Автореферат и диссертация по медицине (14.00.14) на тему:Исследование антипролиферативной активности интернализуемых пептидов, содержащих фрагменты ингибиторов циклиновых киназ р16INК4а и р21СIР/КIР
- Ученая степень
- кандидата медицинских наук
- ВАК РФ
- 14.00.14
Оглавление диссертации Кулинич, Татьяна Михайловна :: 2006 :: Москва
Список сокращений
2. Введение
3. Обзор литературы
3.1. Интернализуемые пептиды
3.2. Интернализуемые пептиды, полученные из белков
3.3 Пептиды, основанные на сигнальных последовательностях
3.4 Синтетические или химерные проникающие пептиды
3.5 Модельные амфифильные пептиды
3.6 Свойства пептидов, необходимые для интернализации
3.7 Возможные механизмы интернализации
3.8 Токсичность ИнП
3.9 ИнП — векторы доставки
3.10 Применение интернализуемых пептидов для регуляции клеточных функций
3.11 Основные этапы клеточного деления и возможные точки
Введение диссертации по теме "Онкология", Кулинич, Татьяна Михайловна, автореферат
С начала 90-х годов в России ежегодно диагностируют более 400 тысяч случаев злокачественных новообразований [6]. При этом в Европе ежегодная смертность от онкологических заболеваний за период с 1985 года по 2004 продолжает расти [60]. В структуре причин смертности онкологические заболевания занимают 2-ое место после заболеваний сердечно-сосудистой системы. Поэтому поиск новых лекарственных противоопухолевых препаратов является одной из актуальных задачей современной биологии и медицины [103].
В настоящее время большое количество работ посвящено созданию новых лекарственных противоопухолевых препаратов на основании достижений молекулярной биологии [99,109,11]. Общепринято, что основополагающим признаком неопластической клетки является нарушение регуляции клеточного цикла и апоптоза [36]. Известно, что регуляция процессов пролиферации клетки контролируется путем последовательной активации циклинов и соответствующих циклин-зависимых киназ (Сс1к) [11]. Активность циклиновых киназ определяется уровнем экспрессии соответствующих циклинов и активностью специфических ингибиторов циклиновых киназ [71]. Имеется несколько семейств ингибиторов циклиновых киназ. Наиболее изученными и, по-видимому, практически важными для онкологии являются - р16ШК4а, р21С1Р/К1Р, р27 К1Р1 [79]. Показано, например, что мутации или гиперметилирование промоторов генов ингибиторов циклиновых киназах наблюдаются в 40-60% случаев злокачественных лимфом, раке поджелудочной железы и ряде других злокачественных новообразований [103, 90].
В настоящее время синтезирован ряд низкомолекулярных ингибиторов циклиновых киназ и проходит их экспериментальное изучение [101]. Активно изучаются возможности востановдения функции р 16 с помощью методов генной терапии [93, 122]. Другим, возможным направлением, для создания ингибиторов циклиновых киназ может быть использование функциональных последовательностей из соответствующих внутриклеточных ингибиторов [123]. Белок р16 INK4a является одним из наиболее интересных кандидатов группы ингибиторов Cdk [121,122]. Известно, что белок pl6INK4a ингибирует циклин зависимые киназы D и тем самым прохождение G1 фазы клеточного цикла [32, 58]. Показано, что его функция нарушена при широком спектре онкологических заболеваний [76]. Другим возможным кандидатом на использование в качестве ингибитора пролиферации является белок р21 — ингибирующий циклиновые киназы всех типов [84, 109, 117]. Дополнительным мотивом к поиску технологий применения естественных белковых ингибиторов пролиферации стало открытие нового способа внутриклеточной доставки с помощью коротких последовательностей аминокислот (п=15-30), способных выполнять векторные функции в отношении пептидных последовательностей и соединений другой химической природы (РНК, ДНК) [29, 61, 82].
