Автореферат и диссертация по медицине (14.04.02) на тему:Изучение биологически активных веществ липофильной фракции (углеводородного экстракта) листьев шалфея и ее фармакологической активности

На правах рукописи

Щеглова Татьяна Алексеевна

ИЗУЧЕНИЕ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ ЛИПОФИЛЬНОЙ ФРАКЦИИ (УГЛЕВОДОРОДНОГО ЭКСТРАКТА) ЛИСТЬЕВ ШАЛФЕЯ И ЕЕ ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ

14.04.02- фармацевтическая химия, фармакогнозия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Москва - 2014

2 ОКТ 2014

005552961

Диссертационная работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М. Сеченова Министерства Здравоохранения Российской Федерации

Научный руководитель:

Стреляева Ангелина Вадимовна - доктор фармацевтических наук, доцент ГБОУ ВПО Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М. Сеченова Министерства Здравоохранения Российской Федерации

Официальные оппоненты:

Патуднн Александр Васильевич - доктор фармацевтических наук, профессор, вице - президент Российского гомеопатического общества.

Фурса Николай Сергеевич - доктор фармацевтических наук, профессор, заведующий кафедрой фармакогнозии и фармацевтической технологии ГБОУ ВПО «Ярославская государственная медицинская академия» Минздрава России.

Ведущая организация:

ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт лекарственных и ароматических растений Россельхозакадемии.

Защита состоится «19» ноября 2014г. в 14-00 часов на заседании Диссертационного совета Д.208.040.09 при ГБОУ ВПО Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М. Сеченова Министерства Здравоохранения Российской Федерации по адресу: 119019, г. Москва, Никитский бульвар, д. 13

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГБОУ ВПО Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М. Сеченова по адресу. 117997, г. Москва, Нахимовский проспект, д.49 и на сайте ГБОУ ВПО ПМГМУ им. И.М. Сеченова www.mma.ru

Автореферат разослан «_»_2014 г.

Ученый секретарь

Диссертационного совета Д.208.040.09,

доктор фармацевтических наук, профессор Демина Наталья Борисовна

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. В настоящее время все больший интерес вызывают средства природного происхождения. Особое внимание привлекает получение и исследование углеводородных экстрактов из лекарственного растительного сырья (ЛРС).

Известны углеводородные экстракты из плодов грецкого ореха, мяты перечной, тысячелистника обыкновенного и доказана их фармакологическая активность. В выше перечисленных растительных экстрактах используются различные фракции нефти. Керосиновый экстракт из плодов грецкого ореха молочно- восковой зрелости успешно применяется в народной медицине для лечения радикулита, простатита, опухолей (Кашницкий С., 1990). Академик А.Г. Маленков с соавторами (1995) запатентовали препарат тодикамп, полученный из плодов грецкого ореха с помощью нефтяной фракции ленефр.

В настоящее время в ассортименте аптек используются лекарственные препараты, полученные на основе определенных фракций нефти. Так, например, вазелиновое масло или парафин жидкий — фракция нефти, получаемая после отгонки керосина, применяется внутрь при хронических запорах; нефть нафталанская рафинированная, мазь нафталанная, линимент нафталанской нефти, мазь серно-нафталанная, мазь цинко-нафталанная с анестезином, паста цинко-нафталанная, применяемые в качестве смягчающего, дезинфицирующих и болеутоляющих средств, парафин и вазелин - в качестве основ для мазей (Машковский М.Д.,1999; Харкевич Д.А.,2002). В России широко используется импортный гомеопатический препарат петролеум, обладающий широким спектром фармакологической активности (Патудин А.В. с соавторами (2006).

Работа посвящена изучению углеводородного (петролеумного) экстракта из высушенных листьев шалфея лекарственного^а/у/а officinalis L.), в котором в качестве экстрагента и, вместе с тем, терапевтически активного начала использовался петролеум. Так как петролеум обладает противовоспалительным, противогрибковым, противопаразитарным действием, а листья шалфея - противовоспалительным действием, то можно прогнозировать фармакологическую активность углеводородных экстрактов, полученных из листьев шалфея, для создания лекарственных препаратов на его основе. Таким образом, изучение биологически активных веществ и фармакологической активности углеводородного (петролеумного) экстракта листьев шалфея для скрининга новых препаратов является чрезвычайно актуальной задачей.

Степень разработанности темы исследования. Ранее изучались углеводородные (петролеумные) экстракты грецкого ореха, мяты перечной и тысячелистника обыкновенного. Углеводородные (петролеумные) экстракты из шалфея лекарственного до настоящего момента времени совершенно не изучены. Отсутствуют литературные данные о химическом составе и

фармакологической активности углеводородного экстракта шалфея. Недостаточно изучен химический состав растительного сырья - свежих листьев шалфея лекарственного. Не обоснованы преимущества использования свежих листьев шалфея лекарственного по сравнению с высушенным сырьем. Цель настоящего исследования

Целью настоящей работы является изучение биологически активных веществ и фармакологической активности липофильной фракции листьев шалфея.

Для выполнения поставленной цели необходимо решить следующие задачи:

1. Изучить литературу по химическому составу, по фармакологической активности, а также методам анализа основных действующих веществ листьев шалфея.

2. Получить спиртовое извлечение и эфирное масло из свежего и высушенного ЛРС шалфея, настойку гомеопатическую матричную и углеводородный (петролеумный) экстракт из листьев шалфея и провести их анализ.

3. Изучить физико-химические свойства углеводородного (петролеумного) экстракта из листьев шалфея и петролеума (экстрагента), полученного на основе авиационного керосина.

4. Разработать оптимальные условия хроматографирования в тонком слое (ТСХ) углеводородного экстракта листьев шалфея.

5. Провести исследования углеводородного экстракта листьев шалфея и петролеума как экстрагента методами хромато-масс-спектрометрии и спектрофотометрии.

6. Изучить с использованием модельного метода антиоксидантную активность соединений, содержащихся в листьях шалфея.

7. Изучить фармакологическую активность углеводородного экстракта листьев шалфея и препаратов, полученных на его основе

Решение задач осуществлялось путем обобщения данных литературы и проведения экспериментальных исследований.

Научная новизна работы. Впервые получены петролеумные (углеводородные) экстракты из листьев шалфея лекарственного. Описаны физические свойства полученных экстрактов. Методом хромато-масс-спектрометрии изучен состав упомянутых выше экстрактов. Проведен сравнительный анализ химического состава липофильных фракций -спиртового извлечения, эфирного масла и петролеумного экстракта листьев шалфея. Предложены условия для проведения анализа изучаемых фракций методом ТСХ.

