Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Исследование эндотелиопротективных свойств препарата "Импаза"

На правах рукописи

□03453ЭЭ5

Белоус Александр Сергеевич

ИССЛЕДОВАНИЕ ЭНДОТЕЛИОПРОТЕКТИВНЫХ СВОЙСТВ ПРЕПАРАТА «ИМПАЗА»

14.00.25 - фармакология, клиническая фармакология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание учёной степени кандидата медицинских наук

Курск-2008

003453995

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Курский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию».

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор Покровский Михаил Владимирович

Официальные оппоненты:

заслуженный деятель науки, доктор медицинских наук профессор Резников Константин Михайлович

доктор медицинских наук, профессор Тюренков Иван Николаевич

Ведущая организация:

Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Московский государственный медико-стоматологический университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию».

Защита состоится « 11 » ур^- 2008 г. в 12 - 3 О часов на

заседании диссертационного совета Д 208.ТО9.03 при Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Курский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» (г. Курск, 305041, ул К. Маркса, 3).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО КГМУ Росздрава.

Автореферат разослан «

Учёный секретарь диссертационного совета

Пашин Е.Н.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. По современным представлениям эвдотели-альная дисфункция (ЭД) является одним из ведущих патогенетических звеньев сердечно-сосудистых заболеваний. Так, роль дисфункции эндотелия доказана в патогенезе ряда наиболее распространенных заболеваний и патологических состояний: атеросклерозе, артериальной гипертензии, легочной гипертензии, сердечной недостаточности, дилагационной кардиомиопатии, ожирении, гиперли-пидемии, сахарном диабете, гипергомоцистеинемии (Laufs U., 1998; Белоусов Ю.Б., Намсараев Ж.Н., 2006).

Основным механизмом, лежащим в основе ЭД, является снижение образования и биодоступности оксида азота (N0) при одновременном повышении уровня супероксид-аниона и продукции мощных вазоконстрикторов (Марков Х.М., 2005).

Таким образом, дисфункция эндотелия проявляется дисбалансом между медиаторами, обеспечивающими в норме оптимальное течение всех эндотелий-зависимых процессов (Shimokawa Н., 1998; Luscher T.F., 2001).

Нарушения продукции, взаимодействия, разрушения эндотелиальных ва-зоактивных факторов наблюдаются одновременно с аномальной сосудистой реактивностью, изменениями в структуре и росте сосудов, которым сопутствуют сосудистые заболевания (Xu С., 2001).

NO синтезируется из L-аргинина под влиянием эпдотелиальной NO-синтазы (eNOS) путем присоединения молекулярного кислорода к конечному атому азота гуанидиновой группы L-аргинина (Casino P.R., Kilcoyne С.М., Quyyumi A.A., Hoeg J.M., Panza J.A., 1994).

Изучение состояния сосудистой стенки и поиск возможностей целенаправленного лечения ЭД является важной клинико-экспериментальной задачей, но вместе с тем в настоящее время не существует препаратов для специфической коррекции.

Одной из важных точек приложения терапевтического воздействия при ЭД является восстановление дефицита N0, которое возможно путем активации фермента eNOS (Бабак О.Я., 2004).

Оксид азота (N0) - ведущий гуморальный эндотелиальный модулятор дилатации, релаксирующий сосуды. Фактор вырабатывается эндотелиоцитами. Поскольку клетки эндотелия выделяют большое количество различных веществ в кровь и окружающие ткани, их комплекс можно рассматривать как самую большую эндокринную систему (Dzau V.J., 2001).

В настоящее время достаточно большое внимание уделяется препарату «Импаза» производства (ООО НПФ «Материа Медика Холдинг», Россия) для коррекции эректилыюй дисфункции (Мазо Е.Б., Гамидов СМ., Овчинников Р.И., 2003).

Ряд исследований свидетельствует о том, что эректильная дисфункция, представляя собой проявление эндотелиальной дисфункции, является независимым фактором риска сердечно-сосудистых заболеваний, поскольку повреждение эндотелия сосудов считается одним из первых этапов формирования ате-росклеротической бляшки. В клинических исследованиях по изучению эндоте-

лийзависимой и независимой дилатация плечевой артерии данные значения оказались сниженными у пациентов с эректильной дисфункцией по сравнению со здоровыми мужчинами (Мартюшев-Поклад A.B., Дугина Ю.Л., Сергеева СЛ., Эпштейн О.И., 2003).

Таким образом, эректильная дисфункция нередко оказывается первым проявлением эндотелиальной дисфункции (по современным представлениям -первого патогенетического звена атерогенеза).

В связи с вышеизложенным являлось актуальным изучение эндотелио-протективных свойств препарата «Импаза» и его комбинаций с ингибитором ангиотензинпревращающего фермента (АПФ) - эналаприлом и блокатором ан-гиотензиновых рецепторов (АТ1) - лозартаном при экспериментальном дефиците оксида азота.

Номер государственной регистрации темы - 01.2.006 10387.

Цель исследования: провести оценку эндотелио- и кардиопротективных эффектов препаратов «Импаза», эналаприл, лозартан и их комбинаций на модели L-NAME-индуцированного дефицита оксида азота в эксперименте.

Задачи исследования:

1. Изучить гемодинамические эффекты препарата «Импаза».на ненарко-тизированных животных.

2. Изучить эндотелиопротективную активность препарата «Импаза» L-NAME-индуцированной модели дефицита NO в эксперименте.

3. Изучить эндотелиопротективную активность сочетанного применения препарата «Импаза» и ингибитора АПФ - эналаприла при L-NAME-индуцированной модели дефицита NO в эксперименте.

4. Изучить эндотелиопротективную активность сочетанного применения препарата «Импаза» и блокатора AT 1-рецепторов лозартана калия при L-NAME-индуцированной модели дефицита NO в эксперименте.

Научная новизна исследования. В работе впервые показано, что «Импаза» 1 таб./кг (1 таблетка на 100 мл воды, со свободным доступом к питью с учётом объема потребляемой жидкости 20±3 мл/животное/сут.) оказывает эндоте-лиопротективное действие на модели L-NAME-индуцированной NO-дефицитной ЭД. Эналаприл 0,5 мг/кг и лозартан калия 6 мг/кг (однократно внутрижелудочно в течение 7 суток) как монотерапия также обладали эндоте-лиопротективными эффектами на выбранной модели патологии. Сочетанное использование препарата «Импаза» с ингибитором АПФ эналаприлом и блокатором ATI-рецепторов лозартаном калия показало положительное эндотелио-протективное взаимодействие, выражающееся в снижении коэффициента эндотелиальной дисфункции.

В работе впервые показано, что «Импаза» 1 таб./кг (1 таблетка на 100 мл воды, со свободным доступом к питью с учётом объема потребляемой жидкости 20±3 мл/животное/сут.) оказывает выраженное кардиопротективное действие на модели L-NAME-индуцированной NO-дефицитной ЭД, выражающееся в предотвращении повышения адренореакгивности и снижения миокардиального резерва.

В работе впервые показано, что «Импаза» 1 таб./кг (1 таблетка на 100 мл воды, со свободным доступом к питью с учйтом объема потребляемой жидкости 20±3 мл/животное/сут.) предотвращала увеличение поперечного диаметра миокардиоцитов, вызванное L-NAME-индуцированной NO-дефицитной ЭД. Сочетанное использование препарата «Импаза» с ингибитором АПФ энала-прилом и блокатором ATI-рецепторов лозартаном калия показало аддитивное действие на диаметр миокардиоцитов.

Научная новизна подтверждается получением патента РФ (RU 2306953, «Способ коррекции эндотелиальиой дисфункции смесью растворов гомеопатических разведений поликлональных кроличьих антител к эндотелиальной син-тазе оксида азота человека - С12, СЗО, С200) и положительным решением на выдачу патента РФ (Заявка 2007134108) «Способ коррекции эндотелиальной дисфункции лозартаном в комплексе с смесью растворов гомеопатических разведений поликлональных кроличьих антител к эндотелиальной синтазе оксида азота человека - С12, СЗО, С200».

Практическая значимость. В работе обоснована эффективность соче-танного применения препарата «Импаза» с ингибитором АПФ эналаприлом и блокатором ATI-рецепторов лозартаном калия для коррекции L-NAME-индуцированной NO-дефицитной ЭД в эксперименте. Показано, что их сочетанное использование позволяет нормализовать изменение соотношения сосудистых реакций на ацетилхолин (эндотелийзависимая вазодилатация) и нитро-пруссид натрия (эндотелийнезависимая вазодилатация) с увеличением коэффициента эндотелиальной дисфункции (КЭД) в 5 раз, предотвратить снижение показателей биохимических маркеров (Total NO, экспрессия NO-синтетазы), а также добиться положительной динамики морфофункциональных показателей сердечно-сосудистой системы (диаметр миокардиоцитов, прирост давления при пробе на нагрузку сопротивлением и адренореактивность и т.д.).

Экспериментально доказано, что введение препарата «Импаза» вызывает коррекцию NO-дефицитной эндотелиальной дисфункции.

Полученные данные позволяют рекомендовать целенаправленные клинические испытания препарата «Импаза» при состояниях, сопровождающихся эндотелиальной дисфункцией.

Внедрение результатов научных исследований. Материалы диссертационного исследования, касающиеся изучения эндотелиопротективной активности стимулятора eNOS, используются и в ООО НПФ «Материа Медика Холдинг», Россия, с целью формирования представления об эндотелиопротективной активности данного препарата.

Материалы диссертационного исследования, касающиеся антигипертеь-зивной и эндотелиопротективной активности лозартана калия «Блоктран» и эналаприла малеата «Рениприл» (производства ОАО «Фармстандарт-Лексредства», Курск), включены в состав документов, поданных на регистрацию в МЗ РФ (РУ № 000084/01-2000).