Метод внутриклеточной достакви различных веществ, основанный на технологии пептидных векторов, обладающих способностью проникать в клетки, не повреждая плазматическую мембрану, является весьма перспективным ввиду слабой иммуногенности таких соединений и способности переносить достаточно крупные молекулы [9,28,30,33]. Соединение возможности целевой доставки пептидов в клетку и обнаружение коротких функциональных доменов в белках регуляторах различных клеточных функций создали предпосылки для конструирования молекул имеющих патогенетическую направленность [38, 105, 111]. Относительная простота синтеза таких молекул позволяет говорить о принципиальной возможности создания индивидуальных химиопрепаратов на их основе, т.е. влияющих на патологические изменения свойственных данной конкретной опухоли [92,95]. Поэтому мы сформулировали следующую цель нашей работы:
Цель исследования:
Изучение антипролиферативных свойств химерных пептидов, включающих последовательности из ингибиторов циклиновых киназ pl6INK4a и p21Cip/Kip и содержащих интернализуемые последовательности.
Для достижения поставленной цели были сформулированы следующие задачи:
1. Исследовать способность пептидов, включающих интернализуемые последовательности проникать и накапливаться в клетках.
2. Изучить влияние исследуемых интернализуемых пептидов с фрагментами pl6INK4a и p21Cip/Kip на процессы пролиферации клетки на примере клеточных культур различного происхождения.
3. Изучить способность исследуемых пептидов ингибировать активность циклин-зависимых киназ.
4. Сравнить эффекты, оказываемые пептидами с разными функциональными группами (pl6INK4a и р21 Cip/Kip) и с разными интернализуемыми последовательностями (Tat, pAntp).
5. Изучить эффекты положения функциональных групп и размера пептидов на их биологическую активность.
Научная новизна.
Впервые синтезирован спектр химерных пептидов содержащих белок-переносчик (Tat, pAntp) и «активные центры» - р21 Cip/Kip и pl6INK4a имеющих различное положение функциональных и лидирующих групп. Для их создания использован как твердофазный синтез, так и генно-инженерные методы.
Впервые, с использованием метода проточной цитофлуорометрии, доказана возможность внутриклеточного ингибирования фосфорилирования рШэ, и, как следствие, угнетение пролиферации. Показано, что данные химерные интернализуемые пептиды оказывают цитостатический и цитотоксический эффекты на активно пролиферирующие клетки.
Впервые исследованы различия эффектов, вызываемых интернализуемыми пептидами с активными центрами р21Слр/Клр и р161ЫК4а. Впервые исследовано влияние структуры и положения интернализуемой последовательности на функциональные свойства химерных пептидов.
По результатам исследования получен патент на изобретение « Химерный белок для лечения злокачественных лимфом».
Практическая значимость нолучснных результатов.
Настоящая работа представляет практический интерес для создания нового класса фармакологических препаратов на основе интернализуемых пептидов, действующих по патогенетическому принципу. В работе показано, что исследуемые пептидные последовательности обладают цитостатическими свойствами, что позволяет их рассматривать как потенциальные противоопухолевые препараты. Полученные результаты являются основанием для дальнейшего изучения свойств химерных пептидов, в том числе несущих пептиды - ингибиторы циклиновых киназ и создания на их основе новых "таргетных" противоопухолевых средств.
Публикации.
По материалам диссертации опубликовано 4 научные работы, изданные в отечественной (2) и зарубежной печати (1). Получен патент на изобретение № 2004133921/15(036909). - 2004 г.
Структура и объем диссертации.
Материал диссертации изложен на 123 страницах и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов исследования, главы обсуждения полученных результатов, выводов и списка литературы. Библиографический указатель включает в себя
Заключение диссертационного исследования на тему "Исследование антипролиферативной активности интернализуемых пептидов, содержащих фрагменты ингибиторов циклиновых киназ р16INК4а и р21СIР/КIР"
7. Выводы.
1. Пептидные векторы Antp и Tat накапливаются во внутриклеточном пространстве и могут быть переносчиками как небольших амино-кислотных последовательностей, так и последовательностей содержащих более 50 аминокислот.
