Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Роль β-эндорфина в нейроэндокринной регуляции функций иммунной системы

На правах рукописи

Гейн Сергей Владимирович

РОЛЬ р-ЭНДОРФИНА В НЕЙРОЭНДОКРИННОЙ РЕГУЛЯЦИИ ФУНКЦИЙ ИММУННОЙ СИСТЕМЫ

14 00 36 Аллергология и иммунология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Пермь - 2007

003159576

Работа выполнена в аналитической лаборатории Института экологии и генетики микроорганизмов УрО РАН, Пермь

Научный консультант:

академик РАН и РАМН, д м н, профессор

Черешнев Валерий Александрович

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Сибиряк Сергей Владимирович, доктор медицинских наук, профессор Кузнецов Валериан Фёдорович, доктор медицинских наук, профессор Юшков Владимир Викторович

Ведущая организация: Институт экспериментальной медицины РАМН, Санкт-Петербург

Защита состоится «26» 2007 г. в /¿>оачасов на заседании

диссертационного совета Д 004 019 01 в Институте экологии и генетики микроорганизмов УрО РАН по адресу 614081, г Пермь, ул. Голева, 13 Факс (342)2446711

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института экологии и генетики микроорганизмов УрО РАН, Пермь

Автореферат разослан « 2Ó » дг^о2007 г Ученый секретарь диссертационного совета,

чл -корр РАН yf Ившина Ирина Борисовна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Поддержание гомеостаза определяется взаимодействием нервной, эндокринной и иммунной систем организма. Известно, что иммунная система многокомпонентна, ее функционирование обеспечивается сложной сетью взаимосвязанных сигналов Одними из важнейших посредников во взаимодействии нервной и иммунной систем выступают эндогенные опиоидные пептиды, представляющие собой группу факторов и играющие ключевую роль в процессах адаптации организма (Корнева, Шхинек, 1988, Зозуля, Пшеничкин, 1990; Корнева, 2007, Maier, 2003; Pruett, 2003; Bodnar, Klein, 2006, Sharp, 2006, Wilbert-Lampen et al, 2007) Несмотря на то, что в последние годы изучению влияния эндогенных опиоидных пептидов на процессы регуляции иммунитета в литературе уделяется достаточно много внимания (Panerai, Sacerdote, 1997; Tomassim et ai, 2003, 2004, Sacerdote, 2003), вопрос о механизмах реализации эффектов биорегуляторных пептидов данного класса остается крайне актуальным.

Основной источник опиоидных пептидов в организме - центральная нервная система, в которой группа пептидных гормонов (адренокортикотропный гормон, Р-липотропин, меланоцитстимулирующий гормон, 3-эндорфин) образуется в результате расщепления большой молекулы - предшественника проопиомеланокортина При этом наиболее активным и полифункциональным представителем пептидов группы проопиомеланокортина является (3-эндорфин. Основной источник (5-эндорфина в центральной нервной системе - аркуатное ядро гипоталамуса, на периферии - промежуточная доля гипофиза, из которой пептид секретируется в кровь при стрессе, шоке, травмах и физических нагрузках (3-эндорфин является ключевым фактором, осуществляющим контроль стрессиндуцированных изменений иммунитета со стороны эндогенной опиоидной системы (Зозуля, Пшеничкин, 1990, Pedersen, Hoffman-Goetz, 2000) Роль других соединений из семейства эндогенных опиоидных пептидов, в частности энкефалинов, при стрессе более скромна, а, по мнению отдельных авторов (Owens, 1987), вообще отрицается

Известно (Panerai, Sacerdote, 1997), что изменение концентрации 3-эндорфина в головном, спинном мозге и гипофизе часто сочетается с ^ неврологическими и аутоиммунными нарушениями (мигрень, рассеянный^ ^

склероз, болезнь Крона) Важную роль ß-эндорфин играет в патогенезе инфекционных заболеваний, модулируя функции клеток адаптивного и естественного звеньев иммунной системы при их контакте с микроорганизмами и вирусами (Ляшев, 2000, Plotmkoff, 1999, Sitte et al, 2007) В связи с этим изучение роли ß-эндорфина в регуляции иммуногенеза представляет большой интерес

Широкий спектр биологической активности ß-эндорфина определяется его способностью взаимодействовать с различными по своей природе сайтами связывания, к которым относятся опиоидные (налоксон-чувствительные) и неопиоидные (налоксон-нечувствительные) рецепторы. Экспрессия опиатных рецепторов трех основных классов (¡i, 8, к) и неопиоидного рецептора на клетках различных органов и тканей, в том числе и клетках иммунной системы, доказана методами радиолигандного связывания и детекции соответствующей РНК (Наволоцкая и др, 2004; Madden, 1995; Plotmkoff, 1999, Bidlack, 2000, Kraus et al, 2006, Lotsch et al, 2006, Sharp, 2006) Подобное распределение участков связывания ß-эндорфина объясняет широкий спектр активности данного пептида и указывает на возможность, как прямого, так и опосредованного влияния на формирование иммунного ответа (Зозуля, Пшеничкин 1990, Bidlack, 2000; Stanojevic et al., 2006)

Нерешенными остаются вопросы, касающиеся изучения роли эндогенной опиоидной системы в стрессивдуцированных изменениях гуморального и клеточноопосредованного иммунитета, различных рецепторов в регуляции выраженности иммунных процессов, индуцируемых эндогенными опиоидами при стрессе, а также на фоне введения двух основных стрессреализующих факторов - глюкокортикоидов и катехоламинов Малоизученными остаются молекулярные и клеточные механизмы иммунорегуляторного действия ß-эндорфина, связанные с эффектами данного гормона на процессы пролиферации, кооперации и дифференцировки клеток иммунной системы, продукцию ряда ключевых цитокинов (IFN-y, DL-4, IL-10, IL-12), являющихся маркерными для регуляторных Т-лимфоцитов 1 и 2 типа (Thl/Th2) и определяющих выбор типа иммунного ответа В литературе имеются довольно противоречивые данные о влиянии ß-эндорфина на функции клеток естественного

иммунитета (Van den Bergh et ai, 1994, Peterson et al, 1998, Voccanno, Kastin, 2000, Sacerdote, 2003, Bodnar, Klein, 2006)

Цель настоящей работы - изучение роли опиатергических механизмов в нейроэндокринной регуляции иммуногенеза с оценкой эффектов Р-эндорфина на процессы пролиферации, дифференцировки и кооперации клеток иммунной системы

Основные задачи исследования

1. Изучить роль основных компонентов эндогенной опиоидной системы в регуляции процессов иммуногенеза в условиях острого стресса

2 Исследовать возможность оиосредованности иммунорегуляторных эффектов глюкокортикоидов и катехоламинов через взаимодействие с эндогенной опиоидной системой

3 Оценить влияние Р-эндорфина на функции клеток адаптивного иммунитета и исследовать механизм действия пептида на процессы пролиферации, кооперации и ТЫ/ТЪ2-дифференциравки лимфоцитов

4 Изучить роль Р-эндорфина в регуляции функций клеток естественного иммунитета.

Научная новизна работы. Экспериментально обоснована интегральная роль эндогенной опиоидной системы в нейроэндокринной регуляции иммуногенеза в норме, в условиях стрессорного воздействия и при введении стрессреализующих гормонов - глюкокортикоидов и катехоламинов. Впервые изучено влияние Р-эндорфина на процессы активации, пролиферации, кооперации и ТЫ/ТЬ2-дифференцировки Т-лимфоцитов с оценкой роли различных клеточных фракций Выявлен характер участия опиатных рецепторов различных типов в регуляции иммунных реакций под воздействием Р-эндорфина и синтетических лигандов опиатных рецепоров пептидной природы. В экспериментах т vivo и т vitro подтверждено, что основной мишенью Р-эндорфина является гуморальное звено иммунного ответа, при этом выявлена зависимость эффектов Р-эндорфина от фазы развития иммунной реакции. В модели пролиферативного ответа лимфоцитов обнаружена зависимость эффекта р-эндорфина и селективных агонистов ц- и 5-рецепторов от концентрации митогена и концентрации исследуемых пептидов Выявлена ключевая роль 8-рецепторов в реализации стимулирующего эффекта Р-эндорфина на

пролиферацию и продукцию 1Ь-4 Впервые установлена зависимость стимулирующего эффекта опиоидных пептидов на пролиферацию лимфоцитов и продукцию 1Ь-4 от присутствия моноцитов в клеточной культуре. Обнаружено, что (З-эндорфин снижает степень выраженности реакции бластгрансформации лимфоцитов при удалении моноцитов из клеточной культуры Показано, что З-эндорфин стимулирует фагоцитарную активность эффекторов естественного иммунитета и оказывает модулирующее влияние на цитокинпродуцирующую функцию моноцитов и нейтрофилов Изучен характер участия опиатных рецепторов в регуляции этих процессов

Теоретическая и практическая значимость. Полученные данные расширяют представление о роли (3-эндорфина и опиатных рецепторов разных типов в регуляции иммуногенеза Обосновано, что формирование иммунного ответа в норме и при стрессе, а также регуляция адаптивного и естественного иммунитета реализуется за счет механизмов, связанных с синтезом опиоидных пептидов Выявлен механизм влияния опиоидных пептидов на процессы ТЫ/ТЬ2-дифференцировки Т-лимфоцитов Полученные экспериментальные данные подтверждают целесообразность использования иммуномодулирующих свойств 3-эндорфина в терапии ряда аутоиммунных заболеваний (рассеянный склероз, болезнь Крона и пр). В связи с широким использованием агонистов опиатных рецепторов в практической медицине, необходим учет последствий их применения Результаты работы используются в лекционном курсе «Экспериментальная иммунопатология и иммунотерапия» на кафедре микробиологии и иммунологии Пермского государственного университета (614990, Пермь, Букирева 15).