Апробация работы. Материалы работы доложены на итоговых научных сессиях и конференциях молодых ученых КГМУ в 2006, 2007 и 2008 гг., XIII национальном конгрессе «Человек и лекарство». Апробация диссертации про-

ведена на научно-практической конференции кафедр фармакологии, клинической фармакологии и фармакотерапии, внутренних болезней № 2, гистологии, анатомии человека, НИИ экологической медицины КГМУ. По материалам диссертации опубликовано 20 печатных работ, в том числе 4 работы в журналах, рекомендуемых ВАК.

Положения, выносимые на защиту

1. «Импаза» 1 таб./кг (1 таблетка на 100 мл воды, со свободным доступом к питью с учётом объема потребляемой жидкости 20±3 мл/животное/сут.) оказывает дозозависимое эндотелиопротективное действие на модели L-NAME-индуцированной NO-дефицитной ЭД. Эналаприл 0,5 мг/кг и лозартан калия 6 мг/кг однократно в течение 7 суток внутрижелудочно как монотерапия также обладали эндотелиопротективными эффектами на выбранной модели патологии.

2. Сочетанное использование препарата «Импаза» 1 таб./кг (1 таблетка на 100 мл воды, со свободным доступом к питью с учётом объема потребляемой жидкости 20±3 мл/животное/сут.) с эналаприлом 0,5 мг/кг оказывает выраженное эндотелиопротективное действие на модели L-NAME-инду.цированного дефицита NO, что выражается в снижении КЭД, а также в предотвращении снижения содержания нитрит-ионов NOx. При этом не отмечается предотвращение развития гипертензии. Результаты нагрузочных проб выявили способность комбинации предотвращать повышения адренореактивности на фоне снижения реакции на реоксигенацию. Морфологические исследования миокар-диоцитов обнаружили предотвращение под влиянием комбинации препарата «Импаза» с эналаприлом увеличения поперечного диаметра миокардиоцитов.

3. Комбинированное использование препарата «Импаза» 1 таб./кг (1 таблетка на 100 мл воды, со свободным доступом к питью с учётом объема потребляемой жидкости 20±3 мл/животное/сут.) с лозартаном калия 6,0 мг/кг оказывает эндотелиопротективное действие на модели L-NAME-индуцированного дефицита NO, выражающееся в снижении КЭД, положительной динамике результатов нагрузочных проб и морфологических исследований, а также в предотвращении снижения содержания нитрит-ионов NOx. При этом так же не отмечается предотвращение развития гипертензии.

Структура и объем работы.

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, результатов исследования, обсуждения полученных результатов, выводов и списка используемой литературы, включающего 309 источников, из них 121 отечественных и 188 зарубежных авторов. Диссертация изложена на 162 страницах машинописи, содержит таблиц - 15, рисунков - 39, схем - 1.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материал и методы исследования

Опыты проводились на белых крысах-самцах линии Wistar массой 250-300 г. N-HHTpo-L-aprHHHH метиловый эфир (L-NAME) вводился ежедневно один раз в сутки внутрибрюшинно, в дозе 25 мг/кг. На 7 день от начала экспе-

римента под наркозом (этаминал-натрия 50 мг/кг) вводили катетер в левую сонную артерию для регистрации показателей, болюсное введение фармакологических агентов осуществляли в правую бедренную вену. Показатели гемодинамики: систолическое артериальное давление (САД), диастолическое артериальное давление (ДАД) и частоту сердечных сокращений (ЧСС) измеряли непрерывно посредством датчика и компьютерной программы «Bioshell». Функциональные пробы: внутривенное введение ацетилхолина (40 мкг/кг) (Laureen J.В., 1997) и нитропрусснда натрия (30 мкг/кг) (Галаган М.Е., 1991).

Исследование сократимости миокарда после моделирования патологии проводили у наркотизированных крыс, находящихся на управляемом дыхании. Полость левого желудочка зондировали иглой через верхушку сердца и посредством датчика P23ID «Gould», США, АЦП L-154 и компьютерной программы «Bioshell» регистрировали показатели кардиогемодинамики (левожелудочковое давление (ЛЖД), максимальную скорость сокращения (+dp/dt max), максимальную скорость расслабления (-dp/dt шах), частоту сердечных сокращений (ЧСС) и интенсивность функционирования структур (ИФС) (произведение частоты сердечных сокращений и давления, развиваемого левым желудочком (мм рт.ст. х уд./мин.).

Для оценки функциональных возможностей миокарда у животных проводили нагрузочные пробы в представленной последовательности:

1. Нагрузка объёмом (внутривенное одномоментное введение 0,9% раствора NaCl, из расчёта 0,4 мл на 100 г) (Тюренков И.Н., 2005).

2. Проба на адренореактивность (внутривенное одномоментное введение раствора адреналина гидрохлорида из расчёта 0,1 мл на 100 г) (Меерсон Ф.З., 1980).

3. Нагрузка сопротивлением (пережатие восходящей аорты на 30 сек.) (Меерсон Ф.З., 1980).

4. 3-минутная гипоксия (Пашин E.H., 1993).

Биохимические маркеры эндотелиалыюй дисфункции. Нами использована модификация метода определения стабильных метаболитов NO (Ме-тельская В.А., Туманова Н.Г., 2005).

Уровень экспрессии эндотелиальной синтазы оксида азота (e-NOS) определяли в клеточном лизате по методу Хендриксона (Метельская В.А., Туманова Н.Г., 2002).

Для морфологического подтверждение развития моделируемых патологических процессов и в комплексной оценке эффективности препаратов проведено гистологическое исследование сердца (во всех сериях эксперимента), почек, надпочечников, участков брюшной и сонной артерий). Материал фиксирован в 10% формалине с последующей заливкой в парафин. Использованы окраски гематоксилином Pero и эозином для выявления ранних повреждений мио-кардиоцитов по Ван Гизон, ставилась ШИК-реакция. При морфометрии сердца использован метод раздельного взвешивания миокарда с определением индексов, определение диаметра кардиомиоцитов по методике Г.Г. Автандилова (1994). Определялись абсолютная и относительная масса надпочечников, в почках оценивался диаметр почечных телец и их клубочков.

Обоснование доз и дизайн эксперимента. Исследован препарат «Импа-за» (сверхмалые дозы антител к эндотелиальной NO-синтазе, смесь гомеопатических разведений С12+С30+С200, производства ООО «НПФ «Материа Медика Холдинг», Россия), разводился в поилках из расчёта 1 таблетка на 100 мл воды. Крысы получали препарат «Импаза» в свободном доступе к питью с учётом объема потребляемой жидкости 20±3 мл/животное/сут., что соответствует суточной дозе.

Ингибиторы АПФ эналаприла малеат «Рениприл» (производства ОАО «Фармстандарт-Лексредства», Курск) и лозартан калия «Блоктран» (производства ОАО «Фармстандарт-Лексредства», Курск) использовали в дозах 0,5 мг/кг и 6 мг/кг соответственно, что подтверждается данным доступной литературы и выявляет эффективное гипотензивное и кардиопротективное действие препаратов в экспериментах, ранее проведённых в нашей лаборатории.

В хронических экспериментах при моделировании L-NAME-опосредованного дефицита оксида азота все лекарственные вещества вводились в соответствующих дозах один раз в сутки в течение 7 дней через 30 минут после введения L-NAME.

Комбинированное использование препарата «Импаза» 1 таб./кг с эналаприла малеатом 0,5 мг/кг (внутрижелудочно) и лозартаном калия 6 мг/кг (внут-рижелудочно) проводилось по вышеописанному протоколу один раз в сутки в течение 7 дней на фоне введения L-NAME. Принятая схема соответствует основной массе экспериментальных исследований на крысах (Deng L.Y., 1993).

Достоверность наблюдавшихся при действии исследованных препаратов изменений параметров, как абсолютных, так и в приростах от исходного уровня, определяли разностным методом описательной статистики с нахождением средних значений сдвигов (М), средней ошибки средней арифметической (±ш) и вероятности возможной ошибки (р), рассчитанной с использованием t-test для групп с различной дисперсией. Различия оценивали как достоверные при р<0,05. Статистические расчеты проводились с использованием программы Microsoft Excel 2003.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

1. Динамика функциональных, биохимических и морфологических показателей при моделировании L-NAME-индуцированного дефицита NO.

Длительное, в течение 7 суток, однократное внутрибрюшинное введение L-NAME в дозе 25 мг/кг привело к стойкому повышению артериального давления (рис. 1).

Проведение функциональных проб с оценкой реакции на эндотелий-зависимое и эндотелийнезависимое расслабление показало существенные отличия в группе с L-NAME-индуцированной патологией в отличие от интактных животных. На рисунке 2а - верхняя кривая - АД систолическое, далее - АД диастолическое и ЧСС. Реакция на введение ацетилхолина характеризуется резким падением АД и брадикардией. После окончания миокардиального компонента (метка 2) АД восстанавливается. Треугольник над кривой восстановления АД рассматривался нами как площадь эндотелиальной реакции.

• Интактные

■ Ь-ИАМЕ

Рис. 1. Функциональные, биохимические и морфологические показатели при моделировании Ь-ЫАМЕ-индуцированного дефицита N0.

* - р < 0,05 в сравнении с группой интактных животных.

е-N08

АДр 247

,3*

змя

а) интактные животные

б) животные с патологией

Рис. 2. Кривые САД, ДАД, ЧСС при проведении функциональной пробы на эндотелийзависимую вазодилатациго (внутривенное введение ацетилхолина 40 мкг\кг) у интактных животных.

