Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Интероцептивные эффекты психотропных препаратов

На правах рукописи

Калинина Та тьяна Сергеевна

ИНТЕРОЦЕПТИВНЫЕ ЭФФЕКТЫ ПСИХОТРОПНЫХ ПРЕПАРАТОВ

14.00.25-ФА|'МАКОЛОП1Я, клнничкская фармакология

АВТОРЕФЕРАТ лиссертацнн на соискание ученой степени доктора биологических наук

Москва - 2008

003465552

Работа выполнена в ГУ IIIIII фармакологии имени В.В.Закусова Российской академии медицинских паук

Научный консультант:

доктор медицинских наук, профессор Воронина Татьяна Александровна

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор доктор биологических наук, профессор доктор биологических наук

Ковалев Георгий Иванович Каменский Андрей Александрович Кост Наталия Всеволодовна

Ведущая оргашиацпн:

Санкт-Петербургский Государственный Медицинский Университет имени И.П.Павлова Росздрава

Защита состой к я __О*/_2009 года в ч на заседании диссертационного

совета Д.001.024.01 при ГУ НИИ фармакологии имени В.В.Закусова РАМН но адресу: 125315 Москва, ул. Балтийская, д.8

С диссертацией можно ознакомиться в ученой части ГУ НИИ фармакологии имени В.В.Закусова РАМП по адресу 125315 Москва, Балтийская ул.8.

Автореферат разослан « & » Рр^ 2009 I-.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук

Е.А.Вальдман

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность работы. Одним из актуальных направлений современной экспериментальной и клинической фармакологии является изучение интероцептивных (субъективных) эффектов психотропных препаратов, которые, как полагают, являются важным фактором, повышающим риск развития лекарственной зависимости (Rush et al., 2004; Vansickel et al., 2006). Способность фармакологических агентов проявлять интероцептивные свойства лежит в основе фундаментального феномена "обучения, зависимого от состояния", состоящего в том, что ранее выработанный у человека или животного условный рефлекс воспроизводится в наиболее полной форме только в том состоянии, в котором происходит его выработка (Overton, 1984, Khavandgar et al., 2003). Моделируемое введением веществ "обучение, зависимое от состояния" обнаруживается в явлениях, которые можно подразделить на две основные группы: диссоциированное обучение (state dependent learning) н лекарственную дифференцировку (ЛкД) (drug discrimination).

В эксперименте при обучении животных ЛкД интероцептивные эффекты фармакологических агентов выполняют функцию днфференцпровочных стимулов, указывая на высокую вероятность предъявления физиологически значимого для организма безусловного раздражителя (вознаграждения) при совершении определенной инструментальной реакции. В процессе такого условпорефлекторного обучения у животного формируется стабильная интероцептивная дифференцировка по степени, воспроизведения которой судят об изменении интероцептивных эффектов тренировочных веществ после самых разнообразных фармакологических манипуляции (Colpaert, 1999; Jarbe et al., 2008).

Являясь самостоятельным физиологическим феноменом, ЛкД составляет основу методологического подхода к экспериментальному изучению целого ряда проблем биологии и медицины. Современные классификационные схемы подтипов рецепторов нервной системы основываюгся на результатах исследований лигандного связывания и других методов анализа in vitro, при использовании в качестве моделей патологии трансгенных и нокаутированных инбредных линий животных (Creslani et al., 2001; Rosahl, 2003; Morris et al., 2006; Stórustovu, Ebert, 2006). При этом остается актуальной проблема сопоставления этих данных с анализом действия психотропных препаратов и функционирования рецепторных систем в условиях'in vivo и в исходных популяциях (wild) лабораторных животных (Rowlett et al., 2005; Atack et al., 2007). Высокая корреляция данных, полученных при изучении рецепторных механизмов действия веществ на основе анализа их интероцептивных эффектов, с результатам! in vitro позволяет рассматривать ЛкД в качестве уникальной экспериментальной парадигмы, обеспечивающей высокий уровень адекватности информации о нейрохимических и молекулярных механизмах действия лекарственных препаратов in vivo (Lelas et al., 2000, 2001,2002).

Важной практической точкой приложения методологии, основанной на интсроцептпвных эффектах фармакологических агентов, является доклиническая оценка иаркогешюго потенциала новых психотропных лекарственных препаратов в сравнении с их известными аналогами и химически родственными соединениями (Barrett et al., 2005; Hodge et al., 2006; McMahon, 2006).

При изучении иитероцептивных эффектов психотропных препаратов выделяют несколько актуальных направлений. Первый комплекс задач составляют исследования способности новых веществ проявлять субъективные эффекты и изучение механизмов их психотропной активности на основе методологии ЛкД (Recker, Higins, 2004). Разработка психотропных препаратов на основе новых фармакологических концепций часто имеет своим результатом создание новых психоактивных веществ оригинального, часто сложного, спектра действия, сочетающих анксиолитическое действие с ноотропным и/или иеГфопротектнвным, нейролептический эффект с ноотропными свойствами, опиат-зависимые анальгетическне эффекты со слабой выраженностью подкрепляющих свойств. Это обусловливает необходимость сравнительного анализа иитероцептивных свойств этих новых веществ и классических препаратов с целью определения перспективы изучения рецепторных механизмов их действия в условиях in vivo на основе методологии ЛкД. Использование ЛкД позволяет оценить риск развития лекарственной зависимости и негативных влияний па процессы памяти и обучения при клиническом применении новых веществ. Вышеизложенное объясняет актуальность анализа особенностей динамики формирования ЛкД при изучении иитероцептивных эффектов новых лекарственных препаратов как одного из фундаментальных компонентов спектра психотропной активности.

Вторым важным направлением является разработка, оптимизация и стандартизация экспериментальных методов для изучения иитероцептивных эффектов веществ. При значительном методическом разнообразии, наблюдаемом в области изучения иитероцептивных эффектов веществ, единично представлены экспериментальные работы, предметом которых является сравнительный анализ и обобщение различных методик изучения ЛкД, в частности использования разных типов безусловного подкрепления при формировании днфференцировочного рефлекса, режимов оперантного обучения, вариаций тестовых процедур (Zarcone, Ator, 2000). Наиболее эффективным методом исследования ЛкД в настоящее время признаны оперантные модели поведения, представленные различными модификациями и используемые у разных видов лаборатортых животных (Barrett et al., 2005; Platt et al., 2005; Carter et al, 2005). Однако, единственная на сегодняшний день классификация дифференцируемое™ психотропных препаратов основана на динамике и специфичности иитероцептивных свойств веществ при формировании ЛкД в условиях Т-образного лабиринта при электроболевом подкреплении (Overton, 1982). Вместе с тем, противоречивость данных, полученных в разных экспериментальных работах при изучении специфичности и механизмов иитероцептивных эффектов психотропных препаратов, часто объясняют особенностями

методических модификации формирования ЛкД и оценки "стимулыюго контроля" веществ (Zarcone, Ator, 2000).

В ГУ НИИ фармакологии имени В.В.Закусова РАМН наряду с бензодиазепнновыми (БД) анкснолитиками фсназепамом и гндазепамом, в последние годы были созданы, изучаются и внедряются в лечебную практику оригинальные вещества, сочетающие анксиолитическнй эффект с ноотропным и/или нейропротективным действием. Селективный анксиолитнк с нейропротективным действием афобазол обладает принципиально новым для протиаотревожного средства механизмом действия, оказывая влияние па внутриклеточные процессы в результате избирательного взаимодействия с a-рецепторами (Середенин с соавт., 2006; Seredenin et al., 2008). В лечебной практике в качестве анксиолитического, ноотропного и иейропротективиого средства применяется препарат мексидол (Воронина, 2001). На основе дизайна коротких пептидов создан препарат ноопепт, анксиолитическую и ноотропную активность которого связывают с его метаболитом цпклопролил-глицином (ЦПГ), также определяемым в ЦНС млекопитающих в качестве эндогенного вещества (Гудашева и соавт., 1999, 2001). На стадии доклинического изучения в качестве новых анальгетиков находятся производные пептида дерморфина (Гузеватых и соавт., 2003). Вопрос о наличии дифференцировочных интероцептивных эффектов у ноотропных и/или нейропротективных препаратов, равно как и сравнительные аспекты интероцептивных эффектов нового селективного анксиолнтнка афобазола и классических БД препаратов, остается неясным. Вышеизложенное обусловило цель и задачи настоящего исследования.

Цель исследования состояла в сравнительном изучении особенностей интероцептивных эффектов психотропных препаратов основных фармакологических классов и новых веществ из разных фармакологических групп (анксиопитиков, атипичных нейролептиков, ноотропов, анальгетика) и разработке оптимальной стратегии изучения интероцептивных свойств новых психотронных препаратов в условиях оиерантной модели лекарственной дифференцпровки. Для решения указанной цели были поставлены следующие задачи:

1. Осуществить сравнительный анализ динамики формирования ЛкД известных и новых психотропных препаратов при использовании разных режимов оперантного обучения (FR1 и FR10).

2. На основе анализа особенностей текущего процесса формирования ЛкД и ее воспроизведения определить параметры дифференцируемости веществ в условиях оперантной модели поведения.

3. Осуществить сравнительный анализ специфичности интероцептивных эффектов исследуемых препаратов и механизмов реализации их дифференцировочных стимульных свойств в условиях разных режимов оперантной модели ЛкД.

4. Определить роль отдельных модуляторных сайтов ГАМКл-рецепторов в реализации интероцептивных эффектов веществ с анксиолнтическим действием.

5. Провести анализ соотношения степени дифференцируемости препаратов разных

фармакологических классов и их специфических психотропных свойств. 6. На основе полученных данных определить общие принципы оптимизации методической схемы экспериментального изучения интероцептивных эффектов новых веществ из разных фармакологических классов в условиях оперантной модели ЛкД у крыс.

Научная монизма исследования. Выявлены различия в характеристиках интероцептивных стнмульных свойств и особенности формирования ЛкД анксиолитиков бензодиазепиповон (БД) структуры п анксиолитиков с ноотропным и/или нейропротективиым компонентами действия. Показано, что феназепам является высокодифференцнруемым препаратом и характеризуется наибольшей специфичностью интероцептивных дифференцировочных стнмульных свойств в ряду классических БД анксиолитиков, что проявляется в отсутствии генерализации интероцептивных эффектов феназепама при использовании в условиях заместительного тестирования положительных модуляторов ГАМКд-рецепторов барбптуратной и нейростероидной структуры. Полная генерализация интероцептивных эффектов феназепама наблюдается только при использовании лоразепама, что свидетельствует о наличии существенных отличительных особенностей в рецепторпом механизме реализации психотропной активности феназепама и лоразепама по сравнению с другими БД. Вместе с тем, установлено, что специфичность интероцептивных свойств феназепама несколько выше, чем у лоразепама. Показана способность БД анксполитика гпдазепама частично воспроизводить стимульные свойства лоразепама в условиях оперантной модели ЛкД. Вместе с тем, гидазепам менее эффективен при воспроизведении интероцептивных стнмульных свойств феназепама.

Впервые выявлены общие звенья в механизме реализации интероцептивных эффектов феназепама и лоразепама и изучены механизмы реализации интероцептивных эффектов гпдазепама. Установлено, что в реализации стнмульных свойств феназепама и гпдазепама определяющую роль играет функциональное состояние БД- модулирующего участка хлорного канала, что является общим звеном механизма интероцептивных эффектов изученных веществ БД структуры. Вместе с тем, интероцептивные свойства феназепама и лоразепама в значительной степени зависят от состояния ГАМКд-рецепторов, что отличает их от гпдазепама. Стимульные свойства феназепама и лоразепама не зависят от функциональной активности пикротоксинового и ненростероидного модулирующих сайтов, что отличает феназепам и лоразепам от других БД анксиолитиков. Впервые проведено изучение дифференцировочных стнмульных свойств анксиолитиков с ноотропным и/пли нейропротективиым компонентами действия мексидола, афобазола и ЦПГ, атипичных нейролептиков сульпирида и дилепта, пептидного анальгетика дерморфпна. Показано, что афобазол и дилепт относятся к группе иедифференцируемых препаратов. Установлена средняя степень дифференцируемое™ мексидола при использовании разных режимов оперантного поведения (FR1 и FRIO), ЦПГ в режиме непрерывного подкрепления, сульпирида в разных режимах оперантного обучениями 1 и FRIO) и дерморфина (FRIO).

Показано, что ЛкД, вырабатываемая при использовании аиксиолитиков с ноотропиыми и/илн нейропротсктпвпымн свойствами, характеризуется более длительными сроками обучения, более низким уровнем воспроизведения адекватных оперантных реакций, менее стабильным воспроизведением по сравнению с ГАМКд-позитивными модуляторами БД и барбитуровой природы.

Научно-нрактнческ-ая значимость работы. Данные о низкой дифференцируемости афобазола позволяют предполагать полное отсутствие риска развития лекарственной зависимости и синдрома отмены при прекращении длительных приемов препарата.

Наличие средней степени дифференцируемости мексидола, ЦПГ и дерморфииа свидетельствует о риске возникновения лекарственной зависимости при длительном применении веществ лишь у отдельных пациентов.

Данные о высокой специфичности стимульных свойств БД аиксиолитиков (феназепама и лоразепама), низкой и средней дифференцируемости аиксиолитиков с ноотропиыми и/или иейропротектнвными свойствами позволяют расширить международную классификацию психотропных препаратов, основанную на их дифференцируемости.

Определены подходы к оптимизации методики исследования интероцептивных эффектов психотропных препаратов. Показана эквипотенциальная эффективность использования в качестве базовых оперантных режимов FR1 и FRIO при выработке ЛкД и анализе механизмов интероцептивных эффектов, высокодифференцируемых фармакологических агентов, что позволяет ускорить процедуру формирования ЛкД и изучение механизмов их действия при использовании оперантиого рефлекса FR1.

Установленные в работе особенности формирования и воспроизведения ЛкД в условиях оперантной модели поведения у крыс позволяют определить общие подходы при изучении интероцептивных эффектов новых препаратов из разных фармакологических классов. При изучении стимульных свойств новых психотропных препаратов со сложным спектром поведенческих эффектов, сочетающих анксисшитические свойства с ноотропным и/или нейропротективным действием, предпочтение следует отдавать оперантному режиму FRIO, поскольку динамика текущего процесса формирования ЛкД не совпадает с динамикой воспроизведения ЛкД и зависит от сложности базового условного рефлекса.

Связь с планами НИР. Диссертация выполнена в рамках фундаментальной тематики НИР ГУ НИИ фармакологии имени В.В.Закусова РАМН - темы "Изучение механизмов эндо - и экзогенной регуляции функций центральной нервной системы. Разработка новых оригинальных нейропсихотропных средств" и гранта РФФИ 99-04-49625 "Изучение механизмов интероцептивных стимульных свойств бензодиазепиновых аиксиолитиков".

Апробация работы. Материалы диссертации были представлены в докладах на всероссийских и международных конференциях: Международная конференция,

посвященная 100-летию со дня рождения академика С.В.Аничкова "Нейрофармакология на рубеже двух тысячелетии", Санкт-Петербург, 1992; VI и VII Российский Национальный Конгресс "Человек и лекарство", Москва, 1999, 2000; "Нейрофармакология двадцать первого века", Санкт-Петербург, сентябрь 2002, 2-й Съезд Российского Научного Общества фармакологов, Москва, 2003г.; 3-й Съезд Российского Научного Общества фармакологов "Фармакология - практическому здравоохранению", Санкт-Петербург, 2007; 3-rd International Symposium "Pharmacology of Transmitter Interaction", Sofia, Bulgaria, 1990; 2-nd International Conference "Biological Basis of Individual Sensitivity to Psychotropic Drugs", Moscow, 1993; 5th Meeting of the European Behavioural Pharmacology Society (EBPS), Berline Germany, 1994; 1th European Congress of Pharmacology, Milan, Italy, 1995; 6th Meeting of the EBPS Cagliary, Italy, 1996; 7th Meeting International EBPS, Brno, Czech Republic and 5th International Meeting on Drug Discrimination of the Society for Stimulus properties of Drugs, Antwerp, Belgium, 1998; European Research conference "Neuronal mechanisms of learning and memory", Obernai, France, 2000; 8th TCNP Regional Meeting, Moscow, Russia, 2005; 11th Biennial Meeting EBPS, Barselona, Spaine, 2005.

