Автореферат и диссертация по медицине (14.03.06) на тему:Исследование антиульцерогенной активности производных 3-гидроксипиридина и ацилированных аминокислот в условиях НПВП-гастроэнтеропатии в эксперименте

На правах рукописи

Зорькин Михаил Викторович

ИССЛЕДОВАНИЕ АНТИУЛЬЦЕРОГЕННОЙ АКТИВНОСТИ ПРОИЗВОДНЫХ 3-ГИДРОКСИПИРИДИНА И АЦИЛИРОВАННЫХ АМИНОКИСЛОТ В УСЛОВИЯХ НПВП-ГАСТРОЭНТЕРОПАТИИ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ

14.03.06-фармакология, клиническая фармакология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

1 2 <^ЕЗ 2015

005559056

Саранск, 2015

005559056

Работа выполнена в Медицинском институте Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Мордовский государственный университет имени Н.П. Огарёва»

Научный руководитель: Усанова Анна Александровна, доктор медицинских

наук, профессор, заведующий кафедрой факультетской терапии Медицинского института ФГБОУ ВПО «МГУ им. Н.П.Огарева», г.Саранск

Научный консультант: УРаков Александр Ливиевич, доктор медицинских

наук, профессор, заведующий кафедрой общей и клинической фармакологии ГБОУ ВПО «ИГМА», г.Ижевск.

Покровский Михаил Владимирович, доктор медицинских наук, профессор, заведующий кафедрой фармакологии Медицинского института ФГАОУ ВПО НИУ «БелГУ», г. Белгород

Трубицына Ирина Евгеньевна, доктор медицинских наук, заведующий лабораторией доклинических исследований ТБУЗ г.Москвы «Московский клинический научно-практический центр Департамента здравоохранения города Москвы», г. Москва.

ГБОУ ВПО «КГМУ» Министерства здравоохранения РФ, г. Казань

Официальные оппоненты:

Ведущая организация:

Защита состоится «27» марта 2015 года в «1200» часов на заседании Д 212.117.08 при ФГБОУ ВПО «Мордовский государственный университет им. Н.П. Огарева» (430032, г. Саранск, ул. Ульянова, 26а).

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке ФГБОУ ВПО «Мордовский государственный университет им. Н.П.Огарева» (430005, г. Саранск, ул. Большевистская, 68).

Автореферат размещен на официальном сайте ФГБОУ ВПО «МГУ им. Н.П. Огарева» www.mrsu.ru и сайте ВАК Минобрнауки России

Автореферат разослан «26» января 2015 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат медицинских наук, доцент

А.Г. Голубев

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность исследования. Побочные эффекты фармакологических препаратов - актуальная проблема современной фармакотерапии. Нестероидные противовоспалительные препараты (НПВП) - это одна из наиболее часто используемых групп лекарственных средств (Насонов ЕЛ, 2005; Козлова И.В. с соавт., 2006; Макарьянц M.J1., 2007). Но их использование, даже непродолжительное, сопряжено с высокой частотой развития побочных эффектов (Ма-ев И.В., Самсонов A.A., 2006). В первую очередь это заключается в эрозивно-язвенном поражении желудочно-кишечного тракта, получившего термин НПВП - ассоциированная гастродуоденопатия, и может привести к развитию серьезных осложнений - кровотечений и перфораций (А.Е. Каратеев,

B.А. Насонова, 2008; Goldstain J.L., 2006).

Но в отличие от повреждения желудка на фоне введения НПВП, механизм поражения кишечника недостаточно изучен (Adebayo D, Bjarnason I., 2006). Гастропротекторная терапия в условиях воздействия НПВП подробно описана, но методики, обеспечивающие достаточно эффективный энтеропро-текторный эффект, все еще недостаточно разработаны (Wallace JL., 2012; Park SC et al., 2011). Причем, ингибиторы протонной помпы, наиболее эффективные в профилактике и лечении язвенного поражения желудка на фоне приема НПВП, не оказывают на кишечник защитного действия (Lanas A, Scarpignato

C., 2000) или, возможно, даже могут усугубить его повреждение (Hawkey CJ et al., 2008; Wallace JL et al., 2011; Pardi DS, Kelly СР., 2011; Wallace JL., 2012; Daniell HW., 2012).

В связи с вышесказанным особенно актуальным является поиск новых методов профилактики и лечения побочных воздействий нестероидных противовоспалительных препаратов на желудочно-кишечный тракт, включающих в себя реализацию энтеропротекторного действия.

Исследование выполнено в соответствии с тематикой научных исследований ФГБОУ ВПО «МГУ им. Н.П.Огарева» «Фармакологическая коррекция повреждающих воздействий при гипоксическом, токсическом и радиационном воздействии» (номер государственной регистрации 0120000410303).

Цель исследования: исследование энтеропротекторного и гастропротек-торного действия производных 3-гидроксипиридина (ЛХТ-1-09 и ЛХТ-2-09) и ацилированных аминокислот (ЛХТ-1-05, ЛХТ-1-06, ЛХТ-3-09, ЛХТ-4-05) в условиях моделирования эрозивно-язвенного повреждения желудочно-кишечного тракта диклофенаком и индометацином.

Задачи исследования:

1. Провести исследование профилактического гастропротекторного и энтеропротекторного действия производных 3-гидроксипиридина (ЛХТ-1-09 и ЛХТ-2-09) и ацилированных аминокислот (ЛХТ-1-05, ЛХТ-1-06, ЛХТ-3-09, ЛХТ-4-05), оценить их влияние на некоторые показатели перекисного окисления липидов в ткани желудка и кишечника в условиях индуцирования острого поражения желудочно-кишечного тракта диклофенаком.

з

2. Оценить антиульцерогенную активность производного 3-гидроксипири-дина (ЛХТ-1-09) и ацилированной аминокислоты (ЛХТ-4-05) при внутримышечном и внутрижелудочном путях введения на фоне моделирования подострого повреждения желудочно-кишечного тракта введением индометацина.

3. Исследовать влияние соединений с лабораторными шифрами ЛХТ-1-09 и ЛХТ-4-5 на содержание простагландина Е2 в плазме крови белых мышей в условиях введения диклофенака.

Научная новизна. При сравнительном исследовании антиульцерогенной активности производных 3-гидроксипиридина (ЛХТ-1-09, ЛХТ-2-09) и ацили-рованных аминокислот (соединений ЛХТ-105, ЛХТ-1-06, ЛХТ-3-09, ЛХТ-4-05) в условиях острого повреждения желудочно-кишечного тракта введением диклофенака, наиболее выраженное гастро- и энтеропротекторное действие выявлено у производного 3-гидроксипиридина ЛХТ-1-09 и производного ацилированной аминокислоты - ЛХТ-4-05. При этом отмечено, что по антиульцероген-ному действию в желудке и тонкой кишке соединения ЛХТ-1-09 и ЛХТ-4-05 превосходят деанола ацеглумат и сравнимы с 3-ГПМ в изученных дозах, а по энтеропротекторному действию в толстой кишке превосходят оба препарата сравнения.

Показано, что по антиульцерогенному действию на фоне подострого уль-церогенного повреждения желудочно-кишечного тракта введением индометацина соединение ЛХТ-1-09 превосходит препараты сравнения деанола ацеглумат и 3-гидроксипиридина малат в изученных дозах. Соединение ЛХТ-4-05 по энтеропротекторному эффекту превосходит деанола ацеглумат, при внутримышечном введении превосходит 3-гидроксипиридина малат в изученных дозах в толстой кишке, а при внутрижелудочном введении — в тонкой и толстой кишке.

Отмечено, что применение производного 3-гидроксипиридина ЛХТ-109 и производного ацилированной аминокислоты ЛХТ-4-05 также, как препарата сравнения 3-гидроксипиридина малата, способствует повышению содержания простагландина Е2 в плазме крови на фоне введения диклофенака.

Практическая значимость исследования. Полученные результаты являются экспериментальным обоснованием целесообразности дальнейшего исследования производного 3-гидроксипиридина ЛХТ-1-09 и ацилированной аминокислоты - ЛХТ-4-05 как перспективных соединений для создания новых антиульцерогенных лекарственных препаратов с лечебной и профилактической направленностью и выраженным энтеропротекторным эффектом, подтверждают перспективность дальнейших клинических исследований антиульцероген-ного действия 3-гидроксипиридина малата и деанола ацеглумата как при внутримышечном, так и при внутрижелудочном путях введения на фоне приема нестероидных противовопалительных средств.