Треугольники над кривой артериального давления - объяснение по тексту.

На рис. 26 представлена реакция на ацетилхолин при моделировании Ь-К'АМЕ-индуцированной эндотелиальной дисфункции. При этом видно, что площадь эндотелийзависимой реакции в несколько раз меньше, чем у интактных животных.

Аналогично оценивали эндотелийнезависимую реакцию на нитропрус-сид. Обращает на себя внимание отсутствие принципиальной разницы в площадях эндотелийнезависимых реакций у интактных и опытных групп, несмотря на существенно более высокие цифры АД (рис. 3).

Рис. 3. Кривые САД, ДАД, ЧСС при проведении функциональной пробы на эндотелийзависимую вазодилатацию (внутривенное введение нитропруссида натрия 30 мкг\кг) у интактных животных.

Треугольники над кривой артериального давления - объяснение по тексту.

Математическое выражение описанного явления представлено нами в виде коэффициента эндотелиальной дисфункции (КЭД), являющегося отношени-

ем площади среднего артериального давления на нитропруссид к площади среднего артериального давления на ацетилхолин.

В наших экспериментах КЭД в группе интактных животных составил 1,1 ±0,1, при Ь-ИАМЕ-индуцированном дефиците оксида азота - в 5 раз больше: его значение составило 5,4±0,6 (рис. 1). Ь-ЫАМЕ-индуцированный дефицит оксида азота привёл к увеличению абсолютных значений ЛЖД в пробе на адре-нореактивность и снижению миокардиального резерва в пробе нагрузки сопротивлением (рис. 1). У интактных животных ЛЖД к 25 секунде снижалось до 83,6±2,1%, а у животных с Ь-МАМЕ-индуцированной патологией значительно сильнее - до 66,0±2,3%.

Характерная динамика биохимических маркеров Ь-ЫАМЕ-индуцированного дефицита оксида азота представлена на рис. 1. Так, концентрация нитрит-ионов (1МОх) у животных, получавших Ь-ИАМЕ, составила 61,2±3,6, тогда как у интактных - 114,1 ±4,1 мкМ.

Экспрессия эндотелиальной МО-синтазы (е-МОБ) сывороткой интактных животных составила 72,9±3,8 тогда как у животных, получающих Ь-ЫАМЕ, -21,4±4,7%

Подтверждением функционально-биохимических показателей, отражающих развитие Ь^АМЕ-индуцированной эндотелиальной дисфункции, явились результаты морфологических исследований (рис. 4). На представленных гистологических препаратах, рис. 4а- интактные миокардиоциты, рис. 46 - миокар-диоциты животных на 7-е сутки с Ь-ЫАМЕ-индуцированной патологией. Наглядно видно, что площадь поперечного сечения резко увеличена при сохранённом диаметре ядер при одном увеличении. Морфометрические исследования показали, что у интактных животных поперечное сечение составило 9,1±1,1, а у животных, получавших Ь-ЫАМЕ, - 18,4±1,1 мкМ (рис. 1).

Рис. 4. Морфология миокарда у интактных и опытных животных: а) гистологическая картина миокарда у интактных крыс на поперечном срезе; б) гипертрофия кардиомиоцитов и их ядер у крысы с артериальной гипертензией в модели с Ь-ЫАМЕ на поперечном срезе. Окраска гематоксилином и эозином. Рис. а, б - в 440-кратном увеличении.

Аналогично прослеживалась морфологическая картина изменений сосудистой стенки почечных артериол (рис. 5). У интактных животных (а) - клетки эндотелия расположены плоско, при Ь-ЫАМЕ-патологии (б) - сосуд спазмиро-ван, стенки утолщены, эндотелий «вздыблен».

Таким образом, ежедневное в течение 7 суток внутрибрюшинное введение Ь-ЫАМЕ 25 мг вызывает развитие эндотелиальной дисфункции, характеризующейся резким увеличением КЭД, АД, повышением адренореактивности с развитием скрытой сердечной недостаточности, характерными биохимическими сдвигами и гистологической картиной гипертрофии миокарда и гиперплазии сосудистого русла.

Рис. 5. Морфологическая картина почечных артерий у интактных и опытных животных: а) неизмененная артерия почки у интактной крысы; б) перестройка стенки почечной артерии с резким утолщением ее стенки и сужением просвета, гиперплазией эластических структур и гипертрофией гладкомышечных элементов у крысы с артериальной гипертензией в модели с Ь-ЫАМЕ. Окраска гематоксилином и эозином. Рисунок а, б - в 440-кратном увеличении.

2. Исследование эндотелиопротективной активности препарата «Им-паза», эналаприла и лозартана при Ь^АМЕ-индуцированной модели дефицита N0 в эксперименте.

Наши исследования показали, что препарат «Импаза» обладает выраженным эндотелиопротективным эффектом, превосходящим таковую у эналаприла и лозартана. Так, КЭД у интактных животных составил - 1,1 ±0,1, у Ь-ИАМЕ -5,4±0,6, Ь-Ь'АМЕ + «Импаза» - 2,1±0,2, ЫЧАМЕ + эналаприл (0,5 мг/кг) -3,2±0,3, Ь-КАМЕ + лозартан (6 мг/кг) - 2,5±0,3 (рис. 6).

Проба на адренореактивность у животных с Ь-ЫАМЕ-индуцированной патологией на фоне терапии препаратом «Импаза», эналаприлом и лозартаном также обнаружила снижение максимальных цифр левожелудочкового давления. У интактных животных - 199,2±8,3, у Ь-ЫАМЕ - 247,3±4,8, у препарата «Импаза» - 211,1 + 10,2, у эналаприла (0,5 мг/кг) - 216,2±10,8, у лозартана (6 мг/кг) -242,7±4,7 мм рт.ст. Аналогичная тенденция выявлена в пробе на нагрузку сопротивлением.

□ ДАД

Иктастые •1-ЫАЫЕ * им па за Ь^АЫЕ * поаартан

-Х- - ЫЧАМЕ ♦ »ивлаприл

Рис. 6. Влияние препарата «Импаза» ! таб./кг, эналаприла 0,5 мг/кг, лозар-тана калия 6 мг/кг на функциональные, биохимические и морфологические показатели при моделировании Ь-ЫАМЕ-индуцированного дефицита N0.

* - р < 0,05 в сравнении с группой Ь-КАМЕ животных,

** - р < 0,05 в сравнении с группой интакт-ных животных.

■ Интактные

- Ь-КАМЕ

- «Импаза» 1 таб./кг

■ Эналаприл 0,5 мг/кг

- Лозартан 6 мг/кг

Сократимость на 25 секунде нагрузки составила у интактных животных -83,6±2,1% к 5-й секунде, взятой за 100%. Ь-ЫАМЕ-индуцированная патология -66,0±2,3%, Ь-ЫАМЕ + «Импаза» - 82,9±2,9%, Ь-ЫАМЕ + эналаприл -82,7±2,8%, Ь-ЫАМЕ + лозартан - 88,3±3,1%.

На рисунке 6 представлена экспрессия эндотелиальной ЫО-синтазы в % от контроля сывороткой животных, получавших Ь-ЫАМЕ и указанные препараты. Для интактных животных показатель составил 72,9±3,8, Ь-ЫАМЕ-21,4±4,7, эналаприл (0,5 мг/кг), лозартан (6 мг/кг), соответственно 42,2±3,б, 43,3±3,8, что достоверно выше, чем у Ь-ЫАМЕ, но ниже интактных. В группе Ь^АМЕ + «Импаза» (1 таб./кг) данный показатель приближался к значениям интактных животных - 65,3±4,3. Концентрация нитрит ионов в сыворотке крови под влиянием препарата «Импаза» достоверно не отличалась от интактных. Эналаприл и лозартан не предотвращали Ь-ЫАМЕ-индуцированного дефицита оксида азота (рис. 6).

Влияние указанных препаратов на диаметр миокардиоцитов также выявило существенные преимущества препарата «Импаза» в способности предотвращать гипертрофию миокардиоцитов. Препарат «Импаза» 1 таб./кг почти полностью предотвращал увеличение поперечного диаметра миокардиоцитов. Эналаприл (0,5 мг/кг) и лозартан (6 мг/кг) заняли промежуточное положение между интактными и животными с Ь-ЫАМЕ-индуцированной патологией; однако не достигли статистически значимых различий диаметра кардиомиоцитов крыс с моделированием патологии.

Таким образом, по совокупности функциональных, биохимических, морфологических показателей, отражающих эндотелиопротективные эффекты, препарат «Импаза» проявил активность, сопоставимую или превосходящую таковую у ингибитора АПФ эналаприла и блокатора АТ1-рецепторов лозартана.

3. Изучение эндотелиопротективной активности сочетанного применения препарата «Импаза» и ингибитора АПФ при Ь-1МАМЕ-индуцированной модели дефицита N0 в эксперименте.

Сочетанное применение эналаприла (0,5 мг/кг) с препаратом «Импаза» (1 таб./кг) на фоне Ь-ЫАМЕ-индуцированного дефицита оксида азота не приводило к значительному снижению артериального давления, что так же не достигалось при монотерапии отдельно препаратом «Импаза» и эналаприлом (рис.

7).

КЭД при сочетанном использовании препарата «Импаза» и эналаприла составил 1,6±0,2, что достоверно отличается от монотерапии эналаприлом -КЭД - 3,2±0,3 и приближается к показателям у интактных животных -КЭД - 1,1±0,1 и в 3 раза отличается от Ь-ЫАМЕ-индуцированной патологии -КЭД - 5,4±0,6 (рис. 7).

