Автореферат и диссертация по медицине (14.03.06) на тему:Исследование эффективности некоторых производных фосфорилуксусной кислоты и гидроксипиридина при эрозивно-язвенных гастродуоденопатиях (экспериментальное исследование)

На правах рукописи

004613232

ТАЗИНА Юлия Андреевна ^

ИССЛЕДОВАНИЕ ЭФФЕКТИВНОСТИ НЕКОТОРЫХ ПРОИЗВОДНЫХ ФОСФОРИЛУКСУСНОЙ КИСЛОТЫ и ГИДРОКСИПИРИДИНА ПРИ ЭРОЗИВНО-ЯЗВЕННЫХ ГАСТРОДУОДЕНОПАТИЯХ (экспериментальное исследование)

14.03.06 - фармакология, клиническая фармакология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

1 8 НОЯ 2010

Саранск 2010

004613232

Работа выполнена на кафедре общественного здоровья и здравоохранения Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Мордовский государственный университет имени Н.П. Огарева»

Научный руководитель: Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук Д.С.Блинов

доктор медицинских наук профессор Л.А. Балыкова, ГОУВПО «МГУ им. Н.П. Огарева»

доктор медицинских наук профессор В.Б. Кузин, ГОУ ВПО «НижГМА»

Ведущая организация: ГОУ ВПО «Московский государственный медико-стоматологический университет»

Защита состоится <И^>> 2010 г. на заседании диссертационного

совета Д 212.117.08 при ГОУВПО «Мордовский государственный университет им. Н.П. Огарева» (430032, г. Саранск, ул. Ульянова, 26а).

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке ГОУВПО "Мордовский государственный университет им. Н.П.Огарева" (430005, г. Саранск, ул. Большевистская, 68).

Автореферат размещен на официальном сайте ГОУВПО «МГУ им. Н.П. Огарева» www.mrsu.ru

Автореферат разослан </^>> ГяГЛ-с ¿^пЛ 2010 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат медицинских наук, доцент

А.Г. Голубев

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

АКТУАЛЬНОСТЬ ИССЛЕДОВАНИЯ. Язвенная болезнь — самое распространенное (после хронического гастрита и дуоденита) заболевание органов брюшной полости. Наиболее часто оно встречается в Северной Америке и Европе. Так, в США от 7 до 10 % населения в течение жизни болеют язвенной болезнью (Ивашкин В.Т. и соавт., 1999). Ежегодно регистрируются от 350 ООО до 450 ООО новых случаев заболевания. Каждый десятый житель Германии заболевает язвенной болезнью. Еще больше распространено это заболевание в Швеции (10,2 % взрослого населения) (Маев И.В. и соарт., 2004). Большое число больных язвенной болезнью регистрируется в России и странах СНГ (5 - 6 % взрослого населения) (Soll А.H., 1998), Причем, тенденция к снижению частоты этих заболеваний прослеживается в развитых странах, но не является, к сожалению, характерной для жителей России (Ивашкин В.Т. и соавт., 2001; Лапина Т.Л., 2001; Маев И.В. и соавт., 2006).

Язвенная болезнь рассматривается многими авторами как заболевание всего организма, что подразумевает системность реагирования на воздействие этиологического (причинного) фактора с преимущественным поражением слизистой оболочки гастродуоденальной зоны. Подобная системность проявляется разнообразными функциональными и морфологическими изменениями не только в органах - мишенях - желудке и двенадцатиперстной кишке, но и в сопряженных органах, а также в различных, тесно связанных друг с другом регулирующих системах. Доказательством этому служат часто сопутствующие язвенной болезни функциональные и хронические заболевания органов пищеварения (Фадеенко Г.Д., 2004).

Вместе с тем, проблема язвенной болезни включает не только собственно клиническую, но и социально-экономическую составляющую. Известно, что более 60% больных приходится на лица молодого и среднего, наиболее трудоспособного и социально активного возраста. Следствием этого зачастую являются потеря трудоспособности, а в ряде случаев, дисквалификация и инвапидизация таких больных (Чернин В.В., 2000). По-прежнему значительными остаются расходы, связанные с лечением больных язвенной болезнью, которые в США, например, составляют 3,1 млрд. долларов, занимая 4-ое место после расходов, связанных с лечением гастроэзофагеальной реф-люксной болезни, желчнокаменной болезни и колоректального рака (Хаки-мова Д.Р. и соавт., 2003; Laine L., 2000).

Изучению язвенной болезни, в частности ее этиопатогенеза, лечения и профилактики, посвящено множество экспериментальных и клинических исследований, особенно за последние десятки лет. Вместе с тем, достигнутые успехи в раскрытии механизмов ульцерогенеза и разработка на их основе методов этиопатогенетической терапии все еще не решают проблемы язвенной болезни, заболевание остается достаточно распространенным во всем мире и сопряжено с развитием жизненно опасных осложнений (Фадеенко Г.Д., 2004).

В связи с этим, поиск средств консервативной коррекции эрозивно-язвенного поражения слизистой оболочки верхних отделов желудочно-кишечного тракта остается одной из актуальных проблем современной экспериментальной и клинической фармакологии.

ЦЕЛЬ РАБОТЫ: сравнительное изучение фармакологической эффективности неантихолинэстеразного фосфорорганического соединения - производного фосфорилуксусной кислоты ХС-3587 и производного 3-гидроксипиридина ИБХФ-2 при экспериментальных эрозивно-язвенных поражениях желудка и двенадцатиперстной кишки.

Для достижения поставленной цели в процессе выполнения работы решились следующие ЗАДАЧИ:

1. Провести, сравнительное исследование терапевтической активности соединений ИБХФ-2 и ХС-3587 при НПВС - ассоциированной эрозивно-язвенной гастродуоденопатии у мышей.

2. Изучить фармакологическое действие соединений ИБХФ-2 и ХС-3587 при стресс - индуцированном ульцерогенезе.

3. Исследовать терапевтическую активность соединений ИБХФ-2 и ХС-3587 в условиях эрозивно-язвенного повреждения слизистой оболочки желудка и двенадцатиперстной кишки, вызванного введением спирто - пред-низолоновой смеси.

