Автореферат и диссертация по медицине (14.00.27) на тему:Исследование ранозаживляющего действия эмульсии пихтового масла

Красноярская государственная медицинская академия

•'•" '"о Л -т ■ I и и

^п .ц. На правах рукописи

и /Ь.ш ¡^-о

КУДРЯВЦЕВА Александра Николаевна

УДК 616-001.4 : 616-003 : 634.0

ИССЛЕДОВАНИЕ РАН03АЖИВЛЯЮЩЕГ0 ДЕЙСТВИЯ ЭМУЛЬСИИ ПИХТОВОГО МАСЛА

/экспериментальное исследование/

14.00.27 - хирургия 14.00.25 - фармакология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Красноярск 1995

- г -

Работа выполнена на ка-ледре экспериментальной, а клинической ^р\шксяог1Щ. Красноярской государственной медицинской академии. .

Научные руководители:

кандидат медицинских наук, доцент АЛ'.Швепнаи

кандидат медицинских наук, допент В.А,Нетеса

ОШжальные оппоненты:

доктср медицинских наук, грстйессор Е.А.Селезов

доктор медицинских наук, профессор Ю.А.Ьедозерцев

Ведущая организация: НШ пары акал огии ТНЦ СО РАМН

Защита состоится "_"_на заседании.

специализированного совета К 064.49.02 при Красноярской государственной медицинской академии /6600 22,Красноярск,ул„ Партизана Железняка,1/

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Красноярской государственной медицинской академии.

Автореферат разослан "_"_1995 г»

Ученым секретарь специализированного совета кандидат' медицинских наук, доцент

- 3 -

Актуальность теми Способность лекарственных растении положительно влиять ка-заживление ран давно привлекала внимание людей. В народной меди-пине для ускорения заживления ран издавна использовали различные растителтаые препарата, в тш числе и препараты хвойных растении.. Сегодня научно доказано, что лечебные свойства лекарственных растении обусловлены наличием в них биологически активных веществ и, в частности, Фитонцидов.

Учение о Фитонцидах, основоположник см которого был ЬЛ.Токин, возникло и сформировалось как общебиологическая проблема. Бяд исследователей доказали антимикробную и репаративную активность ■оигоннидов /Лробогько В.Г. с соавт.,I9f.f; Ворончкхин С-И. Дим о-нов lUC-ДЕ€1; Николаевский В.-В.. с соавт.Д987;Нетеса В.А^.Встав-ская L'.A.,If9I/. Был предложен препарат дая лечения гнойных ран, состоящий из смеси хлоройиллов /Надтока В.Л. Д9Т1/.

В связи с широким применением, мощных ачтчбактериалншх средств синтетического и полусинтетического происхождения произошло снижение частоты нагноений ран /лапенко В.Л. с соавт1. ,1984/ и растителшые препараты отошли на второе план> Однако в результате применения все новых и новых антибактериальных средств постепенно изменился и спектр микробов, вызывающих раневую инфекцию. Появились микроорганизмы, устойчивые к действию антибиотиков» Ученые многих стран отметили значительный рост устойчивых штаммов пневмс кокков, стафилококков и микобакгерий туберкулеза. Использование таких методов профилактики и лечения как вакуумирование Достюче-нок БЛ.,Карлов ВД„Д°Р4/, лучи лазера /Скобаткин OJi. с соавт, 1978/, навитируювдгл ультразвук /Младенцев ПЛ.. с соавт. ,1966/ проблему не решило. Тщательный анализ,частоты гнойных осложнении ,прс веденный хирургами многих стран, показал, что и в новую эпоху cyü

да ем от о снмения частоты нагноенш. не наблюдается А' апошников В.Г. с соавт. Дете/. Поэтому поиск нобкх элективных средств борьбы с раненой ин-лекииеь по-прежндау остается актуальном. В этот плане представляют интерес препараты лекарственных растении.

?;оирное масло пихтн сибирской разрешено к применению (.ар-мапологическим колите тем Минздрашедпш/а Госсии. Б литератур имеютя сведения о лечении ран пихгевьм чьелем, однако они немногочисленны, в них не указано содержание пихтового масла в единице лекарственное нормы, критерии пролодшого лече;-:ия недостаточно объективнн/Чечулин А.С. ,19-*2; Паисяоикип Г .И»; Курбангалеев СЛ* с соавт. ДР77; Цобкалло

Пел*. исследования

Изучить влияние эмульсии пихтового масла ка процесс заживления гнойных ран.,

радачи исследования

1. Изучитк зависимость ранозагивляютего действия от- концентрации пихт он ого масла в эмульсии.

2. Исследовать влияние эмульсии пихтового масла на процессы регенерации в ранах и микробную обсемененность».

3. Определить аллергизирущиь и раздралаздш; э^уекты пихтового масла и его препаратов.