Объем и структура диссертации- Работа состоит из введения, обзора литературы, раздела "Материалы и методы исследования", 9-ти экспериментальных глав, обсуждения результатов, выводов, библиографического указателя, включающего 58 источников на русском и 485 источников на иностранном языках. Диссертация изложена на страницах машинописного текста, содержит 26 таблиц и 86 рисунков.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Опыты проведены на самцах белых нелинейных крыс массой 220-250 г и 350-400 г соответственно в начале и конце хронического эксперимента (питомник "Столбовая" РАМН). Животных содержали в стандартных клетках в условиях естественного светового режима при свободном доступе к воде и стандартному гранулированному корму (фирма "МЭСТ", РФ) с добавлением овощей и кефира. Вода была доступна животным в течение 33 ч в неделю. Поведенческие эксперименты проводились с 13 до 17 ч.

Исследованы интероиептивные дифференцировочные стимульные свойства анксиолитиков производных 1,4-бензодиазепина феназепама (ФХИ имени А.В. Богатского УАН). лоразеиама ("Pol fa", Польша); диазепама ("Sigma"), гидазепама (ФХИ имени А.В. Богатского УАН), селективного аикснолнтнка производного меркаптобензимидазота афобазола (ГУ НИИ фармакологии имени В.В. Закусова РАМН), производного пирнмнднннл-ппперазшювон структуры буспнрона (ФХИ имени А.В. Богатского УАН), ноотропных препаратов с выраженным противотревожным компонентом действиях производного З-оксипиридина мексидола (ГУ НИИ фармакологии имени В.В. Закусова РАМН), феннлыюго производного ГАМК фенибута, метаболита ноопепта ЦПГ (ГУ НИИ фармакологии имени В.В. Закусова РАМН), атипичного нейролептика сульпирида ("Sanofi-Synthelabo"), нового пептидного нейролептика дилепта (ГУ НИИ фармакологии имени В.В. Закусова РАМП, Москва), анальгетика пептидной природы дерморфина (ГУ

НИИ фармакологии имени В.В. Закусова РАМН), антагониста ГАМК коразола (pentylenetetrazol, "Sigma"). Препараты были исследованы в дозах, в которых они обнаруживают специфическую психотропную активность.

При анализе специфичности ннтероцептивпых эффектов веществ использовали: феназепам, лоразепам, гидазепам, буспирон, фенобарбитал, пентобарбитал натрия, пирацетам, мексидол, афобазол, ГАМКд-позитнвнын нейростероид прегнанолон, ингибитор ГАМК - трапсаминазы вальпроат кальция (Са), дилепт, d-амфетамин, комбинацию вальпроата кальция и мексидола, избирательный агонист ГАМКд-рецепторов мусцимол, антагонист дофаминовых рецепторов Оз-рецепторов нейролептик карбиднн, блокатор калэцневых каналов флунаризин.

В качестве фармакологических анализаторов использовали: избирательный блокатор ГАМКд-рецепторов бикукуллин ("Sigma"), ингибитор хлорного канала пикротоксин ("Sigma"), инверсный агонист БД сайта ГАМКл-рецепторов флумазенил ("Serva").

Все исследуемые соединения вводили внутрибрюшинт за исключением бикукудлина, пикротоксина и коразола, применявшихся при подкожном введении.

Методика оперантного поведения. Оперантные рефлексы вырабатывали в 6-ти секционной установке оперантного поведения (фирма - "Lafayette Instrument Со, США) в условиях автоматизации эксперимента при использовании персонального компьютера Арр1е-2е (США) по специально разработанной оригинальной программе (Гарибова, 1990). Камера Скиннера в настоящей модификации представляла собой звукоизолированный бокс размером 21,5x21,5x28,5 см. На передней стенке камеры расположены два рычага на высоте 7,5 см над электродным полом и на расстоянии 7,5 см друг от друга, поилка (кормушка), жидкостной и пеллетный распределители, электрическая лампочка для подачи светового сигнала. Каждый из 6-ти оперантных боксов соединялся через интерфейс "Lafayette Instrument Со" с компьютером Арр1е-2е и принтером Epson FX-80. Рефлексы у животных вырабатывали после 24-48-часовой водной депривации, в качестве безусловного раздражителя использовати питьевое подкрепление: 1 капля воды объемом 0,125 мл при осуществлении адекватной оперантной реакции. В дальнейшем крысы получали воду только в течение экспериментов в качестве вознаграждения и в течение 20 мин после сеансов обучения (в разные интервалы времени после окончания сеанса обучения).

ЛкД веществ осуществляли при использовании оперантных режимов фиксированного отношения (fixed ratio) - FRN, где N (число последовательных нажатий на рычаг, вознаграждаемое 1 единицей подкрепления) составляло 1, 4 пли 10 (FR1, FR4, или FR10). При выработке ЛкД в оперантом режиме FR10 предварительный этап обучения состоял в поэтапном формировании у животных базового оперантного рефлекса FR10. С этой целью крыс последовательно обучали в режимах FR1, FR2, FR4, FR6, FR8, FR10, при этом подкрепляли выполнение оперантного рефлекса в отношении любого из 2-х рычагов. После упрочения базового рефлекса переходили к этапу собственно

9

дифференщгровочного обучения, суть которого состояла в выработке у крысы реакции альтернативного выбора правого или левого рычага в зависимости от введенных веществ. При использовании режима непрерывного подкрепления, или FR1, предварителшый этап обучения отсугствоват. По достижении критерия обученности и стабильном воспроизведении ЛкД тестирование чередовали с тренировочными сеансами (Рис.1).

При формировании ЛкД в качестве дифференцируемых стимулов использовали фепазепам (2 мг/кг, FR1 пли FRIO), лоразепам (2 мг/кг, FRIO), гидазепам (10 мг/кг, FR1 или FR10), буспирон (5 мг/кг, FR1 или FR10), пентобарбитал натрия (10 мг/кг, FR1 или FR10), феннбут (100 мг/кг, FR1), пирацетам (500 мг/кг, FR1), мексидол (50, 100 мг/кг, FR1 или FR10), афобазол (20 мг/кг, FR10), циклопролил-глицин (ЦПГ) (0,1 мг/кг, FR1 или FR10), сульпприд (25, 33, 40, 60 мг/кг, FR1 или FR10), дилепт (2, 6 мг/кг, FR1 или FR10), дерморфин (0,5 п 1 мг/кг, FR10), коразол (20 мг/кг, FR10). Каждую группу лабораторных животных, состоящую из 6-27 крыс, обучали отличать одно из выше перечисленных веществ от контрольного раствора. Диазепам в качестве дифференцируемых стимулов использовали в двух дозах - 0,5 мг/кг и 5 мг/кг, обучая крыс различать их в режиме FR10, При выработке ЛкД введения веществ или контрольного раствора, а при использовании дназепама - двух разных доз препарата, чередовали в равновероятностной последовательности. Интервал времени между инъекцией вещества и началом сеанса обучения ЛкД соответствовал периоду развития специфической психотропной активности дифференцируемого препарата.

Оценку специфичности интероцептивных эффектов исследуемых препаратов и гесты па антагонизм с их стпмульными свойствами осуществляли только у крыс, демонстрирующих стабильное воспроизведение ЛкД. Тестирование осуществляли 1-2 раза в неделю, при этом тесты чередовали с тренировочными сеансами с целью сохранности ЛкД. Длительность каждого тестового сеанса составляла 2-3 мин, в течение которых подкрепление отсутствовало независимо от поведения животных (Рнс.1). Каждый тест повторяли 2-3 раза.

Параметрами оценки воспроизведения интероцептивных эффектов тренировочных и тестовых препаратов при заместительном тестировании и в тестах на антагонизм являлись: 1) средний по группе % выборов рычага, соотнесенного в процессе обучения с шгьекниен "тренировочного" препарата; 2) % крыс, осуществляющих выбор рычагов, ассоциируемых с каждым из дифференцируемых стимулов; 3) частоту оперантных реакций тестируемых животных. При определении среднего % адекватных реакций альтернативного выбора у крыс, обучаемых в оперантном режиме FR1, регистрировали долю правильных реакций, осуществляемых в течение всего времени тестирования. При использовании рефлекса FR10 % правильных реакций определяли по отношению (10/N)xl00%, где N - общее число нажатий на оба рычага до получения первого подкрешкния.

Анксполитнчсские свойства веществ исследовали в условиях конфликтной ситуации (Молодавкин, Рамхин, 1992). Эффекты препаратов на орментировочно-

исследовательскую реакцию (ОИР) животных оценивали в "открытом поле". Влияние веществ на координацию движении и мышечный тонус определяли в тестах вращающегося стержня и горизонтальной перекладины.

Статистическую обработку экспериментальных данных осуществляли по точному критерию Фишера для выборочных долей вариант (данные, выраженные в %), парному и непарному ^критериям Стыодента, непараметрическому критерию Манна-Унтни (Урбах, 1964; Боровиков, 2001).

Рнс.1 Схема экспериментов при формировании лекарственной дифференнировки в режимах оперантого шведешш ГК10(Л) и РК1 (Б)

Л

Б

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Изучение динамики формировании ЛкД

Оценка особенностей динамики формирования ЛкД состояла из двух этапов: 1) анализа текущего процесса выработки условнорефлекторного навыка различения веществ (при подкреплении адекватных реакций альтернативного выбора рычагов), отражающего, помимо интероцептивиых эффектов тренировочного препарата, его влияние на процесс оперантного обучения и 2) оценки параметров воспроизведения ЛкД (в отсутствие подкрепления адекватных оперангных реакций), собственно отражающих "силу стимульного контроля" тренировочного вещества.

При использовании большинства изученных веществ в качестве дифференцируемых стимулов, альтернативных "состоянию нормы" (без вещества), первый крнтерш обученности фиксировали в течение 1-8 сеансов обучения независимо от базового оперантного режима (FR1 пли FRIO). При использовании мексидола (в режиме FRIO) или афобазола (в режиме FR4) для достижения первого критерия обученности требовалось не более 12-13 сеансов обучения. Более выраженное замедление достижения первого критерия обученности регистрировали при формировании ЛкД при введении нейролептиков сулышрида и дилепта (Табл.1). Увеличение числа фиксированного отношения до 10 сопровождалось увеличением периода, необходимого для стабильного выполнения ЛкД, при использовании буспнрона, мексидола и сульпирида. При применении в качестве дифференцируемого стимула ЦПГ в условиях оперантного режима FR 10 стабильного выполнения условнорефлекторного навыка различения веществ не наблюдали и после 42 сеансов обучения. Вместе с тем, точность выполнения ЛкД при инъекции этих веществ не изменялась по сравнению с тренировкой животных на основе более простого оперантного рефлекса FR1. При использовании в качестве дифференцируемого стимула фенибута стабильного выполнения ЛкД не регистрировали после 24 сеансов обучения в условиях простого режима FR1 (Табл.1). Прогрессирующее уменьшение частоты оперантных реакции при инъекции этого препарата не позволило продолжить дальнейшее формирование ЛкД.

Отсутствие подкрепления адекватного оперантного поведения не оказывало негативного влияния на асимптотический уровень воспроизведения условного рефлекса альтернативного выбора у крыс, обучаемых при хроническом введении БД, буспнрона, барбитурата или коразола. При использовании этих веществ адекватную реакцию альтернативного выбора рычагов регистрировали у значимо большей части тестируемых крыс (80 и более %). В противоположность этому, в тестовых условиях применение тренировочных доз остальных исследуемых веществ сопровождалось уменьшением уровня адекватного реагирования ниже 80%, установленных в качестве критерия воспроизведения ЛкД (Табл.2). Тем не менее, при анализе индивидуальных реакций установлено, что при обучении ЛкД при инъекции мексидола, сульпирида, ЦПГ или дерморфнна определенная часть обучаемых животных обнаруживала высокий уровень воспроизведения ЛкД в соответствии с критериями, принятыми для

высокодафференцируемых фармакологических веществ. В случае применения мексидола или сульпирида доля животных, различающих инъекции препаратов и контрольного раствора, не изменялась в зависимости от сложности базового оперантпого поведения. При обучении ЛкД фенибута, афобазола или дилепта ни одно из тестируемых животных не воспроизводило интероцептивных эффектов.

Совокупность экспериментальных данных, полученных при оценке динамики текущего процесса обучения и воспроизведения ЛкД, позволяет разделить изученные вещества на несколько основных групп - высоко-, средне - н педифференцируемые препараты.

В условиях оперантной модели ЛкД у крыс высокодифференцпруемые вещества характеризуются сочетанием следующих параметров: период достижения первого критерия обучения (на фоне каждого из дифференцируемых состояний) составляет не более 7-ми сеансов обучения, уровни точности выполнения днфференцировки в течение сеанса обучения н воспроизведения дифференцпровки составляют 80 и более %, что характерно для 80-100% тестируемых животных. Принципиальной характеристикой интероцептивных эффектов веществ данной группы является независимость динамики формирования ЛкД от сложности оперантпого режима фиксированного отношения и сходство динамики обучения и динамики воспроизведения условного рефлекса различения веществ.

Для среднедифференцируемых веществ характерно увеличение периода тренировки, необходимого для стабильного выполнения ЛкД. При применении веществ данной группы период достижения первого критерия обучения может увеличиваться до 30 дней, максимальный уровень точности выполнения днфференцировочного рефлекса в течение сеанса обучения может достигать до 75-90%, период, необходимый для демонстрации стабильного выполнения рефлекса - от 14 дней (возможно только при обучении в простом оперантном режиме) до нескольких месяцев, средний по группе уровень воспроизведения дифференцпровки - 50-80%, доля тестируемых животных, способных к воспроизведению - 8-80%. Следует отметить, что наблюдаемые случаи воспроизведения ЛкД при инъекциях выше упомянутых веществ соответствуют достаточно жестким критериям, принятым для описания интероцептивных свойств высоко дифференцируемых препаратов. По-видимому, наиболее адекватным подходом, характеризующим дифференцируемость этих веществ в условиях оперантной модели поведения с питьевым подкреплением, является установление принципиальной возможности воспроизведения ЛкД при их использовании в качестве условных стимулов.

Для недифференцируемых веществ характерно следующее: первое достижение критерия обучения возможно в любой период обучения, но вместе с тем носит эпизодический характер, уровень точности выполнения реакции альтернативного выбора в течение сеанса обучения составляет 40-60%, период, необходимый для демонстрант стабильного выполнения рефлекса - от 50 дней, средний по группе уровень воспроизведения днфференцировки - 40-60%, доля тестируемых животных, способных к

ее воспроизведемте) - 0%.

Табл.1 Параметры текущего процесса формирования лекарственных дифференцнровок в условиях оперши ною обучения (при подкреплении реакции альтернативного выбора) ______________

Вещества ' Доза, Режим Число сеансов Уровень Число сеансов

мг/кг оперантного обучения до точности обучения,

обучения достижения выполнения необходимое для

первого ЛкД* (%) стабильного

критерия выполнения

обучения ЛкД ЛкД*** _

Феназепам 2 FR1 1-3 90

Феназепам 2 FRIO 4-5 83 14

Гидазепам 10 FR1 1-4 90 18

Гидазепам 10 FRIO 2-5 100 28

Диазепам ** 0,5; 5 FRIO 2 90 26

Лоразепам 2 FRIO 1-2 86 18

Пентобарб. 10 FRI 2-4 90 24

Пентобарб. 10 FRIO 2-3 90 22

Буспирон 5 FRI 3-6 91 20

Буспирон 5 FRIO 3-4 85 38

Коразол 20 FRI 3-8 87 44

ЦПГ ол FRI 3 85 20

ЦПГ 0,1 FRIO - 80 >42

Мексидол 100 FRI 1-2 85 24

Мексидол 50-100 FRIO 5-13 80 54

Сульпирид 60 FRI 4-5 84 14

Сульпирид 25-40 FRIO 28-30 73 >112

Дилепт 2-6 FRIO 12-16 64 >64

Лфобазол 20 FR4 3-12 75 56

Фенибут 50 FRI 1-24 62 >26

Дерморфин 0,5-1 FRIO 4-8 80 70

Примечание: * - данные представлены асимптотическим уровнем усредненных по группе реакций альтернативного выбора, адекватных инъекции препаратов; ** - ЛкД между инъекциями диазспама в дозах 0,5 мг/кг и 5 мг/кг, *** - число сеансов обучения, после которых в течение 6-ти последовательных сеансов обучения регистрировали 80 и более % адекватных оперантных реакций как после инъекции препарата, так и при введении контрольного раствора.

