Автореферат и диссертация по медицине (14.04.02) на тему:Изучение липофильных фракций мяты перечной и тысячелистника обыкновенного (углеводородные экстракты)

На правах рукописи

Зуев Сергей Сергеевич

ИЗУЧЕНИЕ ЛИПОФИЛЬНЫХ ФРАКЦИЙ МЯТЫ ПЕРЕЧНОЙ И ТЫСЯЧЕЛИСТНИКА ОБЫКНОВЕННОГО (УГЛЕВОДОРОДНЫЕ ЭКСТРАКТЫ)

14.04.02 - Фармацевтическая химия, фармакогнозия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук -g MAP 2014

Москва-2014

005545760

Работа выполнена в ГБОУ ВПО Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М.Сеченова Министерства здравоохранения Российской Федерации

Научный руководитель:

Стреляева Ангелина Вадимовна - доктор фармацевтических наук, доцент ГБОУ ВПО Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М.Сеченова Министерства здравоохранения Российской Федерации

Официальные оппоненты:

Фурса Николай Сергеевич - доктор фармацевтических наук, профессор, заведующий кафедрой фармакогнозии и фармацевтической технологии ГБОУ ВПО Ярославская государственная медицинская академия Минздрава России,

Лякина Марина Николаевна - доктор фармацевтических наук, заместитель начальника управления №3 экспертизы лекарственных средств ФГБУ НЦЭСМП МЗ РФ.

Ведущая организация: ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт лекарственных и ароматических растений Россельхозакадемии.

Защита состоится «19» марта 2014 г. В 14 час. на заседании Диссертационного совета Д.20В.040.09 при ГБОУ ВПО Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М.Сеченова Министерства здравоохранения Российской Федерации по адресу: 119019, г. Москва, Никитский бульвар, д.13.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГБОУ ВПО Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М.Сеченова (ЦНМБ) по адресу: 117997, г. Москва, Нахимовский проспект,

Д.49.

Автореферат разослан «/??» 2014г

Ученый секретарь

Диссертационного Совета Д.208.040.09, доктор фармацевтических наук, профессор

Н.Б. Демина

Общая характеристика работы

Актуальность темы

Актуальной задачей здравоохранения является поиск и изучение новых лекарственных препаратов для лечения паразитарных заболеваний, осложненных пециломикозом, сопровождающихся кровотечениями и воспалительным процессом. Несмотря на значительные успехи синтеза химических лекарственных средств и их применения, растения продолжают оставаться одним из перспективных источников получения лекарственных препаратов.

Перспективным является изучение углеводородных экстрактов из листьев мяты перечной и из травы тысячелистника, где в качестве экстрагента используется петролеум.

Листья мяты перечной - официнальное лекарственное сырье, на основе которого выпускаются препараты для лечения воспалительных процессов. На современном фармацевтическом рынке богатый ассортимент комплексных препаратов, применяемых как наружно, так и внутрь, такие, как меновазин, бальзам «золотая звезда», венозол гель и другие.

Тысячелистник обыкновенный - официнальное лекарственное растение, которое широко используется для лечения различного рода кровотечений и воспалительных процессов. В ассортименте аптек большое количество препаратов, содержащих в своем составе траву тысячелистника или его экстракт. Широко применяются препараты Лив-52, Ротокан, Малавит, Траумель, Миллефолиум.

Гомеопатические лекарственные препараты в настоящее время широко используются для лечения многих заболеваний, в том числе и для лечения заболеваний, сопровождающихся воспалительным процессом. В Российской Федерации метод гомеопатии разрешен к медицинскому применению в 1995 году (Приказ №335 МЗ РФ от 29.11.95 № 335).

Зарубежная фармацевтическая промышленность предложила ряд лекарственных препаратов, как аллопатических, так и гомеопатических на основе керосиновой фракции нефти. Так, хорошо известен препарат фирмы Веледа «Петролеум», который применяется для лечения радикулита, он также обладает отхаркивающим действием при кашле и тяжелых бронхитах (в том числе и у детей). Известен петролеум гомеопатический. Согласно немецкой гомеопатической фармакопее петролеум представляет собой фракцию нефти, выкипающую в температурном интервале 180-220°С. В России, где имеется много источников сырья для производства петролеума, данный лекарственный препарат не выпускается. В гомеопатии очень часто используется петролеум в комплексе с другими гомеопатическими препаратами. Исходя из вышесказанного, исследования петролеумных (углеводородных) экстрактов из листьев мяты перечной и травы тысячелистника обыкновенного, которые ранее не применялись в медицинской, в ветеринарной практике, является актуальной задачей фармации.

Цель и задачи работы

Целью настоящей работы является изучение физико-химических свойств, биологической активности и токсичности углеводородных экстрактов листьев мяты перечной и травы тысячелистника.

Для выполнения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Провести информационно-аналитический поиск источников литературы для установления степени изученности данной темы.

2. Получить углеводородные (петролеумные) экстракты из листьев мяты перечной и травы тысячелистника.

3. Используя современные методы анализа (хромато-масс-спектрометрию, спектрофотометрию, ТСХ), изучить физико-химические свойства полученных экстрактов.

4. Изучить фармакологическую активность петролеумных (углеводородных) экстрактов.

5. Получить гомеопатические препараты на основе углеводородных экстрактов.

6. Изучить токсичность петролеумных (углеводородных) экстрактов.

Научная новизна работы.

Получены углеводородные экстракты (петролеумные) из листьев мяты перечной и травы тысячелистника.

Описаны физические свойства данных экстрактов. Методом ТСХ, хромато-масс- спектрометрии изучен состав биологически активных веществ экстрактов.

Проведен сравнительный анализ химического состава липофильных фракций (спиртового извлечения, эфирного масла, углеводородного экстракта) листьев мяты перечной и травы тысячелистника.

Предложены условия для проведения ТСХ анализа данных углеводородных экстрактов.

Впервые изучены биологическая активность, острая и хроническая токсичность углеводородных экстрактов.

Изучен качественный состав и токсичность петролеума.

Практическая значимость работы

На основе проведенных исследований разработан проект Фармакопейной статьи «Петролеум». Результаты исследований внедрены в учебный процесс кафедры фармакогнозии Первого МГМУ им. И.М.Сеченова.

Положения, выносимые на защиту:

-данные по качественному и количественному составу биологически активных веществ липофильных фракций листьев мяты перечной и травы тысячелистника;

-результаты оценки биологической активности полученных углеводородных экстрактов;

- результаты изучения острой и хронической токсичности полученных экстрактов.

Апробация работы

Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на XXI,XXI 1,ХХ111 Московской международной гомеопатической конференции «Развитие гомеопатического метода в современной медицине» (Москва, 2011,2012,2013), на национальных Российских конгрессах «Человек и лекарство» (Москва, 2010,2013), на научной конференции одаренных студентов и молодых ученых в Самарканде (2010), на VI11 Всероссийской конференции с международным участием «Химия и медицина» (Уфа, 2010) ,на научно-практической конференции «Современные аспекты использования растительного сырья и сырья природного происхождения в медицине» (Москва, 2013). Апробация диссертации состоялась на кафедре фармакогнозии фармацевтического факультета ГБОУ ВПО Первый МГМУ имени И.М.Сеченова МЗ РФ (Москва, 2013).

