Автореферат и диссертация по медицине (14.00.13) на тему:Изучение опиоидных пептидов при рассеянном склезозе

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РСФСР

ВТОРОЙ МОСКОВСКИЙ ОРДЕНА ЛЕНИНА ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ ИНСТИТУТ имени И. И. ПИРОГОВА

На правах рукописи ПОПОВА Наталия Федоровна

удк 1.616.832—004.2—092:615.37

ИЗУЧЕНИЕ ОПИОИДНЫХ ПЕПТИДОВ ПРИ РАССЕЯННОМ СКЛЕРОЗЕ

14.00.13 — Нервные болезни

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Москва 1991

Работа выполнена во 2-ом Московском ордена Ленина государственном медицинском институте им. Н. И. Пирогова и лаборатории иммунологии НИИ клинической психиатрии ВИЦ ПЗ АМН СССР.

Научный руководитель:

академик АМН СССР, доктор медицинских наук, профессор

Е. И. Гусев Научный консультант: доктор медицинских наук А. А. Зозуля

Официальные оппоненты:

член-корреспондент АМН СССР, доктор медицинских наук, профессор И. В. Ганнушкина, доктор медицинских наук, профессор Н. Н. Яхио

Ведущая организация:

Московский медицинский стоматологический институт им. Н. А. Семашко "

Защита состоится „_" _:— 199 г. в-час.

на заседании Специализированного Совета Д.084.14.03 при 2-ом Московском ордена Ленина государственном медицинском институте им. Н. И. Пирогова, по адресу: Москва, ул. Островитянова, д. 1.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке 2-го МОЛГМИ им. Н. И. Пирогова.

Автореферат разослан „_"-199 г.

Ученый секретарь Специализированного Совета доктор медицинских наук,

профессор П. X. Джанашия

© Институт химической физики АН СССР

ОВДДЯ ЗШЖСГЕР1'СП1КД РЛШШ

лкт/ллььтеть прсялеш

Рассеянный склероз занимает одно из ведущих жег среди домиелиниэируодих заболеваний нервк Я системы. Проблема изучения рассеянного склероза относится в числу актуальных и социально важных в связи с широкой распространенностью,преимущественны.',î поражением лиц молодого возраста, а также в свяе". с быстрой инвалидиэацией больных (Завалинки 51 А. , 1986 г., Ко. Donald V. ,1986, Sanders Е. Л. et al., 1988, Thomson A. J. , 1985, Waksman В. H. , 19S8).

Природа рассеянного склероза изучается на протяжении многих десятилетий. Вместе с тем остается не' .выясненными многие аспекты его этиологии и патогенеза, механизмы деше-линиэации, не достаточно ясны подходы к лечению.

• В последнее время внимание отечественных и зарубежных ученых направлено на изучение вирусологических, эпидемиологических, гекь.йческих, иммунологических аспектов этой проблемы ( Хондкариан 0. А, 1987; Гусев Е. И. , 1990г., Brahic It, Jewell. , 1908, Fierrz V. , 1989, Mc. Donald W. et al., 1987, Larsen M et al., 1986, Waksman 8. H., 1988). Многочисленные факты указывает на участие . иммунной 'систеш з патогенезе рассеянного склероза, однако имеющаяся по этому вопросу литература чрезвычайно противоречива. •

В последние годы, благодаря внедрению новейших биохимических, иммуногистохимических, радиологлчегасих методов в клиническую неврологию, появились методические возмозягости для использования в изучении неразрешенных вопросов патогенеза рассеянного склероза, фундаментальных исследований в. области молекулярной и клеточной иейребиологии, нейрохшии.

В атом плане представляется перспективна изучение эндогенных опиоидных пептидов, которые являются наиболее -интересной н многочисленной группой нейропептидов, обладающих широтам спектром биологической активности. Не смотря на то, что со времени открытия этой, группы соединений прошло более

. 15 лет и об их структуре получено много новых данных, физиологическая их роль до конца не выяснена.

Работами отечественных и заруълшых исследователей доказано участие опиоидных пептидов в регуляции эмоциональных реакций (Daly R.J. et al., 1987), фуищионировании периферических органов ( Булгаков С. А., Виноградов В. А. , Смагин В.Г., 1983), формировании адаптационного синдрома (Пшенни-кова М. Г. , 1987). Привлечешь внимания к проблеме эндогенных опиоидных пептидов актуально и в свете изучения процессов иммунорегуляции при рассеянном склерозе. Последние исследования свидетельствуют о том, что опиоидные пептиды могут участвовать в переносе информации от нервной системы к иммунной (Зозуля А. А. , 1986, Ausiello С. М. et al. , 1934, Simpkins С.О. et al. , 1984, Vybran J. et al., 1979). "Более того, они сами являются компонентами иммунной системы. .Известно, что некоторые клетки им.,^1.ной системы способны продуцировать огшоидные пептиды, а некоторые медиаторы иммунной системы обладают опиоидной активностью (Зозуля Л. А., 1Й86, Blalock J. Е., 1982, 1985, Smith Е. М. , 198i).