Впервые получена мазь, содержащая углеводородный экстракт из листьев шалфея лекарственного, и изучена ее фармакологическая активность irt vivo. Изучен качественный состав петролеума, используемого в качестве экстрагента. Получены гранулы гомеопатизированные и мазь гомеопатизированная для лечения кожного пециломикоза.

Теоретическая значимость работы. Доказана на примере шалфея лекарственного эффективность использования петролеума как нового экстрагента при получении препаратов из ЛРС. Методом хромато-масс-спектрометрии доказана изменчивость качественного состава компонентов эфирного масла, полученного как из свежего и высушенного сырья листьев шалфея лекарственного, так и из сырья, хранившегося длительное время. Представленный в работе экспериментально-практический материал может служить теоретической базой для исследования и создания лекарственных препаратов на основе углеводородного (петролеумного) экстракта из листьев шалфея лекарственного.

Практическая значимость работы. На основе проведенных исследований разработан проект фармакопейной статьи (ФС) на Петролеум и проект ФС на свежие листья шалфея лекарственного. Разработанные проекты переданы для утверждения в установленном порядке. Материалы исследования внедрены в учебный процесс кафедры фармакогнозии Первого МГМУ им. И.М.Сеченова (Акт внедрения).

Методология и методы исследования. Объектами исследования служили углеводородный экстракт листьев шалфея из высушенного сырья, спиртовые извлечения и эфирное масло, полученные из свежих и высушенных листьев шалфея, а также настойка гомеопатическая матричная из высушенного сырья. При выполнении работы использованы методы хромато-масс-спектрометрии, хроматографии в тонком слое сорбента, спектрофотометрии и амперометрии. Статистическую обработку результатов исследований проводили в соответствии с ГФХ1.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 18 печатных работ, из них 4 статьи в журналах рекомендуемых ВАК и 1 патент РФ. Степень достоверности результатов. Для проведения экспериментальных работ использовано современное сертифицированное оборудование; установлена воспроизводимость и правильность результатов исследований; сравнение полученных результатов с применением методов статистической обработки позволяет считать их достоверными.

Апробация работы. Основное положение диссертационной работы доложено на XXI, XXII, XXIII и XXIV Московской международной гомеопатической конференции «Развитие гомеопатического метода в современной медицине» (Москва, 2011-2014), на научной конференции одаренных студентов и молодых ученых в Самарканде (2011), на Итоговой Всероссийской студенческой научной конференции с международным участием «Татьянин День» (Москва, 2012), на национальном Российском конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2010, 2013), на научно-практической конференции «Современные аспекты использования растительного сырья и сырья природного происхождения в медицине» (Москва, 2013,2014). Апробация диссертации прошла на кафедре фармакогнозии фармацевтического факультета ГБОУ ВПО Первый МГМУ имени И.М.Сеченова Минздрава России (Москва, 2014).

Личный вклад автора. При непосредственном участии автора были определены цели и задачи исследования, разработаны методологические подходы к их выполнению; был проведен анализ научной и популярной литературы. Диссертант принимал непосредственное участие в работе по идентификации и определению количественного содержания основных биологически активных соединений в исследуемом объекте. Автору принадлежит ведущая роль в проведении экспериментальных исследований, статистической обработке и анализе полученных результатов, написании публикаций и нормативных документов.

Соответствие диссертации паспорту научной специальности. Научные положения диссертационной работы соответствуют формуле специальности 14.04.02 — фармацевтическая химия, фармакогнозия (фармацевтические науки). Результаты проведенного исследования соответствуют области исследования специальности, конкретно пунктам 2 и 3 паспорта фармацевтическая химия, фармакогнозия.

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтической науки. Диссертационная работа выполнена в соответствии с тематикой и планом: «Развитие научных и научно-методических основ, базовых и инновационных подходов при разработке, внедрении и применении лекарственных средств». Номер государственной регистрации 01201261653. Основные положения, выносимые на защиту

• Результаты исследований качественного состава углеводородного экстракта из листьев шалфея лекарственного и экстрагента.

• Результаты исследований качественного и количественного состава терпеноидов в настойке гомеопатической матричной, полученной из высушенных листьев шалфея лекарственного.

• Результаты исследований качественного и количественного состава эфирного масла, полученного из свежих и высушенных листьев шалфея лекарственного.

• Результаты исследований качественного и количественного состава спиртовых извлечений из свежих и высушенных листьев шалфея лекарственного.

• Результаты исследования фармакологической активности углеводородного (петролеумного) экстракта из листьев шалфея и лекарственных препаратов, полученных на его основе.

Объем и структура диссертации. Работа изложена на 188 страницах машинописного текста, содержит 34 таблицы и 38 рисунков, приложение 1,2,3. Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, 6-ти экспериментальных глав, библиографии из 207 наименований, из которых 72 на иностранных языках. Содержание работы

Объектами исследования являются: углеводородный экстракт листьев шалфея лекарственного, полученный из высушенного сырья; настойка гомеопатическая матричная листьев шалфея лекарственного, полученная из

высушенного сырья; спиртовые извлечения из листьев шалфея лекарственного, полученные из высушенного и свежего сырья; эфирное масло, полученное различными методами гидродистилляции из свежего, высушенного и сырья, длительно хранившегося; экстрагент - петролеум (фракция нефти, перегоняемая в интервале температур 180-300°С), полученный на основе авиационного керосина; препараты, полученные на основе углеводородного экстракта из листьев шалфея лекарственного.

Методы исследования. Газовая хромато-масс-спектрометрия осуществлена на приборе «Agilent Technologies», состоящем из: 1) газового хроматографа 7890 (колонка НР-5, 50 мх 320 мкм * 1.05 мкм) и 2) масс -селективного детектора 5975 С с квадрупольным масс-анализатором; масс-спектрометрический анализ - при энергии ионизирующих электронов 70 эВ; регистрация масс-спектров в положительных ионах в диапазоне (m/z) от 20 до 450 со скоростью 2,5 скан/сек. Программное обеспечение - ChemStation Е 02.00. Идентификация компонентного состава (качественный анализ) проведена по библиотеке полных масс-спектров NIST-05 и соответствующим значениям хроматографических линейных индексов удерживания (Г). Относительное содержание (%) компонентов смеси (количественный анализ) вычислено из соотношения площадей хроматографических пиков. Спектрофотомерия выполнена на однолучевом спектрофотометре «Hitachi U 1900». Изучение воздействия ультразвука проведено с использованием ультразвуковой ванны «CITIZEN SW 1500». Антиоксидантная активность соединений, содержащихся в листьях шалфея лекарственного изучена посредством модельного метода, предусматривающего применение амперометрии, на установке «Цвет Яуза-01-АА».