Личное участие автора

Автор, изучив отечественную и зарубежную нормативную и справочную документацию, обосновал актуальность избранной темы. Предложил методики определения качественного состава новых петролеумных экстрактов мяты перечной и тысячелистника, при этом использовав современные методы исследования - ТСХ, хромато-масс-спектрометрию. Изучил токсичность и фармакологическую активность предложенных экстрактов на цыплятах, мышах, крысах и кроликах. Самостоятельно получил новые гомеопатические препараты. Провел статистический анализ результатов исследований, подготовил фотографии, рисунки, таблицы, демонстрирующие результаты исследований, сформулировал выводы и практические рекомендации. Вклад автора является определяющим и заключается в непосредственном участии во всех этапах исследования: от постановки задач, их теоретической и практической реализации до обсуждения результатов в научных публикациях, докладах на международных и российских конференциях.

Соответствие диссертации паспорту научной специальности

Научные положения диссертационной работы соответствуют формуле специальности 14.04.02. - фармацевтическая химия, фармакогнозия (фармацевтические науки). Результаты проведенного исследования соответствуют области исследования специальности, конкретно пунктам 6 и 7 паспорта «фармацевтическая химия, фармакогнозия».

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 26 печатных работ, из них 8 статей - в рекомендуемых ВАК изданиях.

Связь темы диссертационной работы с планом научных работ учреждения. Диссертационная работа выполнена в рамках комплексной темы кафедры фармакогнозии Первого МГМУ имени И.М.Сеченова «Разработка современных технологий подготовки специалистов с высшим медицинским и фармацевтическим образованием на основе достижений медико-биологических исследований». Номер государственной регистрации: 01.2.006 06352 и в соответствии с планом НИР лаборатории фармакогнозии НИИ фармации Первого МГМУ имени И.М. Сеченова по теме: «Фармакогностическое изучение лекарственного растительного сырья, лекарственных сборов, лекарственных форм из сырья и разработка методов их стандартизации с учетом влияния антропогенных факторов» (код темы 04.07.093, проблема № 1006 АМН РФ, Государственный регистрационный номер 01200110546).

Объем и структура диссертации. Работа изложена на 150 страницах машинописного текста, содержит 28 таблиц и 39 рисунков. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, пяти глав экспериментальной части, выводов, списка литературы, включающего 152 источника, в том числе 45 на иностранных языках и приложения.

Полученные результаты обработаны статистически, обобщены в таблицах, выражены в соответствующих формулах, которые приведены в работе.

Содержание работы

Объекты исследования

Объектами исследования является углеводородный (петролеумный) экстракт травы тысячелистника и углеводородный (петролеумный) экстракт листьев мяты перечной, петролеум (фракция нефти, выкипающая при температуре 180 - 220° С), спиртовые извлечения, полученные из листьев мяты перечной различных хемотипов, спиртовые извлечения, полученные из свежей и высушенной травы тысячелистника.

Углеводородные (петролеумные) экстракты готовили методом мацерации в соотношении травы и экстрагента 1:10. Настаивали в течение 2-х недель в темном месте периодически помешивая.

Методы исследования: спектрофотометрия (оптические спектры поглощения петролеума и экстракта были выполнены на однолучевом спектрофотометре Hitachi U 1900), хромато-масс-спектрометрия, условия которой были следующие: прибор фирмы Agilent Technologies; программное обеспечение - ChemStation Е 02.00; энергия ионизирующих электронов 70 эВ; регистрация масс-спектров в положительных ионах в диапазоне (m/z) от 20 до 450 со скоростью 2,5 скан/сек. Идентификацию компонентного состава (качественный анализ) проводили по библиотеке полных масс-спектров NIST-05 и соответствующим значениям хроматографических индексов Ковача. Относительное содержание компонентов смеси, % (количественный анализ)

проводили вычислением соотношения площадей хроматографических пиков по полному ионному току (методом простой нормировки).

Газовая хроматография выполнялась с помощью газового хроматографа «Биохром-1».

В методе ТСХ использовались в качестве неподвижной фазы пластинки «Сорбифол» и «Силуфол». В качестве подвижной фазы использовались хлороформ и бензол:этилацетат (7 : 3). В качестве свидетелей - СО ментола и СО цинеола. Детектор: диэтилформамид, парадиметиламинобензальдегид. Длина пробега 10 см.

Физико-химические свойства углеводородных экстрактов Растворимость

Была изучена растворимость полученных углеводородных (петролеумных) экстрактов листьев мяты перечной и травы тысячелистника обыкновенного. Изучали растворимость по методике ГФХП. Углеводородные экстракты мяты и тысячелистника «очень легко растворим» в органических растворителях (толуол, эфир, этилацетат), «хорощо» растворим в спирте.

Определение сухого остатка

Сухой остаток определяли по методике ГФХ1. Сухой остаток углеводородного (петролеумного) экстракта мяты перечной представляет собой аморфное вещество грязно-зеленого цвета, без запаха, практически нерастворимое в воде, хорошо растворимое в спирте , толуоле, хлороформе, гексане, ацетоне. Сухой остаток углеводородного экстракта листьев мяты перечной составил 0,40 ± 0,02%, углеводородного экстрагента -0,020±0,001%.

Сухой остаток углеводородного экстракта тысячелистника представляет собой аморфное вещество грязно- зеленого цвета, без запаха, практически не растворимое в воде, хорошо растворимое в спирте , толуоле, хлороформе, гексане, ацетоне. Сухой остаток углеводородного экстракта травы тысячелистника составил 0,20% ± 0,05%. Определение плотности

Определение плотности проводили согласно методике ГФ XI издания. Плотность петролеума составила 0,799г/мл ±0,001, углеводородного экстракта мяты 0,807г/мл ±0,001, углеводородного экстракта тысячелистника 0,812±0,001. Определение кислотного числа

Определение кислотного числа проводили согласно методике ГФ XI издания. Кислотное число углеводородного экстракта тысячелистника составило Кч (э) = 1,01±0,01; петролеума Кч(п) = 0,71±0,01Кч(э), углеводородного экстракта мяты = 1,03±0,01. Тонкослойная хроматография

Нами разработаны оптимальные условия проведения ТСХ для углеводородного экстракта тысячелистника. Установлено, что наилучшее разделение углеводородного экстракта тысячелистника при хроматографировании было достигнуто в системе бензол: этилацетат (7: 3) на пластинах «Сорбифол» с использованием в качестве детектора диэтилформамида.

При хроматографировании в данной системе мы наблюдали достаточно четкое разделение углеводородного экстракта. Было выделено 4 зоны адсорбции: Rfl= 0,23 (голубого цвета); RÍ2 = 0,44 (зеленоватого); RÍ3 = 0,54 (коричневого); Rf4 = 0,70 (фиолетово-розового). Зоны располагались по всей пластинке и детектировались диэтилформамидом.

При сравнительном хроматографическом анализе углеводородного экстракта и настойки тысячелистника было установлено, что состав углеводородного экстракта тысячелистника оказался несколько богаче настойки. При хроматографировании углеводородного экстракта было обнаружено 5 зон абсорбции, две из которых соответствовали ментолу и цинеолу и двум зонам адсорбции настойки тысячелистника.

