Иммунотерапия с использованием дендритных клеток в лечении рецидивного инвазивного переходно-клеточного рака молочного пузыря

Шоуа, Анри Бесланович

Диссертации по медицине → Хирургия

Автореферат и диссертация по медицине (14.00.27) на тему:Иммунотерапия с использованием дендритных клеток в лечении рецидивного инвазивного переходно-клеточного рака молочного пузыря

ДИССЕРТАЦИЯ

Иммунотерапия с использованием дендритных клеток в лечении рецидивного инвазивного переходно-клеточного рака молочного пузыря - диссертация, тема по медицине

АВТОРЕФЕРАТ

Иммунотерапия с использованием дендритных клеток в лечении рецидивного инвазивного переходно-клеточного рака молочного пузыря - тема автореферата по медицине

Шоуа, Анри Бесланович Москва 2009 г.

Ученая степень: кандидата медицинских наук

ВАК РФ: 14.00.27

Автореферат диссертации по медицине на тему Иммунотерапия с использованием дендритных клеток в лечении рецидивного инвазивного переходно-клеточного рака молочного пузыря

На правах рукописи

ШОУ А Анри Бесланович

ИММУНОТЕРАПИЯ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ДЕНДРИТНЫХ КЛЕТОК В ЛЕЧЕНИИ РЕЦИДИВНОГО ИНВАЗИВНОГО ПЕРЕХОДНО-КЛЕТОЧНОГО РАКА МОЧЕВОГО ПУЗЫРЯ

14.00.27 - хирургия 14.00.40 - урология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

о о ; ■ ~

,' I -. : .

Москва - 2009

003467337

Работа выполнена в Федеральном государственном учреждении «3 Центральный военный клинический госпиталь им. А.А. Вишневского Министерства обороны Российской Федерации»

Научные руководители:

Заслуженный деятель науки РФ доктор медицинских наук, профессор

доктор медицинских наук, профессор Сергей Николаевич

Официальные оппоненты:

член корреспондент РАМН доктор медицинских наук, профессор

доктор медицинских наук, профессор

Сергиенко Николай Федорович Переходов

Войновский

Евгений Александрович Борисов

Владимир Викторович

Ведущая организация: ФГУ «2 Центральный военный клинический госпиталь № 2 им. П.В. Мандрыка МО РФ».

Защита диссертации состоится _ 2009 года в 14.00 на

заседании диссертационного совета Д 215.009.01 при Государственном институте усовершенствования врачей Министерства обороны Российской Федерации (107392, г. Москва, ул. Малая Черкизовская, д. 7)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Государственного института усовершенствования врачей МО РФ.

Автореферат разослан « 03» (Ш^М/А 2009 г.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук Зубрицкий В.Ф.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы

Рак мочевого пузыря (РМП) составляет 30-40% новообразований органов мочевого тракта и около 4% в структуре всей онкологической патологии. Среди всех онкоурологических заболеваний рак мочевого пузыря занимает второе место после рака предстательной железы [ Brauers А., Jakse G.,2000 ].

Заболеваемость РМП ежегодно возрастает, особенно в индустриально развитых странах, как в абсолютном числовом выражении, так и по отношению к частоте рака большинства других локализаций. Комплексный анализ её динамики за 1996-2000 гг. у мужчин и женщин в России показал увеличение общего прироста на 13,4 и 12,3% соответственно. Общий прирост заболевших с 1993 по 2003 г. - 25%. [ Б.П.Матвеев, К.М.Фигурин, О.Б.Карякин, 2001 ].

В США новообразования мочевого пузыря составляют 9% опухолей у мужчин и находятся на шестом месте среди причин смерти у мужчин и на тринадцатом у женщин, а по заболеваемости вышли на четвертое место. В странах Европейского союза РМП наблюдается у 5% онкологических больных, занимая шестое место в структуре заболеваемости после опухолей легкого, толстой кишки, молочной железы, предстательной железы и желудка. [ Лоран О. Б. 1998 ].

Несмотря на бурное развитие медицины и внедрение в практику новых способов терапии и диагностики, отмечается повсеместный рост заболеваемости раком мочевого пузыря, остается высоким процент рецидивирования и метастазирования процесса, вследствие чего поиск эффективных методов терапии остается актуальной проблемой современной онкологии.

(цистэктомия с различными методами деривации мочи) оперативные пособия, которые переносимы не всеми пациентами в силу сопутствующей соматической патологии, тяжести операционной травмы, объема кровопотери, возраста больного.

Помимо вышеизложенного потеря органа негативно сказывается на качестве жизни больного.

В связи с этим огромное внимание научных центров всего мира уделяется созданию различных форм противоопухолевых вакцин, которые позволили бы более эффективно лечить онкологические заболевания. После открытия и изучения функциональной роли дендритных клеток (ДК) на них стали возлагать надежды в отношении терапии злокачественных опухолей.

Дендритные клетки представляют собой антиген-презентирующие клетки (АПК), контролирующие иммунитет посредством взаимодействия с лимфоцитами. Ранее было показано, что функциональная активность ДК у онкологических больных значительно снижена, и одной из причин этого является неспособность дифференцировки ДК в зрелые формы. Общая схема создания противоопухолевых вакцин на основе дендритных клеток заключается в следующем. Культивирование ДК больного и «нагрузка» опухолевыми антигенами происходит вне организма (in vitro), что позволяет получить зрелые ДК, нагруженные антигенами, которые, с одной стороны, способны активировать иммунный ответ, а с другой стороны, устойчивы к супрессорному влиянию опухоли. В ряде клинических работ была продемонстрирована перспективность применения противоопухолевых вакцин на основе дендритных клеток. [Dhodapkar M.,Steinman R., et al..2001].

Была отработана и адаптирована методика культивирования дендритных клеток для клинического применения. [ Чкадуа Г.З. 2006 ]. В экспериментах ДК имели «зрелый» иммунофенотип, что выражалось в высокой экспрессии ко-стимулирующих молекул, молекул адгезии и главного комплекса гистосовместимости I и II классов. Также дендритные клетки обладали соответствующей функциональной активностью: незрелые ДК интенсивно

захватывали антиген, тогда как у зрелых ДК эндоцитозная активность была значительно снижена.

Литературных данных, посвященных иммунотерапии РМП дендритными клетками крайне мало, и практически все исследования проведены у больных с метастазами в различные органы после нескольких курсов химиотерапии. Недостаточно полно изучен иммуномоделирующий эффект вакцинотерапии, а также его отдаленные результаты.

В связи с этим представляется актуальным изучение данной проблемы.

Цель работы: улучшить результаты лечения рецидивного инвазивного рака мочевого пузыря с использованием вакцины на основе дендритных клеток в адъювантном режиме.

Задачи исследования:

1. Оценить безопасность, токсичность и переносимость вакцины на основе дендритных клеток при внутрикожном способе введения.

2. Сравнить динамику иммунологических показателей больных, получающих иммунотерапию, с контрольной группой, оценить иммуномодулирующий эффект вакцинотерапии.

3. Оценить противоопухолевую эффективность вакцинотерапии.