4. Изучить влияние исследуемых соединений на кровоснабжение стенки желудка и двенадцатиперстной кишки, моторику желудочно-кишечного тракта в условиях курсового введения диклофенак - натрия.

5. Изучить морфологию слизистой оболочки желудка и двенадцатиперстной кишки на фоне введения диклофенак-натрия и коррекции ИБХФ-2 и ХС-3587.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА РАБОТЫ. В работе проведено сравнительное исследование терапевтической активности производного 3-гидроксипиридина ИБХФ-2 и производного фосфорилуксусной кислоты ХС-3587 на различных моделях эрозивно-язвенных гастродуоденопатий у белых мышей обоего пола.

Установлено, что в условиях стресс-индуцированного ульцерогенеза исследуемые вещества проявляют свойства гастроцито- и дуоденопротекто-ров при пероральном введении животным в эквимолярных дозах, при этом по своей фармакологической активности не уступают препарату сравнения ква-мателу, вводимому в сопоставимой дозе. В тех же дозах ИБХФ-2 и ХС-3587 изучены на модели формирования острых спирто-преднизолоновых дефектов слизистой оболочки желудка, умеренная гастропротекторная активность выявлена лишь у вещества ИБХФ-2 в дозе 20 мг/кг.

На модели НПВС-ассоциированной гастродуоденопатии, вызванной введением животным диклофенак-натрия, установлена дозозависимость терапевтического действия соединений: наибольший протекторный эффект проявляется у вещества ИБХФ-2 в дозе 20 мг/кг, при снижении вводимой дозы терапевтическая активность соединения снижается. Развитие эффекта со-

провождается восстановлением целостности эпителия слизистой оболочки желудка и 12-перстной кишки.

Впервые изучено влияние исследуемых соединений на некоторые функциональные показатели, отражающие состояние желудочно-кишечного тракта - кровенаполнение слизистой оболочки и двигательную активность желудка и двенадцатиперстной кишки. Показано, что ИБХФ-2 и ХС-3587 в эквимолярных дозах стимулируют перистальтику кишечника и повышают кровенаполнение стенки желудка мышей с диклофенак-индуцированной эро-зивно-язвенной гастродуоденопатией.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЦЕННОСТЬ РАБОТЫ. Результаты проведенных исследований являются экспериментальным обоснованием для углубленного доклинического изучения эффективности веществ ХС-3587 - Ы-ацетилгидразид пара - диметиламинофенил - 2 - хлорэтоксифосфорилуксус-ной кислоты и ИБХФ-2 - 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина ацетил глута-мат в лечении и профилактике эрозивно - язвенных гастродуоденопатий с целью создания потенциальных лекарственных средств.

ВНЕДРЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ РАБОТЫ. Материалы диссертации используются в научно-исследовательской работе и учебном процессе кафедр цитологии, гистологии и эмбриологии, фармакологии с курсом клинической фармакологии, и общественного здоровья и здравоохранения Мордовского государственного университета им. Н.П. Огарева.

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ:

1. В условиях НПВП - индуцированного повреждения высокую протекторную активность проявило химическое соединение ИБХФ-2. Наименьший антиульцерогенный эффект показало вещество ХС-3587 в минимальной дозе (1,6 мг/кг).

2. Соединение ИБХФ-2 уменьшало выраженность эрозивно - язвенного повреждения слизистой оболочки желудка и двенадцатиперстной кишки при стресс - индуцированной гастродуоденопатии у мышей. Протекторное влияние вещества ХС-3587 было выражено в меньшей степени. Оба соединения малоэффективны в условиях спирто - преднизолонового поражения слизистой оболочки желудка и двенадцатиперстной кишки.

3. Исследуемые вещества эффективно корригируют нарушения микроциркуляции в поврежденном желудке, но не оказывают влияния на данный процесс в тонком кишечнике. Соединения ИБХФ-2 и ХС-3587 в эквимолярных дозах стимулируют моторную активность желудочно-кишечного тракта.

ОСНОВНЫЕ СВЕДЕНИЙ ОБ АПРОБАЦИИ РАБОТЫ. Результаты исследований, представленные в диссертации докладывались на XV и XVI Российских национальных конгрессах «Человек и лекарство» (Москва, 2009, 2010), VI Съезде анатомов, гистологов и эмбриологов (Саратов, 2009), ежегодных Огаревских чтениях (научной конференции Мордовского госуниверситета, Саранск, 2008-2010), конференции, посвященной 100-летию со дня рождения Д.А. Жданова (Москва, 2008), конференциях молодых ученых Мордовского государственного университета им. Н.П. Огарева (Саранск,

2008-2010), I Региональной научно-практической конференции «Научный потенциал молодежи - будущему Мордовии» (Саранск, 2009), Межрегиональной научной конференции «Актуальные проблемы мед. науки и образования» (Пенза, 2009), Всероссийской конференции по гастроэнтерологии и гепатоло-гии (Нижний Новгород, 2010).

ПУБЛИКАЦИИ. По теме диссертации опубликовано 6 научных работ, в том числе 2 - в изданиях, рекомендованных ВАК Минобрануки РФ.

СТРУКТУРА И ОБЪЕМ РАБОТЫ. Диссертация изложена на 141 странице компьютерного набора, документирована 13 таблицами и иллюстрирована 20 рисунками. Работа состоит из введения, обзора литературы (глава I), описания материалов и методов исследования (глава И), изложения собственных результатов (глава III, IV, V), заключения и библиографического указателя, включающего 356 источников, в том числе 220 отечественных и 136 иностранных авторов.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Объектом исследования послужили два оригинальных лекарственных вещества: ИБХФ-2 и ХС-3587.

Вещество ХС-3587 - N - ацетилгидразид пара - диметиламинофенил -2 - хлорэтоксифосфорилуксусной кислоты. Вещество синтезировано на кафедре органической химии Казанского государственного технологического университета под руководством в.н.с. к.х.н. Р.И.Тарасовой. Химическая структура представлена на рис. 1.