Хроматографирование углеводородного экстракта листьев мяты проводилось в системе растворителей - хлороформ, на пластинах «Силуфол». Наносились свидетели ментол, в качестве детектора использовался анисовый альдегид. Было выделено 9 зон адсорбции: с ГШ=0,53(бордового цвета); Rf2 = 0,38 (светло-фиолетового); RÍ3 = 0,27 (светло-коричневого); Rf4 = 0,22(светло-зеленого); Rf5 = 0,20 (бордового); Rf6 = 0,18 (розового); RÍ7 = 0,13 (красного); RÍ8 = 0,11 (светло-зеленого); RÍ9 = 0,09 (зеленого); Rf (ГСО ментола) = 0,44. Зоны располагались по всей пластинке и детектировались анисовым альдегидом.

Был проведен хроматографический анализ углеводородного экстракта мяты перечной, где условия хроматографирования несколько изменились-была использована пластина «Сорбфил» 15x15 см и изменено время насыщения камеры до 30. Было выделено 8 зон адсорбции: с Rfl= 0,83(бледно-красного цвета); Rf2 = 0,54 (фиолетового); RD = 0,46 (бледно-фиолетового); Rf4 = 0,31 (розового); Rf5 = 0,20 (бледно-розового); Rf6 = 0,11 (зеленого); RÍ7 = 0,05 (бледно-розового); Rf8 = 0,03 (серого); Rf (ГСО ментола) = 0,33; Rf (ГСО цинеола) = 0,56. Зоны располагались по всей пластинке и детектировались диметилформамидом.

При хроматографировании с использованием пластины «Сорбфил» в системе бензол-этилацетат (7:3) мы наблюдали четкое разделение углеводородного экстракта листьев мяты перечной. Было выделено 6 зон адсорбции: с Rfl= 0,9(красного цвета); Rf2 = 0,82 (светло-зеленого); RÍ3 = 0,75 (коричневого); Rf4 = 0,61 (розового); Rf5 = 0,54 (бледно-фиолетового); Rf6 = 0,48 (коричневого); Rf (ГСО ментола) = 0,76; Rf (ГСО цинеола) = 0,63. Зоны располагались по всей пластинке и детектировались анисовым альдегидом.

Оптимальное разделение углеводородного экстракта мяты перечной было достигнуто при хроматографировании на пластинках «Силуфол» с подвижной фазой - хлороформом и детектором - анисовым альдегидом. Было детектировано 9 зон адсорбции, одна из которых соответствовала ГСО ментола.

Сравнительный хроматографический анализ углеводородного экстракта листьев мяты перечной, эфирного масла мяты и настойки мяты перечной проводился на пластинах «Сорбфил» в системе растворителей бензол-этилацетат (7:3) при детектировании анисовым альдегидом.

При хроматографировании в углеводородном экстракте листьев мяты перечной было детектировано 7 зон адсорбции, в эфирном масле мяты перечной - 6, в настойке мяты перечной - 5. При этом во всех образцах был идентифицирован ментол, с ЯГ ГСО ментола - 0,63; ЯГ пятой зоны углеводородного экстракта мяты- 0,60; четвертой зоны масла мяты перечной - 0,62; четвертой зоны настойки мяты перечной - 0,59; Яб данных зон по ментолу от 0,94 до 0,98.

При проведении сравнительного анализа состава углеводородного экстракта мяты перечной, эфирного масла, настойки мяты перечной методом ТСХ состав углеводородного экстракта мяты перечной оказался несколько богаче такового эфирного масла и настойки матричной гомеопатической.

Исследование состава углеводородного экстракта тысячелистника, мяты перечной и экстрагента методом газовой хроматографии

В немецкой гомеопатической фармакопее было отмечено, что основной методикой стандартизации петролеума является газовая хроматография. Для получения общего хроматографического портрета петролеума и углеводородных экстрактов была проведена газовая хроматография. В качестве свидетелей использовалась стандартная смесь предельных и ароматических углеводородов. Петролеум представляет собой многокомпонентную смесь, где представлены мажорные компоненты и большое количество минорных компонентов.

Методом газовой хроматографии удалось идентифицировать в петролеуме, углеводородном экстракте тысячелистника, углеводородном экстракте мяты предельные углеводороды: октан, нонан, декан, ундекан. Компоненты эфирного масла экранировались компонентами петролеума. Поэтому нами были проведены исследования углеводородных экстрактов с использованием хромато-масс-спектрометрии.

Хромато-масс-спектрометрическое исследование экстрагента и углеводородных (петролеумных) экстрактов тысячелистника и мяты перечной

Методом хромато-масс-спектрометрии установлено, что в состав петролеума входит более 100 индивидуальных соединений, относящихся к различным классам углеводородов (табл.1).

Таблица 1. Компонентный состав углеводородного экстрагента петролеума

СОЕДИНЕНИЯ %

м-Алканы Гептан, октан, нонан, декан, ундекан, додекан, тридекан, тетрадекан 35,80

Разветвлё иные 2,3,5-Триметилгексан; 2,2,3,3-тетраметилгексан; 2- и 3-метилгептаны; 2,3-, 2,5- и 2,6-диметилгептаны; З-этил-2-метилгептан; 3- и 4-метилоктаны; 2,3-, 2,6- и 3,5-диметилоктаны; 2-, 3-, 4- и 5-метилнонаны; 2,5-, 2,6- и 3,7-диметилнонаны; 2-, 3-, 4- и 5-метилдеканы; 3,7-диметилдекан; 5-этил-5-метилдекан; 2-, 3- и 4-метилундеканы; 2,6-диметилундекан; 4,6-диметилдодекан; 2,6,10-триметилдодекан 25,75

Цикличес кие 1 -Бутил-2-метилциклопропан; 1 -бутил-1 -метил-2-пропил-циклопропан; 1-метил-2-пентилциклопропан; этил-, пропили гексилциклопентаны; 1-этил-З-метил-циклопентан и 1-метил-2-пропилциклопентан; 2-этил-1,1 -диметилцикло-пентан; метил-, этил-, пропил- и в/иор-бутилциклогексаны; 1,1-, 1,2-, 1,3- и 1,4-диметилциклогек-саны; 1,2-диэтил-циклогексан, 1-этил-2-метилциклогексан,1-этил-4-метил-циклогексан,1-метил-2-пропилциклогексан и и-ментан; 1,1,2- и 1,1,3-три-метилциклогексаны; 1,1,2,3-тетраметил-циклогексан; 2-бутил-1,1,3-триметилциклогексан 10,55

Алкены 2,6-и 3,7-Диметил-1-октены; 1 -фенил- 1-бутен; децен (один из изомеров по двойной связи) 2,20

Арены Толуол; о- и и-ксилолы; кумол, пропил-, бутил-, втор-бутил- и н-амилбензолы; и-цимол и о-, м-, я-этил-, п-пропил-, п-изо-бутил-, п-втор-бугштолуолы; 1,2-диэтилбензол; 2-фенил-пентан; 1-этил-1-метилиндан; гемеллитол, \(/ -кумол и мезитилен; З-Этил-о-ксилол и 4-Этил-л<-ксилол; пренитол и изодурол; пентаметилбензол; нафталин, 1-й 2-метилнафталины 25,70

Оценено относительное процентное содержание как индивидуальных соединений, так и суммарный состав компонентов, относящихся к различным классам. Среди мажорных компонентов наиболее значимыми оказались н-алканы (35,80%). Суммарно в равных количествах присутствовали разветвлённые алканы (25,75%) и арены (25,70%), (табл.1).

Методом хромата-масс-спектрометрии в углеводородном экстракте тысячелистника были идентифицированы 107 соединений, из них к терпеноидам относятся: эстафиатин (рис.1) и в следовых количествах следующие вещества: а-пинен, р-туйен, и-цимол ,1,8-цинеол, 2-метил-5-изопропил-бицикло[3.1.0]гексан-2-ол,г/«с-Р-терпинеол (табл2.,рис. 1).