Внедрение результатов работы. Материалы исследования внедрены в учебную и научно-исследовательскую работу кафедры фармакологии, кафедры поликлинической терапии и функциональной диагностики, кафедры факультет-

ской терапии Медицинского института ФГБОУ ВПО «МГУ им. Н.П. Огарева». По данным исследования получен Патент РФ №2435575.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Изученные производные 3-гидроксипиридина (ЛХТ-1-09 и ЛХТ-2-09) и аудированных аминокислот (ЛХТ-1-05, ЛХТ-106, ЛХТ-3-09, ЛХТ-4-05) при профилактическом введении проявляют гастро-и энтеропротекторную активность в условиях острого язвенного повреждения желудочно-кишечного тракта введением диклофенака, наиболее выраженную у соединений ЛХТ-1-09 и ЛХТ-4-05, а также ограничивают активность процессов перекисного окисления липи-дов в тканях желудка, тонкой и толстой кишки (кроме ЛХТ-1-05).

2. Лнтиульцерогенное действие соединения ЛХТ-1-09 в условиях моделирования подострого повреждения желудочно-кишечного тракта индометацином превосходит эффект деанола ацеглумата и 3-гидроксипиридина малата, анти-ульцерогенный эффект соединения ЛХТ-4-05 при внутримышечном введении более выражено, чем у деанола ацеглумата, а при внутрижелудочном - чем у деанола ацеглумата и 3-гидроксипиридина малата в изученных дозах.

3. Производное 3-гидроксипиридина ЛХТ-1-09 и производное ацилированной аминокислоты ЛХТ-4-05 способствуют повышению содержания простаг-ландина Е2 в плазме крови в условиях введения диклофенака.

Личный вклад автора. Автор лично участвовал в выборе научного направления, формулировании целей и задач, проводил анализ научных источников по теме работы, разрабатывал дизайн работы, осуществлял экспериментальное исследование, проводил анализ полученных данных и их статистическую обработку, непосредственно участвовал в проведении гистологического исследования, формулировке выводов, подготовке публикаций. При выполнении диссертационного исследования соискателем были освоены: методика моделирования острой и подострой НПВП-гастроэнтеропатии, унифицированные методики количественного изучения показателей липопероксидации, содержания простагландина Е2, методы вариационной статистики.

Апробация работы. Результаты выполненного исследования доложены на XVI и XVII Российских национальных конгрессах «Человек и лекарство» (Москва, 2010, 2011); на I международной научно-практич. конф. «Современные проблемы отечественной медико-биологической и фармацевтической промышленности» (Пенза, 2011); на науч. конф. XXXVII- ХЫ1 «Огаревские чтения» (Саранск, 2008-2014); на Х1-ХУ1И науч. конф. Медицинского института МГУ им. Н.П.Огарева «Медицинские проблемы жизнедеятельности организма в норме, патологии и эксперименте» (Саранск, 2007-2014).

Публикации: По результатам исследования опубликовано 12 работ, из них 4 работы в изданиях, рекомендованных ВАК РФ для публикации работ, представляемых на соискание ученой степени кандидата медицинских наук; получен 1 патент РФ, имеется 1 рацпредложение.

Структура и объем работы: Диссертация изложена по традиционной схеме и состоит из введения, обзора литературы, главы «Материалы и мето-

5

ды», 3 глав собственных исследований, заключения, выводов, указателя литературы и приложения. Текст изложен на 154 страницах компьютерного текста, иллюстрирован 45 рисунками и 19 таблицами. Список использованной литературы включает 198 источников (71 отечественный и 127 иностранных).

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ В работе исследовались отечественные оригинальные органические соединения, синтезированные специалистами Всероссийского научного центра по безопасности биологически активных веществ под руководством лауреата Государственной премии РФ, доктора химических наук, профессора С.Я. Скачи-ловой (ВНЦ БАВ, Старая Купавна, Россия, директор Н.М.Митрохин)

В работе исследовались производные 3-гидроксипиридина: соединения с лабораторными шифрами ЛХТ-1-б9и ЛХТ-2-09.

СН3

N * R

Рис.1. Общая структура производных З-гидроксипиридина.

В работе исследовались производные ацилированных аминокислот: соединения с лабораторными шифрами ЛХТ-1-05, ЛХТ-1-06, ЛХТ-3-09 и ЛХТ-4-05.

Ri -СО - NH -СН-СООН

I

Up» V_R_)

Ацильная группа Аминокислота Рис.2. Общая структура ацилированных аминокислот

В качестве препаратов сравнения был выбран деанола ацеглумат - N-ацетил-Ь-глютамат 2 (диметиамино) этанола - также созданный на базе ВНЦ БАВ, по химической структуре близкий к естественным метаболитам мозга (ГАМК, глутаминовая кислота), проявляющий антиоксидантное, ноотропное (Александровский Ю.А. с соавт., 2004, Попов Ю.В., 2006), антиульцерогенное действие в условиях эрозивно-язвенного поражения желудочно-кишечного тракта НПВП (Зорькина A.B. с соавт., 2007; Кияйкина О.М., 2008, Ивянская Е.В., 2010), а также при стрессорной модели язвообразования (Блинова Е.В. с соавт., 2012). В качестве второго препарата сравнения использовался 3-гидроксипири-дина малат (3-ГПМ) (по химической структуре 2-этил-6-метил-3-гидроксипи-ридина гидроксибутандиоат). Препарат синтезирован на базе ВНЦ БАВ, проявляет антиоксидантное, мембранопротекторное, антигипоксическое (Сернов Л.Н.с соавт., 2009; Березовская И.В. с соавт., 2010) и антиульцерогенное действие (Блинов Д.С. с соавт., 2011), запатентован под названием «этоксидол». В работе

б

использовалась субстанция 3-гидроксипиридина малата и 20% раствор деанола ацеглумата, любезно предоставленные профессором С.Я.Скачиловой.

Кроме того, в качестве повреждающих агентов в работе были использованы индометацип и диклофенак. Индометацин — 1- (пара-Хлорбензоил) - 5-метокси-2-метилиндол-З-уксусная кислота - один из наиболее активных НПВП, ингибитор биосинтеза простагландинов. Диклофенак - натриевая соль 2-(2,6-дихлор-фспиламино)феиилуксуспой кислоты), противовоспалительное средство, обладает анальгетическим и жаропонижающим свойствами.

2.2. Характеристика экспериментального материала

Исследования проведены в центральной научно-исследовательской лаборатории Медицинского института Мордовского государственного университета в соответствии с «Международными рекомендациями по проведению медико-биологических исследований с использованием животных» (1985 г.) и «Правилами лабораторной практики в Российской Федерации» (приказ МЗ и СР РФ № 708п от 23.08.2010 г.). Эксперименты выполнены на 67 белых нелинейных мышах и 190 белых нелинейных половозрелых крысах обоего пола массой 200-250 г., из ФГУП «Питомник лабораторных животных «Рапполово» РАМН, содержащихся в стандартных условиях вивария. Все Эксперименты выполнялись в дневное время.

Первый раздел исследования (п=128) включал оценку профилактической антиульцерогенной активности новых соединений в условиях моделирования острой НПВП-гастроэнтеропатии у крыс в/м введением диклофенака (50 мг/кг) в течение двух суток. Животным, составившим контрольную группу, не вводили каких-либо корригирующих препаратов или соединений (п=12). В опытных группах животным предварительно с 1 по 5 сутки эксперимента один раз в день вводилось в/м одно из исследованных соединений: производные 3-гидроксипиридина ЛХТ-2-09 (32,6 мг/кг, п=12) и ЛХТ-1-09 (31 мг/кг, (п=12); производные ацилированных аминокислот J1XT-1-05 (41 мг/кг, п=12), J1XT-4-05 (25 мг/кг, п=8), ЛХТ-3-09 (41,2 мг/кг, п=12), ЛХТ-1-06 (30,2 мг/кг (п=12). Животные, составившие группы сравнения, получали в/м деанола ацеглумат (250 мг/кг, п=12) или 3-гидроксипиридина малат (25 мг/кг, п=12). Диклофенак вводился па 5 и 6 сутки эксперимента в вышеуказанной дозе. Оценка результатов проводилась на 7 сутки опыта.