СН3

СН3

N4-/

<о>

|ОСН2 СН2С1 - Р - СН2 - С - NH - N

/

Н

I I О

о

\

СОСНз

Р и с.1. Химическая структура вещества ХС-3587

Фармакологическая активность соединения ХС-3587 в отношении сердечно - сосудистой системы подробно изучена Т.В. Курмышевой (2005). Ею же определены показатели острой токсичности (ЬО50 при внутрибрюшном введении белым мышам составляет 3120 ± 160 мг/кг).

ИБХФ-2 - 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина ацетилглутамат. Химическая структура представлена на рис. 2.

Р и с. 2. Химическая структура соединения ИЬХФ-2.

Работа выполнена на 250 половозрелых беспородных белых мышах обоего пола массой 18 - 23 г. Все подопытные животные были разделены на группы, данные о которых приведены в таблице 1.

Таблица 1.

Распределение животных по экспериментальным группам_

Раздел исследования Условия эксперимента Количество животных

I раздел (НПВС- ассоциированная гаст-родуодепопагия) Интактный котроль 10

Диклофенак-Ыа (50 мг/кг) 10

Диклофснак-Ыа (50 мг/кг)+квамагел (1 мг/кг) 10

Днклофенак-Ыа (50мг/кг)+ИБХФ-2 (10 мг/кг) 10

Диклофепак-Ыа(50 мг/кг)+ИБХФ-2 (20 мг/кг) 10

Диклофенак - натрия (50 мг/кг)+3587 (1,6 мг/кг) 10

Диклофенак - натрия (50 мг/кг)+3587 (3,6 мг/кг) 10

11 раздел (стресс-индудированная га-| стродуодепопатия) Интактный контроль 10

Стресс 10

Слресс + квамател(1 мг/кг) 10

Стресс + ИБХФ-2 (20 мг/кг) 10

Стресс + 3587 (3,6 мг/кг) 10 10

III раздел (спирта- преднизолоновая гастродуоденопагия) Интактный контроль

Спирто - преднизолоновая смесь 10

Спирто - преднизолоновая смесь + квамател (1 мг/кг) 10

Спирто - преднизолоновая смесь + ИБХФ-2 (20 мг/кг) 10

Спирто - преднизолоновая смесь + 3587 (3,6 мг/кг) 10

IV раздел (изучение кровенаполнения) V раздел (изучение моторной функции ЖК'Г) Интактный контроль 10

Диклофенак - натрия (50 мг/кг) 10

Диклофенак - натрия (50 мг/кг) + ИБХФ-2 (20 мг/кг) 10

Диклофенак - натрия (50 мг/кг) + 3587 (3,6 мг/кг) Интактный контроль 10 ....... 10 ..........

Диклофенак - натрия (50 мг/кг) 10

Диклофенак - натрия (50 мг/кг) ИБХФ-2 (20 мг/кг) 10

Диклофенак - натрия (50 мг/кг) + ,3587 (3,6 мг/кг) 10

В качестве препарата сравнения использовался ингибитор гистамино-вых Н2 - рецепторов - фамотидин («Квамател», Gedeon Richter, Германия), во флаконах по 20 мг.

Дозы для исследования выбирали пропорционально молекулярной массе веществ (эквимолярные дозы).

Для оценки эффективности исследуемых соединений мы остановились на трех моделях экспериментального эрозивно - язвенного поражения желудка и двенадцатиперстной кишки, включая острые и субхронические варианты, руководствуясь различиями в характере их течения и механизме возникновения (A.B. Подзорова, 1999; A.B. Стефанов и соавт., 2001).

Первым этапом наших исследований стало изучение противоязвенной активности на модели «диклофенакового» эрозивно - язвенного поражения слизистой оболочки желудка и двенадцатиперстной кишки. Его вызывали внутрижелудочным введением животным диклофенак-натрия 1 раз в день в течение 10 дней в дозе 50 мг/кг (Пентюк H.A. и соавт., 1998).

Моделирование иммобилизационных (субхронических) лзв проводили по методу Brodie D.A. (1971) (Прописнова В.В., 1999). За сутки до иммобилизации животные не получали еду при сохраненном доступе к воде. Стресс воспроизводили иммобилизацией мышей, фиксируя их за лапки к дощечкам брюшком вверх на 24 часа.

Острое поражение верхнего отдела желудочно-кишечного тракта для изучения влияния исследуемых соединений воспроизводили путем моделирования спирто-преднизолоновой язвы у мышей (Стефанов A.B. и соавт., 2001). Спирто-преднизолоновую смесь (преднизолон в дозе 20 мг/кг и этиловый спирт 76 % из расчета 0,6 мл на 100 г массы тела мыши) вводили внут-рижелудочно однократно.

Фармакологический эффект соединений оценивали по макроморфоло-гической картине слизистой оболочки желудка и 12-перстной кишки мыше-ей, выведенных из эксперимента путем краниальной дислокации под эфирным наркозом. Макроморфометрическую оценку состояния слизистой оболочки проводили визуально (с помощью стереоскопического микроскопа МБС-9, Россия). Для систематизации и анализа макроскопической картины слизистой оболочки желудка и двенадцатиперстной кишки использовали методику В.А. Виноградова (1983), предполагающую расчет ряда показателей: 1 - количество эрозий; 2 - количество язвенных дефектов; 3 - тяжесть поражения; 4 - частоту поражения; 5 - множественность поражения и 6 - суммарный показатель - язвенный индекс; 7 - определяли индекс язвообразова-ния.

Тяжесть поражения (ТП) характеризовали средним баллом. Частоту поражения (ЧП) вычисляли как отношение числа животных с язвами к общему числу животных в группе. Множественность поражения (МП) рассчитывали как отношение числа язв у всех мышей к числу животных в группе. Суммарный показатель - язвенный индекс (ЯИ), вычисляли по формуле: ТП+ЧП+МП.