Таблица 2.Компонентный состав основных терпеноидов петролеумного экстракта тысячелистника

Название соединения Структурная формула ят, мин. К1 КоуасЬ 1п(1ех %

а-Пинен 24,16 955 ск

(¡-Туйен $ 25,58 991 ск

п-Цилюл 27,38 1043 ск

1,8-Цинеол 27,82 1056 ск

2-Метил-5-изопропил-бицикло [3.1.0]гексан-2-ол # он 28,98 1088 ск

цис-Р- Терпинеол 30,12 1122 ск

Эстафиатин 62,34 2108 0,05

10050 э 91 53 79 67 | 97 2 105 162 117 131 I 147 175 203 Ь1|||, |1|Ци,д.1, яг.1 246 .-1.................

Ю 30 50 70 00 110 130 150 170 Т90 210 230 250 270 290 310 ЗЭО 350 370 390 (твЩКЬ) ИЧяПпЧп

Рис 1. Масс - спектр эстафиатина.

Методом хромата-масс-спектрометрии в углеводородном экстракте мяты были идентифицированы 105 соединений, из них к терпеноидам относятся:: ментон, изоментон, пулегон, пиперитон, 1,7,7-триметил-2-винил-бицикло[2.2.1]гепт-2-ен. (табл.3).

Таблица 3. Терпеноидные соединения, идентифицированные в углеводородном экстракте мяты перечной

Соединение Структура RT, мин KI Kovach Index %

Ментон(1) 32,09 1182 <0,16

Ментон(2, изо-) 32,49 1194 <0,03

Пулегон 43,89 1272 <0,25

Пиперитон 35,39 1288 <0,12

1,7,7-триметил-2-винил- бицикло[2.2.1]гепт-2-ен ÖC- 34.5 1946 1,26%+

Спектрофотометрические исследования углеводородного экстракта мяты перечной, тысячелистника и петролеума

В задачу наших исследований входило изучение спектральных характеристик полученных углеводородных (петролеумных) экстрактов и сравнение их с таковыми экстрагента - петролеума, который является многокомпонентной смесью углеводородов. В петролеуме были зарегистрированы максимумы поглощения 266 нм и 216 нм с абсорбцией поглощения 1,14 и 3,40 соответственно.

В углеводородном экстракте мяты были зарегистрированы дополнительные максимумы поглощения - 665 , 608 , 534, 408 нм с абсорбцией поглощения 0,540, 0,121,0,128, 1,01 0 соответственно диапазон измерения от 850 до 340 нм.

Углеводородный экстракт тысячелистника растворяли в спирте в соотношении 1:100 и спектрофотометрировали по отношению к растворителю. Удалось получить с хорошим разрешением полосы поглощения в интервале 400^50 нм, 530 нм, 650- 700 нм, 800 нм. Спектральная характеристика показала, что имеется небольшое плечо при 400 нм, четкий максимум при 600 нм и интенсивный третий максимум при 660 нм.

Петролеум - хорошо известный препарат, описанный в Немецкой гомеопатической фармакопее. Широко применяются разведения D2, D3, D4. В частной фармакопейной статье Немецкой государственной гомеопатической фармакопеи приводится анализ качества препарата именно до D4 разведения. Нами изучены спектрофотометрические характеристики «Petroleum-K» в разбавлении до 1:500, при котором удалось получить с хорошим разрешением полосы поглощения.

На основании полученных спектрофотометрических данных по величинам оптической абсорбции (и с применением метода наименьших квадратов (МНК)) построен градуировочный график Abs = F (D). Следует отметить, что в изучаемом диапазоне разведений препарата для величины оптического поглощения наблюдалась зависимость, близкая к линейной. Таким образом, нами выявлена линейная зависимость величины оптической абсорбции от величины разведения D, что в дальнейшем может служить основой для разработки метода стандартизации гомеопатического препарата (рис.2).

Е i ю

Е xl со со —: со (л сч0,01

т j.3 d_3 174 d. ¡.0 d_ >.7 d_ .57 d_ >.4 d_ >.0

разведения (десятичная шкала)

201.5-

200 300 ''' ' 400 '''''' 500 ....... 600 ' ' ' 700 ' '..... 800 ''''''900 Пт

Рис. 2. Гомеопатический «Petroleum-К»: градуировочный график и спектр

петролеума.

Изучение спиртового извлечения, полученного из свежего и высушенного сырья травы тысячелистника и листьев мяты перечной

Проведены сравнительные исследования спиртовых извлечений из Mentha piperita L. (культивируемых на экспериментальном участке ГБС РАН) для свежего растительного материала и высушенных образцов.

Сравнительный анализ проведён методом хромато-масс-спектрометрии на приборе фирмы Agilent Technologies. В ходе исследования качественного состава спиртового извлечения, полученного как из свежего, так и из высушенного сырья, идентифицировано и проведено сравнение по более чем 60-ти компонентам смеси, которые условно разбиты на две группы: I -соединения, относящиеся к определённому биосинтетическому типу терпенов и II - соединения, не относящихся к классу терпенов. Количественный анализ (относительное содержание, соответственно свежее сырьё и высушенное сырьё, %) идентифицированных компонентов в спиртовом извлечении проводили, исходя, из общего суммарного состава указанных групп (I и II) соединений.

В группе I идентифицированы соединения, относящиеся к классу терпенов и терпеноидов, присутствующих как в свежем, так и в высушенном сырье. Монотерпены и монотерпеноиды представлены типами: ментана (в%) - ментол (совокупность стереоизомеров, 64,20 и 3,59), ментил-ацетат (совокупность стереоизомеров, 0,37 и 0,51); ментон (совокупность стереоизомеров, 14,69 и 9,52); лимонен (0,34 и 5,14); г/ыс-р-терпинеол (0,07 и 3,17); 1,8-цинеол (0,37 и 2,24); и-цимол (0,02 и 0,07); тимол (0,04 и 0,04); т-терпинен (следы и 0.20); пулегон (0,52 и 18,63) и изопулегон (0,03 и 0,20); пиперитон (0,87 и 0,46) и пиперитон оксид (0,03 и 0,77); карвеол (0,02 и 0,61); карвон (отсутств. и 30,28); метилированного циклогептана - эукарвон (0,07 и 1,21); ациклическими - транс-Р-оцимен (0,01 и 0,07); линалоол (0,14 и 0,22). Сесквитерпены и сесквитерпеноиды представлены компонентами, охватываемыми биогенетическим древом гермакрана, - гермакрен D (0,13 и

0.11) и представителями типов: кадинана - 5-кадинен (0,11 и 0,01); 1-изопропил-7-метил-4-метилен-1,2,3,4,4а,5,6,8а-октагидронафталин (совокупность стереоизомеров, 0,10 и 0,31), бурбонана - р-бурбонен (0,22 и 0,48); кубебана - р-кубебен (0,06 и 0,28); аромадендрана - спатуленол (0,04 и 0,11);