Основные положения, выносимые на защиту

1. В условиях блокады опиатных рецепторов выявляется выраженная модификация иммунорегуляторных эффектов ротационного стресса, глюкокортикоидов и катехоламинов

2 р-эндорфин в высоких дозах угнетает, в низких - стимулирует гуморальное звено иммунитета, и при этом не влияет на выраженность реакции гиперчувствительности замедленного типа В клеточных культурах З-эндорфин стимулирует пролиферацию лимфоцитов и продукцию 1Ь-4, не

влияет на синтез IL-2 и IFN-y, при этом усиливает степень поляризации Т-хелперов в направлении ТЪ2-клеток В реализации стимулирующих эффектов (3-эндорфина на пролиферацию и продукцию IL-4 доминирующая роль принадлежит 5-рецепторам

3 Клетки моноцитарно-макрофагального ряда играют важную регуляторную роль в направленности эффектов 0-эндорфина в отношении функциональной активности CD4+ лимфоцитов

4 (J-эндорфин стимулирует фагоцитарную активность эффекторов естественного иммунитета и оказывает модулирующее влияние на цитокинпродуцирующую функцию моноцитов и нейтрофилов

Связь работы с крупными программами. Работа проводилась в течение 2000-2007 гг в соответствии с планом НИР ИЭГМ УрО РАН (номер госрегистрации темы НИР 019 009927), в рамках Программы фундаментальных исследований Президиума РАН «Молекулярная и клеточная биология»; гранта РФФИ № 06-04-49001, а также грантов молодых учёных Президиума УрО РАН 2003,2005 гг

Апробация работы. Материалы диссертации представлены на Международном симпозиуме «Взаимодействие нервной и иммунной систем в норме и патологии», Санкт-Петербург, 2007, V-VIII конференциях с международным участием «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге», Санкт-Петербург, 2001-2007, XIX Российском съезде физиологического общества им. И.П Павлова с международным участием, Екатеринбург, 2004; VI Международной конференции «Проблемы загрязнения окружающей среды», Пермь-Казань, 2005, III съезде Российского научного общества иммунологов, Екатеринбург, 2004, I-V конференциях иммунологов Урала, Екатеринбург, 2001, Пермь, 2002, Челябинск, 2003; Уфа, 2005, Оренбург, 2006, I-II конференциях молодых ученых «Современные проблемы микробиологии, иммунологии и экологии», Пермь, 1999, 2002

Публикации. Материалы диссертационной работы обобщены в 46 печатных работах, в том числе 15 экспериментальных статьях и 31 материале конференций

Объем и структура работы. Диссертация изложена на 251 странице, содержит 35 таблиц, 49 рисунков и состоит из введения, обзора литературы, описания объектов и методов исследования, 7 глав результатов собственных

исследований, обсуждения, выводов, списка цитируемой литературы, включающего 448 наименований, в том числе 124 на русском и 324 на английском языках

Место проведения работы. Работа является частью исследований, выполняемых в аналитической лаборатории ИЭГМ УрО РАН (зав. - к г -м н М.А Шишкин) совместно с лабораторией экологической иммунологии (зав - к м н Б А Бахметьев) по изучению механизмов иммуномодулирующих эффектов гормонов, продукция которых изменяется на фоне экологического воздействия. Исследования по проблеме нейроэндокринной регуляции иммуногенеза были инициированы профессором, заслуженным деятелем науки РФ НН Кеворковым Научные положения диссертации и выводы, вытекающие из анализа полученного экспериментального материала, базируются на результатах собственных исследований автора

Автор выражает искреннюю благодарность М А Шишкину, к.х н СП Тендряковой, профессору М В Черешневой, за внимание и моральную поддержку Автор особо признателен сотрудникам группы радиоизотопных исследований к.бн ТА Баевой, инженеру ЕГ. Чижовой, магистрантам кафедры микробиологии и иммунологии Пермского государственного университета К Г. Горшковой и ИЛ Шаравьёвой, способствующим завершению настоящей работы и чей вклад в определенные разделы исследований отражен в приведенных в списке литературы публикациях Автор благодарит главного специалиста Муниципального управления здравоохранением Ростехнадзора, к.мн В.Г Рыжаенкова за помощь в проведении иммуноферментного анализа

Глубокую благодарность и признательность автор выражает своим учителям и наставникам, академику РАН и РАМН В А Черешневу и доценту Ю.И Шилову, оказавшим большое влияние на выбор целей научного поиска и формирование научного мировоззрения автора

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования. В работе использовали белых беспородных мышей массой 20-22 г и лейкоциты периферической венозной крови, полученной от здоровых людей - добровольцев мужского пола в возрасте 19-35 лет

Для экспериментального моделирования реакции стресс использовали ротационную модель Ротация мышей производилась в течение 60 мин по 10 мин с перерывами по 5 мин при 78 об/мин Роль опиатных рецепторов в постстрессорных изменениях иммунных реакций исследовали путем их блокады налоксона гидрохлоридом и нагприндола гидрохлоридом Налоксона гидрохлорид (DuPont, США) в разовой дозе 0,2 мг/кг массы тела и селективный антагонист 8-опиатных рецепторов налтриндола гидрохлорид (ICN, США) в дозе 0,1 мг/кг вводили животным подкожно однократно за 20 мин до ротации (Ашмарин, 1988; Михайлова и др , 1992, Croock et al, 1992) В дальнейших экспериментах в системе т vivo дозы опиатных антагонистов не изменялись Иммунизацию животных производили через 1 ч после окончания ротации

При исследовании иммунорегуляторных эффектов опиоидных пептидов т vivo ß-эндорфин (Sigma, США) в диапазоне доз от 100 мкг/кг до 0,0005 мкг/кг вводили однократно внутрибрЮшинно в объеме 0,2 мл Контролем для животных, получавших ß-эндорфин, служили мыши, которым вводили по той же схеме 0,9% NaCl ц-агонист DAGO ([d-Ala2,N-Ме-РЬе4,С1у3-о1]-энкефалин и 5-агонист DADLE ([d-Ala2,d-Leu5] - энкефалин) (Sigma, США) в диапазоне 10 - 0,0001 мкг/кг вводили по схеме аналогичной введению ß-эндорфина Иммунизацию животных производили через 1 ч после введения опиоидных пептидов.

Гидрокортизона ацетат (Гедеон Рихтер, Венгрия) в дозе 50 мг/кг массы тела вводили однократно внутрибрюшинно Адреналина гидрохлорид (Московский эндокринный завод, Россия) вводили подкожно однократно в дозе 1 мг/кг Налоксон и селективный антагонист 8-опиатных рецепторов налтриндол вводили подкожно за 20 мин до введения гормонов (3 инъекции через 2,5 ч в группе с гидрокортизоном и 1 инъекция в группе с адреналином). Контролем служили интактные мыши, подвергшиеся иммунизации, но не получавшие препаратов Дополнительным контролем для животных, получавших гидрокортизон и опиоидные пептиды, служили мыши, получавшие по той же схеме изотонический раствор хлорида натрия Иммунизацию опытных и контрольных мышей проводили одномоментно через 3 ч от начала эксперимента в группах с гидрокортизоном, через 30 мин - в группах с адреналином

Для моделирования локального иммунного ответа животных иммунизировали эритроцитами барана (108 клеток вводили подкожно в подошвенную поверхность правой стопы) На 4-е сутки вводили разрешающую дозу антигена (108 клеток) На 5-е сутки оценивали выраженность иммунного воспаления при реакции ГЗТ путем регистрации толщины (инженерным микрометром) и массы (на торсионных весах) опытной и контрольной стопы, количество ядросодержащих клеток (ЯСК); интенсивность антителогенеза методом локального гемолиза в геле агарозы (Jerne, Nordin, 1963). Оценку фагоцитарной активности клеток периферической крови, селезенки, регионарного и отдаленного подколенных лимфатических узлов проводили методом В Н Каплина с соавт. (Каплин, 1992, 1996) в модификации (Шилов и др , 1997,1998)

Нефракционированную клеточную взвесь получали путем отстаивания верхнего слоя плазмы крови с лейкоцитами Выделение фракции мононуклеаров и нейтрофилов проводили на градиенте плотности фиколл-верографин Разделение моноцитов и лимфоцитов проводили методом адгезии на чашках Петри CD4+ Т-клетки выделяли при помощи набора магнитных бус Dynabeads М-450 CD4 (Invitrogen, США) Культивирование клеток проводили в течение 24, 48 и 72 ч в пластиковых 24 и 96-луночных планшетах (Orange Scientific, Бельгия) в соответствии с традиционными методиками с использованием полной питательной среды, приготовленной на основе RPMI 1640 или среды 199 (Биолог, Россия) с добавлением 10 шМ HEPES, 2 шМ L-глутамина (Sigma, США), 100 мкг/мл гентамицина и 10% эмбриональной телячьей сыворотки (Биолот, Россия) или аутоплазмы во влажной атмосфере с 5% СОг при 37°С

Пролиферативную активность оценивали по включению 3Н-метилтимидина Радиоактивность проб определяли на жидкостном сцинтилляционном счетчике Guardian (Wallac, Финляндия). Для определения концентрации IL-lß, TNF-a, IL-6, EL-8, DL-lra, IL-2, IL-4 и EFN-y в супернатантах культур клеток использовали спектрофотометр Униплан (Пикон, Россия) и иммуноферментные тест-системы производства ООО Протеиновый контур, ООО Цитокин, Санкт-Петербург, Вектор-Бест, Новосибирск В экспериментах in vitro использовали агонист 5,ц-опиатных рецепторов ß-эндорфин в концентрациях 10"7-10"12М, меланотропин

потенцирующий фактор (MPF) - фрагмент 88-91 ß-липотропина (Lys-Lys-Gly-Glu) в концентрациях 10~7-10"12М, ц-агонист опиатных рецепторов DAGO ([с1-А1а2,Н-Ме-РЬе4,01у3-о1]-энкефалин) в концентрациях 107- 10"12М, 5-агонист опиатных рецепторов DADLE ([й-А1а24-Ьеи51-энкефалин) в концентрациях 10"7-10'12М; неселективный антагонист опиатных рецепторов налоксона гидрохлорид и селективный антагонист 8-рецегггоров налтриндола гидрохлорид в концентрациях 10"6, 10"8, Ю"10М, липополисахарид (ЛПС) Escherichia coli 026 В6 - ОД мкг/мл (Sigma, США), фитогемагглютинин (ФГА) - 1,25, 2,5, 5,0; 10,0, 20,0 мкг/мл (Sigma, США), диклофенак натрия (ДН) 25 мкг/мл, моноклональные анти-IL-lß антитела - 2 мкг/мл.

Полученные данные обрабатывали с помощью многофакторного дисперсионного анализа для парных данных и корреляционного анализа Достоверность различий между группами оценивали с помощью i-критерия Стьюдента и критерия Фишера наименьшей значимой разницы. Сортировку и обработку данных проводили на компьютере IBM PC с использованием программ Statisüca for Windows 6.0 (Statsoft, Inc, США) и DIASTA (Московский государственный университет, Россия).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИИ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Влияние ротационного стресса на показатели иммунитета. Роль опиатных рецепторов. В большинстве опубликованных работ, посвященных изучению влияния стресса на иммунный ответ, исследуются изменения системного иммунного ответа в условиях внутривенной или внутрибрюшинной иммунизации. Принимая во внимание разные компоненты внутрисистемной регуляции общих и локальных форм иммунного ответа, представлялось целесообразным исследование эффектов стресса и блокады опиатных рецепторов в условиях развития локальной формы иммунного ответа

Как видно из рис 1, в индуктивную фазу иммунного ответа на фоне стресса наблюдается увеличение числа АОК в лимфатическом узле (ЛУ) и усиление степени выраженности реакции ГЗТ Блокада 6-опиатных рецепторов приводит к ещё более выраженной активации антителогенеза, в

Контроль Стресс Стресс+налтриндол Стресс+налоксон Налтриндол Налоксон

Контроль Стресс Стресс+налтриндол Огресс+налоксон Налтриндол Налоксон

3

3

_ Контроль

3* * Стресс

—Й* ** Сгресс+налтриндол Стресс+налоксон Налгривдол Налоксон

3

А*

_а. .««

3

1 2 3

1о§10АОК/орг

О 0,5

1 1,5 2 2,5 3 1о01оАОК/млн

В

3

Контроль Стресс Стресс+налтриндол Стресс+налоксон Налтриндол Налоксон

10

15

Х104

О 5 10 15 20 25 30 35

%

Рис 1 Влияние ротационного стресса в условиях блокады опиатных рецепторов на абсолютное (А) и относительное (Б) число АОК, количество ЯСК в регионарном лимфатическом узле (В) и выраженность реакции ГЗТ (Г) в индуктивную фазу иммунного ответа.