Оценку противоязвенной активности исследуемых соединений проводили по методу В.Н. Шаталова и В.М. Полонского (1981). Индекс язвообра-зования (ИЯ) вычисляли по формуле: ИЯ = СБ + КМЯ/(КМ х 2) - КЯ/КМ,

где: СБ - средний балл; КМЯ — количество мышей с язвами; КМ - количество мышей в группе; КЯ - общее количество язв в группе.

Для проведения микроморфологического исследования использовали фрагменты желудков и двенадцатиперстной кишки белых мышей, окрашенных гематоксилином и эозином. Микропрепараты просматривали в световой микроскоп Jenawal (Carl Zeiss - Jena, Германия). Регистрацию микроморфологической картины проводили цифровой фотокамерой Canon PowerShot А540, с последующей обработкой изображения в Adobe Photoshop 7,0.

В ходе наших экспериментов было также изучено влияние испытуемых лекарственных веществ на функциональные показатели деятельности ЖКТ.

Изучение влияния веществ на двигательную активность ЖКТ проводили по методу J.S. Stickney и соавт. (Прописнова В.В., 1999). Опытным животным вводили исследуемые соединения однократно, а контрольной группе - эквивалентное количество воды. Через 1 час всем животным перорапьно вводили по 0,3 мл контрастной массы (10% суспензия активированного угля в 1% крахмальном клейстере.) Через 40 минут животных выводили из эксперимента в условиях эвтаназии. Затем у опытных и контрольных животных проводили измерение (в см) абсолютной длины кишечника и пути, пройденного контрастной массой по нему. В качестве интегрального показателя, характеризующего силу перистальтики ЖКТ, использовали процент длины кишечника, пройденный контрастной массой по отношению к абсолютной длине последнего.

Для изучения уровня кровотока в стенке желудка использовали гемо-глобинцианидный метод обнаружения гемоглобина в биологических жидкостях (Меньшиков В.В. и соавт., 1987, Пупкова В.И., 2001), модифицированный в 1994 г. профессором Малышевым В.Г. Метод основан на измерении объема крови в биологической ткани. В работе использовали стандартный набор реактивов «Ольвекс - диагностикум», г. Санкт - Петербург. Концентрацию гемоглобина вычисляли по формуле: С = Еоп /Ест * Ск * 17,7, где: С - концентрация гемоглобина, г %; Еоп -оптическая плотность пробы; Ест - оптическая плотность калибровочного раствора гемоглобинцианида = 0,065; Ск - концентрация гемоглобинцианида в калибровочном растворе = 59,75; 17,7 - коэффициент разведения пробы в стандарте. Пполученные данные пересчитывали на 1 г сырой ткани и концентрацию гемоглобина выражали в г на 1 г ткани желудка и 12-перстной кишки.

При проведении статистической обработки и исследовании достоверности различия полученных результатов использовали непараметрический критерий «х - квадрат». Достоверность различий средних величин определяли с помощью параметрического критерия t Стыодента при 5 % уровне значимости (Закс JL, 1976).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

На первом этапе нашего исследования были проведены серии опытов по изучению гастродуоденопротекторной активности исследуемых фармакологических соединений на модели стресс-индуцированного ульцерогенеза. Воздействие стресса на слизистую оболочку желудка и двенадцатиперстной кишки по выраженности повреждения несколько различалось. 13 желудке отмечалось образование эрозий и язв, у всех животных отмечались участки гиперемии и точечных кровоизлияний (табл. 2). Изменения дуоденальной области заключались в формировании повреждений, в основном, эрозивного характера (табл. 3).

Таблица 2.

Характеристика стрссс-опосредованных гастропатнн под влиянием исследуе-

мых соединений

Исследуемые Интакт- Стресс - Квамател ИБХФ-2 3587

показатели ные животные контроль (1 мг/кг) (20 мг/кг) (3,6 мг/кг)

Среднее число эрозий 0 1,13±0,40а 0* 0,67±0,39* 0,33±0,39*

Среднее число язв 0 3,67±0,39а 0* 0* 0,67±0,17*

Тяжесть поражения 0 3,67±0,39а 0,625±0,18* 0,67±0,39* 1 ±0,58*

Частота поражения 0 1 0 0 0,33

Множественность по- 0 1,33 0 0 0,33

ражения

Язвенный индекс 0 6 0,625 0,67 1,66

Индекс язвообразова- 0 10,17 2 2 2,84

мия

Примечание: а - отличия от соответствующих показателей шпакгных животных, достоверны при р<0,05; * - отличия от соответствующих показателей группы стресс - контроля, достоверны при р<0,05 (критерий х-квадрат).

Исследуемые соединения, вводимые внутрь в профилактическом режиме в эквимолярных дозах, значительно снижали выраженность эрозивно-язвенного процесса в желудке белых мышей, об этом свидетельствуют все регистрируемые нами показатели. Причем наибольший эффект показало вещество ИБХФ-2 в дозе 20 мг/кг. При микроскопическом изучении препаратов слизистой желудка морфологическая картина была близка к нормальной, характерной для животных интактного контроля.

Соединение ИБХФ-2 оказывало выраженное протекторное действие на структуру слизистой оболочки двенадцатиперстной кишки белых мышей, подвергнутых хроническому иммобилизационному стрессу. Как и при анализе состояния слизистой оболочки желудка, макроморфометрия не выявила наличия язв и эрозий в слизистой оболочке двенадцатиперстной кишки. Протекторное влияние вещества ХС-3587 на слизистую оболочку 12-перстной кишки также было выраженным, но в меньшей степени в сравнении с ИБХФ-2. Изучение данного процесса на микроскопическом уровне подтвердило наличие дуоденопротекторных свойств у изучаемых соединений. Участки сли-

знстой оболочки по своему строению очень напоминали фрагменты двенадцатиперстной кишки, полученные от животных серии интактного контроля.

Таблица 3.