Исследование системы опиоидных пептидов приобрело широкую популярность среди специалистов различных профилей, Вместе о тем в .«шпике нервных болезной этот класс оседикз-' ний только начинает изучаться. Имеющиеся в литературе свадеши не соответствует обкому значению проблеиц so гс*и-шцюсной биохимии опиоидных пептидов и но ИОЗИОЛПОТ ОПр0ЙО-лить их конкретную роль в развитии патологического процесса при рассеянном склероза.

Анализ литературы повезая, что исследование вытесшдачей активности опиоидных пептидов в плазме крови при рассеянном склерозе до настоящего, вреьхши но проводилось. Ьлесто о тем, учитывая, водную роль ойиоядов в центральной нервной сиотемэ, влияние на метаболизм рода бкавогически активных иеп^ств, нейрональиую проводимость, иш.5иошдзгляруигг'.э тЦзгзш, изучение сиотеш опйоидшж пептидов рри расозшшоы сплэрэзе првдотааляатся особенно асгуагешх. 1йуюкхо. из'чззЧпи изта-Оалиакр опиоидов и раскрш:;о . вшгоноазрпссггей рзгуаэдяп им-

■ . V

мунологических функций имеет важное значение для понимания их роди в патогенезе рассеянного аслероза, разработки дополнительны" диагностических критериев.

Очевидна необходимость изучения опиоидных пептидов и для возможного создания иммунокоррегирующих препаратов на основе, синтетических аналогов опкс ушх пептидов, а знание точек приложения этих веществ позволит осуществить направленное медикаментозное воздействие.

ЦЕЛЬ И 5АДАЧН РАБОТЫ

Далью работы явилось : уточнение некоторых звеньев патогенеза рассеянного склероза на основании данных по изучению активности пиоидных пеятидог в плазме крови и концентрации бета-зндорфкна в сыворотке крови и лигазоре у больных с различными клиническими формами рассеянного склероза и определение путей возможной медикаментозной коррекции выявленных нарушений синтетическим аналогом лей-энкефаааша - да-ларгином.

Задача исследования включали:

1. Исследование вытесняющей активности лнгандов 'опиоидных рецепторов дельта- и мю-типа в плазме крови и концентрации Оета-эндорфина в сыворотке крови, ликворе и суперна-тантах активированных лимфоцитов у больных рассеяннш склерозом с' учетом клинических особенностей течения заболевания.

2. Сопоставление активности опиоидов и' уровни бета-эн-дорфииа в плазме крови с рядом иммунологических параметров.

3.Уточнение на основании полученных данных роли опиоидных пептидов в патогенезе рассеянного склероза.

4. Изучение влияния синтетического аналога лей-зпкефа-лина - даларгина на содержание эндогенных опиоидов в плазма крови и клиническое состояние больных рассеяннш склерозом.

- 4 л

научная шатай работы

В настоящей работе впервые проанализировано изменение активности лигандов. опиоидных рецепторов дельта- и мо-типа и концентрации бета-эндорфина в сыворотке крови, лигазоро и еупернатантах активированных лимфоцитов, в зависимости от типа течения заболевания, дебюта, длительности, выраженности неврологического дефици. а, активности патологического процесса при рассеянном склерозе.

Шказаио наличие корреляционных связей мезду тестируемыми опеоидзми плазмы кроеи и рядом иммуг-итгических параметров.

Выявлено изменение активности эндогенных опиоидных пе-. птидов при введении иммуномодулятора, синтетического аналога лей-энкефаяииа - даларгина, показан его регулирующий эф, факт на олиоидкую активность.

Полученные данные дают возможность уточнить некоторые аспекты иммунорегуляции при рассеянном склерозе и обосновывает перспективность использования, синтетических аналогов ошюидны^ пептидов для лечения этого тяжелого заболевания.

■ ПРАКТИЧЕСКАЯ ЦЕННОСТЬ РАБОТЫ

Проведенные исследования обосновывают новое направле-. ние в терапии рассеянного склероза - использование препаратов, являющихся синтетическими аналогами эндогенных опиоидных пептидов, ,для лечения и;.г/.!унопатологическ1к нарушений . при атом заболевании.

. _ Динамическое наблюдение исследуемых показателей и сопоставление ' их отданными иммунологических показателей, в комплексе, способствуют уточнения стадии и азстийюсти аабо-левания, прогнозу неблагоприятных форм его точения,.

• . ■. решзеда шэду. в ерйеше '

Излученные данные изложены в 8 статьях, опубликованных.

п центральной печати и научных сборниках.

Результаты работы докладывались иа 6-ом Всероссийском съезде чевропггологов (октябрь 1990г.), на ааседании Московского общества невропатологов и психиатров (апрель 199Пг.), на Первом съезде невропатологов и психиатров Литвы (июнь 1990г.), на совместном заседг -ии кафедры кеврологии и нейрохирургии Nie курсом усовершенствования врачей и научно-исследовательской лаборатории по изучению нарушений мозгового кровообращения 2 ШЛГШ им. Н. И. Шрогова, а также испс.ьвованы при ведении больных в неврологических отделениях 1 Городской клинической больницы им. Н. TL Пирогова г. f/ockeu.