Здесь и на рис 2 * - р<0,05 к контролю, • - р<0,05 к стрессу

то время как на фоне налоксона стимулирующий -эффект ротационного стресса на антителогенез отменяется. Стресс индуцированное усиление выраженности реакции ГЗТ отменяется как ыалоксоном, так и налтрнндолом. Изолированное введение животным налтриндола или налоксона па количество АОК и степень выраженности ГЗТ влияния не оказывает. В эффектор ну ю фазу иммунного ответа ротационный стресс (рис. 2) стимулирует как клеточный, так и гуморальный ответ, однако, в отличие от индуктивной фалы, на фоне блокады опиатных рецепторов эффекты стресса не модифицируются. Таким образом, стимуляция опиатных рецепторов в индуктивную фазу иммунного ответа играет важную роль в стрессинду дарованных изменениях иммуногенеза и ответственна за активацию функций иммунной системы при стрессе.

Влияние гидрокортизона н адреналина на локальный иммунный ответ в условиям блокады опиатных рецепторов. В процессе развития стрессре акции основные стрессреализующие факторы глюкокорти ко иды,

Контроль Стресс Стресс+наятрнндол Стрссс+нолохсон Налтриндол Налоксон Щ

КоотрпЛЬ Стресс Стресс+н&гпрнкдол

Ииятриидол Налоксон

Стрссс+яалоксоя ЬЩаЩЙШ^— :

Ко отрога Стресс Стресс+катгтрикдол

Стрессч-налокссн Щд^^ВД-*

Канмсоп

О 1 2

Г

Контроль !

Стресс ]

Стреос+калтриндал -^.Ла*^ ■ ♦

Стресс-шалоксон \ Нялтрлкдол Налоксон]

Рис. 2. Влияние ротационного стресса в условиях блокады опиатных рецепторов на абсолютное (А) и относительное (Б) число АОК, количество ЯСК в регионарном лимфатическом узле (В) и выраженность реакции ГЗТ (Г) в эффектор ну ю фазу иммунного ответа.

Таблица 1. Влияние гидрокортизона в условиях блокады ц- и 8-ониатных рецепторов на число АОК, количество ЯСК в лимфатическом узле и выраженность реакции ГЗТ в индуктивную фазу иммунного ответа_

Экспериментальное воздействие Лимфатический узел

ЯСК на орган (хЮ6) 1о§т АОК на 106ЖЖ 1о§ю АОК на орган

Интактные животные 8,93±1,35 2,15±0,15 3,01±0,17

(контроль), п=19 (142) (1014)

Физиологический 7,79±1,08 2,27±0,16 3,10+0,13

раствор, п= 16 (186) (1252)

Гидрокортизон, п=19 4,98±0,68*# 1,6410,23 2,17±0Д5*#

(43) (149)

Гидрокортизон 6,71±0,75а 0,96±0,21*#а 1,50±031*#

+наяоксон, п=15 (9) (32)

Гидрокортизон 5,87±0,71 0,55±0,14*#а 1,07±0,22*#а

+налтриндол, а=17 (4) (12)

Налоксон, в=10 7,76±1,27 2,24±0,08 3,07±0Д4

(173) (1187)

Надтриндол. п=12 8,38±1,37 1,93±0,11 2,79±0,11

(86) (622)

Примечание. Здесь и в табл. 2, 3, 4 в скобках указана средняя геометрическая числа АОК (антилогарифм из средней арифметической 1о§ш числа АОК) * - р<й,05 к контролю, # - р<0,05 к физиологическому раствору; а - р<0,05 к гидрокортизону по непарному ¿-критерию Стыодента

катехоламины и эндогенные опиоиды находятся в тесной взаимосвязи и оказывают друг на друга взаимное регуляторное влияние (ОчСошюг, 2000) Как видно из табл. 1, в индуктивную фазу иммунного ответа гидрокортизон снижает количество ядросодержащих клеток в лимфатическом узле и абсолютное число АОК При введении гидрокортизона на фоне блокады опиатных рецепторов налоксоном и налтриндолом регистрируется отмена индуцированного гидрокортизоном снижения количества ЯСК и ещё более выраженное угнетение антителогенеза по абсолютным и относительным

Таблица 2. Влияние адреналина в условиях блокады р- н 5-опиатных рецепторов на число АОК, количество ЯСК в лимфатическом узле и выраженность реакции ГЗТ в индуктивную фазу иммунного ответа

Экспериментальное воздействие Лимфатический узел

ЯСК на 10Ею 1о§ю

орган АОК на АОК на

(х106) 106ЯСК орган

Интактные 6,29±1,04 2,43±0Д6 3,15+0,22

животные (контроль) (268) (1403)

п=П

Адреналин, п=9 5,71±0,74 2,07±0,14 2,79±0,16

(118) (618)

Адреналин 7,37±2,08 1,94±0,15* 2,73±0,24

+НЭЛОКСОН, 11=6 (86) (541)

Адреналин 6,62±1,30 1,78±0,25* 2,45±0,32

+налтриндол,п=11 (60) (283)

Налоксон, п=10 7,76±1,27 2,24±0,08 3,07±0,14

(173) (1187)

Налтриндол, п=9 8,07±1,82 2,08±1,97 2,90±0,13

(121) (803)

показателям, особенно ярко проявляющееся в условиях блокады б-рецепторов Изолированное введение экспериментальным животным налтриндола и налоксона на исследуемые показатели влияния не оказывает. В эффекторную фазу иммунного ответа гидрокортизон угнетает количество ядросодержащих клеток в лимфатическом узле, абсолютное число АОК, однако в отличие от индуктивного периода на фоне блокады опиатных рецепторов эффекты гидрокортизона на показатели клеточносги и антителогенеза не модифицируются.

Несколько иная картина наблюдается при анализе эффектов адреналина Как видно из табл 2, в индуктивную фазу адреналин оказывает статистически достоверный эффект на антителогенез по относительным показателям (Р=5,28; р<0,03), несмотря на то, что при межгрупповом сравнении по отношению к контролю угнетение относительного количества АОК имеет место только при комбинации адреналина с опиатными

Таблица 3 Влияние Р-эндорфина на число АОК, клеточность и выраженность реакции ГЗТ в регионарном лимфатическом узле_

Эксперименталь ное воздействие, р-эндорфин Число животных Лимфатический узел Интенсивность ГЗТ

ЯСК на т АО$на 10 ЯСК АО^на орган ИР по массе стопы, % •

Контроль 9 4,62±0,89 2,43±0,10 3,04±0,01 17,22±2,41

(271,28) (1088,94)

100 мкг/кг 9 4,33±0,71 1,98±0,22* 2,57±0,26* 19,84±3,68

(95,28) (370,54)

10 мкг/кг 8 5,25±0,70 2,06±0,26 2,76±0,25 23,92±3,46

(115,56) (569,35)

1 мкг/кг 9 4,87±1,06 2,46±0,18 3,05±0,16 20,25+4,25

(286,09) (1128,59)

0,1 мкг/кг 8 7,55±1,35 2,25+0,18 3,08±0,13 18,82+6,17

(117,27) (1198,91)

0,01 мкг/кг 9 5,33±1,13 2,68±0,09 3,34+0,13 26,72±3,88

(474,99) (2192,95)

0,001 мкг/кг 8 5,90±1,73 2,62+0,73 3,21+0,13 21,27+4,88

(421,49) (1607,54)

0,0005 мкг/кг 9 5,82±0,81 2,87±0,08* 3,61±0,07* 28,72±4Д0

(743,72) (4031,74)

Примечание. Здесь и в табл. 4 • - индекс реакции (ИР)* И Р = (Ро~ Рк)/Рк-100%, где Ро и Рк - показатели массы в опытной и контрольной конечностях * - р<0,05 к контролю по í-критерию Фишера наименьшей значимой разницы.

антагонистами В эффекторную фазу иммунного ответа адреналин на антителогенез в лимфатическом узле не влияет Таким образом, блокада опиатных рецепторов в индуктивную фазу иммунного ответа приводит к существенной модификации иммунорегуляторных эффектов глюкокортикоидов и катехоламинов, связанной с изменениями секреции р-эндорфина в ответ на введение гидрокортизона или адреналина (Mougey et al, 1986, Bagdy et al, 1989, Goodwin et al, 1992)

Влияние p-эндорфина на показатели клеточного и гуморального иммунитета. Степень выраженности эффектов p-эндорфина в системе in vivo

Таблица 4. Влияние р-эндорфина в условиях блокады опиатных рецепторов на число АОК, клеточность и выраженность реакции ГЗТ в регионарном лимфатическом узле в индуктивную фазу иммунного ответа

Экспериментальное воздействие Число животных Лимфатический узел Интенсивность ГЗТ

ЯСК на х орган (XI0 ) 1ОЙ10 АОК на 10 ЯСК 1ояю АОК на орган ИР по массе стопы, %

Контроль 18 5,34±0,62 2,35±0,10 3,02+0,11 22,43+3,19

(223,55) (1043,31)

Р-эндорфин 18 4,71±0,51 1,99±0,14* 2,36±0,15* 22,16+2,73

(100 мкг/кг) (98,80) (423,03)

Р-эндорфин 17 5,98±0,66 2,67+0,07* 3,40±0,08* 27,95±2,73

(0,0005 мкг/кг) (465,21) (2519,33)

Р-эндорфин 11 5,64±0,97 2,21+0,14 2,87+0,18 23,79+4,27

(100 мкг/кг) + (161,61) (747,62)

налоксон

р-эндорфин 12 5,95±0,66 2,16+0,12 2,90±0,14 28,57±6,77

(0,0005 мкг/кг) + (143,12) (798,77)

налоксон

р-эндорфин 11 7,18±41,24 2,50±0,07 3,29±0,05* 23,32±4,17

(100 мкг/кг) + (314,71) (1945,42)

налтриндол

р-эндорфин И 9,07±1,24* 2,52±0,09 3,43±0,12* 25,67±3,12

(0,0005 мкг/кг) + (327,67) (2673,98)

налтриндол

Налоксон 12 6,40+0,73 2,23±0,09 3,01+0,11 16,08+2,02

(170,40) (1013,98)

Налтриндол 8 6,98+0,55 2,04±0,24 2,87±0,21 18,36±1,92

(110,87) (755,38)

Примечание. * - р<0,05 к контролю по непарному ¿-критерию

Стьюдента

напрямую зависит от вводимой дозы пептида (табл 3) Пептид оказывает разнонаправленный эффект на гуморальный иммунный ответ, угнетающий в дозе 100 мкг/кг и стимулирующий в дозе 0,0005 мкг/кг образование АОК в

регионарном ЛУ. При этом статистически достоверного влияния (3-эндорфина на клеточность ЛУ и степень выраженности реакции ГЗТ не об i [ару ж и Бается. Таким образом, Р-э&цорфин в системе in vivo в зависимости от дозы как усиливает, так и угнетает образование антител о продуцентов.