Характеристика стресс - опосредованных дуоденопатий под влиянием иссле-______дуемых соединений__________

Исследуемые показатели Интактные животные Стресс - контроль Квамател (1 мг/кг) ИБХФ-2 (20 мг/кг) 3587 (3,6 мг/кг)

Среднее число эрозий 0 1,0±0,38а 0* 0* 0,33± 0,19

Среднее число язв 0 0,67 ± 0,17а 0* 0* 0*

Тяжесть поражения 0 0,67 ±0,17а 0,625±0,18 0* 0,33±0,39

Частота поражения 0 0,33 0 0 0

Множественность поражения 0 0,33 0 0 0

Язвенный индекс 0 1,33 0,625 0 0,33

Индекс язвообразования 0 2,5 0 0 1

Примечание: а - отличия от соответствующих показателей у интактных животных, достоверны при р<0,05; * - отличия от соответствующих показателей группы стресс -контроля, достоверны при р<0,05 (критерий х-квадрат).

Таким образом, приведённые выше данные демонстрируют наличие у изучаемых соединений гастродуоденопротекторных свойств при стресс - индуцированном повреждении.

Спирто-преднизолоновая модель повреждения слизистой верхнего отдела желудочно-кишечного тракта характеризовалась формированием дефектов слизистой оболочки только в желудке. Выраженность повреждения была умеренной. При изучении гастропротекторных возможностей изучаемых соединений на модели острого повреждения слизистой желудка спирто-преднизолоновой смесью не был выявлен статистически значимый протекторный эффект. Можно лишь отметить тенденцию к снижению основных показателей при использовании ИБХФ-2 в дозе 20 мг/кг.

Изучение гастропротекторной активности химических соединений ИБХФ-2 и ХС-3587 мы проводили также на модели НПВС-ассоциированного язвообразования.

Результаты макроморфологического исследования (табл. 4 и 5) убедительно демонстрируют формирование признаков НПВП - гастропатии у всех животных, получавших парентерально диклофенак - натрия в дозе 50 мг/кг в течение 10 суток. Они проявлялись в виде появления острых множественных эрозий и язв, преимущественно в антральном отделе желудка, связанного с основным системным действием НПВП (угнетение синтеза простагландинов) (Каратеев А.Е.. 2000). Случаи летальности животных в этой серии составили 30%.

Таблица 4.

Характеристика диклофенак натрий - индуцированного процесса язнообразовании в

слизистой оболочке желудка под влиянием исследуемых соединений ____(ИБХФ-2 и ХС-3587) н кваматела_______ _______

Исследуемые показатели Контроль (диклофенак - натрий) квамател (1 мг/кг) ИБХФ-2 (10 мг/кг) ИБХФ-2 (20 мг/кг) 35 «7 (1,8 мг/кг) 3587 (3,6 мг/кг)

Среднее число 0,2 5± 0,07 0,25± 0,07 0,17± 0,06 0,14± 0,03* 0 0,29± 0,07

эрозии

Среднее число 1,25±0,3о 0* о*р о*р 0,34± 0,11* 0*

язв

Тяжесть поражения 1,5±0,12а 0,25± 0,07* 0.17± 0,06*(3 0,14± 0,03*р 0,34± 0,11* 0,29± 0,04*

Частота пора- 0,5 0 0 0 0,17 0

жения

Множествен- 0,75 0 0 0 0,17 0

ность поражения

Язвенный ин- 2,75 0,25 0,17 0,14 0,68 0,29

декс

Индекс язвооб- 5,5 1 1 1 1,91 2

разования

Примечание: а - отличия ог соответствующих показателей инта1стных животных, достоверны при р<0,05; * - отличия от соответствующих показателей группы стресс -контроля, достоверны при р<0,05; р - отличия от соответствующих показателей у животных, получавших ХС - 3587, достоверны при р<0,05 (критерий х-квадрат).

Нами установлена дозозависимость гастропротекторного действия веществ на представленной модели. Так, наибольшая активность отмечена у производного 3-гидроксипиридина в дозе 20 мг/кг, при этом, снижение дозы ИБХФ-2 вдвое сопровождалось существенным снижением фармакологической активности соединения. Производное фосфорилуксусной кислоты ХС-3587 обладало меньшим протекторным действием в отношении слизистой оболочки желудка как в дозе 3,6 мг/кг, так и в двое меньшей дозе.

При микроскопическом изучении слизистой оболочки желудка мышей, получавших диклофенак-натрий, во всех случаях отмечались дистрофические изменения эпителия. Микроскопическая картина в изучаемых препаратах характеризовалась выраженным отёком собственной пластинки слизистой оболочки (Аруин Л.И., 1998; Голофеевский В.Ю., 1994; Успенский В.М., 1994). Коррекция патологического процесса исследуемыми производными приводила к положительным изменениям микроморфологической картины: снижалась степень отека собственной пластинки слизистой и лейкоцитарная инфильтрация.

Эрозивно-язвенный процесс, развивающийся у белых мышей на фоне длительного приема нестероидного противовоспалительного средства, сопровождается нарушениями микроциркуляции, о чем свидетельствует снижение содержания концентрации гемоглобина в тканях желудка и двенадцатиперстной кишки (рис. 3.). Исследуемые вещества эффективно корригируют

дефицит кровотока в поврежденном желудке, но не оказывают влияния на данный процесс в тонком кишечнике.

4

3,5 3 2,5 2 1,5 1

0,5 0

□ Контроль В Диклофенак-Ма ЙИБХФ-2 20 мг/кг НХС-3587 3,6 мг кг

Р и с. 3. Влияние исследуемых веществ на содержание гемоглобина (мг/г сырой ткани) в органах ЖКТ мышей, получавших диклофенак-нагрий

Примечание: * - различия при сравнении с животными контрольной группы достоверны при р<0,05; А - различия при сравнении с животными, получавшими только диклофенак-нагрий, достоверны при при р<0,05,

Эрозивно-язвенный процесс, развивающийся у белых мышей на фоне длительного приема нестероидного противовоспалительного средства, сопровождается снижением перистальтической активности желудочно-кишечного тракта (рис. 4.).

100 80 60 40 20 0

□ Контроль ШДиклофенак-Ма ЭИБХФ-2 20 мг/кг ВХС-3587 3,6 мг кг

Р и с. 4. Влияние исследуемых веществ на двигательную активность органов ЖКТ мышей, получавших диклофенак-натрий

Примечание: * - различия при сравнении с животными контрольной группы достоверны при р<0,05; А - различия при сравнении с животными, получавшими только диклофенак-нагрий, достоверны при при р<0,05.