АПРОВЛЩЯ рлюга

Диссертационная работа апробирована на совместном заседании кафедры неврологии и нейрохирургии лечебного факультета 2 МЭЛШ им. Н. И. Шрогова с курсом усовершенствования врачей и НИЛ изучению нарушений мозгового кровообращения, лаборатории иммунологии НШ клинической психиатрии ВНЦ ГВ АШ СССР.

СТРУКТУРА Н ОБЪЕМ РАБОТЫ'

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, глав, посвященных характеристике обследованных бальных, методов исследования и результатов собственных исследований, заключения и выводов. Работа изложена на 188 страницах машинописного текста, иллюстрирована 12 таблицами и' 4А рисунками. Указатель литературы содержит 84 работы отечественных и 174 работы зарубежных авторов. .

- 6 -

ООДЕРЯЛШЕ РАБОТЫ

Общая характеристика клинических наблюдений и методов исследования

Клинический материал включает данные обследовании 122 больных с достоверным (по критериям Shumacher G., 1066) к несомненным (по критериям Хоидкариана О. А., 1987) диагнозом рассеянного склероза Группу юнтроля составили 40 здоровых доноров соответствующего пола и возраста В обследование не включались больные с наличием Долевых синдромов, эндокринологической патологией, указанном на наркоманию-в анамнезе.

Исследования выполнены на базе клиники неврологии и нейрохирургии N 1 2 ЮЛГШ им. Н. И. Пирогова, лаборатории '.''иммунологии НЖ клинической психиатрии ВИД ИЗ АМН СССР, лаборатории |шшичоокой иммунологии и биохимии ВКЩ АМН . СССР.

Комплекс обследования включал: детальное изучение клинической картины заболевания о использованием данных анамнеза, неврологического ц соматического статуса, биохимическое исследование крови, исследование клеточного иммунитета периферической крови и цереброспинальной жидкости,офтальмологическое обследование, злекгрозицефашграфигЬ, короткояа-тентныо стволовые вызванные потенциалы на акустическую стимуляцию (КСВП на АС),у части больны;: - ядерно-ыагшшшл резонанс и компьютерную томография головного-и спинного ¡,-лзга.

Распределение Сольных я вавиоииоюи от пола, возраста, дебета и продолжительности заболевания представлено в таб. лицо 1.

. . Среди наблвдавиикся болышх . бшэ 75 гэлни;;« и 47 wys-чии, возраст больных колебался-от iy до 51 года, преобладающее число больных било в возраото от £1 года до* 30 лет.

7 всех обследуошх больных имела место цоребро--спииальная ферт ваболованш. Дш детального анализа Осль-г ше. были разделены па.подгруппы в яазисииости. от . характера течения .заболевшая, длш-едьаооти, пр«пдаэогчшной иевро-логичеокой «жмптоаашэд, адалЕкссти шшмогичаокого нроцло-

Таблица 1

Распределение больных РС в зависимости от- пола, возраста, дебюта и длительности

заболевания. ,

Группы больных Мужчины Женщины Всего % от

больных общего

числа

- больных

Возраст до 20 лет 2 2 1.6

больных 21-ВО лет 25 35 60 49.2

31-40 лет 18 ' 29 '47 38. 5 -

41-50 лет . 1 11 12 9. 8

старше ¿0 лет . 1 ■ - 1 0. 9

Дебют до 20 лет 16 . '19 35 28.8

заболе- 21-30 лет 20. .' 38 ' ' 58 48.4

вания 31-40 лет а • 16 24. 18.7

старше 40 лет 3 2 • 5 4.1

Продолжи-- до 1 года 5 ' 5 10 8. 2

тельность 1-5 лет 25 30 ' .55' 45.1

заболева- 6 -10 лет 14 31 45 36.9

ния свыше 10 лет 3 9 12 . 9.8

1 Всего 122 больных ...'-...

са и степени тякэстк вй&швшяя. Вторично аддорс-дкеигоэд течение рассеянного склероза имело место у 92 вольных, роматтируодге- у 24 больных и перв- чпо прогредиентное - у О

больных.

Отдельную группу'в количестве 4 человек составили вольные о дебютом рассеянного склероза У этих больных неврологическая онптоматика была отмечена вперь^е и яродошшиоль-ность заболевания на момент обследования составляла от нескольких дней до дву месяцев.

Длительность заболевания до одного года имела место у 10 больных, от одного года до пяти лет - у 55 больных, от пяти до десяти лет - у 45 больных л свыше десяти лет - у 12 больных.

Основную подгруппу доставили! больные с преобладанием двигательных расстройств (100 больных), подгруппы с преимущественно мозизчашой и стволовой симптоматикой составили соответственна 16 и 6 Оашшх. При этом у дзад последних двух подгрупп имели место в той или иной степени выраженные кяргшйдш» нарувошга.

Среди обследованных больных рассеянным склерозом пре-аЗладзли' лица с .легкой и средней степенью тяжести заболевания (81' больной), • с тяжелой степенг , - 41 больной. Оценка клинического соотоящщ проводилась по сумме баллов неврологического дефицита (СБ), и шкале прогрессироваяия заболевания (ШП) (КиЛЕке Е., 1987).