1. Сравнит; э-о^ективность исследуемого препарата с известными ранозаживлящвди средствами хлорооиллиптш и левеглеколем.

Научная новизна работы

Впервые приводятся данные об эффективности применения Ж>% эмульсии пихтового масла для лечения гнойннх ран в разе воспа-

ления. Доказывается ее антимикробное, репаративное деистше без побсчяого влияния на ткани раны и организм в целом.

Практическая значимость Предлагаемый препарат может быть использован для лечения раневой инфекции в стапионате и амбулаторно..

Работа является частью целевого исследования республиканского значения "экстрактивные вещества хвойных и регенерация" Д: государственной регистрации 049-01^

Положения, которые выносятся на защиту

1. Наиболее эффективной, обеспечивающей быстрое очищзние ран без выраженных побочных эффектов, является Ж-% эмульсия пихтового масла.

2. Эмульсия пихтового масла может применяться в I фазе раневого процесса, т.к. обладает антимикробным, дегидратирующий,, дезодорирующим действием.

Апробация работы

Материалы диссертации доложены и обсувденн:

- на заседаниях Красноярского краевого отделения Всероссийского общества Фармакологов 1ГР1,1Р92гг.

- на научно-практической конференции с участием ЕРДР в г Лиге, 19 £0 г.

- на проблемной комиссии Красноярской государственной меди- ! цинской академии.

- материалы диссертация доложены на I съезде Российского научного облрства фармакологов в г .Волгограде, 1995г..

-6 -

Объем работы

Диссертация изложена на 114 страницах и состсит из оглавления, введения, обзора литературы, двух глав собственных исследовании, обсуждения результатов, выводов, практических рекомендаций. Текст иллюстрирован 21 рисунксм и f таблицами. Библиогра--Ттическии указатель содержит 24F источников, из них ИГ I отечественных авторов и 47 зарубежных.

Публикации

По теле диссертации опубликовано 9 печатных работ1, 4 из них н поигралиorí печати.

Внедрение

Результаты представлены в ёариакологический комитет [«инздрав-медпрома России с целью получения разрешения на клинические испытания эмульсии пихтового масла. Кроме того, получено положительное решение на авторскую заявку.

Материалы и метода

Работа является экспериментальным исследованием, произведенным на ХО белых беспородных крысах, С лине^лых мышах /CBA'Cj^BIg/ff j и '¿о кроликах.

7'ля приготовления эмульсии пихтового масла использовали эмульсионную основу, агрегативная устойчивость которой обусловлена эмульгатором £ I /$с 42-1596-Б1/. В процессе приготовления эмульсионной основы эмульгатор В I заливали дистиллированном водой с температурой 70-6С °С и перемешивали на гомогенизаторе npi 6Uü обАшн. Наилучшей для использования оказалась эмульсионная основа с концентрацией эмульгатора 2,5% /Гучин В.Е.,1987/. После приготовления оснсвы к ней добавляли рассчитанные количества шнстозагс касгг. дак пссучек&т эЩ'^ьсш 5% ,<5% :■; оС%, пегаэ-

-7 -

плешивая на гомогенизаторе в тда ке режиме»

Для изучения антимикробной активности были выбраны еле-дущие тест-кулетуры: /АТСС 25923/,

fomuM I4P9C'/, Stttfibcoeeui /и/едглЫ /АТСС 12354/,

Sicbt^eJUa. /АТСС 2з922/, fW^ trtU^Abis /АТСС 669 6/,

ßaiu^w A-o^'&i /АТСС 6633/, Uutolieüo, аШс&пй /АТСС fcb5-€5 3/, Pituck>ru>n&s aenuq<noiCLt /АТСС 27853/, полученные из НИИ стандартизации и контроля биологических пршаратов имЛ»А-Тйтасевича. Протившииробшй э^'оект исследуемых веществ оценивали по их ми-нималткой подавляющей концентрации М К/ и минимальное бактерицидной концентрации /МБК/, которые определялись метсдсм серийных разведений.

Модель гнойной ранн на крысе /Граков Б «С. с соавт.,19бй/ воспроизводили после иссечения круглого кожно-фасциалшого лоскута диаметрсм 11мм и культурой Sla/>k. алчлш /АТСС SS23/ в дозе 1,5 '1С1 ® клеток в Г ,5 мл 0 £5% раствора натрия хлорида шфицир вали мышцы дна раны на глубину 3 мм. Микробную взвесь готовили из кулнгуры сутотного роста SiOfik aatuy /АТСС 25923/ по оптическому стандарту мутности из расчета 3 млрд микробных клеток в I ил взвеси, в котором содержалось IT® жизнеспособных клеток. Взвесь использовали не позднее 2П минут после ее прЕО-отовления с одновременным рассеиванием на среда для контроля количества микробных твл.