Физико-химические свойства углеводородного экстракта листьев шалфея и петролеума. Изучен петролеум как фракция нефти российских месторождений. По своим физико-химическим свойствам рассматриваемая фракция представляет собой бесцветную прозрачную жидкость (с плотностью 0.719 г/см3) с резким характерным запахом, практически не смешивающуюся с водой и хорошо смешивающуюся с органическими растворителями (бензолом, толуолом, хлороформом, этилацетатом).

Углеводородный экстракт из листьев шалфея лекарственного представляет собой прозрачную жидкость темно-зеленого цвета с резким специфическим запахом. Сухой остаток петролеумного экстракта составил 1.32±0.07%. Кислотное число углеводородного экстракта составило Кч(э) = 1,82±0,03; Петролеума Кч(п) = 0,71±0,03. Плотность петролеума составила 0,719±0,001 г/см3; углеводородного экстракта листьев шалфея - 0,7919±0,001 г/см3; спиртового извлечения из высушенных листьев шалфея - 0,8290±0,001 г/см3; спиртового извлечения из свежих листьев шалфея 0,8156±0,001 г/см3.

Элементный анализ образца петролеума показал следующее относительное содержание (%) элементов: С - 85.81; Н - 14.24; S и N - в следовых количествах.

Проведены исследования петролеума как многокомпонентной смеси углеводородов методом ИК-спектроскопии (рис.1). В полученных спектрах набор полос поглощения характеризует различного типа валентные и деформационные колебания связей в молекулах, что свидетельствует о богатой соединениями смеси, состоящей из углеводородов, относящихся к различным классам.

Рис.1. ИК-спектры петролеума (экстрагента)

Так, например, интенсивные полосы поглощения приу 2956и 2864 см характеризуют соответственно антисимметричные и симметричные валентные колебания связи С-Н в СН3-группе насыщенных углеводородов. Интенсивные полосы поглощения npnv 2924 и 2856 с обусловлены, соответственно, антисимметричными и симметричными валентными колебаниями связи С-Н в СН2-группе насыщенных углеводородов. Полоса поглощения приу 2924см кроме того, характеризует валентные колебания связи С-Н метальных заместителей как в moho-, так и в дизамещённых бензолах. Полосы поглощения средней интенсивности приу 1460и 1380 см обусловлены, соответственно, антисимметричными и симметричными деформационными колебаниями связи С-Н в СН3-группе насыщенных углеводородов как нормального, так и изостроения. Наконец, полосу поглощения средней интенсивности приу 668 см"1 можно считать характеристикой внеплоскостных деформационных колебаний связи Cj,-H с участием внеплоскостных колебаний углеродного скелета.

В ходе исследования методом тонкослойной хроматографии (ТСХ) достигнута максимальная эффективность разделения компонентов углеводородного экстракта из высушенных листьев шалфея лекарственного при хроматографировании на пластинках «8огЬШ» в системе растворителей бензол-этилацетат (7:3) с применением детектирующего агента - 1%-ного раствора я-диметиламинобензальдегида в 75%-ном растворе серной кислоты. Детектировано 10 зон адсорбции, одна из которых соответствовала стандартному образцу 1,8-цинеола. В спиртовом извлечении из листьев шалфея методом ТСХ идентифицированы дубильные вещества - галловая кислота. Соединения из класса флавоноидов - кверцетин — идентифицированы как в углеводородном, так и в спиртовом извлечениях из листьев шалфея. При проведении сравнительного анализа спиртового и углеводородного экстрактов из высушенного и свежего сырья шалфея лекарственного методом ТСХ установлено, что качественный состав компонентов, присутствующих в углеводородном экстракте в целом идентичен таковому в спиртовом извлечении из высушенных листьев шалфея лекарственного. Хромато-масс-сиектрометрическое исследование экстрагента, спиртовых и углеводородных извлечений из листьев шалфея лекарственного, настойки гомеопатической матричной. Методом газовой хромато-масс-спектрометрии (рис.2) идентифицированы компонентные составы петролеума как экстрагента, углеводородного и спиртовых извлечений из листьев шалфея лекарственного, настойки гомеопатической матричной.

Сигнал детектора

Время удерживания, мин.

Рис.2 Хроматограмма хромато-масс-спектрометрии петролеума

Так, в составе петролеума-экстрагента обнаружены более 175-ти индивидуальных соединений, из числа которых идентифицированы 160

9

компонентов, относящихся к различным классам углеводородов. Проведён анализ относительного количественного содержания (%) идентифицированных индивидуальных компонентов в петролеуме-экстрагенте. Кроме того, оценено суммарное относительное содержание (%) тех групп компонентов петролеума-экстрагента, которые можно отнести к различным классам углеводородов. Среди компонентов петролеума-экстрагента по относительному составу (%) количественно преобладают следующие группы: н-апканы (31.90), арены (29.50) и разветвлённые шо-алканы (26.45); в меньшем относительном количестве представлены цикланы (9.95) и алкены (2.20).

Так как в гомеопатии используется преимущественно свежее сырье, а в аллопатии высушенное сырье, то необходимо обосновать выбор оптимального вида сырья для получения углеводородного экстракта из листьев шалфея лекарственного. Для этого проведен сравнительный анализ спиртовых извлечений из высушенных и свежих листьев шалфея лекарственного. Результаты исследований, касающиеся сравнительного (качественного и количественного) анализа компонентного состава спиртовых извлечений, полученных из высушенных и свежих листьев шалфея лекарственного, представлены в табл.1.

Как видно из приведённых в таблице 1 данных, преобладающим компонентом как в свежем, так и в высушенном сырье является дитерпеноид лабданового типа - лабда-8(20),14-диен-13-ол. Кроме того, в обоих видах сырья обнаружены и другие терпеноиды лабданового типа: лабда-8(20),12,14-триен и лабда-14-ен-8,13-диол (склареол). Следует отметить, что соединения, такие как 4-терпинеол, а -терпинеол, фитол, леден оксид, аромадендрен оксид, аромадендрен, тимол, миртенол, р-пинен, а-туйен, мирцен, валенцен, а также 4,4,7а-триметил-5,6,7,7а-тетрагидро-1-бензофуран-2(4//)-он в свежем сырье находятся в следовых количествах либо отсутствуют, тогда как в высушенном сырье отмечается достаточно высокое их содержание. Кроме того, в высушенном сырье ощутимо увеличивается по сравнению со свежим относительное содержание (%) лимонена (от 0.27 до 1.28), 1,8-цинеола (от 3.44 до 6.64), а-пинена (от 0.17 до 4.99), камфоры (от 9.13 до 14.86). Таким образом, качественный и, в особенности, количественный составы летучих компонентов в высушенном и свежем сырье не являются идентичными, хотя они и близки по содержанию ряда компонентов. Довольно значительное уменьшение относительного содержания нескольких из указанных выше компонентов смеси, по-видимому, связано с биохимической окислительной трансформацией и образованием их окисленных форм в процессе высушивания и хранения сырья.