Абсолютная цифра максимального ЛЖД на введение адреналина у животных, получавших эналаприл с препаратом «Импаза», составила - 194,3±7,3, что меньше, чем у эналаприла, - 216,2±10,8, и при монотерапии препаратом «Импаза» - 211,1 ±10,2, при показателе у интактных - 199,2±8,3 и с Ь-ИАМЕ-индуцированной патологией - 247,3±4,8 мм рт.ст. (рис. 7).

и

АД

1 1 1 I

190* 184. 183*

И 1 И -I"

145'

136

138

149

■ САД ОДАД

кэд

5.4**

АДр

— Интаитхыв — -и-ЫАМЕ ♦ импаза

- L-NANE » им паза ♦ эналаприл

-ЬМАМЕ

- 1-МА КЕ ♦ эналаприл

114,1

Рис. 7. Влияние комбинированного применения препарата «Импаза» 1 таб,/кг и эна-лаприла 0,5 мг/кг на функциональные, биохимические и морфологические показатели при моделировании Ь-ЫАМЕ-

индуцированного дефицита N0.

* - р < 0,05 в сравнении с группой Ь-ЫАМЕ животных,

** - р < 0,05 в сравнении с группой интактных животных.

[Щ] - Интактные

- Эналаприл 0,5 мг/кг

- Ь^АМЕ рта - «Импаза» 1 таб./кг - Эналаприл 0,5 мг/кг + «Импаза» 1 таб./кг

Аналогичная ситуация отмечалась при проведении пробы на нагрузку сопротивлением. У интактных животных показатель составил - 83,б±2,1%, L-NAME-индуцированная патология - 66,0±2,3%, «Импаза» - 82,9±2,9, соче-танное применение препарата «Импаза» и эналаприла - 89,7±2,9 (рис. 7).

Обнаружено, что комбинированное использование препарата «Импаза» 1 таб./кг с энапаприлом 0,5 мг/кг оказывает статистически значимое влияние на увеличение экспрессии e-NOS. При этом эналаприл в виде монотерапии не оказывал существенного влияния на исследуемый показатель. Концентрация нитрит-ионов (NOx) при сочетанном использовании эналаприла и препарата «Импаза» также оказалась выше, чем при монотерапии эналаприлом (рис. 7).

Морфометрия диаметра миокардиоцитов также показала преимущество комбинации эналаприла и препарата «Импаза» по сравнению с монотерапией эналаприлом. Диаметр миокардиоцитов составил в группе эналаприл + «Импаза» - 9,9±0,4, монотерапии эналаприлом - 15,2±1,0, интактных - 9,1±1,1, животных с L-NAME-индуцированной патологией - 18,5±1,1 мкм.

Таким образом, сочетанное применение ингибитора АПФ эналаприла с препаратом «Импаза», выявило существенные преимущества по сравнению с монотерапией эналаприлом по совокупности функциональных, биохимических и морфологических критериев, характеризующих выраженность и степень эн-дотелиальной дисфункции, а также сопутствующих ей признаков гипертрофии миокарда и ремоделирования сосудистого русла.

4. Изучение эндотелиопротективной активности сочетаиного применения препарата «Импаза» и блокатора ATI-рецепторов лозартана калия при L-NAME-индуцированной модели дефицита NO в эксперименте.

Сочетанное применение препарата «Импаза» (1 таб./кг) с блокатором ATI-рецепторов лозартаном (6 мг/кг) оказывало эндотелиопротективное действие на модели L-NAME-индуцированного дефицита N0 (рис. 8).

Так, при сочетанном применении лозартана с препаратом «Импаза» обнаружено увеличение эндотелиопротективного эффекта лозартана, что привело к снижению КЭД. У интактных животных КЭД составил 1,1±0,1, L-NAME -5,4±0,6, «Импаза» с лозартаном - 1,5±0,2. Однако не достигался целевой уровень АД (рис. 8). Но следует отметить некоторое снижение цифр АД.

В экспериментах на открытом сердце также обнаружена эффективность сочетанного использования препарата «Импаза» с лозартаном по сравнению с монотерапией. Так, максимальная цифра ЛЖД при комбинации в пробе на ад-ренореактивность составила 203,2±7,8, тогда как отдельно лозартан 242,7±4,7, «Импаза» - 211,1±10,2, интактные - 199,2±8,3, L-NAME - 247,2±4,8 мм рт.ст. Аналогичная ситуация обнаружена при проведении пробы на нагрузку сопротивлением. У интактных ЛЖД на 25 сек. составило 83,6±2,1%, в группе лозартан - 88,3±3,6%, «Импаза» - 82,9±2,5%, а их комбинация - 92,0±3,2%, тогда как у животных с L-NAME-индуцированной патологией - 66,0±2,3%.

Эффективность сочетанного применения препарата «Импаза» и лозартана по сравнению с монотерапией выявлена в увеличения экспрессии e-NOS (в процентах от контроля) и содержания нитрит-ионов NOx. Эти показатели были выше и достоверно не отличались от показателей интактных животных (рис. 8).

Рис. 8. Влияние комбинированного применения препарата «Импаза» 1 таб./кг и лозартана 6 мг/кг на функциональные, биохимические и морфологические показатели при моделировании Ь-ЫАМЕ-индуцированного дефицита N0.

* - р < 0,05 в сравнении с группой Ь-ЫАМЕ животных,

** - р < 0,05 в сравнении с группой интактных животных.

- Интактные

■ Ь-ЫАМЕ

■ «Импаза» 1 таб./кг

- Лозартан 6 мг/кг к§$| - Лозартан 6 мг/кг + «Импаза» 1 таб./кг

Функционально-биохимические показатели подтвердились результатами морфометрии миокардиоцитов. Средний диаметр животных, получающих комплексную терапию, 9,4±0,9 мкм, что существенно лучше, чем при монотерапии лозартаном, и достоверно не отличается от интактных животных.

Таким образом, сочетанное использование блокатора АТ1 -рецепторов ло-зартана и препарата «Импаза» оказывало эндотелиопротективное действие на модели Ь-ЫАМЕ-индуцированного дефицита N0, выражающееся в снижении КЭД, а также предотвращении снижения нитрит ионов (МОх) и динамики результатов нагрузочных проб и морфологических исследований.

ВЫВОДЫ

1. Препарат «Импаза» в дозе 1 таб./кг однократно в течение 7 суток проявлял выраженное эндотелиопротективное действие на модели Ь-ЫАМЕ-индуцированного дефицита N0, что выражалось в снижении КЭД до уровня интактных животных, а также в полном предотвращении снижения содержания нитрит-ионов ЫОх. Результаты нагрузочных проб выявили предотвращение повышения адренореактивности и исчерпание миокардиального резерва на фоне повышения реакции на реоксигенацию. Препарат «Импаза» 1 таб./кг предотвращал увеличение поперечного диаметра миокардиоцитов. Монотерапия препаратом «Импаза» в изученных дозах не позволяла достичь целевых значений артериального давления.

2. Эналаприл 0,5 мг/кг проявлял эндотелиопротективное и кардиопротек-тивное действие на модели Ь-ЫАМЕ-индуцированного дефицита N0 по совокупности функциональных, биохимических и морфологических показателей. Монотерапия эналаприлом не достигала целевых значений артериального давления.

3. Лозартан калия 6,0 мг/кг проявлял эндотелиопротективное и кардио-протективное действие на модели Ь-МАМЕ-индуцированного дефицита N0 и по совокупности функциональных, биохимических и морфологических показателей оказался, сопоставим с эналаприлом 0,5 мг/кг. Монотерапия лозартаном калия не достигала целевых значений АД.

4. Комбинированное использование препарата «Импаза» 1 таб./кг с эналаприлом 0,5 мг/кг оказывало эндотелиопротективное действие на модели Ь-ЫАМЕ-индуцированного дефицита N0, выражающееся в снижении КЭД, а также в предотвращении снижения содержания нитрит-ионов ЫОх. При этом не отмечалось предотвращение развития гипертензии. Результаты нагрузочных проб выявили способность комбинации предотвращать повышение адренореактивности на фоне снижения сократимости миокарда на пике реоксигенации. Морфологические исследования миокардиоцитов обнаружили предотвращение увеличения поперечного диаметра миокардиоцитов под влиянием комбинации препарата «Импаза» с эналаприлом.

5. Комбинированное использование препарата «Импаза» 1 таб./кг с лозартаном калия 6,0 мг/кг оказывало выраженное эндотелиопротективное действие на модели Ь-ЫАМЕ-индуцированного дефицита N0, что выражалось в снижении КЭД, а также в предотвращении снижения содержания нитрит-ионов ЫОх.

При этом не достигался целевой уровень АД, однако наблюдалось некоторое снижение цифр АД. Сходную и сопоставимую с эналаприлом (0,5 мг/кг) положительную динамику продемонстрировали результаты нагрузочных проб и морфологических исследований.

Слисок работ, опубликованных по теме диссертации

1. Методические подходы для количественной оценки развития эндоте-лиальной дисфункции при L-NAME-индуцированной модели дефицита оксида азота в эксперименте / М.В. Покровский, Т.Г. Покровская, А.С. Белоус и др. // Кубанский науч. мед. вести. - Краснодар, 2006. - № 10 (91). - С. 72-77.

2. Новый взгляд на коррекцию эндотелиальной дисфункции / А.С. Белоус, М.В. Покровский, В.И. Кочкаров и др. // Russian Journal of Immunology (Official Journal of Russian Society of Immunology): материалы Рос. науч.-практ. конф. «Современные технологии в иммунологии: иммунодиагностика и иммунотерапия». - Курск, 2006. - С. 59-63.

3. Применение препарата «Импаза» для коррекции эндотелиальной дисфункции / А.С. Белоус, Т.Г. Покровская, М.В. Покровский и др. // Биомедицина - 2006. - № 4. - С. 82-83.