Табл.2 Параметры воспрошвсдснпн лекарственных дифференцпровок в

условиях онерантнон модели поведения (в отсутствие подкрепления адекватных реакций альтернативного выбора) __

Вещества | Доза, Рсжим Точность % животных,

мг/кг оперантного воспроизведения ЛкД воспроизводящих

__________I обучения (%) ЛкД* __________________

Феназепам 2 FR1 >80 87

Феназепам 2 FR10 >80 100

Гидазепам 10 FR1 >80 ос UJ

Гидазепам 10 FRIO >80 94

Диазепам ** 0,5; 5 FRIO >80 100

Лоразепам 2 FRIO >80 100

Пентобарб. 10 FR1 >80 80

Пентобарб. 10 FRIO >80 86

Буспирон 5 FR1 >80 88

Буспирон 5 FRIO >80 88

Коразол 20 FR1 >80 80

ЦПГ 0,1 FR1 60 33

ЦПГ 0,1 FRIO 75 0

Мексидол 100 FR1 60 10

Мексидол 50-100 FR10 60 10

Сульпирид 60 FR1 50 10

Сульпирид 25-40 FRIO 60 10

Дилепт 2-6 FRIO 41 0

Афобазол 20 FR4 62 0

Фенибут 50 FR1 50

Дерморфин 0,5- FRIO 50 8

Примечание: * - осуществление адекватной реакции альтернативного выбора не менее чем в 80% всех случаев.

Поскольку одной из основных характеристик оперантного рефлекса является частота оперантных реакций, был проведен сравнительный анализ влияния изучаемых веществ на этот параметр на ранних этапах формирования ЛкД (в течение первых 14 сеансов) (Рис.2). Высокодифференцируемые вещества (гидазепам, пентобарбитат натрия, буспирон (5 мг/кг)) или вызывали увеличение частоты оперантных реакций по сравнению с сеансами, проводимыми на фоне контрольного раствора, или не изменяли это соотношение (феназепам, лоразепам, диазепам). Недифференцируемые препараты афобазол и фенибут, а также буспирон в иеднфференцируемой дозе 10 мг/кг, вызывали снижение частоты оперантных реакций по сравнению с контрольным раствором. Дилепт, неэффективный в качестве дифференцировочного стимула, и вещества, отнесенные к

группе среднедифференцируемых фармакологических агентов (мексидсш, циклопролил-глицин, дерморфин, сульпирид) не влияли на соотношение частоты оперантных реакций при инъекциях веществ и контрольного раствора (Рнс.2). Полученные результаты свидетельствуют, что превышающая или сопоставимая с состоянием «нормы» частота оперантных реакций на фоне действия дифференцируемого фармакологического агента, является необходимым, но недостаточным условием успешной выработки ЛкД. Уменьшение частоты оперантных реакций под действием психотропного вещества более чем на 50% по сравнению с введением контрольного раствора в течение первых 14 сеансов обучения ЛкД может прогнозировать неэффективность этого вещества при дальнейшей тренировке.

Рнс.2 Соотношение частоты оперантных реакций в альтернативных дифференцируемых состояниях при формировании ЛкД у крыс в условиях модели операц ию! о поведения

275 *

12 3 4 5 6 7 8 9 10 И 12 13 14 15 16 По горизонтали: 1- к. р-р, 2-феназепам (2 мг/кг), 3-гидазепам (10 мг/кг), 4-диазепам (5 мг/кг), 5-лоразепам (2 мг/кг). 6-буспирон (5 мг/кг), 7-буспирон (10 мг/кг), 8-коразол(20 мг/кг), 9-фенибут(50 мг/кг), 10-дерморфин (0,1 мг/кг), 11-сульпирид (60 мг/кг). 12-дилепт (2 мг/кг), 13-мексидал (50 мг/кг), 14-афобазол (20 мг/кг), 15- ЦПГ (1 мг/кг), 16-пентобарбитал натрия (10 мг/кг). По вертикали представлена средняя частота оперантных реакций животных в минуту в течение первых 14-ти сеансов обучения ЛкД, выраженная в %. За 100% (пунктирная линия) принята частота нажатий на рычаги при использовании к. р-ра. *, **- отличие от частоты оперантных реакций при инъекции к. р-ра при Р<0,05; Р<0,01.

2. Изучение специфичности шп ероцеп гивных эффектов анкснолитнков

При исследовании специфичности интероцептивных эффектов веществ использовали заместительное тестирование, состоящее в замене тренировочного препарата на другие вещества или другие дозы тренировочного препарата у крыс, стабильно воспроизводящих ЛкД.

2.1 Изучение специфичности интероцептивных эффектов феназепама Полную генерализацию дифференцировочных стимульных эффектов феназепама (2 мг/кг) регистрировали только при замене его на лоразепам (2 мг/кг), о чем свидетельствовал не только высокий уровень воспроизведения адекватного

тренировочному БД оперантного рефлекса, но и сохранение сопоставимой с тренировочными условиями частоты оперантных реакций (Рис. 3; Таб. i.3). Выбор рычага ассоциируемого с инъекциями феназепама (2 мг/кг), осуществляли достоверное большинство тестируемых животных независимо от онерантного рефлекса, на основе которого вырабатывали ЛкД феназепама (Табл.3). Замена феназепама на диазепам (30 мг/кг) в среднем по группе вызывала сопоставимый с тренировочными условиями уровень воспроизведения интероцептивных эффектов феназепама (Рис. ЗА). Однако, выбор в пользу феназепама регистрировали лишь у 40% тестируемых животных и при значимом снижении частоты оперантных реакций (Табл.3). Гидазепам в дозе в 25 раз превышающей дозу феназепама вызывал лишь интермедиальный уровень генерализации ЛкД последнего, что сочеталось с тенденцией к снижению частоты нажатий на рычаги. В условиях оперантной модели FR1, интермедиальный уровень генерализации интероцептивных эффектов феназепама (2 мг/кг) наблюдали при замене его на барбитураты и вальпроат Са. В условиях оперантного обучения FR10, вальпроат Са вызывал поведение, адекватное состоянию нормы, у 40% тестируемых крыс, в то время как при использовании режима FR1 для 100% испытуемых животных были характерны промежуточные реакции (Табл.3). Препараты, сочетающие анксиолитические свойства с ноотропным/нейропротекторным действием, вызвали у крыс, обученных различать феназепам и контрольный раствор, реакции, соответствующие инъекциям контрольного раствора (Рнс.ЗА, Б; Табл.3). При совместном введении мексидола и вальпроата Са в дозах, в которых эти вещества по отдельности вызывали рефлекс, адекватный применению контрольного раствора, регистрировали интермедиальный уровень генерализации интероцептивных эффектов феназепама, что свидетельствует о выраженном модулирующем эффекте данной фармакологической комбинации в отношении БД сайта ГАМКд-рецепторов in vivo.

Рис.З Воспроизведешь ЛкД феназепама (2 мг/кг, в/б) н контрольного раствора в условиях заместительного тестировании оперангных режимов FR1 (А) и FR10 (Б, В) у крыс А 100 ао 60 40

**

20------------

о Ш Я

Лоразеп. Гидазеп. Фенобарб. Вальпроат Пирацетам 2 мг/кг 25 мг/кг 100 мг/кг 200 мг/кг IООО мг/кг

**

**

О fc.'«» & 1 US 1 » шшяЛ* яшт ** ЯВЬ ;. ai •»

К.р-р Феназеп. Лоразеп. Пентобарб Вальпр. Афобазол Мексид. Мексид. 2 мг/кг 2 мг/кг 10 мг/кг 200 мг/кг 50 мг/кг 50 мг/кг 100 кг/кг

Б

100 80 60 40

К.р-р Феназеп. 2 мг/кг

Диазеп. 30 мг/кг

По вертикали представлена доля (%) выборов рычагов, адекватных инъекциям феназепама (2 мг/кг. в/б). *, ** - отличие от феназепама (2 мг/кг) при Р< 0,05; Р< 0,01 (точный критерий Фишера).

Табл.3 Специфичность интероцептивных эффектов феназепама (2 мг/кг)

Вещества Доза, %крыс, выбирающих % крыс, выбирающих Частота оперантных

мг/кг феназепам контрольный раствор реакций/мин

Дифференцировка "феназепам - норма", режим оперантного поведения FRI

К.р-р Экв. 0 89 7,0±0,9

объем

Феназепам 2 87 0 7,8±0,9

Диазепам 30 40 0 2,1±0,3*

Лоразепам 2 80 0 8.4 ±3.4

Гидазепам 50 0 0 4,0±1

Фенобарб. 100 17 50 1,6±0,5*

Вальпр. Са 200 0 0 5,7±1,2

Пирацетам 1000 0 100 2,4± 0,7*

Дифференцировка "феназепам - норма", режим оперантного поведения FRIO

К. р-р Экв. 0 100 9,9± 2,3

объем

Феназепам 2 100 0 10,3 ±1,8

Лоразепам 2 80 0 6,4 ± 1,4

Пентобарб. 10 17 0 7,5 ± 1.5

Вальпр. Са 200 0 40 1,0 ±0,4*

Афобазол 20 0 100 0,5± 0.1*

Мексидол 50 10 90 2,1 ±1.8*

100 0 25 0,5 ±0.3*

Примечание: * - отличие от феназепама (2 мг/кг) при Р<0,05 (парный критерий Стыодента).

При сравнительном изучении специфичности интероцептивных эффектов феназепама при формировании ЛкД в разных режимах FR установлено, что независимо от выбранного режима стимульные свойства феназепама полностью воспроизводятся только при замене его на лоразепам в эквивалентной дозе.

2.2 Изучение специфичности интероцептивных эффектов лоразепама

У крыс, дифференцирующих инъекции лоразепама (2 м/кг) и контрольного раствора, применение феназепама (2 мг/кг) вызывало полную генерализацию интероцептивных эффектов первого. Регистрируемое при этом увеличении частоты оперантых реакций может свидетельствовать об облегчающем влиянии феназепама на дифференцировочный рефлекс, детерминируемый введением лоразепама (Рис. 4, Табл.4).

Рис.4 Воспроизведение реакции альтернативного выбора у крыс, обученных ЛкД лоразепама (2 мг/кг) п контрольного раствора в о перлитном режиме FR10 юо

Лоразепам 2 мг/кг

Феназепам Гидазепам Гидазепам Пентобарбитал 2 мг/кг 20 мг/кг 50 мг/кг Ю мг/кг

По вертикали представлены доли (%) выборов рычагов, ассоциированные с инъекцией тренировочного препарата, ** - отличие от лоразепама (2 мг/кг) при Р<0,01 (точный метод Фишера для выборочных долей вариант)

Табл.4 Спецш Вещества Доза, | мг/кг Лоразепам 1 2 шчность нитсронеош % крыс, выбирающих лоразепам 100 впых эффектов лораз % крыс, выбирающих к, р-р 0 гпама (2 мг/кг) Частота оперантных] реакций/мин 8,2±2Л

Феназепам Гидазепам Пентобарб. 2 20 50 ~ 10 100 67 67 ~ 0 0 о............ 0 ...... 0 19,0 ±4,4* 3,7±1,1* 1 6,4±3,1 2,7±1>т 1

Примечание: *, ** отличие от тренировочного препарата при Р<0,05, <0,01 (парный критерш Стыодента)

Замещение лоразепама на гидазеиам (20, 50 мг/кг) в среднем по группе вызывало поведение, адекватное применению тренировочного БД. Однако достижение или превышение 80%-ного уровня адекватных инъекциям феназепама реакций регистрировали у 67% тестируемых животных (Табл.4). Аналогично интероцептивным свойствам феназепама, дифференцировочные свойства лоразепама не воспроизводились при замене БД на пентобарбитал натрия (10 мг/кг), инъекция которого вызывала снижение частоты оперантных реакций по сравнению с тренировочными условиями (Табл.5).

2.3 Изучение специфичности нптсроцсптмвпых эффектов гндазепама и диазепама

Специфичность интероцептнвных эффектов гндазепама (10 мг/кг, в/б) и диазепама (5 мг/кг, в/б) была исследована при обучении крыс ЛкД в условиях оперантного режима РШ. При использовании при заместительном тестировании положительных модуляторов ГАМКд-рецепторов наблюдалась полная генерализация интероцептивных эффектов диазепама (5 мг/кг) (Рис. 5). При этом выбор в пользу рычагов, ассоциированных с введением диазепама, осуществляли все тестируемые крысы с частотой оперантных реакций, сопоставимой с частотой нажатии на рычаги, регистрируемой при введении тренировочного БД (Табл. 5). Интероцептивные эффекты гндазепама полностью воспроизводились при использовании в заместительном тесте БД. Однако при использовании барбитурата, интероцептивные эффекты гндазепама воспроизводились лишь частично, что свидетельствует о более высокой специфичности эффектов гндазепама по сравнению с диазепамом.

Рнс.5 Воспроизведение реакции альтернативного выбора у крыс, обученных различать инъекции гидазепама (10 мг/кг) - А или диазепама (5 мг/кг) - Б от инъекций контрольного раствора, в оперантном режиме FR1.

А

100

80--------

60

40 *

2о

К. р-р

Б

100

80--------

60 40 20

Q 8ШШ

К. р-р Диазепам Феназепам Гидазепам Пентобарбптал 5 мг/кг 2 мг/кг 10 мг/кг 10 мг/кг По вертикали представлены доли (%) выборов рычагов, ассоциированные с инъекцией тренировочного препарата. ** - отличие от гидазепама (10 мг/кг) - А или от диазепама (5 мг/кг) - Б при Р<0.01 (точный метод Фишера).

Табл.5 Сравнение специфичности ннтероцеитнвных эффектов гидазепама (10 мг/кг, в/б) и диазепама (5 мг/кг, в/б) в условиях заместительного теста в оперангном режиме FR1.

Вещества Доза, % крыс, выбирающих % крыс, выбирающих Частота оперантных

мг/кг тренировочный БД к. р-р реакций/мин

«гидазепам — контрольный раствор»

Гидазепам 10 83 0 7,4±1,5

Феназепам 2 80 0 1,7±0,7**

Диазепам 20 100 0 6,3±2,9

Фенобарб. 40 0 0 1,4±0,1 * *

«диазепам - контрольный раствор)

Диазепам 5 100 0 9,1±1,9

Феназепам 2 100 0 8,9±1,6

Гидазепам 10 100 0 12,5±2,3

Пентобарб. 10 100 0 14*2,7

Примечание: ** - отличие от тренировочного препарата при Р<0,05; <0,01 (парный критерий Стьюдента)

2.1 Сравнительное изучение генералнзационных профилей анкснолитиков в оперантном режиме FRIO

В условиях заместительного тестирования феназепам (0,5-2 мг/кг, в/б), гидазепам (0,5-10 мг/кг. в/б), пентобарбптал натрия (0,5-15 мг/кг, в/б) и буспирон (1-5 мг/кг, в/б) вызывали дозозависимую полную генерализацию интероцептивных свойств своих тренировочных доз (Рис. 6). Полная генерализация интероцептивных эффектов

феназспама (2 мг/кг) имела место лишь при использовании в тесте феназепама (2 мг/кг) и диазепама (30 мг/кг). Однако в последнем случае высокий уровень генерализации дифференцировочных свойств феназспама регистрировали лишь у 40% тестируемых крыс, что позволяет рассматривать генерализацию ЛкД феназепама при замене его на диазепам лишь как частичную. В эффективной дозе диазепам значимо снижал частоту оперантпых реакций на 40 % по сравнению с аналогичным параметром в тестовых сессиях при введении контрольного раствора. Фенобарбитал вызывал дозозависимую частичную генерализацию стимульных эффектов феназепама, в то время как буспирон не обладал дозозависимым действием и вызывал у обученных различать инъекции феназепама и контрольного раствора крыс реакции, адекватные состоянию нормы (Рис. 6А).

