Автореферат и диссертация по медицине (14.03.06) на тему:Фармакотерапия экспериментального остеопороза и нарушений консолидации переломов на его фоне L-аргинином и его комбинациями с эналаприлом и лозартаном

На правах рукописи РАДЖКУМАР ДЕНСИНГ САМУЭЛ РАДЖ

ФАРМАКОТЕРАПИЯ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО ОСТЕОПОРОЗА И НАРУШЕНИЙ КОНСОЛИДАЦИИ ПЕРЕЛОМОВ НА ЕГО ФОНЕ Ь-АРГИНИНОМ И ЕГО КОМБИНАЦИЯМИ С ЭНАЛАПРИЛОМ И ЛОЗАРТАНОМ

14.03.06 - фармакология, клиническая фармакология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Курск - 2014

1 о ИЮЛ 2014

005550468

005550468

Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Курский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации.

Научные руководители:

доктор медицинских наук, профессор Покровский Михаил Владимирович доктор медицинских наук Файтельсон Александр Владимирович

Официальные оппоненты:

Ковалев Георгий Иванович - доктор медицинских наук, профессор, Федеральное государственное бюджетное учреждение «Научно-исследовательский институт фармакологии имени В.В. Закусова» Российской академии медицинских наук, лаборатория радиоизотопных методов исследований, заведующий

Моисеева Инесса Яковлевна - доктор медицинских наук, профессор, Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Пензенский государственный университет» Министерства образования и науки Российской Федерации, кафедра общей и клинической фармакологии, заведующий

Ведущая организация:

Открытое акционерное общество «Всероссийский научный центр по безопасности биологических активных веществ»

Защита состоится « » г. в ^^^ часов

на заседании диссертационного совбта Д 208.039.03 при Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Курский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации (305041, г. Курск, ул. К. Маркса, 3).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке и на сайте ГБОУ ВПО КГМУ Минздрава России, http://www.kurskmed.com/diss2/read.php?id=23

Автореферат разослан « —».

Ученый секретарь диссертационного совета

Овод Алла Ивановна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования. Всемирная организация здравоохранения (ВОЗ) определяет остеопороз как «системное заболевание скелета, характеризующееся низкой плотностью костной ткани и нарушением ее микроархитектуры», что приводит к увеличению хрупкости костей и риску возникновения переломов (Genant Н.К., 1999; Беневоленская Л.И., 2004). К модифицируемым факторам развития остеопоротических нарушений относят низкое содержание кальция и витамина D, сидячий образ жизни, курение, чрезмерное потребление алкоголя, длительный прием глюкокортикоидов, ревматический артрит; к немодифицируемым факторам можно отнести преклонный возраст, генетическую предрасположенность, снижение веса и менопаузу (Johnell О., 2005; Миронов С.П., 2006; Шилин Д.Е., 2008).

По данным Национального фонда остеопороза (NOF), 10 миллионов человек в США страдают остеопорозом, 80% из них - женщины. Переломы являются одной из основных причин гиподинамии у пожилых женщин, что значительно снижает качество их жизни (Abrahamsen В., 2009; Adachi J.D., 2010). В Соединенных Штатах около 40% женщин в возрасте старше 50 лет страдают от переломов бедер, позвонков или костей запястья, причиной этому является остеопороз. Годовая стоимость лечения переломов в США к 2015 году прогнозируется на уровне более 20 млрд долларов (Bürge R., 2007).

Отечественные и зарубежные травматологи-ортопеды утверждают, что смертность при характерном для остеопороза осложнении - переломе шейки бедра - в течение первых 6 месяцев после перелома достигает 30% (Михайлов Е.Е., 1999; Center J.R., 2007; Adachi J.D., 2010). С каждым годом растет число проводимых оперативных вмешательств по поводу переломов костей с применением разнообразных имплантатов, включая использование эндопротезов крупных суставов. По имеющимся данным, на каждую пятую операцию первичного эндопротезирования приходится одно реэндопротезирование, что чаще всего связано с развитием асептической нестабильности на фоне остеопоротических нарушений (Миронов С.П., 2006; Родионова С.С., 2007; Goldhahn J., 2008).

Как известно, пусковой механизм для манифестации остеопороза - это нарушение равновесия между двумя главными процессами ремоделирования костной ткани: резорбцией и остеогенезом (Беневоленская Л.И., 2008). Существенным звеном в патогенезе развития остеопоротических нарушений, в частности связанных с длительной иммобилизацией, является нарушение трофики кости, приводящее к уменьшению активности и количества остеобластов, а также к активации остеокластов (Alagiakrishnan К., 2003; Сагапо R.A., 2003; Murphy W.L., 2004; Madeddu P., 2005). •

Кровоснабжение кости играет значительную роль в процессах как костного ремоделирования, так и репарации повреждений костной ткани (Alagiakrishnan К., 2003; Murphy W.L., 2004; Гудырев О.С., 2008). Микрососуды костной ткани представлены монослоем эндотелиоцитов и не имеют мышечного и соединительнотканого слоев, следовательно, именно эндотелий опосредует гуморальную регуляцию обмена между остеоцитами и кров]

(Streeten E.A., 1990; Madeddu P., 2005). Следовательно, причиной нарушения кровоснабжения костной ткани может быть дисфункция эндотелия сосудов, которая, таким образом, может приводить к нарушениям образования кости и репаративной регенерации, вызывая остеопороз.

В свою очередь, современная патогенетическая терапия остеопороза включает препараты, как замедляющие костную резорбцию (эстрогены, кальцитонин) и стимулирующие костеобразование (фториды, анаболические стероиды), так и препараты многопланового действия (например, витамин D) (Рожинская Л.Я., 2007; Lyritis G.P., 2010; Марченкова JI.A., 2010; Стабровс-кая Н.В., 2011; Файтельсон A.B., 2012). Это разграничение является условным, так как все препараты так или иначе воздействуют на оба процесса ремоделирования. Однако неуклонный рост частоты остеопороза и остеопоротических переломов демонстрирует, что надежных способов терапии и профилактики этого заболевания не существует.

В то же время современные фармакологические исследования показали положительное остеопротективное действие препаратов, корригирующих дисфункцию эндотелия. К ним в первую очередь относятся ингибитор ангиотензинпревращающего фермента эналаприл, блокатор ангиотензиновых рецепторов лозартан и фитоалексин резвератрол (Гудырев О.С., 2008; Стабровская Н.В., 2011; Файтельсон A.B., 2012).

Это указывает на актуальность дальнейшего поиска фармакологических агентов для воздействия на процессы костного ремоделирования, а также обосновывает избранное нами направление исследования.

Цель исследования: сравнительное изучение остеопротективного действия L-аргинина и его комбинаций с эналаприлом и лозартаном для фармакологической коррекции экспериментального остеопороза и нарушений консолидации переломов на его фоне.