На пятый день от момента нанесения ран сухой струп иссекали и начинали лечение, производили аппликации препаратов стерильными марлевыми тун^ерши один раз в день. Ежедневно производили осмотр и измерение размеров ран. Окончание тазы воспаления фиксировали по исчезновению гипералии, размерам инфильтрата и отечное-

ти тканей в области раны, а также по количеств и характер отделяемого» Га ü ,8,12,16 и 20 день брали биопгатн для исследования микробной обсемененности.

Все крысы были разделены на 8 групп. Во всех группах, креме контрояшой, на 5 день раневого процесса начинали нанесение ис-следудаых препаратов. Измерение площади ран и ин1шлБгратавного вала производили по методу Г.F.Поповой /&енчин K.M.,1979/. Оценку количественных показателей микробной обсемененности в процессе лечения производили по методу М.К.Кузина с соавт»/1980/.

Морфологические изменения в ранах изучали на тоталшых препаратах, которые забирали непосредственно после забоя животных в те же сроки, что и при исследовании микробной обсемененности.

Сенсибилизирунцее действие пихтового масла выявляли на кроликах по реакций' спепифическлй агглсмерацщ лейкоцитов /РСАЬ/ по методу О.И.Алексеевой, JI.A.JiyeBoii /1978/. Влинние пихтового масла на первичный шмунннй ответ изучали с помощью определения бяяакообразущих клеток /ЕОК/ по методике (Mnntrug-ficux.Ддбо/„ Исследование гаперчувствЕтельности замедленного типа /15Т/ проводили по методике, предложенной тзардакологичеекзл комитеагш/1989/.

Раздражающее действие нативного пихтового ыасла и эмульсии пихтового масла исследовали по методике, описанной В.Б.Гацурои /1974/.

Влияние пихтового масла различных концентраций на рост клегск в кулкгуре изучали по включению изотспа ^С-лейцина в фибробласты эмбрионов человека /564/ по методике, описанной Р.Адшсом /1963/.

Для определения влияния эмульсии пихтового масла на синтез белка в ране использовали метод, разработанный Е.АЛурия и И*ЕЛья ченко /Гичев ЮЛ.,Граудиня В.П.,198б/ Для кулнгевирования ткани

чени. В настояием исследовании метод применен для ткани раны.

Определение свободного окешпролизта в кроен провозитесь пс год' б С.О.Тетянец /1985/.

Полученный оксперямеяталышй материал подвергнут статисти-зкой обработке с использованием критерия Стъюдэнта.

Результаты исследования

Изучение ранозаживляюцего действия пихтового масла в зави-/юсти от концентрации в дмульсии прозедея-о на 276 белых беспо-ц-шх крг-'сах-салцах..

К пятому дню у животных всех групп в области раны определял-плогннй ик'шгнграт, размеры которого в 1,5-2 раза превышали ?меры раны. В окружности ран отмечалась гипершия. Площадь ран контрольной группе составляла 87,17-7,14 мм^. Рана была покрыта [кой корочкой первичного струпа, при иссечении которого выделял-густой, зловонный той. При микроскопическом исследовании в и? период был виден эксудат, состоящий из продуктов тканевого ¡пада. В эксудате преобладали полинуклеарные лейкоциты и многоленные колонии микроорганизмов. Много некротизированньос мышеч-

вслокон. В иеясм микроскопическая картина отражала проиесс poro гнойно-некротического воспаления.

В дальнейшем на раны животных 3,4,--i и 6 групп наносили еке-вно, соответственно, 5$ ,25$ и оС% эмульсию пихтового масла, огные I группы служили контролем, а не раны животных 2 группы осили эмульгатор № I.

В контрольной группе животных на 8 день исследования размеры ллнграта существенно не менялись. Отмечалась мацерация кожи зуг раны. Плошадь ран уменнналась до 63,57±4,7G мм2, а микроб-обсемененность оставалась на уровне Ю® ксяоний/lr ткани

Таблина I-Основные параметры заживления гнойных ран под влиянием эмульсии различной концентрации, хлсрориллипта и левше коля

Группа микроб- Скорость за- Уменьшение Продолжит ел ь-ная об- живления плац ада ра- носгь лазы семен-ть № /дни/ ны за сутки воспаления

на 8 день % /дни/

I г9 22 ,,68-1,39 3,69$ ,66 11,8011,37

2 Ю7 27 ,70 ^Р ,7С' 3,30^0,50 12,40 •'С ,50

3 ю7 ас ,80-1 »78 4,40-11,06 11,40^0 ,85

4 1С5 17 ,73 5,9Г*Г- ,81 8,£С±е ,80

5 ю7 31,57-1,8С 2,20*0.80 12 ,50

6 зг* - - -

7 1Г7 21,8011,ер 2,78-1^3 Ю ,90±0 Д)

6 ю3 18 ,50 —1,63 4,27^0 ,81 6 сС±С ,40

Примечание:- # - количесгко колонжиДг ткани

/табл.1/. Микроскопически в ранах сохранялся эксудат, макрораги и полимор'бноядерные лейкоциты образовывали четко выраженным лейкоцитарный вал вокруг зоны некроза. Коллагеновые волокна юные и вокруг них много клеточных элементов.

