Автореферат и диссертация по медицине (14.00.06) на тему:Изучение полиморфных вариантов некоторых генов-кандидатов ИБС у русских мужчин молодого и среднего возраста
- Ученая степень
- кандидата медицинских наук
- ВАК РФ
- 14.00.06
Автореферат диссертации по медицине на тему Изучение полиморфных вариантов некоторых генов-кандидатов ИБС у русских мужчин молодого и среднего возраста
"О
ООЗ169444
На правах рукописи
ГОЛУБЕВА АЛЕКСАНДРА АНДРЕЕВНА
Изучение полиморфных вариантов некоторых генов-кандидатов ИБС у русских мужчин молодого и среднего возраста.
14 00 06 - кардиология
АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук
Москва-2008
1 5 МАЙ 2008
003169444
Работа выполнена в ГОУ ВПО Московская медицинская академия им И М Сеченова Росздрава
Научный руководитель:
доктор медицинских наук, Абрам Львович Сыркин
профессор
Официальные оппоненты:
доктор медицинских наук, Жанна Михайловна Сизова
профессор
доктор медицинских наук, Сергей Николаевич Терещенко
профессор
Ведущее учреждение:
Государственный научно-исследовательский центр
профилактической медицины Росздрава
Защита диссертации состоится « 2008 г в часов
на заседании диссертационного совета Д208 040 05 в Московской медицинской академии им И М Сеченова (119991 Москва, ул Трубецкая, д 8 строение 2)
С диссертацией можно ознакомиться в Фундаментальной библиотеке Московской медицинской академии им ИМ Сеченова (117998, г Москва, Нахимовский проспект, д 49)
Автореферат разослан «Л. .
2008г
Ученый секретарь диссертационного Елена Васильевна Волчкова
совета, доктор медицинских наук,
профессор
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность проблемы Одним из основных направлений в здравоохранении является разработка эффективных мер профилактики заболеваний, на долю которых приходится наиболее высокий процент инвалидизации и смертности среди населения большинства высокоразвитых стран [Оганов РГ, 1999] В первую очередь к ним относятся ишемическая болезнь сердца (ИБС) Давно известно, что факторами риска развития ИБС являются курение, ожирение, артериальная гипертензия (АГ), гиперхолестеринемия (ГХС), малоподвижный образ жизни, сахарный диабет Однако, в последнее время появились работы, свидетельствующие, что наряду с факторами внешней среды существует также генетическая предрасположенность к этому заболеванию
За последнее десятилетие был обнаружен целый ряд мутаций, приводящих к раннему развитию ИБС и инфаркта миокарда (ИМ) На сегодняшний день описано более 700 различных мутаций гена рецептора липопротеина низкой плотности (РЛПНП), изменяющих аминокислотную структуру белка, в результате которых нарушается взаимодействие этого рецептора с ЛПНП и липопротеинов очень низкой плотности (ЛПОНП) [Hobbs НН, 1992, Мандельштам МЮ, 2002] Это является причиной семейной гиперхолестеринемии, что приводит к раннему развитию ИБС и ИМ Мутация гена аполипопротеина В (АРОВ) 3500Arg—>Gln приводит к замене аминокислоты аргинин на глугаминовую кислоту вблизи от центра связывания с РЛПНП Это также нарушает взаимодействие рецептора с ЛПНП и приводит к такой же клинической картине что и мутации гена РЛПНП ГХС и раннему развитию ИБС и ИМ [Hixson J Е, 1992] Однако, эти мутации крайне редки они встречаются с частотой не более чем 1 случай на 500-700 человек и поэтому не могут объяснить генетические основы этих заболеваний
В ходе расшифровки генома человека были выявлены многочисленные полиморфные варианты ДНК, когда у разных людей в определенном
положении находятся разные нуклеотиды Такие изменения также являются мутациями, однако, поскольку они расположены в участках, некодирующих белки, либо они не нарушают аминокислотную структуру белков, их принято называть однонуклеотидными полиморфизмами или SNP На сегодняшний день в геноме человека обнаружено более 1 000 000 SNP [Lander ES.2001] Отличающиеся варианты ДНК по определенному положению называют аллелями Для сравнительного анализа проводят типирование SNP, у которых частота реже встречающегося аллеля превышает 5% Хотя SNP и не меняют аминокислотную структуру белков, они могут изменять регуляторные участки генов и, таким образом, определять количество соответствующего белка, либо могут оказаться сцепленными с другими функционально-значимыми мутациями, которые пока остаются неизвестными
Цель исследования: Изучить у больных ишемической болезнью сердца полиморфные варианты некоторых генов-кандидатов с целью оценить их роль в качестве маркеров возникновения заболевания. Задачи исследования
1 Изучить распределение частот генотипов полиморфных маркеров, изучаемых генов-кандидатов ИБС гена аполипопротеина Е (АРОЕ), гена липопротеинлипазы (LPL), гена белка переносчика эстерифицированного холестерина (СЕТР), гена синтазы окиси азота (eNOS), гена метилентетрагидрофолатредуктазы (MTHFR), гена фактора V (F5), гена протромбина (F2), гена ингибитора активатора плазминогена (PAI-1), гена ангиотензинпревращающего фермента (АСЕ) у русских мужчин, проживающих в Москве и Подмосковье, страдающих ИБС и в контрольной группе,
2 Провести анализ ассоциаций полиморфных вариантов генов-кандидатов ИБС с факторами риска заболевания,
3 Провести анализ ассоциаций полиморфных вариантов генов-кандвдатов ИБС с содержанием липидов в сыворотке крови (ОХС, ХСЛВП, ХСЛНП, ТГ),
4 Провести анализ ассоциаций полиморфных вариантов генов-кандидатов ИБС с показателями свертывающей системы крови (фибриноген, протромбиновый индекс (ПИ), активированное частичное тромбопластиновое время (АЧТВ))
Научная новизна У русских мужчин, проживающих в Москве и Подмосковье, с помощью современных методов исследования, впервые охарактеризованы частоты генотипов полиморфных вариантов генов-кандидатов одновременно нескольких систем Проведен анализ ассоциаций полиморфных вариантов изучаемых генов-кандидатов с риском развития ИБС, а также с показателями липидного спектра и свертывающей системы крови Результаты настоящего исследования могут служить отправными данными для дальнейшего изучения и поиска генетических факторов риска ИБС
Практическая значимость работы.
1 Анализ ассоциаций полиморфных маркеров генов-кандидатов ИБС может быть использован для выявления лиц, угрожающих по развитию данного заболевания и последующего проведения донозологической профилактики
2 Данные об ассоциациях полиморфных маркеров генов-кандидатов ИБС можно рекомендовать в практике медико-генетического консультирования для определения риска развития сердечно-сосудистых заболеваний и их осложнений,
3 Информация об ассоциациях полиморфных вариантов генов-кандидатов ИБС может быть использована в области генетической эпидемиологии, а также в популяционной генетике
Положения, выносимые на защиту:
1 Наряду с факторами внешней среды, существует генетическая предрасположенность к ишемической болезни сердца
2 Для выявления молекулярно-генетических факторов, определяющих предрасположенность к ИБС, можно проводить анализ SNP, расположенных внутри и/или вблизи генов с потенциально наибольшим вкладом в патогенез заболевания
3 С развитием ишемической болезни сердца, у русских мужчин молодого и среднего возраста, ассоциированы полиморфные маркеры гена АРОЕ, eNOS, PAI-1
4 Внедрение молекулярно-генетичесикх исследований в клиническую практику даст возможность выявлять группы риска по развитию и неблагоприятному течению сердечно-сосудистых заболеваний
Внедрение результатов работы: Методика определения полиморфных маркеров генов-кандидатов сердечно-сосудистых заболеваний внедрена в практику клиники кардиологии ММА им И M Сеченова
Апробация диссертации: проведена 05 декабря 2007 года на совместном заседании Кафедры профилактической и неотложной кардиологии ФППОВ, клиники кардиологии, отдела кардиологии НИЦ ММА им И M Сеченова
Публикации: по теме диссертации опубликовано 4 печатных работ
Структура и объем диссертации:
Диссертация изложена на 112 страницах машинописного текста, включает 26 таблиц, 6 рисунков, состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, изложения результатов исследования, заключения, выводов и практических рекомендаций Список литературы включает 160 работ отечественных и зарубежных авторов
б
ОБЪЕКТ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Объект исследования. Всего обследовано 253 мужчины русской национальности, проживающих в Москве и Подмосковье В основную группу включены 120 больных ишемической болезнью сердца, неродственных между собой и группой контроля, в возрасте до 55 лет (средний возраст на момент обследования 49,2±0,64) 85 пациентов имели в анамнезе перенесенный инфаркт миокарда, у 35 по данным селективной коронароангиографии был диагностирован коронарный атеросклероз
В группу контроля включено 133 человека, в возрасте до 60 лет (средний возраст на момент обследования 49,4±0,82) без клинических и диагностических признаков ишемической болезни сердца (отрицательная проба при проведении нагрузочного теста) Пациенты, страдающие сахарным диабетом, тяжелыми сопутствующими заболеваниями были исключены из исследования В контрольную группу также не были включены лица, страдающие сахарным диабетом и артериальной гипертензией
Пациенты и здоровые лица проходили обследование, а при необходимости лечение в Клинике кардиологии ММА им И М Сеченова в период с сентября 2005 по апрель 2007 год
Методы исследования. Все лица, вошедшие в исследование прошли тщательное медицинское обследование В числе параметров, ассоциирующихся с возникновением ИБС, анализировали набор стандартных факторов риска ИБС (возраст, пол, семейная история ИБС, курение, ожирение, наличие сопутствующих артериальной гипертонии, сахарного диабета и дислипидемии) Изучали характер течения ИБС (возраст, дебют заболевания, характер первых симптомов, длительность и особенности течения коронарной болезни) Группа мужчин, вошедших в контрольную группу также прошли медицинское обследование, включающее в себя сбор анамнеза, физикальное обследование, нагрузочный ЭКГ тредмил-тест для исключения ИБС Оценивали наличие таких факторов риска ИБС, как
семейная история коронарной болезни, курение, ожирение (по индексу массы тела вес в кг/рост в м2
Ожирение: Для оценки выраженности ожирения вычисляли индекс Кетле по формуле индекс Кетле= Вес(кг)/рост(м2) Под избыточным весом понимали индекс Кетле >25 кг/ м2
Курение Учитывался как факт курения, так и количество выкуриваемых в день сигарет
Отягощенная наследственность Оценка семейного анамнеза проводили на основе опроса больных с помощью стандартного опросника ВОЗ «Семейный анамнез» Регистрировали наличие у родственника первой степени родства (родители, родные братья и сестры, дети) наличие смерти от ИМ и инсульта Семейный анамнез считали отягощенным при наличии у пациентов двух и более больных родственников
Гиперлпцдемия: Определение концентраций ОХС, ТГ, ХСЛПВП, ХСЛПНП проводилось стандартным ферментативным методом в лаборатории клинического центра ММА им И М Сеченова
Пациентам основной группы определение показателей липидов крови проводили однократно до назначения липидснижающей терапии Пациенты, которые получали лечение липидснижающими препаратами до включения в исследование, не учитывались при анализе ассоциаций генов-кандидатов с показателями липидного спектра
К гиперхолестеринемии относили значения ОХС> 190 мг/дл, повышенным уровнем ХС ЛНП считали >115 мг/дл Сниженным уровнем ХС ЛВП у мужчин считали значения ХС ЛВП<40 мг/дл К гипертрИглицеридемии относили уровень ТГ>150 мг/дл [ВНОК, 2003] Генетическое обследование.