Данные о влиянии [З-эщюрфина на фоне блокады опиатных рецепторов представлены в табл. 4. Блокада рецепторов нееелсктивныМ антагонистом налоксоном отменяет как угнетающий эффект дозы 100 мкг/кг, так и стимулирующий эффект дозы 0,0005 мкг/кг на относительное и абсолютное количество АОК. В то же время введение мышам p-эндорфина на фоне блокады {¡-рецепторов палтриндолом по абсолютным показателям не отменяет стимулирующего эффекта низкой (0,0005 мкг/кг) дозы пептида и приводит к увеличению числа АОК в ответ на введение животным высокой дозы (100 мкг/кг). Кроме этого, введение пептида в дозе 0,0005 мкг/кг на фоне налтриндола приводит к статистически достоверному увеличению клеточиости Л У по сравнению с контролем. На степень выраженности иммунного воспаления комбинация p-эндорфина с антагонистами опиатных рецепторов влияния не оказывает. Таким образом, Р-эндорфин в зависимости

о.1 о.о] o.ooi 0,0001

МКГ/КГ

го

..................................

7 " w , . . , ir- A, j —í—i

ñ j l I i | i ^ 1 шщ

к ю ¡ 0,1 шег/ki 0,01 0.001 0,0001

о,1 0.01 o.ooi o.oooi

мкг/кг

0.1 0,0! 0.001 0,0001 мкг/кг

Рис. 3. Влияние DADLE на относительное и абсолютное число АОК, выраженность реакции ГЗТ и клеточность в регионарном лимфатическом узле в индуктивную фазу иммунного ответа.

* - /?<0,05; ** - р<0,01; *** - р<0.001 к контролю по /-критерию Фишера наименьшей значимой разницы.

от дозы оказывает разнонаправленное влияние на образование антител опроду центов, tie влияя на клеточноопос ре до ванный ответ. Способность пептида взаимодействовать с S-рецептором проявилась только при введении высокой дозы, что, в свою очередь, указывает на возможность реализации через 5-рецептор и мму но супрессивных эффектов, напротив, блокада ^.-рецепторов отменяет эффекты пептида независимо от вводимой дозы. В эффектор ну ю фазу влияния (i-эндорфина на иммунный ответ не выявляется.

Параллельно нами изучалось сравнительное: влияние селективных ¡j и 5-агонистов на выраженность локального иммунного огвета. Как видно из рис. 3, в индуктивную фазу иммунного ответа введение 6-агониста DADLE в дозах 10,0; 0,1; 0,01 мкг/мд стимулирует количество АОК по абсолютным и относительным параметрам, не влияет на степень выраженности иммунного воспаления (ГЗТ) и оказывает разнонаправленное действие на клеточность регионарного лимфатического узла, при зтом в дозе 10 мкг/кг угнетая, а в дозе 0,1 мкг/кг, увеличивая содержание ЯСК. Введение ц-aro и иста DAGO статистически достоверно влияет только на относительное число АОК и клеточность регионарного лимфатического узла. В дозах J 0,0; 1,0; 0,0001

.гЧ—1 II i ! 1

К 10 ( <?,< мк^кг O.Ol o,aoi o.oooi

0,1 0.01 0,001 0,0001

0,1 0.01 0.001 0.0001 мкг'к:

Рис. 4. Влияние DAGO на относительное и абсолютное число АОК, выраженность реакции ГЗТ и клеточность в регионарном лимфатическом узле в индуктивную фазу иммунного ответа.

* - /'<0,05; ** - р<0,01; *** - р<0,001 к контролю по i-критерию Фишера наименьшей значимой разницы.

мкг/кг пептид активирует образование антителопродуцентов по относительным показателям и в диапазоне доз 10-0 1 мкг/кг угнетает количество ЯСК (рис. 4). Таким образом, по нашим данным, в системе in vivo эффекты ß-эндорфина и аналогов энкефалинов с ц,5-селективным спектром связывания DAGO и DADLE значительно варьируют по направленности действия, эффективному диапазону доз, взаимодействию с опиатными рецепторами различных типов, а также зависят от этапа, на конкретный опиоидный пептид вмешивается в развитие иммунных реакций В то же время наиболее выраженное активирующее влияние наблюдается при введении экспериментальным животным селективного агониста 8-рецепторов DADLE

Влияние ß-эндорфина, 88-91 фрагмента липотропина MPF, селективных лигангдов DAGO, DADLE на пролиферативный ответ лимфоцитов. Степень выраженности эффектов исследуемых опиоидных пептидов в системе in vitro зависит от их концентрации и присутствия митогена в культуральной среде Все лиганды опиатных рецепторов проявляют активность только на стимулированных митогеном культурах Как видно из рис 5, ß-эндорфин в концентрации 10'7М статистически значимо усиливает пролиферативный ответ лимфоцитов в культурах с ФГА 5 мкг/мл. Внесение пептида в культуры в концентрации 10"8М приводит к стимуляции реакции бласттрансформации в присутствии ФГА 2,5 мкг/мл Низкие (10"10, 10"ПМ) концентрации ß-эндорфина стимулируют пролиферативный ответ в культурах с ФГА 5,0 и 2,5 мкг/мл, соответственно Внесение ß-эндорфина в концентрации 1012М, отражающей фоновый уровень пептида в плазме крови, не оказывает существенного влияния на пролиферацию лимфоцитов А А Зозулей и С.Ф Пшеничкиным (1990) высказано предположение, что иммуномодулирующие эффекты ß-эндорфина могут проявляться через С-концевой участок пептидной цепи, невзаимодействующий с 6-, ц-рецепторами В связи с этим, представлял интерес анализ эффектов С-концевого тетрапептида ß-эндорфина MPF (меланотропин-потенцирующего фактора) на пролиферативную активность лимфоцитов периферической крови Как видно из рис 6, MPF ни в одной из исследуемых концентраций статистически значимых эффектов на

К -7 -8 -9 -10 -И -12 Концентрация пептида, log М Б

20000

15000-

а s

I 10000

s s

5000

. III

JV

К

-12

-7 -8 -9 -10 -11 Концентрация пептида, log М Рис. 5 Влияние -эндорфина (А) и DAGO (Б) на ФГА-индуцированный пролиферативный ответ лимфоцитов.

Здесь и на рис & I - ФГА 5 мкг/мл, П - ФГА 2,5 мкг/мл, Ш - ФГА 1,25 мкг/мл, IV - без внесения ФГА Число наблюдений в группах с ß-эндорфином п=9, в группах с DAGO - п=8 * - /><0.05 к контролю по парному г-критерию Фишера наименьшей значимой разницы.

спонтанную и индуцированную митогеном пролиферацию лимфоцитов не оказывает Это позволяет предположить, что выявленный стимулирующий эффект ß-эндорфина на пролиферативную активность лимфоцитов не опосредуется через его С-концевой участок

В связи с тем, что ß-эндорфин N-концевой последовательностью связывается как с ц.-, так и 6-опиатными рецепторами и не ясно, какой тип

А

Концентрация пептида, log М

Б

80000 т

0 —* i * i * i ' i * 1 i ' i' 1 * К -7 -8 -9 -10 -11 -12

Концентрация пептида, log М

Рис 6 Влияние DADLE (А) н MPF (Б) на ФГА-индуцированный пролиферативный ответ лимфоцитов.

Число наблюдений 8.

рецепторов в данном случае является основным проводником сигнала с поверхности клетки, мы сопоставили его эффекты на пролиферацию с эффектами селективных ц- и 8-агонистов Данные о влиянии синтетического селективного агониста ц-опиатных рецепторов DAGO на пролиферативную активность лимфоцитов периферической крови представлены на рис 5 Анализ зависимости эффектов от концентрации показал, что DAGO в высоких и низких концентрациях достоверно усиливает пролиферативный ответ лимфоцитов исключительно в присутствии субоптимальной концентрации (2,5 мкг/мл) митогена На спонтанный пролиферативный ответ DAGO подобно ß-эндорфину влияния не оказывает

Аналогичные результаты получены при анализе влияния селективного 5-а гони ста DADLE lía пролиферацию лимфоцитов (caí. рис. 6). Выявлено, что DADLE усиливает включение 3Н-тимидина лимфоцитами по сравнению С контролем а присутствии ФГА 2,5 мкг/мл и высокой концентрации (10'7 М) данного пептида.

В дальнейшем проводилась сравнительная оценка влияния р-эпдорфина на пролиферативный ответ на фоне блокады опиатных рецепторов в цефракционированных и фракционированных, очищенных от моноцитов, лимфоцитарных культурах. Как видно из рис. 7, в не фракционирован ной лейкоцитарной суспензии стимулирующий эффект (3-эндорфина на пролиферативный ответ не отменяется, а напротив, усиливается. При удалении моноцитов из фракции мононуклеаров эндорфин (F—13,07; р=0,006) и налоксон (F=10,21; p=0,01í) оказывают

Контроль Р-эндорфин

р-эндорфин

i

и ш —< *

— * ---i

200 400 600 800 1000 имп/мин

20000 40Ü00 нмп/ыин

60000

Рис. 7. Эффекты ß-эндорфина на фоне блокады опиатных рецепторов, DAGO и DADLE на спонтанную (А) и индуцированную ФГА 2,5 мкг/мл (Б) пролнферативную активность лимфоцитов в нефракцнонировакных клеточных культурах.

Здесь и на рис. 8, П, 12: ß-эндорфин 10'М; налоксон i0aM; DAGO 10"8М; DADLE - 10"7М. * - р<0,05 к контролю по парному /-критерию Стьюдента; • - р<0,05 к ß-эндорфину.

высоко достоверные самостоятельные эффекты на ФГА-индуцированную пролиферацию, не проявляя статистически значимого взаимодействия между собой (F=4,08; р=0,074). Последующее сравнение средних величин показало, что направленность эффектов опиоидных пептидов противоположна

влиянию, оказываемому ß-эндорфином и налоксоном в присутствии фракции моноцитов (рис. 8). В частности, выраженное угнетение пролиферации лимфоцитов по сравнению как с контролем, так и с ß-эндорфином наблюдается при совместном внесении в культуры ß-эндорфина и налоксона. Угнетающий эффект на захват ^Н-тимидина лимфоцитами оказывает селективный Ц-агоиист DAGO, Селективный агонист 5-рецепторов DADLE не влияет на Ф Г А-индуцированную пролиферативную активность лимфоцитарной фракции. При этом эффекты исследуемых опиоидов в аналогичных культурах без митогена не обнаруживаются. Проведенный корреляционный анализ выявил статистически достоверную (г=0,73; р<0,05) зависимость между интенсивностью пролиферации лимфоцитов в нефракционированных культурах под воздействием ß-эндорфина и в аналогичных культурах, очищенных от фракции моноцитов.

Анализ роли 5-рецепторов в регуляции пролифератиэного ответа в нефракционярованнон лейкоцитарной суспензии и фракции лимфоцитов {рис. 9) показал отмену стимулирующего эффекта ß-эндорфина наятриндолом во фракции лейкоцитов. Во фракции лимфоцитов ß-эндорфин и налтриндол на степень выраженности пролиферации не влияют, что свидетельствует о возможной реализации стимулирующего эффекта пептида через 5-рецсптор, но только в присутствии моноцитов.