Диазепам полностью воспроизводил стимульные свойства гндазепама, как и феназепам (Рис. 6Б). Диазепам (10 мг/кг) и феназепам (1 мг/кг) в условиях заместительного тестирования вызывали 100% уровень генерализации ЛкД гндазепама, не вызывая при этом значимого снижения частоты оперантпых реакций. Значительное снижение частоты нажатий на рычаги регистрировали при увеличении дозы БД (диазепама до 20 мг/кг, феназепама - до 2 мг/кг). Фенобарбитал (40-80 мг/кг) вызывал интермедиальный уровень генерализации ЛкД (35-55% адекватных инъекциям гндазепама реакций), снижая при этом частоту оперантпых реакций. Вместе с тем, следует отметить в данном случае наличие положительной дозовой зависимости. Принципиально иные результаты получены при введении крысам, обученным условному рефлексу различения гндазепама и контрольного раствора, буспиропа. Во-первых, при замене гндазепама на буспирон у животных регистрировали условные реакции, или адекватные применению контрольного раствора (выбор ассоциируемого с гидазепамом в среднем не превышает 20%), или соответствующие иитермедналыюму уровню (30%). Во-вторых, генерализационная кривая характеризуется полным отсутствием линейной зависимости от дозы. При этом частота оперантпых реакций существенно снижалась по сравнению с частотой нажатий на рычаги в условиях нормы и при использовании в качестве тестируемых агентов позитивных модуляторов ГАМКд-рецепторов. Таким образом, результаты заместш-ельного тестирования свидетельствуют о сходстве интероцептивных свойств гндазепама, феназспама и диазепама. Однако, эффекты, сопоставимые по уровню генерализации интероцептивных свойств гндазепама (10 мг/кг), диазепам и феназепам вызывали в разных дсвовых диапазонах, различающихся в 10 раз.

При инъекции крысам, обученным условнорефлекторному навыку различения пентобарбитала натрия и контрольного раствора (Рис. 6В), феназепам (0,5 - 2 мг/кг) или гндазепама (1-10 мг/кг) вызывали дозозависимую и полную генерализацию дифференцировочных свойств барбитурата, подтверждая полученные в условиях других методик ЛкД данные о способности БД препаратов замещать производные барбитуровой кислоты.

В условиях заместительного тестирования позитивные модуляторы ГАМКд-рецепторов у крыс, обученных дифференцировке буспирона (5 мг/кг), вызывали в лучшем

случае интермедиальный уровень воспроизведения интероцептивных эффектов производного пиримидинил-пилеразина и не обнаруживали прямой линейной зависимости степени генерализации эффекта от тестируемой дозы (Рис. 6Г).

Таким образом, экспериментальные результаты, полученные при обучении крыс ЛкД в условиях оперантного режима FRIO, свидетельствуют о наличии определенной степени качественного сходства интероцептивных эффектов изученных позитивных модуляторов ГАМКд-рецепторов и их принципиальном отличии от противотревожных веществ не БД структуры (буспирона).

Рис. 6 Геиерализацоиные профили интероцепгивнмх эффектов феназеиама (А) пыазепама(Б), пентобарабитала натрия (В) н буспирона (Г) у крыс, обученных ЛкД в операцию« режиме FRIO

А феназепам

юо ü а so.

гидазепам

а

60

Ш

ии

40,

20 0

а

0,5

100 80 60* 40 20,

Ü

а

5 Ю 20 30 I . диазепам

; ; а а ;

: щ :

#

а

а

фенобарб. буспирон

Ш

а

Ш V т

а & ^ £ и-ч

150 120 90 60 j 30 0

5 10 50 феназепам

а а

40 80 100 фенобарб.

& а

&

100 80 60 40

а

0,5 I 5 10 пентобарбитал

, аа а

!•. JKi

а

а

2 5 10 буспирои

150

120

90

## 60

а 30

"о

& ÍS 20

оа а

0,5 1 5 буспирон юо а 80 60 ^ 40

5 10 20 ; феназепам

а а

т

0,5 1 2 гидазепам

а^

а

40 80 фенобарб.

а

2 5 10 буспирон

250

а 200

т 150

а* ® & в 100

# а й*50

10 15 0,5 диазепам

1 2

1 2 10 10 20 40

феназепам

гидазепам

&

38

#

20,

а

0,5

а

#

т

i

&

1 2 5

а а

0,5 1 2

а а

йй а

а

1 5 ю зо

пентобарб.

ís Ф jb

а # а а а

150 120 90 60 30

о

1 2 5 ю

Ü5 Генерализация íS Частотаопе-условного ре- ратных реак-флекса ций

По левой вертикали - % выборов рычагов, ассоциируемых с введением тренировочного препарата, где 100% - реакции, адекватные инъекции тренировочного препарата в тренировочной дозе; #, ## - достоверное отличие от тренировочного препарата в тренировочной дозе при Р<0,05; Р<0,01 (точный метод Фишера). По правой вертикали - частота оперантных реакций/мин, выраженная в % от частоты, регистрируемой при введении к. р-ра. По горизонтали представлены дозы тест-препаратов (мг/кг)

3. Изучение механизмов интсроцепгнвны.х эффектов положительных модуляторов ГАМКл-рецспторов

3.1 Роль различных компонентов ГЛМКл-рецемторов в механизме реализации стчмульных свойств БД н барбитуратов

При совместном применении флумазенила (5-15 мг/кг) с феназепамом или гидазепамом интероцептивные эффекты тренировочных БД ингибировались дозозависимым образом, что согласуется с данными литературы о способности инверсного агониста БД рецепторов нарушать стимульный контроль, индуцируемый БД в том числе и лоразепамом (Ator et al., 1983; Lelas et al., 2000). В дозе 15 мг/кг флумазешш вызывал специфический "сдвиг" условнорефлекториого поведения крыс в сторону состояния нормы. Так, при совместном применении каждого из исследуемых БД с флумазеиилом (15 мг/кг) крысы отказывались от выборов рычагов, соответствующих инъекции феназепама или гидазепама, и предпочитали рычаги, адекватные введению контрольного раствора (Рис. 7Л, В; Табл. 6).

Блокада активности ГАМКд-рецепторов при введении бикукуллина нарушала воспроизведение интероцептивных эффектов феназепама (45,8±14,0%; Р<0,01; точный критерий Фишера). Большинство тестируемых крыс (80%) демонстрировали интермедиальные реакции, а 20% - выбирали рычаги, ассоциируемые с инъекциями контрольного раствора. В противоположность феназепаму, дифференцировочные стимульные свойства гидазепама не зависели от функционального состояния ГАМКд-рецепторов, поскольку селективный антагонист бикукуллин не изменял условнорефлекторной реакции у 100% животных (Рнс. 7А, В).

Комплексное введение блокатора хлорного канала пикротоксина с феназепамом приводило к незначительному снижению доли реакций, адекватных БД (с 87,2±4,3% до 75,7± 10%; Р>0,05; точный критерий Фишера). Одновремгино отмечали незначительное уменьшение доли крыс, предпочитавших в данной ситуации соответствующий феназепаму рычаг. При совместном применении гидазепама и пикротоксина регистрировали также незначительное (Р>0,05) снижение доли выборов ассоциируемых с БД рычагов. Вместе с тем, наблюдали более существенное уменьшение доли крыс (на 23%), осуществляющих выбор рычагов в пользу гидазепама (Табл.6).

Избирательный агонист ГАМКд-рецепторов мусцимол (I мг/кг) в условиях

заместительного тестирования индуцировал интермедиальный уровень воспроизведения пнтероцептивных свойств феназепама (Рис. 7Б).

Установлено, что стимульные свойства феназепама (2 мг/кг) не воспроизводятся при замене его на прегнанолон (5, 10 мг/кг, в/б). Вместе с тем, степень генерализации дифференцировочпых свойств феназепама при замещении его на прегнанолон носит дозозависимый характер, как по количественным, так и по качественным характеристикам ЛкД, что может свидетельствовать о способности нейростероидного компонента ГАМКд-рецептора оказывать модулирующее действие на БД рецепторы, активность которых преимущественно лежит в основе пнтероцептивных эффектов БД анксиатитиков (Рис. 7Б; Табл<й).

Агонист ГАМК вальпроат Са, повышающий уровень эндогенной ГАМК в головном мозге, в условиях заместительного тестирования демонстрировал низкий "заместительный потенциал" в отношении феназепама: крысы выбирали рычат, соотнесенные с применением тренировочного БД, всего лишь в 25,6±8,0% всех случаев. Большая часть тестированных крыс выбирали рычаги, ассоциируемые с состоянием нормы. При введении вальпроата у крыс, дифференцирующих гидазепам и контрольный раствор, также не наблюдали генерализации пнтероцептивных эффектов тренировочного БД. Однако в этом случае отмечался интермедиальный уровень генерализации пнтероцептивных эффектов препарата (60,7 ± 5,2%; Р<0,05; точный критерий Фишера), что было характерно для всех испытуемых животных (Табл4).

В противоположность БД препаратам, селективное воздействие на БД рецепторы ГАМКд-рецепториого комплекса не оказывало существенного влияния на воспроизведение пнтероцептивных эффектов пентобарбитала натрия, что согласуется с данными литературы (А(ог, 1983). Совместное введение пентобарбитала и бикукуллина не вызывало у крыс нарушения оператного рефлекса, сформированного при хроническом использовании барбитурата. Животные, как и в тестовых условиях на фоне одного пентобарбитала, в большинстве случаев выбирали рычаги, ассоциируемые с введением препарата, а не физиологического раствора (Рис. 7Г). Однако следует отметить снижение числа крыс, выбирающих адекватные барбитурату рычаги, до 60% (Табл. б). Более существенное изменение уровня воспроизведения пнтероцептивных эффектов пентобарбитапа наблюдали при совместном применении барбитурата и пнкротоксина (Рис. 7Г; Табл.6). При замене барбитурата на мусцимол (1 мг/кг) у 80% животных регистрировали поведение, адекватное инъекциям физиологического раствора, а доля выборов рычагов, соответствующих инъекциям препарата составляла в среднем по группе всего лишь 10,5±7,0% (Р<0,01; точный критерий Фишера) (Рис.7Г, Табл.5).

Рис. 7 Влияние функциональной активности ГАМКд-рецепторов на воспроизведение ннтероцептнвных эффектов феиазепама (А, Б), гндазепама (В) и пентобарбш ала натрия (Г) у крыс, обученных различать инъекции препаратов от контрольного раствора в оперантном режиме I- НИ) А 100 80 60 40 20 О

К. р-р Феназепам +Флума.зенил +Пикротоксин

2 мг/кг +Флумазенил 15 мг/кг +Бикукуллин 2 мг/кг 5 мг/кг I мг/кг

К. р-р Феназеп. Муецимол Прегнан. Прегнан. 2 мг/кг. I мг/кг 5 мг/кг 10 мг/кг

К. р-р Гидазепам +Флумазенил +Бикукул. +Пикротокс.

10 мг/кг 5 мг/кг +Флумазенил I мг/кг 2 мг/кг 15 мг/кг

100 80 60 40

§йй# 1 ¡вйй 1 1 ■

шмшш ■маю

К-р-р

Пентбарб. +Флумаз. +Бикукул. +Пикротокс. Муецимол 10 мг/кг 15 мг/кг 1 мг/кг 2 мг/кг 1 мг/кг

По вертикали представлены доли (%) выборов рычагов, ассоциированных с инъекциями тренировочных препаратов; *, ** - отличия от тренировочного препарата при Р<0,05; Р<0,01 (точный метод Фишера).

Табл.6 Зависимость реакции альтернативного выбора рычагов, адекватных инъекциям позитивных модуляторов ГЛМКд-рсцепторов, от функциональной активности различных модуляторных сайтов ГАМКд-реценторов у крыс условиях оперантного режима FRIO

Вещества Доза, мг/кг % крыс, выбирающих тренировочный препарат % крыс, выбирающих! Частота оперантных к, р-р j реакций/мин 1

Дифференцировка «феназепам - контрольный раствор»

К. р-р - 0 100

Феназепам 2 80 0 9,5±1,1

+Флумазенпл 5 15 80 0 0 100 - 3,6±0,7

+Бнкукуллин 1 20 0 3,8±1,1

+Пикротокс, 2 67 0 4,2±0,9

Вальпр. Са 200 0 86 7,3±0,8

Мусцимол 1 0 20 2,0±0,5#

Прегнанолон 5 10 0 20 80 20 2,1±1,6# 7,4±3,1

Дпф< >ерепцировка «гидазепам - контрольный раствор»

К. р-р 0 100 8,3±1,7

Гидазепам 10 100 0 7,4±1,5

+Флумазеннл 5 15 80 0 0 67 2,9±0,8#

+Бикукуллип 1 100 0 10,0±1,7

+Пикротокс. 2 67 0 5,4±2,6

Вальпроат Са 200 0 0 7,4±0,8

Дифференцировка «пеитобарбитал натрия - контрольный раствор»

К. р-р - 0 100 7,3±0,5

Пентобарб. 10 80 0 6,4±0,3

+Флумазеннл 15 80 0 6,8±0,9

+Бнкукуллнн 1 60 0 7,3±1,7

+Пнкротокс. 2 20 0 1,8±0,3#

Мусцимол 1 20 80 Г 1,9±0,5#

Примечание: # - Отличие от тренировочного препарата при Р<0,05 (парный критерий Стыодента).

3.2 Сравнительное изучение механизмов иптсроцептнвных эффектов феназенама п лоржепама

Известно, что пнтероцептивные эффекты лоразепама, как и других изученных БД препаратов, полностью и дозозавненмым образом ингнбируются при их совместном

26

применении с инверсными агонистами БД рецепторов (в частности, флумазенилом). Вместе с тем, роль других модуляторных участков ГАМКд-рецепторов в реализации интероцептпвных эффектов лоразепама остается неизученной. В связи с этим был проведен сравнительный анализ воспроизведения интероцептивных эффектов лоразепама (2 мг/кг, в/б) у крыс, обученных различать инъекции феназепама (2мг/кг, в/б) от контрольного раствора или инъекции лоразепама (2 мг/кг, в/б) от контрольного раствора, при совместном введении лоразепама с бикукуллипом (1 мг/кг) или пикротоксином (2 мг/кг). Дополнительной задачей данного пункта работы явилось продолжение сравнительного анализа экспериментальных результатов, полученных при формировании ЛкД в двух режимах оперантого обучения - FR1 и FRIO.

Установлено, что при комплексном введении лоразепама и бикукуллина крысам, обученным различать инъекции феназепама (2 мг/кг) и контрольного раствора в условиях оперантных режимов FR1 и FRIO, интероцептпвные эффекты тренировочного БД воспроизводились лишь частично, что свидетельствует о зависимости заместительной способности лоразепама от состояния ГАМКд-рецептора (Табл. 7). Эти результаты согласуются с тем, что бпкукуллии нарушает успешно сформированный навык различения инъекций лоразепама и контрольного раствора, что свидетельствует о зависимости интероцептивных эффектов лоразепама от функциональной активности ГАМКл-рецепторов (Табл. 7).

Совместное применение лоразепама (2 мг/кг) и ппкротоксина (2 мг/кг) не оказывало значимого влияния на способность лоразепама вызывать генерализацию ЛкД феназепама, что согласуется с данными об отсутствии зависимости стимульных эффектов феназепама от состояния пикротоксннового сайта ГАМКд-рецепторов (Табл. 7).

Таким образом, полученпые данные свидетельствует о сходстве ГАМКд-рецепторного звена в механизме интероцептивных эффектов лоразепама и феназепама, что отличает эти препараты от других БД и согласуется с высокой специфичностью их стимульных свойств, выделяющей феназепам и лоразепама среди веществ БД структуры.

Табл.7 Влияние бикукуллина н ппкротоксина па ннтсроцспгивные стимульные эффекты феназепама (2 мг/кг) и лоразепама (2 мг/кг) у крыс, обученных ЛкД в оперантных режимах FR1 и FRIO

Вещества Доза, мг/кг % реакций, j % крыс, | % крыс, ) Частота адекватных | выбирающих выбираю- оперантных тренировоч- ] тренировоч- 1 щих к. р-р j реакций/мин ному БД 1 ный препарат i

Дифферен Феназепам Феназепам + Бикукуллин цировка 2 2 1 "феназепам-контрольный раствор", оперантное поведение FR1 81,8 ± ; " 89.....0' 5,0-1,0 50,7 ±7,3** ] 0 10] 2,3±0,5# 1 1 1

Лоразепам+ Пикротокс. 2 2 85,7 ±9,4 75 'j 0 | 5,4±2,2

Дифференцировка "феназепам-контрольный раствор", оперантное поведение FR10

Феназепам 2 87,0 ±3,2 ' 100 j 0 10,3 ± 1,8

Лоразепам 2 86,0 ±5,0 80 i 0 6,4 ±1,4

Лоразепам+ 2 65,5 ±4,3* 14 Г 0 ~ 7,0 ±2,7 .....