Генетическое обследование проводили на базе НИИ физико-химической медицины, в лаборатории генетики человека
ДНК лейкоцитов выделяли из 2 мл цельной крови с помощью набора Wizard (Promeda, USA) согласно инструкции производителя Анализ
полиморфных маркеров получали в ходе ПЦР-амплификации при помощи олигонуклеотидных пар праймеров с определенными последовательностями Для идентификации точечных однонуклеотидных замен в исследуемых генах использовали подходящие смеси дезокси- и дидезоксинуклеотидтрифосфатов (dNTP и ddNTP) и следующие олигонуклеотвдные зонды Затем проводили реакцию термоциклического минисеквенирования Очистку продуктов реакции минисеквенирования и секвенирования проводили с помощью SpectroCLEAN Kit (Sequenom, США) согласно инструкции фирмы-производителя
Статистический анализ. Статистическая обработка данных выполнена с помощью электронных таблиц ((Microsoft Excel», и пакета прикладных программ «Statistica for Windows» v 6 0, StatSoft Inc (США), SPSS 13 0
Все полученные количественные анамнестические, клинические, лабораторные и инструментальные данные обработаны методом вариационной статистики Для каждого количественного параметра были определены среднее значение (М), среднеквадратическое отклонение (5), ошибка среднего (га), медиана (Me), 95% доверительный интервал, для качественных данных - частоты (%)
Для сравнения числовых данных (после проверки количественных данных на нормальное распределение) использовали метод дисперсионного анализа ANOVA (для нескольких групп) и t-критерий Стьюдента для 2-х независимых выборок Для сравнения непараметрических данных применяли методы Круаскала-Уоллиса (для нескольких групп), попарное сравнение с помощью критерии Манна-Уитни (для 2-х групп) для несвязанных совокупностей
Для нахождения различий между качественными показателями использовали метод у? с поправкой Йетса на непрерывность, для вычисления, которого прибегали к построению «сетки 2x2» и «3x2», а также точный критерий Фишера для небольших выборок
Статистически значимыми считались отличия при р<0,05 (95%-й уровень значимости) и прир<0,01 (99%-й уровень значимости)
Связь между изучаемыми показателями оценивалась по результатам корреляционного анализа с вычислением коэффициента корреляции Пирсона (г) или Спирмена (R) и последующим установлением его значимости по критерию t
Для исследования влияние одной или нескольких независимых переменных на одну зависимую переменную использовался одномерный дисперсионный анализ (общий многофакторный)
Частоту аллелей вычисляли по формуле f=n/2N, где п - количество раз встречаемости аллеля (у гомозигот он учитывался дважды)
Относительный риск (ОР) заболеваемости вычисляли по методу Woolf по формуле
(а * d) / (Ь * с),
где а - количество больных, имеющих данный генотип, b — количество больных, не имеющих данного генотипа, с - количество здоровых индивидуумов с данным генотипом, d - количество здоровых индивидуумов, не имеющих данного генотипа
В том случае, когда один из показателей был равен О, относительный риск вычисляли по формуле, модифицированной Haldane для малых чисел [(2а+1 )(2d+1 )]/[(2Ь+1 )(2с+1)]
Для определения ассоциации качественных показателей с количественными показателями использовали многомерный многофакторный анализ (GLM) Оценка показателей учитывалась по двустороннему критерию «След Пиллая»
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ 1. Факторы риска ИБС.
На момент обследования средний возраст больных составлял 49,2±0,б4 года Средний возраст мужчин, вошедших в контрольную группу составил
49,4±0,82 года Клиническая характеристика больных представлена в таблице 1
Таблица 1. Сравнительный анализ факторов риска в основной и контрольной группе.
Показатель Основная группа Контрольная групп Р
(п=120) (п=133)
Возраст 49,2±0,64 49,4±0,82
Курение, Да 53,2 36,7 0,04
Нет 23,4 33,2 0,89
Ранее 24,0 30,1 0,33
Отягощенная 51,7 12 0,01
наследственность
ИМТ <25 кг/м' 50,8 62,4 0,41
ИМТ 25-29 кг/м2 26,7 24,8 0,36
ИМТ >30 кг/м1 22,5 12,8 0,02
Как следует из таблицы 1, между исследуемыми лицами не было выявлено межгрупповых различий по возрасту Так, средний возраст в основной группе составил 49,2±0,64 года, в контрольной группе 49,4±0,82 Рассматриваемые группы статистически достоверно отличались по семейному анамнезу ИБС (в основной группе чаще встречался отягощенный семейный анамнез, чем в контрольной группе (51,7% у больных против 12% у здоровых, р=0,01) Количество курящих было больше в основной группе, чем в контрольной группы (53,2% против 36,7%, р=0,04)
Также группы отличались по ИМТ (ИМТ >30 кг/м2 достоверно чаще встречался у больных ИБС (22,5%, против 12,8% у здоровых, р=0,02)
При изучении показателей липидного спектра оказалось, что средний уровень ТГ у лиц обоих групп находился в рамках нормальных значений (менее 200 мг/дл) [Expert Panel on Detection, Evaluation and Treatment of High Blood Cholesterol in Adults,2001], хотя у основной группы рассматриваемый показатель был достоверно выше, чем у контрольной (181±7,92 и 113±5,43, соответственно, р=0,01) Средний уровень общего ХС в основной группе несколько превышал нормальные значения в 200 мг/дл [Scandinavian Simvistatin Survival Study Group,1994] и достоверно отличался от показателя
в контрольной группе (255±4,42 и 180±4,64, соответственно, р=0,03) Данные представлены в таблице 2
Таблица 2. Сравнительный анализ показателей липидного обмена в основной и контрольной группе
Показатель ИБС (п=98) Контрольная группа (п=100) Р
ХС (мг/дл) 255±4,42 180±4,64 0,03
ЛПВП (мг/дл) 37,7±1,24 47,2±3,4 0,24
ЛПНП (мг/дл) 13б±3,81 138±10,3 0,68
ЛПОНП 39,2±1,88 31,6±2,51 0,12
1Г (мг/дл) 181±7,92 113±5,43 0,01
Среди показателей свертывающей системы крови, мы исследовали уровень фибриногена, ПИ и АЧТВ Пациенты, принимающие антиагрегаты, антикоагулянты и другие препараты, оказывающие влияние на показатели коагулограммы не учитывались при анализе Как следует из таблицы 3, уровень фибриногена не превышал нормальных значений (однако статистически достоверно был несколько выше в группе больных (3,19±0,07 против 1,9б±0,09, р=0,03) Показатели ПИ и АЧТВ не превышали нормальных значений как в основной, так и в контрольной группе и статистически не отличались
Таблица 3. Сравнительный анализ показателей свертывающей системы крови у основной и контрольной группы
Показатель ИБС (п= 98) Контрольная групп (п=84) Р
Фибриноген 3,19±0,07 1,96±0,09 0,03
ПИ 98,2±0,99 89,3±0,77 0,45
АЧТВ 32,8±0,91 34,2±0,74 0,32
2. Анализ результатов генетического обследования
Основной подход к изучению роли молекулярно-генетических факторов в развитие ИБС связан с выявлением группы генов с потенциально наибольшим вкладом в патогенез заболевания Мы исследовали гены-
кандидаты одновременно нескольких систем некоторые гены белков метаболизма и транспорта липидов (ген АРОЕ ген LPL, ген СЕТР), гены белков свертывающей системы крови (ген F2, ген MTHFR, ген F5, ген PAI-1), а также ген АСЕ и ген eNOS
2.1 Анализ ассоциаций полиморфных маркеров Е2/ЕЗ/Е4 гена аполипротеина Е с ИБС.