Контроль ß-эндорфнн ß-эндо

Налоксон

DAGO DADLE

О 200 400 600 ими/мин

Контроль ß-эндорфин

10000 20000 нмп/мин

Рис. S. Эффекты ß-эндорфина на фоне блокады опнатных рецепторов, DAGO и DADLE на спонтанную (А) н индуцированную ФГА 2,5 мкг/мл (Б) пролиферативную активность лимфоцитов в клеточных культурах, очищенных от фракции моноцитов.

* -р<0,05 к контролю по парному г-критерию Стъюдента,

Контроль

Р-эндорфин

Р-эндорфин+ налтрндол Налтринлол

10000 ЗОООО 30000 40000

Контроль Р-эндорфин

Р-Эндорфин+ наятридол Налтриндол

0 20000 40000

60000

.'мим,:: и «11/мин

Рис 9. Эффекты р-эндорфина 10 7М на фоне блокады б-опнагных рецепторов налтринлолом Ю^М на индуцированную ФГА 2,5 мкг/мл пролнфератнвную активность лимфоцитов во фракции лейкоцитов (А) и фракции лимфоцитов (Б).

* - р<0,05 к контролю по парному /-критерию Стьюдента.

Учитывая важную регуляторную роль моноцитов, в дальнейшем мы попытались оценить роль И.-1Р и продуктов циклоокеигеназного цикла в р-эндорфинопосредованной регуляции пролиферативного ответа лимфоцитов в присутствии ФГА (рис. 10Д). Все обследованные здоровые доноры были разделены по индивидуальной чувствительности к р-эндорфкну на две группы: у 1-й группы пептид стимулировал пролиферативный ответ, а у 2-й - угнетал. Впервой группе доноров на фоне моноклональных антител к 1Ь-1р наблюдается резкое снижение пролиферативной активности, в то же время при внесении в культуры анти-ГЬ-1 р-антител в присутствии р-эвдорфина наблюдается некоторое усиление пролиферативного ответа, достоверно отличающееся от культур с анти-1Ь-1Р-а}[тителами, но по сравнению с контролем уровень захвата метки был также достоверно ниже. Как видно на рис. ШБ, у второй группы доноров на фоне при культивировании лейкоцитов в присутствии диклофенака натрия как стимулирующий, так и угнетающий эффект Р-эндорфина на пролиферативный ответ нивелируется, что подтверждает данные о возможном участии простатаандинов (иросгаглашшна Е) (РОЕз), в частности) в регуляции функциональной активности лимфоцитов под воздействием опиоидных легпкдов. Таким образом, регуляция функциональной активности лимфоцитов р-эндорфином может опосредоваться как системой 11.-1, так и простагландннами. анти-[Ь-1 р- а!ггител иитенсивносгь пролиферативного ответа в присутствии Р-эцдорфина не изменяется.

Контроль Р-эндорфин р-эндорфин+аЕггн- 1Ь-1 ¡3 Анти-1Ыр 0-эндорфин+ДН ДН

--

-ш

-Н-

5000 10000 и мп/мин

Б

15000

Контроль Р'шдорфин Р -эндорфнн+зит1! -И,- ]Р ЛтиИ,-1Р р-:ждорфнн+ДН ДН

-"М"

ш-

0 10000 20000 имп/мин

Рис, 10. Влияние -эндорфина 10"7М на Ф Г А - н и ду ц и ро в а нн ы й пролнферагивный ответ лимфоцитов в присутствии анти-ГЬ-1 антител и на фоне блокады синтеза иростагландинов ДН у доноров 1-й (А, п=9) и 2-й (Б, п—11) групп.

* - р<0,05 к контролю: а - р< 0,05 к анти-1Ь-1р по паркому /-критерию Стъюдента.

Влияние р-эндорфина и селективных лнгандов штатных рецепторов на процессы клеточной кооперации и переключение ТЫ/ТЬ2 цнгокннового профили. Следующим этапом исследований являлось изучение роли Р>-эндорфина в регуляции продукции II--4 и ШЫ-у в супер! штангах не фракционирован ной лейкоцитарной взвеси, лимфоцитарной фракции и культуре С134+ клеток.

Контроль ß-тндорфкн ß-энд+налоксон Налоксон DAGO DADLE

без ФГА

Komp оль р--$НДорфиН р-эндшалоксои Налоксои DAGO DADLE

ттг/мл

ФГА 2,5 мкг/мл

Контроль ß-тндорфин ß-чнд+налохсон Налоксон DAGO DADLE

э-

fe

Копропь

1 fanOKDCH dado í14dle

10

ü

12 18 Я 30 36 m/мп

ФГА 2,5 мкг/мл

0 2 4 6 пгУмл

без ФГА

Рис. 11. Влияние ß-зндорфина, DAGO, DADLE на продукцию IFN-y в н^фракционированной (А) к фракционированной культурах (Б). Здесь и на рис. 12 число наблюдений п=10. * - р<0,05 к контролю по парному f-критерию Стъюдента.

Как показано на рис. ii, уровень IFN-v в супернатантах под воздействием ß-зндорфина, а также в случае комбинации ß-эидорфина с налоксоном не отличается от контроля как в нефрак циогшрова иных культурах, так и в культурах, очищенных от моноцитов, независимо от присутствия ФГА в среде культивирования. Однако в фракционированных клеточных культурах, стимулированных митогеном, регистрируется эффект селективного ö-агониста DADLE на продукцию IFN-y, что, очевидно, обусловлено его прямым эффектом на рецепторные структуры клеточной поверхности лимфоцитов.

На рис. 12 приведены результаты исследования влияния ß-эндорфина,

DAGO, DADLE на продукцию IL-4 в неф рационированной лейкацитарной

Контроль ß-эпдорфнн [клш-нгалоксон Нажжсон DAGO DADLE.

10 20 30 40

пг/mj!

50

без ФГА

0 10 20 30 40 50 60 [и/мл

ФГА 2,5 мкг/мл

Контрэпь

Р-ай+иалок«« Нижсон DAGO E'ADLE

0

10

п:/м_1

15

без ФГА

Контроль р-экдорфин р. мщ+налоксон i Iii ,л;'j DAGO DADLE

20

ir/мл

ФГА 2,5 мкг/мл

Рис. 12. Влияние ß-эндорфмна, DAGO, DADLE на продукцию IL-4 в нефракционированной (А) и фракционированной клеточных культурах (Б).

* - /><0,05 к контролю по парному /-критерию Стьюдента.

суспензии и фракции лимфоцитов. По нашим данным, под воздействием налоксона и DAGO в культурах без митогена регистрируются угнетающий и стимулирующий эффекты, соответствен но. Выраженный стнмулируюший эффект на ФГА-индуцнрованную продукцию DL-4 оказывают ß-эндорфин, налоксон и DADLE. В очищенной фракции лимфоцитов значимых эффектов исследуемых соединений на продукцию IL-4 не выявляется, за исключением угнетающего эффекта налоксона, зарегистрированного в культурах без добавления митогена. Корреляционный анализ выявил отрицате л ы гу ю зависимость (г=>0,68; р<0,05) между интенсивностью пролиферации и уровнем IL-4 в культурах с совместным внесением ß-эндорфина и налоксона

Килроиь {кнщфя

Мононуклеары

.................

СР4*-клетки

CD4' + моноциты

1с бега-эил к бетюид к бегл-энд

Рис 13. Влияние Р-эндорфмна ХО'7 М на продукцию фракцией мононуклеаров, С04+-лимфокитами и С04+-лимфоцитами в присутствии моноцитов в присутствии ФГА 2,5 мкг/мл.

* - р < 0,05; ** - р < 0,01; *** - р < 0,001 к контролю по парному / критерию Стьюдента.

Монопуклеар!.:....... CÍV.' кпетки 01)4' - моноциты

к dadle к dadle к dadle

Рис 14. Влияние DADLE 10'7 М на продукцию IL-4 фракцией мононуклеаров, CD4*-лимфоцитами к С04+-лимфоцитами в присутствии моноцитов в присутствии ФГА 2,5 мкг/мл.

* - р < 0,05; ** - р < 0,01; *** - р < 0,001 к контролю по парному /-критерию Стъголента,

в присутствии ФГА. Таким образом, Р-эндорфин, нал оке он и селективный агонист S-рецепторов DADLE, усиливая пролиферацию, способствуют изменению соотношения Т-хеллеров в сторону ТЬ2-клеток.

Учитывая, что во фракции лимфоцитов находятся Т-, В-лимфоциты, NK-клетки, присутствие которых может оказывать влияние на конечный результат, дальнейшие эксперименты проводились с использованием CD4+-клеток, основных продуцентов IL-4. Как видно из рис. 13, ß-эцдорфин усиливает продукцию IL-4 во фракции мононуклеаров, и не влияет на уровень IL-4 в культуре CD4+-клеток. Добавление к СМ4-лимфоцитам моноцитов приводит к восстановлению уровня продукции IL-4 под воздействием ß-эндорфина. Аналогичный по силе и направленности эффект на продукцию IL-4 С D4+-лимфоцитам и оказывает селективный 8-агонист DADLE {рис. 14). Анализ влияния ц-агониста DAGO выявил тенденцию

8( Моноиуклеары...............CD4'-метки .............. 01>4* + моноциты

70......

к dago к dago к dago

Рис 15. Влияние DAGO 10"® М на продукцию IL-4 фракцией мононуклеаров, СШ^-лимфоцктами и С04*-лимфоцитами в присутствии моноцитов в присутствии ФГА 2,5 мкг/мл.

* - р < 0,05; ** - р < 0,Oí; *** - р < 0,001 к контролю по парному (-критерию Стъюдента.

к усилению продукции IL-4 фракцией мононуклеаров (рис. 15), однако статистически достоверного эффекта достичь не удалось. Как видно из рис, 16, внесение p-эндорфина на ФГА-индуцированную продукцию IL-2 мононуклеарами, CD4+-лимфоцитами и комбинацией CD44-лимфоциты+моноциты влияния не оказывает. Таким образом, полученные данные свидетельствуют о том, что от присутствия моноцитов зависит направленность влияния р-эндорфина и б-агониста DADLE на Thl/Th2-поляризацию лимфоцитов. Учитывая важное участие 5-рецепторов в регуляции синтеза IL-4 была проанализирована их роль в эффекте р-

эндорфина на продукцию данного цитокина. в условиях блокады 5-рсцспторов нивелируется усиливающее действие пептида на уровень 1Ь-4 в нефракционированных клеточных культурах. Во фракции лимфоцитов Р-эндорфин и налтриндол на продукцию 11.-4 не влияют (рис, ] 7).

Мононуклеары Ср4+-клетки Ср4* + моноциты

I. С Т к Н1Л

Бетя-энд

Бенонл

Рис 16. Влияние Р-эндорфина 10' М на продукцию 1Ь-2 фракцией мононуклеаро», СБ4 "-лимфоцитами и СП4+-лимфоцитами в присутствии моноцитов в присутствии ФГА 2,5 мкг/мл.