Задачи исследования:

1. Изучить антиостеопоротическое действие L-аргинина на модели экспериментального остеопороза с использованием результатов изучения кровоснабжения костной ткани, функциональных сосудистых тестов и морфометрического исследования в сравнении с препаратом Кальций-ДЗ Никомед.

2. Изучить антиостеопоротическое действие комбинации L-аргинина с эналаприлом при экспериментальном остеопорозе с использованием результатов изучения кровоснабжения костной ткани, функциональных сосудистых тестов и морфометрического исследования в сравнении с монотерапией L-аргинином и препаратом Кальций-ДЗ Никомед.

3. Изучить антиостеопоротическое действие комбинации L-аргинина с лозартаном при экспериментальном остеопорозе с использованием результатов изучения кровоснабжения костной ткани, функциональных сосудистых тестов и морфометрического исследования в сравнении с монотерапией L-аргинином и препаратом Кальций-ДЗ Никомед.

4. Изучить влияние Ь-аргинина на репаративную регенерацию кости при экспериментальных остеопоротических переломах проксимального отдела бедра у крыс в сравнении с препаратом Капьций-ДЗ Никомед.

5. Изучить влияние комбинации Ь-аргинина с эналаприлом на репаративную регенерацию переломов проксимального отдела бедра на фоне остеопороза в сравнении с монотерапией Ь-аргинином и препаратом Кальций-ДЗ Никомед.

6. Изучить влияние комбинации Ь-аргинина с лозартаном на репаративную регенерацию переломов проксимального отдела бедра на фоне остеопороза в сравнении с монотерапией Ь-аргинином и препаратом Кальций-ДЗ Никомед.

Научная новизна исследования. Впервые показано, что через 12 недель после операции овариэктомии развивается экспериментальный остеопороз, характеризующийся признаками дисфункции сосудистого эндотелия -повышением коэффициента эндотелиальной дисфункции, значительным снижением уровня микроциркуляции в проксимальном отделе бедра и отрицательной динамикой морфометрических показателей.

В работе впервые продемонстрировано, что Ь-аргинин в дозе 200 мг/кг в качестве монотерапии и его комбинации с эналаприлом в дозе 0,5 мг/кг и лозартаном в дозе 6 мг/кг, обладая эндотелиопротективной активностью, предотвращали локальное ухудшение микроциркуляции в кости проксимального отдела бедра. Таким образом, Ь-аргинин и его комбинации с эналаприлом и лозартаном способствовали замедлению истончения трабекул в губчатой кости и предотвращению возникновения микроповреждений трабекул, то есть обладали остеопротективным действием.

Настоящее исследование впервые показало, что в группах животных, получавших Капьций-ДЗ Никомед в дозе 85,7 мг/кг в течение четырех недель по прошествии восьми недель после произведенной билатеральной овариэктомии, не наблюдалось достоверного влияния препарата на функционирование эндотелия сосудов костной ткани и состояние регионарной микроциркуляции в кости проксимального отдела бедра экспериментальных животных. Кроме того, Кальций-ДЗ Никомед не оказывал остеопротективного воздействия при экспериментальном остеопорозе, что выражалось в отсутствии статистически значимого влияния препарата на среднюю ширину костных трабекул в проксимальном отделе бедренной кости.

В работе впервые показано, что Ь-аргинин и его комбинации с эналаприлом и лозартаном, вводимые в течение четырех недель после воспроизведения и остеосинтеза экспериментальных переломов на фоне остеопороза, повышали показатели микроциркуляции в формирующейся костной мозоли проксимального отдела бедра у крыс не только по сравнению с животными с остеопоротическими переломами бедра, а также животными, получавшими Кальций-ДЗ Никомед, но также и по сравнению с контрольными животными. Тем самым Ь-аргинин и его комбинации с эналаприлом и лозартаном статистически значимо улучшали частоту консолидации

экспериментальных переломов проксимального отдела бедра на фоне гипоэстрогенного остеопороза.

Научная новизна исследования подтверждается подачей двух заявлений на выдачу патентов РФ на изобретения (заявки № 2013143106 и №2013143107).

Научно-практическая значимость работы. В диссертационном исследовании обоснована эффективность Ь-аргинина и его комбинаций с эналаприлом и лозартаном для коррекции остеопоротических изменений костей скелета и фармакотерапии остеопоротических переломов.

Экспериментально доказано, что использование Ь-аргинина и его комбинаций с эналаприлом и лозартаном позволяет нормализовать изменения соотношений сосудистых реакций эндотелийзависимой и эндотелийнезависимой вазодилатации.

Ь-аргинин в качестве монотерапии и в сочетании с эналаприлом и лозартаном способствует увеличению кровоснабжения костной ткани при экспериментальном остеопорозе, замедлению отрицательной динамики гистоморфометрических показателей кости и улучшению процессов консолидации переломов на фоне экспериментального остеопороза.

Результаты работы позволяют рекомендовать проведение клинических испытаний Ь-аргинина и его комбинаций с эналаприлом и лозартаном при распространенном остеопорозе и переломах на его фоне.

Внедрение результатов исследования. На основании данных диссертационной работы запланировано проведение целенаправленных клинических исследований Ь-аргинина и его комбинаций с эналаприлом и лозартаном в фармакологической коррекции остеопоротических нарушений при переломах костей.

Полученные результаты используются в курсах лекций кафедр травматологии, ортопедии и военно-полевой хирургии и фармакологии Государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Курский государственный медицинский университет» и кафедры фармакологии и фармацевтических дисциплин Федерального государственного автономного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Белгородский государственный национальный исследовательский университет».

Связь диссертационного исследования с темами научно-исследовательских работ организации. Работа выполнена по инициативному плану, включена в программу «Разработка и совершенствование методов лечения и профилактики остеопоротических нарушений с целью улучшения качества и увеличения продолжительности жизни пациентов» на 2010-2014 гг., номер государственной регистрации темы - 01201153218.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Ь-аргинин в дозе 200 мг/кг при экспериментальном остеопорозе оказывает эндотелиопротективное действие, предотвращая повышение коэффициента эндотелиальной дисфункции; позволяет избежать снижения локального кровоснабжения бедренной кости; обладает статистически

значимым остеопротективным действием, проявляющимся замедлением уменьшения ширины костных трабекул и предотвращением возникновения их микроповреждений.

2. Комбинированное применение Ь-аргинина в дозе 200 мг/кг с эналаприлом в дозе 0,5 мг/кг и лозартаном в дозе б мг/кг при экспериментальном остеопорозе оказывает более выраженное по сравнению с монотерапией Ь-аргинином эндотелиопротективное действие, снижая коэффициент эндотелиальной дисфункции; эффективно предотвращает уменьшение кровоснабжения костной ткани бедренной кости; обладает статистически значимым остеопротективным действием, проявляющимся замедлением уменьшения ширины костных трабекул и предотвращением возникновения их микроповреждений.