Ген АРОЕ активно изучается как один из наиболее известных генов-кандидатов, полиморфизм которого оказывает выраженное влияние на предрасположенность к ряду сердечно-сосудистых и нейродегенеративных заболеваний. Полиморфизм гена АРОЕ, изученный в нашей работе, связан с двумя сцепленными точковыми мутациями в позициях 112 (Arg-Cis) и 158 (Arg-Cis)
Результаты проведенного анализа показали наличие трех аллельных вариантов (Е2, ЕЗ, Е4) и 5 генотипов (Е2/ЕЗ, Е2/Е4, ЕЗ/ЕЗ, ЕЗ/Е4 и Е4/Е4) исследуемого локуса гена АРОЕ В нашем исследовании отсутствовали лица с генотипами АРОЕ2/Е2
На первом этапе мы определили частоту встречаемости полиморфных вариантов гена АРОЕ в основной и контрольной группе Частоты генотипов в основной группе составили АРОЕ2/3 (10,8), АРОЕЗ/З (47,8%), АРОЕЗ/4 (18,7%), АРОЕ 2/4 (2,7%), АРОЕ 4/4 (0,8%) Частоты генотипов в контрольной группе составили' АРОЕ2/3 (12%), АРОЕЗ/З (62,4%), АРОЕЗ/4 (10,2%), АРОЕ2/4 (0,8%), АРОЕ 4/4 (1,5%) При сравнении основной группы и контрольной группы по распределению частот генотипов оказалось, что в контрольной группе достоверно чаще преобладал генотип АРОЕЗ/З (р=0,04) При этом, относительный риск развития заболевания при данном генотипе снижен (ОР=0,51, 95%ДИ [0,26-0,89] В основной группе генотип АРОЕЗ/4 встречается достоверно чаще, чем в контрольной группе (р=0,04) При этом относительный риск развития ИБС, при наличии генотипа АРОЕЗ/4, увеличивался практически в 3 раза (ОР=2,89, 95%ДИ [1,36-4,89]
Рисунок 1. Распределение частот генотипов полиморфных маркеров гена АРОЕ в основной и контрольной группе.
100Т"Г.............
% 50
□ Больные
□ Контроль
р<0,05 В2 4 48
| 10,8
12
р<0,05
Ж?-
2.7 0,8 0,8 1,5
АРОЕ2Л АРОЕЗ/З АРОЕЗМ АРОЕ2/4 АР04/4
В связи с тем, что мы получили достоверные результаты по распределению частот генотипов между основной группой и контрольной группой, мы проанализировали, существуют ли отличия по распределению частот генотипов у лиц с перенесенным ИМ и без ИМ. Данные представлены на рисунке 2.
Рисунок 2. Распределение частот генотипов и аллелей полиморфных маркеров гена АРОЕ у больных, перенесших ИМ и без ИМ.
% 50
□ ИБС, ИМ □ ИБС 74,3
32,4 ¿Зч??
ОЛ
10,611,4 Щ 1.8 1,2 0,8 0,8
АРОЕ2/3 АРОЕЗ/З
При сравнении подгрупп больных между собой, выявлены достоверные различия среди лиц, перенесших ИМ. Генотип АРОЕЗ/4 встречается чаще у пациентов, которые перенесли ИМ, чем в группе больных без перенесенного
ИМ (20,0% против 8,6%, р =0,03) При этом риск развития ИМ повышен при наличии генотипа АРОЕЗ/4 (ОР =1,49 95%ДИ [1,12-2,24]
Полученные данные позволяют предположить, что именно аллель Е4 и генотип АРОЕЗ/4 можно рассматривать как повышающие риск развития ИМ, но их действие на уровне популяции в целом не явно выражено из-за низкой частоты данного аллеля и генотипа
Мы не получили достоверных различий между генотипами АРОЕ 2/4 и АРОЕ4/4 в основной и контрольной группе, где также встречается аллель Е4, что вероятнее всего связано с низкой частотой встречаемости данных генотипов Однако, это не исключает вклад аллеля Е4 в развитие ИБС у русских мужчин
2.2 Анализ ассоциаций полиморфного маркера S447X гена LPL с
ИБС.
Полиморфный маркер S447X гена LPL в настоящее время еще малоизучен Однако известно, что вариант G полиморфизма S447X ассоциирован с благоприятными изменениями липидного спектра пониженным уровнем ТГ и повышенным уровнем ХСЛПВП Генотип G/G полиморфизма 8447является защитным фактором[7еп1аа R, 1995]
Частоты распределения генотипов полиморфизма S447X гена LPL в основной группе являются следующими S447X С/С (84,2%), S447X G/C (10,8%), S447 XG/G (0,8%) Частоты распределения генотипов полиморфизма S447X гена LPL в контрольной группе составили S447X С/С (80,5%), S447G/C (9,8%), S447 G/G (0,8%)
Как видно из рисунка 3, нами не было получено статистически значимых различий по частотам встречаемости генотипов полиморфного маркера S447 гена LPL в основной и контрольной группе
При сравнении лиц с перенесенным ИМ и без ИМ по распределению частот генотипов достоверных отличий не обнаружено Данные представлены на рисунке 4
Рисунок З.Распределение частот генотипов полиморфного маркера S447 гена LPL
Рисунок 4. Распределение частот генотипов полиморфного маркера в447 гена ЬРЬв подгруппах с ИМ и без ИМ.
100|1 87,1 а ИБС, ИМ 0ИБС
СС ОС 00
Таким образом, у русских мужчин, полиморфный маркер S447X гена LPL не ассоциирован с риском развития ИБС.
2.3. Анализ ассоциаций полиморфизмов TaqlB и I405A гена СЕТР с
ИБС.
Ген СЕТР, который изучался в нашей работе, представлен двумя полиморфными вариантами: TaqlB и I405V. В литературе имеется небольшое количество данных, изучающих данные полиморфные варианты гена СЕТР и их вклад в развитие ИБС и ИМ.
Частоты распределения генотипов полиморфизма TaqlB в группе больных являются следующими TaqlBlB2 (30,0%), TaqlB2B2 (43,3%), TaqlB IB 1 (21,7%) В группе контроля распределение было следующим1 TaqlBlB2 (27,1 %), TaqlB2B2 (48,1%), TaqlBlBl (18,0%) Генотип В1В1 несколько чаще встречается в группе ИБС, результат не является статистически достоверным (р>0,05) Генотип В2В2 чаще встречался в группе контроля, однако результат также не является статистически достоверным Распределение частот генотипов полиморфизма I405A в основной группе является следующим I405V Ш (42,5%), I405VI/V (38,3%), I405V V/V (9,2%) В контрольной группе распределение выглядело таким образом I405V И (46,6 %), I405V I/V (32,3 %), I405V V/V (5,3%) В группе контроля несколько чаще встречался генотип II (42,5% против 46,6%, р>0,05), генотип VV чаще встречался в группе больных ИБС (9,2% против 5 3%, р>0,05)
По нашим данным генотип В1В1 полиморфизма TaqlB несколько чаще встречался в группе больных ИБС, что не противоречит раннее проведенным исследованиям [Inazu A,1990,InazuA,1994,KuivenchovenJ А,1998] Изучение полиморфизма I405V показало, что генотип II встречался чаще в группе здоровых людей, а генотип VV чаще встречался в группе ИБС Наши результаты не противоречат литературным источникам, однако результаты являются статистически не достоверными [Borggreve SE, 2006, Isaacs А,2007,]
2.4 Анализ ассоциаций генов метаболизма и транспорта липидов с факторами риска ИБС и показателями липидов крови. Одной из задач нашего исследования была попытка выявить взаимосвязь между определенными полиморфными вариантами генов АРОЕ, СЕТР, LPL и такими факторами риска ИБС, как ожирение, курение, отягощенная наследственность При сравнении частот распределения полиморфных вариантов указанных генов и факторами риска ИБС (курение, ожирение, семейный анамнез) достоверной значимости получено не было (р>0,05)
Для выявления ассоциации между генами метаболизма и транспорта липидов и показателями липидов крови (ОХС, ТГ, ЛПВП, ЛПНП) мы использовали многомерный многофакторный анализ (процедура GLM в системе SPSS 13 0) Данные представлены в таблице 4.
Таблица 4. Анализ ассоциаций генов АРОЕ, LPL S447, СЕТР taq, СЕТРI405A с показателями липидов крови
Гены Значимость двустороння по критерию след Пиллая
АРОЕ 0,87
S447LPL 0,97
СЕТР taq 0,61
CETPI405A 0,81
Однако, мы не получили ассоциации между генами-кандидатами и показателями липидов крови. Возможно, с одной стороны это можно объяснить небольшим количеством людей, вошедших в исследуемые группы, а с другой стороны неравномерностью распределения генотипов в исследуемых группах
2.5. Анализ ассоциаций G/T полиморфизма гена эндотелиальнон синтезы оксида азота с ишемической болезнью сердца
Ген эндотелиальный NO-синтетазы расположен на хромосоме 7q35-36 Нами был изучен полиморфизм E298D, мононуклеотидная замена в экзоне 7, приводящая к аминокислотной замене глутаминовой кислоты на аспарагиновую кислоту
Частоты распределения генотипов полиморфного маркера гена NOS в основной группе составили eNOS G/G (34,2%), eNOS G/T(43,3%), eNOS T/T-(10,0%) Частоты распределения генотипов гена NOS в контрольной группе следующие eNOS G/G (56,4%), eNOS G/T(28,6%), eNOS T/T (4,5%) В основной группе достоверно чаще встречается генотип eNOS Т/Т (р=0,02), при этом относительный риск развития ИБС повышен в 2,5 раза (ОР=2,29, 95%ДИ [1,13-4,34] Генотип eNOS G/T встречается также значительно чаще в
основной группе, чем в контрольной группе (р=0,02; ОР=1,13, 95%ДИ [0,241,38]. Генотип eNOS G/G чаще встречается в контрольной группе, при этом снижен и относительный риск развития ИБС (р=0,05, ОР 0,20; 95% ДИ [0,180,48]. Распределение генотипов гена eNOS представлено на рисунке 5. Рисунок 5. Распределение частот генотипов G\T гена NOS
При сравнении распределения частот генотипов между больными перенесшими инфаркт миокарда и больными, без инфаркта миокарда, оказалось, что генотип eNOS G/T достоверно чаще встречался у больных ИМ (49,4% против 28,6 %; р=0,01), по сравнению с группой больных без ИМ. Данные представлены на рисунке 6.