Уменьшение размеров инфильтрата и количества огделяшого из раны отмечено в этой группе на 9—Ю день. Исчезала мацерация кожа, а при удалении рыхлого струпа видик были грануляции.

На 12 день у болнлинства животных сохранялись вышеописанные изменения. Микробная обсшененность снижалась до 2,5 Микроскопически отлеталось увеличение содержания бибробластов в 1рануля1Гионной ткани.

Средняя продолжительность лазь воспаления составила 11,80-

1,39 дня.

На 16 день инфильтрат в области раны практически ограничивался размерши раны» Отделяемое становилось серозно-гноиньм. Площадь ран уменьшалась недостоверно по сравнению с контролем до 32, ¿£±6,39 мм2 /р<С ,1/. Микробная обсемененность - 6,2'Ю7. Микроскопически определяли возрастание количества сосудов. В поверхностных слоях грануляционной ткани было много клеточных ¿лелен-тов. Более глубокий слой состоял из молодых формирующихся коллаген овкх волокон.

На 20 день исследования раны очищались от гнойно-некротических масс. Появлялась активная краевая эпителизация. Площадь ран была рана 26,16±5,20 мм2. Микробная обсемененность /1-б/*ЮЬ.

В этой 1руппе скорость заживления составила 22,66-1,3) дня, процент уменьшения площада ран за сутки - 3,69^ ,66% /табл.1/.

Во 2 группе животных, на раны которых наносили 2,о?» эмульгатор л I, на 5 день площадь ран составляла 79,40-1,40 мм'Ч

На 8 день поведение животных и размеры инфильтрата не отличались от контроля. Раны были покрыты гнокно-геморрагическш стру-псм, при удалении которого выделялось неболшое количество гноя. Микроскопическая картина была такой же, как в контрольной группе. Микробная обсемененность также на уровне контрольной.

Уменьшение размеров инфильтрата отмечалось на £-10 день.

На 12 день исследования исчезала инфильтрация кожи. Площадь ран

+ о "о

68,61-2,50 мм . Микробная обсемененность - 1*Д] .

Средняя продолжителшость фазы воспаления 12,4С ^ ,50 мм2, что недостоверно отличалось от контроля /р>о ,1,табл.1/.

На 16 день исследования раны были заполнены рыхлым струи см, под к от ерш скапливался гнойный эксудат. Размера ран не отличались

от контрольных. Микробная обсалененность оставалась на прежнем уровне» Микроскопически эксудата в ранах было меняле, зернисто--Фибршозный налет достаточно хорошо выражен. В нижних слоях грануляционной ткачи виден горизонтальный слои фибробластов.

На 23 дань исследования площадь ран составляла что практически не отличалось от контроля. Остахыше параметры заживления также не отличались от контрольных.

Скорость заживления ран составила 27,70^,70 дней /таблЛ/.

В 3 группе животных, леченных Ъ% эмульсией пихтового масла, динамика площаде ран мало отличалась от контроля, как и микробная обсемененность. В микроскопической кертине на 16 день обмечалось несколько более интенсивное, чда в контроле, созревание грануляционной ттсани, а на 2С дань клинически отмечалась несколько более интенсивная эпителизация ран.

В целсм скорость заживления ран в этой группе составила 20,80-1,78 дней /р > 0 ,1/, процент уменшения площади ран за сутки - 4,40-1 /таблЛ/.

В 4 хруппе животных, леченных Т'% эмульсией пихтового масла, уже на F день исчезала периФокаяшая кнпильтрапия тканей. При этсм раны заметно очищались сяг гнойно-иератических масс. Активный рост грануляций и ускорение контракции приводили к уменьшению площади ран до 47,60^3,26 мм2 /р<0£1/, микробная обсемененность снижалась до /табл»1/. Микроскопически в этот период отмечено увеличение количества макрофагов, что также свидет'елъсгвсвало об ускорении процесса заживления.

Продолжите л wость Фазы воспаления также была достоверно меньше по сравнению с контролем - 8,90% ,80 дней /р<0 ,02/.

На 12 и 16 день раневого процесса отмечалось ускорение

процесса заживления по сравнению с контролем, микробная обсаие-ненность оставалась на уровне Ю .

На 23 день у болшинсва животных рана эпителизирована. Под эпитвлида микроскопически видна грубая волокнистая ткань» Плсщадь ран составляла 13,27±3,Э7 мм2 /р<С £5/. Скорость заживления составила 17,80^0 ,73 дня /р<С £.1/. Процент уменниения площади, ран за сутки - 5 ,9IX С1 ,61% /табл.1/.