3. Ь-аргинин в дозе 200 мг/кг статистически значимо повышает уровень микроциркуляции в зоне экспериментального остеопоротического перелома проксимального отдела бедра по сравнению с крысами с экспериментальными остеопоротическими переломами, что положительно сказывается на процессах репарации костных повреждений. Ь-аргинин увеличивает число позитивных результатов консолидации переломов на фоне экспериментального остеопороза у крыс.

4. Комбинированная терапия Ь-аргинином в дозе 200 мг/кг с эналаприлом в дозе 0,5 мг/кг и лозартаном в дозе 6 мг/кг позволяет предотвратить снижение уровня микроциркуляции в межотломковой области перелома проксимального отдела бедра у крыс, что положительно сказывается на результатах регенерации костни. Исследуемые комбинации препаратов увеличивают число позитивных результатов сращения экспериментальных переломов на фоне остеопороза у животных.

Степень достоверности и апробация результатов. Достоверность полученных в ходе проведения исследования результатов обеспечивается выбором современных лабораторных и инструментальных методов получения экспериментальной информации, адекватных методов статистической обработки первичных научных данных.

Материалы диссертации были доложены на 76-й Всероссийской научной конференции студентов и молодых ученых с международным участием «Молодежная наука и современность» (г. Курск, 2011); на IV съезде фармакологов России «Инновации в современной фармакологии» (Республика Татарстан, г. Казань, 2012); на X научно-практической конференции студентов, интернов, ординаторов, аспирантов, молодых ученых, посвященной 10-летию Института последипломного медицинского образования, «Актуальные вопросы современной клинической и экспериментальной медицины» (г. Белгород, 2012); на IV Всероссийском научно-практическом семинаре молодых ученых с международным участием «Современные проблемы медицинской химии. Направленный поиск новых лекарственных средств» (г. Волгоград, 2012); на VII Международной научной конференции молодых ученых-медиков (г. Курск, 2013); на заседаниях Курского отделения Ассоциации травматологов-ортопедов Российской Федерации (Курск, 2011, 2012, 2013).

Апробация диссертации проведена на совместном заседании кафедр фармакологии; клинической фармакологии; травматологии, ортопедии и военно-полевой хирургии; гистологии, эмбриологии, цитологии; оперативной хирургии и топографической анатомии им. профессора А.Д. Мясникова; хирургических болезней № 2; НИИ экологической медицины Государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Курский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации.

Публикации. По материалам диссертационного исследования опубликовано 16 работ, в том числе три из них - в изданиях, рекомендованных ВАК для опубликования результатов диссертационных исследований на соискание ученой степени кандидата медицинских наук, две - в иностранных изданиях. Поданы две заявки на выдачу патентов РФ на изобретения.

Личный вклад автора. Автору принадлежит ведущая роль в составлении плана и дизайна исследования, в постановке цели и поиске путей ее достижения. Им проведен подробный анализ отечественных и зарубежных источников литературы по теме диссертации, выполнялись экспериментальные исследования на 240 самках белых крыс линии Вистар с разделением их на группы: основные, сравнения и контрольные; выбраны критерии рандомизации. Диссертантом самостоятельно производились анализ и обобщение полученных результатов, составление графиков, таблиц и диаграмм, написание диссертации, сопоставление с литературными данными. В работах, выполненных в соавторстве, использованы результаты исследования с долей личного участия 70-90%.

Вклад автора является определяющим и заключается в непосредственном участии на всех этапах исследования.

Объем и структура диссертации. Работа состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов исследования развития и фармакологической коррекции экспериментального остеопороза и экспериментальных остеопоротических переломов и их обсуждения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы. Диссертационная работа изложена на 115 страницах машинописного текста, содержит 4 таблицы и 50 рисунков. Библиографический список включает 199 источников, в том числе 119 - на иностранных языках.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Моделирование экспериментального остеопороза. Исследование проводили на 120 белых крысах-самках Вистар с массой тела 200-300 г. Для моделирования остеопороза крыс подвергали наркотизации посредством внутрибрюшинной инъекции водного раствора хлоралгидрата в дозе 300 мг/кг, после чего осуществляли операцию двусторонней овариэктомии. По прошествии восьми недель у данных животных развивается системный остеопороз (Гудырев О.С., 2008). Исследуемые препараты и комбинации препаратов применяли с девятой по двенадцатую неделю эксперимента включительно. В качестве контроля использовали животных, которым была проведена ложная операция овариэктомии. Степень выраженности

остеопоротических изменений анализировали спустя 12 недель после проведения овариэктомии посредством проведения гистоморфометрии.

Моделирование закрытых остеопоротических переломов бедренных костей и их остеосинтез. Исследование было проведено на 120 белых крысах-самках Вистар с массой тела 200-300 г. У всех крыс (за исключением контрольной группы) моделировали остеопороз путем удаления обоих яичников. Далее, по прошествии восьми недель после овариэктомии, на фоне развившегося остеопороза моделировали переломы бедренных костей. Для этого крыс предварительно наркотизировали и без разреза мягких тканей, при помощи крампонов с надетыми на режущие поверхности силиконовыми трубками, производили внешнее воздействие на проксимальный отдел бедренной кости перпендикулярно оси кости до появления в ней перелома. Для фиксации и стабилизации переломов производили закрытый мини-инвазивный интрамедуллярный остеосинтез. Исследуемые препараты в качестве монотерапии и комбинации препаратов применяли с первой по четвертую неделю после воспроизведения и остеосинтеза переломов включительно. Таким образом, результаты консолидации переломов оценивали визуально и рентгенографически по прошествии четырех недель после остеосинтеза переломов или через 12 недель после начала эксперимента.

Измерение уровня микроциркуляции в кости, проведение функциональных сосудистых тестов. Уровень микроциркуляции на модели экспериментального остеопороза оценивали в ткани проксимального отдела бедра, на модели остеопоротических переломов - в ткани формирующейся костной мозоли через 12 недель после начала эксперимента. Для этого после наркотизации производили хирургический доступ к проксимальному отделу бедренной кости крысы. После формирования отверстия в кортикальном слое кости или на поверхности костной мозоли глубиной до 2 мм, вводили в него игольчатый датчик для исследования состояния регионарной микроциркуляции. Уровень микроциркуляции костной ткани или костной мозоли исследовали с помощью аппаратного комплекса Biopac systems, включающего блок полиграфа MP 100, LDF100C - блок лазерной допплеровской флоуметрии (ЛДФ) и датчик TSD144. На модели экспериментального остеопороза после измерения уровня микроциркуляции в кости, проводили функциональные сосудистые тесты эндотелийзависимой и эндотелийнезависимой вазодилатации в ответ на одномоментное внутривенное введение растворов ацетилхолина в дозе 40 мкг/кг и нитропруссида натрия в дозе 30 мкг/кг соответственно для оценки степени развития дисфункции сосудистого эндотелия. Рассчитывали коэффициент эндотелиальной дисфункции (Гудырев О.С., 2008). Регистрацию и обработку результатов лазерной допплеровской флоуметрии при исследовании микроциркуляции и проведении функциональных сосудистых тестов осуществляли в программе AcqKnowledge версий 3.8.1-4.2.0, показатели локального кровоснабжения выражались в перфузионных единицах (ПЕ).