Рисунок 6. Распределение частот генотипов G\T гена NOS в подгруппах больных перенесших ИМ и в группе без ИМ.
Таким образом, в ходе нашего исследования, оказалось, что достоверно чаще аллель Т и генотип eNOS G/T и Т/Т встречаются в группе больных ИБС и именно у пациентов, перенесших инфаркт миокарда Наши данные согласуются с результатами мировых исследований, которые также демонстрируют связь аллеля Т и генотипа ТТ с риском развития ИБС, в том числе ИМ (Ichthara S ,1998, Shimasaki Y ,1998, Hmgorani A D ,1999)
При изучении ассоциации между определенными полиморфными вариантами гена NOS и анализируемыми факторами риска ИБС (отягощенная наследственность, курение, ожирение) оказалось, что лица, страдающие ИБС и курящие достоверно чаще имеют генотип NOS Т/Т, чем пациенты, которые не курят Данные представлены в таблице 5
Таблица 5. Сравнительный анализ частот распределения генотипов гена е1УОв среди курящих и некурящих лиц основной группы.
Курящие пациенты (n=50) Некурящие пациенты (n=28) P OP 95%ДИ
eNOS G/G 24,8 18,3 0,34 0,12
eNOS G/T 12,2 19,8 0,48 0,28
eNOS T/T 38,6 14,3 0,01 1,12[1,21-19,8]
В контрольной группе нами не было получено статистически значимых различий по частоте встречаемости генотипов гена еЖ)8 в группе курящих и некурящих Для других факторов риска также не было получено статистически значимых различий
Таким образом можно предположить, что сочетание такого фактора риска как курение и наличие аллеля Т и генотипа ТТ может увеличивать риск развития ИБС
2.6. Анализ ассоциаций Ш> полиморфизма гена ангиотензин-превращагощего фермента с ИБС.
Значительный интерес представляет изучение ассоциации между развитием сердечно-сосудистых заболеваний и вариантами генов,
кодирующих белки и принимающих участие в регуляции кровяного давления и сосудистого тонуса В первую очередь к таким белкам можно отнести белки ренин-ангиотензиновой системы Ключевым белком данной системы является ангиотензинпревращающий фермент В настоящее время выявлено три генотипа гена АПФ (на основе механизма вставки/делеции-вставка/отсутствие вставки 287-й пары нуклеотидов в 16 интроне) ББ и II-гомозиготы и Ш гетерозиготы {Дща! В ,1990]
Распределение частот генотипов и аллелей 1/0 полиморфизма в интроне 16 гена АСЕ в основной группе следующее АСЕ 1Д (25,8%), АСЕ1Я) (45,8%), АСЕБЛЭ (25,8%) В контрольной группе были получены следующие данные АСЕ 1Л (16,5%), АСЕЮ (54,1%), АСЕБЯ) (24,8%) Мы не получили межгрупповых различий по генотипам ОБ, ГО,II среди исследуемых групп (р>0,05) Также нами не было получено статистически значимых различий между пациентами, перенесшими ИМ и без ИМ
При сравнении частот распределения генотипов гена АСЕ и факторов риска ИБС достоверной взаимосвязи получено не было (р>0,05)
Таким образом, у русских мужчин не выявлено ассоциации между 1/0 полиморфизмом гена АСЕ и развитием ИБС
2.7. Гены-кандидаты белков свертывающей системы крови и анализ ассоциаций полиморфных вариантов с ИБС.
В нашей работе изучались следующие гены-кандидаты белков свертывающей системы крови ген метилентетрагидрофолатредуктазы (С-611-1), ген фактора V (0-1691-А), ген протромбина (0-20210-А), ген ингибитора активатора плазминогена (РА1-1 50/40) Частота распределения полиморфных вариантов указанных генов в основной и контрольной группе представлены в таблице 6
Исследуя наличие лейденовской мутации в гене ГУ, оказалось, что лейденовская мутация встречается чаще у пациентов, страдающих ИБС, однако результат не является статистически достоверным (р>0,05)
Также, мы не получили достоверных различий по наличию лейденовской мутации у лиц перенесших инфаркт миокарда, или без него Исследуя ген МТНШ и ген протромбина среди основной и контрольной группы, мы также не получили статистически достоверных различий (Р>0,05)
Таблица 6. Частота распределения полиморфных вариантов генов-кандидатов белков свертывающей системы крови в основной и
контрольной группе
Ген Генотипы Частота генотипа в группе больных ИБС, % Частота генотипов в контрольной группе, % Р ОР 95%ДИ
Р2 АО 1,7 4,5 0,11 0,23
во 97,5 93,2 0,87 0,11
Е5 АС 3,3 1,5 0,20 1,04
(Ю 95,8 96,2 0,43 1,22
МТ Ш Я СС 45,0 42,9 0,36 0,41
СТ 43,3 46,6 0,32 0,86
ТТ 9,2 8,3 0,40 0,14
РА1 44 28,3 34,6 0,14 1,21
45 50,0 38,3 0,03 1,21 [1,1114,231
55 18,3 24,1 0,13 0,98
В нашем исследовании в качестве полиморфного маркера гена РА1-1 рассматривалась мононуклеотидная делеция /вставка в промоторной области гена (позиция 675 промотера)-40(-675)50
Согласно нашим данным, достоверно чаще у больных ИБС встречался генотип РА1-140/5(} (р=0,03, ОР=1,21, 95%ДИ [1,10-12,21] При разделении больных на подгруппы, именно в группе больных без инфаркта миокарда достоверно чаще встречался генотип РА1-14С/50 Эти данные отличаются от опубликованных исследований, где именно аллель 4в ассоциировалась с инфарктом миокарда [ЕткэБоп Р,1995, N 055е1-0епшщ,1997 ]
Таким образом, можно предположить, что у русских мужчин, молодого и среднего возраста, выявлена ассоциация полиморфного маркера РА1-1 40/50 с развитием ишемической болезни сердца
Таблица 7. Частота распределения полиморфных вариантов генов-кандидатов белков свертывающей системы крови в основной группе у
лиц с перенесенным ИМ и без ИМ.
Ген Генотипы Частота генотипа в группе больных ИБС, ИМ; % Частота генотипов в группе ИБС Р ОР
¥2 АО 2,4 1,2 0,67 0,86
СЮ 96,5 100,0 0,67 0,97
¥5 Ав 3,5 2,9 0,43 1,24
СЮ 95,3 97,1 0,30 0,98
МТН га сс 43,5 48,6 0,30 0,90
ст 44,7 40,0 0,31 1,11
тт 9,4 8,6 0,44 1,20
РА1 44 30,6 22,9 0,18 1,34
45 44,7 62,9 0,03 0,70
55 22,4 8,6 0,88 0,61
При анализе ассоциаций полиморфных маркеров генов белков свертывающей системы крови с факторами риска ИБС мы не получили достоверно значимых различий (р>0,05) При анализе ассоциаций генов белков свертывающей системы крови и показателей коагулограммы, выявлена взаимосвязь гена МТНРЛ с показателями свертывающей системы крови Данные представлены в таблице 8
Таблица 8. Анализ ассоциаций генов Р5, Р2, МТИШ, РА1-1 с показателями свертывающей системы крови (ПИ, АЧТВ, фибриноген)
Гены Значимость двустороння по критерию след Пиллая
¥2 0,90
¥5 0,84
МТНИ1 <0,001
РА1-1 0,25
Анализируя средние показатели АЧТВ, фибриногена и ПИ, оказалось, что при генотипе СТ и ТТ гена МТШИ уровень АЧТВ несколько выше, чем при генотипе СС Данные представлены в таблице 9
Таблица 9. Средние показатели АЧТВ, фибриногена и ПИ при
разных генотипах гена MTHFR.
Зависимая переменная MTHF R Среднее Сто ошибка 95% доверительный интервал
Нижняя граница Верхняя граннца
АЧТВ (сек) СС 39,981 1,084 37,832 42,129
СТ 41,453 1,074 39,325 43,581
ТТ 46,800 2,473 41,901 51,699
Фибриноген (г/л) СС 3,321 ,108 3,107 3,534
СТ 3,030 ,107 2,819 3,241
ТТ 3,503 ,245 3,017 3,989
ПИ(%) СС 100,308 1,418 97,497 103,118
СТ 98,434 1,405 95,650 101,218
ТТ 84,700 3,235 78,291 91,109
Таким образом выявлена ассоциация гена MTHFR с показателями АЧТВ и фибриногена (р<0,05)
Таким образом, из приведенных выше данных следует, что у русских мужчин молодого и среднего возраста не выявлено статистически значимых различий по частоте встречаемости полиморфных маркеров генов LPL, СЕТР, АСЕ, F2, F5, MTHFR Обнаружена ассоциация полиморфных маркеров АРОЕЗ/4, NOS Т/Т, PAI-14G/5G с ишемической болезнью сердца в изученной нами популяции Эти данные еще раз показывают необходимость дальнейших исследований в данном направлении с целью выявления новых полиморфных вариантов генов-кандидатов сердечно-сосудистых заболеваний
выводы
1 У русских мужчин, проживающих в Москве и Подмосковье были обнаружены различия между больными ИБС и здоровыми людьми по следующим изученным генам. АРОЕ, еЖ)8, РА1
2 В группе больных ИБС не различающихся по давности и возрасту ИБС достоверно чаще встречались генотипы АРОЕЗ/4, N05Т/Т среди лиц, перенесших ИМ;
3 Полиморфный маркер 40/50 гена РА1-1 достоверно чаще встречался среди лиц, страдающих ИБС без перенесенного ИМ,
4 Выявлена ассоциация гена МТНРЯ с уровнем АЧТВ у пациентов, страдающих ИБС,
5 Полученные данные могут быть использованы при скрининговым исследовании для выявления лиц угрожающих развитие ИБС с целью проведения первичной профилактики заболевания,
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕДАЦИИ
1 Результаты исследования применимы в практическом здравоохранении для проведения донозологической профилактики сердечно-сосудистых заболеваний,
2 На основании данных, полученных в ходе генетического обследования возможно формирование генетического паспорта пациента;
3. Информация по распределению частот генотипов и аллелей среди русских мужчин, проживающих в Москве и Подмосковье может быть использована в области генетической эпидемиологии, в популяционной и эволюционной генетике для углубленного описания генофонда народонаселения.