2. Исследование влияния положения векторной последовательности показало, что перемещение ее на N-конец химерной конструкции приводит к снижению функциональной активности пептидов. Показано, что изменение длины полипептидной цепи практически не влияет на функциональную активность пептидов.
3. Пептиды, содержащие фрагмент pl6INK4a (82 - 102), вызывают задержку пролиферации клеток в вОЮЬфазе, увеличивая процент клеток в GO/Gl-фазе до 62% (в контроле в среднем 24%).
4. Снижение активности циклиновых киназ D-типа под воздействием пептидов, содержащие функциональные фрагменты белка pl6INK4a, подтверждается уменьшением уровня фосфорилирования PRb и снижением экспрессии мРНК циклинов.
5. Пептид, содержащие фрагмент р21 Cip/Kip вызывают задержку пролиферации клеток в S-фазе. Уровень S-фазы увеличивается до 65% (в контроле - 44%). Количество клеток в G2/M - фазе снижается до 0,5% (в контроле - 13%>).
6. Пептиды, включающие последовательность из pl6INK4a кроме цитостатического оказывают и цитотоксический эффект, выражающийся в увеличении уровня апоптоза. Средний уровень апоптоза в образцах с пептидами содержащими фрагмент pl6INK4a (40мкМ) увеличивается до 32,6% (в контроле - 10%).
Список использованной литературы по медицине, диссертация 2006 года, Кулинич, Татьяна Михайловна
1. Абелев Г.И. Механизмы дифференцировки и опухолевый рост //Биохимия.-2000. т.65.-№ 1.-С. 127-138.
2. Богатырев В. Н. Значение количественных методов исследования (морфометрии, проточной цитометрии, сканирующей микрофотометрии) в клинической онкоцитологии. Автореф. дисс. доктора мед.наук. - Москва. - 1991. - С. 78-111.
3. Богатырев В.Н., Портной С.М., Лактионов К.П., Летягин В.П. Проточная цитометрия при раке молочной железы T1-2N0M0: анализ 10-летних наблюдений. Материалы 1 съезда онкологов стран СНГ, 3-6 декабря 1996, Москва т.2, стр. 482483. .' '.' " '
4. Владимирская Е.Б., Масчан A.A., Румянцев А.Г. Апоптоз и его роль в развитии опухолевого роста // Гематол. и трансфузиол., 1997. - т.42.-№ 5.-С.4-9.
5. Давыдов М.И., Аксель Е.М. Злокачественные новообразования в России и странах СНГ в 2000 г. М.: РОНЦ им. Н.Н.Блохина РАМН. 2002 - С. 281.
6. Епифанова О.И., Полуновский В.А., Терских В.В. -"Регуляторные механизмы пролиферации клеток", М., ВИНИТИ, Итоги науки и техники. 1998. - т. 10. - С.28-30.
7. Епифанова О.И., Полуновский В.А., Терских В.В. -"Регуляция размножения клеток в процессе специализации, старения и неопластической трансформации", М., ВИНИТИ, Итоги науки и техники. 1998. - т.11. - С.43-44.
8. Игнатович И. А. , Диже Э. Б. , Павлоцкая А. В. , Акифьев Б. Н. , Буров С. В., Орлов C.B., Перевозчиков А. П. Механизм переноса комплексов ДНК/Tat в клетки млекопитающих. -11-ая Международная конференция. 2003.
9. Копнин Б.П. Мишени действия онкогенов и опухолевых суирессоров: ключ к пониманию базовых механизмов канцерогенеза // Биохимия. -2000.-т.65.-№ 1.-С.5-33.
10. Копнин Б.П. Опухолевые супрессоры и мутаторные гены//Российский онкологический научный центр им. Н.Н.Блохина РАМН, Москва. 2002.
11. Копнин Б.П. Основные свойства неопластической клетки и базовые механизмы их возникновения.//Российский онкологический научный центр им. Н.Н.Блохина РАМН, Москва. 2002.
12. Коршунов А.Г., Сычева Р.В., Голанов A.B. Иммуногистохимическое изучение апоптоза в глиобластомах больших полушарий головного мозга// Арх. пат. 1998. Т. 60, № 3. - С. 23-27.