В подгруппу с атагашш рассеянным склерозом включались болышэ у которых в течении предшествующих обследованию 2 месяцев отмечалось углубление старых или появление новых неврологических симптомов (43 больных),в подгруппу со стабильно течением заболевания •• больные с но"капитальными колебаниями симптомов в тот ме период времени (79 больных).

• Исследование активности дягандов опиоадных рацелторов (ЛОР) - дельта- и нэ-типа сыворотки крови больных рассеяюшм

склерозом (PC) проводилось методам рздкорецепторного анализа (Zozulya Л, А. et al., 1985).

Опр^делешг бета-эндорфина в сыворотке крови, суперна-тантах активированных лимфоцитов (САЛ) и ликворе проводили ра£"о!Шмунологическим методом с использованием стандартных наборов .pôajîTHBQB фирмы "Instar Corporation" (США), в соответствии с кнстру1сцинми.

Иммунологические методы включали: определение содержания субпопуляций Т-лимфоцитов в сыворотке ivoBii и ликворе, с использованием ыоношюнальных антител ОКТ 3+, ОКТ 4+, ОКТ 8+ и проточного цитофлуоркметра; поста-, новка реакции бласттрансформации лимфоцитов периферической • крови (принцип реакции описал Линг Н. Р. , 1982), с использованием мигогешг фитогемагг'дюгини"а ( ЗГА), митогеив лаконоса (PVM) и конканавалкна А (Кон А); оценка продукции и рецепции интерлейкина-2 (ИЛ-2) в модификации широко-распространенного метода с использованием активированных клеток.

Исследование активности и концентрации опиоидов проводилось в динь^ике при поступлении больного в стационар, через 1-2 недели, 1,3,6,12 месяцев, 1,5 и 2 года от момента первоначального обследования. Полученные результаты анализировали с использованием критерия Стьюдента. Были использованы методики корреляционного и регрессионного анализа. Обработку результатов проводили на компьютере IBM PC/AT с использованием пакета программ "Statgraphics", собственных ' баз данных, а такие оригинальных программ обработки статистических данных.

РЕЗУЛЬТАТЫ КОСДЕДОВАШЯ

Исследование активности л и г а н д о в опиоидиых рецепторов в плазме крови проведено у 122 больных рассеянным склерозом. Индивидуальные показатели активности, опиоидов варьировали, однако в целом по группе больных выявлено достоверное снижение вытесняющей активности ЛОР, как дельта- (125,9i 16,3 тюль.экв.лиганда/мл плазмы, р < 0,05), так и мю-типа (115,1

i 10,5 пмоль. sud. лиганда/мл. плазмы р < 0,05), но сравнению, о ■ контрольной группой (155,3 £ 8,1 пмоль. экв. лиганда/мл. плазмы и 160,1+ 6,5 пмоль. экв. лиганда/м^. плазмы, р < 0,05 соответственно). Значения активности ЛОР в подгруппах с различны;.! характером течения заболевания: ремиттирущим,. вторлчно .прогредиентным, первично прогредиентным, не выявило достоверных различий , как между собой , тач и при сравнении со всей группой больных, оставаясь достоверно снигйнными по сравнению с контролеч Вместе с тем у больных с дебютом PC отмечалось максимальное повышение активности ХОР дельта- и ¡.катила (230,42.5,4 пмоль. зга. лиганда/мл. нлазш, и 208,5 4. 18,2 пмоль.экз. лиганда/мл. плазмы, р < 0,05, соответственно), не только по сравнению с показателями по группе больных в _ целом ( 125,9 £ 16,3 пмоль. экв. лиганда/мл. плазмы и lit?, 1 10,6 пмоль.экв. лиганда/мл. плазмы, р < 0,05,соответственно), но и в сравнении с контролем, Максимальное повшение активности опиоидов при дебюте PC можно рассматривать как следствие активации эндогенной опиоидной системы на фоне адаптационно-компенсаторной перестройки, вслед ¿а которой

наступает срыв адаптации й постепенное истощение защиных %

механизмов. •

фи сравнении активности опиоидов в подгруппах больных с преобладанием различной неврологической симптоматики было выявлено достоверное сиикаэние активности ЛОР дельта-типа у больных с преимущественно пирамидной »симптоматикой (1j7,8-±10,1 пмоль. экв. лптанда/шь плазмы р < 0,05), по сравнении с показателями подгрупп с преобладанием мозкечковой (135,9 ± 9,2 '• пмойъ. экв. лигаида/ыл. плазмы, р< 0,05) и стволовой ( 123,4 ±11,2 пмоль. экв. лиганда/мл. плазш, р< 0,05) симптоматики. Активность ЛОР мя-ткла в ^авниваемь... подгруппах , достоверно не различалась. Подобная корреляция с тонической симптоматикой .может• быть обусловлена тем, что имеющиеся изменения активности опиоидов способствуют ус зуОхвща дефекта' проведения нервного импульса, всшхшю через систему циклических иукжеотадов и иэмэнгчю'проницаемости выбран .для ионов Са и К*.