* - р < 0,05; ** - р < 0,01; *** - р < 0,001 к контролю по парному (-критерию Стъюдента.

К<ЖТрОЛЬ

Р-эндорфин

3-Эндорфин+ налтрндол Налтриндол

50 100

пг/мл

(50

Контроль Р-ждорфин

р-Э|ЩОрфиН+ налгрндп» 1 ¡алтрнндод

э-

50 )00 пг/мл

150

Рис. 17. Эффекты Р-эндорфина 10" М на фоне блокады 5-опиатных рецепторов налтриндолом Ю^М на продукцию 1Ь-4 в нефракционнрованной клеточной взвеси (А) н фракции лимфоцитов (5) в присутствии ФГА мкг/мл.

* - р < 0,05; ** - р < 0,01; *** - р < 0,001 к контролю по парному /-критерию Стьюдента.

Таким образом, результаты проведенных исследований свидетельствуют о важной роли моноцитов в регуляции секреторной активности клеток адаптивного иммунитета, при этом, как агонисты, так и антагонисты опиатаых рецепторов оказывают самостоятельные эффекты на активность клеточных популяций

Роль р-эндорфина в регуляции фагоцитарной активности клеток естественного звена иммунитета. По нашим данным, р-эндорфин в концентрациях 10"7 и 10'8 М (46,25±1,57 в контроле - 51,3±1,66 - (З-эндорфин 10"7 М, Р<0,001 к контролю) увеличивает процент фагоцитоза и фагоцитарное число нейтрофилов (0,61+0,02 в контроле - 0,68±0,03 р-эндорфин 10"7 М, Р<0,001 к контролю). Помимо нейтрофилов пептид усиливает фагоцитарную активность моноцитов в концентрациях 10"7- 10"8 М, увеличивая процент фагоцитоза (36,9+2,75 в контроле - 47,7±4,8 - Р~ эндорфин 10'7 М, Р<0,05 к контролю) и фагоцитарное число (0,44±0,03 в контроле - 0,67±0,08 р-эндорфин 10"7 М; Р<0,05 к контролю) Так же Э-эндорфин стимулирует общий (суммарный) фагоцитоз На фагоцитарную активность эозияофилов (З-эндорфин не влияет.

Роль Э-зндорфина в регуляции цитокиннродуцирующей функции моноцитов и нейтрофилов. Как видно из табл 5, 6, ЛПС усиливает продукцию 1Ь-10, ЮТ-а, 1Ь-6 только в культурах с фракцией моноцитов, в то время как в культуре лейкоцитов эффект ЛПС на синтез 1Ь-1р, ЮТ-<х, П_-6 отсутствует. В то же время уровень 1Ь-8 в ответ на ЛПС усиливается в нефракционированной клеточной фракции и не изменяется в очищенной моноцитарной фракции. В нефракционированной клеточной культуре (3-эвдорфин (10 ;-10"пМ) активирует ЬРЯ-индуцированную продукцию 1Ь-10, не влияя на синтез 1Ь-6, ТЫБ-а и угнетая продукцию 1Ь-8 в концентрациях 10"7 и 10"11М. Р-эндорфин в концентрациях 10"7 - 10"ИМ усиливает продукцию ГЬ-1га, рецепторного антагониста 1Ь-1р Значительно менее выраженный стимулирующий эффект пептид оказывает на спонтанную продукцию П_-1(3 в концентрациях 10"7 и 10"9М На индуцированную субоптимальной дозой ФГА продукцию исследуемых цитокинов, а также на их спонтанный и ЛПС-индуцированный синтез в очищенной фракции моноцитов Р-эндорфин не влияет.

Данные, представленные на рис 18, указывают на отсутствие отмены стимулирующего эффекта Р-эндорфина на уровень ЕЬ-1Р в условиях блокады опиатных рецепторов неселективным антагонистом налоксоном (8, |х) и селективным 5-антагонистом налтриндолом в течение 24 ч культивирования Также обнаруживается самостоятельный стимулирующий эффект налтриндола на продукцию 1Ь-1Р Выявленная динамика сохраняется в течение 48 ч культивирования Действие Р-эндорфина на продукцию

Таблица 5 Влияние Р-эндорфина на продукцию 1Ь-1р, ЮТ-а, 1Ь-6 в нефракционированной лейкоцитарной суспензии

Цитокин, пг/мл Экспериментальное воздействие Концентрация Р-эндорфина, М

контроль ю-7 ю-9 10"

1Ь-1р, п=8 Без индуктора ЛПС 0,1 мкг/мл 193,01+ 39,16 190,87± 54,43 271,66± 77,96* 305,76+ 49,50*** 266,57± 49,18* 300,95± 76,95** 238,22± 50,19 279,41± 62,40*

ЮТ-а, п=8 Без индуктора ЛПС 0,1 мкг/мл 253,72± 52,60 269,59± 53,90 286,79± 61,43 297,93± 66,45 277,46± 67,08 295,42± 68,59 290,90± 62,32 295,49+ 60,45

1Ь-6, п=8 Без индуктора ЛПС 0,1 мкг/мл 1115,41± 30,54 1094,73+ 36,40 1084,09± 50,23 1082,85+ 28,72 1101,83± 56,55 1051,07± 36,16 1109,70± 46,66 1115,41+ 33,88

1Ь-8, п=4 Без индуктора ЛПС 0,1 мкг/мл 1353,68± 114,42 1699,20± 68,25а 1340,28± 104,42 1278,40± 31,34*** 1664,63± 44,10 1635,43+ 68,31 1313,30± 156,25 1364,28± 59,85**

1Ь-1га, п=4 Без индуктора ЛПС 0,1 мкг/мл 1811,38± 272,30 1957,13± 232,16 1840± 275,54 2346,5± 198,97*** 1817,25± 431,75 2168,13± 261,74* 1932,5+ 297,55 2175,13± 198,06*

Примечание Здесь и в табл. 6 * - р < 0,05; ** - р < 0,01, *** - р < 0,001

к контролю по парному г-критерию Фишера наименьшей значимой разницы, а -р <0,05 - к спонтанной продукции.

антагониста EL-ip IL-Ira (рис 19) имело картину, схожую с полученной нами при анализе продукции EL-ip Р-эндорфин и налтриндол стимулируют продукцию IL-1га по сравнению с контролем, как на 1-е, так и на 2-е сутки культивирования. Отмены стимулирующего влияния пептида на фоне блокады опиатных рецепторов не наблюдается Анализ влияния пептида на продукцию IL-8 показал статистически достоверный угнетающий эффект, как на 24, так и на 48 ч культивирования. В условиях блокады опиатных рецепторов налоксоном и налтриндолом угнетающее влияние р-эндорфина нивелируется Внесение налоксона и налтриндола на продукцию IL-8 не влияет.

Таблица б. Влияние Р-эндорфина на продукцию IL-ip, TNF-a, IL-б в очищенной фракции моноцитов

Цитокин, Экспериментальное Концентрация Р-эндорфина, M

пг/мл воздействие контроль ю-7 ю-9 ю-11

IL-ip, Без индуктора 153,22± 33,48 121,65± 19,83 249,921 84,88 118,711 28,97

п=8 ЛПСОД мкг/мл 230,26± 42,25а 202,84± 36,47 223,971 71,16 235,211 53,29

TNF-a, Без индуктора 137,52± 51,33 153,81± 58,24 148,311 57,56 133,201 55,31

п=8 ЛПСОД мкг/мл 163,21± 60,48а 178,81+ 69,78 174,971 68,63 178,731 70,21

IL-6, Без индуктора 1204,61± 354,15 1174,581 356,34 1281,191 357,40 1243,461 332,03

п=8 ЛПС 0,1 мкг/мл 1435,55+ 379,02а 1442,891 340,04 1346,261 342,73 1414,19+ 367,26

IL-8, Без индуктора 1198,38± 153,25 1230,631 85,79 1294,631 219,75 1148,68+ 200,81

п=4 ЛПСОД мкг/мл 1307,22± 213,04 1422,481 90,89 1159,641 121,80 1228,321 154,70

IL-1га, Без индуктора 280,38± 90,82 364,251 128,06 352,831 133,52 359,051 146,50

п=4 ЛПС ОД мкг/мл 302,13± 88,60 343,401 115,95 377,351 148,54 348,801 141,58

При оценке влияния опиатов на уровень ТЫР-а выявлено угнетение продукции Т^-а по сравнению с контролем при совместном внесении в культуры (3-эндорфина и антагонистов опиатных рецепторов на 24 и 48 ч культивирования (си. рис. 18). На продукцию ГЬ-6 на 24 ч культивирования р-эндорфин не влияет. На 48 Ч культивирования нр0дукци!0 1Ь-6 стимулирует калтриндол, как при изолированном внесении, так и в комбинации с Р-эндорфином. Учитывая, что во фракции лейкоцитов помимо

400

зоо ; гоо 100 о

24 ч

***......

п I

_J

ш

У _

48 ч

400

зоо

§ зоо

г

100

0

700 600 500 £ 400 = 300 200 100 о

-ь

'■Ш

% Р.

г 0.-6

К ^л.

-ь

л

300 . 200 1 100 о

"ШР-а

,Нг-

1500

1300 I 1100

В 900 700 500

-¡т

*

-ь

* "

1к

•

л

К I 2 3 4 5 К 1 2 3 4 5

Рис. 18. Влияние р-эидорфина о условиях блокады опиатных рецепторов на продукцию 1Ь-1р, ТОТ-а, 1Ь-6 в нефракииоиированной клеточной суспензии в присутствии ЛПС.

Здесь и на рис, 19: К — контроль; 1- Р-эндорфин 107М; 2 - р-эндорфин 10 'М + налоксон 106М, 3 - Р-эндорфин 10"7М + налтриндол 10'6М; налоксон 10"6М; налтриндол 10"6М. * - р < 0,05; ** - р < 0,01; *** - р < 0,001 к контролю но парному Г-критерию Стьюдента.

моноцитов, основных продуцентов про воспалительных цитокинов, присутствуют гранулоциты, преимущественно нейтрофипы (Abraham et aU, 2003; Fujiharaa et al,, 2003; Xing, Remick, 2004), так же способные продуцировать IL-lft и П.-8, мы исследовали влияние Р-эндорфина на продукцию IL-ip и IL-8 во фракциях мононуклеаров и нейтрофилов.

Результаты исследований влияния р-.эндорфинз на продукцию JL-] и IL-8 во фракциях мононуклеаров и нейтрофилов представлены на рис. 20. р-эндорфин Х0*7М стимулирует спонтанную и Л ПС-индуцированную продукцию П.-1 ¡3 мононуклеарами. Аналогичная картина наблюдается во фракции нейтрофилов. На фоне LPS наблюдается статистически значимое усиление продукции IL-IfJ- (J-эндорфин 10 7М стимулирует, как спонтанную, так и LPS-индуцированную продукцию IL-I р нейтрофилами. ЛПС-индуцированная продукция IL-8 мононуклеарами и нейтрофилами под

24 ч

48 ч

поо

i

I 900

too

1 3 ш

года

ISOO

? 1000 £

soo о

-г

Л* : -i.

