Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Иммунотропные свойства антигистаминных препаратов и их комбинаций с иммуномодуляторами

Г Г 5 ОД

1 3 ыш

■ На правах рукописи

Красилова Ирина Леонидовна

ИММУНОТРОПНЫЕ СВОЙСТВА АНТИГИСТАМИННЫХ ПРЕПАРАТОВ И ИХ КОМБИНАЦИЙ С ИММУНОМОДУЛЯТОРАМИ

14.00. 25 - "Фармакология"

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Уфа -1996

Работа выполнена в Башкирском государственном медицинском университс

Научный руководитель; доктор медицинских наук, профессор Алехин е.к.

Официальные оппоненты:

1. доктор медицинских наук, профессор Зарудий Ф.а

2. доктор медицинских наук, профессор Сгригин В.А

Ведущая организация: Российский государственный медицинский университет (г. Москва)

Защита состоится " " июня 1996 года в 10 часов на заседании диссертационного совета (К. 084. 35. 02) при Башкирском государственном медицинском университете по адресу: 450000, г. Уфа, Ленина, 3.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Башкирского государственного медицинского университета (450000, г. Уфа, Ленина,

3) .

Автореферат разослан 30 апреля 1996 г.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук, профессор

Давлетов Э.Г.

актуальность проблемы.

Классические антигистамннные препараты - блокаторы Н, гистаминорецепторов являются одной из наиболее часто применяемых групп современных лекарственных средств, которые активно назначают при огромном числе различных заболеваний и в любом возрасте (Чернин В.В., 1981; Лоуренс Д.Р., Бенитт П.Н., 1993; Бредихин А.Ю., 1994; Шумаков В.И. и соавт., 1994; Куликов Ю.А., 1995; Проскурина В.А. и соавт., 1995; Романов В.Е. и соавт., 1995; RafTerty Р., 1990; McGufTey Е.С., 1994; Mixon T. et al., 1994; McGee S.R., 1995). Причем объем мирового рынка антигистаминных препаратов непрерывно растет, ежегодно увеличиваясь на 15 % (Саутенкова Н. Л., Мошкова Л. В., 1994).

Столь широкое и многолетнее использование этих препаратов, казалось бы, должно обусловить их всестороннюю изученность. Однако имеющиеся сведения об их действии, помимо основного, собственно антигистаминного, ограничиваются в основном снотворным и седативным эффектами и расцениваются чаще всего как побочные (Гущин И.С., Сараф A.C., 1992; Witek TJ.Jr.etal., 1995).

Весьма слабо изученным остается, в частности, влияние на систему иммунитета, которой в последние годы придается все большее значение в возникновении и течении многих неинфекционных и большинства инфекционных заболеваний.

Существенно, что в изучении иммунотропных свойств нуждается каждый антнгистаминный препарат, поскольку при общей способности блокировать Н,-гистаминовые рецепторы они значительно различаются по спектру антимсдиаторной активности (холинолитической, антисеротониновой и др.), что в свете сегодняшних представлений о нейроэндокринной регуляции иммунитета может внести определенные нюансы в иммуномодуляцию.

Иммунотропные свойства антигистаминных средств, важные сами по себе, приобретают особую значимость в тех нередких ситуациях, когда их назначают одновременно с иммуностимуляторами (ИС), необходимость в которых в силу ряда обстоятельств (экологический пресс, супрессивные свойства многих лекарств, трудности антибиотикотерапии) становится все более настоятельной (Andersen W.K., Feingold D.S., 1995).

При этом информация об иммунофармакологических аспектах взаимодействия гистамннолитиков с ИС в равной мере важна для рационального применения как антигистаминных средств, так и стимуляторов иммунитета, а экспериментальный подход представляется обязательным этапом изучения данной проблемы, так как в условиях неизбежной для современной клиники полипрагмазии выявить искомые эффекты и закономерности едва ли возможно.

Цель работы:

Анализ иммунофармахологического профиля Нсгистаминолитиков н их комбинаций с иммуностимуляторами.

Задачи исследования:

1. Исследовать действие Нггистамнноблокаторов димедрола, гисманала, феккарола на гуморальный, клеточный варианты иммунного ответа.

2. Изучить эффект Н|- гистаминоблохаторов димедрола, гисманала, фенкарола на фагоцитарную активность макрофагов и полинухлеарных нейтрофилов.

3. Оценить иммунотропную активность комбинаций иммуностимуляторов оксиметацила и тахтивина с Н|- гистаминолитиками.

Научная новизна:

1. Выявлен и теоретически обоснован разнонаправленный характер иммуномодуляции Н|-гистаминолитиками; показано, что механизм их иммунотропной активности не исчерпывается только антигистаминными свойствами.

2. Впервые установлена способность гисманала стимулировать фагоцитарные функции, имеющая самостоятельное значение и заметно выделяющая его из ряда антигистаминных средств.

3. Показано, что активность иммуностимуляторов оксиметацила и тактивина существенно трансформируется в комбинациях с Н|-гистаминолитиками.