Бикукуллин 1 1

Лоразепам+ 2 87,3 ±5,9 7 40 0 6,2 : 2.5

Пикротокс. 2 .................L .

Дифференцировка "лоразепам-контрольный раствор" оперантное поведение FRIO

Лоразепам 2 82,8 ± 0,5 100 0 8,2 ±1,3

Лоразепам+ 2 19,8 ±9,8** , 25 ¡ 0 4,2 ± 1,6#

Бикукуллин I _________________

'Примечание:*, **- отличие от инъекций феназепама (2 мг/кг, в/б) при Р<0,01; Р<0,05 (точный метод Фишера). # - Отличие от инъекций феназепама (2 мг/кг, в/б) при Р<0,01 (парный крнтерийСтьюдента).

3.3 Изучение роли дофамнновон системы и активности кальциевых каналов в реализации ннтерокентивных эффектов диазепама

Указания на взаимодействие между системой Сл-каналов L-типа и ГАМК и дофаминовую регуляцию ГАМКд-ергнческой системы (Гарибова и соавт., !998;DeVry et al., 1999; Negus et al.„ 2000; Gatch et al., 2003, 2005) обусловили изучение роли дофаминовой системы и активности Са-каналов в реализации интероцептнвных эффектов дназеиама при выработке у крыс навыка различения двух доз препарата (5 мг/кг и 0, 5 мг/кг) в условиях оперантного режима FR10. В качестве тест-препаратов использовали блокатор Ся-кальциевых каналов флунаризин (5 мг/кг), нейролептики транс-карбидин (5 мг/кг, в/б,), обладающий свойствами антагониста дофаминовых D3- рецепторов (Кудрин и соавт., 1999), и галоперидол (0,1 мг/кг), а также комбинации диазепама (1-5 мг/кг) и карбцдина(20 мг/кг), диазепама (5 мг/кг) и галоперидола (0,1 мг/кг).

В данных экспериментальных условиях стимульный кот-роль диазепама носпл дозозависимый характер. Замена диазепама на физиологический раствор вызывала у крыс генерализацию рефлекса, адекватного введению диазепама в дозе 0,5 мг/кг (Рис. 8, Табл. 8).

Совместное введение карбиднпа (1 мг/кг) с диазепамом (0,5 мг/кг или 5 мг/кг) не изменяло генерализациоиный профиль БД. Увеличение дозы карбидина до 5 мг/кг при совместном применении с малой дозой диазепама вызывало значимое увеличение % выборов рычагов, адекватных инъекции большей дозы БД, что свидетельствует о потенцпацип интероцептнвных эффектов малой дозы диазепама. Вместе с тем, применение карбидина (5 мг/кг) вместо диазепама вызывало у животных условную реакцию, соответствующую инъекции диазепама (0,5 мг/кг). Следует отметить, что в условиях заместительного тестирования и при совместном с диазепамом применении карбндин (1,5 мг/кг) оказывал депримнрующее в отношении частоты оиерантных реакций действие (Табл. 8). Независимо от дозы, карбидин при комплексном применении с диазепамом (5 мг/кг) уменьшат долю крыс, выбирающих ассоциируемый с диазепамом (5 мг/кг) рычаг. При использовании с диазепамом (0,5 мг/кг) карбидин в дозе 5 мг/кг приводил к увеличению % крыс, выбирающих диазепам в большей дозе (Табл. 8).

Совместное применение галоперидола и диазепама (5 мг/кг) у крыс, обученных различать две дозы диазепама, вызывало условную реакцию, адекватную инъекции большей дозе тренировочного БД (Рис. 9). 43месте с тем, отмечалось существенное снижение частоты оперантиых реакций тестируемых животных и уменьшение доли крыс, выбирающих ассощшруемый с большей дозой диазепама рычаг (Табл. 8). Таким образом, по-видимому, следует сделать вывод об отсутствии модулирующих влияний на интероцепгивиые эффекты диазепама со стороны активности дофаминовых рецепторов типа Di/Dj и наличии определенной степени зависимости механизмов иитероцептивных свойств БД от функциональной активности дофаминовых D3 рецепторов.

Интероцепгивиые свойства диазепама (5 мг/кг) ослаблялись при совместном применении с кальциевым блокатором флунаризином (5 мг/кг) (Рис.9). Вместе с тем, частота опера!ггных реакций при совместном применении диазепама и флунаризина не изменялась (Табл. 8). Полученные результаты свидетельствуют, что блокада кальциевых каналов оказывает существенное ингибнрующее влияние на интероцептивные эффекты БД препаратов и носит специфический характер именно в отношении интероцепшвиых свойств, поскольку не оказывает влияния на частоту оперантных реакций.

3.4 Изучение влияния афобазола на гспералнзацнониый профиль интероцептнвных эффектов диазепама

На основе гипотезы о новой мишени фармакологического воздействия, направленного на коррекцию мембранных изменений, развивающихся при стресс-реакции, был создан селективный анксиолитик афобазол. В опытах in vitro препарат проявляет антирадикшьные свойства, в условиях ex vivo - предотвращает падение БД рецепции в нейрональных мембранах, полученных от животных с выраженной реакцией страха и нарушение эндогенной регуляции связывания лиганда БД рецептора ионами С1 и ГАМК (Середешш и соавт., 2006). Цель настоящего раздела работы состояла в сравнительном изучении интероцептнвных свойств афобазола и диазепама.

При заместительном тестировании афобазол (1; 20 мг/кг) у половины крыс вызывал выбор рычага, соотнесешого с инъекциями диазепама в дозе 0,5 мг/кг, но не с диазепамом в дозе 5 мг/кг. Вместе с тем, при замене диазепама на афобазол (1; 20 мг/кг) частота оперантных реакций животных значимо уменьшалась в 2-6 раз по сравнению с инъекциями диазепама (0,5; 5 мг/кг). Полученные результаты свидетельствуют, что афобазол (20 мг/кг) лишь частично воспроизводит дифференцировочные свойства низках доз диазепама (0,5 мг/кг) и не замешает диазепам в дозе 5 мг/кг, что в целом характеризует афобазол как препарат, не способный к генерализации ЛкД диазепама. При совместном применении афобазол (20 мг/кг) не изменяет генерализационный профиль диазепама, что свидетельствует об отсутствие общих звеньев в механизме психотропных эффектов этих веществ in vivo и согласуется с ранее сделанным выводом об отсутствии у афобазола интероцептнвных эффектов.

Рнс.8 Влияние карбнднна и афобазола на генерализационный профиль диазепама у крыс, обученных лекарственной дифференцнровке "диазепам 0,5 мг/кг -диазепам 5 мг/кг" в оперантном режиме FR10

Й Диазепам +Афобазол 8» +Карб,5 мг/кг ^ +Карб.1мг/кг

Диазепам 0 0,5 1 2,5 5 0 1 2,5 5 0 0,5 5

(мг/кг)

+Афобазол 20 20 20 20

(мг/кг)........................................................................................................................................................................................................................................................................................

+Карбидин 5 5 5

(мг/кг) 1 1

По вертикали представлен % выборов рычага, адекватный инъекциям диазепама (5 мг/кг. в/б). * - Достоверное отличие от диазепама (0.5 мг/кг) (точный метод Фишера).

Рнс.9 Влияние галоперидола н флунаризина на воспроизведение реакции альтернативного выбора рычагов у крыс, дифференцирующих инъекции диазепама в дозах 0,5 н 5 мг/кг у крыс

1 ОО 80 60 40 20

О

Диазепам Диазепам К. р-р +ГалоперидолТ +ФлунаризинТ 0,5 мг/кг 5 мг/кг ОД мг/кг 5 мг/кг

По вертикали представлена доля выборов рычага, ассоциируемого с введением диазепама (5 мг/кг. в/б). *. ** - Достоверное отличие от диазепама (5 мг/кг) при Р<0,05;0,0! (точный метод Фишера). Т- Совместное применение с диазепамом (5 мг/кг).

Таблица 8. Влияние афобазола, карбнднна, галоперидола и флунарнзнна на лекарственную днфференцировку "диазепам (5 мг/кг) - диазепам (0,5 мг/кг) " у крыс

Вещество Доза, % крыс, выбирающих % крыс, выбирающих Частота оперантных

мг/кг диазепам (5 мг/кг) диазепам (0,5 мг/кг) реаций/мин

Диазепам 5 100 0 12,3±1,1

2,5 50 0 17,0 ±3,5

I 8 38 15,6±2,4

0,5 0 91 9,6±1,3

0 0 82 7,7±2,3

Вещество Доза, мг/кг % крыс, выбирающих диазепам (5 мг/кг) % крыс, выбирающих диазепам (0,5 мг/кг) Частота оперантных реаций/мин

Афобазол ¿ 0 0 46 57 2,1±0,5** 4,0±1,1 **

Диазепам+ Афобазол 5 20 100 0 10,5±2,7

Диазепам+ Афобазол 2,5 20 43 0 14,0±0,9

Диазепам+ Афобазол 1 20 0 30 9,9±3,4

Карбидин 5 0 67 6,1±1,3**

Диазепам+ Карбидин 5 1 67 0 4,7±3,3**

Диазепам+ Карбидин 5 5 55 9 3,0±1,3**

Диазепам+ Карбидин 0,5 1 0 88 3,5 ±0,3*»

Диазепам+ Карбидин 0,5 5 27 9 6,6±2,0*

Диазепам+ Галоперид. 5 0,1 30 0 2,4±1,1**

Диазепам+ Флунариз. 5 5 43 14 8,4±2,7

Примечание: *,** - отличие от дпазепама (5 мг/кг) при Р<0,05;Р<0,01 (парный критерий Стьюдента).

4. Пнтероцептивные эффекты атипичных нейролептиков

Исследование дифферент цхшочиых стпмудьных свойств аитипсихотических препаратов, прежде всею, адресовано вопросу о принципиальной возможности использования метода ЛкД для изучения механизмов действия этих веществ in vivo. В настоящей работе исследование интероцептивных стнмульных свойств осуществлялось у нового нейролептика днлепта и препарата сравнения сульпирида в условиях методики лекарственной днфференцпровкн при использовании оперантных режимов FR1 и FRIO.

Новый отечественный пептидный нейролептик дилепт (2-6 мг/кг) не проявляет интероцептивных эффектов после продолжительного обучения ЛкД. Вместе с тем, дилепт в изученных дозах не обладает и седативным действием, что отличает его от сульпирида, выбранною в качестве препарата сравнения. Сульпирид (25-60 мг/кг), в свою очередь, характеризуется средней днфференцируемостью в режимах FR1 и FR10.

Установлено, что иитероцепгивиые эффекты сульпирида (40 /кг) носяг дозозависимый характер и максимально выражены в дозах 40-80 мг/кг, в которых регистрируют снижение частоты оперантных реакций (Рнс. 10). При использоваши в

условиях заместительного тестирования дилепта (6 мг/кг, в/б) наблюдали поведение, адеквагиое инъекциям физиологического раствора. Комбинация сулъпирида (60 мг/кг, в/б) и нсихосгмулятора d-амфетамина (0,1 мг/кг, в/б) не оказывата влияния на интероцептивные эффекты нейролептика.

Рис.10 Генералнзационнын профиль сульпирида (40 мг/кг, в/б) при формировании ЛкД в условиях оперантного режима FRIO

100 80 60 40 20 0

По левой вертикали представлены "/о выооров рычага, ассоциированного с инъекциеи сульпирида (40 мг/кг.• ); по правой вертикали представлена частота оперантных реакций/ мин (О).

Рис.11 Воспроизведение ннтсроцептивных эффектов сульпирида (40 мг/кг, в/б) при замещении его на днлент и совместном применении с d-амфетамнном

I I Выборы ры- Щ Частота опер, чага, % реакций/мин

120 100 80 60 40 20 0

Сульпирид К.р-р Дилепт Сульпирид Сульпирид 60 мг/кг

40 мг/кг 6 мг/кг 60 мг/кг +с!-афетамин 0,1 мг/кг

По левой вертикали - % выборов рычага, адекватного инъекциям сульпирида (40 мг/кг). по правой вертикали - частота оперантных реакций/мин, выраженная в % по отношений к частоте оперантных реакций при инъекциик. р-ра. ** - отличие от сульпирида (40 мг/кг) при Р <0.01 (точный метод Фишера); #- отличие от сульпирида (40мг/кг) при Р<0,05 (парный критерий Стыодента).

5. Изучение соотношения ннтероцептивных дифференцировочных свойств и других психотропных эффектов веществ.

Сопоставимый по степени выраженности "стимульный контроль" могут вызывать вещества, обладающие разной направленностью эффектов. Так. одинаково высокая дифференцнруемость БД препаратов сочетается с выраженным депримирующим действием на ОИР крыс при введении феназспама, лоразепама и диазепама и с

14

12 10 8 6 4 2 0

24

30

40

60

80 (мг/кг)

120 100

60 40 20 0

отсутствием такового при инъекции гидазепама. Буспирон (5 мг/кг) не оказывает влияния на ОИР животных в "открытом поле", а в дозе, вызывающей подавление поведенческой активности животных, ухудшает и способность к оперантному обучению. Пентобарбитал (10 мг/кг) вызывает высокий "стимульный контроль", стимулируя ОИР крыс в открытом поле". Вместе с тем, в условиях конфликтной ситуации БД, барбитурат и буспирон достоверно увеличивали количество наказуемых взятий воды. Однако, если в ряду позитивных модуляторов ГЛМКА-рсцепторов апксначнтнчеекий эффект характеризовался десятикратным превышением контрольных показателей, то при использовании буспирона регистрировали увеличение наказуемых реакций всего в 2 раза по сравнению с контрольным раствором. Известно, что этанол является высокодифференцнруемым фармакологическим агентом (Jackson et al., 2003). В то же время известно, что в зависимости от временного интервала между введением и тестированием животных этанол вызывает стимулирующее или депримируюшее влияние на поведение крыс. Животные обучаются различать ранние и поздние интероцептивные эффекты этанола в условиях оперантной методики ЛкД (Hodge et al., 2006). Можно сделать заключение, что в ряду позитивных модуляторов ГАМКл-рецепторов (БД и барбитуратов), а, возможно, и ГАМКа-позитивиых нейростерондов, именно выраженность анксиолитического компонента будет коррелировать с ннтероцептивными эффектами. И изменяя в результате фармакологических воздействий воспроизведение ЛкД БД препарата, можно говорить о влиянии именно на его апкснолитические свойства.

Полученные в настоящем исследовании экспериментальные результаты свидетельствовуюг о том, что дифферентруемым компонентом может служить и определешый уровень анксиогенеза, что было продемонстрировано при выработке ЛкД коразола (Табл. 9).

Менее выраженный (по сравнению с БД и пентобарбиталом) анкснолитический эффект буспирона (5 мг/кг) сочетается с дпфференщцэуемостыо, приближающейся к таковой позитивных ГАМКд-модуляторов. Известно, что буспирон обладает сложным спектром психотропной активности, сочетающим противотревожные, антидепрессаттные и нейролептические свойства (Lanctot et al.,2001). Учитывая данные о слабой, в лучшем случае, средней дифференщруемосги веществ с нейршегггической активностью, следует предположить, что, высокий "стимульный контроль" буспирона (5 мг/кг) может быть обусловлен, скорее всего, его аитидепрессантными свойствами.