13. Лушников Е.Ф., Абросимов А.Ю. Гибель клетки (апоптоз). М.: Медицина, 2001. - С. 81-1 10.
14. Лушников Е.Ф., Абросимов А.Ю. Сравнительная морфология апоптоза и некроза клеток опухолей // Тезисы 1 Белорусского съезда патологоанатомов и судебных медиков.- Минск. 1990-1991. - Т. 2.- С. 299-300.
15. Ориновский М.Б., Ожерельев A.C., Кушлинский Н.Е. Рак молочной железы. Тканевые маркеры в оценке метастазировапия и прогноза (монография)//Издательская группа РОНЦ им. Блохина РАМН.-М.-2003.- С.250. ББК 55.6.081.
16. Программированная клеточная гибель//под ред. проф. В.С.Новикова. СПб.: Наука. - 1996.-С. 276.
17. Робинсон М.В., Труфакин В. А. Апоптоз клеток иммунной системы. Успехи соврем биологии. 1991. - Т. 111, № 2. - С. 246-259.
18. Руководство по иммуногистохимической диагностике опухолей человека//под ред.С.В. Петрова, Н.Т. Райхлина: Казань 2000. - С. 250-265.
19. Самуилов В.Д., Олескин A.B., Лагунова Е.М. Программируемая клеточная смерть//Биохимия. 2000. - т.5.- С.34-36.
20. Симоненко В.Б., Бойцов С.А., Глухов A.A. Апоптоз и патология миокарда // Клин. мед. 2000. - т.78, № 8. - С. 1216.
21. Слонимская Е.М. Прогнозирование исхода заболевания у больных раком молочной железы. Автореф. дисс. доктора медицинских наук.-Томск. 1999. - С.48.
22. Фильченков A.A. Современные представления о роли апоптоза в опухолевом росте и его значение припротивоопухолевой терапии//Эксперим. онкол. -1998.-т.20.1. C.259-270.
23. Фильченков А.А., Стойка Р.С. Апоптоз и рак. Киев. -Морион.- 1999.-С. 184:
24. Ярилин А.А. Апоптоз. Природа феномена и его роль в целостном организме//Патол. физиол. экспериментальная терапия. -1998.-Т.2.-С.З8-48
25. Adams P.D. Regulation of the retinoblastoma tumor suppressor protein by cyclin/cdks. // Biochim. Biophys. Acta. -2001. Vol. - 1471. - P.123-133.
26. Ball K.L., Lain S., Fahraeus R., Smythe C., Lane D.P. Cell-cycle arrest inhibitor of Cdk4 activity by small peptides based on the carboxy-terminal domain о f p21WAri //Current Biology. 1996. - Vol. 7, P. 71-80.
27. Becker-Hapak M., McAllister S. S., and Dowdy S. F. TATMediated Protein Transduction into Mammalian CeIls//Metods. -2001. Vol. 24. - P. 247-256.
28. Bedner Elzbieta et al. Analysis of apoptosis by Laser Scanning Cytometry//Cytometry.-l999.-Vol.35.-P. 181-195.
29. Bonny C., Oberson A., Negri S., Sauser C., and Schorderet
30. D. F. Cell-Permeable Peptide Inhibitors of JNK Novel Blockers of p -Cell Death// DIABETES. 2001. - Vol. 50. - P.77-82.
31. Brodsky J.L. Translocation of proteins across the endoplasmic reticulum membrane. // Int. Rev. Cvt. 1998. V. 178. P. 277-328.
32. Chappuis P. O., Kapusta L., Begin L.R., et al. Germinal BRSA1/2 mutations and p27ljpl protein levels independentlyoutcome after breast cancer // J. Clin. Oncol. 2000. - Vol. 18. p. 4045 - 4052.
33. Chen T.L., Luo I., Mikhail N., Raskova J., Raska K Jr. Comparison of flow and image cytometry for DNA content analysis of fresh and formalin-fixed, paraffin-embedded tissue in breast carcinoma// Cytometry.-1995.-vol.22.- №3.-P.181-9.