Научная новизна исследования

1. Доказана эффективность комплексного лечения инвазивного рецидивного рака мочевого пузыря с применением вакцины на основе дендритных клеток, нагруженных опухолевыми антигенами, в ближайшие 2 года после лечения.

2. Установлено, что при использовании аутологичной вакцины, представленной суспензией дендритных клеток, нагруженных опухолевыми антигенами отсутствуют токсичность и пирогенные реакции у больных раком мочевого пузыря.

3. При сравнительном анализе динамики иммунологических показателей у больных с инвазивным раком мочевого пузыря, получающих вакцинотерапию, и больных контрольной группы в процессе проведения вакцинотерапии, при контрольном исследовании спустя 3 мес было выявлено увеличение активированных лимфоцитов с фенотипом CD3+HLA-DR+ и эффекторных CD8+CDllb+ лимфоцитов, что свидетельствует о системной индукции иммунного ответа. У больных, получающих стандартную терапию, динамики показателей иммунной системы при следующем контрольном исследовании выявлено не было.

Практическая значимость

Установлено, что включение в программу лечения инвазивного рака мочевого пузыря иммунотерапии с использованием вакцины на основе аутологичных дендритных клеток, нагруженных опухолевыми антигенами, снижает частоту возникновения рецидивов опухолей (11,1%) по сравнению с только хирургическим лечением и внутрипузырной химиотерапией (21,8%) в первые 2 года после оперативного вмешательства.

При анализе полученных результатов установлено, что вакцина на основе аутоиогичных дендритных клеток, нагруженных опухолевыми антигенами in vitro, при внутрикожном введении обладает достаточно высокой эффективностью и отсутствием токсичности.

Иммунотерапия с использованием вакцин на основе дендритных клеток может быть применена как метод выбора для лечения больных раком мочевого пузыря, с мультицентрическим ростом опухолей и с единичными опухолями, в адъювантном режиме, у которых не может быть выполнена радикальная цистэктомия.

Реализация результатов исследования

Выводы, практические рекомендации, основные положения данного исследования внедрены и успешно используются в урологическом центре

ФГУ «3 Центральный военный клинический госпиталь им. A.A. Вишневского Министерства обороны РФ», а также внедрены в учебный процесс кафедры хирургии Государственного института усовершенствования врачей МО РФ.

Основные положения диссертации выносимые на защиту

Применение противоопухолевой вакцины на основе ДК у больных РМП способствует развитию клеточного иммунного ответа и не вызывает токсических или аутоиммунных осложнений.

В процессе проведения вакцинотерапии у больных инвазивным раком мочевого пузыря выявляется увеличение количества активированных лимфоцитов с фенотипом CD3+HLA-DR+ и эффекторных CD8+CDllb+ лимфоцитов, что свидетельствует о системной индукции иммунного ответа в отличие от пациентов контрольной группы.

Адъювантная иммунотерапия инвазивного РМП с применением вакцины на основе аутологичных ДК, нагруженных опухолевыми антигенами является эффективным методом лечения. Уровень противоопухолевого ответа за период наблюдения составил 88,9% против 78,2% у больных контрольной группы.

Апробация диссертации.

Основные материалы и положения диссертационной работы доложены и обсуждены на 5 - й научно-практической конференции урологов Дагестана (Махачкала, 2008) и научно-практической конференции посвященной 40 -летию ФГУ «3 ЦВКГ им. A.A. Вишневского Минобороны России» (Красногорск, 2008).

Апробация диссертации состоялась 18 декабря 2008 г. На межкафедральном совещании кафедры хирургии Государственного института усовершенствования врачей МО РФ на базе ФГУ «3 ЦВКГ им. A.A. Вишневского МО РФ». (Протокол № 11/08).

Публикации

По теме диссертации опубликовано 6 научных работ, из них 2 - в центральной печати.

Объем и структура диссертации

Диссертационная работа изложена на 117 страницах машинописного текста и состоит из введения, четырех глав (обзор литературы, описание материала и методов исследования, собственные результаты и их обсуждение), заключения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы из 129 источников (65 отечественных и 64 иностранных авторов). Работа иллюстрирована 30 рисунками и 12 таблицами.

СОДЕРЖАНИЕ ДИССЕРТАЦИИ

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В основу работы положен анализ результатов лечения 41 больного с рецидивным инвазивным переходно-клеточным раком мочевого пузыря, которые лечились в урологическом центре ФГУ «3 ЦВКГ им. A.A. Вишневского МО РФ» в период с июня 2006 г. по июнь 2008 г. Все больные подвергались трансуретральной резекции (ТУР) стенки мочевого пузыря с опухолью и внутрипузырной химиотерапии доксорубицином.

В исследовании по изучению эффективности терапии инвазивного РМП с включением в программу лечения вакцинотерапии на основе ДК участвовало 18 больных. Всем пациентам выполнялась ТУР стенки мочевого пузыря с опухолью и адъювантная внутрипузырная химиотерапия доксорубицином.

Диагностирован инвазивный рецидивный РМП II стадии (T2aN0M0) -у 7 (38,8%) чел. и II стадии (T2bN0M0) - у 11 (62,2%) чел. (рис.1).

Предшествующее лечение (количество рецидивов): первый рецидив - у 14 (77,8%) чел.; второй рецидив - у 3 (16,6%) чел.; третий рецидив - у 1 (5,6%) чел. Размеры опухолевых очагов варьировали от 1,5 до 3,5 см. У всех больных диагноз был подтвержден гистологически и цитологически: переходно-клеточный рак различной степени дифференцировки: 01 - у 1 (5,6%) чел.; - у 12 (66,7%) чел.; ОЗ - 5 (27,8%) чел..

Больные основной группы (п = 18)

ГЛ Больные

контрольной группы

(п = 23)

II II

стадия T2aN0M0

п = 7 (38,8%)

стадия Т2ЫЧ0М0 п = 11 (62,2%)

стадия T2aN0M0

п = 8. (34,7%)

стадия T2bN0M0 п = 15 (65,3%)

Рис. 1. Распределение больных по стадии заболевания Т N М

Иммунотерапия инвазивного РМП основывалась на использовании ДК, нагруженных опухолевыми антигенами in vitro. Дендритные клетки культивировали из моноцитов периферической крови больного, при этом источником антигенов служил опухолевый материал самого пациента. Общее время, необходимое для получения вакцины на основе ДК, с момента забора крови составляло 6 сут. Вакцина представляет собой суспензию живых ДК, нагруженных опухолевыми антигенами. Больным провели шесть инъекций нагруженных ДК. Интервалы между введениями составили 2-4 недели. Дендритные клетки вводили внутрикожно в несколько точек (4 - 6) по ходу лимфатических коллекторов. Больным, включенным в исследование, за одну вакцинацию инъецировали от 2x106 до 6x106 ДК.

В контрольную группу вошли 23 пациента с РМП.

Диагностирован инвазивный рецидивный РМП II стадии (Т2аШМ0) у 7 (30,4%) чел. и.Н стадии (Т2ЫЧ0М0) - у 16 (69,6%) чел. Предшествующее лечение (количество рецидивов): первый рецидив - у 17 (73,9%) чел.; второй рецидив - у 4 (17,4%) чел.; третий рецидив - у 2 (8,7%) чел.