4. Установлено, что оксиметацил, редуцируя длительность "этанольного наркоза", препятствует реализации классического побочного эффекта димедрола - потенцирования действия алкоголя.

Научно-практическая ценность:

1. Полученные результаты расширяют представления о фармакологии Н|-гистаминолитихов, что позволит более обоснованно подходить к выбору препаратов в процессе курсовой терапии.

2. Выявленные особенности интерактивного поведения иммуностимуляторов оксиметацииа, тактивина и Нсгистаминоблокаторов, помимо теоретического интереса, важны для прогнозирования эффективности подобных сочетаний в клинике.

3. Установленная способность гисманала стимулировать макрофагальный фагоцитоз, существенно превосходящая активность "профессиональных" иммуностимуляторов оксиметацила и тактивина, и проявлять антимикробные свойства позволяет рассматривать его как новый иммуномодулятор с оригинальным спектром действия.

4. Исследования "антиалкогольного" эффекта оксиметацила приоритетны и перспективны в плане дальнейшего изучения.

положения, выносимые на защиту:

1. Модуляция активности оксиметацила и тактивина антигистаминными средствами.

2. Н|-гистаминолитики - препараты с выраженной и разнонаправленной иммунотропной активностью.

3. Гисманал - новый оригинальный иммуномодулятор.

Внедрение:

Результаты работы внедрены в практику преподавательской и научно-исследовательской деятельности Волгоградской ордена Трудового Красного

знамени медицинской академии; включены в преподавание соответствующих разделов курса иммунологии и кафедры фармакологии №2 БГМУ.

Апробация работы:

Основные положения диссертации доложены на 60-ой конференции молодых ученых БГМИ (Уфа, 1995); на XII Российской научной конференции "Факторы клеточного и гуморального иммунитета при различных физиологических и патологических состояниях" /Челябинск, 1995/, на 4-ой международной конференции "Нейроиммунология. Нейроинфекция. Нейроимидж."/ Санкт-Петербург, 1995/, на I Российском съезде фармакологов /Волгоград, 1995/, на заседании общества фармакологов Башкортостана/Уфа, 1996/.

Публикации:

По теме диссертации опубликовано 9 работ. Объем и структура диссертации:

Диссертация, изложенная на 155 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, 3 глав, отражающих результаты собственных исследований, обсуждения полученных результатов и выводов; включает 14 таблиц и 20 рисунков. Библиография представлена 209 отечественными и 170 зарубежными работами.

Материалы и методы:

Эксперименты выполнены на 1800 половозрелых мышах, преимущественно самцах, полученных из питомника лабораторных животных РАМН "Рапполово". Использованы мыши генотипов: СВА (Нгк), С57В1/6 (Н2В), гибриды первого поколения Fi(CBA*C57BI/6) и неинбредные.

Животных содержали на обычном рационе вивария. Условия проведения экспериментов строго идентичны для контрольных и опытных групп.

В экспериментах использованы следующие препараты: димедрол (Минмедбиопром. Челябинский химфармзавод) внутрижелудочно 0.1 - 10.0 мг/кг в изотоническом растворе Na CI; гисманал (Janssen pharmaceutica, суспензия в 1 мл- 2 мг) внутрижелудочно 0.017 - 1.7 мг/кг в 2% крахмальной взвеси; фенкарол (Минмедбиопром. ПО "Латвбиофарм") внутрижелудочно 0.02 - 2.0 мг/кг в 2% крахмальной взвеси; тактивин (предприятие биомедпрепаратов им. И.И. Мечникова, г. Москва) подкожно 0.25 мг/кг в изотоническом растворе Na CI; оксиметацил [ОМУ] (Институт химии УНЦ РАН) внутрижелудочно 50 мг/кг в 2% крахмальной взвеси.

Иммуностимуляторы вводили в оптимальных иммуноактивных дозах (Камилов Ф.Х. и соавт., 1992; Арион В.Я., 1990) в течение 5 дней ежедневно (оксиметацил - внутрижелудочно; тактивин - подкожно), Hi-гистаминолитики в стократном диапазоне доз: 0.1 - 10.0 от среднетерапевтической (СТД) дозы для человека с шагом в один порядок перорально ежедневно. Схемы введения препаратов по отношению к антигенному стимулу (модели антителобразующих клеток [АОК], гиперчувствительности замедленного типа [ГЗТ)) указаны в соответствующих разделах.