4. Application of the admixture of solutions homeopathist of delutions of polyclonal rabbit antibodies to endothelial synthase nitrogen of oxide the person -C12, C30, C200., for correction of endothelial dysfunction / A.S. Belous, T.G. Pok-rovskaya, M.V. Pokrovskiy et al. // Fundamental pharmacology and pharmacy -clinical practice: Materials of the 2-nd Russian - Chenese international scientific conferences on pharmacology. - Perm, 2006. - P. 23-24.

5. Влияние смеси гомеопатических разведений аффшшо очищенных поликлональных кроличьих антител к эндотелиальной синтазе оксида азота (eNOS) С12, СЗО, С200 на показатели гемодинамики при экспериментальном моделировании эндотелиальной дисфункции / А.С. Белоус, А.И. Маяков, Н.В. Корокина, Я.И. Залозных // Университетская наука: Взгляд в будущее: сб. тр. 72-й науч. конф. КГМУ и сессии Центр.-Чернозем. науч. центра РАМН. Рос. симп. «Закономерности интеграции физиологических функций в норме и их дезинтеграции в патологии». В 3-х тт. - Курск: Изд-во КГМУ, 2007. - Т. 3. -С. 170-171.

6. Возможность использования эндотелиопротекторных адцитивов для массовой профилактики сердечно-сосудистых заболеваний / Т.Н. Зеленкова, М.В. Покровский, А.С. Белоус и др. // Междунар. науч.-практ. конф. «Теоретические и прикладные проблемы социально-правовых, медико-биологических и технико-экономических сфер жизни общества» (26-27 марта 2007 г., г. Курск). -Курск, 2007. - С. 249-252.

7. Изучение кардиопротективных эффектов смеси гомеопатических разведений поликлональных кроличьих антител к эндотелиальной синтазе оксида азота (eNOS) С12, СЗО, С200 при экспериментальном моделировании L-NAME-индуцированного дефицита оксида азота / A.C. Белоус, Т.Г. Покровская, М.В. Покровский и др. // XIV Рос. нац. конгр. «Человек и лекарство». - М., 2007. - С. 800.

8. Изучение эндотелиопротективных эффектов смеси гомеопатических разведений поликлональных кроличьих антител к эндотелиальной синтазе оксида азота (eNOS) С12, СЗО, С200 при экспериментальном моделировании L-NAME-индуцированного дефицита оксида азота / A.C. Белоус, Т.Г. Покровская, М.В. Покровский и др. // XIV Рос. нац. конгр. «Человек и лекарство». -М., 2007.-С. 348-349.

9. Кардиопротективные эффекты препарата «Импаза» при экспериментальном моделировании L-NAME-индуцированной эндотелиальной дисфункции / A.C. Белоус, М.В. Покровский, Т.Г. Покровская и др. И Клинические исследования лекарственных средств: материалы 6-й Междунар. конф. - М., 2007.-С. 17-18.

10. Кардиопротективные эффекты смеси гомеопатических разведений поликлональных кроличьих антител к эндотелиальной синтазе оксида азота (eNOS) С12, СЗО, С200 при экспериментальном моделировании эндотелиальной дисфункции / A.C. Белоус, А.И. Маяков, М.М. Корнеев, Т.И. Зеленкова // Университетская наука: Взгляд в будущее: сб. тр. 72-й науч. конф. КГМУ и сессии Центр.-Чернозем, науч. центра РАМН. Рос. симп. «Закономерности интеграции физиологических функций в норме и их дезинтеграции в патологии». В 3-х тт. -Курск: Изд-во КГМУ, 2007. -Т. 3. -С. 169-170.

11. Коррекция дисфункции эндотелия антителами к ферменту NO-синтетазе / A.C. Белоус, Т.Г. Покровская, М.В. Покровский и др. // Междунар. науч.-практ. конф. «Теоретические и прикладные проблемы социально-правовых, медико-биологических и технико-экономических сфер жизни общества». (26-27 марта 2007 г., г. Курск). - Курск, 2007. - С. 213-215.

12. Применение смеси гомеопатических разведений аффинно очищенных поликлональных кроличьих антител к эндотелиальной синтазе оксида азота (eNOS) С12, СЗО, С200 («Импаза») для коррекции эндотелиальной дисфункции / A.C. Белоус, М.В. Покровский, М.П. Гладченко, А.И. Маяков // Эндотели-альная дисфункция и сердечно-сосудистая патология: материалы III заоч. электрон. межвузов, науч. конф. - Курск: Изд-во КГМУ, 2007. - С. 38-39.

13. Эндотелио- и кардиопротективные эффекты смеси гомеопатических разведений афинно очищенных поликлональных кроличьих антител к эндотелиальной синтазе оксида азота (eNOS) С12, СЗО, С200 при экспериментальном

моделировании L-NAME-индуцированной эндотелиальной дисфункции / A.C. Белоус, М.В. Покровский, В.И. Кочкаров и др. // Кубанский науч. мед. вестн. - Краснодар, 2007. - № 1-2 (94-95). - С. 23-26.

14. Эндотелиопротективные эффекты препарата «Импаза» при длительном применении на фоне экспериментального моделировании L-NAME-индуцированной эндотелиальной дисфункции / A.C. Белоус, М.В. Покровский, Т.Г. Покровская и др. // Новый курс: консолидация усилий по охране здоровья нации: материалы II нац. конгр. терапевтов. - М., 2007. - С. 22.

15. Эндотелиопротективные эффекты препарата «Импаза» при экспериментальном моделировании L-NAME-индуцированной эндотелиальной дисфункции / A.C. Белоус, М.В. Покровский, Т.Г. Покровская и др. // Клинические исследования лекарственных средств: материалы 6-й Междунар. конф. - М., 2007.-С. 16-17.

16. Пат. 2306953 Российская Федерация, МПК7 А 61 К 39/395, А 61 Р 9/08. Способ коррекции эндотелиальной дисфункции смесью растворов гомеопатических разведений поликлональных кроличьих антител к эндотелиальной синтазе оксида азота человека - С12, С30, С200 / Покровский М.В., Покровская Т.Г., Кочкаров В.И., Артюшкова Е.Б, Белоус A.C., Зеленкова Т.И , Файтельсон A.B., Литвинов С.А.; заявители и патентообладатели Покровский М.В., Покровская Т.Г., Кочкаров В.И., Артюшкова Е.Б., Белоус A.C. - № 2006125314/14; заявл. 14.07.2006; опубл. 27.09.2007, Бюл. № 27. - 5 с.

17. Белоус, A.C. Коррекция эндотелиальной дисфункции препаратом «Импаза» в комплексе с классическими гипотензивными препаратами / A.C. Белоус // Сб. тр. II Междунар. науч. конф. молодых ученых-медиков. В 3-х гг. - Курск: Изд-во КГМУ, 2008. - Т. I. - С. 11-12.

18. Изучение кардиопротективных эффектов препарата «Импаза» в комплексе с лозартаном при экспериментальном моделировании L-NAME-индуцированного дефицита оксида азота / A.C. Белоус, Т.Г. Покровская, М.В. Покровский и др. // XV Рос. нац. конгр. «Человек и лекарство». - М., 2008. -С. 589-590.

19. Изучение эндотелиопротективных эффектов препарата «Импаза» в комплексе с лозартаном при экспериментальном моделировании L-NAME-индуцированного дефицита оксида азота / A.C. Белоус, Т.Г. Покровская, М.В. Покровский и др. // XV Рос. нац. конгр. «Человек и лекарство». - М., 2008. -С. 589.

20. Использование потенцированных антител к eNOS для коррекции дисфункции эндотелия / A.C. Белоус, Т.Г. Покровская, М.В. Покровский и др. // Материалы XIII Междунар. конгресса по реабилитации в медицине и иммуно-

реабилитации. Всемирный форум по астме (Дубай, ОАЭ 26-29 апреля 2008) // Аллергология и иммунология. - 2008. - Т. 9, № 1 - С. 153.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

АД - артериальное давление

АДр - адреиореактивность

ДАД - диастолическое артериальное давление (мм рт.ст.)

ДМ - диаметр кардиомиоцитов

кэд - коэффициент эндотелиальной дисфункции

лжд — левожелудочковое давление

НС - нагрузка сопротивлением

САД - систолическое артериальное давление (мм рт.ст.)

ЧСС - частота сердечных сокращений (уд. мин.)

e-NOS - экспрессия синтазы оксида азота

eNOS - эндотелиальная синтаза оксида азота

NOx - total NO

СТАТИСТИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ

р - уровень статистической значимости * - достоверность различий, р<0,05

Лицензия ЛР № 020862 от 30.04.99 г. Сдано в набор 24.10.2008 г. Подписано в печать 01.11.2008 г. Формат 30x42'/8 Бумага офсетная. Гарнитура Times New Rom. Печать офсетная. Усл. печ. л. 1,0. Тираж 100 экз. Заказ № 53 А Издательство Курского государственного медицинского университета 305041, г. Курск, ул. К. Маркса, 3.

В современном мире, особенно в развитых странах, артериальная гипертензия (АГ) является одним из основных факторов, повышающих инвалидизацию и смертность за счет таких грозных осложнений, как инфаркт миокарда, сердечная недостаточность и инсульт [4, 8, 24, 97, 115, 124, 246]. В России распространенность АГ среди взрослого населения превышает 30 %. Наша страна занимает одно из первых мест в Европе по смертности от инсультов и ИБС [6, 7, 22, 85, 113]. Одной из основных причин АГ является эндотелиальная дисфункция (ЭД) и в первую очередь - нарушение релаксационных свойств эндотелия [5, 9, 18, 41, 48, 57, 79, 81, 257, 285].