Размеры опухолевых очагов: 1,5 - 4,0 см.

У всех больных диагноз был подтвержден гистологически и цитологически: переходно-клеточный рак различной степени дифференцировки. Степень дифференцировки опухоли: - у 2 (8,7%) чел.; й2 - у 14 (60,7%) чел.; йЗ - у 7 (30,4%) чел.

Больным контрольной группы выполнялась ТУР стенки мочевого пузыря с опухолью и адъювантная внутрипузырная химиотерапия доксорубицином.

Для оценки достоверности полученных результатов была проведена статистическая оценка результатов исследования с помощью метода вариационной статистики, с оценкой достоверности различий средних величин по критерию I - критерию Стьюдента на компьютере с использованием пакетов прикладных программ «БТАТШТЮА», версия 7.0 для «\VINDOWS-XP-Professional». Достоверными считали различия при р < 0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

В результате проведенного лечения у больных основной группы получены следующие результаты: у 16 (88,9%) - рецидива заболевания не выявлено, у 2 (11,1%) - отмечен рецидив рака, из них у 1 пациента -прогрессировать опухолевого процесса. Сроки наблюдения за больными после окончания иммунотерапии составили от 12 до 24 мес. (средний срок 17 мес.).

Рецидивы рака на фоне терапии дендритными клетками наступили у больных с низкодифференцированными опухолями (03). Вышеизложенное позволяет сделать вывод, что высокая степень дифференцировки опухоли (01-2) является благоприятным фактором прогноза эффективности иммунотерапии с использованием аутологичных дендритных клеток.

В результате проведенного лечения у больных контрольной группы получены следующие результаты: у 18 (78,2%) достигнута полная ремиссия в сроки наблюдения от 12 - 24 мес, у 5 (21,8%) - рецидивирование рака без признаков прогрессирование опухолевого процесса. Сроки наблюдения за больными после окончания лечения составили 12-24 мес (средний срок 15 мес).

Анализ активационного антигена НЬА-1Ж на поверхности лимфоцитов периферической крови показал (рис. 2), что в процессе вакцинотерапии

£ 16

5 14

з-

I1 12

5 С

ь 10

£С

а <

-I

со О О

а 2

1 *

— вакцинотерапия - без вакцинотерапии

исходное через 1,5 месяца через 5 месяцев значение

(* - р < 0,05)

Рис. 2. Изменение содержания активированных СОЗ НЬА-ВЯ Т-лимфоцитов у больных раком мочевого пузыря в исследовательской (п=18) и контрольной (п=23) группах в процессе лечения.

увеличивалось содержание клеток, экспрессирующих HLA-DR. Если до начала лечения содержание клеток, экспрессирующих HLA-DR, было на уровне 8,1%, то спустя 5 мес после начала лечения данный показатель увеличивался до 13,2%.

При этом в контрольной группе больных, которые получали стандартное лечение, содержание лимфоцитов, экспрессирующих HLA-DR как в начале (8,0%), так и через 5 мес (7,9%), было в пределах нормальных значений. Увеличение доли CD3 - лимфоцитов, несущих на своей поверхности HLA-DR, в группе больных, получавших вакцинотерапию было достоверно выше по сравнению с контрольной группой (р < 0,05).

Следует отметить, что увеличение содержания активационного маркера HLA-DR в группе больных, получающих вакцинотерапию, происходило за счет увеличения его экспрессии на CD3 Т-лимфоцитах, что можно трактовать как одно из иммунологических проявлений действия вакцины на организм больного.

При изучении экспрессии эффекторной молекулы CD lib на поверхности лимфоцитов (рис. 2) в группе, которая получала вакцинотерапию, было выявлено увеличение доли CD8 Т-лимфоцитов, несущих CDUb антиген.

Если в начале лечения содержание CD1 lb CD8 Т-лимфоцитов было на уровне 10,1%, то в процессе вакцинотерапии через 5 мес данный показатель увеличился вдвое и составил 21,2% (рис. 3). В контрольной группе больных содержание эффекторных лимфоцитов практически не менялось, оставаясь в пределах нормальных значений. Разница между содержанием эффекторных CD8 Т-лимфоцитов, экспрессирующих CDllb, в контрольной группе и группе, получавшей вакцинотерапию, была достоверно значимой (р < 0,005).

Сводные данные по иммунологическим показателям могут быть представлены в виде таблицы (таб. 1).

—*— вакцинотерапия - -в- - без вакцинотерапии

Г-Р <0,05)

Рис. 3. Изменение содержания цитотоксических CD8 CDllb Т-лимфоцитов у больных раком мочевого пузыря в исследовательской (п=18) и контрольной (п=23) группах в процессе лечения.

Таким образом, применение аутологичной вакцины на основе ДК, нагруженных опухолевыми антигенами, показало, что у больных на фоне вакцинотерапии происходит постепенная активация иммунной системы и развивается преимущественно клеточный ответ, при этом не отмечается выраженной токсичности при применении данного биопрепарата.

Одной из задач данной работы являлась адаптация вакцины на основе ДК для применения у больных рецидивным инвазивньш РМП и оценка его токсических его проявлений при проведении иммунотерапии.

Все пациенты вакцинацию переносили хорошо, никаких токсических или аутоиммунных осложнений отмечено не было. У 61% больных после вакцинации повышалась температура до 37,5°С. Практически у всех

пациентов, за исключением 1 больного, спустя 2-3 вакцинации в местах введения ДК развивалась реакция гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ). Как правило, реакция развивалась на следующий день после введения

Таблица 1 - Сравнительная характеристика иммунологических показателей у больных раком мочевого пузыря в процессе лечения.

Больные получившие Больные без вакцинотерапии

Показатель Доноры вакцинотерапию (п=18) (п=23)

(n=15) Исходное Через 1,5 Через 5 Исходное Через 1,5 Через 5

значение месяца месяцев значение месяца месяцев

Иммуноре-

гулятор-ный индекс 1,5±0,2 1,3±0,3 1,3±0,2 1,4±0,2 1,4±0,2 1,3±0,2 1,4±0,3

(CD4/CD8)

CD3 73,1±7,4 69,1 ±3,7 71,1±3,6 72,1±4,4 68,3±4,0 70,2±3,1 71,5±4,6

CD4 44,1±5,4 41,9±3,9 42,3±3,8 45,7±5,6 40,5±2,8 45,1±4,3 42,5±3,7

CD8 25,1±4,1 29,5±3,7 27,4±3,6 30,2±2,9 28,7±3,2 26,4±3,3 25,8±3,5

CD20 5,6±2,3 6,4±1,3 7,1±1,2 5,9±2,7 6,8±1,5 5,2±1,7 5,5±1,9

CD16 15,7±5,5 18,6±2,5 17,6±2,4 16,3±3,6 14,9±3,6 15,2±2,7 15,8±4,1

HLA-DR 12,6±4,7 13,2±5,4 17,3±4,9 25,1±4,3 12,1±3,8 13,6±5,1 12,7±3,3

CD3+ HLA-DR* 7,4±3,3 7,7±4,6 9,5±3,9 13,2±3,5 8,0±3,5 7,3±2,8 7,6±3,7

CDllb 31,1±6,1 32,6±6,3 34,5±6,5 39,8±5,7 29,7±5,5 32,6±4,8 31,3±6,1

CD8+CD1 lb+ 12,6±4,9 10,1±6,2 14,9±4,2 21,2±5,9 11,3±3,9 12,5±5,1 12,9±4,8

вакцины и сохранялась в течение нескольких суток, а размер участка гиперемии у больных варьировал от 1 до 3 см в диаметре. 50% пациентов при опросах помимо покраснения отмечали зуд, припухание в месте введения ДК. У небольшого числа больных были жалобы на слабость и ломоту в костях и суставах.