Во втором разделе экспериментов исследовалось антиульцерогенное действие производных 3-гидроксипиридина и ацилированных аминокислот в условиях моделирования подострого поражения желудочно-кишечного тракта курсовым (в течение 5 суток) внутрижелудочным введением индометацина (10 мг/кг) белым крысам (п=76) зондовым способом (Зорькина A.B. с соавт., 2004; Трубицина И.Е., Чикунова Б.З., 2007) в нашей модификации. Животным серий сравнения и опытных групп исследуемые препараты и соединения вводились в те же сроки не ранее, чем через 60 минут после введения индометацина (табл. 2.2.). В сериях сравнения подопытным животным вводились деанола ацеглумат 250 мг/кг внутримышечно или внутрижелудочно и 3-гидроксипиридина малат

25 мг/кг в/м внутримышечно или внутрижелудочно (п 1.4=8). В четырех опытных сериях животные получали производное 3-гидроксипиридина ЛХТ-1-09 внутримышечно (п=8) или внутрижелудочно (п=8) и производное ацилирован-ной аминокислоты ЛХТ-4-05 внутримышечно (п=8) или внутрижелудочно (п=8). Контрольную группу составили 12 животных.

Выведение из опыта осуществлялось декапитацией после предварительного в/б введения тиопентала натрия (50 мг/кг).

Желудочно-кишечный тракт вскрывался на всем протяжении. Повреждение оценивалось визуально в соответствии с методикой Н.Е. Чернеховской с соавт. (2006). В желудке оценивались количество язв и их площадь, проводилась оценка площади и количества глубоких и поверхностных язв, а также площади и количества язв с признаками кровотечения. Рассчитывалась доля глубоких язв и язв с признаками кровотечения от общих показателей язвенного поражения желудка. Определялась частота язвообразования. В тонкой кишке оценивалась общая площадь и количество язв, язв с признаками кровотечения, прободных язв. Проводился расчет количества и площади язвенного поражения на 1 см длины кишки, расч'ет доли язв с гемосидерином и прободных язв от общих показателей язвенного поражения. В толстой кишке оценивалось количество и площадь язвенного поражения, количество и площадь язв с тромбами.

В тканях желудка, тонкой и толстой кишки оценивались содержание малонового диальдегида (МДА) при спонтанном и активированном железом окислении (РеМДА), оценивалась активность катапазы. Проводился расчет антиокислительной активности (АОА= РеМДА-МДА) и резерва липидов для пе-рекисного окисления (РЛПО= (РеМДА-МДА)/МДА х 100 %)) (КузьменкоД.И., Лаптев Б.И., 1999).

После вскрытия кусочки тонкой, толстой кишки и желудка погружали в раствор нейтрального формалина (10%), затем заключали в парафин. Окраску срезов производили гематоксилином и эозином. Изменение гистологической картины оценивали методом световой микроскопии.

Третий раздел исследования выполнен на 67 мышах, поставлено пять групп экспериментов. Животные контрольной группы (п=10) получали в/м введение диклофенака в дозе 50 мг/кг внутримышечно в течение 3 суток. В серии сравнения и опытных сериях предварительно вводился препарат сравнения 3-гидроксипиридина малат (42,9 мг/кг, п=8) или исследуемые соединения: производное ацилированной аминокислоты ЛХТ-4-05 (42,9 мг/кг, п=7) или производное 3-гидроксипиридина ЛХТ-1-09 (53,14 мг/кг, п=8) внутримышечно ежедневно в течение 7 суток. С 5 по 7 сутки эксперимента вводился диклофенак в дозе 50 мг/кг в/м. Дозы исследуемых соединений рассчитывались с учетом межвидового переноса доз, исходя из используемых на предыдущих этапах исследования. Интактную группу составили 8 животных.

После выведения подопытных животных из эксперимента на 8-е сутки опыта кровь собиралась в пробирки с предварительно введенным для стабили-

зации гепарином 0,01 мл, центрифугировалась в течение 10 мин при скорости 3000 оборотов в минуту. Плазма замораживалась для хранения и одномоментного определения содержания простагландина Е2, которое оценивалось методом иммуноферментного анализа с использованием набора реактивов .Mouse Prostaglandin E2,PG-E2 ELISA Kit / ИФА набор Mouse Prostaglandin E2,PG-E2 ELISA Kit (Производство-.Cusabio).

Статистическая обработка результатов проведена с использованием программы «Statistica 6.0». Для выборок вычисляли среднее арифметическое (М) и среднюю квадрашческую ошибку (т), представляя данные в виде М±ш. Уровень статистической значимости различий между независимыми выборками определяли с помощью параметрического критерия (t-критерия Стыодента) и непараметрического критерия х (Кулаичев А.П., 2006). ОСНОВНЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

В контрольной группе животных на фоне моделирования острого язвенного поражения ЖКТ введением диклофенака наблюдалась гибель 25% животных. К моменту завершения эксперимента доля глубоких язв в желудке составила 80% по количеству и 96% по площади, доля язв с кровотечением - 78% и 93% соответственно. У всех животных отмечались признаки кровотечения в желудке, тонкой и толстой кишке, прободные язвы в тонкой кишке (табл.1, 2). Количество прободных язв составило 8,25±0,88, площадь - 22,91±3,06 мм2, язв с кровотечением - 40,0±6,84 и 318,8±95,5 мм2, общее количество и площадь язв - 1,36±0,14 и 7,31±1,39 мм2/см. В толстой кишке количество язв с кровотечением составило 0,75±0,25, площадью 1,63±0,53 мм2, а общее количество и площадь язв достигли 29,25±2,22 и 320,2±26,7 мм2 соответственно. 91% от площади язв составили язвы с тромбами. Повреждение ЖКТ подтверждалось гистологически.

В условиях профилактического введения препаратов сравнения и всех изученных соединений при последующем моделировании острого повреждения желудочно-кишечного тракта диклофенаком не наблюдалось гибели подопытных животных. Профилактическое введение препарата сравнения деанола ацег-лумата уменьшало количество (до 44%, р<0,05) и площадь (до 39%, р<0,001) язв в желудке с кровотечением (табл.2). В тонкой кишке достоверно уменьшалось количество язв (на 48%), площадь (на 83%), количество и площадь прободных язв (на 97% и 96%), количество и площадь язв с кровотечением (на 73% и 91%), снижалась частота развития прободных язв (у> 11,813, р<0,019). В толстой кишке площадь язвенного поражения уменьшалась на 46% (до 171,6±8,6 мм , р<0,05), но общее количество язв при этом возросло на 44% (р<0,05). Признаков свежего кровотечения ни у одного животного не наблюдалось, количество язв с тромбом сократилось на 32% (с 19,0±2,3 до 13,0±2,6, р<0,05), а их площадь - на 68% (с 292,0±27,9 мм2 до 93,63±19,96 мм2, р<0,05).

Профилактическое введение препарата сравнения 3-ГПМ снижало частоту кровотечения из язв желудка до 25% (Х2=11,813, р=0,019), количество язв с кровотечением - до 5,6% (р<0,001), площадь - до 1,4% (р<0,001), общую площадь язв - до 27% от соответствующего показателя контроля (р<0,001), площадь глу-

боких язв желудка - до 22% (р<0,001), а количество - до 49% (р<0,05). Предотвращалось развитие кровотечения и прободных язв в кишечнике (х2=21,0, р<0,001). Площадь и количество язв в тонкой кишке уменьшались до 8% (0,577±0,142 мм2/см, р<0,001) и до 40% (0,537±0,125 язв/см, р<0,05) от данных контроля. В толстой кишке наблюдалось сокращение площади язв до 26% от показателей контроля (82,16±5,43, р<0,001).

Таблица 1.

Влияние производных 3-гидрокеипиридина и ацилированных аминокислот на язвообра-_зование в желудочно-кишечном тракте на фоне введения диклофенака (п )

Серия п Летал ь- таль- ность Желудок Тонкая кишка Толстая

Язвы с кровотечением Глубокие язвы Прободные С кровотечением С кровотечением С тромбом

Контроль 12 3 9 9 9 9 9 9

ДА 12 0 12 12 3 л 10 0Л 10

3-ГПМ 12 0 Зд 12 О4 0*л 0Д 0*Д

ЛХТ 109 12 0 1*д 9 о4 6 0Л 0*л

ЛХТ 209 12 0 9 12 зл 12# ол 0*4

ЛХТ 105 12 0 9 12 ол Ш 0Л 12#

ЛХТ 106 12 0 9 12 ол 7# 5 0*4

ЛХТ 309 12 0 3*А 12 9 П 7# ол 0*4

ЛХТ 405 8 0 2*д 6 0Л 0*л ол 0*4

Примечание: Д - достоверность различия р<0,05 по критерию ч по сравнению с контролем, * - по сравнению с деанола ацеглуматом, # - по сравнению с 3-ГПМ.