34. Christiaens B., Grooten J., Reusens M., Joliot A., Goethals M., Vandekerckhove J., Prochiantz A. and Rosseneu M. Membrane interaction and cellular internalization of penetratin peptides//Eur. J. Biochemystry. 2004. - Vol. 271, P. 11871 197.
35. Cook D.L., Weaver D.L. Comparison of DNA content, S-phase fraction, and survival between medullary and ductal carcinoma of the breast//Am J Clin Pathol.-1995.-vol. 101.- №1.-P.17-22.
36. Crissman A. and T. Hirons G. Staining of DNA in live and fixed cells//Methods in Cell Biology. Academic Press, San Diego.-1994.-P. 195-209.
37. Darzynkiewicz Z. Apoptosis in antitumour strategies: modulation of cell cycle or differentiation//.! Cell Biochem.-1995.-Vol.58.- P.151-59.
38. Derossi D., Calvet S., Trembleau A., Brunissen A., Chasaing G., Prochiatz A. Cell internalization of the third helix of the Antennapedia homeodomain is receptor-independent. // J. Biological Chemystry. 1996. - Vol.271 (30). - P. 1 8 1 88-1 8193.
39. Derossi D., Chassaing G., Prochiantz A. Trojan peptides: the penetratin system of intracellurar delivery.// Trends Cell Biol. 1998. - Vol.8. - P.84-87.
40. Deshayes S., Gerbal-Chaloin S., Morris M.C., Aldrian-Herrada G., Charnet P., Divita G., Heitz F. On the mechanism of non-endosomial peptide-mediated cellular delivery of nucleic acids//Biochim Biophys Acta. 2004. - Vol.15. - No. 1667. -P.141-147.
41. Dressier L.G. Controls, standards, and histogram interpretation in DNA flow cytometry//Biology.-1990.-Vol.33.-P. 1 57.
42. Drin G., Mazel M., Clair P., DanieA le Mathie, Kaczorekl M. and Temsamani J. Physico-chemical requirements for cellular uptake of pAntp peptide. Role of lipid-binding affinity//Eur. J. Biochemystry. 2001. - Vol. 268. - P. 1304 -1314.
43. Eiden L.E. Fusion polypeptides that inhibit exocytosis: fusing aptamer and cell-penetrating Peptide technologies and pharmacologies//Molecular Pharmacology. 2005. - Vol.67. -No.4. - P.980-982.
44. Elliott G., O'Hare P. Intercellular trafficking and protein delivery by a herpes virus structural protein. // Cell. 1997. -Vol. 88. - P. 223-233.
45. Eriksson M., Nielsen P.E., Good L. Cell permeabilization and uptake of antisense peptide-peptide nucleic acid (PNA) into Escherihia coli. // J. Biology Chemystry. 2002. - Vol.277 (9).1. P. 7144-7147.
46. Ezhevsky S. A., Ho A., Becker M. Differential Regulation of Retinoblastoma Tumor Suppressor Protein by Gl Cyclin-Dependent Kinase Complexes In Vivo//Molecular and cellular biology. 2001. - Vol. 21. - No. 14. - P. 4773-4784.
47. Fischer P.M., Krausz E., and Lane D.P. Cellular delivery of impermeable effector molecules in the form of conjugates with peptides capable of mediating membrane translocation//Bioconjugate Chem. 2001. - Vol. 12, P. 825841.
48. Fischer R., Waizenegger T., Kohler K., Brock R. A quantitative validation of fluorophore-labelled cell-permeable peptide conjugates: fluorophore and cargo dependence of import//Biochimica et Biophysica Acta . 2002. - Vol. 1564, P. 365- 374.
49. Ford K.G., Souberbielle B.E., Darling D.and Farzaneh F. Protein transduction: an alternative to genetic intervention? //Gene Therapy. 2001. - Vol. 8. - P. 1-4.