1, 1и 4,7-тетраметилдекагидро-1//-циклопропа-[е]азулен-4-ол (0,69 и 0,06). Биогенетическое древо гумулана представлено типами: гумулана - а-кариофиллен (0,14 и 0,12), р-кариофиллен (2,56 и 4,00) и р-кариофиллен оксид (0,12 и 1,64). Среди сесквитерпенов и терпеноидов обнаружены также соединения, относящиеся к типам: элемана - Р-элемен (0,03 и 0,05); ациклических - р-фарнезен (0,26 и 0,11); геранилизовалерат (0,04 и 0,66); фитол (0,92 и 0,51). Среди компонентов группы II идентифицированы: ацетол (0,64 и 0,34); 2-фуральальдегид (0,10 и 0,20), 5-метил-2-фуральальдегид (0,31 и 0,20), 2-фуранметанол (0,14 и 0,26), 5-гидроксиме-тил-2-фуральдегид (0,53 и 1,36) и 2,5-диметил-4-гидрокси-3(2Л)-фуранон (0,59 и 0,15); 2-цикло-пентен-1,4-дион (0,07 и 0,45) и 2-гидроксициклопент-2-ен-1-он (0,06 и 0,01); 2,3-дигидро-3,5-ди-гидрокси-6-метил-4//-пиран-4-он (0,83 и 1,07); фенилацетальдегид (0,27 и 0,46); 2-гидрокси-5-ме-тилбензальдегид (1,09 и 1,04); кумаран (0,23 и 0,29); 2-метокси-4-винилфенол (0,15 и 0,07) и эвгенол

(0,13 и 0,14); диэтилмалонат (0,55 и 0,04) и моноэтилсукцинат (0,95 и 0,37); олеиновая кислота (0,23 и отсутств.), этилпальмитат (1,91 и 0,89), этиллинолеат (1,2 и 0,24), этиллиноленат (2,14 и 0,25) и этилстеарат (0,34 и 0,12).

Таким образом, в высушенном сырье по сравнению со свежим, наблюдается резкое уменьшение содержания основных хемотипических соединений, присущих мяте перечной: содержание ментола (сумма стереоизомеров) снижается с 64,20 до 3,60%, содержание ментона снижается с 14,69 до 9,52. При этом в высушенном сырье по сравнению со свежим наблюдается существенное увеличение содержания лимонена (с 0,34 до 5,14%) и соединений, образующихся из него в результате окисления либо двойных связей, либо аллильного положения. В подтверждение этому в высушенном сырье появляются соединения, которые в свежем сырье отсутствуют, либо находятся в следовых количествах. Таковыми являются компоненты, относящиеся к типу ментана - лактон минт-фуранон (совокупность стереоизомеров, отсутств. и 1,35) и ментофуран (отсутств. и 0,40); лимонен оксид (отсутств. и 0,45); карвилацетат (отсутств. и 0,63); дигидрокарвеол (отсутств. и 1,46); диосфенол - 2-гидрокси-3-изопропил-6-ме-тил-2-цикло-гексен-1-он (отсутств. и 0,32); карвон (отсутств. и 30,28); Кроме того, в высушенном сырье выявлено увеличение монотерпеновых компонентов, относящихся к типам: пинана - а-пинен (следы и 0,48) и Р-пинен (следы и 0,83); туйана - сабинен (следы и 0,52); также идентифицирован и бициклический дитерпеноид, типа лабдана, - склареол (лабд-14-ен-8,13-диол, следы и 0,26).

Таким образом, качественный и количественный состав свежего и высушенного сырья - листья мяты - не является однозначным, что следует необходимым образом учитывать при использовании его для приготовления субстанций для гомеопатических препаратов. Опираясь на то, что в свежем сырье содержания ментола гораздо выше, чем в высушенном сырье, следует предпочтение отдать свежему сырью при приготовлении как гранул гомеопатических, так и углеводородного экстракта.

В составе анализируемых проб спиртового извлечения высушенного и свежего сырья травы тысячелистника среди летучих компонентов идентифицировано более 30-ти соединений, большая часть которых относится к классам moho-, а также сесквитерпенов и терпеноидов.

Среди монотерпенов и терпеноидов в свежем и воздушно-сухом сырье тысячелистника содержатся (суммарно 58,20 и 63,60% соответственно):а -туйен, а - и р-пинен, а-фенхен, сабинен,р -мирцен, и-цимол, лимонен, 1,8-цинеол, т -терпинен, 5-изопропил-2-метилбицикло[3.1.0]гексан- 2-ол, цис-р-терпинеол, 2,6-диметил-3,5,7-октатриен-2-ол, камфора, борнеол и борнилацетат, а-терпинеол, 4-туйен-2а-илацетат.

Среди сесквитерпенов и терпеноидов в свежем и воздушно-сухом сырье тысячелистника содержатся (суммарно 41,80 и 36,40% соответственно): а- и Р-кариофиллен, 1-изопропил-7-метил-4-метилен-1,2,3,4,4а,5,6,8а-октагидро-нафталин (совокупность стереоизомеров), гермакрен D и гермакрен D-4-ол, 5-

кадинен, неролидол и неролидилацетат, спатулен^л, -кариофиллен оксид, 1,1,4,7-тетраметилдекагидро- 1//-циклопропа[е]азулен-4-ол (совокупность стереоизомеров), кубенол, хамазулен.

Из представленных данных видно, что качественный состав извлечения как из свежего, так и из воздушно-сухого сырья в целом сходен. Однако даже в свежевысушенном сырье появляются продукты окисления, а также изомеризации терпенов, отсутствующих в растительном материале до сушки, например, в воздушно-сухом сырье присутствует окисленная форма сабинена -4-туйен- 2а-илацетат - и изомерная формф -кариофиллена - а-кариофиллен. Следует отметить, что отличительные особенности свежего растительного материала в сравнении с воздушно-сухим сырьём прослеживаются в различном относительном содержании (%, соответственно) отдельных компонентов спиртового извлечения. Так, существенные различия количественного состава касаются, прежде всего(х -пинена (8,48 и 3,83%), а-фенхена (3,00 и 0,04%), борнеола (0,35% и следовые количества), борнилацетата (3,15 и 0,12%), гермакрена D (3,32 и 0,63%), 5-кадинена (4,44 и 1,00%), неролидола (6,50 и 0,44%) и неролидилацетата (1,00% и следовые количества), спатуленола (2,03 и 0,30%), кубенола (2,56 и 0,50%)%. Особо следует подчеркнуть, что по сравнению со свежим воздушно-сухое сырье тысячелистника имеет на порядок более высокое относительное содержание хамазулена (соответственно 1,23 и 15,50%). Это обстоятельство может играть ключевую роль при выборе воздушно-сухого сырья для получения углеводородного экстракта.

Сравнительный анализ извлечений, полученных из свежего и высушенного сырья травы тысячелистника, показал, что их компонентный состав не является равнозначным, хотя и близким по своему качественному и количественному составу.

Сравнительный анализ эфирного масла форм мяты перечной, относящейся к различным хемотипам

Растение вида Mentha piperita L. имеет большое количество хемотипических форм. В задачу наших исследований входило изучение компонентного состава эфирного масла (ЭМ) двух интродуцируемых форм вида М. piperita L., культивируемых на экспериментальном участке Главного ботанического сада им. Н.В. Цицина РАН. Изучены ЭМ из форм мяты перечной - ГБС 2-95 и ГБС 1-84, - относящихся соответственно к ментольному и линалоольному хемотипам. Образцы ЭМ получены гидродистилляцией и исследованы методом хромато-масс-спектрометрии. В ЭМ каждой из изученных форм мяты перечной идентифицировано более 60-ти компонентов, относящихся к классам moho-, сесквитерпенов и терпеноидов.