Эндотелий - монослой клеток, выстилающих внутреннюю поверхность сосудов и полостей сердца; играет важную роль в поддержании тонуса и структуры сосудов, локального гомеостаза и пролиферации клеток сосудистой стенки [88, 239, 263, 279, 290]. Эндотелий выполняет множество функций: секреторную, барьерную, участвует в фагоцитозе, регулирует транспорт многих биологически активных веществ (факторов роста, вазоактивных веществ, гормонов, анти- и прокоагулянтов), контролирует диффузию воды, электролитов, продуктов метаболизма [12, 38, 40, 75, 147, 189, 195].

В патогенезе и клинике атеросклерозе, артериальной гипертензии, легочной гипертензии, сердечной недостаточности, дилатационной кардиомиопатии, ожирении, сахарном диабете и их осложнений одним из важных аспектов считается нарушение структуры и функции эндотелия [12, 103, 114, 194, 207, 235, 250, 256]. При этих заболеваниях он предстает в роли первоочередного органа-мишени, поскольку эндотелиальная выстилка сосудов участвует в регуляции сосудистого тонуса, гемостаза, иммунного ответа, миграции клеток крови в сосудистую стенку, синтезе факторов воспаления и их ингибиторов, осуществляет барьерные функции [27, 28, 139, 152, 189, 191,264].

Основным механизмом, лежащим в основе ЭД является снижение образования и биодоступности оксида азота (NO), при одновременном повышении уровня супероксид аниона и продукции мощных вазоконстрикторов [70].

В настоящее время под дисфункцией эндотелия понимают дисбаланс между медиаторами, обеспечивающими в норме оптимальное течение всех эндотелийзависимых процессов [36, 70, 100, 104, 107, 195, 235, 237, 270].

При снижении выработки оксида азота активируются и перемещаются в ядро факторы транскрипции, неактивные в нормальной эндотелиальной клетке, что приводит к транскрипции генов, запускающих каскад реакций, ведущих к активации цитокинов (интерлейкина I и фактора некроза опухоли-а) и экспрессии молекул адгезии (Е-селектин, VCAM-1, ICAM-1) на поверхности эндотелиоцитов. Данные процессы стимулируют воспалительную реакцию в сосудистой стенке за счет увеличения связывания и трансэндотелиальной миграции лейкоцитов, таким образом запуская атерогенез [88, 98, 110, 117, 135, 188, 244, 269].

Патогенетическая роль эндотелиальной дисфункции доказана при ряде наиболее распространенных заболеваний и патологических состояний: атеросклерозе, артериальной гипертензии, легочной гипертепзии, сердечной недостаточности, дилатационной кардиомиопатии, ожирении, гиперлипидемии, сахарном диабете, гипергомоцистеинемии. [9, 18, 41, 48, 57, 79, 81, 84, 120, 208, 249, 257, 271, 285]. Этому способствуют такие модифицируемые факторы риска сердечно-сосудистых заболеваний, как курение, гипокинезия, солевая нагрузка, различные интоксикации, нарушения углеводного, липидного, белкового обменов, инфекция и др. [25, 63, 65, 69, 111, 142, 147, 161, 178,220].

NO синтезируется из L-аргинина, являющегося единственным природным донором оксида азота, под влиянием эндотелиальной NOсинтазы (eNOS) путем присоединения молекулярного кислорода к конечному атому азота гуанидиновой группы L-аргинина [31, 42, 142, 276, 279, 308].

К настоящему времени идентифицированы три определенные формы NOS. Это - конститутивная нейрональная изоформа (nNOS или NOS I), обнаруженная в нервной ткани центральной и периферической нервной системы [72, 134, 144, 221, 254, 273, 274]. Активность nNOS регулируется Са2+ и кальмодулином (белковый мономер, который является межклеточным посредником переноса ионов кальция). Другой конститутивный изофермент - eNOS или NOS III (также кальмодулин/Са2+-зависимый) обнаружен в сосудистых эндотелиальных клетках [146, 236, 283, 306].

И третий Са2+-независимый энзим (iNOS или NOS II)- индуцибельная форма, образующаяся в ответ на раздражение и экспрессия которой индуцируется, например, воспалением или бактериальной инфекцией - при этом ее концентрация возрастает на несколько порядков [29, 137, 145, 164, 253, 309]. Каждая NOS изоформа кодируется определённым геном и все их белки принадлежат к бис-доменовым структурам, т.е. димеризация является необходимым условием ферментативной активности каждой NOS. NOS-изоформы в значительной степени гомологичны, причём для С-концевого домена гомология характерна не только для самих изоферментов, но и для цитохрома Р-450, несколько меньшее сходство имеют N-концевые домены [281].

Фермент (eNOS) имеет второй центр, имеющий сродство к субстрату (но не участвующий в процессе окисления субстрата) и при связывании с ним стерически ингибируется взаимодействие с тем активным центром, где происходит окисление L-аргинина. В результате этого исключается возможность связывания L-аргинина с активным центром ферментом, и реализуется ингибирование каталитической активности [29].

Необходимо также отметить, что ингибиторами NOS могут быть белковые структуры (аутоаптитела) продуцируемые в ответ на токсическую гиперпродукцию оксида азота при различных патологических состояниях, таких как ранние этапы воспаления, церебральная ишемия, хронические инфекции, наследственные болезни иммунной системы (болезнь Хантингтона), ревматоидный артрит, злокачественные опухоли, диабет, септический шок, что является одним из биологических механизмов снижения патологической генерации оксида азота в организме. Такое прямое ингибирование ферментов NOS обеспечивает снижение продукции NO в сосудах при продолжительной экспозиции его доноров. В этой связи объясняется механизм биологической защиты организма от избытка NO. [150,211].

Исходя из того, что магистральным путем увеличения количества NO является повышение активности и количества eNOS и был предложен отечественный препарат «Импаза», представитель нового класса лекарственных средств - универсальных регуляторов гомеостаза, в состав которого входят потенциированные антитела к eNOS (ООО «НПФ Материа-Медика Холдинг», Россия) для коррекции эректильной дисфункции различного происхождения. Способ лечения данным препаратом заключается в активизации по механизму обратной связи выработки контрантител для ликвидации дисбаланса при сниженном количестве eNOS. Теоретической предпосылкой для создания данного препарата как раз и явилось открытие модифицирующих свойств сверхмалых доз антител к эндотелиальной NO-синтазе при их введении в организм.

В настоящее время достаточно большое внимание уделяется препарату «Импаза» для коррекции эректильной дисфункции, а вот изучение данного препарата, при экспериментальном моделировании эндотелиальной дисфункции в литературе не обнаружено.

В связи с вышеизложенным являлось актуальным изучение эндотелиопротективных свойств препарата «Импаза» и ее комбинаций с ингибитором ангиотензинпревращающего фермента (АПФ) - эналаприлом и блокатором ангиотензиновых рецепторов (AT]) - лозартаном при экспериментальном дефиците оксида азота.

Номер государственной регистрации темы - 01.2.006 10387

Цель исследования: провести оценку эндотелио- и кардиопротективных эффектов препаратов «Импаза», эналаприл, лозартан и их комбинаций на модели L-NAME-индуцированного дефицита оксида азота в эксперименте.

Для достижения поставленной цели необходимо решить следующие задачи исследования:

1. Изучить гемодинамические эффекты препарата «Импаза» на не наркотизированных животных.

2. Изучить эндотелиопротективную активность препарата «Импаза» L-NAME- индуцированной модели дефицита N0 в эксперименте.

3. Изучить эндотелиопротективную активность ингибитора АПФ — эналаприла при моделировании L-NAME индуцированной эндотелиальной дисфункции в эксперименте.

4. Изучить эндотелиопротективную активность блокатора АТ1-рецепторов лозартана при моделировании L-NAME индуцированной эндотелиальной дисфункции в эксперименте.

5. Изучить эндотелиопротективную активность сочетанного применения препарата «Импаза» и ингибитора АПФ - эналаприла при L-NAME- индуцированной модели дефицита NO в эксперименте.

6. Изучить эндотелиопротективную активность сочетанного применения препарата «Импаза» и блокатора ATI- рецепторов лозартана калия при L-NAME- индуцированной модели дефицита NO в эксперименте.

Научная новизна исследования. В работе впервые показано, что «Импаза» 1т/кг (1 таблетка на 100 мл воды, со свободным доступом к питью с учётом объема потребляемой жидкости 20±3 мл/животное/сут) оказывает эндотелиопротективное действие на модели L-NAME-индуцированной N0-дефнцитной ЭД. Эналаприл 0,5 мг/кг и лозартан калия 6 мг/кг (однократно внутрижелудочно в течение 7 суток) как монотерапия также обладали эндотелиопротективными эффектами на выбранной модели патологии. Сочетанное использование препарата «Импаза» с ингибитором АПФ эналаприлом и блокатором ATI-рецепторов лозартаном калия показало положительное эндотелиопротективное взаимодействие, выражающееся в снижении КЭД.

В работе впервые показано, что «Импаза» 1 т/кг (1 таблетка на 100 мл воды, со свободным доступом к питью с учётом объема потребляемой жидкости 20±3 мл/животное/сут) оказывает выраженное кардиопротективное действие на модели L-NAME-индуцированной NO-дефицитной ЭД, выражающееся в предотвращении повышения адренореактивности и снижения миокардиального резерва.

В работе впервые показано, что «Импаза» 1 т/кг (1 таблетка на 100 мл воды, со свободным доступом к питью с учётом объема потребляемой жидкости 20±3 мл/животное/сут) предотвращала увеличение поперечного диаметра миокардиоцитов вызванное L-NAME-индуцированной NO-дефицитной ЭД. Сочетанное использование препарата «Импаза» с ингибитором АПФ эналаприлом и блокатором ATI рецепторов лозартаном калия показало аддитивное действие на диаметр миокардиоцитов.