50. Frankel A.D., Pabo C.O. Cellular uptake of the Tat protein from human iminodeficiency virus. // Cell. 1996. - Vol. 55. -P.1189-1193.
51. Fu G.H., Wang Y., Xi Y.H., Shen W.W., Pan X.Y., Shen W.Z., Jiang X.S., Chen G.Q. Direct interaction and cooperativerole of tumor suppressor p 16 with band 3 (AE1)//FEBS Letter. -2005. Vol 1. - P.2105-21 10.
52. Garrett M. D. and Fattaey A. CDK inhibition and cancer therapy//Current Opinion in Genetics & Development. 1999. -Vol. 9. - P. 104-111.
53. Gupta B., Levchenko T.S., Torchilin V.P. Intracellular delivery of large molecules and small particles by cell-penetrating proteins and peptides//Adv Drug Deliv Rev. 2005.- Vol.28. No.57. - P.637-51.
54. Hallbrink M., Floren A., Elmquist A., Pooga M., Bartfai T., Langel U. Cargo delivery kinetics of cell-penetrating peptides.// Biochem. Biophys. Acta. 2001. - Vol.1515 (2). - P. 101-109.
55. Hallbrink M., Oehlke J., Papsdorf G., Bienert M. Uptake of cell-penetrating peptides is dependent on peptide-to-cell ratio rather than on peptide concentration//Biochimical Biophysical Acta. 2004. - Vol.15. - No.1667. - P.222-228.
56. Ho A. , Schwarze S. R., Mermelstein S. J., Waksman G. and Dowdy S. F. Synthetic Protein Transduction Domains: Enhanced Transduction Potential in Vitro and in Vivo//Cancer Research. -2001. Vol. 61. - №15. - P. 474-477.
57. Hosotani R., Miyamoto Y., Fujimoto K., Doi R., Otaka A., Fujii N. and Imamura M., Trojan p 16 Peptide Suppresses Pancreatic Cancer Growth and Prolongs Survival in Mice//Clinical Cancer Research. 2002. - Vol. 8. - P. 12711276.
58. Joliot A., Pernelle C., Deagostini-Bazin H., Prochiantz A. Antennapedia homeobox peptide regulates neural morphogenesis. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1991. - Vol.88. - P.1864-1868.
59. Joliot A.H., Triller A., Volovitch M., Pernelle C., Prochiatz A. Polysialic acid is the neuronal surface receptor of Antennapedia homeobox peptide. // New Biol. 1991. - No 3. -P. 1121-1134.
60. Jones S. W. , Christison R., Bundell K., Voyce C. J. , Brockbank S. M. V. , Newham P. and Lindsay M. A. . Characterisation of cell-penetrating peptide-mediated peptidedelivery//British Journal of Pharmacology. 2005. - Vol. 145. -P.1093-1102.
61. Kaplan I.M., Wadia J.S., Dowdy S.F. Cationic TAT peptide transduction domain enters cells by macropinocytosis// Control Release. 2005. - Vol.102. - No.20. - P.247-253.
62. Kastan M. B and Bartek J. Cell-cycle checkpoints and cancer//Nature. 2004. - Vol. 432. - P.316-323.
63. Kerr J.F.R., Winterford C.M., Harmon B.V. Apoptosis: Its significance in cancer and cancer therapy//Cancer.-1994.-vol.73.-P.2013-26.
64. Kilk K., El-Andaloussi S., Jarver P., Meikas A., Valkna A., Bartfai T., Kogerman P., Metsis M., Langel U. Evaluation of transportan 10 in PEI mediated plasmid delivery assay//Control Release. 2005. - Vol.21. - No.103(2). - P.51 1-523.
65. Kondo E., Seto M., Yoshikawa K., Yoshino T. Highly efficient delivery of pi 6 antitumor peptide into aggressive leukemia/lymphoma cells using a novel transporter system//Molecular Cancer Ther. 2004. - Vol.'l2. - P. 16231630.