Гистоморфометрическая оценка развития экспериментального остеопороза и эффективности его коррекции. При изучении изменений,

происходящих в процессе развития экспериментального остеопороза и при его коррекции, проводили гистоморфометрические исследования костной ткани проксимальных отделов бедренных костей. Гистологические стекла с препаратами микроскопировали на микроскопе Leica СМЕ и фотографировали. Для морфометрического изучения использовали предварительно откалиброванную программу ImageJ версий 1.39-1.43. В качестве количественной меры оценки развития остеопороза и эффективности его фармакологической коррекции использовали ширину костных трабекул проксимального отдела бедра, которую измеряли и выражали в микрометрах.

Обоснование доз препаратов и дизайн исследования. Для исследования антиостеопоротической активности нами были подобраны препараты и комбинации препаратов с эндотелиотропной активностью, продемонстрированой в ранее проведенных исследованиях в НИИ экологической медицины КГМУ. L-аргинин, ингибитор АПФ эналаприл («Рениприл», «Фармстандарт-Лексредства»), блокатор ангиотензиновых рецепторов лозартан калия («Блоктран», «Фармстандарт-Лексредства») применяли в дозах 200 мг/кг, 0,5 мг/кг и 6 мг/кг соответственно. В качестве препарата сравнения использовали Капьций-ДЗ Никомед в дозе 85,7 мг/кг. Препараты после тщательного измельчения вводили ежедневно однократно в сутки внутрижелудочно в виде суспензии в 1% крахмальной слизи.

Статистическая обработка первичных данных исследования. В работе все полученные экспериментальные данные были проанализированы с помощью описательной статистики (пакет анализа Microsoft Excel 2003). Для групповых значений определяли средние значения (М) показателей и ошибку среднего (m). Оценка статистической значимости различий при межгрупповых сравнениях производилась по двухвыборочному t-тесту Стьюдента с различными дисперсиями. Для оценки исследований по консолидации переломов бедренных костей использовался точный критерий Фишера.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

1. Изучение развития экспериментального остеопороза с использованием результатов измерения уровня костной микроциркуляции, функциональных сосудистых проб и гистоморфометрического исследования

Результаты ЛДФ в кости позволили установить статистически значимое снижение уровня кровоснабжения костной ткани у животных с экспериментальными остеопоротическими изменениями (58,75±3,76 ПЕ) в сравнении с контролем (99,91±3,41 ПЕ). В группе контрольных крыс КЭД равнялся 1,28±0,18, у крыс с остеопоротическими изменениями - 2,57±0,23.

Рисунок 1 иллюстрирует микрофотографии гистологических срезов проксимальных отделов бедренных костей в группах контрольных животных и крыс с остеопорозом. Остеопоротические изменения были обнаружены у всех животных через 12 недель после двусторонней овариэктомии. В ходе исследования в гистологических препаратах проксимальных отделов бедренных костей крыс с остеопорозом были обнаружены травматические микроповреждения в виде переломов отдельных костных трабекул (рис. 2).

ШЩ

Ж ' ~

_

__ ^'яий*»' IЙЩ____

Рисунок 1 - Гистологическая картина проксимального отдела бедра у контрольной крысы (слева) и у крысы с остеопорозом (справа) (окр. гематоксилин-эозином, XI00)

и ш.

Рисунок 2 - Гистологическая картина микроархитектоники проксимального отдела бедра у крысы с остеопорозом Примечание * - микроперелом костной трабекулы (окр. гематоксилин-эозином, Х800)

Объективной мерой оценки развития экспериментального остеопороза через 12 недель после овариэктомии стало достоверное снижение ширины трабекул в проксимальном отделе бедренной кости. Средняя ширина костных трабекул в проксимальном отделе бедра у крыс с остеопоротическими изменениями при этом была меньше показателя контроля на 43,4% (рис. 3).

120 100

80

мкм 60 40 20 0

У 98,51

-- 55,77*

?

-

Контроль Остеопороз

Рисунок 3 - Показатели средней ширины костных трабекул в проксимальном отделе бедренной кости у контрольных крыс и животных с остеопорозом Примечание * - р<0,05 в сравнении с контрольными животными

Результаты, полученные в ходе исследования, говорят о том, что по прошествии 12 недель после двусторонней овариэктомии у белых самок крыс развивается генерализованная дисфункция эндотелия сосудов, и ее частным случаем является нарушение функционирования эндотелиоцитов микроциркуляторного русла кости, следствием которого является снижение показателей регионарной микроциркуляции в кости, что приводит к нарушению баланса между процессами ремоделирования костной ткани и возникновению и развитию остеопоротических изменений, сопровождающихся истончением костных трабекул и возникновением в них микропереломов. Данный факт дал нам основание сделать заключение о значительной роли нарушения функционирования эндотелия микрососудистого русла кости в патогенезе остеопороза.

2. Изучение остеопротективного действия препарата Кальций-ДЗ Никомед и Ь-аргинина при экспериментальном остеопорозе

Результаты проведенного исследования продемонстрировали отсутствие у препарата Кальций-ДЗ Никомед влияния на показатели кровоснабжения проксимального отдела бедра крыс. Значения изученного показателя не отличались от результатов в группе животных с остеопорозом (р=0,675). В то же время было выявлено, что Ь-аргинин эффективно предотвращал снижение уровня локальной микроциркуляции в кости (рис. 4). По результатам расчета КЭД у крыс, получавших Кальций-ДЗ Никомед, равен 2,64±2,7, что позволило констатировать отсутствие эндотелиотропной активности препарата. Было выявлено, что Ь-аргинин снижал КЭД до значения 1,63±0,19 (рис. 5).

120

100

ПЕ

60 -40 ■ 20 0 -

99,91

79,80**

58,75* ■

56,89

Контроль Остеопороз

Кальций-ДЗ Никомед

Ь-аргинин

Рисунок 4 - Результаты влияния препарата Кальций-ДЗ Никомед и Ь-аргинина на уровень микроциркуляции в кости проксимального отдела бедра у крыс Примечание * - р<0,05 в сравнении с контрольными животными; ** - р<0,05 в сравнении с крысами с остеопорозом

Морфометрическое исследование гистологических препаратов подтвердило отсутствие влияния препарата Кальций-ДЗ Никомед на среднюю ширину костных трабекул проксимального отдела бедра крыс. Средняя ширина трабекул была статистически значимо меньше показателя контрольных животных и не отличалась от значений у животных с экспериментальной патологией (р=0,240). Установили, что Ь-аргинин препятствовал уменьшению ширины трабекул до показателей крыс с остеопорозом. Тем не менее ширина трабекул значений контрольных крыс не достигала (рис. 6).