Желудок Кишечник

Интегральный показатель, %

Соединения ИБХФ-2 и ХС- 3587 при внутрибрюшинном введении в дозах 20 мг/кг и 3,6 мг/кг соответственно стимулируют моторную активность желудочно-кишечного тракта.

По результатам проведенных экспериментов можно сделать заключение, что в условиях экспериментальной НПВП-индуцированной дуоденопа-тии слизистая оболочка желудка белых мышей подвергается более сильному повреждению, чем слизистая оболочка кишечника. При этом квамател и ИБХФ-2 в рамках использованной модели оказывают выраженное дуодено-протекторное действие, соединение ХС - 3587, хотя и обладает статистически достоверным гастродуоденопротекторным действием, но по силе эффекта уступает названным лекарственным средствам.

Обобщая приведённые выше данные, характеризующие активность изучаемых химических соединений при стрессе, воздействии агрессивных факторов на слизистую оболочку желудка и 12-перстной кишки, можно предположить, что эти соединения могут явиться основой для получения эффективного лекарственного средства с гастродуоденопротекторными свойствами. Механизм действия соединения на слизистую оболочку ЖКТ на сегодня ещё не изучен, но в свете полученных результатов, характеризующих исследуемые химические соединения как эффективные потенциальные гастро-протекторы, его изучение представляет большой научный и практический интерес для медицины.

ВЫВОДЫ

1. Вещества ХС-3587 - Ы-ацетилгидразид пара-диметиламинофенил-2 -хлорэтоксифосфорилуксусной кислоты и ИБХФ-2 - 2-:>тил-6-метил-3-гидроксипиридина ацетилглутамат в условиях экспериментальной НПВП-индуцированной гастродуоденопатии оказывали выраженный протекторный эффект. Причем вещество ИБХФ-2 проявило высокую протекторную активность в обеих исследованных дозах (10 мг/кг и 20 мг/кг) и заметно превосходило по своей активности вещество ХС-3587, вводимое в дозах 1,6 мг/кг и 3,6 мг/кг и препарат сравнения квамател, изученный в дозе 1 мг/кг.

2. Использование исследуемых соединений ИБХФ-2 и ХС-3587 на фоне курсового введения диклофенак-натрия приводило к практически полному восстановлению целостности слизистой оболочки, что подтверждается высокой степенью сохранности поверхностного эпителия.

3. На модели стресс- индуцированной гастродуоденопатии соединение ИБХФ-2 в дозе 20 мг/кг оказывало наибольшее протекторное действие, влияние вещества ХС-3587 в эквивалентной дозе было менее значительным.

4. При изучении спирто-преднизолоновой модели язвообразования можно отметить лишь незначительный протекторный эффект при использовании ИБХФ-2 в дозе 20 мг/кг.

5. Соединения ИБХФ-2 к ХС-3587 оказывают влияние на функциональные показатели ЖКТ: эффективно корригируют нарушения микроцир-

куляции в поврежденном желудке, но не оказывают влияние на данный процесс в тонком кишечнике; стимулируют моторную активность желудочно-кишечного тракта.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Полученные нами результаты позволяют рекомендовать целенаправленное исследование эффективности N-ацетилгидразид пара-диметиламинофенил-2-хлорэтокснфосфорилуксусной кислоты (лабораторный шифр ХС-3587) и 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина ацетилглутамат (лабораторный шифр ИБХФ-2) с целью разработки лекарственных средств для комплексной терапии симптоматических эрозивно-язвенных гастродуо-денопатий в клинике внутренних болезней.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Тазина Ю.А. Влияние некоторых цитопротекторов на микроциркуляцию при экспериментальном стрессе / Тазина Ю.А., Блинов Д.С., Балашов

B.П. и соавт. // Мат. XXXVII науч. конф. «Огаревские чтения» мед. института Модов. Ун-та. - Саранск, 2008. - С. 20 - 21.

2. Тазина Ю.А. Влияние фосфорорганического соединения и производного 3-оксипиридина на экспериментальную летальность при иммобили-зационном стрессе / Тазина Ю.А., Блинов Д.С. // Мат. I Региональной научно-практической конференции «Научный потенциал молодежи - будущему Мордовии». Вып. 10-Саранск,2009.-С. 88-89.

3. Крупнова Т.С. Макроморфологическая характеристика слизистой оболочки желудка мышей, получающих цитопротекторную терапию / Крупнова Т.С., Тазина Ю.А., Блинов Д.С., Балашов В.П. // Мат. XXXVIII науч. конф. «Огаревские чтения» мед. института Модов. Ун-та. - Саранск, 2009. -

C. 65 -66.

4. Тазина Ю.А. Морфологическое обоснование антиульцерогенной терапии в эксперименте / Тазина Ю.А., Блинов Д.С., Балашов В.П. и соавт. // Морфология. - 2009. - Т. 136. - №4. - С. 134-136.

5. Блинов Д.С.Гатропротекторная активность дерината и некоторых ангиоксидантных средств в условиях стресс-индуцированной гатропатии / Блинов Д.С., Тазина Ю.А., Крупнова Т.С. и соавт. // Мат. XVII Российского национального конгресса «Человек и лекарство». - М., 2010. - С. 580-581.

6. Блинов Д.С. Патогенетическое обоснование эффективности препаратов с и мм у и о м о л у л I ipy ю i ц е й и цитопротекторной активностью в коррекции эрозивно-язвенных гатродуоденопатий различной этиологии / Блинов Д.С., Тазина Ю.А., Крупнова Т.С. и соавт. // Медицинский альманах. - 2010. - Т. 10. - №1. - С. 134-135.

Бумага офсетная. Формат 60x84 1/16. Гарнитура Тайме. Печать способом ризографии. Усл. печ. л. 1,08. Уч.- изд. л. 0,8. Тираж 100 экз. Заказ №91 от 15.10.2010 г.