Таблица 1. Сравнительный анализ (качественный и количественный) компонентного состава спиртовых извлечений из высушенного и свежего сырья - листьев шалфея лекарственного

Соединение, Структурная формула Свежее сырье Высушенное сырье Соединение, Структурная формула Свежее сырье Высушенное сырье

% %

I 2 3 1 2 3

О- 2-Фуральдегид 0.16 — 1,8-Цинеол 3.44 6.64

2-Фу рил метанол 0.22 — Х> т-Терпинен 0.31 0.20

а-Пинен 0.17 4.99 р-Линалоол 0.29 0.63

¿г а-Фенхен 0.46 3.90 а-Туйоны (стереоизомеры) 11.38 1.28 21.57 5.56

Р-Пинен — 0.68 НООС-^. СООК1 Моноэтил-сукцинат следы -

Н^ а-Туйен — 0.08 Ъ- Камфора 9.13 14.86

л-Цимол 0.17 0.76 «Зг Туйол - 0.39

к> Лимонен 0.27 1.27 Ъ- Борнеол 1.13 2.29

4-Терпинеол следы 0.22 ЙУ- Валенцен следы 0.12

а-Терпинеол следы 0.11 ХХ^ 5-Кадинен — 0.02

Спектрофотометрическое исследование экстрактов из свежих и высушенных листьев шалфея лекарственного. В одну из задач настоящего исследования входило сравнительное изучение методом абсорбционной спектроскопии - спектрофотометрии - спиртовых извлечений (из высушенного и свежего сырья) и углеводородного (из высушенного сырья) экстракта, а также эфирного масла шалфея и петролеума-экстрагента.

В спектрах спиртовых извлечений из высушенных и свежих листьев шалфея лекарственного (рис. 3 а) и б)) зарегистрировано несколько максимумов поглощения прйл тах (нм) 286 и 328 с соответствующими величинами абсорбции (Abs) 1.57 и 1.65, что, по-видимому, можно связать с присутствием соединений, относящихся к классу флавоноидов; максимумы поглощения при Хтш (нм) 406, 534, 606 и 664 с соответствующими величинами абсорбции (Abs) 0.50, 0.05, 0.04 и 0.18, которые свидетельствуют о присутствии родственного хлорофиллу пигмента — феофитина а. Важно отметить, что спектральные данные, полученные для спиртовых извлечений как из свежего, так и из высушенного сырья - листьев шалфея - содержат идентичные наборы максимумов поглощения.

извлечений из высушенных (а) и свежих (б) листьев шалфея лекарственного

В спектре углеводородного экстракта шалфея при разбавлении спиртом в соотношении 1:250 наблюдаются только два максимума поглощения Хтах (нм), относящихся к петролеуму-экстрагенту: 220 и 270 с соответствующими величинами абсорбции (Abs) 3.75 и 2.35. Тогда как в спектре более концентрированного раствора, при разбавлении спиртом в соотношении 1:100, удаётся зарегистрировать четыре максимума поглощения при A^ax (нм) 230, 258, 265 и 400 с соответствующими величинами абсорбции (Abs) 3.9, 0.36, 3.8 и 0.13. Причём в спектре углеводородного извлечения из листьев шалфея при разбавлении спиртом в соотношении 1:100 с вычетом спектра петролеума зарегистрировано три максимума поглощения nj&i max (нм) 234, 257, 267 с соответствующими значениями абсорбции (Abs) 0.69, 0.36, 0.34 (рис. 4а).

шалфея (а) и эфирного масла шалфея лекарственного (б)

Спектральная картина эфирного масла шалфея представлена максимумами поглощения при Х.тах (нм) 224 с величиной абсорбции (Abs) 4.58, а также - при >чпах (нм) 285 и 328 с величинами абсорбции (Abs) 0,7 и 0,8 соответственно (рис. 46).

Сравнительный анализ эфирного масла, полученного из листьев шалфея лекарственного с использованием различных методов гидродистилляции.

В фокусе исследований этой части работы находилась задача, касающаяся сравнительного изучения компонентного состава эфирного масла из листьев шалфея лекарственного, полученного различными методами гидродистилляции. В процессе изучения состава образцов эфирного масла, полученного двумя способами гидродистилляции - по методу Гинзберга и методу Кпевенджера, - проведена идентификация и сравнительная оценка относительного (%) компонентного состава эфирного масла по более чем 90 соединениям. Совокупность идентифицированных компонентов эфирного масла условно разбита на две группы: группа I — соединения, относящиеся к определённому биосинтетическому типу терпеноидов; группа II - соединения, которые не относятся к классу терпеноидов (неизопреноидные компоненты).

Из класса терпеноидов (группа I) в составе эфирного масла шалфея лекарственного идентифицированы следующие компоненты.

Монотерпеноиды представлены соединениями, относящимися к биосинтетическим типам туйана, ментана, пинана, камфана и изокамфана, изоборнилана и фенхана, метилированного циклогексана, ациклических монотерпеноидов. Сесквитерпеноиды представлены соединениями, входящими в биогенетическое древо гермакрана и относящимися к биосинтетическим типам кадинана, эудесмана, аромадендрана, бурбонана; входящими в биогенетическое древо гумулана, а также - соединениями ациклического строения. В ряду дитерпеноидов идентифицированы соединения, относящиеся к биосинтетическому типу лабдана. При сравнении результатов в отношении двух методов гидродистилляции, использованных для получения эфирного масла, в анализируемых образцах 1 (гидродистилляция по методу Гинзберга) и 2 (гидродистилляция по методу Клевенджера), выявлены различия, касающиеся, прежде всего, относительного количественного содержания (%) ряда изопреноидных компонентов. Так, например, такие различия в образцах 1 и 2 при сравнительном анализе относительного количественного содержания (%) наблюдались для совокупности компонентов, относящихся к биосинтетическому типу туйана - соответственно 26.64 и 33.74. В частности, найдено, что для стереоизомерных а- и ß -туйонов (/ соответственно 1133 и 1144) сравнительные значения их совокупного относительного количественного содержания (%) составили соответственно 24.93 и 32.60. Сравнительные значения относительнго совокупного количественного содержания (%) компонентов, относящихся к биосинтетическому типу аромадендрана, составили соответственно 9.81 и 3.20; в частности, при сравнении относительного количественного содержания (%) в образцах 1 и 2 для 1,1,4,7-тетраметил-декагидро-1//-циклопропа[е]азулен-4-ола

(как совокупности стереоизомерных форм — ледола и глобулола, — / соответственно 1662 и 1669) значения составили соответственно 9.25 и 2.84. Наконец, в исследуемых образцах 1 и 2 эфирного масла выявлены различия, касающиеся относительного количественного совокупного содержания (%) дитерпеноидов биосинтетического типа лабдана - соответственно 5.15 и 2.17; в частности, для лабда-8(20),12,14-триена - биформена (/ 1925) -соответственно 0.07 и 0.38; лабда-8(20),14-диен-13-ола (/ 1981) -

соответственно 4.75 и 1.70, а также лабда-14-ен-8,13-диола - склареола (/ 1994) - соответственно 0.33 и 0.09.

