом росте в яичке вызывает деструктивные изменения в ткани опухоли (некроз, изменение стромально-паренхиматозного соотношения) и структурные преобразования в региональных лимфатических узлах, зависящие от их локализации, причем использование «платисерина» вызывает более выраженные эффект.

4. Сочетание препаратов платины и фитокоррекции (БАД к пище «Бережник») при экспериментальном опухолевом росте в яичке приводит к увеличению размеров Т и В-зависимых зон в регионарных лимфатических узлах, активации лимфопролиферативных процессов в их структурно-функциональных зонах.