Список работ по теме диссертации
1 Зайкина А А Савинецкая Г А, Маршева О В , Погода Т В , Генерозов Э В, Сыркин А Л Полиморфизм генов-кандидатов и их вклад в развитие ИБС у мужчин // В сборнике XIV Российского национального конгресса"Человек и лекарство" Тез докл — Москва, 2007 г — с 96
2 Зайкина А А, Савинецкая Г.А, Герок Д В, Маршева О В , Погода Т В , Генерозов Э В, Сыркин АЛ // Генетический полиморфизм при ишемической болезни сердца// Кардиология, 2008 т 48 №1 с 62-65
3 Голубева А А, Савинецкая Г А, Погода Т В, Терехов В Н, Потиевский Б Г , Генерозов Э В , Сыркин А Л Изучение некоторых генов-кандидатов и их вклад в развитие ишемической болезни сердца// В сборнике XV Российского национального конгресса"Человек и лекарство" Тез докл — Москва, 2008 г — с 394
4 Сильвестрова Г А, Голубева А А, Сыркин А Л , Генерозов Э В , Погода Т В , Терехов В Н, Потиевский Б Г Полиморфизм генов ренин-ангиотензин-альдостероновой системы и гена-ЪЮ-синтетазы и их влияние на развитие артериальной гипертонии у русских мужчин московской популяции// В сборнике XV Российского национального конгресса"Человек и лекарство" Тез докл — Москва, 2008 г — с 417
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
АГ Артериальная гипертензия
АД Артериальное давление
АРС Активированный протеин С
АЧТВ Активированное частичное тромбопластиновое время
ВТЭ Венозная тромбоэмболия
ГХС Гиперчолестеринемия
ДНК Дезоксирибонуклеиновая кислота
ИБС Ишемическая болезнь сердца
им Инфаркт миокарда
ИМТ Индекс массы тела
ИБС Индекс нарушения сократимости
КАТ Коронароангиография
КДР Конечный диастолический размер
КФК Креатинфосфосфаткиназа
лпвп Липопротеины высокой плотности
ЛПНП Липопротеины низкой плотности
ЛПОНП Липопротеины очень низкой плотности
олн Острая левожелудочковая недостаточность
ОПСС Общее периферическое сопротивление сосудов
пи Протромбиновый индекс
РЛПНП Рецептор липопротеинов низкой плотности
СНС Симпатическая нервная система
ссз Сердечно-сосудистые заболевания
сгхс Семейная гиперхолестеринемия
тг Триглицериды
ФВЛЖ Фракция выброса левого желудочка
ФР Фактор риска
хм Хиломикроны
хс Холестерин
чсс Частота сердечных сокращений
ЭКГ Электрокардиография
эхо кг Эхокардиографическое исследование
АСЕ Ангиотензинпревращающий фермент
АРОВ Аполипопротеин В
АРОЕ Аполипопротеин Е
СЕТР Белок переносчик эстерифицированного холестерина
п Протромбин
¥5 Фактор свертывания 5
ЬРЬ Липопротеинлипаза
МГНИ1 Метилентетагидрофолатредуктаза
ЫОБ Синтаза окиси азота
РА! Ингибитор активатор плазминогена
БЫР Однонуклеотидные полиморфизмы
Оглавление диссертации Голубева, Александра Андреевна :: 2008 :: Москва
Список используемых сокращений Введение
Глава 1. Обзор литературы
1.1.Введение
1.2.Гены белков метаболизма и транспорта липидов.
1.2.1.Ген аполипопротеин Е.
1.2.2.Ген липопротеинлипазы.
1.2.3.Ген белка переносчика эстерифицированного холестерина.
1.3. Гены белков свертывающей системы крови.
1.3.1.Ген коагуляционного фактора II
1.3.2. Ген фактора У.Лейденовская мутация
1.3.3.Ген метилентетрагидрофолатредуктазы
1.3.4.Ген ингибитора активатора плазминогена
1.4. Ген ангиотензинпревращающего фермента
1.5. Ген синтазы окиси азота
Введение диссертации по теме "Кардиология", Голубева, Александра Андреевна, автореферат
Актуальность темы:
Одним, из основных направлений в здравоохранении является разработка эффективных мер профилактики заболеваний, на долю которых приходится наиболее высокий процент инвалидизации и смертности среди населения большинства высокоразвитых стран [Оганов- Р.Г, 1999;Оганов Р.Г.,2000].
В первую очередь к ним относятся ишемическая болезнь сердца- (ИБС).
В общей структуре смертности от ИБС лица моложе 65 лет составляют 25% среди мужчин и 9% среди женщин.
По»эпидемиологическим данным, до* 50% всех случаев ранней ИБС в популяции, приходится^ на 2-6% семей с положительным семейным анамнезом, преждевременной* ИБС. Наличие ранней ИБС у одного родственника первой, степени родства увеличивает риск развития- ИБС у мужчин 20-39'лет в-4 раза, а у двух и более родственников <в< 12 раз [National Cholesterol Education Program, 1994; Hunt S.С, 1986].
Давно известно, что факторами риска (ФР) развития * ИБС являются курение, ожирение, артериальная! гипертепзия* (АГ), гиперхолестеринемия* (ГХС), малоподвижный образ жизни, сахарный диабет (СД). В то же время в последнее время появились работы, свидетельствующие, что наряду с факторами внешней. среды существует также генетическая предрасположенность к этому заболеванию.
За последнее десятилетие был обнаружен целый ряд мутаций, приводящих к раннему развитию ИБС и-ИМ. На сегодняшний день описано более 700 различных мутаций гена рецептора липопротеина' низкой» плотности (РЛПНП), изменяющих аминокислотную- структуру белка, в результате которых нарушается взаимодействие этого рецептора с ЛИНИ и* липопротеинов очень низкой плотности (ЛПОНП) [Hobbs Н.НД992; Мандельштам М.Ю, 2002]. Это- является причиной семейной гиперхолестеринемии, что приводит к раннему развитию ИБС и ИМ.
Мутация гена аполипопротеина В (АРОВ) 3500Arg—>Gln приводит к замене аминокислоты аргинин на глутаминовую кислоту вблизи от центра связывания с РЛПНП. Это также нарушает взаимодействие рецептора с „ ЛПНП и приводит к такой же клинической картине что и мутации гена РЛПНП: ГХС и раннему развитию ИБС и ИМ [Hixson J.E, 1992]. Однако, эти мутации крайне редки: они встречаются с частотой не более чем 1 случай на 500-700 человек и поэтому не могут объяснить генетические основы-этих ' заболеваний.
В ходе расшифровки генома человека были выявлены многочисленные полиморфные варианты дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК), когда у разных людей в определенном положении находятся1 разные нуклеотиды. Такие изменения» также являются? мутациями, однако, поскольку они расположены в участках, некодирующих белки, либо они не нарушают аминокислотную структуру белков, их принято называть, однонуклеотидными полиморфизмами или SNP. На сегодняшний- день в геноме человека обнаружено более 1 ООО ООО SNP [bander ES,2001]J Отличающиеся варианты ДНК по определенному положению называют аллелями. Для сравнительного анализа проводят типирование SNP, у которых частота реже встречающегося аллеля превышает 5%. Хотя SNP'h не меняют аминокислотную структуру белков, они могут изменять-, регуляторные участки генов, и, таким образом, определять количество соответствующего белка, либо могут оказаться сцепленными с другими» функционально-значимыми мутациями, которые пока остаются5 неизвестными.
Для выявления молекулярно-генетических факторов, определяющих предрасположенность к ИБС, анализируют SNP, расположенные внутри* и/или вблизи генов, с потенциально наибольшим вкладом в патогенез, заболевания:
Заболеваемость и смертность от ИБС характеризуется этнографической неоднородностью. Было показано, что на формирование наследственной предрасположенности к развитию заболевания оказывает влияние генетический фон популяции. Поэтому необходимо исследовать полиморфизмы ДНК кандидатных генов для каждой, отдельно взятой популяции.