Таким образом, в результате проведённого сравнительного анализа компонентного состава эфирного масла шалфея лекарственного, полученного посредством двух способов гидродистилляции — по методу Гинзберга и методу Клевенджера, - убедительно показано, что указанные методы гидродистилляции не являются равнозначными. Различия, наблюдаемые в относительном количественном содержании (%) ряда компонентов в исследованных образцах эфирного масла, по-видимому, являются следствием окислительных и деструктивных процессов, протекающих при гидродистилляции.

Сравнительный анализ эфирного масла, полученного из листьев шалфея лекарственного различного срока хранения. В этой части исследования выполнялась задача сравнительного изучения компонентного состава образцов эфирного масла, полученного из свежих и высушенных листьев шалфея лекарственного, а также сырья, хранившегося длительное время. Изучен качественный и относительный (%) количественный состав образцов эфирного масла, полученного из свежего и высушенного сырья, а также сырья, подвергшегося длительному хранению. Идентифицировано и проведено сравнение по более чем 110-ти соединениям многокомпонентной смеси. Найдено, что качественный состав образцов эфирного масла, полученного из свежего, высушенного сырья и сырья, хранящегося в течение длительного времени в целом идентичен. Однако в образцах эфирного масла, полученного из высушенного сырья, в большом числе случаев наблюдается увеличение относительного (%) содержания некоторых компонентов, содержащих кетогруппу или ароматическое ядро, например, такие как стереоизомерные туйоны, камфора, а-камфоленаль, 5-метил-2-(1-метилэтилиден)-4-гексеналь, а также /7-цимол, тимол, карвакрол и 6-аллил-4-метокси-1,3-бензодиоксол (миристицин). При этом в эфирном масле из высушенного сырья довольно часто наблюдается снижение относительного (%) содержания компонентов, содержащих гидроксильную, эпоксидную функции или О-ацетильную группу, а также некоторых компонентов, относящихся к moho-, би- и трициклическим терпеноидов, претерпевающих окисление двойных связей, например, линалоол, линапилацетат, борнеол и стереоизомерные борнилацетаты, 5-кетоборнил-ацетат, стереоизомерные туйолы, цис-сабинол, 4-терпинеол, а -терпинеол, аромадендрен оксид, (З-кариофиллен оксид, 1,5,5,8-тетраметил-12-оксабицикло-[9.1.0]-додека-3,7-диен, а фкже -пинен, а-терпинен, т -терпинен,

аромадендрен, а -копаен, 8 -кадинен, 1-изопропил-7-метил-4-метилен-1,2,3,4,4а,5,6,8а-октагидронафталин, а- и (З-кариофиллены. Примечательно, что в эфирном масле, полученном из сырья, подвергшегося длительному хранению, наблюдается появление сесквитерпенового лактона эудесманового типа — эудесма-5,11(13)-диен-8,12-олид, образование которого можно объяснить процессами окислительной циклизации.

Следует отметить, что сравнительное спектрофотометрическое исследование образцов эфирного масла шалфея лекарственного, полученного из сырья с различными сроками хранения, показало отсутствие различий в спектрах поглощения. Так, во всех проанализированных образцах эфирного масла зарегистрированы 2 максимума поглощения - при Хл™* (нм) 273 и 235.

Согласно полученным данным хромато-масс-спектрометрического и спектрофотометрического исследования спиртовых извлечений и эфирного масла листьев шалфея можно сделать вывод о целесообразности использования для получения петролеумного (углеводородного) извлечения высушенного сырья листьев шалфея лекарственного.

В углеводородном экстракте из листьев шалфея лекарственного методом хромато-масс-спектрометрии идентифицировано более 100 компонентов. Среди идентифицированных - следующие 6 соединений относятся к классу терпеноидов: 1,8-цинеол, а-туйон, камфора, борнеолр -кариофиллен, лабда-8(20), 14-диен-13-ол (табл.2).

Таблица 2. Терпеноидные соединения, идентифицированные в углеводородном экстракте из листьев шалфея ___

нпп Соединение Структура Хрома-тографи-ческий линейный индекс удерживания, /(ЯТ) нпп Соединение Структура Хрома-тографи-ческий линейный индекс удерживания, /(ЯТ)

1 1,8-Цинеол 27.78 4 Борнеол 32.66

2 а-Туйоны (стереоизомеры) 30.43 30.77 5 р-Карио-филлен ¿X 40.69

3 Камфора 32.08 6 Лабда-8(20), 14-диен-13-ол 61.72

Вероятно, что экстракции петролеумом подвергается значительно большее число соединений терпеноидного ряда, но их масс-спектрометрическая идентификация с требуемой высокой степенью достоверности (даже при хроматографировании на капиллярной колонке в условиях достаточно эффективного разделения компонентов смеси) сильно затруднена по причине подавляющего количественного преобладания углеводородов из состава экстрагента.

Ниже - на рис. 5 и 6 - даны примеры масс-спектрометрической идентификации некоторых терпеноидных компонентов, найденных в углеводородном экстракте из листьев шалфея.

(а)

41 55

147 181

I.......I.......I......|1

203 244

216

........... ■"'Г''...........................