Первичный гуморальный иммунный ответ оценивали по числу АОК в селезенке мышей, иммунизированных эритроцитами барана (ЭБ), методом Jerne N.. Nordin А. (1963) в модификации Cunningham H.S. (1965). ЭБ (5*108) вводили внутрибрюшинно в объеме 0.5 мл изотонического раствора Na С1 на 20 г мыши. На 5-ые сутки животных декапитировали. Селезенку гомогенизировали в 10 мл раствора Хенкса (НПО "Иммунопрепарат"). Суспензию пропускали через 4-х слойный капроновый фильтр. В камере Горяева подсчитывали количество спленоцитов и рассчитывали их число на всю селезенку. Смесь для заполнения камер готовили путем добавления к 0.6 мл раствора Хеикса 0.1 мл 10% ЭБ в изотоническом растворе NaCI, 0.1 мл взвеси спленоцитов и 0.2 мл комплемента морской свинки (разведение 1:5). После инкубации подсчитывали число зон гемолиза в камере. Количество АОК рассчитывали как во всей селезенке, так и на миллион спленоцитов. Hi-гистаминолитики и ИС вводили с первого дня сенсибилизации. На 5-ые сутки, спустя 24 часа после последнего ведения препаратов, проводили тестирование.

Клеточный иммунный ответ изучали на модели ГЗТ к 2,4-динитрофторбетолу (ДНФБ). ГЗТ воспроизводили у беспородных мышей-

самцов путем двукратной аппликации (0, +1 день) на эпилированную поверхность живота (S=3 см2) 25 мкл 0.5 % раствора ДНФБ в ацетон-оливковом масле (4:1) (сенсибилизация). На 5-ые сутки после сенсибилизации на дорсальную поверхность ушных раковин наносили 25 мкл 0.25% раствора ДНФБ. Индекс ГЗТ оценивали по приросту толщины уха по отношению к исходной (+5 сутки) через 24 часа после нанесения разрешающей дозы антигена путем измерения инженерным микрометром МК-0-25 (Phanuphak Р. et al., 1974). Hi-гистаминоблокаторы и ИС вводили с первого дня сенсибилизации в течение 5 дней. Последнее введение - за 24 часа до разрешающей дозы антигена.

Функциональное состояние фагоцитов (перитонеальных макрофагов и ■ полинуклеарных нейтрофилов периферической крови) оценивали по способности поглощать стандартные микросферы латекса (Brock P.I. van den. et al., 1988-1989) и интенсивности кислородного метаболизма по тесту восстановления нитротетразолиевого синего [HCT] (Шубич М.Г., Медникова В.Г., 1978, модификация Нагоева Б.С., 1983). Лейкоконцентрат получали общепринятым способом из образцов крови, полученных пункцией ретроорбитального венозного синуса. Макрофаги выделяли адсорбцией из перитонеального экссудата. Оценку фагоцитарной активности проводили в реакциях с конечным объемом 0.08 мл при соотношении фагоцит - латекс 1:20. Поглотительную активность оценивали после 20 мин инкубации при 37 ° в СОг-инкубаторе микроскопически в фиксированных в спирт-формалиновой смеси окрашенных по Романовскому-Гимзе мазках. Вычисляли фагоцитарное число (ФЧ) - процент активных фагоцитов; фагоцитарный индекс (ФИ) - число поглощенных микросфер латекса одним потенциальным фагоцитом; показатель интенсивности фагоцитоза (ПИФ) - среднее количество поглощенных тест-частиц каждой участвующей в фагоцитозе клеткой.

Результаты НСТ-теста оценивали после 30 минутной инкубации суспензии фагоцитов с 0.1 % раствором HCT ("Chemapol") морфологическим методом. В окрашенных 2% метиловым зеленым мазках определяли долю активных фагоцитов - %А (содержащих гранулы восстановленного диформазана) и индекс активации (ИА), характеризующийся степенью активации в перераспределении на один фагоцит. Показатели вычисляли в интактных клетках (спонтанный HCT) и в суспензии фагоцитов в процессе фагоцитоза микросфер латекса (индуцированный НСТ-тест).

Поведенческие реакции оценивали у беспородных мышей-самцов в тесте "открытого поля" (Марнель A.A., 1981) спустя 1 час после введения препаратов. В течение 10 минут учитывали локомоторную (горизонтальную, вертикальную) и поисковую активность ("норковый рефлекс").

Модель алкогольного наркоза воспроизводили на беспородных мышах-самцах массой 18-20 г. 33% этиловый спирт вводили внутрибрюшинно в объеме

0.2 мл на 20 г мыши. Учитывали продолжительность алкогольного сна по общепринятому тесту "бокового положения" (Шарапов Н.И., 1952).

Результаты обрабатывали на IBM PC AT 486 DXJ2 66 с помощью методов вариационной статистики (Лакин Г.Ф., 1990), разработанных на базе пакета программ Microsoft Office.

результаты исследования и их обсуждение.

1. Сравнительная иммунотропная характеристика hi-гистаминоблокаторов.

Для сравнительного изучения иммунофармакологических свойств Hi-гистаминолитиков выбраны 3 препарата: классический гистаминоблокатор димедрол, обладающий выраженным М-холинолитическим и седативным эффектами, широко применяемый в России фенкарол, способный активировать диаминоксидазу, и представитель нового поколения селективных гнстаминолитиков гисманал (астемизол), отличающийся высокой избирательностью в отношении Hi-гистаминорецепторов и уникальными фармакокинетическими характеристиками.