Научная новизна подтверждается получением одного патента РФ (RU 2306953, «Способ коррекции эндотелиалъной дисфункции смесью растворов гомеопатических разведений поликлон алъных кроличьих антител к эндотелиалъной синтазе оксида азота человека — С12, СЗО, С200).

Практическая значимость. В работе обоснована эффективность сочетанного применения препарата «Импаза» с ингибитором АПФ эналаприлом и блокатором ATI-рецепторов лозартаном калия для коррекции L-NAME-индуцированной NO-дефицитной ЭД в эксперименте. Показано, что их сочетанное использование позволяет нормализовать изменение соотношения сосудистых реакций на ацетилхолин (эндотелийзависимая вазодилатация) и нитропруссид натрия (эндотелийнезависимая вазодилатация) с увеличением коэффициента эндотелиальной дисфункции (КЭД) в 5 раз, предотвратить снижение показателей биохимических маркеров (Total NO, экспрессию NO-синтетазы), а также добиться положительной динамики морфофункциональных показателей сердечно-сосудистой системы (диаметр миокардиоцитов, прирост давления при пробе на нагрузку сопротивлением и адренореактивности, и т.д.).

Экспериментально доказано, что введение препарата «Импаза» вызывает коррекцию NO-дефицитной эндотелиальной дисфункции.

Полученные данные позволяют рекомендовать целенаправленные клинические испытания препарата «Импаза» при состояниях, сопровождающихся эндотелиальной дисфункцией.

Внедрение результатов научных исследований. Материалы диссертационного исследования, касающиеся изучения эндотелиопротективной активности стимулятора eNOS, используются и в ООО НПФ «Материа Медика Холдинг» с целью формирования представления об эндотелиопротективной активности данного препарата.

Материалы диссертационного исследования, касающиеся антигипертензивной и эндотелиопротективной активности лозартана калия «Блоктран» и эналаприла малеата «Рениприл» производства ОАО «Фармстандарт-Лексредства», включены в состав документов, поданных на регистрацию в МЗ РФ (РУ № 000084/01-2000).

Апробация работы. Материалы работы доложены на итоговых научных сессиях и конференциях молодых ученых КГМУ в 2006, 2007 и 2008 гг., XIII национальном конгрессе «Человек и лекарство». Апробация диссертации проведена на научно-практической конференции кафедр фармакологии, клинической фармакологии и фармакотерапии, внутренних болезней №2, гистологии, анатомии человека, НИИ экологической медицины КГМУ. По материалам диссертации опубликовано 20 печатных работ.

Положения, выносимые на защиту

1. «Импаза» 1т/кг (1 таблетка на 100 мл воды, со свободным доступом к питью с учётом объема потребляемой жидкости 20±3 мл/животное/сут) оказывает дозозависимое эндотелиопротективное действие на модели L-NAME-индуцированной NO-дефицитной ЭД. Эналаприл 0,5 мг/кг и лозартан калия 6 мг/кг однократно в течение 7 суток внутрижелудочно как монотерапия также обладали эндотелиопротективными эффектами на выбранной модели патологии.

2. Сочетанное использование препарата «Импаза» 1т/кг (1 таблетка на 100 мл воды, со свободным доступом к питью с учётом объема потребляемой жидкости 20±3 мл/животное/сут) с эналаприлом 0,5 мг/кг оказывает выраженное эндотелиопротективное действие на модели L-NAME-индуцированного дефицита NO, что выражается в снижении КЭД, а также в предотвращении снижения содержания нитрит-ионов NOx. При этом не отмечается предотвращение развития гипертензии. Результаты нагрузочных проб выявили способность комбинации предотвращать повышения адренореактивности на фоне снижения реакции на реоксигенацию. Морфологические исследования миокардиоцитов обнаружили предотвращение под влиянием комбинации препарата «Импаза» с эналаприлом увеличения поперечного диаметра миокардиоцитов.

3. Комбинированное использование препарата «Импаза» 1т/кг (1 таблетка на 100 мл воды, со свободным доступом к питью с учётом объема потребляемой жидкости 20±3 мл/животное/сут) с лозартаном калия 6,0 мг/кг оказывает эндотелиопротективное действие на модели L-NAME-индуцированного дефицита NO, выражающееся в снижении КЭД, положительной динамики результатов нагрузочных проб и морфологических исследований, а также в предотвращении снижения содержания нитрит-ионов NOx. При этом так же не отмечается предотвращение развития гипертензии.

Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, результатов исследования, обсуждения полученных результатов, выводов и списка используемой литературы, включающего 309 источник, из них 121 отечественных и 188 зарубежных авторов. Диссертация изложена на 162 страницах машинописи, содержит таблиц -15, рисунков - 39, схем -1.

ВЫВОДЫ

1. Препарат «Импаза» в дозе 1 таб/кг однократно в течение 7 суток проявлял выраженное эндотелиопротективное действие на модели L-NAME-индуцированного дефицита N0, что выражалось в снижении КЭД до уровня интактных животных, а также в полном предотвращении снижения содержания нитрит-ионов NOx. Результаты нагрузочных проб выявили предотвращение повышения адренореактивности и исчерпание миокардиального резерва на фоне повышения реакции на реоксигенацию. Препарат «Импаза» 1 таб/кг предотвращал увеличение поперечного диаметра миокардиоцитов. Монотерапия препаратом «Импаза» в изученных дозах не позволяла достичь целевых значений артериального давления.

2. Эналаприл 0,5 мг/кг проявлял эндотелиопротективное и кардиопротективное действие на модели L-NAME-индуцированного дефицита NO по совокупности функциональных, биохимических и морфологических показателей. Монотерапия эналаприлом не достигала целевых значений артериального давления.

3. Лозартан калия 6,0 мг/кг проявлял эндотелиопротективное и кардиопротективное действие на модели L-NAME-индуцированного дефицита NO и по совокупности функциональных, биохимических и морфологических показателей оказался, сопоставим с эналаприлом 0,5 мг/кг. Монотерапия лозартаном калия не достигала целевых значений АД.

4. Комбинированное использование препарата «Импаза» 1 таб/кг с эналаприлом 0,5 мг/кг оказывало эндотелиопротективное действие на модели L-NAME-индуцированного дефицита NO, выражающееся в снижении КЭД, а также в предотвращении снижения содержания нитрит-ионов NOx. При этом не отмечалось предотвращение развития гипертензии. Результаты нагрузочных проб выявили способность комбинации предотвращать повышение адренореактивности на фоне снижения сократимости миокарда на пике реоксигенации. Морфологические исследования миокардиоцитов обнаружили предотвращение увеличения поперечного диаметра миокардиоцитов под влиянием комбинации препарата «Импаза» с эналаприлом.

5. Комбинированное использование препарата «Импаза» 1 таб/кг с лозартаном калия 6,0 мг/кг оказывало выраженное эндотелиопротективное действие на модели L-NAME-индуцированного дефицита NO, что выражалось в снижении КЭД, а также в предотвращении снижения содержания нитрит-ионов NOx. При этом не достигался целевой уровень АД, однако наблюдалось некоторое снижение цифр АД. Сходную и сопоставимую с эналаприлом (0,5 мг/кг) положительную динамику продемонстрировали результаты нагрузочных проб и морфологических исследований.

129

Заключение

Известным фактом является то, что сосудистый гомеостаз регулируется посредством высвобождения клетками эндотелия ряда вазоактивных веществ, которые поддерживают базальный тонус сосудов, обладают ангиопротективными свойствами, подавляя пролиферацию гладкой мускулатуры сосудов, предотвращают ремоделирование сосудистой стенки, ингибируют агрегацию и адгезию тромбоцитов, лейкоцитарные взаимодействия и миграцию моноцитов, оказывают антиоксидантное действие.

Эндотелиальная дисфункция может быть определена как дисбаланс противоположно действующих начал - релаксирующих и констрикторных, прокоагулянтных и антикоагулянтных, факторов роста и их ингибиторов.

Основным механизмом, лежащим в основе ЭД является снижение образования и биодоступности оксида азота (NO), при одновременном повышении уровня супероксид аниона и продукции мощных вазоконстрикторов [70], т.е. проявляется дисбалансом между медиаторами, обеспечивающими в норме оптимальное течение всех эндотелийзависимых процессов [36, 70, 99, 103, 106, 189, 237, 237, 284].

Методы исследования функции эндотелия периферических и коронарных артерий основываются на оценке его способности продуцировать N0 в ответ на фармакологические (ацетилхолин, метахолин, брадикинин, гистамин) или физические (изменение кровотока) стимулы, а также на прямом определении уровня NO и оценке уровня косвенных показателей эндотелиальной функции (эндотелии, фактор фон Виллебранда, тканевой активатор плазминогена, тромбомодулин).

Изучение ЭД, состояния сосудистой стенки артерий у больных с сердечно-сосудистыми заболеваниями, включая АГ, и поиск возможностей лечения ЭД являются важными клиническими задачами. Усилия исследователей направлены на поиск препаратов, которые наряду с гипотензивным эффектом могли бы уменьшать выраженность ЭД и способствовать обратному ее развитию.

Вышеизложенное предопределило необходимость разработки и систематизации методологических подходов к оценке эндотелиальной дисфункции с одной стороны, и последующей оптимизации коррекции ЭД с учетом вклада в течение патологического процесса препаратов разных групп.