Следует отметить, что отсутствие интероцегггивных эффектов или средняя дифференцируемость препаратов с ноотропной активностью сочетается с меньшей выраженностью у них (по сравнению с классическими БД) анксиолитических свойств отсутствием влияния на ОИР и двигательные реакции интактных животных (Табл. 9). В основе способности психотропных веществ вызывать ЛкД и диссоциированное обучение лежат так называемые "субъективные эффекты" ("subject effects"): чем глубже степень выраженности субъективных эффектов, тем выше дифференцируемость веществ. Данная точка зрения в настоящее время получает подтверждение в клинических исследованиях

(Kelly et а!., 2003). Таким образом, следует сделать вывод о том, что отсутствие ннтероиептпвиых эффектов у препаратов с ноотропным и/или нейропротекгорными свойствами у большей части обучаемых ЛкД особей объясняется тем, что эти вещества не вызывают у интактных животных измененного "субъективного" состояния. Для выявления потенциатыю существующих дпфферепцировочных стимульных свойств ноотроппых препаратов следует разрабатывать методы, в условиях которых животные обучались бы отличать эффекты этих веществ не от состояши нормы, а от какого-либо умереннсго патолошческого состояния, которое, однако, не должно препятствовать процессам ассоциативного обучения.

Табл.9 Соотношение выраженности ннтероцеитивных эффектов веществ Ii их специфической психотропной активности

Вещество Влияние на Нарушения Миорелак- Анксиоли- Нейролеп- Ноотропные Интеро-

ОИР координаци сация тический тические нейропро- цептивные

и движений эффект свойства текторные свойства эффекты

Диазепам и + + + 0 0 ++

Феназепам й + + + 0 0 ++

Лоразелам 4 + + + 0 0 ++ ++ ++ ++

Гидазепам 0 + 0 о 0 о

Пентобарб. Ü + + + 0 0

Буспирон S1 иг/кг 0 0 0 + 0 0 ++

Буспирон 10 мг/кг 4 + + + + 0 0

Афобазол 0 0 0 + - + 0

Сульпирид* 0 0 0 + 0 +

Дилепт 0 0 0 0 + + 0

Пирацетам 0 0 0 + 0 + 0

Мексидол 0 0 0 + 0 + +

Фенибут # + 0 + 0 + 0

ЦПГ 0 0 0 + 0 + +

Дерморфин ъ - - 0 0 + +

Коразол ъ + 0 анксиогенез 0 0 ++

Этанол 4 tf + + + 0 + ++

Заключение

Проведенный анализ особенностей динамики текущего процесса выработки и воспроизведения условнорефлекторного навыка различения веществ позволяет выделить следующие критерии, на основе которых возможна классификация веществ по их степени дифференцируемостп в условиях оперантной модели поведения у крыс:

1) период достижения первого критерия обучения (на фоне каждого из дифференцируемых состояний) составляет не более 7-ми сеансов обучения, уровень точности выполнения реакции альтернативного выбора 80% и более, период, необходимый для демонстрации стабильного выполнения рефлекса - не более 26-30 дней,

средний по группе уровень воспроизведения ЛкД - 80% и более, что должно быть характерно для 80-100% тестируемых животных;

2) период, необходимый для достижения первого критерия обученности, от 1 до 30 дней, уровень точности выполнения ЛкД в течение сеанса обучения может составлять 7590%, период, необходимый для демонстрации стабильного выполнения рефлекса - от 14 дней (возможно только при обучении в простом оперантиом режиме) до нескольких месяцев, средний по группе уровень воспроизведения ЛкД - 50-80%, доля тестируемых животных, способных к воспроизведению ЛкД - 8-80%;

3) первое достижение критерия обученности возможно в любой период обучения, но, вместе с тем, носит эпизодический характер, уровень точности выполнения ЛкД в течение сеанса обучения составляет 40-60%, период, необходимый для демонстрации стабильного выполнения рефлекса - от 50 дней или не определяется в течение всего периода тренировок, средний по группе уровень воспроизведения ЛкД - 40-60%, доля тестируемых животных, способных к воспроизведению ЛкД - 0%.

Рнс.12 Расширенная классификация психотропных веществ по степени их дифференцнруемостн.

Высокодифференцируемые: БД (феназелам. гидазепам). мышечные релаксанты, антагонисты мускариновых рецепторов, этанол, анестетики, тетрагидроканнабиноиды

Среднедифференцируемые:

адреноблокаторы, ингибиторы МАО, трициклические антидепрессанты, агонисты/ инверсные агонисты опиатных рецепторов, антагонисты гистамина, судорожные

(коразол) и противосудорожные вещества, галлюциногены, психостимуляторы, атипичные нейролептики (сульпирид), анксиолитики с ноотропным компонентом (мексидол. ЦПГ), атипичные анксиолитики (буспирон). пептидные аналгетики (дерморфин)

Т-образный лабиринт, оборонительная мотивация: Оперантное поведение положительная мотивация

Слабодифференцируемые:

нейролептики, ненаркотические анальгетики, блокаторы ГАМК и дофамина

Недифференцируемые: препараты лития, блокаторы никотиновых рецепторов, производные салициловой кислоты, ноотропы с анксиолитическим компонентом (фенибут). атипичные

нейролептики с положительным когнитивными свойствами (дилепт), селективные анксиолитики с нейропротекторным действием (афобазолЛ I

На Рис.12 представлено распределение изученных веществ в соответствии с вышеприведенной классификацией и сравнение этого распределения с единственной существующей в настоящее время классификацией Овертона (1982), разработанной им по результатам тестирования веществ в условиях формирования ЛкД у крыс в Т-образном

лабиринте при электроболевом наказании. Можно отметить, что по ряду позиций эти две классификации совпадают. В частности, в соответствии с обеими классификациями в группу высокоднф<[)ерснцируемых веществ помещены БД, анестетики (пентобарбитат натрия), в группу среднедиффсренцируемых веществ помещены агонисты опиатных рецепторов (в нашем случае - дерморфик) и судорожный агент (коразол). Однако имеют место и расхождения. В первую очередь, это касается нейролептиков, помещенных Овертоном в группу слабоднфференцнруемых препаратов. В нашем исследовании, исЬользование атипичного нейролептика сулышрида сопровождалось формированием высокого "стимульиого контроля" у 10% обучаемых крыс, что явилось основанием для того, чтобы отнести препарат к группе среднедифференцируемых веществ. Новый пептидный нейролептик дилепт оказался абсолютно не эффективным при выработке у крыс способности отличать его от инъекций контрольного раствора. В группу недифференцируемых препаратов также был отнесен новый селективный анксиолитик афобазод.

Таким образом, эмпирически установленные критерии для классификации психотропных веществ по степени их днфференцируемостн в условиях оперантной модели поведения у крыс на основе питьевой мотивации в значительной степени совпадают с таковыми, установленными при формировании ЛкД в Т-образном лабиринте при отрицательном подкреплении, главным образом в части фармакологических агентов, вызывающих сильный "стимульный контроль".

Способность среднедифференцируемых веществ проявлять интероцептивные эффекты, характеризуемые как высокий "стимульный контроль" у отдельных особей, в значительной степени сочетается со способностью этих веществ облегчать процесс условнорефлекторного обучения у этих животных. Наиболее ярко данная закономерность прослеживается при использовании в качестве стимулов препаратов, составивших группу высокодпфференцируемых веществ.

Принципиальное сходство динамики формирования ЛкД "феназепам-норма" и "лоразепам-норма" в разных режимах операптного поведения, их геиерализанионных профилей и данные перекрестного заместительного тестирования позволяют предположить высокую степень сходства интероцептивных эффектов феназепама и лоразепама. Общим свойством интероцептивных эффектов феназепама и лоразепама является высокая специфичность в ряду позитивных модуляторов ГАМКд-рецептора, что согласуется с данными о неспособности барбитуратов и ГАМКд-позитивных нейростерондов вызывать генерализацию интероцептивных эффектов лоразепама (Аюг е! а1., 2000). Гидазепам частично и феназепам полностью воспроизводят стимулытые свойства лоразепама, в то время как стимульпые свойства феназепама воспроизводятся только лоразепамом. Это свидетельствует о большей специфичности стимульных свойств феназепама, по сравнению с таковыми у лоразепама. Дифференцировочные свойства этих веществ в значительной степени зависят от функциональной активности собственно ГАМКд-рецепторов, что отличает их от других БД (диазепама, гидазепама, мидазолама),

и полностью ннгибнруются при снижении функциональной активности БД модулирующего участка ГАМКл-рецепторов, что объединяет их с другими БД препаратами, в частности с гидазепамом. Вместе с тем, непосредственная активация ГАМКд-рецепторов не является достаточным условием генерализации интероцептивных эффектов феназепама, что согласуется с установленными в отношении других лигандов БД рецепторов данными (Rowlett et al., 1999). Несмотря на определенную степень качественного сходства интероцсптпвиых эф(]>ектов БД и барбитуратов (Lelas et al., 2000), механизмы их интероцептивных эффектов различаются. Воспроизведение ЛкД БД в меньшей степени зависит от пикротоксинового сайта ГАМКл-рецептора, а эффекты барбитуратов более значимо ослабляются при инъекциях пикротоксина и не изменяются при снижении активности БД участка

Определенное значение в механизме интероцептивных эффектов БД модуляторов ГАМКд-рецепторов имеет активность Са-каналов, блокада которых специфически ослабляет ЛкД диазепама, и дофаминовых рецепторов D3, ингибирование которых потенцирует интероцептивные свойства малых доз диазепама. Эти результаты свидетельств уют о наличии реципрокных функциональных взаимодействиях между этим! системами в генезе субъективных эффектов БД, психостимуляторов, действующих как агонисты дофамина, и алкоголя. Отчасти эти взаимодействия могут объяснять эффективность БД и блокаторов Со каналов при лекарственной зависимости к психостимуляторам и алкогольной абстиненции.

Интероцептивные стнмульные эффекты нейролептиков остаются мало изученными. В данном исследовании, только 10% крыс из каждой группы успешно обучались ЛкД сульпирида. Источники литературы, посвященные дифференцировочшм свойствам антагонистов дофамина, также свидетельствует о том, что лишь у небольшой доли обучаемых животных при использовании этих веществ возможно формирование ЛкД в соответствии со стандартными критериями воспроизведения ЛкД (Goudie et al., 1999). В настоящем исследовании было показано, что на крысах, способных к усвоению ЛкД сульпирида, возможен адекватный анализ механизмов дифференцировочных свойств нейролептиков и сравнительное изучение их интероцептивных эффектов. Результаты об успешной выработке ЛкД сульпирида при использовании нейролептика в дозах, в которых отмечается развитие седативного действия, также согласуется с данными литературы в отношении препарата тнаприда и родственных ему соединений (Cohén et al., 1997). Известно, что нейролептики вызывают затруднение выработки условных рефлексов, в частности оперантного поведения при формировании ЛкД в тех дозах, в которых могут и не проявлять седативного действия (Coehen et al., 1997). Одним из объяснений подобного влияния на условнорефлекторный процесс является предположение о том, что нейролептики влияют на мотивационную компоненту условнорефлекторного процесса, блокируя контроль условных реакций со стороны подкреплгния (Colpaert et al., 2007).

Как правило, вещества с высоким риском развития лекарственной зависимости,

обладающие положительными подкрепляющими свойствами (барбитураты, опиаты), являются наиболее эффективными при формировании ЛкД (Ator, Kautz 2000; Carey, Bergman, 2001). При длительном применении БД анкснолитнков, развитие лекарственной зависимости также сочетается с их высокой дифференцпруемостыо (Colpaert, 1999; Kelly et al., 2003). Однако более жесткой является закономерность, в соответствии с которой низкая дифференцируемость вещества является прогностическим признаком отсутствия наркогенного потенциала или небольшой (минимальной) вероятности развития лекарственной зависимости. Результаты настоящего исследования позволяют прогнозировать отсутствие развития лекарственной зависимости при длительном применении селективного анкснолнтпка афобазола и атипичного нейролептика дилепта. Средняя дифференцируемость мексидола, дерморфнна и ЦПГ не позволяет исключить вероятность развития лекарственной зависимости у этих препаратов. Однако развитие таковой следует ожидать лишь у отдельных пациентов.

Рнс.13 Рекомендуемая схема экспериментального анализа ннтероцептивных эффектов нового вещества в условиях оперангнон модели поведения у крыс.

ФОРМИРОВАНИЕ ЛкД «ПРЕПАРАТ- ФИЗ.Р-Р» В ОПЕРАНТНОМ РЕЖИМЕ FR1

ТЕСТИРОВАНИЕ В РЕЖИМЕ FR1 ИЛИ FR10

ТЕСТИРОВАНИЕ В РЕЖИМЕ FR1

Установленные в данном исследовании особенности формирования и воспроизведения ЛкД в условиях оперантной модели поведения у крыс позволяет определить некоторые общие подходы при изучении ннтероцептивных эффектов препаратов из разных фармакологических классов (Рис. 13). Независимость ннтероцептивных эффектов позитивных модуляторов ГАМКд-рецепторов от режима

оперантной модели позволяет рассматривать операптпый режим непрерывного подкрепления FR1 в качестве стандартного метода экспериментального анализа интероцептивных эффектов веществ предположительно родственных выше названным препаратам по химической структуре или механизму действия. Простой режим оперантного обучения целесообразно использовать в качестве базового рефлекса при изучении ннтсроцептивных эффектов веществ, способных вызывать полную генерализацию диффереицировочных эффектов полных или частичных агонистов ГАМКд-рецепторов или производных пиримидипил-пиперазипа. При изучении стимульных свойств новых психотропных препаратов со сложным спектром поведенческих эффектов, сочетающих анксиолитические свойства с ноотропным и/или нейропротективным действием, выработку ЛкД следует осуществлять в оперантном режиме FRIO.

Сравнительный анализ динамики формирования ЛкД и ее воспроизведения в разных режимах оперантного обучения (FR1 и FRIO) позволяет дифференцировать наличие "стимулыюго контроля" и потенциально возможных влияний вещества на процессы инструментального обучения, не имеющих в своей основе связи с интсроцептивными эффектами.

выводы

1. Определены параметры, по которым психотропные препараты подразделяются на высоко-, средне - и неднфференцируемые: период достижения первого критерия обученпости; точность выполнения оперантного рефлекса альтернативного выбора; длительность обучения; точность воспроизведения лекарственной дифференцировки (ЛкД); % животных, способных к воспроизведению ЛкД; степень зависимости динамики формирования ЛкД от режима оперантного обучения. Показано, что высокодпфференцируемые препараты характеризуются отсутствием зависимости процессов формирования и воспроизведения ЛкД от режима оперантного обучения. Среднедифференцируемые препараты характеризуются наличием хотя бы одного из следующих свойств: снижением уровня воспроизведения ЛкД, увеличением периода обучения при усложнении режима и воспроизведением ЛкД лишь у отдельных особей.

2. Интероцептивные свойства феназепама имеют большую специфичность по сравнению с таковыми у лоразепама. ГАМКд-познтивные нейростероиды и барбитураты

не вызывают генерализации стнмульных эффектов феназепама и лоразепама, что принципиально отличает эти препараты от других бензодиазепинов (БД), в частности, диазепама. Гидазепам не вызывает генерализации интероцептивных эффектов феназепама и лишь у некоторых крыс замещает лоразепам, что свидетельствует о различии интероцептивных эффектов гидазепама и этих БД. Барбитураты не вызывают генерализации интероцептивных эффектов гидазепама. По степени специфичности интероцептивных эффектов изученные БД располагаются следующим образом: феназепам>лоразепам >гпдазепам>диазепам.

3. Интероцептивные эффекты феназепама, лоразепама и гидазепама зависят от функциональной активности БД модуляторного сайта и не зависят от активности пикротоксин-связывающего участка ГАМК-рецепторов. Прямая функциональная блокада ГАМКд-рецепторов частично ингибпрует интероцептивные эффекты лоразепама и

феназепама, но не гидазепама. Интероцептивные эффекты барбитуратов не зависят от функциональной активности БД модуляторного сайта и непосредственно ГАМКд-рецепторов, а определяются функциональной активностью пнкротоксинового сайта ГАМКд-рецепторов.

4. Показаны принципиальные различия механизма реализации интероцептивных эффектов производных пиримндиннл-пиперазина (буспнрона) и БД и барбитуратов, так как в условиях перекрестного заместительного тестирования наблюдается полное отсутствие генерализации дифференцировочных стимульных свойств положительных аллостерических модуляторов ГАМКд-рецепторов и буспирона.

5. Вещества, в спектре фармакологической активности которых анксиолитическое действие дополняется ноотропным и/или пейропротективным эффектами или не обладают ннтероцептивными свойствами (феннбут), или вызывают ЛкД только у отдельных особей

40

(мексидол, циклопролил-глищш), что позволяет прогнозировать развитие лекарственной зависимости при их длительном применении лишь у отдельных пациентов.