Отпечатано с оригинала-макета заказчика в ООО «Референт». 430000, г. Саранск, пр. Ленина, 21. Тел. (8342) 48-25-33.

АКТУАЛЬНОСТЬ ИССЛЕДОВАНИЯ. Язвенная болезнь — самое распространенное (после хронического гастрита и дуоденита) заболевание органов брюшной полости. Наиболее часто оно встречается в Северной Америке и Европе. Так, в США от 7 до 10 % населения в течение жизни болеют язвенной болезнью (Ивашкин В.Т. и соавт., 1999). Ежегодно регистрируются от 350 ООО до 450 ООО новых случаев заболевания. Каждый десятый житель Германии заболевает язвенной болезнью. Еще больше распространено это заболевание в Швеции (10,2 % взрослого населения) (Маев И.В. и соавт., 2004). Большое число больных язвенной болезнью регистрируется в России и странах СНГ (5 - 6 % взрослого населения) (Soll А.Н., 1998). Причем, тенденция к снижению частоты этих заболеваний прослеживается в развитых странах, но не является, к сожалению, характерной для жителей России (Ивашкин В.Т. и соавт., 2001; Лапина Т.Л., 2001; Маев И.В. и соавт., 2006).

Язвенная болезнь рассматривается многими авторами как заболевание всего организма, что подразумевает системность реагирования на воздействие этиологического (причинного) фактора с преимущественным поражением слизистой оболочки гастродуоденальной зоны. Подобная системность проявляется разнообразными функциональными и морфологическими изменениями не только в органах - мишенях — желудке и двенадцатиперстной кишке, но и в сопряженных органах, а также в различных, тесно связанных друг с другом регулирующих системах. Доказательством этому служат часто сопутствующие язвенной болезни функциональные и хронические заболевания органов пищеварения (Фадеенко Г.Д., 2004).

Вместе с тем, проблема язвенной болезни включает не только собственно клиническую, но и социально-экономическую составляющую. Известно, что более 60% больных приходится на лица молодого и среднего, наиболее трудоспособного и социально активного возраста. Следствием этого зачастую являются потеря трудоспособности,, а в ряде случаев, дисквалификация и инвалидизация таких больных (Чернин В.В., 2000). По-прежнему значительными остаются расходы, связанные с лечением больных язвенной болезнью, которые в США, например, составляют 3,1 млрд. долларов, занимая! 4-ое место после расходов, связанных с лечением гастроэзофагеальной реф-люксной болезни, желчнокаменной болезни и колоректального рака (Хаки-мова Д.Р. и соавт., 2003; Laine L., 2000).

Изучению язвенной болезни, в частности ее этиопатогенеза, лечения и профилактики, посвящено множество экспериментальных и клинических исследований, особенно за последние десятки лет. Вместе с тем, достигнутые успехи в раскрытии механизмов ульцерогенеза и разработка на их основе методов этиопатогенетической терапии все еще не решают проблемы язвенной болезни, заболевание остается достаточно распространенным во всем мире и сопряжено с развитием жизненно опасных осложнений (Фадеенко Г.Д., 2004).

В связи с этим, поиск средств консервативной коррекции эрозивно-язвенного поражения слизистой оболочки верхних отделов желудочно-кишечного тракта остается одной из актуальных проблем современной экспериментальной и клинической фармакологии.

ЦЕЛЬ РАБОТЫ: сравнительное изучение фармакологической эффективности неантихолинэстеразного фосфорорганического соединения ХС -3587 и производного 3-гидроксипиридина ИБХФ-2 при экспериментальных эрозивно-язвенных поражениях желудка и двенадцатиперстной кишки.

Для достижения поставленной цели в процессе выполнения работы решились следующие ЗАДАЧИ:

1. Провести сравнительное исследование терапевтической активности соединений ИБХФ-2 и ХС-3587 при НПВС - ассоциированной эрозивно-язвенной гастродуоденопатии у мышей.

2. Изучить фармакологическое действие соединений ИБХФ-2 и ХС-3587 при стресс - индуцированном ульцерогенезе.

3. Исследовать терапевтическую активность соединений ИБХФ-2 и ХС-3587 в условиях эрозивно-язвенного повреждения слизистой оболочки желудка и двенадцатиперстной кишки, вызванного введением спирто- пред-низолоновой смеси.

4. Изучить влияние исследуемых соединений на кровоснабжение стенки желудка и двенадцатиперстной кишки, моторику желудочно-кишечного тракта в условиях курсового введения диклофенак - натрия.

5. Изучить морфологию слизистой, оболочки желудка и двенадцатиперстной кишки на фоне введения диклофенак - натрия и коррекции ИБХФ-2 и ХС-3587.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА РАБОТЫ. В работе проведено сравнительное исследование терапевтической активности производного 3-гидроксипиридина ИБХФ-2 и производного фосфорилуксусной кислоты ХС-3587 на различных моделях эрозивно-язвенных гастродуоденопатий у белых мышей обоего пола.

Установлено, что в условиях стресс - индуцированного ульцерогенеза исследуемые вещества проявляют свойства гастроцито- и дуоденопротекто-ров при пероральном введении животным в эквимолярных дозах, при этом по своей фармакологической активности не уступают препарату сравнения ква-мателу, вводимому в сопоставимой дозе. В тех же дозах ИБХФ-2 и ХС-3587 изучены на модели формирования острых спирто - преднизолоновых дефектов слизистой оболочки желудка, умеренная гастропротекторная активность выявлена лишь у вещества ИБХФ-2 в дозе 20 мг/кг.

На модели НПВС - ассоциированной гастродуоденопатии, вызванной введением животным диклофенак - натрия, установлена дозозависимость терапевтического действия соединений: наибольший протекторный эффект проявляется у вещества ИБХФ-2 в дозе 20 мг/кг, при снижении вводимой дозы терапевтическая активность соединения снижается. Развитие эффекта сопровождается восстановлением целостности эпителия слизистой оболочки желудка и 127перстной кишки.