При оценке влияния гистаминоблокаторов на клеточный вариант иммунного ответа установлено, что димедрол и гисманал подавляли экспрессию ГЗТ, фенкарол же, не оказывая влияния в дозах 0.1; 1.0 СТД, вызывал достоверную стимуляцию реакции в десятикратной СТД.

На формирование первичного гуморального иммунного ответа у неинбредных и мышей линии C57BI/6, низко отвечающих на ЭБ, препараты не оказывали заметного эффекта: количество АОК на миллион спленоцитов, как и АОК во всей селезенке, были сравнимы с контрольными величинами. Однако у высоко отвечающих на ЭБ мышей СВА фенкарол в дозе 2 мг/кг приводил к достоверному снижению количества АОК. Гисманал (0.17 мг/кг) вызывал лишь тенденцию к снижению числа АОК на 10* спленоцитов, что, вероятно, связано

с достоверным увеличением числа спленоцитов, а димедрол (1.0 мг/кг) не влиял на антнтелообразованне.

Препараты неоднозначно влияли на макрофаги и нейтрофилы. Действие димедрола на поглотительную функцию фагоцитов в целом можно охарактеризовать как инднфферентное. Статистически значимым оказалось лишь увеличение количества активных макрофагов и ФИ палочкоядерных лейкоцитов (ПЯЛ) в дозе 0.1 СТД. Димедрол оказывал однотипный эффект как на интактные, так и на стимулированные фагоциты: угнетал оксидантный метаболизм макрофагов (спонтанный: 0.1-1.0 СТД; индуцированный: 0.1-10.0 СТД) и повышал - нейтрофилов (1.0-10.0 СТД).

Фенкарол проявлял активность преимущественно в дозе, равной десятикратной СТД: обеспечивал достоверную стимуляцию фагоцитоза и индуцированного оксидантного метаболизма ПЯЛ. Однако в макрофагах интенсивность наработки биооксидантов в условиях индукции латексом существенно снижалась (0.1; 10 СТД).

Среди изученных Н|-гистаминолитиков заметно выделяется представитель второго поколения гистаминоблокаторов - гисманал. Он вызывал выраженную стимуляцию поглощения микросфер латекса макрофагами (по всем изученным показателям), однако практически не влиял на ПЯЛ - незначительно усиливал их фагоцитарную способность лишь в десятикратной СТД. Гисманал (0.1; 1.0 СТД) достоверно супрессировал спонтанный кислородзависимый метаболизм перитонеальных макрофагов и активировал его в ПЯЛ (0.1-10 СТД), причем количество НСТ-положительных клеток и индекс активации менялись в равной степени. В условиях индукции латексом активность оксидантных систем ПЯЛ была аналогична таковой в спонтанном НСТ-тесте, а макрофагов не отличалась от контрольных величин (рис. I).

Эффект гисманала на фагоциты резко отличается от действия димедрола и фенкарола. В отличие от них, гисманал обеспечивает мощную активацию поглотительной функции макрофагов и кислородзависимого метаболизма нейтрофильных гранулоцитов. Мы полагаем, что этот эффект обусловлен, главным образом, бензимидазольной структурой препарата, - так как известна способность бензимидазолов стимулировать фагоцитоз,- и не связан с

и

300 250 200 150' 100 50' 0

200 -]

■й-

г 150 -

а

о

1- 100 -

О

X

< 50 -

S

200

Фагоцитоз Мф

[Ь .

Фагоцитоз ПЯЛ

1 2 3 HCT сп Мф

Й

1 2 3 HCT ИНД Мф

JL

250 п 200

К 150 | 10°'

50 • О

700 -600 500 400 300 200 100 О

250

С

§ 200

4

х

х »-

О

X <

5

150 100 50 О

W

% И

1 2 3

нет сп пял

« X

Ш

1 2 3

нет инд пял

1 2 3

1

Рис. 1. Влияние гисмакала на показатели фагоцитарной, метаболической активности макрофагов и нейгрофилытх гранулоцстов (% к контролю)

ФИ - фагоцитарный индекс фагоцитов

ИА HCT сп - индекс активации в спонтанном НСТ-тесте

ИА HCT инд- индекс аетивации в индуцированном латексом HCT- тесте

I I I - гисманал 0.1 СТД

ИЙ**! 2 - гисманал 1 СТД . доверительный интервал I 3 - гисманал 10 СТД _ контрольной группы

угнетением синтеза простагландинов. Действительно, в специально проведенных нами экспериментах еще более селективный Н|-гистаминолитик кларитин (лоратадин), но имеющий другую химическую структуру (представитель пиридинов), заметно не изменял активность обоих типов фагоцитов (табл. I); кроме того, гнсманал не влиял на антитеяопродухцию у мышей линии С57В1/6, низкий уровень ответа которых генетически детерминирован избыточной продукцией ПГЕ: (Колесникова О.П., Ватолин Г.Ю., 1989).

Таблица 1.