-h

= wo

(-Г

7П

700

2000 -j

1500

(ооо

iOO J

i

о I

........*.. .., pi—1 •Щ pi—i

Ц- il с*

<Г '*'J "

■ s» •

Т -' - „; ■

Ц-lti

ШШШ ШШ

ш

. ?

К I 2 3 ■» 5 К 1 2 3 4 5

Рис. 19. Влнннне ^-ундорфина ] 0'7М в условиях блокады опиатиых рецепторов на продукцию и Ш-1га в нефракционнрованной

клеточной суспензии в присутствии ЛНС.

* - р < 0,05; ** - р < 0,01; *** - р < 0,001 к контролю по парному г-критсрию Сгьюдента.

гь-13

Мононуклеары ^ **

Нейтрофилы

д

к 1

К I

П,-8

1000 Мононуклеары

Нейцюфилы

с? 2

Рис. 20 Влияние Р-эндорфина 10" М на продукцию 11,-1 Р и 1Ь-8 во фракциях мононуклеаров, нейтрофилов и моноцитов, стимулированных ЛПС.

К - контроль, 1 - Р-эндорфин, 2 - ЛПС, 3 - ЛПС+Р-эндорфин * - р < 0,05, ** - р < 0,01, *** - р < 0,001 к контролю, а - р < 0,05 к ЛПС по парному г-критерию Стъюдента

воздействием Р-эндорфина снижается. В культурах без ЛПС пептид уровень 1Ь-8 не изменяет. При анализе влияния Р-эндорфина на продукцию исследуемых цитокинов мононуклеарами в присутствии ФГА были получены следующие результаты (рис. 21) Во фракции мононуклеаров ФГА, как и ЛПС, усиливает выработку 1Ь-1Р, и не влияет на уровень ГЬ-8. р-эндорфин стимулирует, как спонтанную, так и ФГА-индуцированную продукцию П_-1Р мононуклеарами Уровень 1Ь-8 под воздействием пептида в нестимулированных ФГА пробах не изменяется, а в стимулированных -снижается. Как следует из полученных данных, продукцию цитокинов семейства 1Ь-1 нефракционированными лейкоцитами, нейтрофилами и мононуклеарами (но не очищенными моноцитами) р-эндорфин активирует, а продукцию 1Ь-8 угнетает, таким образом, оказывая двоякое действие, с

одной стороны, активируя процессы пролиферации и дифференцировки, а, с другой, угнетая хемотаксис. При этом, в отличие от IL-1, депрессия IL-8 проявляется только в ЛПС и ФГА-индуцированных культурах и нивелируется огогатаыми антагонистами, что указывает на вовлеченность различных рецепторных механизмов в регуляцию синтеза IL-1P и IL-8 р-

IL-8 IL-lp я

1000-, _ «т 500

т а. % * I

800-ÉÉ-^Í^ _L í I-+400

§ боо-НННЯ _L m rh * 300

i 400-ВННН -200

200-НННВ -100

о НИМИ МЫИМ 0

К 1 2 3 К 1 2 3

Рис 21 Влияние Р-эндорфина 10*7М на продукцию IL-lp и IL-8 мононуклеарами, стимулированными ФГА 2,5 мкг/мл в течении 24 ч культивирования.

К - контроль, 1 - Р-эндорфин, 2 - ФГА, 3 - ФГА+Р-эндорфин * - р < 0,05, ** - р < 0,01; *** - р < 0,001 к контролю, а - р < 0,05 к ФГА по парному t-критерию Стыодента

эндорфином Ранее (Nandhra, 2000) был зарегистрирован угнетающий блокируемый налоксоном, эффект Р-эндорфина на продукцию IL-8 клетками хориодецидуальной оболочки Н.Л. Елизарова с соавт. (2001) установили, что аминокислотная последовательность ¡3-эндорфина в молекуле препарата тимуса - тактивина обусловливает повышение функциональной активности лимфоцитов, усиление фагоцитоза и снижение способности моноцитов к адгезии, причем последняя функция отменялась налоксоном, в то время как усиление фагоцитоза налоксоном не отменялось По нашим данным, депрессия продукции IL-8 отменяется селективным 5-антагонистом налтриндолом, что свидетельствует о возможности реализации эффектов Р-эндорфина через б-рецептор В то же время, как показано в работе В М Sharp (2006), в зависимости от экспериментальной модели и объекта исследования, 5-рецептор может опосредовать проведение, как стимулирующих, так и угнетающих сигналов

снс .

▼

С И-МСГ~] ^"ШгЛ I АКТГ Надпочечники !--- - - - -'- - -'"i I р^нлорфин

сне

v Надпочечники

Адаптивный иммунитет

Th2t

iv Врождённый иммунитет

Антиген

IL-41

пролмфсгулкцн» i аитигелоГенсчТ

f inp т p-ЭНДОрфИН фагоодтй Г

fL-Si TNF-ral

рис. 22. Схема возможного механизма влияния p-эндорфинн на процессы иммуногенеза.

Заключение

Результаты проведенных исследований представлены в виде схемы возможного механизма влияния Р-эндорфина на процессы иммуногенеза (рис 22) Установлено, что р-эндорфин является важным фактором в поддержании внутреннего гомеостаза. Приведенные в работе данные, свидетельствуют о том, что р-эвдорфин поддерживает гомеостаз иммунной системы через балансирование ТЫ и ТЪ2 ответа, смещая поляризацию Т-хелперов в сторону Пг2-Ю1еток, параллельно усиливая естественную резистентность Следовательно, 0-эндорфин является кофактором, опосредующим переключение дифференцировки Т-хелперов с ТЫ на ТЪ2 тип и играющим решающую роль при целом ряде иммунопатологических состояний, а иммуномодулирующие функции опноидных пептидов могут представлять собой значительный терапевтический интерес.

Оценивая роль эндогенных нейропептидов в стрессиндуцированных изменениях иммунной системы, необходимо отметить, что полученные данные прямо указывают на непосредственное участие эндогенных опиатов в активации иммунной системы. Направленность ряда физиологических эффектов эндогенных опиовдных пептидов при стрессе противоположна эффектам глюкокортикоидов и катехоламинов. Ранее глюкокортикоиды и катехоламины рассматривались исключительно как стрессреаяизующие факторы, в то же время их основная биологическая роль может заключаться в ограничении опасной для организма стрессиндуцированной активации иммунных процессов

ВЫВОДЫ

1 Подтверждена интегральная роль эндогенной опиоидной системы в нейроэндокринной регуляции иммуногенеза в норме, при введении глюкокортиковдов и катехоламинов и в условиях стрессорного воздействия Основные компоненты эндогенной опиоидной системы принимают непосредственное участие в активации иммунной системы при стрессе

2 Установлено, что в условиях блокады jx, 6-опиатных рецепторов в период индукции иммунного ответа повышается степень выраженности иммуносупрессивного действия гормонов стресса (глюкокортикоидов и катехоламинов) на антителогенез, и регистрируется снижение степени выраженности угнетающего действия глюкокортикоидов на количество ядросодержащих клеток в регионарном лимфатическом узле

3 Впервые показано, что ß-эндорфин в высоких (100 мкг/мл) дозах угнетает, а в низких (0,0005 мкг/кг) дозах стимулирует гуморальное звено иммунитета, и при этом не влияет на степень выраженности реакции гиперчувствительности замедленного типа В клеточных культурах ß-эндорфин стимулирует пролиферацию лимфоцитов и продукцию IL-4, не влияет на синтез IL-2, IFN-y и при этом усиливает степень поляризации Т-хелперов в направлении ТЬ2-клеток. Доминирующая роль в реализации стимулирующих эффектов ß-эндорфина на пролиферацию и продукцию IL-4 принадлежит 5-рецепторам

4. Впервые обнаружена зависимость стимулирующего эффекта опиоидных пептидов на пролиферацию лимфоцитов и продукцию IL-4 от присутствия моноцитов в клеточной культуре

5 Показано, что ß-эндорфин стимулирует фагоцитарную активность клеток естественного иммунитета и оказывает модулирующее действие на цитокинпродуцирующую функцию моноцитов и нейтрофилов В условиях блокады ц, S-опиатных рецепторов отмены стимулирующего влияния ß-эндорфина на продукцию IL-lß не наблюдается, при этом угнетение продукции IL-8 опиатными антагонистами отменяется.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

Экспериментальные статьи

1 Шилов Ю И., Гейн С В Адренергическая регуляция пролиферативного ответа лимфоцитов в культурах с Т-клеточными митогенами // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины - 1999 - Т 128, № 8 - С 207-209

2. Шилов Ю.И, Гейн С В, Черешнев В А Влияние блокады (5-адренергических рецепторов при стрессе на антителообразование, гиперчувствительность замедленного типа, функции фагоцитирующих клеток при локальной форме иммунного ответа // Russian Journal of Immunology - 2001 - V 6, № 3. - P. 301-308.

3. Гейн С В , Симоненко Т.А , Черешнев В А Влияние ß-эндорфина и селективного агониста ц-опиатных рецепторов DAGO на пролиферативную активность лимфоцитов // Доклады академии наук - 2003. - Т 391, № 1. - С -127-129.

4. Гейн С В., Симоненко Т.А, Тендрякова С.П Влияние агонистов опиатных рецепторов на процесс антителообразования и гиперчувствительность замедленного типа при локальном иммунном ответе // Веста Пермск. университета СерияБиолгия. -2004 -Вып 2 -С. 166-168.

5. Гейн С В, Тендрякова Т А Иммуномодулирующие эффекты гидрокортизона и адреналина в условиях блокады опиатных рецепторов // Докл Академии наук. - 2004 - Т 399, № 3. - С 412-414

6. Gem S V., Simonenko Т. A., Tendiyakova S. P. The effects of rotation stress on measures of immunity The role of opiate receptors // Neuroscience and Behavioral Physiology. - 2004 - V 34, № 9. - P 935-938

7. Гейн C.B, Баева T А Роль опиовдных пептидов в регуляции пролиферации лимфоцитов и изменении Thl/Th2 цитокинового профиля // Проблемы эндокринологии -2005 - № 5 - С 49-51.