Впервые изучено влияние исследуемых соединений на некоторые функциональные показатели, отражающие состояние желудочно-кишечного тракта - кровенаполнение слизистой оболочки и двигательную активность 6 желудка и двенадцатиперстной кишки. Показано, что ИБХФ-2 и ХС-3587 в эквимолярных дозах стимулируют перистальтику кишечника, и повышают кровенаполнение стенки желудка мышей с диклофенак - индуцированной эрозивно-язвенной гастродуоденопатией.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЦЕННОСТЬ РАБОТЫ. Результаты проведенных исследований являются экспериментальным обоснованием для углубленного доклинического изучения эффективности веществ ХС-3587 - >1-ацетилгидразид пара - диметиламинофенил - 2 - хлорэтоксифосфорилуксус-ной кислоты и ИБХФ-2 - 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина ацетилглута-мат в лечении и профилактике эрозивно — язвенных гастродуоденопатий с целью создания потенциальных лекарственных средств.

ВНЕДРЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ РАБОТЫ. Материалы диссертации используются в научно-исследовательской работе и учебном процессе кафедр цитологии, гистологии и эмбриологии, фармакологии с курсом клинической фармакологии, и общественного здоровья и здравоохранения Мордовского государственного университета им. Н.П. Огарева.

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ: I

1. В условиях НПВП - индуцированного повреждения высокую протекторную активность проявило химическое соединение ИБХФ-2. Наименьший антиульцерогенный эффект показало вещество ХС-3587 в минимальной дозе (1,6 мг/кг).

2. Соединение ИБХФ-2 уменьшало выраженность эрозивно - язвенного повреждения слизистой оболочки желудка и двенадцатиперстной кишки при стресс - индуцированной гастродуоденопатии у мышей. Протекторное влияние вещества ХС-3587 было выражено в меньшей степени. Оба соединения малоэффективны в условиях спирто-преднизолонового поражения слизистой оболочки желудка и двенадцатиперстной кишки.

3. Исследуемые вещества-эффективно корригируют нарушения микроциркуляции в поврежденном желудке, но не оказывают влияния на данный процесс в тонком кишечнике. Соединения ИБХФ - 2 и ХС - 3587 в эквимолярных дозах стимулируют моторную активность желудочно-кишечного тракта.

ОСНОВНЫЕ СВЕДЕНИЯ ОБ АПРОБАЦИИ РАБОТЫ. Результаты исследований, представленные в диссертации докладывались на XV и XVI Российских национальных конгрессах «Человек и лекарство» (Москва, 2009, 2010), VI Съезде анатомов, гистологов и эмбриологов (Саратов, 2009), ежегодных Огаревских чтениях (научной конференции Мордовского госуниверситета, Саранск, 2008-2010), конференции, посвященной 100-летию со дня рождения Д.А. Жданова (Москва, 2008), конференциях молодых ученых Мордовского государственного университета им. Н.П. Огарева (Саранск, 2008-2010), I Региональной научно-практической конференции «Научный потенциал молодежи - будущему Мордовии» (Саранск, 2009), Межрегиональной научной конференции «Актуальные проблемы мед. науки и образования» (Пенза, 2009), Всероссийской конференции по гастроэнтерологии и гепатоло-гии (Нижний Новгород, 2010).

ПУБЛИКАЦИИ. По теме диссертации опубликовано 6 научных работ, в том числе 2 - в изданиях, рекомендованных ВАК Минобрануки РФ.

СТРУКТУРА И ОБЪЕМ РАБОТЫ. Диссертация изложена на 141 странице компьютерного набора, документирована 13 таблицами и иллюстрирована 20 рисунками. Работа состоит из введения, обзора литературы (глава I), описания материалов и методов исследования (глава II), изложения собственных результатов (глава III, IV, V), заключения и библиографического указателя, включающего 356 источников, в том числе 220 отечественных и 136 иностранных авторов.

выводы

1. Вещества ХС-3587 — N - ацетилгидразид пара — диметиламинофенил - 2 - хлорэтоксифосфорилуксусной кислоты и ИБХФ-2 - 2-этил,6-метил,3-гидроксипиридина ацетилглютамат в условиях экспериментальной, Н1ШП -гастродуоденопатии оказывали выраженный гастродуоденопротекторный эффект. Причем вещество ИБХФ-2 проявил высокую протекторную активность в обеих своих дозах (10 мг/кг и 20 мг/кг) и заметно превосходило по своим протекторным свойствам вещество ХС-3587, вводимое в дозах 1,6 мг/кг и 3,6 мг/кг и препарат сравнения квамател, изучаемый в дозе 1 мг/кг.

2. Использование исследуемых соединений ИБХФ-2 и ХС-3587 в условиях экспериментальной НПВП - гастродуоденопатии на микроскопическом уровне приводило к практически полному восстановлению целостности слизистой оболочки желудка и 12-перстной кишки, что подтверждается высокой степенью сохранности поверхностного эпителия.

3. На модели стресс - индуцированной гастродуоденопатии соединение ИБХФ-2 оказывало наибольшее протекторное действие, влияние вещества ХС-3587 в эквивалентной дозе было менее значительным.

4. При изучении спирто - преднизолоновой модели язвообразования можно отметить лишь незначительный протекторный эффект на слизистую оболочку желудка при использовании ИБХФ-2 в дозе 20 мг/кг.

5. Соединения ИБХФ-2 и ХС-3587 при НПВС - ассоциированной гастродуоденопатии оказывают влияние на функциональные показатели ЖКТ: эффективно корригируют нарушения микроциркуляции в поврежденном желудке, но не оказывают влияние на данный процесс в тонком кишечнике; стимулируют моторную активность ЖКТ.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Полученные нами результаты позволяют рекомендовать целенаправленное исследование эффективности N - ацетилгидразид пара - диметилами-нофенил - 2 - хлорэтоксифосфорилуксусной кислоты (лабораторный шифр ХС-3587)и 2-этил,6-метил,3-гидроксипиридина ацетилглютамат (лабораторный шифр ИБХФ-2) с целью разработки лекарственных средств для комплексной терапии симптоматических эрозивно-язвенных гастродуоденопатий в клинике внутренних болезней.