Контроль Остеопороз

К'альций-ДЗ Никомед

Ь-аргинин

Рисунок 5 - Результаты влияния препарата Кальций-ДЗ Никомед и Ь-аргинина на значение коэффициента эндотелиальной дисфункции Примечание * - р<0,05 в сравнении с контрольными животными; ** -р<0,05 в сравнении с крысами с остеопорозом

120 100 80 60 40 20 0

98,51

55,77*

58.23

60,24**

ШР

Р

Контроль Остеопороз Кальций-ДЗ Ь-аргинин Никомед

Рисунок 6 - Результаты влияния препарата Кальций-ДЗ Никомед и Ь-аргинина на ширину костных трабекул в проксимальном отделе бедренной кости у крыс Примечание * - р<0,05 в сравнении с контрольными животными; ** - р<0,05 в сравнении с крысами с остеопоротом

Таким образом, Кальций-ДЗ Никомед в дозе 85,7 мг/кг ожидаемо не обладает эндотелиопротективным действием, а также не предотвращает снижения уровня локальной микроциркуляции в кости проксимального отдела бедра. Несмотря на имеющуюся положительную тенденцию, препарат не оказал статистически значимого влияния на протекание процессов костного ремоделирования при остеопоротических изменениях. Ь-аргинин в дозе 200 мг/кг, обладая эндотелиотропной активностью, статистически значимо предотвращает уменьшение регионарной микроциркуляции в кости проксимального отдела бедра. Это позволяет нормализовать нарушенное при остеопорозе протекание процессов костного ремоделирования, свидетельством чего является сохранение микроархитектоники костной ткани проксимального отдела бедра, в том числе замедление истончения трабекул и предотвращение возникновения микропереломов. Учитывая тот факт, что такие препараты, как эналаприл и лозартан, обладая эндотелиотропными свойствами, оказывают профилактическое остеопротективное действие, в дальнейших исследованиях нами была изучена остеопротективная активность комбинаций Ь-аргинина с эналаприлом и лозартаном в качестве препаратов для коррекции уже сформировавшегося экспериментального остеопороза.

3. Изучение остеопротективного действия Ь-аргинина в комбинациях с эналаприлом и лозартаном при экспериментальном остеопорозе

Результаты влияния комбинаций Ь-аргинина с эналаприлом и лозартаном на величину среднего уровня микроциркуляции в проксимальном отделе бедра у крыс через 12 недель после овариэктомии представлены на рисунке 7.

120 100 80

ПЕ 60 40 20

0

Контроль Остеопороз Кальций-ДЗ Ь-аргинин Ь-аргинин Ь-аргинин Никомед +эналаприл +лозартан

Рисунок 7. Результаты влияния комбинаций Ь-аргинина с эналаприлом и лозартаном на уровень микроциркуляции в кости проксимального отдела бедра Примечание * - р<0,05 в сравнении с контрольными животными; ** - р<0,05 в сравнении с крысами с остеопорозом

Изученные комбинации предотвращали снижение уровня локальной микроциркуляции при развившемся остеопорозе. Данные ЛДФ-графии в группе крыс, получавших комбинацию Ь-аргинина и эналаприла, статистически значимо превышали показатели животных с остеопорозом, а также крыс, получавших препарат сравнения - Кальций-ДЗ Никомед, однако достоверно не отличались от результатов в группе с монотерапией Ь-аргинином (р=0,557). Данные лазерной допплеровской флоуметрии в группе крыс, которым проводилось сочетанное лечение Ь-аргинином и лозартаном, кроме того, статистически значимо отличались в большую сторону от значений уровня микроциркуляции в группе с монотерапией Ь-аргинином (р=0,042).

Установили, что комбинации Ь-аргинина с эналаприлом и лозартаном статистически значимо снижали КЭД до значений 1,61±0,18 и 1,55±0,16 соответственно. Значения КЭД в группах, получавших комбинированную терапию, не отличались достоверно от результатов расчета КЭД в группе животных с монотерапией Ь-аргинином (рис. 8).

В результате изучения гистологических препаратов проксимальных отделов бедренных костей у крыс, получавших Ь-аргинин в комбинациях с эналаприлом и лозартаном, обнаружили сохранную микроархитектонику и предотвращение уменьшения ширины костных трабекул по сравнению с крысами с остеопоротическими изменениями. Результаты морфометрического исследования продемонстрированы на рисунке 9. Установили, что комбинации Ь-аргинина с эналаприлом и лозартаном предотвращали снижение средней ширины костных трабекул, однако ширина костных трабекул не была равна значениям контрольных крыс. Значения средней ширины костных трабекул в проксимальном отделе бедренной кости у крыс, получавших Ь-аргинин в

99,91 —I—

комбинации с эналаприлом, статистически значимо отличались от значений животных с остеопорозом (р=0,001) и получавших Кальций-ДЗ Никомед (р=0,027), но достоверно не отличались от показателей крыс, получавших L-аргинин в дозе 200 мг/кг в качестве монотерапии (р=0,228). Показатели средней ширины костных трабекул в проксимальном отделе бедренной кости у крыс, получавших L-аргинин в комбинации с лозартаном, статистически значимо отличались также и от значений в группе крыс, получавших L-аргинин в дозе 200 мг/кг в качестве монотерапии (р=0,019).

кэд

Контроль Остеопороз

Кальций-ДЗ Никомед

L-аргинин

Ь-аргинин Ь-аргинин +эналаприл +лозартан

Рисунок 8 - Результаты влияния комбинаций L-apгининa с эналаприлом и

лозартаном на значение коэффициента эндотелиальной дисфункции, рассчитанного на основании данных лазерной допплеровской флоуметрии Примечание * - р<0,05 в сравнении с контрольными животными; ** - р<0,05 в сравнении с крысами с остеопорозом

Контроль Остеопороз

Кальций-ДЗ Никомед

1^аргинин

L-аргинин +эналаприл

1^аргинин +лозартан

Рисунок 9 - Результаты влияния комбинаций L-apгининa с эналаприлом и лозартаном на среднюю ширину костных трабекул Примечание: * - р<0,05 в сравнении с контрольными животными; ** - р<0,05 в сравнении с крысами с остеопорозом

Таким образом, комбинации L-apгининa с эналаприлом и лозартаном, обладая эндотелиопротективной активностью, статистически значимо предотвращают уменьшение уровня локальной микроциркуляции в кости проксимального отдела бедра. Это позволяет поддерживать на должном уровне нарушенное при остеопорозе протекание процессов костного ремоделирования, свидетельством чего является сохранение микроархитектоники костной ткани проксимального отдела бедра, а именно замедление истончения костных трабекул и предотвращение возникновения микропереломов трабекул.