Частота развития побочных явлений в процессе вакцинации представлена в табл. 2.

Таблица 2. Частота побочных явлений у больных РМП в процессе

вакцинотерапии ДК.

ПОБОЧНЫЕ ЭФФЕКТЫ ЧАСТОТА СТЕПЕНЬ ВЫРАЖЕННОСТИ

ОБЩИЕ Повышение температуры тела до субфебрильных цифр 11 (61,1%) Незначительно

Слабость 4 (22,2%)

Ломота в костях и суставах 2(11,1%)

ЛОКАЛЬНЫЕ Гиперемия 17(94,4%) Незначительно

Зуд 9 (50%)

Болезненность 2 (11,1%)

Реакция ГЗТ характеризует клеточное звено иммунитета и реализуется за счет Т-лимфоцитов, которые обладают определенной специфичностью к вводимому антигену. Так как Т-лимфоцит распознает антиген в контексте МНС (главный комплекс гистосовместимости), то вводимый белок должен быть захвачен, процессирован и представлен АПК. В связи с этим, регистрируя реакцию ГЗТ после введения вакцины, нельзя исключать, что ГЗТ может развиваться и на компоненты сыворотки, которые присутствовали в питательной среде во время культивирования клеток. Для подтверждения специфичности реакции ГЗТ наряду с нагруженными ДК в соседнюю область, вводили такое же количество ненагруженных ДК или же фосфатно-солевой буфер, содержащий 1% человеческого сывороточного альбумина. В местах инъекции -PBS (фосфатно-солевой буфер) или ненагруженных ДК реакция ГЗТ не развивалась, что говорит о специфичности иммунного ответа на вводимые ДК, нагруженные опухолевым лизатом (OJI). Следует отметить, что в процессе вакцинотерапии происходило изменение сроков развития ГЗТ в местах введения ДК. Если вначале больные отмечали появление

покраснения на вторые сутки после инъекции ДК, то спустя несколько курсов вакцинаций больные регистрировали наступление ГЗТ уже к вечеру первых суток, что можно трактовать как сенсибилизацию организма к ДК нагруженным ОЛ.

Таким образом, вакцина на основе аутологмчных ДК при внутрикожном применении не обладает системной и местной токсичностью. Умеренное повышение температуры тела, зуд, гиперемия и припухлость в месте введения вакцины не являются противопоказанием для введения препарата, так как это является проявлением реакции ГЗТ.

Важным критерием, характеризующим вакцину, является жизнеспособность ДК. Этот этап работы предусматривал определение продолжительности жизни ДК и сохранение ими своих свойств, в частности экспрессии основных антигенов. Вопрос стабильности вакцины очень важен, так как необходимо выяснить, как долго клетки могут храниться после окончания процедуры их культивирования.

Перед непосредственным введением вакцины больному из полученного препарата отбирали небольшой объем суспензии ДК для определения жизнеспособности клеток. Плотность клеток варьировала от 5x106 до 8x106 на 1 мл натрий-фосфатного буфера. Клетки делили на две порции и оставляли на 24 ч либо при комнатной температуре, либо при +4°С. Исходный иммунофенотип соответствовал зрелым ДК, а содержание погибших клеток не превышало 11%. После хранения вакцины в течение суток при +4°С процент погибших клеток не превышал 17, в то время как хранение при комнатной температуре приводило к существенному увеличению погибших клеток и достигало 50% (рис. 4 ,5, 6, 7).

Экспрессия основных антигенов после хранения при +4°С была на том же уровне, что и в исходном образце, тогда как хранение клеток при комнатной температуре сопровождалось снижением экспрессии ряда поверхностных антигенов (рис. 7).

ю2

Аппеюп V Р1ТС

Рис. 4. Исследование жизнеспособности зрелых дендритных клеток больного РМП методом проточной цитофлуориметрии: по оси абсцисс -интенсивность окрашивания клеток Аппехт V, конъюгированного с флуоресцеинизотиоцианатом (ФИТЦ), по оси ординат - количество событий; исходный уровень мертвых ДК

Ю'

Аппехт V ПТС

Рис. 5. Исследование жизнеспособности зрелых дендритных клеток больного РМП методом проточной цитофлуориметрии: по оси абсцисс -интенсивность окрашивания клеток Аппехт V, конъюгированного с ФИТЦ, по оси ординат - количество событий; хранение ДК в течение 24 ч при комнатной температуре

<я 01

М1

Лк^Лг

10* 101 102 101 Аппех1г| V Р1ТС

10"

Рис. 6. Исследование жизнеспособности зрелых дендритных клеток больного РМП методом проточной цитофлуориметрии: по оси абсцисс -интенсивность окрашивания клеток Аппехш V, конъюгированного с ФИТЦ, по оси ординат - количество событий; хранение ДК в течение 24 ч при 4°С

3 ю

1_ О С

иоодное состояние 24часапри4С

24 часа при комнатной температуре

(* р <0,05.)

Рис. 7. Сравнение жизнеспособности дендритных клеток больных РМП при различных условиях хранения (п=4)

□ свежие ДК Ш И сутки при 4 С Щ ■ сутки при комнатной Т

СЭ40

С086

СЭ54

исследуемые антигены

(* р < 0,05.)

Рис. 8. Сравнение средней интенсивности флуоресценции поверхностных антигенов на зрелых дендритных клетках больных РМП при различных условиях хранения (п=4)

1. Применение противоопухолевой вакцины на основе дендритных клеток у больных инвазивным рецидивным раком мочевого пузыря в режиме внутрикожного введения, которым выполнено удаление первичного очага, не вызывает токсических или аутоиммунных осложнений, способствует развитию клеточного иммунного ответа (реакция гиперчувствительности замедленного типа; повышение уровня цитотоксических лимфоцитов).

2. В процессе проведения вакцинотерапии, при контрольном исследовании спустя 5 месяцев выявляется увеличение активированных лимфоцитов с фенотипом С03+НЬА-0(1+ (исходно 8,1%, спустя 5 мес после начала

ВЫВОДЫ

лечения - 13,2%) и эффекторных СП8+С011Ь+ лимфоцитов (исходно 10,1%, в процессе вакцинотерапии через 5 мес данный показатель увеличился вдвое и составил 21,2%), что свидетельствует о системной индукции иммунного ответа.

3. Иммунотерапия инвазивного рака мочевого пузыря с применением вакцины на основе аутологичных дендритных клеток, нагруженных опухолевыми антигенами, может быть применена в адъювантном режиме больным, у которых выполнение радикального хирургического лечения невозможно. Противоопухолевый эффект вакцины на основе аутологичных дендритных клеток за период наблюдения составил 88,9%, у больных контрольной группы - 78,2%.