10 30 50 70 80 110 130 150 170 190 210 230 250 270 290 310 (И Не) £ап 13014(61.724 тт) ¡п С:\_201» _14\_14\ 1402.11 ОМА.«

11290 301 313 327 341 355

(б)

и

П.М 1

х

110 130 150 170

210 230 250 270 290 310 330 350 370

(тат№) 1-№рМЬа1епергорапо1, ¿-е1Ьепук1есаЬус1го-д.5.5,8а4е1гате1Ьу1-2-те№у1епе-. [1Э{1а(Р?).4ай.аай]]-

Рис. 5. Масс-спектры компонента углеводородного экстракта (а) и стандартного

образца (база данных №8Т-05) лабда-8(20), 14-диен-13-ола (б)

(а)

№

50-

тАу,

139

125

I •11 ■ I! 'г

154

177 188 20/ 223

281 297 315 325333341

.....уНТ^РИц'!1!............................................№|1Ж|'!'П'|........и|'|'|N11|'|'Р|11111'|'||п111'|1111111'|п||'[У|У|I|П'Г|'||

10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140 150 160 170 180 190 2С0 210 220 230 240 250 260 270 280 290 300 310 320 330 340 • (Ш1е)йап5492(27778тт)пС:\_201СИ4\ ММИШШ (б)

ди

) 170 1ВО 190 200 2

Э 240 250 260 270 280 290 300 ЗЮ 320 330 340 350 ЗбО

Рис.6. Масс-спектры компонента углеводородного экстракта из листьев шалфея (а) и стандартного образца (база данных М8Т-05) 1,8-цинеола (б)

17

Изучение воздействия ультразвука на экстракцию. Изучено влияние на процесс экстрагирования ультразвука при воздействии его на петролеумные (рис.7) и гексановые экстракты, а также спиртовые извлечения из листьев шалфея лекарственного, которые подвергали воздействию акустических колебаний (с частотой 40 кГц, мощностью 40 Вт) в течение различного времени (10 и 60 минут). После удаления растворителей сухой остаток экстрактов и извлечений шалфея представляет собой аморфную субстанцию темно-желто-зеленого цвета, без запаха, практически не растворимую в воде, хорошо растворимую в спирте, ацетоне, хлороформе, толуоле и гексане.

Рис.7 Сравнительное спектрофотометрическое изучение углеводородного экстракта, подвергнутого ультразвуковому воздействию с различной продолжительностью

Увеличение продолжительности воздействия в акустическом поле приводит к увеличению выхода (%) сухого остатка, причём сравнительно наиболее высокое его значение наблюдалось в случае спиртового извлечения. Изучение настойки гомеопатической матричной. Получена настойка гомеопатическая матричная и оценено ее качество согласно требованиям общей фармакопейной статьи «Настойки гомеопатические матричные» (ОФС 42-002705). Методом хромато-масс-спектрометрии в настойке гомеопатической матричной идентифицировано более 40 компонентов. Из числа идентифицированных соединений наиболее высокие и средние величины относительного содержания (%) имеют следующие: лабда-8(20),14-диен-13-ол (34.27), а-туйоны (сумма стереоизомеров, 9.90), ледол (8.40), этиллиноленат (5.15), этилпальмитат (5.14), камфора (4.64), этиллинолеат (4.00$ -ка-риофиллен (3.86), а-кариофиллен (3.44), 1,8-цинеол (2.45), борнеол (2.21), 3,5-дигидрокси-6-метил-2,3-дигидро-4#-пиран-4-он ( 1.67), 2-(7-гидрокси-3,3-диметил-4-оксо-7-винилбицикло[3.2.0]гепт-1-ил)-ацетальдегид (1-56), 5-(гидроксиметил)-2-фуральдегид (1.42), 4'-ги-дроксиацетофенон (1.12),

18

этилстеарат (0.78), 2-метокси-4-винилфенол (0.76), моноэтилсукцинат (0.72), 5-кетоборнилацетат (0.67); тогда как минорными оказались: 4,4,7а-триметил-5,6,7,7а-тетрагидро-1-бензофуран-2(4Н)-он (0.03), а-терпинеол (0.06), лимонен (0.08), 8-кадинен (0.13), 4-терпинеол (0.15), я-цимол (0.21), 2,4-дигидрокси-2,5-диметил-3(2Я)-фуранон (0.24), 4-ацетил-2-метоксифенол (0.30) и валенцен (0.35).

Изучение антиоксидантной активности шалфея лекарственного. При

использовании модельного метода изучена антиоксидантная активность соединений, содержащихся в листьях шалфея лекарственного. Осуществлено определение суммарного содержания природных антиоксидантов (АО) в экстрактах листьев шалфея лекарственного посредством амперометрического метода. Установлено, что суммарная концентрация (мг/г) АО (по галловой кислоте) в экстрактах из листьев шалфея лекарственного существенно варьируется в зависимости от состава экстрагента и температурного режима экстракции в диапазоне значений от 4.96 до 19.64 (рис.8).

1

а 1. вода, 20°С

в 2. этанол, 70% 20°С

□ 3. этанол, 96%, 20°С

□ 4.вода, 95°С

■ 5.этанол, 96%,

75°С □ б.этанол, 70% 85°С

Рис. 8. Суммарная антиоксидантная активность (суммарная концентрация АО, мг/г) извлечений из листьев шалфея лекарственного

Установлено, что наиболее высокие показатели антиоксидантной активности (суммарная концентрации АО) наблюдаются в извлечениях, где в качестве экстрагентов использованы: смесь вода-этанол (30:70) при температуре 85°С и вода без спиртового сорастворителя при температуре 95°С. Получение гомеопатизированного препарата на основе петролеумного экстракта шалфея. Согласно методике, изложенной в частной фармакопейной статье в Немецкой государственной фармакопее и в общей фармакопейной статье Российской Федерации «Гранулы гомеопатические» (ОФС 42-0023-04), нами получены гранулы гомеопатизированные СЗ и С6 на основе углеводородного экстракта из листьев шалфея и оценены некоторые показатели их качества.

Гомеопатизированная мазь на основе петролеумного (углеводородного) экстракта листьев шалфея. В результате теоретического анализа и экспериментальных исследований предложена гомеопатизированная мазь следующего состава: вазелин, глина голубая кембрийская, петролеумный

экстракт из листьев шалфея и эфирные масла (можжевельника, лаванды, герани).

Испытания противопециломикозной активности проведено на 25 цыплятах месячного возраста, лапки которых были поражены пециломикозом. Контрольную группу составило 10 цыплят, которых лечили мазью аллопатической (на основе петролеумного (углеводородного) экстракта листьев шалфея), 15 цыплят лечили гомеопатизированной мазью. Цыплята обеих групп выздоровели от кожного пециломикоза. Разница в сравниваемых группах была незначительна.

Аллопатическая мазь на основе петролеумного (углеводородного) экстракта листьев шалфея для лечения кожного пециломикоза.

Предложена мазь для лечения кожного пециломикоза, характеризующаяся тем, что она содержит 9.0-10.0 г петролеумного экстракта, полученного при настаивании в течение двух недель высушенных листьев шалфея лекарственного и петролеума (на основе авиационного керосина) в соотношении 1-4:5, и вазелина до 100.0. Испытания в отношении противопециломикозной активности проводили, сравнивая эффективности действия предложенной мази с низораловой мазью, используемой при кожном пециломикозе. Сравнение терапевтической эффективности мазей осуществлено на 60-ти аутбредных белых крысах-самцах массой 210 - 230 г.