Наибольшая степень выраженности фармакологической активности на выбранной модели патологии была отмечена у комбинации Ь-аргинина с лозартаном. Основываясь на полученных результатах исследования, в дальнейших исследованиях нами проведено сравнительное изучение влияния Ь-аргинина и его комбинаций с эналаприлом и лозартаном на качество сращения экспериментальных переломов на фоне остеопороза.

4. Изучение влияния препарата Кальций-ДЗ Никомед и Ь-аргинина на репаративную регенерацию при экспериментальных остеопоротических переломах

Результаты ЛДФ в группах животных с переломами бедра продемонстрировали, что при консолидации переломов при моделированном гипоэстрогенном остеопорозе средний показатель кровоснабжения костной мозоли был статистически значимо ниже, чем у контрольных животных (рис. 10). Следовательно, сращение экспериментальных переломов при остеопорозе протекает на фоне снижения уровня кровоснабжения костной мозоли, что может негативно сказаться на результатах сращения переломов на фоне остеопороза.

Перелом бедра Остеопоротический перелом

бедра

Рисунок 10 - Средний уровень кровоснабжения костной мозоли по прошествии четырех недель после воспроизведения и остеосинтеза перелома Примечание * - р<0,05 в сравнении с животными с переломом бедра

При визуальной оценке зон переломов проксимального отдела бедра обнаружили, что у большего числа крыс с переломами как без остеопороза, так и на его фоне по прошествии четырех недель после воспроизведения и остеосинтеза переломов присутствовали признаки образования костных мозолей. Тем не менее отмечались также случаи отсутствия сращения переломов. В группе животных с переломами бедра без остеопороза из 20 крыс в трех случаях имелось отсутствие сращения перелома с развитием ложного сустава. У животных с переломами бедра на фоне остеопороза число неудовлетворительных результатов было более чем вдвое больше (семь против трех из 20) (рис. 11).

При положительных результатах сращения переломов наблюдали рентгенографические признаки консолидации, а именно отсутствие расстояния между возникшими в результате перелома отломками бедренной кости, сохранение правильной оси бедра, а также формирование костной мозоли. При отсутствии консолидации переломов у крыс с остеопорозом на

рентгенограммах наблюдали деформации сегментов конечностей, вращательные и ангулярные смещения костных отломков друг относительно друга, присутствие расстояния между отломками кости, отсутствие или замедление образования костной мозоли (рис. 12).

Установили, что Ь-аргинин в дозе 200 мг/кг положительно влиял на показатели кровоснабжения костной мозоли экспериментальных переломов проксимального отдела бедра на фоне остеопороза, в отличие от препарата Кальций-ДЗ Никомед, который не обнаруживал такого действия (рис. 13).

17 НЯ! 131

Перелом бедра Остеопоротический перелом

бедра

0 Сращение ■ Несращение

Рисунок 11 - Результаты консолидации экспериментальных переломов проксимального отдела бедра по прошествии 4 недель после моделирования

Рисунок 12 - Примеры рентгенограмм бедра крыс без остеопороза (слева) и с остеопорозом (справа) по прошествии 4 недель после перелома бедра 120

ПЕ

100 80 60 40 20 -о

- ■

Перелом бедра

Остеопоротический перелом бедра (ОПБ)

ОПБ+Кальций-ДЗ Никомед

ОПБ+Ь-аргинин

Рисунок 13 - Результаты влияния препарата Кальций-ДЗ Никомед и Ь-аргинина на уровень кровоснабжения костной мозоли перелома Примечание * - р<0,05 в сравнении с животными с переломом бедра; ** -р<0,05 в сравнении с животными с остеопоротическим переломом бедра

При этом у крыс, получавших Ь-аргинин, уровень микроциркуляции имел тенденцию к превышению показателей кровоснабжения костной мозоли переломов у животных с переломами бедра без остеопороза (р=0,477).

При оценке результатов сращения остеопоротических переломов выявили, что после введения препарата Капьций-ДЗ Никомед и Ь-аргинина у четырех животных из 20, получавших Кальций-ДЗ Никомед, наблюдалось отсутствие сращения переломов с развитием ложного сустава (рис. 14).

20 -15 -10 -5 " 0 -

Перелом бедра Остеолоротический ОПБ+Кальций-ДЗ ОПБ+Ь-аргинин перелом бедра Никомед

(ОПБ)

□ Сращение ■ Несращение

Рисунок 14 - Результаты влияния препарата Кальций-ДЗ Никомед и Ь-аргинина на консолидацию экспериментальных остеопоротических переломов

Таким образом, сращение экспериментальных переломов проксимального отдела бедра на фоне остеопороза у самок крыс Вистар через 12 недель после овариэктомии протекает на фоне ухудшения показателей микроциркуляции костной мозоли, что отрицательно сказывается на результатах сращения переломов. Введение Ь-аргинина, в отличие от препарата сравнения Кальций-ДЗ Никомед, предотвращает ухудшение показателей кровоснабжения костной мозоли перелома проксимального отдела бедра, поддерживая значения микроциркуляции выше, чем у крыс с экспериментальными переломами как на фоне остеопороза, так и без него. Тем не менее и Ь-аргинин, и Кальций-ДЗ Никомед положительно воздействуют на процессы репарации повреждений, увеличивая частоту сращения переломов на фоне остеопороза.

5. Изучение влияния Ь-аргинина в комбинациях с эналаприлом и лозартаном на репаративную регенерацию при экспериментальных остеопоротических переломах

Выявили, что изученные комбинации Ь-аргинина в дозе 200 мг/кг с эналаприлом в дозе 0,5 мг/кг и лозартаном в дозе 6 мг/кг позитивно влияют на значения уровня кровоснабжения костной мозоли экспериментальных остеопоротических переломов проксимального отдела бедра. Установлено, что у крыс, получавших комбинации Ь-аргинина с эналаприлом и лозартаном, абсолютные значения микроциркуляции превышали показатели как контрольных животных с экспериментальными переломами без остеопороза, так и показатели у крыс, получавших монотерапию Ь-аргинином (рис. 15).

При визуальной и рентгенологической оценке результатов сращения переломов выявили, что после введения комбинаций Ь-аргинина с эналаприлом и лозартаном крысам в течение четырех недель после воспроизведения и остеосинтеза экспериментальных переломов на фоне остеопороза неудовлетворительных результатов сращения не наблюдалось: сращение остеопоротических переломов отмечалось в 100% наблюдений (рис. 16).

120 100 80 ПКО 40 20 О

89,30

66,59*

68,48

■

93,46**

А

'у/г///

■УУ/УУУ

/////у

ш.