4. Степень дифференцировки опухоли является прогностически значимым фактором эффективности вакцинотерапии аутологичными дендритными клетками. Высокая степень дифференцировки опухоли (01-2) является благоприятным фактором прогноза эффективности иммунотерапии с использованием аутологичных дендритных клеток.

5. Аутологичный опухолевый материал и дендритные клетки, выращенные из собственных моноцитов больного, обеспечивают индивидуальную модель лечения.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Иммунотерапия методом введения аутологичной вакцины, представленной суспензией дендритных клеток, нагруженных опухолевыми антигенами, позволила установить отсутствие токсичности и пирогенности у больных инвазивным раком мочевого пузыря.

возраст, выраженность сопутствующей патологии, а также при отказе пациента от органоуносящего лечения), вакцинотерапию на основе аутологичных дендритных клеток, нагруженных опухолевыми антигенами.

3. При анализе иммунного статуса больных инвазивным раком мочевого пузыря в процессе лечения заслуживают внимания те исходные иммунные нарушения, которые спустя 5 мес у больных увеличиваются до нормальных показателей. Эти результаты демонстрируют индукцию противоопухолевого иммунитета.

Таким образом, предварительные данные об иммунотерапии с использованием дендритных клеток дают основание рекомендовать дальнейшее изучение этого метода у больных инвазивным раком мочевого пузыря, применяя его в сочетании с химиотерапией в адъювантном режиме.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Криоконсервация дендритных клеток человека для последующего применения в клинической практике // Тр. 8 - конгр.: Современные проблемы аллергологии, иммунологии и иммунофармакологии Рос. аллергол. журн. - 2007. - № 3. - С. 248 (соавт.: Чкадуа Г.З., Борунова A.A.).

2. Иммунотерапия инвазивного рака мочевого пузыря с использованием вакцины на основе аутологичных дендритных клеток // Матер. 5-го науч.-практ. конф. урол. Дагестана. - Махачкала, 2008. - С. 164 - 165 (соавт.: Сергиенко Н.Ф., Ситников Н.В., Чкадуа Г.З.).

3. Исследование эффективности иммунотерапии инвазивного рака мочевого пузыря аутологичными дендритными клетками, нагруженными опухолевым лизатом // Мат. 5-й науч.-практ. конф. урол. Дагестана. - Махачкала, 2008. -С. 165 - 166 (соавт.: Сергиенко Н.Ф., Ситников Н.В., Чкадуа Г.З.).

4. Исследование эффективности терапии рака мочевого пузыря методом трансплантации аутологичных дендритных клеток, нагруженных опухолевыми антигенами in vitro // Сб. науч. тр. посвящ. 40 - летию ФГУ «3 ЦВКГ им. A.A. Вишневского Минобороны России». - Красногорск, 2008. -С. 188 - 189 (соавт.: Сергиенко Н.Ф., Гнилорыбов В.Г., Ситников Н.В.).

5. Опыт применения вакцины на основе аутологичных дендритных клеток у больных раком мочевого пузыря // Сб. науч. тр. посвящ. 40 - летию ФГУ «3 ЦВКГ им. A.A. Вишневского Минобороны России». - Красногорск, 2008. -С. 393 - 394 (соавт.: Сергиенко Н.Ф., Ситников Н.В., Кочетов А.Г., Чкадуа Г.З.)

6. Предварительные результаты использования вакцин на основе аутологичных дендритных клеток, нагруженных опухолевыми антигенами in vitro, в лечении рака мочевого пузыря // Урология. - 2008. - № 5. - С. 54 - 57 (соавт.: Сергиенко Н.Ф., Ситников Н.В., Чкадуа Г.З.).

Иммунотерапия с использованием дендритных клеток в лечении рецидивного инвазивного переходно-клеточного рака мочевого пузыря.

Шоуа Анри Беслановнч (Россия)

Лечение инвазивного рака мочевого пузыря (РМП) остается сложной и актуальной проблемой онкологии. Дендритные клетки являются наиболее мощными антиген-презентирующими клетками, контролирующими иммунный ответ за счет взаимодействия с лимфоцитами. Противоопухолевые вакцины на основе дендритных клеток получали путем культивирования моноцитов периферической крови пациентов и нагрузки опухолевыми антигенами дендритных клеток in vitro. Зрелые нагруженные дендритные клетки активировали противоопухолевый иммунный ответ пациентов. Предварительные результаты исследования покали эффективность противоопухолевой вакцины на основе дендритных клеток в комбинированной терапии инвазивного РМП.

Immunotherapy of invasive relapse transitional cell bladder cancer with dendritic cells.

Showa Anri Beslanovich (Russia)

Therapy of invasive bladder cancer is still actual and complicated question in oncology. Dendritic cells (DC) are most potent antigen-presenting cells controlling immune response by means of interaction with lymphocytes. Antitumor vaccines based on DC are produced by means of the patients DC culturing and loading with tumor antigens in vitro. This provides mature antigen-loaded DC able to activate immune response. Pilot results of the trial of the efficacy of the above antitumor vaccine in the treatment of bladder cancer demonstrate perspectives of the vaccines as an combined treatment of bladder cancer.

Подписано в печать 02.03. 09 Формат 60x84/16. Бумага офсетная.

_Тираж 100 экз. Заказ № 214__

Отпечатано в службе множительной техники ГУ РОНЦ им. H.H. Блохина РАМН 115478, Москва, Каширское ш., 24

Оглавление диссертации Шоуа, Анри Бесланович :: 2009 :: Москва

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. СОВРЕМЕННЫЕ МЕТОДЫ ЛЕЧЕНИЯ РАКА МОЧЕВОГО

ПУЗЫРЯ (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ).

1.1 Лечение инвазивного рака мочевого пузыря.

1.2 Лучевая терапия.

1.3 Классификация опухолевых антигенов.

1.4 Характеристика дендритных клеток.

1.5 Противоопухолевые вакцины на основе дендритных клеток.

1.6 Клиническое применение дендритных клеток в онкологии.

Глава 2. ХАРАКТЕРИСТИКА КЛИНИЧЕСКИХ НАБЛЮДЕНИЙ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

2.1. Клиническая характеристика обследованных больных.

2.2 Методы исследования.

2.2.1 Общеклинические исследования.

2.2.2 Анализ иммунного статуса.

2.2.3 Иммунологические исследования.

2.3 Оборудование.

2.4 Методы статистической обработки.

Глава 3. ПОЛУЧЕНИЕ ВАКЦИНЫ НА ОСНОВЕ АУТОЛОГИЧНЫХ ДЕНДРИТНЫХ КЛЕТОК, НАГРУЖЕННЫХ ОПУХОЛЕВЫМИ АНТИГЕНАМИ.

3.1 Культивирование дендритных клеток.

3.2 Криоконсервация мононуклеаров периферической крови.

3.3 Получение опухолевого лизата.

3.4 Приготовление противоопухолевой вакцины на основе дендритных клеток и схема введения вакцины.

3.5 Схема вакцинации.55,

3.6 Исследование жизнеспособности дендритных клеток.