Цель исследования:
Изучить у больных ишемической болезнью сердца ДНК-полиморфизмы- некоторых генов-кандидатов с целью оценить их роль в качестве маркеров развития заболевания:
Задачи исследования:
- Г. Исследовать распределение частот генотипов полиморфных маркеров генов-кандидатов ИБС: гена аполипопротеинаЕ (АРОЕ), гена липопротеинлипазы' (LPL) , гена белка переносчика эстерифицированного холестерина (СЕТР), гена синтазы окиси азота (eNOS), гена метилентетрагидрофолатредуктазы (MTHFR), гена фактора 5 (F5), гена протромбина (F2), гена ингибитора активатора плазминогена (PAI-1), гена ангиотензинпревращающего фермента (AGE), у русских * мужчин, проживающих в Москве и Подмосковье, страдающих ИБС и в^ контрольной! :. группе;
2. Провести анализ ассоциаций полиморфных вариантов генов-кандидатов ИБС с содержанием липидов в сыворотке крови (общий холестерин (ОХС), липопротеинов высокой платности (ЛПВП), ХС ЛПНП, ТГ);
3. Провести анализ ассоциаций полиморфных вариантов1 генов-кандидатов ИБС с показателями свертывающей системы крови (фибриногену протромбиновый индекс (ПИ), активированное частичное трмбопластиновое время (АЧТВ));
4. Провести анализ ассоциаций полиморфных маркеров генов-кандидатов ИБС с факторами риска заболевания (курение, ожирение, отягощенная наследственность).
Научная новизна: У русских мужчин, проживающих в Москве и Подмосковье, с помощью современных методов исследования, охарактеризованы частоты генотипов полиморфных вариантов генов-кандидатов одновременно нескольких систем: системы метаболизма и транспорта липидов, свертывающей системы крови, ренин-ангиотензин-альдостероновой системы, синтазы окиси азота. Проведен анализ ассоциаций полиморфных вариантов изучаемых генов-кандидатов с риском развития ИБС, а также с показателями липидного спектра и свертывающей системы крови. Результаты настоящего исследования могут служить отправными данными для дальнейшего изучения и поиска генетических факторов риска ИБС.
Практическая значимость работы.
1. Анализ ассоциаций полиморфных маркеров генов-кандидатов' ИБС может быть использован для выявления лиц, угрожающих по развитию данного заболевания и последующего проведения донозологической профилактики.
2. Данные об ассоциациях полиморфных маркеров генов-кандидатов ИБС можно рекомендовать в практике медико-генетического консультирования для определения риска развития сердечно-сосудистых заболеваний и их осложнений;
3. Информация об ассоциациях полиморфных вариантов генов-кандидатов ИБС может быть использована в области генетической эпидемиологии, а также в популяционной генетике.
Заключение диссертационного исследования на тему "Изучение полиморфных вариантов некоторых генов-кандидатов ИБС у русских мужчин молодого и среднего возраста"
1. Результаты исследования применимы в практическом здравоохранении для проведения донозологической профилактики сердечно-сосудистых заболеваний;
2. На основании данных, полученных в ходе генетического обследования возможно формирование генетического паспорта пациента;
3. Информация по распределению частот генотипов и аллелей среди русских мужчин, проживающих в Москве и Подмосковье может быть использована в области генетической эпидемиологии, в популяционной и эволюционной генетике для углубленного описания генофонда народонаселения.
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
Список использованной литературы по медицине, диссертация 2008 года, Голубева, Александра Андреевна
1. Аметов А., Демидова Т., Целиковская А. Ожирение и ССЗ. Tep.apx.-2001 .Т.8-С.-66-69;
2. Аронов Д.М., Лупанов В.П. Функциональные пробы в кардиологии. Медпресс-информ, Москва, 2003 с.64-69;
3. Ганелина И.Е. Атеросклероз коронарных артерий и ИБС. Механизм развития, клиника, основы лечения // СПб Наука.-2004.-с.34 е.;
4. Зубаиров Д-М. Биохимия свертывания крови М.: Медицина. 1978.176с-3
5. Климов А.Н., Никульчева Н.Г. Липиды, липопротеины и атеросклероз. Спб.1995 с.156-159;
6. Константинов В.О. Клинико-эпидемиологические аспекты течения ИБС у мужчин // Автореферат на соискание ученой степени доктора медицинских наук. СПб.-1994-44.с;
7. Моисеев B.C., Терещенко С.Н., Кобалава Ж.Д. и др. Периндоприл в лечении сердечной недостаточности при различном генотипе АПФ. Клин. фарм. тер. 2000; 4: 22-5.
8. Оганов Р.Г. Первичная профилактика ишемической болезни сердца. М: Медицина 1999; 160;
9. Оганов Р.Г., Масленникова Г.Я. Сердечно-сосудистые заболевания в Российской Федерации во второй половине XX столетия:
10. Райков A.I Г., Халфен Э.Ш., Кошечкин В.А., Соколова М.А. Липиды крови,- как фактор реализации наследственной предрасположенности к ИБС // Кардиология; 1989: * 6. С. 14-19.
11. Спиридонова M.F., Степанов; В.А., Пузырев В.П., Карпов Р.С. Анализ генных комплексов подверженности к коронарному атеросклерозу. Генетика. 2002, том 38, № 3, с.383-392;
12. Суханов А.В., Шахтшнейдер Е.В., Пилипенко П.И., Распространенность аллелей аполипопротеина Е при болезни« Альцгеймера в сибирской популяции // У1европейский конгресс клинических геронтологов.-Россия; Москва, 2002.— Р: 161;
13. Ardissino D., Peyvandi F., Merlini? P.A. et al; Factor Y (Arg 506— >Gln) mutation in young- survivors of myocardial infarction//Thromb Haemost 1996,75:5:701—702;
14. Baessler R., I Iengslenberg C., Holmer S.et al. Long-term effects of in hospital; cardiac rehabilitation on the: cardiac risk profile; A case-control; study im pair of sibling with myocardial: infarction// Eur.HeartJ.-2001.-V.22.-H.1111-1118;
15. Bamum H. The economic burden of the global trade in tobacco//Tobacco control: an international journal, 1994, 3:358-361;
16. Baum L, Wiebusch H, Pang CP. Roles for. lipoprotein' lipase: in Alzheimer's disease: an association study//Microsc:Res Tech. 2000 Aug 15, 50(4):291;
17. Beekman M-;,. Heijmans B;T., Martinet: N;G; all- Hèritabilities of apolipoprotein and lipid levels inthree countries // Twin: Res.— 2002.— Vol. 5 (2). —P. 87-97;
18. Bellagio statement on tobacco and sustainable development. Tobacco alert, October, 1995 (available from Tobacco or Health Programme, World Health Organization, 1211 Geneva 27, Switzerland;
19. Berg K. Genetics of coronary heart disease // Progress in medical genetics. Philadèlphia: Saunders and:Co., 1983. P. 35-90;
20. Boushey G.J., Beresford S.A., Omenn G.S., Motulsky A.G. A quantitative assessment of plasma; homocysteine as a risk factor for vascular disease. Probable benefits of increasing folic acid' intakes// JAMA 1995,274:1049—57;
21. Breslow J.L. Familial;- desorders of high density lipoprotein metabolism. In: Sciver C.R., Beaudet a.L., Sly W.S., Valle D (eds) The metabolic basis, of inherited; disease, six edition// 1989.Mc Graw. Hill. New York.P. 1251-1264;
22. Brewer HB;,Hypertriglyceridemia: changes in the plasma lipoproteins, associated; with an increased risk of cardiovascular disease// Am; Ji Cardiol 1999, 83:3-12;
23. Bruce C., Sharp D.S., Tall.A.R. Relationship of HDL and coronary heart disease to a common amino acid polymorphism in the cholesteryl ester transfer protein in men with and without hypertriglyceridemia//! Lipid Res 1998, 39:1071-1078;
24. Burzotta F., Paciaroni K., De Stefano V., Crea F., Maseri A., Leone G. and Andreotti F.- G20210A Prothrombin gene polymorphism and coronary ischaemic syndromes: a phenotype-specific meta-analysis of 12 034 subjects//! leart 2004,90:82-86;
25. Cambien F., Poirier O., Lecerf L. et al. Deletion polymorphism in the gene for angiotensin-converting enzyme is a potent risk factor for myocardial infarction // Nature. 1992. - Vol. 359. - P. 641-644;
26. Chan L. The apolipoprotein multigene family: structure, expression evolution and molecular genetics // Klinish Wochen-Schrift.1989. V67. P.225-237;
27. Clarke R., Daly L., Robinson K., Naughten E., Cahalane S., Fowler B., et al. Hyperhomocysteinemia: an independent risk factor for vascular disease//N Engl J Med 1991, 324:1149—55;
28. Gorbo R.M:, Scacchi R.Apolipoprotein E allele distribution in the world. Is APOEM a thrifty allele//Ann Hum Genet 1999, 63:301-3l'O;
29. Danesh J., Collins R, Peto R, Lowe GD. Haematocrit, viscosity, erythrocyte sedimentation rate: meta-analyses of prospective studies of coronary heart disease// Eur Heart J. 2000 Apr,21(7):515-20;
30. DavignonJ., Gregg R.E., Sing G.F. Apolipoprotein E polymorphism and atherosclerosis//Atheriosclerosis 1988, 8:1-21;
31. Dawson S., Wiman B., Hamsten A., et al The two allele sequences of a common polymorphism in the promoter of the PAI-1 gene respond differently to intrrleukin-1 in hep g2cells// J.Biol Chem,1993,268A10739-10745;