По сравнению с деанола ацеглуматом изученные производные 3-гидроксипиридина (ЛХТ-1-09 и ЛХТ-2-09) по гастропротекторному действию при профилактическом введении превосходили препарат сравнения в изученных дозах, достоверно снижая частоту кровотечения из язв желудка (ЛХТ-1-09), а также снижая общую площадь язв (на 44% и 30%, р<0,05), площадь глубоких язв (на 65% и 43%, р<0,05), количество глубоких язв (на 61% и 33%, р<0,05), количество язв с кровотечением (на 92% - ЛХТ-1-09, р<0,05) и площадь (на 95,5% и 54%, р<0,05) соответственно по сравнению с данными при введении деанола ацеглумата.

Из изученных производных ацилированных аминокислот соединение ЛХТ-1-05 не отличалось по профилактическому'гастропротекторному действию от деанола ацеглумата в изученных дозах. Гастропротекторная активность остальных изученных производных ацилированных аминокислот была выше, чем у препарата сравнения. Так, на фоне введения соединения ЛХТ-1-06 площадь глубоких язв была меньше на 62% (р<0,001),; соединения ЛХТ-3-09 общая площадь язв (р<0,05) была меньше на 41% (р<0,05), количество и площадь глубоких язв - на 44% (р<0,05) и 64% (р<0,05) соответственно, количество и площадь язв с гемосидерином - на 87,5% (р<0,05) и 74% (р<0,05), снижалась частота развития кровотечений (х2=14,4, р=0,006) по сравнению с показателями серии, где вводился деанола ацеглумат. В опытной серии с профилактическим введением соединения ЛХТ-4-05 на 59% была меньше общая площадь язв (р<0,05), на 53% - количество (р<0,05) и на 65% - площадь глубоких язв

(р<0,05), а также на 87,5% было меньше количество (р<0,05) и на 93% - площадь язв с кровотечением (р<0,05), снижалась частота кровотечений из язв желудка (х2=12,857, р=0,012) по сравнению с данными.при введении деанола ацеглумата.

. Таблица 2.

Влияние производных З-гндроксшшридина и ацилированных аминокислот на процессы новообразования в желудке при моделировании острого поражения ЖКТ введением диклофенака 50 мг/кг (М±т)

Общее кол-во язв

Показатели

Контроль

Общая площадь язв Кол-во глубоких язв

Плошадь глубоких язв

Кол-во по-верхи. язв

Плошадь 110-верхн.язв

Кол-во язв с гсмосид.

Плошадь язв с гемоснд.

5,75± 0,80

29,7± 2,0

4,63± 0,53

28,4± 2,2

з-гпм

5,50± 038

8,08± 0,62°

2,25± 031°

1,13±

0,48

1,28± 0,50

4,50± 0,46

27,5± 2,5

6,31± 1,02°

3,25± 0,37°

2,43± 0,42

0,250± 0,164°

0375± 0,263°

ДА

9,00± 0,66#

24,2± 2,8#

4,50± 034#

203± 2,6#

лхт-

1-09

5,00± 0,53*

13,52± 1,11°#*

1,75± 0,45°*

4,92± 0,60°

3,87± 0,44°

2,00± 035°#

8,37± 1,29°#

7,14±

131°*

ЛХТ-2-09

6,00± 038*

16,90± 1,56°*#

3,00± 038*

3,2 5± 037°

638± 1,43°#

0,167± 0,167°*

0375± 0375°*

11,63± 1,62°*#

лхт-

1-05

7,25± 1,05

27,6± 4,7#

3,50± 1,22

20,63± 5,51#

3,00± 0,27*

5,27± 0,74°#

1,50± 0,42#

3,87± 1,19°*#

3,75± 0,36°

6,93± 130°#

2,13± 0,81

9,50± 2,99

лхт-1-06

8,25± 1,33

17,01± 1,01°#

3,50± 0,53

7,76± 0,99°*

4,75± 0,90°

ЛХТ-3-09

4,25± 0,46*

14,15± 1,54°*

2,50± 0,36°*

7,33± 1,00°*

9,25± 1,71°*#

1,75± 0,59#

4,63± 1,22°#

1,75± 0,25*#

6,03± 1,00#

лхт-

4-05

4,38± 0,50*

9,92± 1,17°*

2,13± 0,52°*

7,06± 1,67°*

2,25± 0,164*

0,25± 0,13°*

2,17± 1,19°*

3,47± 0,50°

0,25± 0,16°*

0,563± 0,395°*

Примечание: ° -достоверность различия, рассчитанная по сравнению с данными контрольной группы р<0 05; # - с соответствующими показателями серии с введением 3-гидроксипиридш,а малага (З-ГПМ); * - по сравнению с данными серии с введением деанола ацеглумата (ДА).

По профилактическому энтеропротекторному -действию из производных ацилированных аминокислот соединение ЛХТ-3-09 уступало деанола ацеглу-мату, не сокращая частоту развития прободных язв. Хотя количество и площадь язв с кровотечением были достоверно меньше, чем в серии с введением деанола ацеглумата, на 88% (р<0,05) и 75% (р<0,05), но при этом количество прободных язв и их площадь, а также общая площадь язв были достоверно больше, чем в серии сравнения. Соединения ЛХТ-1-05, ЛХТ-1-06 и ЛХТ-4-05 полностью предотвращали развитие прободных язв, в отличие от серии сравнения с введением деанола ацеглумата. Но в опытной серии с введением ЛХТ-1-05 было достоверно больше количество язв с кровотечением (р<0,05), ЛХТ-106 -больше количество язв и общая площадь язв (р<0,05). То есть, из производных ацилированных аминокислот по энтеропротекторному действию препарат сравнения деанола ацеглумат превосходило только соединение ЛХТ-4-05 по влиянию на основные показатели язвообразования, предотвращая не только развитие прободных язв в тонкой кишке, но и язв с кровотечением, а также в

большей степени, чем деанола ацеглумат (в 2 раза), сокращая общую площадь язв тонкой кишки.

По сравнению с деанола ацеглуматом из производных 3-гидроксипири-дина по энтеропротекторному действию в тонкой кишке соединение ЛХТ-2-09 уступало препарату сравнения: достоверно больше были показатели количества язв и общей площади язв, чем на фоне введения деанола ацеглумата (р<0,05). Соединение ЛХТ-1-09 превосходило препарат сравнения деанола ацеглумат в изученных дозах, полностью предотвращая развитие прободных язв, в большей степени сокращая количество (на 98%, р<0,05) и площадь (на 98%, р<0,05) язв с кровотечением, и общую площадь язв (на 57%, р<0,05) по сравнению с показателями на фоне введения деанола ацеглумата. По энтеропротекторному действию в толстой кишке соединения ЛХТ-1-09, ЛХТ-2-09, ЛХТ-3-09 и ЛХТ-4-05 превосходили деанола ацеглумат, полностью предотвращая развитие кровотечений и образование язв с тромбом.

По сравнению с 3-ГПМ в изученных дозах по профилактическому гас-тропротекторному действию в условиях модели №1 производные ацилирован-ных аминокислот ЛХТ-1-05, ЛХТ-1-06 и производное 3-гидроксипиридина ЛХТ-2-09 уступали препарату сравнения, не влияя на частоту развития кровотечений из язв желудка и в меньшей степени сокращая основные показатели яз-вообразования. Соединения ЛХТ-4-05, ЛХТ-3-09 и ЛХТ-1-09, как и препарат сравнения 3-ГПМ, в изученных дозах достоверно сокращали частоту развития кровотечений из язв желудка. При этом в серии с профилактическим введением соединения ЛХТ-309 общая площадь язв была на 75% больше, чем в серии сравнения (р<0,05), а площадь поверхностных язв - в 2,5 раза (р<0,05). Соединение ЛХТ-4-05 в той же степени, что и препарат сравнения, снижало общую площадь язв, количество и площадь глубоких язв, количество и площадь язв с признаками кровотечения. Кроме того, на фоне введения соединения ЛХТ-4-05 общая площадь язв была на 30% меньше, чем в серии с введением соединения ЛХТ-3-09 (р<0,05). Производное 3-гидроксипиридина ЛХТ-1-09 в той же степени снижало основные показатели язвообразования, что и препарат сравнения 3-ГПМ, хотя общая площадь язв в желудке была больше, чем в серии сравнения, на 54% (р<0,05), но в опытной группе у 25% животных не обнаруживалось глубоких язв. Гистологически также картина желудка в опытных сериях с введением соединений ЛХТ-1-09 и ЛХТ-4-05 была сходной с группой, получавшей 3-ГПМ в изученных дозах.