Глава 4 ИММУНОТЕРАПИЯ ИНВАЗИВНОГО РЕЦИДИВНОГО

ПЕРЕХОДНО-КЛЕТОЧНОГО РАКА МОЧЕВОГО ПУЗЫРЯ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ В КОМБИНИРОВАННОМ ЛЕЧЕНИИ ДЕНДРИТНЫХ КЛЕТОК, НАГРУЖЕННЫХ ОПУХОЛЕВЫМИ АНТИГЕНАМИ.

4.1 Характеристика и результаты комбинированного лечения больных с использованием противоопухолевой вакцины на основе дендритных клеток.

4.2 Характеристика и результаты лечения больных контрольной группы получавших стандартное лечение в объеме ТУР стенки мочевого пузыря и внутрипузырной химиотерапии доксорубицином.

4.3 Клиническая характеристика вакцины на основе аутологичных дендритных клеток нагруженных опухолевыми антигенами при внутрикожном применении.

4.4Иммунный статус больных инвазивным рецидивным раком мочевого пузыря.

4.5 Клинические примеры.

Введение диссертации по теме "Хирургия", Шоуа, Анри Бесланович, автореферат

Актуальность темы

В США новообразования мочевого пузыря составляют 9% опухолей у мужчин и находятся на шестом месте среди причин смерти у мужчин и на тринадцатом у женщин, а по заболеваемости вышли на четвертое место [7]. В странах Европейского союза РМП наблюдается у 5% онкологических больных, занимая шестое место в структуре заболеваемости после опухолей легкого, толстой кишки, молочной железы, предстательной железы и желудка [8].

Несмотря на бурное развитие медицины и внедрение в практику новых способов терапии и диагностики, отмечается повсеместный рост заболеваемости раком мочевого пузыря, остается высоким процент рецидивирования и метастазирования процесса, вследствие чего, поиск эффективных методов терапии остается актуальной проблемой современной онкологии [34, 65].

Рак мочевого пузыря можно отнести к одним из наиболее агрессивных злокачественных новообразований, плохо поддающихся стандартным формам терапии, что зачастую вынуждает применять органоуносящие (цистэктомия с различными методами деривации мочи) оперативные пособия, которые переносимы не всеми пациентами в силу сопутствующей соматической патологии, тяжести операционной травмы, объема кровопотери.

Помимо вышеизложенного потеря органа негативно сказывается на качестве жизни больного.

В связи с этим огромное внимание • научных центров всего мира уделяется созданию различных форм противоопухолевых вакцин, которые позволили бы более эффективно лечить онкологические заболевания. После открытия и изучения функциональной роли дендритных клеток (ДК) на них стали возлагать надежды в отношении терапии злокачественных опухолей.

Дендритные клетки представляют собой антиген-презентирующие клетки (АПК), контролирующие иммунитет посредством взаимодействия с лимфоцитами. Ранее было показано [81], что функциональная активность ДК у онкологических больных значительно снижена, и одной из причин этого является неспособность дифференцировки ДК в зрелые формы. Общая схема создания противоопухолевых вакцин на основе дендритиых клеток заключается в следующем. Культивирование ДК больного и «нагрузка» опухолевыми антигенами происходит вне организма (in vitro), что позволяет получить зрелые ДК, нагруженные антигенами, которые, с одной стороны, способны активировать иммунный ответ, а с другой стороны, устойчивы к супрессорному влиянию опухоли [110]. В ряде клинических работ была продемонстрирована перспективность применения противоопухолевых вакцин на основе дендритных клеток.

Была отработана и адаптирована методика культивирования дендритных клеток для клинического применения [61]. В экспериментах ДК имели «зрелый» иммунофенотип, что выражалось в высокой экспрессии ко-стимулирующих молекул, молекул адгезии и главного комплекса гистосовместимости I и II классов. Также дендритные клетки обладали соответствующей функциональной активностью: незрелые ДК интенсивно захватывали антиген, тогда как у зрелых ДК эндоцитозная активность была значительно снижена.

Литературных данных, посвященных иммунотерапии РМП дендритными клетками, крайне мало, и практически все исследования проведены у больных с метастазами в различные органы после нескольких курсов химиотерапии. Недостаточно полно изучен иммуномоделирующий эффект вакцинотерапии, а также его отдаленные результаты.

В связи с этим представляется актуальным изучение данной проблемы.

Цель исследования: улучшить результаты лечения рецидивного инвазивного рака мочевого пузыря с использованием вакцины на основе дендритных клеток в адыовантном режиме.

Задачи исследования:

3. Оценить противоопухолевую эффективность вакцинотерапии.

Научная новизна

1. Установлено, что при использовании аутологичной вакцины, представленной суспензией дендритных клеток, нагруженных опухолевыми антигенами отсутствуют токсичность и пирогенные реакции у больных раком мочевого пузыря.

2. При сравнительном анализе динамики иммунологических показателей у больных инвазивным раком мочевого пузыря, получающих вакцинотерапию, и у больных контрольной группы в процессе проведения вакцинотерапии, при контрольном исследовании спустя 3 мес было выявлено увеличение активированных лимфоцитов с фенотипом СБЗ+НЬА-ОК+ и эффекторных СВ8+СВ11Ь+ лимфоцитов, что свидетельствует о системной индукции иммунного ответа. У больных, получающих стандартную терапию, динамики показателей иммунной системы при следующем контрольном исследовании выявлено не было.

3. Доказана эффективность комплексного лечения инвазивного рецидивного рака мочевого пузыря с применением вакцины на основе дендритных клеток, нагруженных опухолевыми антигенами в ближайшие два года после лечения.

Практическая значимость

При анализе полученных результатов установлено, что вакцина на основе аутологичных ДК, нагруженных опухолевыми антигенами in vitro, при внутрикожном введении обладает достаточно высокой эффективностью и отсутствием токсичности.

Иммунотерапия с использованием вакцин на основе дендритных клеток может быть применена как метод выбора для лечения больных раком мочевого пузыря с мультицентрическим ростом опухолей и с единичными опухолями, в адъювантном режиме.

Реализация результатов исследования

Выводы, практические рекомендации, основные положения данного исследования внедрены и успешно используются в урологическом центре ФГУ «3 Центральный военный клинический госпиталь им. A.A. Вишневского Министерства обороны РФ», а также внедрены в учебный

Основные положения диссертации, выносимые на защиту

1. Применение противоопухолевой вакцины на основе ДК у больных

РМП способствует развитию клеточного иммунного ответа и не вызывает токсических или аутоиммунных осложнений.

2. В процессе проведения вакцинотерапии у больных инвазивным раком мочевого пузыря выявляется увеличение активированных лимфоцитов с фенотипом CD3+HLA-DR+ и эффекторных CD8+CDllb+ лимфоцитов, что свидетельствует о системной индукции иммунного ответа в отличие от пациентов контрольной группы.

3. Адъювантная иммунотерапия инвазивного РМП с применением вакцины на основе аутологичных ДК, нагруженных опухолевыми антигенами является эффективным методом лечения. Уровень противоопухолевого ответа за период наблюдения составил 88,9% против 78,2% у больных контрольной группы.