32. De Stefano V, Chiusolo P, Paciaroni K, Casorelli I, Rossi E, Molinari M, Servidel S, Tonali PA & Leone G (1998) Prothrombin G20210A mutant genotype is a risk factor for cerebrovascular ischemic disease in young patients//Blood 91: 3562-3565;
33. Deeb S.S., Peng R. Structure of the human lipoprotein lipase gene. //Biochemistry, 1989; v. 28, p. 4131-4135;
34. Doix S, Mahrousseh M; Jolak M, Laurent Y, Lorenzini1 JL, Binquet C, Zeller M, Cottin Y, Wolf JE Factor V Leiden and myocardial infarction: a case, review of the literature with a meta-analysis//Ann- Cardiol Angeiol (Paris). 2003 Jun;52(3): 143-9;
35. Dorn'J.M., Schisterman E.F., Winkelstein W.J.et.al. Body mass index and mortality in a general population sample of men- and women. The Buffalo Health Study//Amer.J.Epidemiol.l997.V.146.P.919-931;
36. Durand P., Lussier-Cacan S., Blache D. Acute methionine load-induced hyperhomocysteinemia enhances platelet aggregation, thromboxane biosynthesis, and macrophage-derived tissue factor activity in rats//FASEB J 1997,11:1157—68;
37. Ehnholm C., Lukka M., Kuusi T. etJ al: Apolipoprotein E polymorphism in the Finnish population: gene frequencies and relation to lipoprotein concentrations// J. Lipid Res 1986, 27:227-235;
38. Erriksson P., Kallin B., FM van"t Hooft et.al. Allele-specific increase in basal transcription of plasminogen-activator inhibitor 1 gene is associate with myocardial-infarction// Proc. Natl: Acad: Sci USA, 1995, V 92: PI851-1855;
39. Factor V Leiden: The Copenhagen City Heart Study and 2 metaanalyses. Klaus Juul, Anne Tybjasrg-Hansen, Rolf Steffensen, Steen Kofoed, Gorm Jensen, and Etarge Granne Nordestgaard //Blood, 1 July 2002, Vol. 100, No. 1, pp. 3-10
40. Factor V Leiden: The Copenhagen City Heart Study and 2 metaanalyses. Klaus Juul, Anne Tybjasrg-Hansen, Rolf Steffensen, Steen Kofoed, Gorm Jensen, and B0rge Granne Nordestgaard// Blood, 1 July 2002, Vol. 100, No. 1, pp. 3-10;
41. Feng DL., Toiler G.H., Larson M.G. The plasminogen activator inhibitor-1 gene 4G\5G polymorphism and cardiovascular disease:The Framingham heart Study// 48th Annual Scientific Session of ACC, 1999, New Orlean, USA. ABSt.1191;
42. Finkelstein J.D. Methionine metabolism in mammals// Journal of Nutritional Biochemistry 1990,1:228—37;
43. Folsom AR, Cushman M, Tsai MY, Aleksic N, Heckbert SR, Boland LL, Tsai AW, Yanez ND, Rosamond WD. A prospective study of venous thromboembolism in relation to factor V Leiden and related factors //Blood. 2002 Apr 15;99(8):2720-5;
44. Foster W. R., and Burton, B. T. (eds.): Health implications of obesity: NIH consensus development conference//Ann. Intern. Med. 103:979, 1985;
45. Franco RF, Araujo AG, Guerreiro JF, Elion J, Zago MA.: Analysis of the 677 C->T mutation of the methylenetetrahydrofolate reductase gene in different ethnic groups// Thromb Haemost. 1998 Jan,79(l):l 19-21;
46. Franco RF, Araujo AG, Guerreiro JF, Elion J, Zàgo MA.: Analysis of the 677 C-->T mutation of the methylenetetrahydrofolate reductase gene in différent ethnic groups// Thromb Haemost. 1998 Jan,79( 1 ): 119-21 ;
47. Freeman D;G.,. Wilson V., McMahon A.D. et al. Polymorphism of the CETP gene predicts cardiovascular events in the West of Scotlands Coronary Prevention Study (WOSCOPS) (Abstract) Atherosclerosis 2000,15:91;
48. Friedl.W., Krempler F., Paulweber B.et.al. A deletion polymorphism in angiotnsin-converting enzyme gene is not associated with coronary heart disease in Austrian population // Atherosclerosis. 1995. V.1T2.P. 13 7-143;
49. Friedlander Y, Arbogast P, Schwartz SM, Marcovina SM, Austin MA, Rosendaal FR, Reiner AP, Psaty BM, Siscovick DS Family history as a risk factor for early onset myocardial infarction^ in young women//Atherosclerosis. 2001 May;156(l):201-7;
50. Fujisawa T., Ikegami II., Shen G.Q. et. al. Angiotensin I-converting enzyme gene polymorphism is associatedlwith myocardial; infarction^ but not with retinopathy or nephropathy, in NIDDM // Diabetes Care. 1995. V.18. P.983-985;
51. G20210A prothrombin gene mutation identified in patients with venous leg ulcers. Gh. Jebeleanu, Lucia Procopciuc//J.Cell.Mol.Med. Vol 5, No 4, 2001 pp. 397-401;
52. Hellgren M., Svensson»P., Dahlbflck B. Resistance to activated protein C as a basis for venous thromboembolism associated with pregnancy and oral contraceptives// Am J Obstet Gynecol 1995,173:210—3;
53. Higara H., Oshima T., Watanabe M. et al. Angiotensin I-converting enzyme gene polymorphism and salt sensitivity in essential hypertension // Hypertension. 1996. V.27. P.569-572;
54. Hixson J.E., McMahan C.A., McGill H.G. et al. APOB insertion/deletion polymorphism are associated with atherosclerosis in
55. Hobbs H.H., Brown M.S., Goldstein J.L. Molecular genetics of the LDL receptor gene in familial hypercholesterolemia // Hum Mutat. 1992. VI .P.445-466;
56. Hunt S.C., Williams R.R., Barlow G.K. A comparison of positive family history definitions for defining risk of future disease// JChron Dis 1986, 39:p.809-821;
57. Iacoviello L., Burzotta F., Castelnuovo A.Di et al. The 4G\5G polymorphism of the plasminogen activator inhibitor gene as risk factor for myocardial infartion: meta-analysis// Tromb Hemost 1998, V 80: P 10291030;
58. Inazu A., Brown M.L., Hesler C.B. et al. Increased high- density lipoprotein levels caused by acommon cholesteryl ester transfer protein gene mutation//N. Engl J Med 1990, 323 :p. 1234-1238;
59. Inazu A.,Jiang X.C., Haraki T. et al. Genetic cholesteryl ester transfer protein caused by two prevalent mutations as a major determinant of increased levels of high density lipoprotein cholesterol// J. Clin Invest 1994,v94:p.l872-1882;
60. Iwai N., Shimoike H., Nakamura Y. Et al. The 4G\5G polymorphism of the plasminogen activator inhibitor gene is associated with the time course of progression to acute coronary syndromes//Atherosclerosis. 1998.Y. 136.№1 .P. 109-114;
61. Kalina A, Czeizel AE. The methylenetetrahydrofolate reductase gene polymorphism (C677T) is associated with increased cardiovascular mortality in Hungary//Int.J.Cardiol.2004Nov,97(2):333-4;
62. Kamboh MI, Aston CE, Perez-Tur J, Kokmen E, Ferrell RE, Hardy J, DeKosky ST A novel mutation in the apolipoprotein E gene (APOE*4 Pittsburgh) is associated with the risk of late-onsetAlzheimer'sdisease//Neurosci Lett. 1999 Mar 26,263(2-3): 129-32;
63. Keil U. Coronary artery disease: the role of lipids, hypertension and smoking. Basic Res Cardiol. 2000,95 Suppl 1:152-8;
64. Klerk M, Verhoef P, Clarke R, Blom HJ, Kok FJ, Schouten EG; MTHFR Studies Collaboration Group. MTHFR 677C~>T polymorphism and risk of coronary heart disease: a meta-analysis// JAMA. 2002 Oct 23-30,288(16);
65. Koeleman B.P., van Rumpt D., Hamulyak K., Reitsma P.H., Bertina R.M. Factor V Leiden: an additional risk factor for thrombosis in protein S deficient families// Thromb Haemost 1995,74:580—3;
66. Koelerman B.P., Reitsma P.H., Allaart C.F., Bertina R.M. Activated protein C resistance as an additional risk factor for thrombosis in protein C-deficient families//Blood 1994,84:1031—5;
67. Krantz DS, McCeney MK. Effects of psychological and social factors on organic disease: a critical assessment of research on coronary heart disease//Annu Rev Psychol 2002,53:341-69;
68. Kuivenchoven J.A., Jukema J.W., Zwinderman A.H. et al. The role of a common variant of the cholesteryl ester transfer protein gene in the progression of coronary atherosclerosis//N. Engl. J. Med 1998,338:86-93;
69. Kurtz T.W. Genetic approaches to hypertension // Annals Med.l992.V.24.P.81-83;
70. Lagrost L Differential effects of cis and trans fatty acid isomers, oleic and elaidic acids, on the cholesteryl ester transfer protein activity// Biochim Boiphis Acta 1992, 1124: 159-162;
71. Lagrost L. Regulation of cholesteryl ester transfer protein (CETP) activity: review of in vitro studies// Biochim Boiphis Acta 1994, 215: p.209-236;
72. Lander ES, Linton LM, Birren B, et al.Initial sequencing and analysis of human genome// Nature 2001, 409:p.860-921; '
73. Law M Plasma LDL concentrations achieved by pravastatin reduced coronary event rate// Evid Based Cardiovasc Med. 1998 Dec, 2(4): 116-7;
74. Law M., Tanq JL An analysis of the effectiveness of interventions intended to help people stop smoking//Arch Intern Med. 1995 Oct 9,155(18): 1933-41;
75. Mailly F., Tugrul Y., Revmer P.W. et al A common variant in the gene for lipoproteinlipase (Asp9->Asn) Functional implications and prevalence in normal and hyperlipidemic subjects//Atheroscler Thromb Vase Biol 1995,15:p.468-678; ,
76. Mandel H., Brenner B., BerantM., Rosenberg N., Lanir N., Jakobs C., et al. Coexistence of hereditary homocystinuria and factor V Leiden^—effect on thrombosis// N Engl J Med 1996,334:p.763—8; .