В общей сложности у 39-ти крыс в эксперименте развился кожный пециломикоз. До начала лечения проведены гематологические и биохимические исследования крови животных. У крыс, заразившихся кожным пециломикозом, отмечено в крови уменьшение количества эритроцитов, гемоглобина, общего белка и лейкоцитов, увеличение количества эозинофилов, глюкозы, активности АлАТ, АсАТ, ЩФ.

Одну группу животных (17 крыс) лечили мазью на основе петролеумного (углеводородного) экстракта листьев шалфея, а другую группу (14 крыс) препаратом сравнения - низораловой мазью. В течение 30-ти дней ежедневно у 17-ти крыс смазывались мазью на основе петролеумного (углеводородного) экстракта листьев шалфея тонким слоем утром и вечером пораженные участки кожи. У всех животных, получавших лечение предложенной мазью, исчезли фиолетовые участки, и наступило выздоровление. Подобный эффект получен и при лечении группы из 14-ти крыс низораловой мазью. У животных нормализовались показатели крови в той группе, которую лечили мазью на основе петролеумного (углеводородного) экстракта листьев шалфея. Следует отметить, что в группе крыс, пролеченных низораловой мазью, не происходила нормализация показателей крови. Кроме того, найдено, что в отличие от низораловой мази мазь на основе петролеумного (углеводородного) экстракта листьев шалфея обеспечила воздействие не только на местный очаг инфекции, но и её очаги, которые развились в легких.

Эксперименты по изучению токсичности проведены на рандоинбредных белых крысах самцах (массой 210-220 г). Группы крыс составляли по 30 особей (по 10 особей на каждый срок обследования). Мазь на основе петролеумного

(углеводородного) экстракта листьев шалфея и чистый петролеумный экстракт из листьев шалфея наносились на выбритую поверхность кожи животных в количестве 0,2 г ежедневно в течение 30 дней. Площадь аппликации составляла 1 см2. В течение первых 14-ти дней эксперимента у подопытных крыс не было зарегистрировано отклонений от контроля по всем биохимическим показателям. Однако после 30-ти дневного воздействия петролеумного экстракта шалфея наблюдались обратимые признаки местно-раздражающего действия в виде гиперемии кожи и появления тонких корочек. При нанесении испытуемой мази такие явления носили единичный характер. При обследовании крыс после аппликации петролеумным экстрактом шалфея наблюдали изменения гематологических показателей (снижение цветового показателя и ускорение процессов свертывания крови). В группе крыс, которым наносилась испытуемая мазь, колебания гематологических и биохимических показателей не отличались от таковых в контрольных группах животных.

ВЫВОДЫ

1. Анализ литературных источников и нормативной документации показал, что, хотя листья шалфея и лекарственные препараты на его основе являются изученными и широко используемыми в фармации и медицине, углеводородный (петролеумный) экстракт листьев шалфея практически не изучен и является перспективным для создания лекарственных препаратов.

2. Сравнительный анализ спиртового извлечения из свежего и высушенного сырья шалфея лекарственного показал, что преобладающим компонентом как в свежем, так и в высушенном сырье является лабда-8(20),14-диен-13-ол. Также следует отметить, что соединения, такие как 4-терпинеол, а -терпинеол, фитол, леден оксид, аромадендрен оксид, аромадендрен, тимол, миртенолд -пинен, туйен, мирцен, валенцен, а также 4,4,7а-триметил-5,6,7,7а-тетрагидро-1-бензофуран-2(4//)-он в свежем сырье находятся в следовых количествах либо отсутствуют, тогда как в высушенном сырье отмечается достаточно высокое их содержание. Таким образом, целесообразно использовать для получения петролеумного (углеводородного) экстракта высушенное сырье листьев шалфея лекарственного. Анализ эфирного масла, полученного разными методами и хранившегося разные сроки показал наличие более 100 компонентов терпеноидной природы. В настойке гомеопатической матричной идентифицировано более 40 компонентов.

3. Установлено, что петролеумный экстракт из высушенных листьев шалфея лекарственного представляет собой прозрачную жидкость темно-зеленого цвета с резким специфическим запахом, хорошо смешивающуюся с гексаном, этиловым эфиром уксусной кислоты, хлороформом в соотношении 1:1 и плохо смешивающуюся с этиловым спиртом и водой очищенной в соотношении 1:1 Сухой остаток 1,32±0.07%. Кислотное число углеводородного экстракта составило Кч(э) = 0,71 ±0,03; углеводородного экстрагента -

0,7919±0,001 г/см3; плотность (г/см3) петролеума и углеводородного экстракта листьев шалфея составили 0.710±0.001 и 0.792±0.001 соответственно. Полученные данные ИК-спектроскопии могут быть использованы для идентификации препаратов на основе петролеума.

4. Максимальное разделение компонентов петролеумного экстракта из высушенных листьев шалфея лекарственного методом ТСХ достигнуто при хроматографировании на пластинках «БогЫП» в системе растворителей бензол-этилацетат (7:3) с детектирующим реагентом - 1%-м раствором п-диметиламинобензальдегида в 75%-м растворе серной кислоты. Детектировано 10 зон адсорбции, одна из которых соответствовала стандартному образцу 1,8-цинеола.

5. В составе исследуемого образца петролеума методом хромато-масс-спектрометрии идентифицированы более 160-ти индивидуальных соединений и проведена оценка относительного количественного содержания (%) как индивидуальных компонентов, так и суммарный состав групп компонентов, относящихся к различным классам углеводородов. Найдено, что количественно преобладающим в составе петролеума является класс н-алканов (31,90%). В углеводородном экстракте из листьев шалфея идентифицированы более 100 компонентов, 6 из которых относятся к терпеноидам: 1,8-цинеол, а-туйон, камфора, борнеол, (3 -кариофиллен, лабда-8(20), 14-диен-13-ол. Методом спектрофотометрии в спиртовых извлечениях из свежих и высушенных листьев шалфея обнаружен родственный хлорофиллу пигмент - феофитин а. Компоненты эфирного масла оказываются экранированы экстрагентом в углеводородном экстракте из листьев шалфея.

6. При использовании модельного метода изучена антиоксидантная активность соединений, содержащихся в листьях шалфея лекарственного. Осуществлено определение суммарного содержания природных антиоксидантов (АО) в экстрактах листьев шалфея лекарственного посредством амперометрического метода. Найдено, что суммарная концентрация АО в составе экстракта изменяется в зависимости от состава экстрагента и температурного режима процесса экстрагирования. Наиболее высокие показатели антиокидантной активности (суммарная концентрации АО) наблюдались в извлечениях, где в качестве экстрагентов использованы: смесь вода-этанол (30:70) при температуре 85 С и вода без спиртового сорастворителя при температуре 95 С.