66. Koppelhus U., Awashi S., Zachar V., Hoist H., Ebbesen P., Nielsen P. Cell-dependent differential cellurar uptake of PNA, peptides and PNA-peptide conjugates.// Antisense Nucl. Acid Drug Dev. 2002. - Vol. 12. - P. 51-63.
67. Li J.Q., Li Y., Shi Y.J., Wu S.L. Re-expression of p 16 gene in myeloma cell line U266 by arsenic trioxide//Ai Zheng. -2004. Vol.23. - No.6. - P.626-630.
68. Lindgren M.E., Ilallbrink M.M., Elmquist A.M., Langel U. Passage of cell-penetrating peptides across a human epithelial cell layer in vitro//Biochem. J. 2004.- Vol.377. - P.69-76.
69. Lindgren M.E., Ilallbrink M.M., Prochiantz A., Langel U. Cell penetrating peptides.//Tips. 2000. - Vol.21. - P.99-102.
70. Lowe S.W, Cepero E. and Evan G. Intrinsic tumour suppression//Nature. 2004. - Vol. 432. - P.307-3 15.
71. Lundberg P., Langel U. A brief introduction to cell penetrating peptides. // J. Mol. Recogn. 2003. - Vol.16. - P. 227-233.
72. Marty C., Meylan C., Schott H., Ballmer-Hofer K., Schwendener R.A. Enhanced heparan sulfate proteoglycan-mediated uptake of cell-penetrating peptide-modified liposomes//Cell Molecular Life Scince. 2004. - Vol.14. -P.1785-1794.
73. Massague J. G1 cell-cycle control and cancer//Nature. -2004. Vol. 432. - P.298 - 306.
74. Matsuzaki K., Sugishita K., Miyajima K. Interactions of an antimicrobial peptide, magainin 2, with liposomosacharidecontaining liposomes as a model for outer membranes of gramnegative bacteria.// FEBS Letter. 1999. - Vol. 449 (2-3). - P. 221-224.
75. Mitra J., Dai C. Y., Somasundaram K., El-Deiry W.S., Satyamoorthy K., Herlyn M., and Enders G. II. Induction of p21WAn/ciiM and Inhibition of cdk2 Mediated by the Tumor
76. Suppressor pl6INK4a//Molecular and Cellular Biology. 1999. -Vol. 19. - No. 5. - P. 3916-3928.
77. Morris M.C., Vida P., Chaloin L,. Heitz F., Divita G. A new peptide vector for efficient delivery of oligonucleotides into mammalan cells. // Nucl. Acids Res. 1997. - Vol. 25. - P. 2730-2736.
78. Mosmann T. Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival: application to proliferation and cytotoxicity assays // J. Immunology Methods. 1983. Vol.-65 (1-2). - P. 55-63.
79. Perea S.E., Reyes O., Puchades Y., Mendoza O., Vispo N.S., Torrens I., Santos A., Silva R., Acevedo B., Lopez E.,
80. Falcon V., Alonso D.F. Antitumor effect of a novel proapoptotic peptide that impairs the phosphorylation by the protein kinase 2 (casein kinase 2)//Cancer Research. 2004. - Vol.64. - No. 19. -P.7127-7129.
81. Persson D., Thoren P.E., Esbjorner E.K., Goksor M., Lincoln P., Norden B. Vesicle size-dependent translocation of penetratin analogs across lipid membranes//Biochimical Biophysical Acta. 2004. - Vol.11. - No. 1665. - P. 142-155.
82. Plenat T., Deshayes S., Boichot S., Milhiet P.E., Cole R.B., Heitz F., Le Grimellec C. Interaction of primary amphipathic cell-penetrating peptides with phospholipid-supported monolayers//Langmuir. 2004. - Vol.12. - No.20. - P.9255-9261.
83. Pooga M., Hallbrink M., Zorko M., Langel U. Cell penetration by transportan//FASEB J. 1998. - Vol.12. - P.67-77.
84. Pooga M., Kihlmark M., Hallbrink M., Fermaeus S., Raid R., Land T., Hallberg E., Bartfai T., Langel U. Cellurar translocation of proteins by transportan. // FASEB J. 2001. -Vol.15. - P.1451-1453.