77. Marsden PA, Schappert KT, Chen HS et ah Molecular cloning: and characterization of human endothelial- nitric oxide synthase. FEBS; Lett 1992,307: 287-93;
78. Mikkelsson J;5 Perola M., Wartiovaara U et al. Plasminogen activator, inhibitor-1 polymorphism; Coronary thrombosis, and Myocardial Infarction in middle -aged Finish men who, died suddenly// Thromb Hemost 2000,V 84:3 78-82; .
79. Morris BJ:, Zee R.Y.L., Ying L.I-L, Griffiths L.R. Independent marked associations of alleles of the insulin: receptor and dipeptidyl carboxypeptidase-I genes with essential hypertension // Clin. Science. 1993. V. 85. P.189-195;
80. Mustafma OE, Shagisultanova EI, Tuktarova IA, Khusnutdinova EK Polymorphism of the apolipoprotein E gene and the risk of myocardial infarction//Mol Biol (Mosk). 2002 Nov-Dec,36(6):978-84;
81. National Cholesterol Education Program. Second report of the Expert Pannel on Detection, Evalution and Treatment of High Blood Cholesterol in Adults// Circulation 1994,89:p.l333-1440;
82. Nygard O., Nordrehaug J.E., Refsum H., Ueland P.M., Farstad M., Vollset S.E. Plasma homocysteine- levels and mortality in patients with coronary artery disease//№Engl'J-Med 1997,337:p.230—6;
83. Oka K., Tkalcevie GT, Nakano T, Tucker H, Ishimura-Oka K, Brown V. Structure and polymorphic map of human lipoprotein lipase gene// Boichim. Biophys. Acta.-I980.-Vol. 1049.- p.21-26;
84. Olivieri O, Bassi A, Stranieri C, Trabetti E, Martinelli N, Pizzolo F, Girelli D, Friso S, Pignatti PF, Gorrocher Apolipoprotein C-III, metabolic syndrome, and, risk of coronary artery disease// J Lipid Res. 2003 Dec,44(12):2374-81;
85. Rail SC, Weisgraber KH, Mahley RW Human apolipoprotein E. The complete amino acid sequence //J Biol Chem 1982 257:4171-8;
86. Ridker P.M., Hennekens C.H., Seihub J., Miletich J.P., Malinow M.R., Stampfer M.J. Interrelation of hyperhomocyst(e)inemia, factor V Leiden, and risks of future venous thromboembolism// Circulation 1997,95:p.l777—82;
87. Ridker P.M., Miletich J.P., Stampfer M.J., Goldhaber S.Z., Lindpaintner K., Hennekens C.H. Factor V Leiden and recurrent idiopathicfvenous thromboembolism// Circulation 1995, 92: p.2800—2;
88. Rigat B., Hubert C., Corvol P., Soubrier F. PCR detection of the insertion/deletion polymorphism of the human angiotensin converting enzyme gene (DCP1) (dipeptidyl carboxypeptidase 1) // Nucl. Acids Res. 1990. V.20. P. 1433;
89. Rosendaal FR, Doggen C.J. Geographic distribution of the 20210 G to A prothrombin variant// Thromb Haemost, 79(4): 706-8, 1998;
90. Rosendaal FR, Siscovick DS, Schwartz SM, Psaty BM, Raghunathan TE, Vos HL. A common prothrombin variant (20210 G to A) increases therrisk of myocardial infarction in young women//Blood. 1997 Sep 1, 90(5): 1747-50;
91. Rosendaal FR, Siscovick DS, Schwartz SM. et al. A common prothrombin variant (20210 G to A) increases the risk of myocardial infarction in young women// Blood 1997,90:p. 1747-1750;
92. Rosendaal FR. Risk factors for venous thrombosis: prevalence, risk, and interaction//Semin Hematol. 1997 Jul,34(3):171-87;
93. Samani NJ, Thompson JR, O Toole L, Channer K, Woods KL 1996 A meta-analysis of the deletion allele of the angiotensin-converting enzyme gene with myocardial infarction// Circulation 94:708-712;
94. Scandinavian Simvistatin Survival Study Group: Randomised trial of cholesterol lowering in 4444 patients with' coronary heart disease: The Scandinavian Simvastatin Survival Study (4S)//Lancet 344:1383, 1994;
95. Schaefer E.L., Lamon-Fava'S., Johnson S. et al Effects of genger and menopausal status on the association of apoliprotein E phenotype' with plasma lipoprotein levels. Results from the Framingham Study// Atheroscler Thromb 1994,14:p:l 105-1113;
96. Schmitz C," Lindpaintner K, Verhoef P, Gaziano JM, Buring J.: Genetic polymorphism of methylenetetrahydrofolate reductase and myocardial infarction. A case-control study// Circulation. 1996 Oct 15,94(8):p.l812-4;
97. Sesso HD,Lee IM, Gaziano JM, Rexrode KM, Glynn RJ, Buring JE. Maternal and paternal history of myocardial infarction and risk of cardiovascular disease in men and women//Circulation. 2001 Jul 24,104(4):393-8;
98. Shimo-Nakanishi Y, Urabe T, Hattori N, Watanabe Y, Nagao T, Yokochi M, Hamamoto M, Mizuno Polymorphism of the lipoprotein lipasegene and risk of atherothrombotic cerebral infarction in the Japanese. Stroke//Circulation 2001 Jul,32(7):1481-6;
99. Stamler J.S., Osborne J.A., Jaraki O., Rabbani L.E., Mullins M., Singel D., et al. Adverse vascular effects of homocysteine are modulated by endothelium-derived relaxing factor and related oxides of nitrogen//J Clin Invest 1993,91 :p.303—18;
100. Stampfer M.J., Malinow M.R., Willett W.C., Newcomer L.M., Upson B., UllmannD., et al. A prospective study of plasma homocysteine and risk of myocardial infarctionin US physicians// JAMA 1992,268:877—81;
101. Stampfer M.J., Malinow M.R., Willett W.C., Newcomer L.M., Upson B., Ullmann D., et al. A prospective study of plasma homocysteine and risk of myocardial infarction in US physicians// JAMA 1992,268:877—81;
102. Thomas C., Bruce • A., Birkhead X.L. • Wang Effect of ecNOS polymorphisms and coronary artery disease upon exhaled nitric oxide. J Mol Med (2002) 80:181-186
103. Thomson G, Wilson P., Coronary risk factor and their assessment. Switzerland.- 1992.-P. 12-15;
104. Tornvall P, Karpe F, Carlson LA, Hamsten A. Relationships of low density lipoprotein subfractions to angiographically defined coronary artery disease in young survivors of myocardial infarction AAtherosclerosis. 1991 Sep;90(l):67-80;
105. Tsai J.C., Perrella M.A., Yoshizumi M., Hsieh C.M., Haber E., Schlegel R., et al. Promotion of vascular smooth muscle cell growth by homocysteine: a link to atherosclerosis. Proc Natl Acad Sci U S A 1994,91 :p.6369—73;
106. Utermann G. Apolipoprotein E polymorphism in health and disease. j Am Heart J 1987,113:2:Pt2:p.433-440;
107. Van Bockxmeer FM, Mamotte CD, Vasikaran SD, Taylor RR.: Methylenetetrahydrofolate reductase gene and coronary artery disease. Circulation. 1997 Jan 7,95(l):21-3;
108. Vandenbroucke J.P., Koster T., Briet E., Reitsma P.H., Bertina R.M., Rosendaal F.R. Increased risk of venous thrombosis in oral-contraceptive users who are carriers of factor V Leiden mutation. Lancet 1994,344:1453— 7;
109. Wang S , Wang L., Brown M.L.et al Structure-function studies of human cholesteryl ester transfer protein by linker insertion scanning mutagenesis. Biochemistry 1991, 30:3184-3190;
110. Waterworth DM, Talmud PJ, Luan J, Flavell DM, Byrne CD, Humphries SE, Wareham NJ Variants in the APOC3 promoter insulin responsive element modulate insulin secretion and lipids in middle-aged men. Biochim Biophys Acta. 2003 Apr 17,1637(3):200-6;
111. Wilson P.W.F., Schaefer E.J., Larson M.G., Ordovas J.M. -Apolipoprotein E alleles and Risk of Coronary Disease: A Meta-analysis. // Arterioscler. Thromb. Vasc.Biol. — 1996. — Vol. 16 (10). — P. 1250-1255;
112. Woo K.S., Chook P., Lolin Y.I., Cheung A.S., Chan L.T., Sun Y.Y., et al. Hyperhomocyst(e)inemia is a risk factor for arterial endothelial dysfunction in humans. Circulation 1997,96:2542—4;
113. Wu J.H., Lo S.K., Wen M.S., Kao J.T. Characterization of apolipoprotein E genetic variationsin Taiwanese: association with coronary heart diseaseand plasma lipid levels / // Hum. Biol. — 2002. — Vol. 74 (1). — P. 25-31;
114. Yusuf S., INTER-HEART: a study of risk factors for, first myocardial infarction in 52 countries and over 27.000 subjects. Paper presented at the European Society for Cardiology Congress 29.08-01.09.2004, Munich., Germany;
115. Zannis V.I., Just P.W., Breslow J.L. Human apolipoprottein E isoprotein subclasses are genetically determined. Am J Hum Genet 1981,33:p.l 1-24;
116. Zema, M. J.: Q wave, S-T segment, and T wave myocardial infarction. Am. J. Med. 78:391, 1985;
117. Zevin S, Saunders S, Gourlay SG, Jacob P, Benowitz NL. Cardiovascular effects of carbon monoxide and cigarette smokingJ Am Coll Cardiol. 2001 Nov 15,38(6): 1633-8;