8. Гейн С.В, Шаравьева И JI, Баева Т.А, Тендрякова Т А. Роль блокады различных типов опиатных рецепторов в регуляции иммуномодулирующих эффектов ротационного стресса // Вестник Уральской медицинской академической науки - 2005. - № 3 - С. 70-73

9 Гейн С В, Баева Т А., Гейн О Н, Черешнев В.А Роль моноцитов в реализации эффектов ß-эндорфина и селективных агонистов ц- и 5-опиатных

рецепторов на пролиферативную активность лимфоцитов периферической крови//Физиология человека -2006 -Т 32, №3 - С 111-116

10 Гейн С В , Шаравьева И Л, Тендрякова Т А Роль 8-опиатных рецепторов в регуляции гуморального и клеточноопосредованного иммунного ответа при ротационном стрессе // Доклады Академии наук - 2006 - Т 407, № 1 - С 127-129

11 Гейн С В, Баева Т А, Кичанова О А Влияние ß-эндорфина на антителогенез и продукцию ИЛ-4 в условиях блокады опиатных рецепторов // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины - 2006 - Т 142, № 8 -С 192-195

12 С В Гейн, Е Г Чижова, С П Тендрякова Влияние гидрокортизона и адреналина в условиях блокады ц.- и 5-опиатных рецепторов на развитие локального иммунного ответа у мышей И Российский физиологический журнал им. Сеченова - 2006. - Т 92, № 7. - С 827-834

13 Горшкова К Г, Гейн C.B., Тендрякова С.П Роль бета-эндорфина в регуляции продукции IL-lß и IL-8 моноцитами и нейтрофилами периферической крови // Вестник Уральской медицинской академической науки - 2006 - № 3-1(14) - С 46-47

14 Гейн С В , Баева Т А, Чижова Е Г., Кичанова О А, Шаравьева И Л. Эндогенная опиоидная система и гормоны стресса в сочетанной регуляции иммунных реакции при остром стрессе // Вестник Уральской медицинской академической науки. - 2006 - № 3-1(14) - С. 38-40

15 Гейн С.В, Горшкова К Г, Тендрякова С П Роль b-эндорфина в регуляции продукции провоспалительных цитокинов моноцитами периферической крови in vitro // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины - 2007. - Т 143, №2 - С 175-178

Труды конференций

16 Shilov Ju I, Gern S V , Chereshnev V A. Adrenergic and cAMP-dependent regulation of mitogen-mduced lymphocyte proliferative responses // Annual Meeting of AAAAI J Allergy and Clin Immunol - 1998 -V 101, № 1 -P 3838

17. Gem S V., Shilov Ju I Influence of stress on expression of immune reactions // Межд конф "Проблемы загрязнения окружающей среды-98". Москва, 1998 - С 238-238

18. Шилов Ю.И, Гейн С В. Влияние блокады бета-адренергических рецепторов и иммобилизационного стресса на реакции клеточноопосредованного и гуморального иммунитета // Научная сессия Пермской государственной медицинской академии. Пермь, 1998. - С 68-68

19. Гейн С.В , Шилов Ю И Адренергическая и цАМФ-зависимая регуляция пролиферативного ответа лимфоцитов в культурах с митогенами И Научная сессия Пермской государственной медицинской академии. Пермь, 1998 - С 69-69

20. Гейн С В , Шилов Ю.И Адренергическая и цАМФ-зависимая модуляция пролиферативного ответа лимфоцитов в культурах с митогенами // V Российский национальный конгресс "Человек и лекарство" Москва, 1998. -С 330-330

21 Шилов Ю И, Гейн С В Модуляция пропранололом стресс-индуцированных изменений иммунных реакций // Там же. - С 340-340 22. Гейн С В., Шилов Ю И., Черешнев В.А Влияние адренергических соединений на пролиферативный ответ лимфоцитов // П-й Национальный конгресс Российской Ассоциации аллергологов и клинических иммунологов «Современные проблемы аллергологии, клинической иммунологии и иммунофармакологии». Москва, 1998. - С. 345-345

23 Шилов Ю.И, Гейн С В Влияние иммобилизационного стресса и блокады адренергических рецепторов на антителообразоваиие и реакции

гиперчувствительности замедленного типа в регионарных лимфатических узлах и селезенке при подкожной иммунизации // Иммунология - 1998. - № 6 - С. 25-26

24 Шилов Ю И., Гейн С В Влияние адреналина и селективных антагонистов а г и а2-адренорецепторов на пролиферативный ответ лимфоцитов периферической крови // Матер III Всерос научного Форума «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге». Медицинская иммунология. - 1999 - Т. 1, № 3-4 - С 28-29

25 Гейн С.В, Шилов Ю И. Роль адренорецепторов в регуляции пролиферативного ответа лимфоцитов в культурах с Т-клеточными митогенами // Всероссийской научно-практической конференция "Актуальные вопросы эндокринологии" Пермь, 1999. - С 101-102

26. Шилов Ю И , Гейн С В , Орлова Е Г, Черешнев В А Влияние блокады (3-адренергичееких рецепторов на иммунный ответ и функциональную активность фагоцитирующих клеток в условиях стресса // Аллергология и иммунология -2000 -Т 1,№2 - С. 116-117

27 Шилов Ю И., Гейн С В Иммуномодулирующие эффекты адренергических соединений в системах m vivo и m vitro // Труды российской научной конференции «Факторы клеточного и гуморального иммунитета при различных физиологических и патологических состояниях» Челябинск, 2000. - С 134-135

28 Кеворков Н.Н , Шилов Ю И, Бахметьев Б А, Ширшев С В , Куклина Е.М, Гейн С В , Сидоров Д В , Заморина С А, Орлова Е Г, Лихачева Н.С , Груздева Е А, Харитонова А В Нейроэндокринная регуляция некоторых функций фагоцитирующих и иммунокомпетентных клеток // Тез докл научной конференции «Актуальные проблемы фундаментальных исследований в области биологии и медицины» Санкт-Петербург, 2000 - С. 67-68

39 Гейн С В Роль (3-адренергических механизмов в регуляции реакций клеточноопосредованного и гуморального иммунного ответа при стрессе // II конференция молодых ученых России с международным участием "Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины". Москва - Т 1 -С 191-191

30. Гейн С В , Симоненко Т А, Тендрякова С П , Шилов Ю И Влияние блокады 8-,ц-опиатных рецепторов при стрессе на показатели клеточноопосредованного, гуморального иммунитета в условиях развития локальной формы иммуного ответа // I конференция иммунологов Урала. Екатеринбург, Иммунология Урала -2001.-№1 -С. 2-3

31 Гейн С В , Симоненко Т А , Тендрякова С П. Участие 5-, к-опиатных рецепторов в развитии реакции гиперчувствительности замедленного типа и изменении числа антителообразующих клеток в модели принудительного головокружения // Труды международной научной конференции «Перспективы развития естественных наук в высшей школе» Пермь, 2001 -Т 3 - С 120-124

32 Гейн С В , Симоненко Т А, Тендрякова С П Роль 8-к-опиатных рецепторов в регуляции функций иммунокомпетентных и фагоцитирующих

клеток при стрессе // II конференция иммунологов Урала Пермь, Иммунология Урала -2002 - №1 -С 4

33 Гейн С В , Симоненко Т А Участие ß-эндорфина и селективных лигандов Ô, ц-опиатных рецепторов в регуляции пролиферативной активности лимфоцитов m vitro И Ш конференция иммунологов Урала Челябинск, Иммунология урала - 2003 - № 1. - С 5

34. Гейн С В., Симоненко Т А Роль ß-эндорфина и опиодных пептидов в регуляции пролиферации лимфоцитов и изменении Thl/Th2 цитокинового профиля // Матер. VIII Всерос. научного Форума с международным участием «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге» Медицинская иммунология - 2004.

- Т 6, № 3-5 - С 226-227.

35. Гейн С.В, Симоненко Т А Опиоидная регуляция пролиферативного ответа лимфоцитов m vitro // Rus J. Immunol - 2004 - V 9, № 1 - P. 38-38

36 Гейн C.B, Гейн O.H, Гаврилова T.B. Механизмы стрессорных нарушений функций иммунной системы и их коррекция // XIX Съезд физиологического общества им. И.П. Павлова 19-24 сентября 2004 Тез докл.

- Российский физиологический журнал им Сеченова - 2004. - Т 90, №8. - С 106-107

37. Гейн СВ., Чижова ЕГ. Влияние гидрокортизона на фоне блокады опиатных рецепторов на развитие локального иммунного ответа // IX международная Пущинская школа-конференция молодых ученых «Биология-наука XXI века» Пущино, 2005. - С 174

38. Гейн C.B., Баева Т.А Роль опиодных пептидов в регуляции пролиферации лимфоцитов и изменении Thl/Th2 цитокинового профиля // Там же.-С 69

39 Баева Т А, Гейн С.В , Шаравьева И JI, Тендрякова С.П Роль блокады различных типов опиатных рецепторов в регуляции иммуномодулирующих эффектов ротационного стресса // Международная конференция "Проблемы загрязнения окружающей среды-2005". Пермь, 2005 - С 56.

40 Гейн С В, Баева Т.А, Черешнев В.А Лиганды опиатных рецепторов в регуляции пролиферативной активности лимфоцитов m vitro // Международная конференция "Проблемы загрязнения окружающей среды-2005". Пермь, 2005. - С. 94

41. Шилов Ю И , Шилов С.Ю , Ланин Д.В., Гейн С В , Орлова Е Г, Черешнев В А Адренергические механизмы регуляции иммунного ответа и функций

неспецифических эффекторных клеток при стрессе // Матер IX Всерос научного Форума с международным участием «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге» Медицинская иммунология. - 2005 -Т 7, №2-3 -С 127-127

42 Гейн С В , Баева Т А, Черешнев В А Роль моноцитов в опиатергической регуляции процессов пролиферации лимфоцитов и цитокинового синтеза // Там же - С 110-110

43 Гейн С В , Баева Т А , Черешнев В А Роль p-эндорфина в регуляции процессов пролиферации и продукции IL-4 лимфоцитами периферической крови m vitro // IV конференция иммунологов Урала Уфа, Иммунология Урала - 2005 - № 1 (4) - С 4-5.

44 Гейн С В , Чижова Е Г, Тендрякова С П Влияние гидрокортизона на фоне блокады 8-, р.-опиатных рецепторов на иммунный ответ // Там же - С

5-6

45 Гейн С.В, Горшкова К Г. Влияние 0-эндорфина на продукцию 11.-1(3, TNF-a, IL-6 моноцитами периферической крови // V конференция иммунологов Урала Оренбург, Иммунология Урала - 2006 - № 1 - с. 6-7

46 Gem S V , Gorshkova K.G , Baeva Т A (3-endorphin-induced modulation of cytokine production by peripheral blood leukocytes // International symposium «Interaction of the nervous and immune systems in health and disease» Saint-Petersburg, 2007 -P 26-27

Список основных сокращений

АКТГ - адренокортикотропный гормон

АОК - антителообразующая клетка

ГЗТ - гиперчувствительность замедленного типа

ЛПС - липополисахарид

ПОМК - проопиомеланокортин

РБТЛ - реакция бластгрансформации лимфоцитов

СНС - симпатическая нервная система

ФГА - фитогемагглютинин

ЦНС - центральная нервная система

ЯСК - ядросодержащая клетка

CD - маркеры дифференцировки лимфоцитов

DADLE - 5-агонист ([d-Ala2,d-Leu5] - знкефалин

DAGO - р-агонист ([0-А1а2,К-Ме-РЬе4,01у5-о1]-энкефалин

IFN - интерферон

IL - интерлейкин

MPF - меланотропин потенцирующий фактор TNF - фактор некроза опухоли

Гейн Сергей Владимирович

РОЛЬ Р-ЭНДОРФИНА В НЕЙРОЭНДОКРИННОЙ РЕГУЛЯЦИИ ФУНКЦИЙ ИММУННОЙ СИСТЕМЫ

14 00 36 Аллергология и иммунология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Подписано в печать 20.09 2007 Формат 60 х 90/16 Набор компьютерный Тираж 120 экз ____Уел печ л 3,25 Заказ № 791-к/2007

Издательский дом «Пресстайм». Адрес 614025, г Пермь, ул Г Хасана, 105.