В 5 группе животных, леченных 25'/, эмульсшй пихтового масла, на 8 день отмечалось изменение в поведении.. Животные становились более беспокойными. Кроме того, отмечалось усиление эксудации с образованием на поверхности ран массивного гнойно-геморрагичес-. кого струпа. Морфологическая картина также подтверждала ухудшение процессов очищения и заживления ран по сравнению с предыдущими группам. В ранах сохранялся эксудат, в некоторых препаратах больше, чда в контроле. Уменшение инрильтрации тканей вокруг раны отмечалось на 1С1-II день. Положительным являлось исчезновение неприятного запаха и появление характерного "хвойного" запаха,несколько более выраженное, чем в предыдущей группе.

Уменвпение яксудада« отмечено на 12 день раневого процесса. Микроскопически в ранах креме изменений, характерных для контроля, было резко выражено полногфовие в глубоких слоях. Больше, чем в контроле, макрофагов в стадии дегрануляши. Эти изменения, возможно, являлись следствием раздражакшего действия высокой концентрации пихтового масла в эмульсии.

Средняя продолжительность Фазы воспаления - 12,50-0 £0дней /р>0 ,1; табл.1/.

Заметное очищение ран от гнойно-некротических масс наблюдалось только на 20 день. Отмечено некоторое замедление эшиге-

лава или ран по сравнению с к он ар сеем.

Б гелей скорость зожнзлекхя в это!. гп.тае составила 31,57-I,80 дней /р<0 ,001/, процент уменьшена-; площади ры: Ы сугоя С /табл.1/.

В 6 группе животных, леченных 50$ эмульсией пихтового масла» ухудшение процесса заживления было еще более заметный. Так,, на 8 день отмечено увеличение площади ран по сравнению с предыдущей. Увеличивалась мацерация кожи и инфильтрация в окружности ран. Микроскопическая картина напоминала таковую при. лечении 25$ эмульсией пихтового масла. Микробная обсемененность на уровне .

К 12 дню усиливалось беспокойство крыс, увеличивалась мацерация кожи. Площадь ран продолжала увеличиваться, эта изменения в картине заживления ран в сторону ухудшения заставили прекратить дальнейшее лечение 50% эмульсией.

Таким образда, установлено, что при лечении ран эмульсиеи различной концентрации наиболее благоприятная картина в заживлении ран наблюдается при использовании Х)% эмульсии пихтового масла. Уменыдение концентрации пихтового масла в эмульсии до Ь% приводит к снижению эффекта,, увеличение до и более усугубляет раневой процесс.

Сравнение ранозаживляющего действия Ж'% эмульсия пихтового масла с действие« известных препаратов - хлерофнллипта и лево-меколя - проведено в 7 и 8 группах животных.

На 8 день в группе животных, леченных хлорофиллиптсм, поведение крыс и размеры инфильтрата не отличались от контр сои. Площадь ран составляла 59 05*4,40 мм2, что практически не отличалось от контроля /р>0 ,1/, но достоверно отличалось с®' действия эмульсии пихтового масла /р<0,01/. Не было заметных от-

- ь -

личий От' контроля и в микроскопической картине.

Продолжительность Фазы воспаления Ю ,90 - С ,эС дней против 8,90—0,80 дней при применении эмульсии /р<0£о; табл.1/.

Ра 12 день раны очидались, заполнялись крупнозернистыми отечными грануляшшйи. В большинстве ран сохранялись некротические тгкани. Площадь ран составляла 45 ,36 мм2 /р > С ,1/. Ми-

7

кробная обсемененность на уровне ► Микроскопическая картина не отличалась от контроля.

Эпителизация ран становилась наиболее выраженной на 16 день. Микроскопически в это? период грануляционная ткань была несколько более зрелой, чем в контроле, содержала бслнпое количество расширенных капилляров.

Скорость заживления в этой груше составила 21,80^1,69 дня, что недостоверно отличалось от контроля /р>0,1/ и достоверно отличалось от скорости заживления при лечении Ц% эмульсией пихтового масла /р<Г X 2/. Процент уменниения площади ран за сутки-2,78-1,03^ /табл.1/.

В 8 группе животных, леченных левомеколем, уменьшение инфильтрата отмечалось уже на 6-7 день.

К 6 дню крысы становились более спокойными, чем в контроле. Активно шло очищение ран от гнойно-некротических масс. Площадь ран уменншлась по сравнению с исходной до 69,33-7,05 мм2/р<0,0 2/. Микробная обсемененность уменьшалась до Микроскопическая

картина была такой же, как при лечении эмульсией пихтового масла.

На 16 день отмечалось некоторое замедление процесса эпите-лизапии и площадь ран составляла 18. -7 мм2 /р > С,I/. Микробная обсемененность сохранялась на уровне 1*1^. Замедление

скорости заживления в этот период сказывалось на показателях заживления: срок заживления составлял 18,1011,63 дня и процент уменнпения площади ран за сутки составлял 4,2710,81% /табл.1/.