6. Афобазол ие вызывает ЛкД, а в условиях заместительного тестирования у крыс, обученных ЛкД БД, наблюдается реакция, адекватная инъекциям физиологического раствора. Афобазол не изменяет генсралнзацнонный профиль интероцептивных эффектов диазепама, что свидетельствует об отсутствии общих звеньев в механизме действия активности афобазола и БД. Полученные данные обосновывают прогноз в отношении минимального риска развития лекарственной зависимости при клиническом применении афобазола.

7. Интероцептивные эффекты атипичного нейролептика сульпирида выявляются лишь у отдельных особей и обнаруживают прямую пропорциональную зависимость от дозы. Пептидный нейролептик дилепт не вызывает ЛкД, не воспроизводит интероцептивные эффекты сульпирида и не влияет на частоту оперантных реакций. Пептидный анальгетик дермофин вызывает ЛкД только у отдельных особей, что свидетельствует о его средней дифференцируемое™ и позволяет ожидать меньшую выраженность лекарственной зависимости при клиническом применении по сравнению с наркотическими анальгетиками.

8. Сравнительный анализ динамики формирования ЛкД и ее воспроизведения в разных режимах оперантного обучения позволяет дифференцировать наличие "стимулыюго контроля" и потенциально возможных влияний на процессы инструментального обучения, не связанных собственно с выраженностью субъективных эффектов психотропных препаратов.

СПИСОК ПУБЛИКАЦИИ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Гарибова, Т.Л. Экспериментальное изучение толерантности и лекарственной зависимости к психотропным препаратам и коррекция этих состояний [Текст] / Т.Л. Гарибова, Н.Н. Богданов, Ж.А. Сопыев // Тез. Докл. - Ташкент- 1988.- С. 81.

2. Гарибова, Т.Л. Оценка действия фармакологических средств на основе новой компьютерной программы для анализа оперантного поведения животных [Текст] / Т.Л. Гарибова, Т.А. Воронина, Т.С. Калинина, Д.В. Стефанков // Фармакология и токсикология,- 1990.- №1- С. 67-70.

3. Garibova, T.L. Comparison of discriminative stimulus properties in chronically treated rats [Текст] / T.L. Garibova, T.S. Kalinina, Jh.A. Sopijev, M. Lazarova-Bakarova // 3-rd International Symposium «Pharmacology of Transmitter Interaction». - 1990. - Sofia.- Bulgaria. -P. 17.

4. Воронина, T.A. Антиамнестическая и антидепрессивная активности аналогов меланостатпна [Текст] / Т.А. Воронина, Н.В. Маркина, Т.С. Калинина, В.М. Кабанов, А.А. Мазуров, С.А. Андронати // Химико-фармацевтический журнал,- 1992,-№ 9-10.- С. 72-74.

5. Гарибова, Т.Л. Проблема толерантности и лекарственной зависимости к гидазепаму [Текст] / Т.Л. Гарибова, Т.С. Калинина, К.Э. Воронин// Гпдазепам,- 1992,- Киев,-Наукова думка- 33.

6. Kalinina, T.S. Discriminative stimulus properties of benzodiazepines in outbred albino rats [Текст] / T.S. Kalinina, T.L. Garibova, T.A. Voronina // Abstracts of the 2nd International conference «Biological Basis of Individual Sensitivity to Psychotropic Drugs».- 1993.-Moscow.- P. 89.

7. Garibova, T.L. Tolerance to and dependence on anxiolytics: individual and species-specificity of animal reactions [Текст] / T.L. Garibova, T.S. Kalinina // Biological Basis of Individual Sensitivity to Psychotropic Drugs.- 1994.- Ed. by S.B. Seredenin, V. Longo, G. Gaviragi.- Graff ham Press Ltd.- P. 57-62.

8. Kalinina T.S. Discriminative stimulus properties of phenazepam and gidazepam: comparison with other anxiolytics [Текст] / T.S. Kalinina, T.L.Garibova, T.A.Voronina // Behavioral Pharmacology. 1994. - № 5, suppl.l. - P. 112.

9. Kalinina, T.S. Differences of central mechanisms of the discriminative effects of benzodiazepines and barbiturates [Текст] /T.S. Kalinina, T.L.Garibova, T.A.Voronina // Pharmacological research.- 1995,- V.31.- Suppl.- P.276

10. Garibova, T.L. Differences in results achieved during chronic administration and after abrupt termination of benzodiazepine anxiolytics [Текст] /T.L.Garibova, T.S. Kalinina, H.A. Valdman, T.A.Voronina // Psychopharmacological research. - 1995.- V.31.- Suppl.- P. 275

11. Kalinina, T.S. Reversed by piracetam in the one-response T-maze task in rats: state-dependent or withdrawal signs? [Текст] / T.S. Kalinina, T.L. Garibova, T.A. Voronina // Behavioral Pharmacology. - 1996. - № 7, suppl. 1. - P. 55.

12. Valdman, E.A. Effects of ondansetron and buspirone in benzodiazepine withdrawal

syndrome [Текст] / E.A. Valdman, T.L. Garibova, T.S. Kalinina, T.A. Voronina // Behavioral Pharmacology.- 1996.-№ 7, suppl.l.- P. 114.

13. Kalinina, T.S. Generalization profile of phenazepam and gidazepam discrimination in rats: comparison with other GABAA-related drugs [Текст] / T.S. Kalinina, T.L. Garibova, T.A. Voronina // Behavioral Pharmacology.- 1998.-№ 9, suppl. 1,-P. 112-113.

14. Asmakova, L.S. The discriminative cffects of sulpiride and its peptide analogue, GZR-123 [Текст] / L.S. Asmakova, T.S. Kalinina, T.A. Gudashcva, R.U. Ostrovskaya, S.B. Seredenin // Behavioral Pharmacology.- 1998,- № 9, suppl. 1.- P. 103-104.

15. Kalinina, T.S. Discriminative cffects of phenazepam and gidazepam in rats: Comparison with other GABA-related Drugs [Текст] / T.S. Kalinina, T.L. Garibova, T.A. Voronina // Pharmacology Biochemistry and Behavior.- 1999,- V. 64,- № 2.-P. 397-401.

16. Asmakova, L.S. Comparison of antipsychotic activity and discriminative stimulus effects of the novel a cyclprolyltyrozine containing compound, GZR, and sulpiride [Текст] / L.S. Asmakova, T.S. Kalinina, R.U. Ostrovskaya, T.A. Gudashcva, N.A. Zaitseva, N.A. Bondarenko, T.A. Voronina, S.B. Seredenin // Pharmacology Biochemistry and Behavior.-1999.-V. 64.-№2.-P. 359-362.

17. Калинина, T.C. Особенности формирования лекарственной дифференцировки при использовании мексидола [Текст] / Т.С. Калинина, Е.В. Петрянина, А.В. Волкова, Т.А. Воронина // Психофармакология и биологическая наркология,- 2002.- Т.2.- № 3-4,- С. 400.

18. Калинина, Т.С. Дифференцировочные стнмульные свойства анксиолитиков с ноотропным компонентом действия [Текст] / Т.С. Калинина, Е.В. Петрянина, А.В. Волкова, Т.А. Воронина // Фундаментальные проблемы фармакологии,- 2003.- Москва,- Ч. I,- С. 222.

19. Петрянина, Е.В. Дифференцировочные стимульные свойства мексидола при использовании разных лекарственных форм [Текст] / Е.В. Петрянина, Т.С. Калинина, Т.А. Воронина // Фундаментальные проблемы фармакологии.- 2003.- Москва,- Ч. П.- С. 88.

20. Калинина, Т.С. Сравнительное изучение особенностей формирования лекарственной дифференцировки мексидола и феназепама [Текст] / Т.С. Калинина, Е.В. Петрянина, Т.А. Воронина// Экспериметальная и клиническая фармакология.- 2005.- Т. 68.- №5.- С. 7-10.

21. Kalinina, T.S. Discriminative stimulus effects of mexidol in rats [Текст] / T.S. Kalinina // European Neuropsychoparmacology. - 2005. - V. 15. - Suppl. 2,- P. SI40.

22. Petryanina, E.V. Stimulus effects of drugs with complex spectrum of behavioral activity [Текст] / E.V. Petryanina, T.S. Kalinina, T.A. Voronina // Behavioral Pharmacology.- 2005,-№16, suppl.l.- P. S35.

23. Калинина, Т.С. Исследование дпфференцировочных свойств циклопролил-глицина в условиях оперантного поведения у крыс [Текст] / Т.С. Калинина // Экспериментальная и клиническая фармакология.- 2007.- № 5.- С. 7-10.

24. Калинина, Т.С. Сравнительное изучение дпфференцировочных стимульных свойств анксиолитиков и нейролептиков [Текст] / Т.С. Калинина, Т.А. Воронина, Е.В. Петрянина, J1.C. Гузеватых// Психофармакология и биологическая наркология.- 2007.- Т.

7 (специальный выпуск).- Ч. 1.-С. 1-1715.

25. Калинина, Т.С. Днфференцпровочные стимульные свойства феназепамаи лоразепама: специфичность и роль ГАМКд-рецепторов [Текст] / Т.С. Калинина, Е.В.Петрянина, Т.А Воронина// Экспериментальная п клиническая фармакология.- 2008.- Т. 71.- № 1.- С. 3-7.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

БД - бензодиахиины

ГАМК - гамма-ампномасляная кислота

К. р-р - контрольный раствор

ЛкД - лекарственная днфференцпровка

ОИР - ориентировочно-исследовательская реакция

ЦПГ - циклопролил-глицин

Экв. объем - эквивалентный объем

Са - кальций

Dn - рецепторы дофамина N подтипа

FR1 - режим фиксированного отношения 1, или режим непрерывного подкрепления FR4 - режим фиксированного отношения 4 (подкрепление каждого 4-го нажатия на рычаг)

FRIO - режим фиксированного отношения 10 (подкрепление каждого 10-го нажатия на рычаг)

Подписано в печать 04.12.08 Формат 60x84 Заказ № 114 Тираж 100 экз. Отпечатано и типографии ООО «АрхивариусЪ» Ленинградский пр-т, д.37, кор. 6

Актуальность работы. По данным Всемирной организации Здравоохранения (ВОЗ), в настоящее время около 450 миллионов человек в мире страдают от психоневрологических расстройств и нарушения поведения. По оценке на 2002 год, опубликованной в ежегодном докладе ВОЗ в 2004 году, вклад психоневрологических расстройств в сокращение продолжительности здоровой жизни увеличился до 13,0% (12,2% среди мужчин, 13,8% - среди-женщин). По прогнозу до 2020 года, этот показатель увеличится до 15% (Murray, 2000).

В популяции социально активного трудоспособного населения следует отметить значительную распространенность невротических и неврозоподобных расстройств, увеличение числа больных с пограничными состояниями, аффективными (депрессивными) расстройствами. Среди лиц более пожилого возраста на первый план выходят патологии, являющиеся следствием нейродегенеративных процессов и проявляющиеся в нарушениях когнитивных процессов. С целью терапии этих расстройств широкое применение получили различные группы психотропных лекарственных средств (анксиолитики, транквилизаторы, ноотропы, нейропротекторы, антидерессанты, нейролептики). В подавляющем большинстве случаев фармакотерапия является или единственным эффективным средством лечения нервно-психических расстройств, или неотъемлемым компонентом комплексных подходов к терапии заболеваний данного круга. Это обусловливает актуальность решения ряда общих проблем современной психофармакотерапии. Нередко для развития терапевтического эффекта необходим прием психотропных препаратов длительными курсами, в связи с чем у пациентов развивается психологическое стремление к потреблению лекарственных средств в отсутствие медицинских показаний, т. е. психической зависимости. Экспериментальная оценка риска развития зависимости данного типа является одной из важных проблем современной психофармакологии. В настоящее время все отчетливей обрисовывается проблема индивидуальной чувствительности к психотропным препаратам, что делает необходимым сравнительные исследования механизмов действия различных фармакологических агентов, представляющих конкретный класс лекарственных средств. В данном аспекте особую важность приобретают сравнительные исследования механизмов действия традиционных классических психотропных средств и новых препаратов, обладающих селективностью в отношении определенных терапевтических свойств.

Одним из актуальных направлений современной экспериментальной и клинической фармакологии является изучение интероцептивных (субъективных) эффектов психотропных препаратов, которые являются важным фактором, повышающим риск развития лекарственной зависимости (Rush et al., 2000, 2003 a, b; Vansickel et al., 2006). Способность фармакологических агентов проявлять интероцептивные свойства лежит в основе фундаментального феномена обучения, зависимого от состояния, состоящего в том, что ранее выработанный у человека или животного условный рефлекс воспроизводится в наиболее полной форме только в том состоянии, в котором происходит его выработка (Overton, 1984, Khavandgar, 2003). Моделируемое введением веществ обучение, зависимое от состояния, обнаруживается в явлениях, которые можно подразделить на две основные группы: диссоциированное обучение (state dependent learning) и лекарственную дифференцировку (ЛкД) (drug discrimination).

В эксперименте при обучении животных ЛкД интероцептивные эффекты фармакологических агентов выполняют функцию дифференцировочных стимулов, указывая на высокую вероятность предъявления физиологически значимого для организма безусловного раздражителя (вознаграждения) при совершении определенной инструментальной реакции. В процессе такого условнорефлекторного обучения у животного формируется стабильная интероцептивная дифференцировка по степени воспроизведения которой судят об изменении интероцептивных эффектов тренировочных веществ после самых разнообразных фармакологических манипуляции (Colpaert, 1999; Jarbe et al., 2008).

В клинических условиях интероцептивные эффекты фармакологических агентов проявляются в том, что при приеме определенных лекарственных средств пациенты сообщают о возникновении характерных ощущений, вызываемых этими веществами — субъективных эффектов, что, как полагают, имеет важное значение в формировании целенаправленного поведения, приводящего к неконтролируемому потреблению лекарственных средств с ярко выраженными положительными подкрепляющими свойствами (Ciccocioppo et al., 2004). У людей интероцептивные свойства веществ исследуют в условиях специальных процедур, включающих инструкции к выполнению задач на обучение (drug discrimination) и/или вопросники о субъективных ощущениях (subjective reportes) в соответствии с психологическими шкалами тревоги, раздражительности, депрессии, расслабленности, эйфории и т.д. (Johanson, 1991; Smith, Bickel, 1999; Rush et al., 2000; Kelly et al., 2003;Rush et al., 2003 a, b; Vansickel et al., 2006).

Являясь самостоятельным физиологическим феноменом, ЛкД составляет основу методологического подхода к экспериментальному изучению целого ряда проблем биологии и медицины. Современные классификационные' схемы подтипов рецепторов нервной системы основываются на результатах исследований лигандного связывания и других методов анализа in vitro, при использовании в качестве моделей патологии трансгенных и нокаутированных инбредных линий животных (Barnard et al., 1998; Crestani et al., 2001; Collinson et al., 2002; Elliot et al., 2003; Rosahl, 2003; Morris et al., 2006; Stórustovu, Ebert, 2006). При этом остается актуальной проблема сопоставления этих данных с анализом действия психотропных препаратов и функционирования рецепторных систем в условиях in vivo и в исходных популяциях (wild) лабораторных животных (Rowlett et al., 2004; Atack et al., 2007). Высокая корреляция данных, полученных при изучении рецепторных механизмов действия веществ на основе анализа их интероцептивных эффектов, позволяет рассматривать ЛкД в качестве уникальной экспериментальной парадигмы, обеспечивающей высокий уровень адекватности информации о нейрохимических и молекулярных механизмах действия лекарственных препаратов in vivo (Lelas et al., 2000a, 2000a, 2002; McCane et al., 2004; McCreary et al., 2007; Cater et al., 2007).

Важной практической точкой приложения методологии, основанной на интероцептивных эффектах фармакологических агентов, является доклиническая оценка наркогенного потенциала новых психотропных лекарственных препаратов в сравнении с их известными аналогами и химически родственными соединениями (Barrett et al., 2005; Hodge et al., 2006; McMahon, 2006).