, " Анализ • аетвйносяи омюздов игтт в подгруппам о раз-

личкой длительностью заболевания позволил выявить достоверное снижнкэ активности JDP дельта-, и im-типа у больных о длительным, свыше. 10 лет прогредиентным течением PC (100,5 . ¿10,4 пмоль. згаз, диганда/мл. плазмы й 70,2 ±. Б, 9 пмоль, экв. ллганда/мл. плазмы, р < 0,05, соответственно), при этом по-, казатели в подгруппах о длительностью заболевания до 5 лет составили соответственно 127,8 £11,0 пмоль. экв. лигаида/мл. плазмы и 112,1 ±7,2 пмоль. экв. лиганда/мл. плазмы, р < 0,0Г.

Вытесняэдая активность тестируемых пептидов была tec-no связана с изменением активности патологического процесса. Выявлено значительное снижение активности ЛОР дельта- и ыга-типа при парасташ»' активности заболевания до 80,5 ±9,1 пмоль. экв. лиганда/ил. плазш и 60,Г£8,5 пмоль. экв. лиганда/ мл. плазмы, р < 0,05, соответственно, при стабильном течении PC достоверных различий о группой всех больных не получено, однако отмечалась тенденция к их повышении (147,5*7,24 пмоль. экв. лигапда/мл. ллазш и 133,4±6,8 пмоль. экв. лиганда/ мл. плазш, соответственно).

Выявлена тенденция к сниглш) активности Л)Р дельта-типа у больных о тйяедш течением заболевания (11Б,б ± 9,8 . пмоль. экв., лиганда/шь плазмы), по сравнению о группой больных в целом (125,9 ± 1(5,3 пмоль. экв. лиганда/мл, плазш), однако достоверных различий эти значения не достигли. Активность ЛОР ¡.ш-тша не коррелировала о тяжестью течения заболевания. •

Интерпретация полученных данных весьма слогага в связи о отсутствием подобных клипичесютх работ, однако мокло предположить,. что изменения активности гчиоидов плазш могут быть вызваны снижением плотности рецепторов на iwioTicax-мишенях, изменением концентрации опиоидних пепгидов в плавка, нарушением соотношения клеток -мишеней и рецепторов, в последнем случае оптимальный физиологический эффэкт по экспериментальным •данным наблгчеотся при соответствии •концентрации опиоадов в рецепторов на мембране клетки*, отсутствии опрэ-доявнных условий для экспрессия рецепторов г? ошюидным пзп-уидаи, тя« как избыточная активация ¡меток ж.(фо~ и ысноки-

нами может приводить к увеличению концентрации рецепторов на мембране и повышению активности ЛОР; способностью опиоид-ных рецепторов связываться с несколькими типами рецепторов; влиянием других звеньев гс гостаза на активность опиоидной системы. Любой, из вышеперечисленных механизмов может иметь место в условиях такой патологии как рассеянный аслероз и является отражением сложных адаптационго-приспособительных реакций при длительном патологическом процессе.

Исследование концентрации бет а-э н д о р ф и н а в сыворотке крови проведено у 50 больных рассеянным склерозом, при этом достоверных различий с группой контроля не выявлено: (3,88 ±0,22 пмоль/мл., контроль - 3,69*0,17 пмоль/мл). Сравнение концентрации бета-эндорфина у больных с'различной длительностью заболевания • показало его достоверное снижение при длительном, свыше 10 Лег, течении заболевания (3,1±0,11 пмоль/мл, р < 0,05) по сравнении с подгруппой больных с продолжительностью заболевания до 5 лет (4,0^0,16 пмоль/мл, р < 0,05). Не выявлено достоверной зависимости между концентрацией бета-зндорфина в' сыворотке криви и степенью тяжести заболевания, однако отмечается тенденция к его повышению у больных с алкелым течением РС (4,2*0,35 пмоль/мл.), при легкой и средней тямести заболевания этот показатель составил 3,8^0,25 пмоль/мл.

Выявлено изменение концентрации бета-зндорфина в сыворотке крови у больных с различной активностью патологического процесса,достоверное его повыаение при нарастании аютив-ности заболевания (5,1810,37 пмоль/мл, р < О,01),что согласуется с исследованиями других авторов (Хондкариан 0. А., Завалишин И. А. , 1987). При стабилизации состояния этот показатель не отличался от контроля (3,5±0,12 пмоль/мл,контроль 3,69i0,17 пмоль/мл). Однонаправленные изменения отмечались и в ликворе больных при нарастании активности патологического процесса (4,58*0,23 пмоль/мл,контроль - 3,95*0,31 пмоль/мл).

Одной из возможных причин г: лишения концентрации бета-зндорфина при нараотании активности патологического процесса шиет бдаь наличие общего метаболического предшествен-

- Í3 -

инка (проолпомеланонюртииа) с адренокортикотротшм гормоном ( АКТF), фрагментами которого являются АКТГ и бета-эндорфин (Foil!< У., i386). Поэтому активация адренокорт¿отроаного гормона при нарастании активности заболевания (Хондкариан 0. Л. , 1987), учитывая общность рецепторов для АКТГ и бета-пндорфина, могчет повышать лигандную способность АКТГ к этим рецепторам и ¡сак следствие aiuro быть причиной повышения концентрации бета-эндорфина в сыворотке кропи. Кроме того, увеличение уровня бета-эндорфина может быть обусловлено уменьшением его связывания с рецепторами. Tait, отдельные Фрагменты АКТГ могут ингибиропать процесс связывания опиоид-шл.ш рецепторами опио>*чних пептидов. Блокада рецепторов может быть обусловлена и другими неспецифическими сывороточными факторами, например белками активной . фаза Нельзя исключить и возможность усиленного синтеза бета-эндорфина лимфоцитами при нарастании ё.стивности заболевания.