Однако продолжительность 'базы воспаления уменьшалась до 6,901 С ,40 дня, что говорит о выраженной, по сравнению с Ю/Ь эмульсией пихтового- масла, э'Мюктивности в фазе воспаления /р <0 Л о/.

Такил образш, выявлено преимущество в ранозаживляюцем действии эмульсии пихтового масла перед хлорофиллиптш. При лечении левсмексяем было отмечено более элективное его действие на Гоазу воспаления, так как препарат содержит сильный антибиотик левшицетин, а основа мази-/полиэтиленоксид/ обладает выраженным дегидрагщзующш э<тфектсм. Но по скорости заживления ран и проценту уменшения площади ран за сутки Т.% эмульсия пихтового масла не уступает левсмеколю в ранозаживляюцдл действии.

Подержание свободного оксипролина в крови крыс исследовали в разные периоды раневого процесса, [-тот показатель является важнш тестем для диагностики сдвигов в обмене соединительной ткани и отражает активность синтеза коллагена /Ьушмелев ВЛ.., 1!;ароев П.Н.,1990/. По даннъм ГЛ .Лудниковой /1982/ в процессе заживления ран наблюдается накопление оксипролина в грануляционной ткани. Существенного изменения содержания оксипролина в крови крыс под влиянием эмульсии- пихтового масла и хлороршшшта по сравнению с контролем выявить не удалось.

Антимикробное действие эмульсии пихт того масла /лПК/ проявлялось в разведении 798 мкг/мл в отношении 5{&}>ку&х&е&ч (н,илг<М. Для Миркхяеегц руо^гл^АШ составила 122 мкг/мл, ¿ш,

íuIU-tts 488мкг/кл. Бактерицидное действие эмульсии на зги тест--кулнгуры проявилось в концентрации ОТО мкг/кл, 980 мкг/кя и ISÖC'Mкг/vui соответственно. ЩК для грамотрицателшых тест-культур была вше, чш дая грамположительных. Так бактериостатическое действие 10$ эмульсии пихтового масла по отношению к PxcL^^ а&яи наблюдалось в разведении 9S0 мкгАш, а по отношению к

о

bieJüci wSi р разведении PC мкг/мл. Бактерицидное действие эмульсии по.отношению-к этим тест-культурам наблюдалось в разведении 2SC0 мкг/мл и 6ЛГС' мкг/лл соответственно. Для Pseudononaj сшм$1ги>-рйгМПК составила 198 мкг/мл и МБК - 272 мкг/мл. По отношения к CcuKcUela. аШыьпл ¡.,щк составила 39С1 мкг/кл и МБК - 980 мкг/мл. Для суммарного пихтового масла МБК по отношению к Ъь&^.ФшлгЩ составила 28С мкгЛлл.

Таким образом, выявлена достаточная антимикробная активность пихтового масла и эмульсии пихтового масла, так как высокой для суммарного эфирного масла считается МБК не более 4С0 мкг/л; . /Николаевский с соавг.,1987/. Особенно выражено антимикробное действие пихтового масла и его эмульсии по отношению к гралполо-жите льн ш те ст-кул кгурам.

Опенку сенсибилизирующего действия проводили по реакции специфической агглстлерации лейкоцитов /5?САГ/, определяющей реакцию клеток-мшеней /нейтрофилы, базоЬилы/ на иммунный комплекс. В опытной пробе на пихтовое масло в дозе^ 200 мкг по сравнению с контролем РСЛЛ была слабо выражена, поскольку процент агглстлерации лейкоцитов в сштной пробе превышал таковой в контроле менее чем на 1/3. Ото позволяет предположить отсутствие аллергазирую-щего действия /Алексеева О.И.,Дуева Л.А„,1978/. С увеличением рабочей дозы до 500 мкг различия становились более заметными, одна-

го не превышали-указанный въше предел, за которым реакцию следует считать псотожителшой.

Оценка сенсибилизирую!® го действия по РСАЛ может характеризовать не столько гиперчувствителжость замедленного типа, сколько реакции немедленного типа, поэтшу дополнительно проведено исследование гшерчувствительности замедленного типа /ГБТ/ на мышах линии /СВА'С^В!^ Я д.

Индекс реакции Д[Р/ в опытной группе составил 26,62*5,14%, а в контрольной - 17,88*4,32$.. Это различие оказалось статистически недостоверным /р>Р ,1/, что также свидетельствует об отсутствии аллергизирующего действия.

Известно, что при контактной аллергии к химическим соединениям 1РТ сочетается с гуморальным ответом на аллерген /Сшиын^-Ав*ц15Р.5/. В связи с этш параллельно на крысах проведено исследование вдияння гактового масла на первичный шмунный ответ.