Влияние кларитина на показатели поглотительной активности макрофагов

№ Препарат Доза мг/кг Число животных ФЧ Р ПИФ Р

I 2% крахмальная взвесь (контроль) - 9 38.89 ± 2.81 - 1.99 ± 0.14

2 Кларитин i I 0.017 7 39.00 ±3.17 > 0.5 2.05 ± 0.13 > 0.5

3 0.17 7 44.29 ± 4.52 > 0.25 1.95 ± 0.07 > 0.5

4 1.7 5 41.60 ± 3.31 > 0.5 1.92 ± 0.08 > 0.5

• Примечание: Р - вероятность отличий от контрольной группы

Обращает внимание явная разнонаправленность действия гисманала на поглотительную функцию макрофагов и нейтрофилов. Этот факт редкий, но не уникальный. Так, подобный эффект отмечен у витаминов А, Е (Муфазалова H.A., 1993). Однако данные фармакокинегичесхого характера или касающиеся особенностей рецепторного аппарата, с помощью которых могла быть удовлетворительно объяснена природа данного феномена, отсутствуют.

Отсутствие стимуляции гисманалом поглотительной функции нейтрофильных гранулоцито» соответствует хлиничесхнм наблюдениям (Лусс Л.В. и соавт.; 1994). Что же касается его влияния на макрофаги, выраженный эффект этого гистамннолнтиха не регистрируется рутинными нммунологичесхими методами, а потому остается не замеченным.

Между тем, установленный нами стимулирующий эффект гисманала на ряд параметров фагоцитоза нельзя рассматривать только хах аххомпанеменгоый по отношению х антигнстаминному, поскольку .его выраженность, хах показали дальнейшие сравнительные исследования с действием "профессиональных" иммуностимуляторов, представляет самостоятельный интерес. Существенно н то, что, не измен« фагоцитарной ахтивности нентрофилов, препарат значительно увеличивает генерацию кислородных радихалов, т.е. основной фахтор их бноцндности.

При рассмотрении гисманала в хачестве потенциального стимулятора фагоцитоза, трудно было пройти мимо, хотя и не многочисленных, сообщений об антибактериальной активности нехоторых Hi-гнстаминолнтихов (Дихнм. И_П. и соавт., 1991; Ray S. et al., 1990 и др.). Подобное действие для гисманала не исследовано. Поэтому совместно с доцентом кафедры михробиологни БГМУ А.К. Булгаховым нами изучена его противомихробная активность на тестовых штаммах Е. colli, В. autracis, Pr. vulgaris, Рг. mirabilis, Ps. aeruginosa, St. aureus,-

¡

Sh. sonna. Vibrion, Ser. marcenscens. В хонцентрации 5*104 мг/мл, эквивалентной i наблюдаемой в крови при достижении стационарного уровня в процессе хурсовой терапии, гисманал оказывал бактерицидное действие на штаммы Sh. sonna, St. aureus, и Pr. mirabilis. Кроме того, при лрофилахтмчесхом введении гисманал охазывал протехтивный эффект на течение инфехционного процесса, вызванного Pr. mirabilis (штамм IIIS). Тахим образом, стимуляция фагоцитоза макрофагов гисманалом в нехоторых случаях выгодно дополняется прямым антибактериальным эффехтом препарата.

2. Иммукотропная характеристика комбинаций Hi-гистамииалитиков и окснметацила.

Для изучения иммунотропной ахтивности комбинаций Hi-гистаминоблохаторов н иммуномодуляторов антигнстаминные препараты

вводили в течение 5 дней в дозах, равных СТД для человека (димедрол - 1.0 мг/кг, гисманал • 0.17 мг/кг; фенкарол - 2.0 мг/кг), поскольку в проведенных ранее экспериментах не было выявлено линейной зависимости "доза - эффект", кроме того, СТД наиболее часто используется и для оценки нммунотропности гнетам инолитиков у животных в эксперименте (Слаутина С.М., 1987; Казимирчук В.Е. и соавт., 1988 и др.).

Действие производного пиримидина ОМУ (50 мг/кг 5-кратно внутрижелудочно) характеризуется достаточной стабильностью: во всех сериях экспериментов он вызывал стойкое повышение фагоцитарной активности макрофагов (поглотительной способности, индуцированного оксидантного метаболизма) и повышал выраженность клеточного иммунного ответа, что созвучно данным других исследователей (Бакиров А.Б., 1980; Сарманаев С.Х., 1987 и др.).

Все изученные гистаминолитики устраняли иммуностимулирующие эффекты оксиметацила по большинству изученных тестов: модель ГЗТ, фагоцитоза перитонеальных макрофагов, индуцированного НСТ-теста (за исключением гисманала). Оксиметацил же существенно не изменял иммунотропной активности димедрола и фенкарола и нивелировал активацию гисманалом макрофагального фагоцитоза, подавление ГЗТ.

Эффекты Hi-гистаминолитиков в отношении спонтанного метаболизма фагоцитов практически не менялись при их сочетании с оксиметацилом, лишь в комбинации с димедролом отмечена интенсификация респираторного взрыва, тогда как индивидуальное применение препаратов было не эффективно.