7. Разработанные гомеопатизированная и аллопатическая мази на основе петролеумного (углеводородного) экстракта листьев шалфея показали противопециломикозную (противогрибковую) фармакологическую активность в экспериментах на крысах и цыплят. Полученные гранулы гомеопатизированные на основе углеводородного экстракта из высушенных

листьев шалфея соответствуют требованиям ОФС 42-0023-04 по разделам описание, распадаемость и количество гранул в 1 г.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Щеглова Т. А. Изучение физико-химических свойств петролеумного экстракта листьев шалфея //Проблемы экологии, здоровья, фармации и паразитологии: сборник научных трудов. -М. -2011. -С.49 -84.

2. Стреляева A.B., Гаспарян Э.Р., Прокина Е.С., Курилов Д.В., Зуев С.С., Щеглова Т.А. Сравнительное изучение физико-химических свойств и компонентного состава петролеума из нефти различных месторождений //Фармация. -2011. -№ 8. - С.20-23.

3. Щеглова Т.А. Хромато-масс-спектрометрическое исследование петролеумных и спиртовых извлечений из листьев шалфея //Проблемы экологии, здоровья, фармации и паразитологии: сборник научных трудов. -М. -2011. -С.84 -97.

4. Мазь для лечения кожного пециломикоза: пат. 2475245 Россия: МПК7 А 61 К 31/537/ Щеглова Т.А., Стреляева A.B., Курилов Д.В., Садыков В.М., Самылина И.А., Лазарева Н.Б.; заявитель и патентообладатель Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М.Сеченова министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации (ГБОУ ВПО Первый МГМУ им. И.М.Сеченова Минздравсоцразвития России) (RU).// Бюллетень № 5 от 20.02.2013.

5. Стреляева A.B., Ахмедов Ю.М., Гаспарян Э.Р., Лазарева Н.Б., Самылина И.А., Чебышев H.B., Ползиков В.В., Прокина Е.С., Курилов Д.В., Зуев С.С., Щеглова Т.А., Габченко А.К., Садыков В.М. Аминокислотный обмен при эхинококкозе, осложненном пециломикозом//Медицинская паразитология и паразитарные болезни. - 2011 . -№4. - С. 19 -23.

6. Курилов Д.В., Стреляева A.B., Ямсков И.А., Стрельцова Е.Д., Зубарева Н.Д., Самылина И.А., Прокина Е.С., Зуев С.С., Щеглова Т.А., Садыков В.М. Изучение химического состава петролеума и перспективность применения его лекарственных форм //Ж. Прикладная аналитическая химия. -2011.-№1(1). -С.54-63.

7. Самылина И.А., Стреляева A.B., Щеглова Т.А., Курилов Д.В., Кириченко Е.Б. Сравнительный анализ качественного состава эфирного масла в настойке матричной гомеопатической и в углеводородном экстракте из листьев шалфея лекарственного //Сборник материалов XXI Московской международной гомеопатической конференции. - Москва, 2011. С. 187-188.

8. Абдиев Ф.Т., Мамышева Н.О., Стреляева A.B., Гаспарян Э.Р., Щеглова Т.А., Зуев С.С., Мухитдинов Ш.М., Вахидова A.B. К изучению патогенеза эхинококкоза, осложненного пециломикозом//Медицинская паразитология и паразитарные болезни. - 2012 - №3. -С.26. -30.

9. Щеглова Т.А., Самылина И.А., Стреляева A.B., Курилов Д.В., Стрельцова Е.Д., Садыков В.М. Анализ углеводородного экстракта,

23

полученного из листьев шалфея лекарственного с использованием ультразвукового воздействия// Сборник материалов XXII Московской международной гомеопатической конференции. - Москва, 2012. С.232-233.

10. Щеглова Т.А., Курилов Д.В., Стреляева A.B. Изучение химического состава и антиоксидантной активности матричной настойки из листьев шалфея лекарственного// Фармация. -2012. -№3-С. -27-30.

11. Щеглова Т. А. Получение комплексного гомеопатического препарата на основе петролеума и шалфея лекарственного//Сборник тезисов итоговой Всероссийской студенческой научной конференции с международным участием «Татьянин день» и конкурса на лучшую студенческую научную работу. - М. 24-25 января, 2012. - С. 177-178.

12. Щеглова Т.А. Гомеопатический препарат Salvium-Petroleum в нормализации слюнотечения // Гомеопатический ежегодник. Сборник материалов XXIII Московской международной гомеопатической конференции. -М„ 2013.-С.220-221.

13. Курилов Д.В., Стреляева A.B., Щеглова Т.А, Зубарева Н.Д.. Сравнительный анализ эфирного масла, полученного из листьев шалфея лекарственного с использованием различных методов гидродистилляции //Гомеопатический ежегодник. Сборник материалов XXIII Московской международной гомеопатической конференции. - М., 2013. -С.175-176.

14. Стреляева A.B., Щеглова Т.А., Землянская JI.A., Курилов Д.В., Еременко С.А. Гомеопатическая мазь Petroleum и Salvia officinalis для лечения кожного пециломикоза //Гомеопатический ежегодник. Сборник материалов XXIII Московской международной гомеопатической конференции. -М., 2013. — С.217-218.

15. Ковалева Т.Ю., Щеглова Т.А., Тращенкова Д.А. К вопросу стандартизации листьев шалфея лекарственного, используемых в гомеопатии // Гомеопатический ежегодник. Сборник материалов XXIV Московской международной гомеопатической конференции. -М., 2014. -С.158-159.

16. Стреляева A.B., Щеглова Т.А., Курилов Д.В., Сапожников С.А. Сравнительный анализ эфирного масла, полученного из свежих и высушенных листьев шалфея лекарственного// Гомеопатический ежегодник. Сборник материалов XXIV Московской международной гомеопатической конференции. -М„ 2014. -С. 167-168.

17. Щеглова Т.А., Садыков В.М., СтреляеваА.В., Цуканов Ю.В. Шалфейно-петролеумная мазь для лечения кожного пециломикоза цыплят // Ж. Сеченовский вестник-2014—№ 1,- С.145-146.

18. Kurilov D.V., Sazhina N.N., Misin V.M., Scheglova Т.А. Comparative Analysis of the Natural Phenolic Antioxidant Content in Extracts of Medicinal Plants// International Conference «Renewable Wood and Plant Resources: Chemistry, Technology, Pharmacology, Medicine». - Russia, Saint-Peterburg, June 21-24 2011, P. 112-113.

Заказ № 28-а/09/2014 Подписано в печать 08.09.2014 Тираж 100 экз. Усл. п.л. 1,2

ООО "Цифровичок", тел. (495) 649-83-30 www.cfr.ru; e-maihzak@cfr.ru