При изучении интероцептивных эффектов психотропных препаратов выделяют несколько основных актуальных направлений. Первый комплекс задач составляют исследования способности новых веществ проявлять субъективные эффекты и изучение механизмов их психотропной активности на основе методологии ЛкД (Recker, Higins, 2004). Разработка психотропных препаратов на основе новых фармакологических концепций часто имеет своим результатом создание новых психоактивных веществ оригинального, часто сложного, спектра действия, сочетающих анксиолитическое действие с ноотропным и/или нейропротективным, нейролептический эффект с ноотропными свойствами, опиат-зависимые анальгетические эффекты, сочетающиеся со слабой выраженностью подкрепляющих свойств. Это обусловливает необходимость сравнительного анализа интероцептивных свойств этих новых веществ и классических препаратов с целью определения перспективы изучения рецепторных механизмов их действия в условиях in vivo на основе методологии ЛкД, рисков развития у пациентов психологической лекарственной зависимости, возможных негативных влияний на процессы памяти и обучения. Вышеизложенное объясняет актуальность анализа особенностей динамики формирования ЛкД при изучении интероцептивных эффектов новых лекарственных препаратов как одного из фундаментальных компонентов спектра психотропной активности.

Вторым важным направлением является разработка, оптимизация и стандартизация экспериментальных методов для изучения интероцептивных эффектов веществ. При колоссальном методическом разнообразии, наблюдаемом в области изучения интероцептивных эффектов веществ, единично представлены экспериментальные работы, предметом которых является сравнительный анализ и обобщение различных подходов изучения ЛкД, в частности использования разных типов безусловного подкрепления при формировании дифференцировочного рефлекса, разных режимов оперантного обучения, вариаций тестовых процедур (Zarcone, Ator, 2000). Наиболее эффективным методом исследования ЛкД в настоящее время признаны оперантные модели поведения, представленные различными модификациями и используемые у разных видов лабораторных животных (Barrett et al., 2005; Platt et al., 2005; Carter et al., 2003; McMahon, 2006). Однако единственная на сегодняшний день классификация дифференцируемости психотропных препаратов основана на динамике и специфичности интероцептивных свойств веществ при формировании ЛкД в условиях Т-образного лабиринта при электроболевом подкреплении (Overton, 1982). Вместе с тем, противоречивость данных, получаемых в разных экспериментальных работах при изучении специфичности и механизмов интероцептивных эффектов психотропных препаратов, часто объясняют особенностями методических модификаций формирования ЛкД и оценки стимульного контроля веществ (Zarcone, Ator, 2000).

В ГУ НИИ фармакологии имени В.В.Закусова РАМН наряду с бензодиазепиновыми (БД) анксиолитиками феназепамом и гидазепамом, в последние годы были созданы и внедряются в лечебную практику оригинальные вещества, сочетающие анксиолитический эффект с ноотропным и/или нейропротективным действием. Селективный анксиолитик с нейропротективным действием афобазол обладает принципиально новым для противотревожного средства механизмом действия, оказывая влияние на внутриклеточные процессы в результате избирательного взаимодействия с ст-рецепторами (Незнамов Г.Г. и соавт., 2001; Середенин и соавт., 2006; Seredenin et al., 2008). В лечебной практике в качестве анксиолитического, ноотропного и нейропротективного средства применяется препарат мексидол (Воронина, 2001, 2004). На основе дизайна коротких пептидов создан препарат ноопепт, анксиолитическую и ноотропную активность которого связывают с его метаболитом циклопролил-глицином (ЦПГ), также определяемым в ЦНС млекопитающих в качестве эндогенного вещества (Гудашева и соавт., 1999, 2001; Середенин и соавт., 2002; Gudasheva et al., 2006). На стадии углубленного изучения в качестве новых анальгетиков находятся производные пептида дерморфина (Гузеватых и соавт., 2005, 2007). Вопрос о наличии дифференцировочных интероцептивных эффектов у ноотропных и/или нейропротективных препаратов, равно как и сравнительные аспекты интероцептивных эффектов нового селективного анксиолитика афобазола и классических БД препаратов, остается неясным, вышеизложенное обусловило цель и задачи настоящего исследования.

Цель исследования состояла в сравнительном изучении особенностей интероцептивных эффектов психотропных препаратов основных фармакологических классов и новых веществ из разных фармакологических групп (анксиолитиков, атипичных нейролептиков, ноотропов, анальгетика) и разработке оптимальной стратегии изучения интероцептивных свойств новых психотропных препаратов в условиях оперантной модели лекарственной дифференцировки. Для достижения выше означенной цели были поставлены следующие задачи:

1. Осуществить сравнительный анализ динамики формирования ЛкД известных и новых психотропных препаратов при использовании разных режимов оперантного обучения (FR1 и FRIO).

2. На основе дифференцированного анализа особенностей текущего процесса формирования ЛкД и ее воспроизведения определить параметры дифференцируемости веществ в условиях оперантной модели поведения.

3. Осуществить сравнительный анализ специфичности интероцептивных эффектов исследуемых препаратов и механизмов реализации их дифференцировочных стимульных свойств в условиях разных режимов оперантной модели ЛкД.

4. Определить роль отдельных модуляторных сайтов ГАМКд-рецепторов в реализации интероцептивных эффектов веществ с анксиолитическим действием.

5. Провести анализ соотношения степени дифференцируемости препаратов из разных фармакологических классов и их специфических психотропных свойств.

6. На основе полученных данных определить общие принципы оптимизации методической схемы экспериментального изучения интероцептивных эффектов новых веществ из разных фармакологических классов в условиях оперантной модели ЛкД у крыс.

Научная новизна исследования. Выявлены различия в характеристиках интероцептивных стимульных свойств и особенности формирования ЛкД анксиолитиков бензодиазепиновой (БД) структуры и анксиолитиков с ноотропным и/или нейропротекгивным компонентами действия. Показано, что феназепам является высокодифференцируемым препаратом и характеризуется наибольшей специфичностью интероцептивных дйфференцировочных стимульных свойств в ряду классических БД анксиолитиков, что проявляется в отсутствии генерализации интероцептивных эффектов феназепама при использовании в условиях заместительного тестирования положительных модуляторов ГАМКд-рецепторов барбитуратной и нейростероидной структуры.

Полная генерализация интероцептивных эффектов феназепама наблюдается только при использовании лоразепама, что свидетельствует о наличии существенных отличительных особенностей в рецепторном механизме реализации психотропной активности феназепама и лоразепама по сравнению с другими БД. Вместе с тем, установлено, что специфичность интероцептивных свойств феназепама несколько выше, чем у лоразепама. Показана способность БД анксиолитика гидазепама частично воспроизводить стимульные свойства лоразепама в условиях оперантной модели ЛкД. Вместе с тем, гидазепам менее эффективен при воспроизведении интероцептивных стимульных свойств феназепама.

Впервые выявлены общие звенья в механизме реализации интероцептивных эффектов феназепама и лоразепама и изучены механизмы реализации интероцептивных эффектов гидазепама. Установлено, что в реализации стимульных свойств феназепама и гидазепама определяющую роль играет функциональное состояние БД модулирующего участка хлорного канала, что является общим звеном в механизме интероцептивных эффектов веществ БД структуры. Вместе с тем, интероцетивные свойства феназепама и лоразепама в значительной степени зависят от состояния ГАМКд-рецепторов, что отличает их от гидазепама. Стимульные свойства феназепама и лоразепама не зависят от функциональной активности пикротоксинового и нейростероидного модулирующих сайтов, что отличает феназепам и лоразепам от других БД анксиолитиков. Впервые проведено изучение дифференцировочных стимульных свойств анксиолитиков с ноотропным и/или нейропротективным компонентами действия мексидола, афобазола и ЦПГ, атипичных нейролептиков сульпирида и дилепта, пептидного анальгетика дерморфина. Показано, что афобазол и дилепт относятся к группе недифференцируемых препаратов. Установлена средняя степень дифференцируемости мексидола при использовании разных режимов оперантного поведения (FR1 и FRIO), ЦПГ в режиме непрерывного подкрепления, сульпирида в разных режимах оперантного o6y4emw(FRl и FRIO) и дерморфина (FRIO).

Показано, что ЛкД, вырабатываемая при использовании анксиолитиков с ноотропными и/или нейропротективными свойствами, характеризуется более длительными сроками обучения, более низким уровнем воспроизведения адекватных оперантных реакций, менее стабильным воспроизведением по сравнению с ГАМКд-позитивными модуляторами БД и барбитуровой природы.

Научно-практическая значимость работы. Данные о низкой дифференцируемости афобазола позволяют полагать полное отсутствие риска развития лекарственной зависимости и синдрома отмены при прекращении длительных приемов препарата.

Наличие средней степени дифференцируемости мексидола, ЦПГ и дерморфина свидетельствует о риске возникновения лекарственной зависимости при длительном применении веществ лишь у отдельных пациентов. Данные о высокой специфичности стимульных свойств БД анксиолитиков (феназепама и лоразепама), низкой и средней дифференцируемости анксиолитиков с ноотропными и/или нейропротективными свойствами позволяют расширить международную классификацию психотропных препаратов, основанную на их дифференцируемости.

Определены подходы к оптимизации методики исследования интероцептивных эффектов психотропных препаратов. Показана эквипотенциальная эффективность использования в качестве базовых оперантных режимов FR1 и FRIO при выработке ЛкД и анализе механизмов интероцептивных эффектов, высоко дифференцируемых фармакологических агентов, что позволяет ускорить процедуру формирования ЛкД и изучение механизмов их действия при использовании оперантного рефлекса FR1.

Установленные в работе особенности формирования и воспроизведения ЛкД в условиях оперантной модели поведения у крыс позволяет определить общие подходы при изучении интероцептивных эффектов новых препаратов из разных фармакологических классов. При изучении стимульных свойств новых психотропных препаратов со сложным спектром поведенческих эффектов, сочетающих анксиолитические свойства с ноотропным и/или нейропротективным действием, предпочтение следует отдавать оперантному режиму FRIO, поскольку динамика текущего процесса формирования ЛкД не совпадает с динамикой воспроизведения ЛкД и зависит от сложности базового условного рефлекса.

Связь с планами НИР, диссертация выполнена в рамках фундаментальной тематики ПИР ГУ НИИ фармакологии имени В.В.Закусова РАМН - темы «Изучение механизмов эндо- и экзогенной регуляции функций центральной нервной системы. Разработка новых оригинальных нейропсихотропных средств» и гранта РФФИ 99-04-49-625 «Изучение механизмов интероцептивных стимульных свойств бензодиазепиновых анксиолитиков».

Апробация работы. Материалы диссертации были представлены в докладах на всероссийских и международных конференциях: Международная конференция, посвященная 100-летию со дня рождения академика С.В.Аничкова Нейрофармакология на рубеже двух тысячелетий, Санкт-Петербург, 1992; VI и VII Российский Национальный Конгресс Человек и лекарство, Москва, 1999, 2000; «Р1ейрофармакология двадцать первого века», Санкт-Петербург, сентябрь 2002, 2-й Съезд Российского Научного Общества фармакологов, Москва, 2003г.; 3-й Съезд Российского Научного Общества фармакологов Фармакология -практическому здравоохранению, Санкт-Петербург, 2007; 3-rd International

Symposium Pharmacology of Transmitter Interaction, Sofia, Bulgaria, 1990; 2nd International Conference Biological Basis of Individual Sensitivity to Psychotropic Drugs, Moscow, 1993; 5th Meeting of the European Behavioural Pharmacology Society (EBPS), Berline Germany, 1994; 1th European Congress of Pharmacology, Milan, Italy, 1995; 6th Meeting of the EBPS Cagliary, Italy, 1996; 7th Meeting International EBPS, Brno, Czech Republic and 5th International Meeting on Drug Discrimination of the Society for Stimulus properties of Drugs, Antwerp, Belgium, 1998; European Research conference «Neuronal mechanisms of learning and memory», Obernai, France, 2000; 8th TCNP Regional Meeting, Moscow, Russia, 2005; 11th Biennial Meeting EBPS, Barselona, Spaine, 2005.

Объем и структура диссертации. Работа состоит из введения, обзора литературы, раздела Материалы и методы исследования, 7-ми экспериментальных глав, обсуждения результатов, выводов, библиографического указателя, включающего 62 источников на русском и 479 источников на иностранном языках. Диссертация изложена на 360 страницах машинописного текста, содержит 25 таблиц и 90 рисунков.

выводы

1. Определены параметры, по которым психотропные препараты подразделяются на высоко-, средне - и недифференцируемые: период достижения первого критерия обученности; точность выполнения оперантного рефлекса альтернативного выбора; длительность обучения; точность воспроизведения лекарственной дифференцировки (ЛкД); % животных, способных к воспроизведению ЛкД; степень зависимости динамики формирования ЛкД от режима оперантного обучения. Показано, что высокодифференцируемые препараты характеризуются отсутствием зависимости процессов формирования и воспроизведения ЛкД от режима оперантного обучения. Среднедифференцируемые препараты характеризуются наличием хотя бы одного из следующих свойств: снижением уровня воспроизведения ЛкД, увеличением периода обучения при усложнении режима и воспроизведением ЛкД лишь у отдельных особей.

2. Интероцептивные свойства феназепама имеют большую специфичность по сравнению с таковыми у лоразепама. ГАМКл-позитивные нейростероиды и барбитураты не вызывают генерализации стимульных эффектов феназепама и лоразепама, что принципиально отличает эти препараты от других бензодиазепинов (БД), в частности, диазепама. Гидазепам не вызывает генерализации интероцептивных эффектов феназепама и лишь у некоторых крыс замещает лоразепам, что свидетельствует о различии интероцептивных эффектов гидазепама и этих БД. Барбитураты не вызывают генерализации контрацептивных эффектов пероксидазе. По степени специфичности контрацептивных эффектов изученные БД располагаются следующим образом: фенамин>поразевало >пероксидазе>диазепам.

3. Интероцептивные эффекты феназепама, лоразепама и гидазепама зависят от функциональной активности БД модуляторного сайт и не зависят от активности пикротоксин-связывающего участка ГАМКл-рецепторов. Прямая функциональная блокада ГАМКл-рецепторов частично ингибирует интероцептивные эффекты лоразепама и феназепама, но не гидазепама. Интероцептивные эффекты барбитуратов не зависят от функциональной активности БД модуляторного сайта и непосредственно ГАМКд-рецепторов, а определяются функциональной активностью пикротоксинового сайта ГАМКл-рецепторов.

4. Показаны принципиальные различия механизма реализации интероцептивных эффектов производных пиримидинил-пиперазина (буспирона) и БД и барбитуратов, так как в условиях перекрестного заместительного тестирования наблюдается полное отсутствие генерализации дифференцировочных стимульных свойств положительных аллостерических модуляторов ГАМКл-рецепторов и буспирона.

5. Вещества, в спектре фармакологической активности которых анксиолитическое действие дополняется ноотропным и/или нейропротективным эффектами или не обладают интероцептивными свойствами (фенибут), или вызывают ЛкД только у отдельных особей (мексидол, циклопролил-глицин), что позволяет прогнозировать развитие лекарственной зависимости при их длительном применении лишь у отдельных пациентов.

6. Афобазол не вызывает ЛкД, а в условиях заместительного тестирования у крыс, обученных ЛкД БД, наблюдается реакция, адекватная инъекциям физиологического раствора. Афобазол не изменяет генерализационный профиль интероцептивных эффектов диазепама, что свидетельствует об отсутствии общих звеньев в механизме действия активности афобазола и БД. Полученные данные обосновывают прогноз в отношении минимального риска развития лекарственной зависимости при клиническом применении афобазола.

7. Интероцептивные эффекты атипичного нейролептика сульпирида выявляются лишь у отдельных особей и обнаруживают прямую пропорциональную зависимость от дозы. Пептидный нейролептик дилепт не вызывает ЛкД, не воспроизводит интероцептивные эффекты сульпирида и не влияет на частоту оперантных реакций. Пептидный анальгетик дермофин вызывает ЛкД только у отдельных особей, что свидетельствует о его средней дифференцируемости и позволяет ожидать меньшую выраженность лекарственной зависимости при клиническом применении по сравнению с наркотическими анальгетиками.

8. Сравнительный анализ динамики формирования ЛкД и ее воспроизведения в разных режимах оперантного обучения позволяет дифференцировать наличие «стимульного контроля» и потенциально возможных влияний на процессы инструментального обучения, не связанных собственно с выраженностью субъективных эффектов психотропных препаратов.