Из изученных сочетаний самые неожиданные результаты получены при анализе комбинаций "ОМУ+димедрол" (рис. 2). Димедрол не модифицировал влияние оксиметацила на фагоцитарную способность и метаболическую активность (по основному критерию - индуцированному НСТ-тесту) нейтрофильных гранулоцитов, но существенно ослаблял эффект ИС на все изученные показатели активности макрофагов. Наблюдался резкий двусторонний антагонизм в отношении гуморального иммунитета и полностью выключалось действие ОМУ на ГЗТ.

от

Ди.медр.ол±-ОМУ

Димедрзд

ИАМф

О»

Рис. 2. Влияние димедрола, оксиметацила и их комбинаций на некоторые показатели иммунитета

Обозначения:

АОК - количество АОК на миллион спленоцитов;

ГЗТ - выраженность ГЗТ к ДНФБ;

ФИ Мф - фагоцитарный индекс макрофагов;

ФИ Нф- фагоцитарный индекс нейтрофильных гранулоцитов;

ИА Мф - индекс активации макрофагов (спонтанный НСТ- тест);

ИА Нф - индекс активации нейтрофильных гранулоцитов

(спонтанный НСТ-тест);

ИА Мф инд -индекс активации макрофагов (индуцированный латексом НСТ-тест);

ИА Нф инд - индекс активации нейтрофильных гранулоцитов (нндуцировлниы)! латексом НСТ-тест).

Такая комбинация представляет несомненный интерес с позиций потенцирования антиаллергической способности димедрола, поскольку отдельные иммуносупрессорные эффекты гистаминолитиков: угнетение синтеза лимфокинов, бластгрансформации лимфоцитов, выраженности ГЗТ большинство авторов склонно трактовать как один из факторов, наряду с выраженной противогистаминной активностью, ведущих к клиническому выздоровлению пациентов (Nogaller A.M. et al., 1994; Shamray T.R., Khomyakova A.S., 1994 и др.). С учетом неординарности полученных данных и известной, обусловленной антиоксидантными свойствами, антитоксической способности ОМУ нам представлялось интересным выяснить, как отражается его действие на классическом побочном эффекте димедрола - потенцировании токсичности этанола, хотя такая постановка вопроса и выходит за пределы частных задач исследования.

ОМУ (50 мг/кг 5-кратно внутрижелудочно) существенно редуцировал длительность "этанольного наркоза". Димедрол (1 мг/кг 5 дней перорально), как и следовало ожидать, увеличивал продолжительность сна, вызванного внутрибрюшинным введением этанола, на 26%. На фоне оксиметацила указанный эффект димедрола не реализовывался, что, очевидно, связано с ослаблением действия этанола, благодаря известным выраженным антиоксидантным свойствам ОМУ.

Для выяснения истинных причин наблюдаемого антагонизма было исследовано действие ОМУ при введении в различные сроки по отношению к этанолу. Как показано работами Мышкина В.А. и соавт. (1976-1994), в основе его антитоксических эффектов (в отношении нитритов, тетрахлорметана, карбофоса, бензола) лежит антиоксидантная активность, максимально проявляющаяся при профилактическом введении за I час до токсиканта. В наших экспериментах существенная редукция продолжительности "алкогольного наркоза" была также получена лишь при введении за I и 2 часа до этанола, что скорее свидетельствует о преимущественном устранении эффекта непосредственно самого этанола за счет антирадикального действия, чем антагонизме с димедролом. Действительно, в специально проведенных нами экспериментах оксиметацил практически не препятствовал реализации собственно седативного эффекта гистаминолитика (регистрировали в тесте

открытого поля), детерминируемого блокадой центральных М-холино- и Н|-гисгаминорецепторов (Ганкина Е.М. и соавт., 1993; БсЬтМйег V/., 1985).

Нельзя было исключить и индукции оксиметацилом цитохром Р<50 в печени, так как известно, что этот путь метаболизма этанола может играть значительную роль именно при массивной алкогольной нагрузке (Ю.М. Островский и соавт., 1986). Однако, судя по длительности гексеналового сна, ОМУ скорее проявляет некоторую ингибиторную способность в отношении микросомальной монооксигеназной системы (длительность гексеналового сна контрольной группы - 18.4+ 2.6 мин (100±14.3%); ОМУ - 25.7±3.7 мин (140±19.9%)).

3. Иммунотропная активность комбинаций тактивнна с Нсантигистаминными препаратами.

Таблица 2.