По сравнению с 3-ГПМ по энтеропротекторному действию в тонкой кишке соединения ЛХТ-2-09 и ЛХТ-3-09 уступали" препарату сравнения, не предотвращая полностью развития прободных язв, а также достоверно превышая основные показатели серии сравнения, характеризующие язвообразование в тонкой кишке. Соединения ЛХТ-1-09, ЛХТ-1-05, ЛХТ-1-06 предотвращали развитие прободных язв, но достоверно не снижали частоту развития кровотечений. При этом только показатель опытной группы с введением соединения ЛХТ-1-09 не носил достоверного отличия от данных серии сравнения с введением 3-ГПМ. В опытных группах, где профилактически вводились соединения ЛХТ-1-

05 и ЛХТ-1-06 в изученных дозах частота развития кровотечений была достоверно больше, чем в серии сравнения. Кроме показателей количества и площади язв с кровотечением на фоне введения соединения ЛХТ-1-05 была достоверно больше общая площадь язв (р<0,05), а на фоне введения ЛХТ-106 - количество и общая площадь язв (р<0,05) по сравнению с показателями серии, где вводился 3-ГПМ. Соединение ЛХТ-1-09 не предотвращало полностью развития кровотечения из язв тонкой кишки, но количество и площадь язв с признаками кровотечения снижались настолько, что не носили достоверного отличия от показателей серии с введением 3-ГПМ. Полностью предотвращало развитие язв с кровотечением и прободных язв в тонкой кишке только соединение ЛХТ-4-05, а также не уступало по влиянию на показатели язвообразования действию препарата сравнения 3-гидроксипиридина мал ату в изученных дозах.

По энтеропротекторному действию в толстой кишке по сравнению с 3-ГПМ в серии с введением соединения ЛХТ-2-09 величина общей площади язв в толстой кишке была достоверно больше, в серии с профилактическим введением соединения ЛХТ-3-09 все показатели язвообразования в толстой кишке не носили достоверного отличия от данных серии сравнения. Профилактический энтеропротекторный эффект соединения ЛХТ-1-09 и соединения ЛХТ-4-05 превосходил активность 3-ГПМ в изученных дозах: в опытных сериях в большей степени уменьшалась общая площадь язв (на 31% и 36% соответственно, р<0,05).

В ткани желудка все изученные соединения оказывали антиоксидантное действие, снижая содержание вторичных продуктов ПОЛ: МДА и РеМДА. Наиболее выраженным снижение показателей было на фоне введения соединений ЛХТ-1-06 и ЛХТ-2-09: МДА до 22% и 14%, РеМДА - до 28% и 26% от контрольных данных. При этом соединение ЛХТ-1-05 достоверно не влияло на содержание изученных вторичных продуктов ПОЛ в ткани желудка. Препарат сравнения 3-ГПМ, соединение ЛХТ-3-09, ЛХТ-4-05 и ЛХТ-1-09 оказывали примерно равное действие на показатели, снижая содержание МДА до 54-58%, а содержание РеМДА - до 56-73% (рис. 3).

Активность процессов ПОЛ в опытных сериях ограничивалась за счет напряжения антиоксидантой защиты тканей желудка. Во всех опытных сериях, кроме группы с введением ЛХТ-1-05, регистрировалась активация катапазы от 79% (ЛХТ-1-09) до увеличения в 5 (соединение ЛХТ-1-06, ЛХТ-2-09) и 7 раз (ЛХТ-3-09). АОА возрастала в большей степени в серии с введением соединения ЛХТ-1-09 (в 2 раза). Величина РЛПО достоверно возрастала на фоне введения соединения ЛХТ-1-06 (в 2,6 раза), ЛХТ-1-09 (в 3,3 раза), ЛХТ-4-05 (в 3,1 раза). Единственная группа, в которой наблюдалось снижение антиокислительного потенциала ткани желудка — это группа с профилактическим введением соединения ЛХТ-1-05: АОА уменьшалась на 59%, РЛПО - на 62% от соответствующих показателей контрольной группы (рис. 3).

В ткани тонкой кишки все изученные соединения, кроме ЛХТ-1-05, снижали содержание МДА и РеМДА в условиях индукции язвообразования дик-лофенаком. В большей степени уменьшение величины показателей регистриро-

валось в группах с введением соединений ЛХТ-1-06, ЛХТ-2-09, которое соответствовало динамике группы сравнения с применение 3-ГПМ в изученных дозах. Активность каталазы в группах с введением соединения ЛХТ-1-05 достоверно снижалась на 37%. В остальных опытных сериях наблюдалась активация фермента в тканях тонкой кишки, наиболее выраженная в сериях с введением соединений ЛХТ-2-09 (в 3,9 раза), ЛХТ-3-09 (в 3,8 раза), ЛХТ-1-06 (в 4,5 раза) по сравнению с контрольными данными. Рост расчетных показателей, отражающих антиокислительный потенциал ткани тонкой кишки, наблюдался также во всех опытных сериях, кроме группы, где вводилось соединение ЛХТ-1-05. При этом регистрировался рост РЛПО в 2 раза (ЛХТ-1-06, ЛХТ-1-09), в 2,3 раза (ЛХТ-2-09, ЛХТ-4-05). АОА увеличивалась на фоне введения ЛХТ-1-09 на 60%, ЛХТ-4-05 - на 65%.

Контроль ДА 3-ОПМ ЛХТ-1-05 ЛХТ-1-06 ЛХТ-1-09 ЛХТ-3-09 ЛХТ-2-09 ЛХТ-4-05

г*

□ Каталаза

■а«

??1°

ш

493-

л#

-544=

-343-

П.

Контроль ДА 3-ОПМ ЛХТ-1-05 ЛХТ-1-06 ЛХТ-1-09 ЛХТ-3-09 ЛХТ-2-09 ЛХТ-4-05

Контроль

3-ОПМ ЛХТ-1-05 ЛХТ-1-06 ЛХТ-1-09 ЛХТ-3-09 ЛХТ-2-09 ЛХТ-4-05

Рис. 3. Влияние производных 3-гидроксипиридина и ацилированных аминокислот в изученных дозах на некоторые показатели перекисного окисления липидов в гомоге-натах желудков белых крыс на фоне моделирования язвообразования введением дик-лофенака; А -достоверность различия р<0,05 по сравнению с соответствующими данными контрольной группы. * - к деанола ацеглумату, # - к 3-ГПМ.

Сходная динамика изученных показателей ПОЛ наблюдалась и в ткани толстой кишки. В опытной группе с профилактическим введением соединения ЛХТ-1-05 содержание МДА и РеМДА не отличалось от контрольных данных. В остальных группах наблюдалось уменьшение показателей, составившее в серии с введением ЛХТ-2-09 - 86% и 75%, ЛХТ-1-06 - 75% и 72%, ЛХТ-3-09 - 49% и 40%, ЛХТ-1-09 - 45% и 25% соответственно. В опытной группе с введением ЛХТ-4-05 достоверное снижение уровня МДА составило 43%. Активация каталазы (более чем в 4 раза) регистрировалась в сериях с введением ЛХТ-1-06,

14

ЛХТ-2-09, ЛХТ-3-09 и была примерно одинаковой с показателями группы сравнения, где применялся 3-ГПМ в изученных дозах. Не наблюдалось роста активности фермента в сериях с введением соединений ЛХТ-1-05 и ЛХТ-1-09. Рост РЛПО регистрировался во всех опытных группах и был наиболее выраженным на фоне введения ЛХТ-2-09 (в 26 раз), ЛХТ-1-09 и ЛХТ- 4-05 (в 12 раз).

Таким образом, влияние изученных соединений на процессы ПОЛ и ан-тиоксидантной защиты ткани желудка и кишечника может быть одним из механизмов реализации их противоязвенного действия, но не объясняет полностью разницы в их эффекте.