Для проверю! одной из этих гипотез, мы провели исследование уровня бета-эндорфина в CAJL В литературе имеются данные о способности активкровыных лимфоцитов (АЛ) вырабатывать бета-эндопфин. Гак, через 6-8 часов после инфицирования вирусом Ныокзоля лимфоциты начинают' синтезировать бета-"пдорфнп (Smith Е. M. et al. , 1981).

Выявлено,что уровень иммуногснного бета-эндорфина, полученного нами после 3-х часовой инкубации лимфоцитов больных' с й'ГА.так ке повышается при активации процесса (3,05 ± 0,28 пмоль/мл, контроль 1,79 3:0,32 пмоль/мл, р < 0,05).'.

Повышение концентрации бета-эндорфина 'мошо рассматривать и не. как истинное его увеличение,а как снимание активности его рецепции it соответствующим рецепторам, что согла- ■ суется с нашими данными о снижении вытесняющей активности ЛЗР при нарастании активности процесса В свою очередь уменьшение концентрации бета-эндорфина при стабильном заболевании иокет быть обусловлено с одной стороны уменьшением синтеза бета-эндорфина, в том "деле иммунокомпетентнкми кзегкшя, о другой - уменьшением влияния другш: блокирувдях ф-экторсв сыворотки.

- 14 -

Анализ корреляционных связей позволил выявить взаимосвязь- между показателями опиоидной системы и рядом иммунолс -гических параметров. В наших исследованиях выявлена прямая корреляционная связь между концентрацией бета-эндорфина в • САЛ у больных PC и содержанием 0КТ-4+ клеток (R=0,57, р < 0,01),что позволяет предположить,что 0КТ-4+ клс. ш могут являться одним из источников синтеза бетл-эндорфина. Способность АЛ синтезировать беТа-зндорфин подтверждена исследованиями Smith Е. М., 1985. 0КТ-4+ клетки являются ведущим участником в реализации основных механизмов иммунопатологического конфликта, следовательно их связь с повышенным синтезом бета-эндорфина может являться одним.из новых патогенетических механизмов.. Активность ЛОР дельта- и мю- типа прямо коррелировала с общим содержанием Т-лимфоцитов (R=0,38 и-К=0,39, соответственно),однако достоверных отличий эти значения не достигли.

Повышенное содержание бета-эндорфина в сыворотке крови оказалось связанным со снижением пролиферативного ответа е реакции блаоттрансформации лимфоцитов (РБТЛ) на ФГА (R= «=-0,71, р < 0,01) и с рецепцией AJI больных рекомбинантного ИЛ-2 (R=-0,83, р < 0,01).

Наиболее вероятно, что ато связано с гиперактивацией лимфоцитов in vivo. Активированные клетки хуже in vitro отвечали на экзогенный ИЛ-2. С другой стороны бета-эндорфин мокет являться одним из блокирующих факторов сыворотки. Высокая активность ЛОР дельта- и мю-типа была связана о высоким пролиферативным ответом в РБТЛ на ФГА (R=0,56 и R=0,32,p < 0,01, соответственно),и с рецепцией рекомбинант-ного ИЛ-2 (R=0,61 и R=0,67,p < 0,01, соответственно). Полученные разнонаправленные связи, вероятно обусловлены тем, что концентрация опиоидов в сыворотке не всегда отражает его физиологическую аотивность, в том числе и в регуляции иммунитета. Выявленные взаимосвязи между показателями опио-идной системы и иммунологическими параметрами могут играть роль в патогенезе PC, участвуя в активации клеток. Не исключена и возможность модулирования бета-эндорфиноы экспрессии

рецепторов .. ИЛ-2. Возможность такой модуляции показала в ряде исследований (КЛетЬет Т.. Н, КПгоу Т, 1985, УуЬгап Д. е1 а1., 1987).

С целью возможной коррекции изменений активности опио-идной и иммунной систем 62 больным РС проведено лечение да-ларгином -синтетичеашм аналогом эндогенного лей-энкефалина

Анализ литературных данных позволяет рассматривать опиоиды в качестве перспективных иммуномодуляторов (Зозучя А. Л. и др. , 1990, Коростылев С. А. 1990).