В ряду монотерпенов и монотерпеноидов в ЭМ мяты перечной ментольного и линалоольного хемотипов содержатся (суммарно 95,07 и 93,77% соответственно) соединения, относящиеся к биосинтетическим типам туйана (а-туйен, сабинен, 5-изопропил-2-метил-бицикло[3.1.0]гексан-2-ол); фенхана (а-фенхен); пинана (а- и р -пинен, ш/занс-пинокарвеол, миртеналь и миртенилацетат); ациклических монотерпенов и монотерпеноидов

(линалоол, Р -мирцен, оцимены (тиранс-3,7-диметил-1,3,6-октатриен и 2,6-диметил-2,4,6-октатриен), цитраль); метилированного циклогексана (2,5,5,8а-тетраметил-3,4,4а,5,6,8а-гексагидро-2//-хромен); жасмон; ментана (ментол ментилацетат (совокупность стереоизомеров), ментофуран, ментон (совокупность стереоизо-меров); а - и т -терпинен, и-цимол, лимоненр -фелландрен, 1,8-цинеол, г/г/с-Р-терпинеол, 4-изо-пропил-1-метил-2-циклогексен-1-ол, 4-изопропенил-1-метил-2-циклогексен-1-ол, изопулегол, изо-пулегилацетат, изопулегон, 4-терпинеол, а-терпинеол, пулегон, изопулегилацетат (совокупность стереоизомеров), тимол, карвон, пиперитон и пиперитон оксид. При этом в числе мажорных компонентов, типичных для ЭМ мяты перечной ментольного хемотипа, необходимо, прежде всего, назвать ментол и ментилацетат (совокупность стереоизомеров, 59,75%), ментофуран (10,05%), а также ментон (совокупность стереоизомеров 15,56%). В ЭМ мяты перечной, относящейся к линалоольному хемотипу, ментол и ментилацетат составляют 1,55%, причём продукт циклизации - ментофуран - не образуется, а ментон составляет 0,26%. Образец ЭМ мяты перечной линалоольного хемотипа представлен мажорным монотерпеноидом линалоолом, содержание которого достигает 85,30%. Тогда как ЭМ мяты перечной ментольного хемотипа содержит линалоол в количестве 0,29%.

Сесквитерпены и сесквитерпеноиды в ЭМ мяты перечной ментольного и линалоольного хемотипов представлены (суммарно 4,93 и 6,23% соответственно) соединениями, относящимися к биосинтетическим типам элемана (Р- и т -элемен); ациклических сесквитерпеиоидов (неро-лидол); биогенетическому древу гермакрана и биосинтетическим типам кадинана (гермак- рен Б, гермакрен-В-4-ол, а-копаен, 1-изопропил-4,7-диметил-1,2,4а,5,6,8а-гексагидронафталин и 1-изопропил-7-метил-4-метилен-1,2,3,4,4а,5,6,8а-октагидронафталии (совокупность стереоизоме-ров), 4-изопропил-1,6-диметил-1,2,3,4,4а,7,8,8а-октагидронафталин-1 -ол, 5 -кадинен, кадина-1,3,5-триен); эудесмана (а-селинен); бурбоиана (Р-бурбонен); аромадендрана (аромадендрен, а -гурьюнен, спатуленол, 1,1,4,7-тетраметилдекагидро- Ш-циклопропа[е]азулен-4-ол (совокупность стереоизомеров)); гваяна (т-гурьюнен); кубебана (Р-кубебен) и биогенетическому древу гумулана (а-кариофиллен, р-кариофиллен и р-кариофиллен оксид). При этом в ЭМ мяты как ментольного, так и линалоольного хемотипов в качестве мажорного компонента выстегает -кариофиллен (1,69 и 4,26% соответственно).

Таким образом, как показали исследования, наряду с различием в качественном составе мажорных компонентов ЭМ мяты, принадлежащей к одному виду, но разным (в частности, ментольному или линалоольному) хемотипам, наблюдаются также и различия в относительном содержании его минорных компонентов.

Оптимальным сырьем для углеводородного экстракта является мята перечная ментольного типа.

Далее образцы листьев мяты перечной двух типов -ментольного и линалоольного использовались для изучения антиоксидантной активности (рис.3,табл.4). Установлено, что в зависимости от состава экстрагента и температурного режима экстракции концентрация АО (по галловой кислоте) в экстрактах варьировалась (мг/г): для мяты (линалоольного и ментольного хемотипа соответственно) - от 5,4 до 39,5 и от 8,6 до 45,0. Наиболее высокие концентрации АО в экстрактах исследованных растений наблюдались в образцах мят ментольного типа. Причем оптимальными условиями для экстракции являлись: экстрагент - вода-этанол (30:70) при температуре 85°С.

Таким образом, самой высокой антиоксидантной активностью обладает ментальный хемотип мяты перечной.

□ 1 - water, 20С В 2 - water, 95С □ 3 - ethanol, 96%, 20С

04- ethanol, 96%, 75С D5 - ethanol, 70%, 20C 06 - ethanol, 70%, 85C

Рис 3. Суммарная антиоксидантная активность извлечений из ментольной и линалоольной форм мяты перечной.

Таблица 4. Температурные режимы экстрагирования высушенных образцов мяты ментольного и линалоольного морфотипов для определения АО амперометрическим методом _

ХЕМОТИПИЧЕСКАЯ ФОРМА

РЕЖИМ ЛИНАЛООЛЬНАЯ МЕНТОЛЬНАЯ

ЭКСТРАГИРОВАНИЯ Концентрация антиоксидантов, мг/г

Вода,20°С 20,82 31,54

Вода, 95°С 30,70 40,25

Этанол, 96%, 20°С 5,38 8,62

Этанол, 96%, 75°С 11,52 17,50

Этанол, 70%, 20°С 22,71 29,44

Этанол, 70%, 85°С 39,53 45,00

Методом перманганатометрического титрования было изучено содержание дубильных веществ (ГФ XI). Как видно из табл.5,6, количество

дубильных веществ примерно одинаковое в обоих типах мяты перечной. Однако в линалоольном типе есть незначительное повышение содержания дубильных веществ.

Таблица 5. Содержание дубильных веществ в листьях мяты перечной ментольного хемотипа

№ У(КМп04) ш1) С (Дв,%) Хер. Б Бг (%)

1 4,40 6,9606

2 4,50 7,2022 6,99 0,18 2,6

3 4,35 6,8397

Таблица 6. Содержание дубильных веществ в листьях мяты перечной линалоольного хемотипа

№ У(КМп04) С Хер. Б Бг

ш1) (ДВ,%) (%)

1 4,20 8,3140 8,28 0,01 0,07

2 4,15 8,2173

3 4,15 8,2173

Гомеопатические гранулы

Полученные гранулы гомеопатические на основе углеводородного экстракта мяты перечной и тысячелистника соответствуют требованиям ОФС 42-0023-04 по разделам описание, распадаемость, количество гранул в 1г. Изучение биологической активности углеводородных (петролеумных) экстрактов травы тысячелистника

Моделью изучения возможности остановки кровотечений при паразитарных болезнях послужили цыплята, больные эймериозом.