Во второй экспериментальной модели, где воспроизводилось подострое НПВП-ассоциированное повреждение желудочно-кишечного тракта курсовым введением индометацина, наблюдалась гибель 20% животных. У всех животных контрольной группы в тонкой кишке регистрировались прободные язвы и язвы с признаками кровотечения (табл.3). При этом отсутствовало достаточно выраженное повреждение слизистой оболочки желудка.

В серии сравнения с внутримышечным введением 3-ГПМ в дозе 25 мг/кг прободные язвы регистрировались у 3 из 8 животных в группе (х =8,654, р=0,070), предотвращалось развитие кровотечения из язв тонкой кишки (х2=18,00, р=0,001). Количество прободных язв составило 9%, их площадь - 5%, общее'количество язв - 21%, общая площадь язв - 14,8% от соответствующих показателей контрольной группы (табл.4). В толстой кишке предотвращалось развитие кровотечения из язв (Х2=11,520, р=0,021), площадь язвенного поражения, а также площадь язв с тромбами достоверно сокращалась, составив соответственно 18% (р<0,001) и 21% (р<0,001) от данных контроля (табл.5). При внутрижелудочиом введении 3-ГПМ в дозе 25 мг/кг предотвращалось развитие кровотечения из язв тонкой кишки (х2=18,00, р=0,001). Частота развития прободных язв достоверно не уменьшалась (у 50% животных, х =6,429, р=0,169), но их количество сократилось до 6,8% (р<0,05), площадь - до 7,8% (р<0,01) от показателей контрольной группы. Общее количество язв в тонкой кишке уменьшилось до 20% (р<0,001), общая площадь язв - до 27% (р<0,001)-2 В толстой кишке частота развития кровотечений снижалась не достоверно (% =8,100, р=0,088), но площадь язв сокращалась до 34% (р<0,05), площадь язв с тромбом -до 40% (р<0,05) отданных контрольной группы (табл. 5).

Введение препарата сравнения деанола ацеглумата в дозе 250 мг/кг внутримышечно в течение 5 суток на фоне моделирования подострой НПВП-энтеропатии привело к сокращению частоты кровотечения из язв тонкой кишки (у 25%, х2= 11,250, р=0,024), уменьшению количества язв с кровотечением до 10% (р<0,05), 'а их площади - до 17,5% (р<0,05-1), сокращению количества язв до 32% (р<0,05), а их общей площади - до 17% (р<0,001), количества прободных язв до 9% (р<0,001) и их площади - до 5,5% (р<0,001) от соответствующих показателей контрольной группы. В толстой кишке предотвращалось развитие кровотечения (х2=11,52, р=0,021), общая площадь язв снижалась до 28,6%, а площадь язв с тромбом - до 46,5% от данных контроля. Внутрижелудочное

введение препарата сравнения деанола ацеглумата полностью предотвратило развитие кровотечения из язв тонкой кишки (%2=18,000, р=0,001), сократило количество язв до 15%, площадь - до 34%, количество прободных - до 5%, их площадь - до 6% от данных контроля. В толстой кишке также полностью предотвращалось развитие кровотечения (х2=11,52, р=0,021), количество язв уменьшалось до 46%, а их площадь - до 30,6%, площадь язв с тромбом снижалась надо 24,3% (табл. 5).

Таблица 3.

Влияние производных З-гидроксипиридина и ацилированных аминокислот на процессы язвообразования в условиях подострого поражения желудочно-кишечного тракта

Серия п Гибель Тонкая кишка Толстая кишка

Прободные 2 кровотечением " кровотечением С тромбом

Контроль 10 2 10 10 8 10

ДА в/м 8 0 7 2д 0Д 8

ДА в/ж 8 0 5 О4 од 8

3-ГПМ в/м 8 0 Зд о4 од 6

3-ГПМ в/ж 8 0 4Д 0* 1 8

ЛХТ-4-05 в/м 8 0 2 д- 0Д 0Д 8

ЛХТ-4-05 в/ж 8 0 О4*» О4 О4 8

ЛХТ-1-09 в/м 8 0 о4* о4 о4 8

ЛХТ-1-09 в/ж 8 0 од*# 2Д о4 8

: контролем, р<0,05; * - по сравнению с данными на фоне введения деанола ацеглумата, # - по сравнению с показателями на фоне введения 3-ГПМ.

В опытной серии с введением соединения ЛХТ-4-05 в дозе 25 мг/кг внутримышечно полностью предотвращалось развитие кровотечения из язв тонкой кишки (х2=18,00, р=0,001), достоверно уменьшалась частота развития прободных язв (у 25%, %2=11,250, р=0,024), количество и площадь язв уменьшались до 17,4% и 16,8%, площадь прободных язв сокращалась до 2,3%, а их количество - до 2,9% (табл.4). В толстой кишке ни у одного животного не наблюдалось язв с кровотечением (х2=11,520, р=0,021), площадь язв уменьшалась до 11,7%, площадь язв с тромбом до 10% от соответствующих показателей контрольной группы (табл.3,6). При внутрижелудочном введении соединения ЛХТ-4-05 эн-теропротекторный эффект сохранялся и даже нарастал: предотвращалось не только развитие кровотечения, но и прободных язв (х2=18,00, р=0,001), количество язв составило 11,5%, площадь - 14%. В толстой кишке также предотвращалось развитие язв с кровотечением (х2=11,520, р=0,021), количество язв с тромбом составило 38%, их площадь - 12,6%, а общая площадь язв - 16,3% от соответствующих показателей контроля. При гистологическом исследовании картина тонкой и толстой кишки была относительно сохранна: в отдельных местах отмечались очаговые атрофические изменения слизистой оболочки, полиморф-ноклеточная инфильтрация стромы слизистой оболочки была умеренно выражена, отек подслизистой оболочки незначителен.

Таблица 4.

Показатель Общ. кол-во язв(па 1 см) Оищ.н.ющадь язв(на 1 см) Кол-во язв прободных Площадь прободных Кол-во язв с гсмосидери-ном Площадь язв с гемоснде-рином

Контроль 1,554±0,142 | 1,788±0,208 25,75±2,48 54,11±5,18 2,50±0,779 2,85±0,78

Деанола ацеглумат 250 мг/кт п/м 0,501 ±0,0701 0,304±0,051 Л 2,25±0,453 д 2,906±0,61 д 0,250±0,164д 0,5±0,327д

Деанола ацеглумат 250 мг/кг в/ж 0,234±0,150д 0,599±0,056д 1,286±0,567д 3,31±1,21 д 0,0±0,0 4 0,0±0,0Д

3-ГПМ 25 мг/кг в/м 0,325±0,051 д* 0,264±0,050д 2,38±1,22Л 2,67±1,38д 0,0±0,0Д 0,0±0,0Д

3-ГПМ 25 мг/кг в/ж 0,315±0,070д 0,479±0,125л 2,00±1,14д 4,81±2,51 д 0,0±0,0Д 0,0±0.0Д

ЛХТ-4-05 25 мг/кг в/м 0,272±0,0534* 0,300±0,059 4 3,750±0,491д" 1,25±0,84д* 0,0±0,0Д 0,0±0,0Д

ЛХТ-4-05 25 мг/кг в/ж 0,273±0,027л 0,255±0,052 д'# 0,0±0,0Д* 0,0±0,0Д* 0,0±0,0Л 0,0±0,0Д

ЛХТ-1-09 31 мг/кг в/м 0,275±0,03 д* 0,263±0,027д 0,0±0,0 л * 0,0±0,0Д* 0,0±0,0Д о,о±о,од

_ ЛХТ-1-09_31 мг/кг в/ж 0,331 ±0,034 4 0,405±0,028* 0,0±0,04* 0,0±0,04* 0,250±0,164д 0,375±0,263д

Примечание: Д - достоверность различия р<0,05 по сравнению с соответствующими данными животных контрольной группы; данными группы деанола ацеглумата, # - с данными группы 3-гидроксипиридина малата.

Таблица

Показатель Общ. кол-во язв Общая площадь язи Кол-во язв с тромбом Площадь язв с тромбом Кол-во язв е гсмосид Площадь язв с гемо- СИД.