100,17**

105,28**

Перелом бедра Остсопоротический ОПБ+Кальиий-ДЗ перелом бедра Никомед

(ОПБ)

ОПБ+Ь-аргинин

ОПБ+Ь-аргинин +зналаприл

ОПБ+Ь-аргинин +лозартан

Рисунок 15 - Результаты влияния комбинаций Ь-аргинина с эналаприлом и лозартаном на уровень кровоснабжения костной мозоли переломов

Примечание * - р<0,05 в сравнении с животными с переломом бедра; ** — р<0,05 в сравнении с животными с остеопоротическим переломом бедра

20 -15 -10 5 0

ииии ÜÜ

ВЦ

20 20 20

17 13 16

ПереломбеДра Остеопорогический ОПБ+Кальций-ДЗ ОПБ+Ь-аргинин ОПБ+Ь-аргинин ОПБ+Ь-аргинин

перелом бедра Никомед +эналаприл +ло:1артан (ОПБ)

□ Сращение ■ Несращение

Рисунок 16 - Результаты влияния комбинаций L-аргинина с эналаприлом и лозартаном на консолидацию остеопоротических переломов

Таким образом, ежедневное внутрижелудочное введение L-аргинина в дозе 200 мг/кг в комбинациях с эналаприлом в дозе 0,5 мг/кг и лозартаном в дозе 6 мг/кг предотвращает ухудшение показателей кровоснабжения костной мозоли перелома проксимального отдела бедра более выражено, чем терапия препаратом Кальций-ДЗ Никомед или L-аргинином в дозе 200 мг/кг в качестве монотерапии. Изученные комбинации L-аргинина с эналаприлом и лозартаном положительно воздействуют на протекание процессов костного ремоделирования при экспериментальных остеопоротических переломах проксимального отдела бедра у крыс, увеличивая число позитивных результатов консолидации переломов до 100%.

ВЫВОДЫ

1. L-аргинин в дозе 200 мг/кг при экспериментальном остеопорозе обладает выраженным эндотелиотропным действием, проявляющимся в снижении коэффициента эндотелиальной дисфункции, предотвращает ухудшение кровоснабжения костной ткани проксимального отдела бедра, поддерживая его на показателях, статистически значимо превышающих показатели в группе крыс с остеопорозом без лечения и получавших Кальций-ДЗ Никомед в дозе 85,7 мг/кг, а также увеличивая среднюю ширину костных

трабекул по сравнению с крысами с остеопорозом и сохраняя микроархитектонику кости, обладает антиостеопоротическим действием.

2. Комбинация Ь-аргинина в дозе 200 мг/кг и эналаприла в дозе 0,5 мг/кг при экспериментальном остеопорозе, имея выраженную эндотелиотропную активность, предотвращает повышение коэффициента эндотелиальной дисфункции; комбинация препаратов эффективно повышает показатели кровотока в кости проксимального отдела бедра, поддерживая их на уровне, статистически значимо превышающем значения в группах крыс с остеопорозом без лечения и получавших Кальций-ДЗ Никомед в дозе 85,7 мг/кг, и обладает выраженным остеопротективным действием, увеличивая среднюю ширину костных трабекул в проксимальном отделе бедренной кости.

3. Комбинация Ь-аргинина в дозе 200 мг/кг и лозартана в дозе 6 мг/кг при экспериментальном остеопорозе обладает выраженным эндотелиотропным действием - значительно уменьшает коэффициент эндотелиальной дисфункции; комбинация препаратов эффективно повышает микроциркуляцию в кости проксимального отдела бедра, в большей степени, чем монотерапия Ь-аргинином в дозе 200 мг/кг, приближая ее значения к показателям контрольных животных, и имеет более выраженное остеопротективное действие, чем Кальций-ДЗ Никомед в дозе 85,7 мг/кг и Ь-аргинин в дозе 200 мг/кг, достоверно увеличивая среднюю ширину костных трабекул проксимального отдела бедра.

4. Ь-аргинин в дозе 200 мг/кг увеличивает показатели кровоснабжения костной мозоли перелома проксимального отдела бедра до значений животных с переломами без остеопороза, а также превышающих показатели у крыс с экспериментальными переломами на фоне остеопороза без лечения и получавших Кальций-ДЗ Никомед в дозе 85,7 мг/кг, а также увеличивает до 100% число позитивных результатов консолидации остеопоротических переломов.

5. Комбинация Ь-аргинина в дозе 200 мг/кг и эналаприла в дозе 0,5 мг/кг повышает показатели микроциркуляции в области перелома проксимального отдела бедра до значений, превышающих соответствующие показатели у крыс с переломами на фоне остеопороза как без лечения, так и получавших Кальций-ДЗ Никомед в дозе 85,7 мг/кг и у животных с экспериментальными переломами без остеопороза. Указанная комбинация препаратов увеличивает число позитивных результатов консолидации остеопоротических переломов до 100%. Отличий в эффективности от монотерапии Ь-аргинином в дозе 200 мг/кг обнаружено не было.

6. Комбинация Ь-аргинина в дозе 200 мг/кг и лозартана в дозе 6 мг/кг существенно увеличивает показатели кровоснабжения костной мозоли перелома проксимального отдела бедра выше, чем в группах с переломами бедренных костей без остеопороза, с переломами на фоне остеопороза без лечения, а также на фоне монотерапии препаратом Кальций-ДЗ Никомед в дозе 85,7 мг/кг и Ь-аргинином в дозе 200 мг/кг, и увеличивает до 100% число позитивных результатов сращения экспериментальных переломов на фоне остеопороза.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Полученные экспериментальные результаты позволяют рекомендовать проведение клинических исследований L-аргинина и его комбинаций с эналаприлом и лозартаном на добровольцах - лицах с явными остеопоротическими нарушениями различной этиологии. Весьма перспективной выглядит возможность проведения исследований клинической эффективности терапии L-аргинином и его сочетанного применения с эналаприлом и лозартаном у женщин с гипоэстрогенным состоянием в постклимактерическом периоде и у мужчин пожилого возраста.

2. Установленная роль адекватности функционирования эндотелия сосудов, в том числе микроциркуляторного русла кости, в протекании процессов костного ремоделирования и остеорепарации позволяет рекомендовать проведение дальнейшего поиска и изучения лекарственных средств и фармакологических агентов для патогенетически обоснованной профилактики и коррекции остеопоротических нарушений и их осложнений.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Влияние биокомпозиционного материала с L-аргинином на заживление переломов / О. С. Гудырев, Д. С. Р. Раджкумар, О. А. Старосельцева [и др.] // Молодежная наука и современность : материалы 76-й Всерос. науч. конф. студентов и молодых ученых с междунар. участием (Курск, 19-20 апр. 2011 г.).

- Курск : КГМУ, 2011. - Ч. III. - С. 283.

2. Значение кровоснабжения в заживлении экспериментальных остеопоротических переломов / О. С. Гудырев, Д. С. Р. Раджкумар, С. А. Цепелева [и др.] // Молодежная наука и современность : материалы 76-й Всерос. науч. конф. студентов и молодых ученых с междунар. участием (Курск, 19-20 апр. 2011 г.). - Курск : КГМУ, 2011. - Ч. III. - С. 284.