Препарат вводили по 1,0 мг 2 раза в день внутримышечно в течении пяти дней. Лечение проводили двойным слепым методом: вначале больные г ддучали плацэбо в аналогичных ампулах (в вид*» прозрачного бесцветного раствора) по той ке схеме, затем даларгин. Группу сравнения составили 30 больных, получавши:: плацебо на'фоне неспецифяческой, общеукрепляющей терапии. Побочного эффекта препарата ни в одном случае отмечено не было. Обязательное неврологическое исследование проводилось при поступлении больного через 14,30 дней; 3,6 месяцев и 1 год. Улучшение клинического состояния на фене лечения рассматр:г алось при уменьшении минимум на 1 балл по 1Ш, при увеличении но менее чем на 1 балл по Ш состояние расценивалось как ухудшение. В зачкстюсти от результатов лечения больные были разделены на 2 подгруппы: с улучшением кгнничесг.сго состояния (38 больных) и отсутствием эффекта или ухудшением состояния (24 больных).

Больные первой и второй подгрупп на различались по возрасту, дебюту л течении заболевания, вместе с тем во второй подгруппе преобладали больные с I _>лее выраженным неврологическим дефицитом н нарастанием актгашостл патологического процесса,

.В подгруппе, .с улучшением клинического состояния отмечаюсь увеличение исходно сниженных параметров активности' ЛЗР д«льтз- (в большой степени) л к»-типа,йсходщо зваче-шя составляли 1?5,'2±7,3 пмоль. зкв. лигеяда/мл.илааш я ИВ,б й 6,2 ' пмоль. экв. лиганда/ыл. тшат, р < 0,05, 'оооизет-отзгаио, поело лечения - 1 СО,4А10.2 тюль.зкв.лигандя/мл.

плазмы и 148,1 ±11,1 пмоль экв. лиганда/мл. плазмы, р < 0,05, соответственно.

СВ и ШП также достоверно различались до и после лечения: 12.4t0.31, 4,61±0,1.' и 10. 3 ±0.25, 3.240.1, р< 0,05, соответственно. Это прослеживается при наблюдении за больными в течение 3-х месяцев.

Улучшение клинического состояния в большей степени касалось нарушений в двигательной сфере: увеличивался объем активных движений в конечностях, нарастала мышечная сила, снижался мышечный тонус, в ряде случаев регрессировали расстройства функций тазовых органов, в мены'^й степени это касалось мозжечковых расстройств. У больных с отсутствием эффекта или ухудшением состояния на фоне лечения исходная активность ЛОР дельта- и ыю-типа была ниже,чем в подгруппе с улучшением (115,9±11,0 пмоль экв.лиганда/мл.плазмы и 107,4 Зе5,2 пмоль экв. лиганда/мл. плазмы, соответственно), в этой шд группе на фоне лечения даларгином отмечено незначительнее снижение опиоидной активности, без достоверных различий (С исходным уровнем (113,7±9,3 пмоль экв. диганда/мл. плазмы и 109,9±7,1 ьмоль экв. лиганда/мл. плазмы).

В подгруппе больных получавших плацебо и неспецифическую терапия исходная активность опиоидов существенно не отличалась от 2-х других подгрупп (124,5±.9,Б пмоль экв. лиганда/мл. плазмы и 112,4 ±6,2 пмоль экв. лиганда/мл. плгчмы, соответственно), после лечения, достоверных различий такие не получено (130,4110,5 пмоль экв. лиганда/мл. плазмы я 118,6 ±9,1 пмоль экв. лиганда/мл. плазмы, соответственно).

Полученные нами данные совпадают с исследованиям других авторов (Зоауля А. А., Шурин П Р., 1930), которыми было получено увеличение исходно сниженной активности апиоидов пяаямы 'после лечения даларгином у 'больных о "боксшш амиотра-•фяческга« скперозон.

Возможно, одним из -механизмов регулирующего влияния ЯаЗйрШа йа Иммунитет, является его действие на эндогенна •оййоедйУй 'Сййте'йу,'Которое ъюэвю ¡рассматривать как регулиру-чашё й уоаешййх «рсшчейкой йаТб&лт

- 17 -

Другой возможный механизм действия даларгина,связанный о быстры),! улучшением клинического состояния, мокет быть обусловлен действием его на молекулярном уровне, обусловленном влиянием на метаболизм цАМФ, ЦГМФ, обмен Са V К; е-влиянием на состояние мембран и нейрональнуга проводимость. В связи с этим можно предположить, что введение экзогенных ОП приводит к улучшении вроведсзнм нервного импульса по де-миелинизированному нервному волокну. Этим можно объяснись быстрый эффект препарата ¡1 улучшение нейрофизиологических характеристик по данным КСВП на АС у больных о улучшением состояния (Гусев Е. И. и др., 1990). Применение даларгина показало, что он способе л регулировать активность эндогенной опиоидной системы у больных РС.

Таким образом комплексное динамическое изучение ' функционирования опиоидных пептидов при РС, выявившее, что наиболее тесно исследуемые покааатели связаны с длительностью заболевания и активностью патологического процесса, а тана® их связь с рядом иммунологических параметров,свидетельствует о вовлечении опиоидной системы в сложный патогенетический механизм это"'о заболевания, дополняет представление о метаболических нарушениях при этом заболевании,способствует более глубокому пониманию сущности функционирования и регуляции различных звеньев иммунной системы. Применение синтетических аналогов опиоидных пептидов, направленных на активацию эндогенной опиоидной системы и влияющих на систему иммунитета, открывает новые перспективы в иммуиогсоррекцш при РС.