Контроль 22,5±1,4 157,9±18,9 10,5±1,5 102,3±7,2 0,500±0,267 0,688±0,340

Деанола ацеглумат 250 мг/кг в/м 21,63±1,95 45,13±4,66 л 10,5±0,89 47,56±2,84д 0,0±0,0 0,0±0,0

Деанола ацеглумат 250 мг/кг в/ж 10,38±1,59д 48,28±4,88л 9,38±0,68 24,8±2,4 4 0,0±0,0 0,0±0,0

3-ГПМ 25 мг/кг в/м 20,8±4,7 28,2±7,3 л 13,0±5,0 21,3±4,7 4 0,0±0,0 0,0±0,0

3-ГПМ 25 мг/кг в/ж 24,8±5,9* 54,04±6,21д 16,3±5,8 41,2±12,7 д 0,38±0,38 0,38±0,38

ЛХТ-4-05 25 мг/кг в/м 18,0±2,4 18,4±1,2 д* 6,3±1,3 10,6±1,6 д 0,0±0,0 0,0±0,0

ЛХТ-4-05 25 мг/кг в/ж 18,3±1,3Д* 25,8±4,4 А*# 4,0±0,7 д*# 12,9±1,8 д*# 0,0±0,0 0,0±0.0

ЛХТ-1-09 31 мг/кг в/м 18,1±1,5Д 21,0±1,7 д* 6,4±0,8Д 9,6±1,1 д*# 0,0±0,0 0,0±0,0

ЛХТ-1-09 31 мг/кг в/ж 23,88±1,46 32,01±1,53д"# 9,63±0,68 18,22±0,95д* 0,0±0,0 0,0±0,0

Примечание: Д - достоверность различия р<0.05 по сравнению с соответствующими данными животных контрольной группы; данными группы деанола ацеглумата, # - с данными группы 3-гидроксипиридина малата соответствующего пути введения.

В опытной серии, где внутримышечно вводилось соединение ЛХТ-1-09 в дозе 31 мг/кг предотвращалось развитие кровотечения и прободных язв (X =18,00, р=0,001), общее количество язв при этом составило 18% (р<0,001), а их площадь - 15% (р<0,001) от данных контроля. В толстой кишке предотвращалось развитие кровотечения (х2=11,520, р=0,021), площадь язв с тромбом составила 9,3% (р<0,001), а общая площадь язв - 13,3% (р<0,001). При внутри-желудочном введении соединения ЛХТ-1-09 также предотвращалось образование прободных язв в тонкой кишке (х2=18,0, р=0,001), достоверно сокращалась частота язвенного кровотечения (у 25%, %2=11,250, р=0,024). Количество язв составило 21,3% (р<0,05) от показателя контрольной группы, а площадь - 22,65% (р<0,05). В толстой кишке предотвращалось развитие кровотечения (%2=11,52, р=0,021), сокращалась общая площадь язв до 20% (р<0,001), площадь язв с тромбом - до 18% (р<0,001) от данных контроля. Гистологическая картина существенно не различалась: регистрировалась умеренно выраженная диффузная полиморфноклеточная инфильтрация слизистой оболочки, незначительный отек подслизистой основы.

Таким образом, при внутримышечном введении анитульцерогенное действие соединения ЛХТ-1-09 более выражено, чем у препарата сравнения 3-ГПМ: предотвращалось развитие не только кровотечения, но и прободных язв в тонкой кишке, остальные показатели язвообразования достоверно не отличались. В толстой кишке на 55% была меньше площадь язв с тромбом, чем в серии сравнения (р<0,05). При внутрижелудочном введении антиульцерогенное действие соединения ЛХТ-1-09 также было более выраженным: в отличие от препарата сравнения 3-ГПМ полностью предотвращалось развитие прободных язв в тонкой кишке. В толстой кишке, в отличие от 3-ГПМ, также полностью предотвращалось развитие кровотечения, была достоверно меньше общая площадь язв толстой кишки - на 41% от данных серии сравнения. Площадь и количество язв с тромбом также были меньше на 56% и на 41%, хотя не носили статистически достоверного отличия с данными серии сравнения.

При внутримышечном введении соединение ЛХТ-4-05, в отличие от 3-ГПМ, достоверно сокращало частоту развития прободных язв в тонкой кишке и также, как препарат сравнения, предотвращало развитие кровотечения из язв тонкой кишки. При этом ряд показателей в опытной серии был меньше, чем в серии сравнения, хотя и не носил статистически достоверного отличия. Так, общее количество язв составило 84%, количество прободных - 31%, площадь прободных язв - 47% от данных серии с внутримышечным введением 3-ГПМ в изученных дозах. В толстой кишке при внутримышечном введении и соединение ЛХТ-4-05 и 3-ГПМ предотвращали развитие кровотечения. Показатели язвообразования при этом не носили достоверного отличия, но площадь язв в опытной группе составила 65%, количество и площадь язв с тромбом - 48% и 50% от данных серии сравнения. При внутрижелудочном введении антиульцерогенное действие соединения ЛХТ-4-05 было более выражено, чем у препарата сравнения 3-ГПМ в изученных дозах. Так, в отличие от препарата сравнения, в опытной серии полностью предотвращалось развитие прободных язв в

томкой кишке. Кроме того, в опытной серии достоверно меньше (на 47%, р<0,05) была н общая площадь язв в тонкой кишке, чем в серии сравнения. В толстой кишке также, в отличие от препарата сравнения, полностью предотвращается развитие кровотечения из язв. Кроме того, в толстой кишке в опытной серии меньше общая площадь язв (на 52%, р<0,05), количество и площадь язв с тромбом (на 75% и 69%, р<0,05), чем в серии сравнения (табл.5).

Особенностью действия препарата сравнения 3-гидроксипиридина малата явилось снижение антиульцерогенного эффекта при внутрижелудочном введении по сравнению с внутримышечным. Особенностью действия соединения ЛХТ-1-09 явилось сохранение, а у соединения ЛХТ-4-05 - определенное усиление антиульцерогенного эффекта в тонкой кишке при его внутрижелудочном введении, что обусловливает целесообразность и перспективность дальнейших исследований этих соединений.

В третьем разделе работы в контрольной группе мышей на фоне введения диклофенака в дозе 50 мг/кг в течение 3-х суток наблюдалась гибель 30% животных. В группе сравнения с предварительным введением 3-гидроксипи-ридина малата и в опытных группах гибели животных после введения диклофенака не наблюдалось.

У животных контрольной группы регистрировалось снижение содержания простагландина Е2 в плазме крови на 61% по сравнению с показателем интактных животных (с 96,55±2,13 пг/мл в интактной группе до 37,2±3,80 пг/мл, р<0,001).

Предварительное курсовое введение 3-ГПМ не предотвращало полностью снижения содержания простагландина Е2 в плазме крови белых мышей: показатель снижался по сравнению с данными интактных животных на 23% (с 96,55±2,13 пг/мл до 74,49±6,07 пг/мл, р<0,05), но при этом содержание простагландина Е2 в плазме крови белых мышей было на 97% выше по сравнению с контрольными данными (р<0,001).

Сходные результаты были выявлены в опытных сериях с предварительным введением производного 3-гидроксипиридина ЛХТ-1-09: показатель снижался по сравнению с данными интактной группы на 15% (с 96,55±2,13 пг/мл до 81,68±3,98 пг/мл, р<0,05), но при этом был в 2,17 раза больше, чем в контроле (р<0,001).

В условиях предварительного введения соединения ЛХТ-4-05 уровень простагландина Е2 снижался от показателя интактной группы на 34% (до 64,04±3,26 пг/мл, р<0,001). Но сохранялся на достоверно более высоком уровне, чем данные контрольной группы - на 69% (р<0,001).

Таким образом, полученные результаты свидетельствуют, что одним из возможных механизмов антиульцерогенного действия 3-ГПМ и соединений с лабораторными шифрами ЛХТ-1-09 и ЛХТ-4-05 в условиях введения нестероидных противовоспалительных препаратов может быть повышение синтеза простагландина Е2.

выводы

1. Соединения с лабораторными шифрами ЛХТ-1-09 (31 мг/кг в/м), ЛХТ-3-09 (41,2 мг/кг в/м) и ЛХТ-4-05 (25 мг/кг в/м) проявляют наиболее выраженное профилактическое гастропротекторное действие из изученных производных 3-гидроксипиридина и ацилированных аминокислот, не уступая препарату сравнения 3-гидроксипиридина малату и превосходя деанола ацеглумат в изученных дозах в условиях моделирования острого повреждения желудочно-кишечного тракта диклофенаком.