Апробация диссертации

Объем и структура диссертации

Заключение диссертационного исследования на тему "Иммунотерапия с использованием дендритных клеток в лечении рецидивного инвазивного переходно-клеточного рака молочного пузыря"

выводы

1. Применение противоопухолевой вакцины на основе дендритных клеток у больных инвазивным рецидивным раком мочевого пузыря в режиме внутрикожного введения, которым выполнено удаление первичного очага, не вызывает токсических или аутоиммунных осложнений, способствует развитию клеточного иммунного ответа (реакция ГЗТ; повышение уровня цитотоксических лимфоцитов).

2. В процессе проведения вакцинотерапии, при контрольном исследовании спустя 5 мес выявляется увеличение активированных лимфоцитов с фенотипом СВЗ+НЬА-БК+ (исходно 8,1%, спустя 5 мес после начала лечения - 13,2%) и эффекторных СВ8+СБ11Ь+ лимфоцитов (исходно 10,1%, в процессе вакцинотерапии через 5 мес данный показатель увеличился вдвое и составил 21,2%), что свидетельствует о системной индукции иммунного ответа.

3. Иммунотерапия инвазивного рака мочевого пузыря с применением вакцины на основе аутологичных дендритных клеток, нагруженных опухолевыми антигенами, может быть применена в адъговантном режиме больным, у которых выполнение радикального хирургического лечения невозможно. Противоопухолевый эффект вакцины на основе аутологичных дендритных клеток за период наблюдения составил 88,9%, у больных контрольной группы — 78,2%.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

2. Мы рекомендуем включать в программу лечения больных рецидивным инвазивным переходно-клеточным раком мочевого пузыря, которым невозможно выполнить радикальное оперативное лечение (пожилой возраст, выраженность сопутствующей патологии, а также при отказе пациента от органоуносящего лечения), вакцинотерапию на основе аутологичных дендритных клеток, нагруженных опухолевыми антигенами.

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2009 года, Шоуа, Анри Бесланович

1. Абоян И.А., Левин Э.Г., Павлов C.B. и др. Опыт применения экспресс-теста для качественного выявления антигена опухолей мочевого пузыря в моче // Рак мочевого пузыря: Матер. Конф. НИИ урологии МЗ РФ, РГМУ Ростов-на-Дону, 1998. - С. 3.

2. Алексеев Б.Я., Русаков И.Г., Франк Г.А. и др. Первично-множественный рак мочевого пузыря и предстательной железы у больных, перенесших радикальную цистэктомию // Онкоурология. 2005. - №2. — С. 19-22.

3. Аксель Е.М., Матвеев Б.П. Состояние онкоурологической помощи больным в России // Урол. и нефрол. 1999. - №2. - С. 3-10.

4. Аль-Шукри С.Х., Комяков Б.К., Горелов А.И., Прохожсв А.Ю.

5. Радикальная цистэктомия при раке мочевого пузыря // Актуальные вопросыIлечения онкоурологических заболеваний: Матер. 2-й Всерос. науч. конф. с участ. стран СНГ, 21-22 нояб. Обнинск, 1997. - С. 8-9.

6. Аль-Шукри С.Х., Комяков Б.К., Горелов С.И. и др. Надпузырная деривация мочи при цистэктомии // Рак мочевого пузыря: Матер, конф. НИИ урологии МЗ РФ, РГМУ. Ростов-на-Дону, 1998. - С. 4-5.

7. Аляев Ю.Г., Асламазов Э.Г., Борисов В.В. Диагностическое и практическое значение эндовезикальной биопсии при опухоли мочевого пузыря // Рак мочевого пузыря: Матер.конф. НИИ урологии МЗ РФ, РГМУ. -Ростов-на-Дону, 1998. С. 6-7.

8. Асламазов Э.Г., Борисов В.В. Особенности диагностики и лечения рецидивов опухоли в мочевом пузыре // Рак мочевого пузыря: Матер, конф. НИИ урологии МЗ РФ, РГМУ. Ростов-на-Дону, 1998. - С. 8-9.

9. Баженов И.В., Борзунов И.В. Особенности хирургического лечения поверхностного рака мочевого пузыря // Матер. II конгр. Рос. общ. онкоурол., 4-5 окт. 2007 г. М. 2007. - С. 69.

10. Борисова А.Г., Илюхин Ю.А., Идашкин Ю.Б., Галямин В.А.

11. Отдаленные результаты лечения рака мочевого пузыря // Рак мочевого пузыря: Матер, конф. НИИ урологии МЗ РФ, РГМУ. Ростов-на-Дону, 1998. -С. 11-12.

12. Братчиков О.И., Шумакова Е.А., Бабенко В.В. Отведение мочи после цистэктомии // Рак мочевого пузыря: Матер, конф. НИИ урологии МЗ РФ, РГМУ. Ростов-на-Дону, 1998. - С. 12-13.

13. Бухаркнн Б.В., Давыдов М.И., Карякин О.Б., Матвеев Б.П. и др.

14. Клиническая онкоурология. М.: Медицина, 2003. — С. 69.

15. Василевич В.Ю., Суконко О.Г., Мнриленко Л.В., Ролевич А.И.

16. Анализ фактора прогноза у больных раком мочевого пузыря II стадии // Матер. II конгр. Рос. общ. онкоурол., 4-5 окт. 2007 г. М., 2007. - С. 70.

17. Вахабов О.У. Прогностические факторы рецидивирования рака мочевого пузыря после трансуретральной резекции III Матер. I конгр. Рос. общ. онкоурол. 4-5 окт. 2006 г. -М., 2006.-С. 15.

18. Галеев Р.Х., Гайнетдинов И.М. Функция артифициального кишечного мочевого пузыря // Урол. и нефрол. 1993. - № 2. - С. 35-37.

19. Галеев Р.Х. Илеоцистопластика при раке мочевого пузыря // Актуальные вопросы лечения онкоурологических заболеваний: Матер. 2-й Всерос. науч. конф. с участ. стран СНГ, 21-22 нояб. Обнинск, 1997. - С. 2021.

20. Горелов С.И., Старцев В.Ю., Мовчан К.И., Роман Л.Д., Пулин ИЛ.

21. Ближайшие результаты радикального хирургического лечения больных инвазивным раком мочевого пузыря // Матер. I конгр. Рос. общ. онкоурол., 45 окт. 2006 г. М., 2006. - С. 77-78.

22. Гущин Б. JI. Клинико-морфологические сопоставления при раке мочевого пузыря: Дис. . канд. мед. наук. М., 1995. - С. 124.

23. Давидов М.И., Палагип П.М., Лядов A.A. и др. Лечение рака мочевого пузыря // Актуальные вопросы лечения онкоурологических заболеваний: Матер. 2-й Всерос. науч. конф. с участ. стран СНГ, 21-22 нояб. Обнинск, 1997. - С. 22-23.

24. Державец JI.A., Прохорова В.И., Машевский A.A. и др. Диагностика инвазивного рака мочевого пузыря по лабораторным показателям с использованием статистических решающих правил // Оикоурология. -2006. -№1 С. 14-17.

25. Камалов A.A., Токарев Ф.В., Гущин Б.Л., Никушнна A.A.