В эксперименте было использовано 76 месячных бройлерных цыплят, у которых эймериоз осложнился пециломикозом. Заболевание сопровождалось кишечным кровотечением. Фекалии птиц были окрашены кровью. 6 цыплят первой группы не лечили, 10 цыплят второй группы пролечены препаратом сравнения кокцидиовитом внутрь по 0,1 г/кг в течение 10 дней, 10 цыплят третьей группы пролечены в течение 10 дней ириленом в дозе по 0,1 г/кг, 50 цыплят четвертой группы в течение 10 дней пролечены ириленом+петролеум в дозе 0,1 г/кг, 5-ю группу составили 10 здоровых цыплят, которые содержались отдельно от больных и никаких препаратов не получали.

На 6-7й день начала эксперимента все цыплята первой группы погибли. На 9,10-й день лечения цыплята 2—4-й групп освободились от эймерий., но у всех продолжалось кровотечение. На 11-й день эксперимента цыплят 3 и 4-й групп начали лечить предложенным нами гомеопатическим препаратом МШейЯшт-рей-окит в разведении Сб. На 3^-й день после применения МШеГо1шт-ре1го1еит из тысячелистника в разведении С6 у больной птицы

прекратились кровотечения. Вторая группа птицы, которой не применялись кровоостанавливающие препараты, на 3—7-й день погибла от кровотечений. Изучение мази на основе углеводородных экстрактов для лечения чесотки

На основе углеводородных (петролеумных) экстрактов тысячелистника обыкновенного, мяты перечной была предложена мазь для лечения чесотки. В состав мази входят петролеумный экстракт тысячелистника(4,0), петролеумный экстракт мяты перечной(4,0), петролеумный экстракт шалфея лекарственного (4,0), льняного масла(10,0), вазелина (до 100,0).

На кроликах, больных чесоткой, доказана высокая эффективность предлагаемой мази. Эксперименты выполнены на 45-ти кроликах самцах шиншилла годовалого возраста, происходящих от одной группы племенных животных. Масса животных от 1250 до 2450 г. Подопытные животные подразделены на пять групп, в каждой по 9 особей. В первой контрольной группе 9 кроликов массой от 2150 до 2450 г. Комплексными исследованиями установлено, что кролики первой контрольной группы клинически здоровы.

Кролики 2-5 групп, спонтанно заразившиеся чесоткой, возбудителем которой является клещ Р80Г0р1еБ сишсиН. Вторая группа кроликов была пролечена петролеумно-растительной мазью, третья - мазью Вилькенсона, четвертая - 20%-ной мазью бензилбензоата, пятая группа контрольная - не лечена. До лечения все 45 животных подвергнуты исследованиям согласно Руководствам Фармкомитета Минздрава России. Наилучший результат получен при лечении предложенной нами мазью, все животные выздоровели. Сравнительное изучение острой токсичности углеводородного экстракта (петролеумного) листьев мяты перечной, травы тысячелистника, петролеума

Опыты по изучению острой токсичности проводились на аутбредных, белых мышах обоего пола массой 15-17г, которые содержались в виварии. Так как летальные дозы не удалось установить - при максимальном заполнении желудка проявлялись только токсические дозы, были подсчитаны токсические дозы. Для { = (30 -1) = 29, при Р = 0,05 I = 2,06, ±ш1 = 4,97г/кг. Токсические дозы петролеума ТБ5о = 13,44 г/кг±4,97 г/кг, петролеум+мята ТБ50 = 14,45 ±2,97 г/кг, петролеум+тысячелистник ТБ50=12,44 ±3,97 г/кг.

Была изучена хроническая токсичность гомеопатического препарата на основе петролеумного экстракта мяты перечной на лабораторной модели ин виво- цыплятах. На 60-ти цыплят месячного возраста доказано, что созданные нами гомеопатические препараты не обладают токсичностью.

ВЫВОДЫ

1.Полученные углеводородные (петролеумные) экстракты тысячелистника и мяты перечной представляют собой прозрачные жидкости, желто-зеленого цвета с резким специфическим запахом, практически нерастворимы в воде, плохо растворим в спирте, хорошо растворим в этилацетате, эфире, хлороформе и толуоле, кислотное число углеводородного экстракта тысячелистника составило: Кч(э) = 1,01±0,01; мяты перечной 1,03±0,01; петролеума Кч(п) = 0,71±0,01. Сухой остаток углеводородного

экстракта травы тысячелистника составил 0,20± 0,005%.; мяты перечной 0,40 ± 0,02%.

2. Методом хромата-масс-спектрометрии в углеводородном экстракте тысячелистника были идентифицированы э стафиатин и в следовых количествах следующие вещества:а -Пинен, Р-Туйен, я-Цимол, 1,8-Цинеол 2-Метил-5-изопропил-бицикло[3.10],гексан-2-о г/ис-р-Терпинеол.

3. Методом хромата-масс-спектрометрии в углеводородном экстракте мяты были идентифицированы: ментон, изоментон, пулегон, пиперитон, 1,7,7-триметил-2-винил-бицикло[2.2.1 ]гепт-2-ен.

4. Разработаны оптимальные условия ТСХ для углеводородного экстракта мяты. Максимальное разделение углеводородного экстракта мяты перечной было достигнуто при хроматографировании на пластинках «Силуфол» с подвижной фазой - хлороформом и детектором - анисовым альдегидом . Было детектировано 9 зон адсорбции, одна из которых соответствовала ГСО ментола. При проведении сравнительного анализа состава углеводородного экстракта мяты перечной, эфирного масла, настойки мяты перечной методом ТСХ состав углеводородного экстракта мяты перечной оказался несколько богаче такового эфирного масла и настойки матричной гомеопатической.

5. Разработаны оптимальные условия ТСХ для углеводородного экстракта тысячелистника. Наилучшее разделение углеводородного экстракта тысячелистника при хроматографировании было достигнуто в системе бензол: этилацетат (7: 3) на пластинах «Сорбфил» с использованием в качестве детектора диэтилформамида. При проведении сравнительного анализа состава углеводородного экстракта состав углеводородного экстракта тысячелистника оказался несколько богаче настойки.

6.Мята перечная ментольного типа обладает более выраженной антиоксидантной активностью, что следует учитывать при получении углеводородного экстракта и гранул гомеопатических. По ОФС была разработана методика получения гранул гомеопатических на основе углеводородного экстракта мяты перечной и тысячелистника обыкновенного.

7.Установлено наличие кровоостанавливающего действия у гомеопатического препарата тысячелистника при эймериозе кур и высокая противочесоточная активность аллопатической мази. При изучении острой токсичности петролеума, петролеум+мята, петролеум+тысячелистник, новой мази летальных доз установить не удалось. Подсчитаны токсические дозы петролеума ТО50 = 13,44 г/кг±4,97 г/кг, петролеум+мята ТБ50 = 14,45 ±2,97 г/кг, петролеум+тысячелистник ТБ50=12,44 ±3,97 г/кг.

Список работ, опубликованных по диссертации

1. Зуев С.С. Сравнительный хроматографический анализ углеводородного экстракта листьев мяты перечной, эфирного масла и настойки мяты перечной /С.С.Зуев // Проблемы экологии, здоровья, фармации и паразитологии: сб. науч. тр.-М., 2010,- С.28-30.

2. Зуев С.С. Сравнительный газохроматографический анализ петролеума и углеводородного экстракта мяты / С.С. Зуев // Проблемы экологии, здоровья, фармации и паразитологии: сб. науч. тр. -М.,2010. - С.ЗО -32.

3. Зуев С.С. Хромато-масс-спектрометрическое исследование петролеума и углеводородного экстракта мяты / С.С. Зуев.// Проблемы экологии, здоровья, фармации и паразитологии: сб. науч. тр. -М., 2010. - С.32. -39.