2. Соединения ЛХТ-4-05 (25 мг/кг) и ЛХТ-1-09 (31 мг/кг) проявляют наиболее выраженное профилактическое энтеропротекторное действие из изученных производных 3-гидроксипиридина и ацилированных аминокислот, сходное с эффектом 3-гидроксипиридина малата и превосходящее действие деанола ацеглумата в изученных дозах в условиях моделирования острого уль-церогенного повреждения желудочно-кишечного тракта введением диклофена-ка.

3. Наиболее выраженное антиоксидантное действие в тканях желудка, тонкой и толстой кишки из изученных производных 3-гидроксипиридина и ацилированных аминокислот проявили соединения ЛХТ-2-09 (32,6 мг/кг) и ЛХТ-1-06 (30,2 мг/кг). Соединения ЛХТ-4-05 и ЛХТ-1-09 проявили сходное с препаратом сравнения 3-гидроксипиридина малатом и превосходящее эффект деанола ацеглумата антиоксидантное действие в тканях желудка, тонкой и толстой кишки в изученных дозах в условиях острого язвенного повреждения желудочно-кишечного тракта диклофенаком.

4. Соединение ЛХТ-4-05 при внутримышечном и внутрижелудочном введении превосходит по энтеропротекторному действию деанола ацеглумат (250 мг/кг), при внутримышечном введении проявляет энтеропротекторный эффект, сходный с действием 3-гидроксипиридина малата в изученных дозах, а при внутрижелудочном введении превышает его, полностью предотвращая развитие прободных язв и в большей степени сокращая площадь язвенного поражения в условиях моделирования подострого повреждения желудочно-кишечного тракта введением индометацина.

5. Соединение ЛХТ-1-09 при внутримышечном и внутрижелудочном введении оказывает более выраженное анитульцерогенное действие в условиях моделирования подострого повреждения желудочно-кишечного тракта индоме-тацином, чем препараты сравнения 3-гидроксипиридина малат и деанола ацеглумат в изученных дозах.

6. Производное 3-гидроксипиридина ЛХТ-1-09 (31 мг/кг) и производное ацилированной аминокислоты ЛХТ-4-05 (25 мг/кг) повышают содержание про-стагландина Е2 в плазме крови белых мышей на фоне введения диклофенака.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Полученные результаты обосновывают перспективность дальнейшего доклинического исследования гастропротекторного и энтеропротекторного действия производного 3-гидроксипиридина ЛХТ-1-09 и производного ацилированной аминокислоты ЛХТ-4-05 для создания высокоэффективных антиуль-

церогенных препаратов для профилактики и лечения язвенного поражения желудочно-кишечного тракта, лызванного приемом нестероидных противовоспалительных препаратов.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ:

1. Захватова Ю.А. Исследование гастропротекторного действия мексидола на модели язвенного поражения желудка, индуцированного индометацином / Ю.А. Захватова, A.B. Зорькина, М.В. Зорькин, О.М. Кияйкина, Е.В. Ивянская // Вестник Российского уннверснтетачдру,жбы народов. Серия Медицина. -2007.-№ 6.-С. 145-149.

2. Захватова Ю.А. Влияние некоторых новых производных 3-оксипиридина на процессы ульцерогенеза в эксперименте / Ю.А. Захватова, М.В. Зорькин // Материалы XIII науч. конф. аспирантов, молодых ученых и студентов медицинского факультета Мордов. гос. ун-та «Медицинские проблемы жизнедеятельности организма в норме, патологии и эксперименте». Вып.8. - Саранск: ООО «Референт», 2008. - С. 45- 47.

3. Захватова Ю.А. Влияние производных 3-оксипиридина МВ-392 и МВ-227 на процессы ульцерогенеза в эксперименте / Ю.А. Захватова, М.В. Зорькин // Применение цитопротекторов метаболического действия в лечении соматических заболеваний: сборник научных работ,- Саранск: ООО «Референт». 2008. С. 58-60.

4. Зорькин М.В. Исследование гастропротекторного действия омепразола и ра-нитидина в условиях гипергликемии в эксперименте / М.В. Зорькин, Е.В. Ивянская, С.Е. Хоронеко //Материалы I Международной научно-практической конференции «Современные проблемы отечественной медико-биологической и фармацевтической промышленности. Развитие инновационного и кадрового потенциала Пензенской области», проходившей 29-30 ноября 2011 г. - С.191-194. ФГУП НТЦ «Информрегистр», Депозитарий электронных изданий. - 2011.

5. Болушева Л.Ф. Исследование антиульцерогенного действия некоторых новых соединений тауриновой и бромникотиновой кислот / Л.Ф. Болушева, Е.М. Кондратьева, O.A. Аткарская, С.Я. Скачилова, М.В. Зорькин // Материалы XVI Российского национального конгресса «Человек и лекарство». -

Москва, 2010.-С. 419.

6. Ивянская Е.В. Повышение ульцерогенного эффекта индометацина в условиях гипергликемии / Е.В. Ивянская, О.М. Кияйкина, М.В. Зорькин, С.С. Ку-дашкин // Материалы XVII Российского национального конгресса «Человек h лекарство». - Москва, 2011. - С. 443.

7. Ивянская Е.В. Некоторые особенности антиульцерогенного действия деано-ла ацеглумата и 3-оксипиридина сукцината в условиях гипергликемии / Е.В. Ивянская, С.Я. Скачилова, О.М. Кияйкина, М.В. Зорькин // Материалы XVII Российского национального конгресса «Человек и лекарство». - Москва, 2011.-С. 443-444.

8. Ураков A.JI. Сравнительная оценка энтеропро-текторной активности нового производного N-ацетилглютаминовой кислоты в условиях НПВП-индуцированного язвообразования / A.J1. Ураков, A.A. Усанова, М.В. Зорькин // Проблемы современной науки и образования/ Problems of modern science and education. - 2014. -№6. (24). - C. 123-128.

9. Зорькина A.B., Зорькин M.B. Антиоксиданты в комплексной терапии и профилактике НПВП-гастроэнтеропатии. - Саранск: ОАО «Типография «Руза-евский печатник». - 152с.

Ю.Зорькин М.В. Сравнительное исследование гастропротекторного действия этоксидола и производных аминогексанововй и ацетилглютаминовой кислот / М.В. Зорькин, O.A. Аткарская, A.B. Зорькина // Современные проблемы науки и образования. - 2014. - №2; (дата обращения: 16.04.2014). URL: http://www.science-education.ru/116-12796

Н.Зорькин М.В., Аткарская O.A. Перспективы профилактической энтеропротек-ции в условиях' введения диклофенака в эксперименте / М.В. Зорькин, O.A. Аткарская // Современные проблемы науки и образования. — 2014. — № 3;(дата обращения: 20.05.2014). URL: hltp://www.science-education.ru/117-13153

12.Зорькин М.В. Сравнительное исследование энтеропротекторного действия деанола ацеглумата и этоксидола на фоне введения индометацина и диклофенака / М.В. Зорькин, O.A. Аткарская, A.B. Зорькина // Фундаментальные исследования. -№ 7 (часть 4) - 2014. - С. 706-710.

Патенты и рационализаторские предложения:

1. Патент на изобретение РФ №2435575. Деанола ацеглумат, проявляющий антиульцерогенную, гастропротекторную и энтеропротекторную активности, комбинации, обладающие антиульцерогенной, гастропротекторной, энтеропротекторной активностями (варианты), фармацевтические композиции. /Серпов Л.Н., Зорькина A.B., Скачилова С.Я., Ермакова Г.А., Кияй-кина О.М., Ивянская Е.В., Митрохин Н.М., Шилова Е.В., Зорькин М.В., Будунова А.П., Шулешкина H.C.II Заявка №2010103415 приоритет от 3 февраля 2010 г., зарегистрирован 10 декабря 2011 г.

2. Зорькина A.B., Захватова Ю.А., Зорькин М.В. Способ моделирования неспецифического язвенного поражения толстой кишки / Удостоверение на рационализаторское предложение №1096 от 29.06.09.

Список сокращений

ДА - деанола ацеглумат

ЖКТ - желудочно-кишечный тракт

3-ГПМ -3-гидроксипиридина мапат

МДА - малоновый диальдегид

ПОЛ - перекисное окисление липидов АОА - антиокислительная активность РЛПО -резерв липидов для перекисного окисления РеМДА - индуцированный железом МДА

Подписано к печать 23.01.15. Объем 1,25 п. л. Тираж 150 экз. Заказ № 34.

Типография Издательства Мордовского университета 430005, г. Саранск, ул. Советская, 24