Так, в ходе проведенных нами исследований в эксперименте на белых крысах-самцах линии Wistar был разработан комплекс методических подходов для оценки функционального состояния эндотелия, включающий физиологические, биохимические и морфологические методы.

Физиологические методы исследования включали моделирование эндотелиальной дисфункции ежедневным в/б введением L-NAME в течение 7 суток. Механизм ингибирования выработки NO в данном случае, заключается в конкурентном ингибировании фермента eNOS аналогом L-аргинина — L-NNA. L-NAME фактически является пролекарством: в организме этот эфир гидролизуется с участием специальных ферментов — эстераз, давая активный ингибитор — L-NNA.

На восьмые сутки животных наркотизировали брали в эксперимент и на первом этапе оценивали реакции артериального давления на эндотелийзависимую (ацетилхолин) и эндотелийнезависимую (нитропруссид) вазодилатацию [23, 229].

Степень эндотелиальной дисфункции рассчитывали как коэффициент эндотелиальной дисфункции (КЭД) - отношение площадей треугольников над кривой восстановления артериального давления на нитропруссид и ацетилхолин.

Мы рассчитывали КЭД у каждого животного интактной группы и крыс после моделирования блокады NO-синтазы и получили разницу КЭД в 5 раз -соответственно 1,1 у интактных и 5,4 у животных, получавших L-NAME. Данные результаты выявили адекватность выбранной модели патологии для исследования фармакологической активности препарата «Импаза» и его комбинации с эналаприлом и лозартаном калия.

Данные факты подтвердились при определении биохимических маркеров ЭД. NO-продуцирующая функция эндотелия исследована на основании данных увеличения экспрессии e-NOS (в процентах от контроля) и содержания нитрит-ионов NOx, и обнаружено, что моделирование L-NAME-индуцированного дефицита NO приводило к резкому снижению экспрессии e-NOS и содержания нитрит-ионов (NOx), соответственно в 3,5 и 1,9 раза.

Результаты гистологических исследований обнаружили, что моделирование L-NAME-индуцированного дефицита NO на 8-е сутки приводит к яркой гипертрофии миокардиоцитов, утолщению мышечного слоя сосудистой стенки и спазму артериол, наиболее выраженному в почечных артериях, а также «вздыбливанию» эндотелиоцитов.

Подводя итог вышеизложенному, следует отметить, что предложенный методический комплекс, функциональных, биохимических и морфологических изменений, связанных с развитием дефицита NO, вследствие блокады NO-синтетазы, позволяет в достаточной степени объективно оценивать эндотелиотропное действие фармакологических агентов.

В дальнейшем с помощью вышеизложенных методологических подходов были проведены сравнительные исследования препарата «Импаза» (ООО «НПФ Материа-Медика Холдинг», Россия) содержащего смесь гомеопатических разведений поликлональных кроличьих антител к эндотелиальной синтазе оксида азота человека - С12, СЗО, С200 с традиционными антигипертензивными препаратами, в частности с ингибитором АПФ эналаприлом и блокатором ангиотензиновых рецепторов (подтип AT]) лозартаном калия.

Эти препараты считаются наиболее перспективными. В опытах на животных и клинических исследованиях показано, что тканевые эффекты ИАПФ восстанавливают функцию эндотелия, подавляют пролиферацию и миграцию ГМК, нейтрофилов и мононуклеарных клеток, снижают свободнорадикальное окисление, усиливают эндогенный фибринолиз, снижают агрегацию тромбоцитов, обладают антиатерогенным действием и стабилизируют атеросклеротические бляшки у животных [7, 26, 46, 68, 159].

Одна из возможностей воздействия на ЭД связана с восстановлением метаболизма брадикинина, нарушенного при сердечно-сосудистых заболеваниях. Блокада тканевого АПФ с помощью ИАПФ приводит не только к уменьшению синтеза AT II, но и замедляет деградацию брадикинина. Наиболее перспективны в этом отношении ИАПФ, которые обладают большей афинностью к эндотелиальной РААС (периндоприл, рамиприл, хинаприл и трандолаприл).

Одним из возможных механизмов действия этих препаратов могут быть снижение базальной и индуцированной инсулином секреции эндотелина-1 и увеличение продукции N0. Каптоприл проявил это действие в эксперименте на культуре эндотелиальных клеток, а также во время недельной терапии больных АГ и здоровых добровольцев. В эксперименте на крысах со спонтанной АГ каптоприл и цилазаприл способствовали восстановлению эндотелиальной функции, повышая продукцию релаксирующих факторов, в частности NO; при этом уровень простагландина Г2альфа оставался неизменным [271]. Кроме того, для цилазаприла было доказано положительное действие на функцию эндотелия в результате повышения выработки эндотелиального гиперполяризующего фактора [276].

Была экспериментально доказана способность рамиприла предотвращать ЭД, опосредованную действием недоокисленных липопротеидов низкой плотности. Положительный эффект связывают с накоплением в эндотелии брадикинина, что, в свою очередь, ведет к повышению продукции N0 [204]. При изучении способности эналаприла и кандесартана восстанавливать функцию эндотелия артерий брыжейки крыс со спонтанной АГ была выявлена их одинаковая эффективность в отношении

ЭД, что в последующем было доказано и в других экспериментах, в частности с каптоприлом и лозартаном [41, 154, 175, 212, 230, 271].

Как свидетельствуют литературные данные, несомненная перспективность в комплексной фармакологической коррекции эндотелиальной дисфункции наряду с препаратами с доказанной эндотелиопротективной активностью отводится препарату «Импаза», представителю нового класса лекарственных средств - универсальных регуляторов гомеостаза, в состав которого входят потенциированные антитела к eNOS (ООО «НПФ Материа-Медика Холдинг», Россия). В настоящее время данный препарат используется для коррекции эректильной дисфункции различного происхождения. Способ лечения данным препаратом заключается в активизации по механизму обратной связи выработки контрантител для ликвидации дисбаланса при сниженном количестве eNOS.

Ряд исследований свидетельствует о том, что эректильная дисфункция, представляя собой, проявление эндотелиальной дисфункции, является независимым фактором риска сердечно-сосудистых заболеваний, поскольку повреждение эндотелия сосудов считается одним из первых этапов формирования атеросклеротической бляшки [157, 179, 268, 287]. Следовательно, препарат «Импаза» (ООО «НПФ Материа-Медика Холдинг», Россия), возможно, использовать не только для лечения эректильной дисфункции, но и для коррекции эндотелиальной дисфункции.

Данный факт подтвердился результатами наших исследований. Так, «Импаза» в дозе 1 таб/кг проявлял выраженное эндотелиопротективное действие на модели L-NAME-индуцированного дефицита N0, что выражалось в преобладании эндотелийзависимого расслабления сосудов и снижении коэффициента эндотелиальной дисфункции КЭД до уровня интактных животных, а таюке в увеличении экспрессии eNOS и полном предотвращении снижения содержания нитрит-ионов NOx. Одновременно результаты нагрузочных проб выявили предотвращение повышения адренореактивности и развития скрытой сердечной недостаточности на фоне повышения реакции на реоксигенацию. Морфологические исследования миокардиоцитов обнаружили предотвращение под влиянием препарата «Импаза» 1 таб/кг увеличения поперечного диаметра миокардиоцитов у животных с L-NAME-индуцированной патологией.

Эналаприл 0,5 мг/кг и лозартан 6 мг/кг также проявили эндотелио- и кардиопротективную активность, однако уступали препарату «Импаза».

Следует отметить тот факт, что все препараты в изученных дозах не достигали заданных значений артериального давления, и следовательно, не могут рассматриваться в виде монотерапии на модели с L-NAME-индуцированной артериальной гипертензией.

Учитывая вышеизложенное определилась необходимость в изучении сочетаний препарата «Импаза» с ингибитором АПФ эналаприлом и блокатором ангиотензиновых рецепторов (подтип ATi) лозартаном калия.

Как, показали дальнейшие исследования комбинированное использование препарата «Импаза» 1 таб/кг с эналаприлом 0,5 мг/кг оказывало выраженное эндотелиопротективное действие на модели L-NAME-индуцированного дефицита N0, что выражалось в снижении коэффициента эндотелиальной дисфункции (КЭД) до уровня, близкого у интактных животных, а также в предотвращении снижения содержания нитрит-ионов NOx. Но при этом не отмечалось существенного предотвращения развития гипертензии.

Одновременно результаты нагрузочных проб выявили способность комбинации предотвращать повышение адренореактивности и развитие скрытой сердечной недостаточности на фоне снижения реакции на реоксигенацию. Морфологические исследования миокардиоцитов обнаружили предотвращение под влиянием комбинации препарата «Импаза» с эналаприлом поперечного диаметра миокардиоцитов у животных с L-NAME-индуцированной патологией.

Комбинированное использование препарата «Импаза» 1 таб/кг с лозартаном калия 6,0 мг/кг также оказывало эндотелиопротективное действие на модели L-NAME-индуцированного дефицита NO, что выражалось в снижении коэффициента эндотелиальной дисфункции (КЭД) до уровня, близкого у интактных животных, а также в предотвращении снижения содержания нитрит-ионов NOx, но при этом достоверно не достигались заданные уровни АД, однако следует отметить некоторое снижение показателей АД.

Одновременно результаты нагрузочных проб выявили способность комбинации предотвращать повышение адренореактивности и развитие скрытой сердечной недостаточности на фоне снижения реакции на реоксигенацию. Морфологические исследования миокардиоцитов обнаружили предотвращение под влиянием комбинации препарата «Импаза» с лозартаном калия поперечного диаметра миокардиоцитов у животных с L-NAME-индуцированнон патологией.

Выраженная в большей степени эндотелиопротективная активность выявлена при использовании комбинации препарата «Импаза» с лозартаном калия.