Влияние комбинаций Н|-гистаминоблокаторов и тактивина на выраженность

ГЗТкДНФБ

№ Препарат Доза мг/кг Число мышей Прирост толщины уха (мкм) Р. Рг Рз

1 Изотонический раствор хлорида натрия (контроль) 27 4.35 ± 0.41

2 Тактивин 0.25 20 4.29 ± 0.37 >0.5

3 Димедрол 1.0 15 2.29 ± 0.28 < 0.001

4 Димедрол + тактивин 18 3.43 ± 0.28 >0.1 < 0.01 0.05

5 Гисманал 0.17 17 2.06 ± 0.37 < 0.001

6 Гисманал + тактивин 17 3.27 ± 0.55 >0.1 > 0.05 0.1

7 Фенкарол 2.0 17 3.22 ± 0.46 >0.05

8 Фенкарол + тактивин 14 2.88 ± 0.34 <0.01 > 0.25 0.1

Примечание:

• Р| - вероятность различий с контролем;

• Рг - вероятность различий с гистаминолитиком;

• Р1 - вероятность различий с тактивином.

Тактивнн 0.25 мг/кг вводили пятикратно подкожно (с 0 по +4 день). Как и следовало ожидать, его применение на интактном фоне не привело к изменению изучаемых показателей, что хорошо согласуется с данными литературы (Арион В.Я., 1980; Мошковская Е.Ю. и соавт., 1989 и др.).

Не проявляя собственной активности на модели ГЗТ, тактивин существенно трансформировал эффекты димедрола и гисманала, устраняя супрессию реакции, что с позиций преимущественно корригирующего действия тактивина вполне логично (табл. 2).

Обнаруженное незначительное по амплитуде, но достоверное угнетение в комбинации с фенкаролом, трудно объяснимо с позиций влияния препаратов на Т-клеточные механизмы ГЗТ, однако, отчасти подобный эффект может быть следствием ингибиции активности макрофагов, роль которых в формировании ГЗТ известна (Маянский Д.Н., 1991).

Сочетание с тактивином не приводило к модуляции эффектов гистаминоблокаторов на моделях АОК, фагоцитоза микросфер латекса и спонтанной метаболической активности ПЯЛ, индуцированного оксидантного метаболизма обоих типов фагоцитов. Эффекты комбинаций были сравнимы с действием отдельных гистаминолитиков.

При изолированном применении димедрол, фенкарол и тактивин не влияли, а гисманал вызывал существенный рост поглотительной активности перитонеальных макрофагов. В комбинациях тактивина с антигистаминными средствами выявлен разнонаправленный характер изменений активности макрофагов. Сочеганное использование с гисманалом приводило к полному устранению стимулирующего эффекта гистаминолитика. Комбинация же с димедролом вызывала незначительное, но достоверное повышение фагоцитарной функции - фагоциты переходили на интенсивный путь функционирования (стимуляция фагоцитоза за счет улучшения работы отдельно взятой клетки, а не за счет увеличения их числа [ПИФкотраш. =1.98; ПИФ«„»г,1ои1ши-2.62; Р<0.05]). По сравнению с индивидуальным применением препаратов одновременное назначение фенкарола и ИС обеспечивало резкое падение как числа фагоцитирующих клеток, так и общего количества поглощенных полистероловых частиц. В отношении нейтрофилов супрессия

Таблица 3.

Влияние комбинаций Нггнстаминоблокаторов и тактнвина на показатели фагоцитарной активности перитонеальных макрофагов

и ПЯЛ

Группа Препарат Доза мг/кг Число мышей ФИ Мф Р| Р. Рз Число мыше й ФИ ПЯЛ Р. Р2 Рз

1 Изотонический раствор хлорида натрия(контроль) - 12 0.34 ± 0.03 - 16 0.19 ± 0.01 -

2 Тактивин 0.25 12 0.31 ± 0.03 > 0.25 12 0.19 ± 0.02 > 0.5

3 4 Димедрол Димедрол + тактивин 1.0 10 11 ~ 0.42 ± 0.08 0.46"± 0.05 > 0.25 > 0.05 > 0.5 < 0.05 10 16 0.20 ± 0.01 0.17 ± 0.02 > 0.25 > 0.1 > 0.05 > 0.25

5 6 Гисманал Гнсманал + тактивин 1.7 16 9 0.68 ± 0.08 0.44 ± 0.05 < 0.001 > 0.1 < 0.01 < 0.05 14 12 0.19 ± 0.01 0.20 ± 0.01 > 0.5 > 0.5 > 0.25 > 0.5

7 8 Фенкарол Фенкарол + тактивин 2.0 12 8 0.34 ± 0.05 0.24 ± 0.02 > 0.5 < 0.02 > 0.05 > 0.05 11 8 0.18 ± 0.02 0.14 ± 0.02 > 0.5 < 0.01 < 0.05 < 0.05

Примечание:

• Р| - вероятность различий с контролем;

• Р2 - вероятность различий с гмстаминолитмком:

• Рг - вероятность различий с тактивином.

фагоцитоза реализовывапась также преимущественно за счет существенного уменьшения доли фагоцитирующих клеток. Активность ПЯЛ в иных комбинациях не отличалась от показателей интактных животных (табл. 3).

Эффекты Н|-гистаминоблокаторов в отношении оксидантного метаболизма фагоцитов практически не изменялись при их сочетании с тактивином, за исключением димедрола. Тактивин устранял эффекты димедрола: супрессорный - в отношении спонтанного метаболизма макрофагов и стимулирующий - в отношении индуцированного метаболизма ПЯЛ.