4. Стреляева, A.B. Изучение спектрофотометрических характеристик и хронической токсичности препарата «Мента-У»/А.В Стреляева, Д.В.Курилов, С.С.Зуев [и др.] //Химия и медицина: VI 11 Всероссийская конференция с международным участием. -Уфа, 2010 - С. 315-317.

5. Стреляева, A.B. ИК-спектрометрическое и спектрофотометрическое исследования углеводородного экстракта тысячелистника/ A.B. Стреляева, Т.А. Щеглова., С.С.Зуев [и др. ] // Проблемы экологии, здоровья, фармации и паразитологии: сб. науч. тр. -М., 2010. - С.20 -21.

6. Стреляева, A.B. Хромато-масс-спектрометрическое исследование экстрагента и углеводородного экстракта тысячелистника /A.B. Стреляева, С.С.Зуев, И.А.Самылина [и др.] // Проблемы экологии, здоровья, фармации и паразитологии: сб. науч. тр. - М., 2010. - С. 13 -17.

7. Лазарева, Н.Б. Лечение множественного эхинококкоза, осложненного пециломикозным сепсисом/ Н.Б. Лазарева, A.B. Стреляева., С.С.Зуев [и др.]. //ХУ11 Российский национальный конгресс «Человек и лекарство»: Сборник материалов конгресса. - М., 2010 - С.662.

8. Зуев, С.С. Новый гомеопатический препарат Millefolium-petroleum в остановке кровотечений у цыплят /С.С.Зуев // Проблемы экологии, здоровья, фармации и паразитологии: сб. науч. тр. — М., 2010. —С.65 -67.

9. Давидьян, A.A. Лечение аллергического пециломикоза у работников по производству шелкового и хлопкового волокна / А.А.Давидьян., A.B., Стреляева, С.С. Зуев [и др.] // Российский национальный конгресс «Человек и лекарство» ХУ11.Сборник материалов конгресса - М.,2010. - С.713.

10. Стреляева, А.В.Изготовление комплексного гомеопатического препарата на основе углеводородного экстракта тысячелистника/А.В.Стреляева, Т.А Щеглова, С.С.Зуев [и др. ] // Проблемы экологии, здоровья, фармации и паразитологии: сб. науч. тр. -М., 2010 - С.21 -24.

11. Стреляева, A.B. Токсическая кардиопатия и миокардиты пециломикозной и иной этиологии у детей /А.В.Стреляева, Э.Р.Гаспарян, С.С.Зуев [и др.] //Российский кардиологический журнал. -2010 -№ 3. -С.46-52

12. Стреляева, A.B. Пецнломикозные атипичные миокардиты у детей и осбенности их лечения /А.В.Стреляева, Э.Р. Гаспарян, С.С.Зуев [и др.] //Российский кардиологический журнал. -2011. -№ 5. -С.58-63.

13. Стреляева, A.B. Перспективность применения комплексных лекарственных препаратов петролеума и мяты перечной /A.B. Стреляева, Д.В.Курилов, С.С.Зуев [и др.] //Традиционная медицина. -2011. -№1- С. 54-61.

14. Стреляева, A.B. Сравнительное изучение физико-химических свойств и компонентного состава петролеума из нефти различных месторождений /А.В.Стреляева, Э.Р.Гаспарян, С.С.Зуев [и др.] //Фармация. -2011. —№ 8. - С.20-23.

15. Стреляева, A.B. Аминокислотный обмен при эхинококкозе/ А.В.Стреляева, Ю.М. Ахмедов,...С.С.Зуев [и др.] //Медицинская паразитология и паразитарные болезни. - 2011. -№4. - С.19 -23.

16. Курилов, Д.В. Изучение химического состава петролеума и перспективность применения его лекарственных форм /Д.В. Курилов, А.В.Стреляева, С.С.Зуев [и др.] //Прикладная аналитическая химия. -2011. -№1(1). - С.54-63.

17. Стреляева, A.B. Гомеопатические препараты в лечении преэклампсии, осложненной пециломикозом /А.В.Стреляева, Э.Р.Гаспарян, С.С.Зуев, А.Т.Сагиева [и др.] //Традиционная медицина.-2011. —№4-С. 51-59.

18. Гаспарян, Э.Р. Latrodectus и пециломикозная эклампсия собак как лабораторная модель в изыскании методов лечения микозов и паразитарных заболеваний/ Э. Р. Гаспарян, А.В.Стреляева, С.С.Зуев [и др.] //Медицинская паразитология и паразитарные болезни. -2012.-№2. - С.36-39.

19. Абдиев, Ф.Т. К изучению патогенеза эхинококкоза, осложненного пециломикозом. /Ф.Т.Абдиев, Н.О.Мамышева, С.С.Зуев [и др.]. //Медицинская паразитология и паразитарные болезни. - 2012.- №3. -С.26. -30.

20. Гаспарян, Э.Р. Испытание противопециломикозной активности гомеопатических препаратов при экспериментальнгой пециломикозе белых мышей. Гомеопатический ежегодник /Э.Р.Гаспарян, А.В.Стреляева., С.С.Зуев [и др.] //Сборник материалов XXII Московской международной гомеопатической конференции. - Москва, 2012. С. 119-121

21. Стреляева, A.B. Лечение детей, оперированных по поводу эхинококкоза печени, осложненного пециломикозным миокардитом/ A.B.

Стреляева, А.Т.Сагиева, .....С.С. Зуев [и др. ] //Медицинская

паразитология и паразитарные болезни. - 2012 . -№1.. - С..44. -45.

22. Стреляева, A.B. К эпизоотологии и эпидемиологии эхинококкоза и пециломикоза/ А.В.Стреляева, Ф.Т.Абдиев, С.С.Зуев[и др.]. // Журнал «Медицинская паразитология и паразитарные болезни. - 2012. -№3. - С.21 -25.

23. Зуев С.С. Гомеопатический препарат Millefolium-Petroleum в остановке кровотечений /С.С.Зуев // Гомеопатический ежегодник. Сборник материалов XXI11 Московской международной гомеопатической конференции. Москва, 2013. -С.117-120.

24. Стреляева, A.B. Способ размножения каракурта в лабораторных условиях и получение из его яда первой российской матрицы для изготовления гомеопатических препаратов с антипаразитарной активностью /А.В.Стреляева, Э.Р. Гаспарян, А.Т.Сагиева, С.С.Зуев [и др.]//Медицинская паразитология и паразитарные болезни. - 2012. -№2. - С.40 -45.

25. Стреляева, A.B. Сравнительный хроматографический анализ углеводородного экстракта листьев мяты перечной, эфирного масла мяты и настойки мяты перечной /A.B.Стреляева, С.С.Зуев //Сеченовский Вестник-М., 2013,-№1(18).-С.75

26. Абдиев, Ф.Т. Лечение сочетанных пециломикозных миокардитов и гастритов гомеопатическими препаратами у больных эхинококкозом /Ф.Т Абдиев, Е.К. Чернышова, ... С.С.Зуев [и др.] //Человек и лекарство. Сборник материалов конгресса. - М., 2013. - С.275.

Заказ № 20-а/02/2014 Подписано в печать 07.02.2014 Тираж 100 экз. Усл. п.л. 1,2

ООО "Цифровичок", тел. (495) 649-83-30 www.cfr.ru; е-таИ:zak@cfr.ru