85. Rajagopalan H. and Lengauer C. Aneuploidy and cancer/VNature. 2004. - Vol. 432. - P.338 - 341.
86. Richard J.P., Melikov K., Vives E., Ramos C., Verbeure B., Gait M.J., Chernomordik L.V. and Lebleu B. Cell-penetrating peptides: A reevaluation of the mechanism of cellular uptake// Journal Biological Chemystry. 2003. - Vol. 278. - P.585-590.
87. Ross M.F., Murphy M.P. Cell-penetrating peptides are excluded from the mitochondrial matrix. Biochem Soc Trans. -2004. Vol.32. - P.1072-1074.
88. Salazar G. and Gonza A. Novel Mechanism for Regulation of Epidermal Growth Factor Receptor Endocytosis Revealed by Protein Kinase A Inhibition//Molecular Biology of the Cell. -May 2002. Vol. 13. - P.1677-1693.
89. Sawyers C. Targeted cancer therapy//Nature. 2004. - Vol. 432. - P. 294-297. www.nature.com/nature.
90. Schutze-Redelmeier M.P., Kong S., Bally M.B., Dutz J.P. Antennapedia transduction sequence promotes anti tumour immunity to epicutaneously administered CTL epitopes//Vaccine.- 2004. Vol.7.-№22.- P. 1985-1991.
91. Schwarze S.R., Ho A., Vocero-Akbani A., and Dowdy S.F. In vivo protein transduction: Delivery of a biologically active protein into the mouse//Science. 2000. -Vol. 285, P. 1569-1572.
92. Soomets U., Lindgren M., Gallet X., Hallbrink M., Elmquist A., Balaspiri L., Zorko M., Pooga M., Brasseur R., Langel U. Deletion analogues of transportan. // Biochim. Biophys. Acta.- 2000.- Vol.1467 (1). P. 165-176.
93. Szeto H.H., Schiller P.W., Zhao K., Luo G. Fluorescent dyes alter intracellular targeting and function of cell-penetrating tetrapeptides//FASEB Journal. 2005. - Vol.19(1). - P.118-120.
94. Takeshima K., Chikusha A., Lee K., Yonehara S., Matsuzaki K. Translocation of analogues of the antimicrobial peptides magainin and buforin across human cell membranes//J.Biol. Chemystry. 2003. - Vol.278. - P.1310-1315.
95. Temsamani J., Vidal P. The use of cell-penetrating peptides for drug delivery//Drug Discov Today. 2004. - Vol.1.- No.23. P.1012-1019.
96. Trehin R., Merkle II.P. Chances and pitfalls of cell penetrating peptides for cellular drug delivery//European Journal Pharm. Biopharmacology. 2004. - Vol.58. - P.209-223.
97. Vives E., Brodin P. Lebleu B. A truncated HIV-1 Tat protein basic domain rapidly translocates through the plasma membrane and accumulates in the cell nucleus. // J. Biol. Chemystry. 1997. - Vol.272. - P. 16010-16017.
98. Wadia J. S. and Dowdy S. F. Protein transduction technology//Current Opinion in Biotechnology. 2002. -Vol.13. - P.52-56.
99. Wu C.-M., Huang T.-H., Xie Q.-D., Wu D.-S., Xu X.-H. Construction of pETNF-P16 plasmid and its expression properties in EC9706 cell line induced by X-ray irradiation// World J. Gastroenterol. 2004. - Vol.15. - No.20. - P.2927-2930
100. Xu D., Qin Y., Sun Z.L., Sun Z.F. Research on the growth inhibition of T47D cell and reversion of pi 6 hypermethylation by CDP// Sichuan Da Xue Xue Bao Yi Xue Ban. 2004. -Vol.35. - No.6. - P.792-796.
101. Zhang Y., Liu J., Xue F., Li J., p 16 tumor suppressor therapy in salivary adenoid cystic carcinoma cell line SACC83// Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod. 2005. -Vol.100. - P.70-74.