Таким образом, в работе выявлен и теоретически обоснован разнонаправленный характер иммуномодуляции Нггистаминоблокаторов, показано, что механизм их иммунотропной активности не исчерпывается только антигистаминным действием. Установленные особенности интерактивного поведения иммуностимуляторов оксиметацила, тактивина и Н|-гисгаминоблокаторов, помимо теоретического интереса, важны для прогнозирования эффективности подобных сочетаний в клинике.

ВЫВОДЫ

1. Проведен сравнительный анализ иммунотропной активности Н|-гистаминолитихов димедрола, фенкарола и гисманала. Иммуномодулирующие эффекты препаратов характеризуются разнонаправленностью действия, отсутствием линейной дозовой зависимости и не исчерпываются влиянием на Нсгистаминорецепторы.

2. Существенно расширена фармакологическая характеристика гисманала: установлена его выраженная способность стимулировать макрофагальный фагоцитоз, супрессировать ГЗТ, выявлена антибактериальная активность.

3. Установлено модифицирующее влияние Н|-антигистаминных средств на иммуностимулирующие эффекты оксиметацила: в большинстве тестов Н|-гистаминолитики устраняют его активность.

4. Оксиметацил существенно не изменяет иммунотропной активности димедрола и фенкарола и нивелирует активацию гисманалом махрофагального фагоцитоза.

5. Не проявляя индивидуальной активности, препараты в комбинации вызывают: супрессию гуморального иммунного ответа и активацию метаболической активности нейтрофильных гранулоцитов - "димедрол + оксиметацил"; ингибирование спонтанной метаболической активности макрофагов - "фенкарол + оксиметацил".

6. Наиболее значимыми результатами комбинирования Hi-гистаминолитиков с тактивином являются: устранение супрессии димедролом ГЗТ, иммуномодулируюших эффектов гисманала, за исключением влияния на метаболическую активность фагоцитов; супрессия фагоцитоза и ГЗТ под влиянием фенкарола с тактивином.

список работ, опубликованных по теме диссертации:

!. Красилова И.Л. Влияние антигистаминных препаратов на окислительный метаболизм фагоцитов // Материалы 59-ой научной конференции студентов и молодых ученых БГМИ. Часть I.- Уфа, 1994.- С. 64-65.

2. Красилова И.Л. Влияние комбинаций Hi-гистаминолитиков с иммуностимуляторами на формирование повышенной чувствительности замедленного типа II Сб. тезисов научно-практической конференции: Современные аспекты поликлинической терап.-Уфа, 1994.-С. 22.

$. Красилова И.Л. Влияние' Hi-гистаминолитиков и их комбинаций с Т-активином на поглотительную активность фагоцитов II Материалы 60-ой научной конференции студентов и молодых ученых башкирского государственного медицинского института. Часть I.-Уфа, 1995.-С. 3.

I. Красилова И.Л., Алехин Е.К., Рябчинская Л.А. Влияние антигистаминных средств на иммунотропную активность охсиметацила II Сб. тезисов докладов XII Российской научной конференции: Факторы клеточного и гуморального иммунитета при различных физиологических и патологических сосгояниях.-Челябинск, 1995.- С. 64- 65.

">. Алехин Е.К., Рябчинская Л.А., Муфазалова H.A., Богданова А.III. Иммунотропная активность комбинаций Т-активина с антигисгаминными

средствами // Нейронммунология. Нейроинфекция. Нейроимидж.: Материалы 4-ой научной конференции 25-27 мая 1995 г. в Санкт-Петербурге. -Санкт-Петербурп Лики России, 1995,- С. 52- 53.

6. Алехин Е.К., Лазарева Д.Н., Богданова А.Ш., Рябчинская Л.А., Муфазалова H.A., Шигаев Н.И., Сакаева Д.Д., Красилова И.Л. Проблема взаимодействия иммуномодуляторов с другими лекарственными препаратами // Фундаментальные исследования как основа создания лекарственных средств: Сб. тезисов 1-го Съезда Российского научного общества фармакологов 9-13 октября 1995 г. г. Волгоград.-М., 1995.-С. 13.

,7. Красилова И.Л. Иммунотропная активность комбинаций антигистаминных средств с иммуностимуляторами //Фундаментальные исследования как основа создания лекарственных средств: Сб. тезисов 1-го Съезда Российского научного общества фармакологов 9-13 октября 1995 г. г. Волгоград,- М., 1995,-С. 207.

8. Алехин Е.К., Красилова И.Л., Мунасыпов Ф.Р. Взаимодействие Hi-антигистаминных средств с другими лекарственными препаратами // Здравоохранение Башкортостана.- 1996.- № 4-5.- С. 89-91.

9. Красилова И.Л., Рябчинская Л.А., Муфазалова H.A., Богданова А.Ш. Сравнительная иммунотропная активность антигистаминных средств // Здравоохранение Башкортостана.- 1996.- № 4-5.- С. 30 - 34.