3. Коррекция экспериментальных остеопоротических переломов эналаприлом и лозартаном / О. С. Гудырев, Д. С. Р. Раджкумар, С. А. Цепелева [и др.] // Молодежная наука и современность : материалы 76-й Всерос. науч. конф. студентов и молодых ученых с междунар. участием (Курск, 19-20 апр. 2011 г.).

- Курск : КГМУ, 2011. - Ч. III. - С. 285.

4. Остеопротективное действие эналаприла, лозартана и резвератрола при экспериментальном остеопорозе / О. С. Гудырев, А. В. Файтельсон, Д. С. Р. Раджкумар [и др.] // Науч. ведомости Белгород, гос. ун-та. Сер. : Медицина. Фармация. - 2011. - № 22 (117), вып. 16/2. - С. 9-15.

5. Фармакологическая коррекция экспериментальных остеопоротических переломов эналаприлом и лозартаном / А. В. Файтельсон, М. В. Покровский, Д. С. Р. Раджкумар [и др.] // Науч. ведомости Белгород, гос. ун-та. Сер. : Медицина. Фармация. - 2012. - № 4 (123), вып. 17/1. - С. 232-238.

6. Роль дисфункции сосудистого эндотелия в патогенезе остеопороза / О. С. Гудырев, А. В. Файтельсон, Д. С. Р. Раджкумар [и др.] // Инновации в современной фармакологии : материалы IV съезда фармакологов России (Казань, 18-21 сент. 2012 г.). - М.: Фолиум, 2012. - С. 52.

7. Эндотелиальная дисфункция - ключевое звено в патогенезе остеопоротических изменений / О. С. Гудырев, Д. С. Р. Раджкумар, М. С. Соболев [и др.] // Актуальные вопросы современной клинической и экспериментальной медицины : материалы X науч.-практ. конф. студентов, интернов, ординаторов, аспирантов, молодых ученых, посвящ. 10-летию Ин-та последиплом. мед. образования (Белгород, 27 апр. 2012 г.). - Белгород : НИУ «БелГУ», 2012.-С. 113-115.

8. Значимость локального кровоснабжения в эффективности консолидации переломов при остеопорозе / О. С. Гудырев, Д. С. Р. Раджкумар, М. С. Соболев [и др.] // Актуальные вопросы современной клинической и экспериментальной медицины : материалы X науч.-практ. конф. студентов, интернов, ординаторов, аспирантов, молодых ученых, посвящ. 10-летию Ин-та последиплом. мед. образования (Белгород, 27 апр. 2012 г.). - Белгород : НИУ «БелГУ», 2012. -

C. 115-116.

9. Влияние эналаприла и лозартана на процессы остеорепарации при переломах на фоне остеопороза / О. С. Гудырев, Д. С. Р. Раджкумар, М. С. Соболев [и др.] // Актуальные вопросы современной клинической и экспериментальной медицины : материалы X науч.-практ. конф. студентов, интернов, ординаторов, аспирантов, молодых ученых, посвящ. 10-летию Ин-та последиплом. мед. образования (Белгород, 27 апр. 2012 г.). - Белгород : НИУ «БелГУ», 2012.-С. 117-118.

10. Изучение остеоиндуктивных и остеокондуктивных свойств костных трансплантатов, содержащих L-аргинин / О. С. Гудырев, Д. С. Р. Раджкумар, М. С. Соболев [и др.] // Актуальные вопросы современной клинической и экспериментальной медицины : материалы X науч.-практ. конф. студентов, интернов, ординаторов, аспирантов, молодых ученых, посвящ. 10-летию Ин-та последиплом. мед. образования (Белгород, 27 апр. 2012 г.). - Белгород : НИУ «БелГУ», 2012.-С. 119-120.

11. Способ моделирования и оценки развития экспериментального остеопороза у животных / О. С. Гудырев, Д. С. Р. Раджкумар, М. В. Покровский [и др.] // Современные проблемы медицинской химии. Направленный поиск новых лекарственных средств : материалы IV Всерос. науч.-практ. семинар молодых ученых с междунар. участием (Волгоград, 29-31 окт. 2012 г.). -Волгоград : ВолГМУ, 2012. - С. 141-142.

12. Comparative Evaluation of Enalapril and Losarían in Pharmacological Correction of Experimental Osteoporosis and Fractures of Its Background /

D. S. R. Rajkumar, A. V. Faitelson, O. S. Gudyrev [et al]//J. Osteoporos. - 2013. - Vol. 2013. - Article ID 325693, 5pages.

13. Остеопротективное действие L-аргинина при экспериментальном остеопорозе / О. С. Гудырев, Д. С. Р. Раджкумар, А. В. Файтельсон [и др.] Науч. ведомости Белгород, гос. ун-та. Сер.: Медицина. Фармация. - 2012. -№ 22 (141), вып. 20/3. - С. 94-97.

14. Osteoprotective Effect of Enalapril, Losarían and Resveratrol in Experimental Osteoporosis / A. V. Faitelson, O. S. Gudyrev, D. S. R. Rajkumar [et al.] //

Bioanalysis & Biomedicine. - 2012. - Vol. 4(2): 030-033. - doi: 10.4172/1948-593X.1000060.

15. Сравнительный анализ профилактического остеопротективного свойства L-аргинина и кальция ДЗ при экспериментальном гипоэстрогенном остеопорозе / Д. С. Р. Раджкумар, О. С. Гудырев, А. В. Файтельсон [и др.] // Междунар. науч.-исследоват. журн. - 2013. - № 12 (19), Ч. 3. - С. 57-58.

16. Протективные свойства L-аргинина в отношении клеток сосудистого эндотелия выявляют остеопротективные эффекты при гипоэстрогенном остеопорозе / О. С. Гудырев, Д. С. Р. Раджкумар, А. В. Файтельсон [и др.] // Междунар. науч.-исследоват. журн. - 2014. - № 1 (20), Ч. 4. - С. 54-57.

В автореферате пспользованы следующие сокращения: АПФ -

ангиотензинпревращающий фермент, ВОЗ - Всемирная организация здравоохранения, КЭД - коэффициент эндотелиальной дисфункции, ЛДФ -лазерная допплеровская флоуметрия, ПЕ - перфузионные единицы.

Лицензия ЛР № 020862 от 30.04.99 г. Сдано в набор 27.06.2014 г. Подписано в печать 1.07.2014 г. Формат 30x42 /8. Бумага офсетная. Гарнитура Times New Rom. Печать офсетная. Усл. печ. л. 1,0. Тираж 100 экз. Заказ № 275(A). Издательство Курского государственного медицинского университета 305041, г. Курск, ул. К. Маркса, 3.