После внутрибрюпданного введения пихтового масла в дозе, составляющей 1/Е Л^, , на Фоне иммунизации количество блкшко-образущих клеток /БОК/ у Р животных практически не увеличивалось /р >0 ,0 5/, а у 5 животных отмечалось выраженное увеличение БОК до 532±23,сС> /р<0/01/, т.е. характер реакции, был несколько разноречивым.

У животных второй группы, которым вводили пихтовое масло в дозе 1/5 ЛД.£ на фоне иммунизации характер шмунного ответа отличался от предыдущего. У 6 крыс этой серии отмечалось увеличение БОК до /р<0 /'01/. У 4 крыс увеличение было несколько менее выраженным, но также высоко значшад.

Выявленное в этш исследовании иммуностимулирующее действие неболших доз пихтового масла не противоречит данныа литера-

туры о способности летучих Фитонцидов благоприятно влиять на состояние иммуннитета /Николаевский В.В. с соаиг.,19Ь7/.

В третьей группе животных на введение пихтового масла в дозе 1/2 ЛД^г шмуннъш ответ носил явно противоположный характер--отмечалось уменвиение ЬОК по сравнению с контролем, что свидетельствовало об дамунодепресеивнда действии высокой концентрации, пихтового масла.

Таким образом, доступным нам метод® не удалось выявить ал-лер позирующего действия пихтового масла. Однако значительные различил в показателях агглшерапии лейкоцитов, зависящие от величины рабочей дозы пихтового масла, не позволяют полностью исключить возможность аллергизаиии. Выявленное влияние пихтового масла на первичный иммунный ответ также зависит саг дозы. Малые дозы пихтового масла вызывают иммуностимулирующее действие, а с увеличением дозы характер иммунного ответа изменяется в противоположную сторону.

Исследование раздражающего действия эфирного масла пихты сибирской и его препаратов: Ж% и 25% эмульсии, а также Л-% и растворов проведено на 25 кроликах.

Расворк пихтового масла 1£% иоС$ вводили внутрикожно по С ,3 мл в центральные точки восши излеченных полей., кроле растворов использовали нативное пихтовое масла в той же дозе, а для контроля вводили Г ,3 мл стерильного подсолнечного масла. Спустя 20 минут внутривенно вводили 1% раствор трепанового синего в дозе 1мл/кг. Через 3" ,Р0 и 1РГ минут после инъекции красителя оценивали окраску кожных зон, куда было введено исследуемое вещество, по интенсивности окраски.

В резулнгате оказалось, что в центре полей, куда вводила

пихтовое масло, уже через час намечались очаги ишешш. Ж.'% расзг-вор давал слабо различшую окраску, что свидетельствовало об очень слаб™ раздражающем действии его.

При нанесении на слизистую оболочку глаза нативного масла пихты, и 2г>% эмульсии пихтового масла также отмечено значительно более слабое раздражаидее действие Ю/ь эмульсии по сравнению с другши исследованными веществали.

Таюм образсм, эфирное масло пихты обладает выраженнш раздражающим действием. С уменьшением концентрации: масла в препаратах раздражающее действие уменьшается, поскольку действие о0% раствора расценивалось как умеренное, а К<% раствора - как слабое.

Выявленное в наших исследованиях положителшое влияние Ъ% эмульсии пихтового масла на заживление ран предполагает способность симулировать регенерацию. Б литературе имеются данные о стимул1фуицем влиянии препаратов некоторых эфирных масел на рост клеток в культуре /Орлова о.А» с соавт.,1575/. Поэтшу нами также проведено исследование влияния пихтового масла на рост клеток в культуре. Исследование проводилось с помощью изучения включе-

Т4_

ния метки С-леицина в клетки Фибробластов эмбрионов человека /ЕБЧ/ при инкубации в течение часа.

Оказалось, что пихтовое масло в концентрациях ЮС -2000мкг/кл несколько повышает включение метки в клетки Ф5Ч, что можно расценивать как показатель стшулирующего действия пихтового масла на рост клеток в кулвгуре.

С целью изучения влияния пихтового масла на процессы регенерации в ране исполтеован также радасизошопный метод, который выявил некоторое увеличение количества включенного изотопа в

ткани ран xzbothhx, леченных X? эмульсиеь шктоьсго к бола но сравнению с контрю ем. Тар *ак данное уселич ¿ние недостоверно /р >С ,1/, то его к о:-по считать ли.^ тенденцией v усилению синтеза белка ■ ] сд глинние^ Z'f эмульсии.

Tai км обг^яо"', доотупя- мы,« методам не удалось «етко ••«ять усиления синтеза rtyn-a п раикх крыс, лечевкь-х 1л эмульсией пихто: ого • асла.

3 Ь В С J Li

1» гаялучртж раиозаг^глкищ»., де] си-лек обладает iL1/,- о^у^ь-сия пихтового масла.

2. Полскитслшое хлшшв Ж.% эмульсия дихтоього масла на _ течение раненого ярокесса обусловлено скижеьиегс у.иьробио;. обсемененности р усяяениек процесса- регенерации. Антимикробное де:.стьие ог обенно вкражено по отношению к 1рагпаио«ательньм :.-икробам.