ВЫВОДЯ

1.У больных рассеянный склерозом выявляется снижение вытесняющей активности лигандов опиоидных рецепторов дэлштр-и мэ-тяпе п плазма кроюл и повышение соотношения активностей ЖР делъта/мв-по сравнения с крятрояв»,

2. Динамика иамэнения вшйошгазрй активности 'лигандов опиоидных рецэпторов плазмы окаа*члаоь- связанной о д.штель-

ностью заболевания и о активностью патологического процесса: при нарастании клинических симптокчз и длительном; свыше 1С лет, течении процесса, активность лигандов опиоидных рецепторов дельта-- и мю-типа бьга минимальной,в дебюте заболевания выявлено резкое повышение исследуемых показателей, что подтверждается корреляционной взаимосвязью.

3. Концентрация бета-эндорфина в сыгоротке крови ташке коррелировала с активностью и длительностью заболевания : достоверное повышение концентрации исследуемого параметра отмечено в подгруппе с активным рассеянным склерозом, у больных с длительным течением - снижение.

4. Корреляционный и регрессионный анализ позволил выявить взаимосвязь между показателями активности опиоидной системы и некоторыми параметрами клеточного иммунитета: по- • лучены прямые корреляционные связи между активностью'лигандов опиоидных рецепторов дельта- и мю-типа и содержанием 0КТ-3+- клеток, ИС в РБТЛ на ФГА, ИВ рекомбинантного ИЛ-2; концентрацией бета-эндорфина в САЛ и содержанием ОКТ— клеток. Обратные корреляционные зависимости получены между содержанием бе а-эндорфина в сыворотке крови и показателями ИС в РБТЛ на ФГА и Ж рекомбинаятного ИЛ-2.

5. Показано регулирующее действие синтетичес1юго аналога яей-энкефапина-даларгчна на показатели, характеризующие эндогенную опиоидную систему. Наибольший .клинический эфсЬигсг был получен у больных со стабильным течением рассеянного склероза и сопровождался активацией исходно сниженных показателей' активности опиоидов плазмы.

6.Полученные данные,свидетельствующие об изменении эндогенной опиоидной системы в динамике патологичеаюго процесса при рассеянном склерозе, могут служить дополнительными критериями определения активности и прогноза заболевания и обосновывают целесообразность направленного применения синтетических аналогов опиоидных пептидов для лечения рассеянного склероза

- 19 -

ПРАКТИЧЕСКИЕ решдзэдацшз

Полученные данные обосновывают целесообразность использования дал?ргина и' других синтетических аналогов опиоидных пептидов для лечения РС.

Исследования активности .рпр плазмы крови и концентрации бета-эндорфина в сочетании с иммунологическими методами могут быть использованы в клинической практике в кач&сп з дополнительных диагностически-прогностичеасих критериев у больных РС.

СЫШ< ООИРАЦЕГШ

АКТГ - адренокортккотропный гормон

АЛ - активированные чимфоциты

ИВ - индекс восстановления

ИЛ-2 - иитердейгаш-2

кс - индекс стимуляции

ксвп па ас - коротколатеитные стволовые вызвачныэ

лор

ркгл

рс

сал

сб

<1ГА

иа

потенциалы на акустическую • стимуляция

- ллгандц спиопдных рецепторов

- реакция блаоттрапсформацпи лимфоцитов

- рассеянный склероз

- оупорнаталты активированных лимфоцитов

- сумма баялся

- фитогемаггготшши

- шкала прогрессировать

- Ш -

ешж РАБОТ, ШУЕВШШИШЫХ Ш .ТЕПЕ ДгОЕРТАЩШ

1. Клинико-иммунонейрофиэиологичеокое испыталие ыиело-пида при рассеянном склерозе. // Материалы межобластной научно-практической конфренции по инфегарюниым заболеваниям нервной системы.: Сб. тр. - Кострома, 1990 г. , с. 136-139

(В соавт.)

2. Взаимодействие опиоидной системы и клеточного иммунитета в патогенезе рассеянного склероза // ' Материалы 'межобластной научно-практической конфренции по инфекционным заболеваниям нервной системы.: Сб. тр. - Кострома, 1990 г., с. 168-169 (В соавт.)

3. Исследование иммунорегуляторного опиатного пептида бета-эндорфина и некоторых показателей клеточного иммунитета у больных рассеянным склерозом. // 6 Всероссийский съезд невропатологов.: Тез. докладов.: 1 т. - !»1, 1990 г., с. 213-214 (В соа^т.)

4. Динамическое клинико-иммунологическое обследоваание 70 больных рассеянным склерозом в течении 3 лет: возможность иммунологического мониторинга активности патологического процесса. // Материалы 1 съезда неврологов и психиатр-ров Литвы.: Теа. докладов.: Каунас, 1990г. с. 166-160 (В соавт.)

б. Исследование неточного иммунитета и системы опиатных пептидов у больных рассеянным склерозом. // Журнал невропатологии и психиатрии им. С. С. Корсакова, 1990г. т. 80, вып. Й, о. 19-24 (В соавт.)

^.5.12,1991г.

8.ак, 753 Об зи 1.25п.л. Тир.'ЮОэка.