3. с.чульсия пихтового масла обладает сл&бш рвздеишда» де! отри ем и не имеет аллергизчрумшего действия,

<±. с^"Л1сия пихтокого гласла Ж% по своей р^-'естивности превосходит хлоро'йвшпт и по сушар:-'<гу э-^кту т отличаете« от ле^скеколя.

Ii F А К Т ¡1 Ч '■< С 1'. кг: ГЕН' & В ГЛАД К ¿х

I. Показанием к применению Х% эмульсии пихтоиого масла являются гнойнке и длителио не за«иьахще ранк, е»аги, пролежни и ЯЗВЬ'.

2» Лекарственная '¡юрла - эмульсия. Построение инградаен-тов внбрено Tai-им сбразсм, что препарат- хорошо распределяет ел на поверхности раны, сманивается с некротическим детритом и не препятствует оттоку раневого содержимого.

- 22 -

. 3. Противопоказания к применению не установлены. Побочны! Э'Тйекгы не выявлены.

4. Предлагается использовать эмульсию пихтового масл< в ввде местных аппликаций на рану с ежедневной сменой повязок,

П ЕРЕЧЕНЬ- РАБОТ, О П У Б Л ИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Влияние эфирного масла пихты на первичный иммунный ответ и гиперчувствигельность замедленного типа /совместно с В.А.Ретесой,11:.А.Вставской /Длиматичесвне и преФсрмирунцие Ьак торы в профилактике и реабилитации бсяшых с бронхо-легочными и сердечно-сосудистьыи заболеваниями: Тез.докл.респ.,.конф.4<1оск 198?.43.267-268.

2. Ранозаживляющее действие эмульсии пихтового масла в сравнении с хлоро-шллиптш /сошестно с В.А.Нетесой,к.А.Вставс кой //производство кормовых и биологически активных продуктов на основе низкосортной древесины и отходов лесопромышленного комплекса: Тез.докл. Зсесоюзн.кон'о. -КрасноярскД990-.-С.16г-17* ■

3. Влияние эфирного масла пихты на заживление гнойных ран /сошестно с В.А.Нетесой.Г.И.Гаровым, В.И.Скороходовой, В.ИЛро-

хоренковым, ? .А.Даниловой //Поиск новых лекарственных средств и их использование: Тез.докл.Всесоюз.кожб. с участием КНДР.-Чита ,1990 .-Ч. I .-С. Ю 6-Ю 8 .

4. Определение возможного влияния эфирного масла пихты и компонента cL -пинена на первичный шмунный ответ и гшерчувст вигельность замедленного типа /совместно с В.Н.Бравве,ВЛ.Нете-сой, Ю.А.Вставской //В сб.гПути и методы снижения заболеваемости рабочих на прсмышленвых предприятиях.-КрасноярскДЭЮ .-С.loi -156.

- 23 -

5. Пихта сибирская - богатый источник биологически активных веществ /совместно с ВД.Нетесои, Г.А.Вставском, Е.ВЛесте-ровой, Е.П.Питьковской, О.В.Корбан, Л.Н.Свндерской //Состояние и перспективы развития Фарлации в Сибири и на Дальнем Востоке: Тез.науч.-практ.конф. ,посвящ. 50-летию Фармацевтического Фа-кул ьте та/-Т см ск, 1991 .-С. 175 -176.

6» эмульсия пихтового масла как ранозаживляющее средство /сошестно с А.А.Вгтавегкой, В.А.Ретесой, Г.ИЛЧаровкм, В.ИЛро-хоренковьм // Состояние и перспективы развития фармаши в Сибири и на Дальнем Востоке: Тез.докл.науч.-практ.конФ..посвящ.. 50- летию фарлацевтического 'оакультета.-Тсмск,1931»-С.71-72»

7. с рирное масло пихт и раневой процесс /соллестно с К.А.Вставской, В.А.Нетесой, А„Г.Гитлиной // Местное лечение рач: Матер.всессюзн.конф.-Москва,1991.-С.219-22: .

F. Исследование репаративной и антимикробной активности эмульсии пихтового масла на мрдели гнойной раны /соылестно с В.А.Нетесой, В. Г .Мельниковым, Ю.А.ВставскоЙ //Механизмы развития патологических процессов: Мат-ер. объединенного пленума патофизиологов и Фармакологов Сибири и Д!алшего Востока.- Кемерово, 1994. -С .8 1-8.2.

9. смульскя пихтового масла при раневой инфекции / ссвмес нос Г .А, Встав скок, ВЛ.Нетесой // фундамент ал нше исследования как основа создания лекарственных средств: Тез .докл. 1-го съезда научного общества Фармакаяогов.-Валгоград,19&5..-С.21&»

т. 1<!ГГЛ, т. <оо, so?