26. Осложнения BCG терапии // Матер. 4-й Всерос. науч. конф. с участ. стран СНГ, 11-12 окт. -М., 2001.-С. 62-63.

27. Колесников Г.П. Выбор объема операции при комбинированном лечении инвазивного рака мочевого пузыря // Рак мочевого пузыря: Матер, конф. 21-22 мая 1998 г. Ростов-на-Дону, 1998. - С. 41-42.

28. Колесников Г.П., Широкорад В.И., Колесников М.Г. Хирургическое и комбинированное лечение инвазивного рака мочевого пузыря // Матер. I конгр. Рос. общ. онкоурол. 4-5 окт. 2006 г. М., 2006. - С. 87-88.

29. Переслегин И.А., Саркисян Ю.Х. Лучевая терапия злокачественных опухолей мочевого пузыря. М.: Медицина, 1969. - С. 216.

30. Лопаткин H.A., Мартов А.Г., Крендель Б.М. и др. Актуальные вопросы лечения онкоурологических заболеваний // Рак мочевого пузыря: Матер. 4-й Всерос. науч. конф. с участ. стран СНГ, 11-12 окт. 2001 г. М., С. 66-67.

31. Лоран О.Б. Лечение поверхностного рака мочевого пузыря // Современные концепции лечения рака мочевого пузыря. Ч. II. - М., 1998. — С. 58-60.

32. Манагадзе Л.Г., Чнгогидзе Т.Г., Родионов. А.Г, Гоцадзе Д.Т.

33. Методы надпузырного отведения мочи и цистопластики // Урол. и нефр. -1994.-№3.-С. 45-49.

34. Мартов А.Г., Сысоев П. А. Эндоскопические операции при инвазивном раке мочевого пузыря // Урология. 2005. - №2. - С. 44-49.

35. Матвеев Б.П., Фигурин K.M. Результаты оперативного лечения больных раком мочевого пузыря // Урол. и нефрол. 1997. - № 2. - С. 25-28.

36. Матвеев Б.П., Фигурин K.M., Карякин О.Б. Рак мочевого пузыря. -М. Вердана, 2001.-243 с.

37. Матвеенко A.A., Мацнонис А.Э., Ягубянц Ю.Т. Возможности цитологического метода в диагностике опухолей мочевого пузыря. М., 1999.-С. 60-61.

38. Мационис Э.Я., Ягубянц Ю.Т., Медведев В.Л. Молекулярная биология рака мочевого пузыря: дань моде или необходимость? -М., 1998. -С. 64-66.

39. Микич Д.Х. Органосохраняющее лечение при инвазивном раке мочевого пузыря // Онкоурология. 2005. - №2 . - С. 30-32.

40. Митряев Ю.И. Уретеросигмостомия после радикальной цистэктомии в комбинированном лечении рака мочевого пузыря (клинико-экспериментальное исследование): Автореф. дис. д-ра мед. наук. М., 1996.I

41. Морозов A.B., Антонов М.И., Павленко К.А. Замещение мочевого пузыря сегментом кишечника (ортотопическая реконструкция мочевого пузыря) // Урол. и нефрол. 2000. - № 3. - С. 17-22.

42. Переслегин И.А., Саркисян Ю.Х. Лучевая терапия злокачественных опухолей мочевого пузыря // М.: Медицина, 1969. С. 216.

43. Поляничко М.Ф. Усовершенствование, диагностики и разработка восстановительных операций при хирургическом и комбинированном лечении злокачественных новообразований мочевого пузыря: Автореф. дис.1 . .д-ра мед. наук. Ростов-на-Дону, 1980.

44. Поляничко М.Ф. Варианты восстановления мочевого пузыря при различных объемах резекции // Актуальные вопросы лечения онкоурологических заболеваний: Матер. 2-й Всерос. науч. конф. с участ. стран СНГ, 21-22 нояб. Обнинск, 1997. - С. 53.

45. Попов A.M., Гришин Г.Н., Доннчкина Е.А., Карякин О.Б. ГУ

46. МРНЦ РАМН, г. Обнинск Органосохраняющее лечение инвазивного рака мочевого пузыря // Онкоурология. 2005. - №1. - С.37-41.

47. Пытель Ю.А., Лопаткин H.A. Онкоурология. М.: Медгиз, 1973. -С.16.

48. Ролевич А.И., Суконко О.Г., Красный С.А., Жуковец А.Г.

49. Внутрипузырный электрофорез доксорубицина при поверхностном раке мочевого пузыря. Результаты проспективного рандомизированного исследования // Онкоурология. 2005. - №2. - С. 26-30.

50. Русаков И.Г., Быстрое A.A. Хирургическое лечение, химио- и иммунотерапия больных поверхностным раком мочевого пузыря // Практ. онкол. — 2003. — Т.4. С. 4.

51. Русаков И.Г. Современные подходы к лечению онкоурологических заболеваний // Симпозиум: Тез. докл. -М., 1998. С. 8-11.

52. Сафиуллин К.Н., Карякин О.Б. Отдаленные результаты лечения рецидивов поверхностного рака мочевого пузыря вакциной БЦЖ // Онкоурология. 2006. - №2. - С. 18-22.

53. Селиванов С.П., Исаева С.Н., Ковалик Т.А. и др. Выбор метода лечения больных инвазивным раком мочевого пузыря // Матер. II конгр. Рос. общ. онкоурол. 4-5 окт. 2007 г. М., 2007. - С. 106.

54. Селиванов С.П., Исаева С.Н., Ковалик Т.А. и др. Неоадъювантная химиотерапия инвазивного рака мочевого пузыря // Урология. 2006. — №6. -С.' 23-27.

55. Семыкии Ю.А. Аутопластика после расширенных резекций в хирургическом и комбинированном лечении глубокоинвазивного рака мочевого пузыря: Автореф. дис. канд. мед. наук. Томск, 1991.

56. Серегин И.В., Самойленко В.М., Фнгурин K.M. Внутрипузырное применение гемцитабина у больных поверхностным раком мочевого пузыря, резистентным к внутрипузырной иммунотерапии вакциной БЦЖ // Онкоурология. 2005. - №2. - С. 21-24.

57. Сергиснко Н.Ф., Шаплыгин JI.B., Дадашсв Э.О., Фурашов Д.В. Квопросу о выборе тактики хирургического лечения при раке мочевого пузыря // В кн.: Современные концепции лечения рака мочевого пузыря. Ч. II. - М., 1998.-С. 82-83.

58. Ситдыков Э.Н., Зубков А.Ю. Эндохирургия новообразований мочевого пузыря. -Казань, 1998. С. 83-84.

59. Ситдыков Э.Н., Ситдыкова М.Э. Основы реабилитации больных раком мочевого пузыря. Казань, 1994. С. 26.

60. Теплов A.A. Хирургическое и комплексное лечение больных инвазивным раком мочевого пузыря. Состояние проблемы. Выбор лечебнойтактики // Матер, межд. науч. Форума: Онкология на рубеже XXI века. Возможности и перспективы. М., 1999. - С. 53.

61. Ткачук В.Н., Комяков Б.К., Новиков А.И. и др. Результаты цистэктомии в зависимости от стадии инвазивного рака мочевого пузыря //

62. Рак мочевого пузыря: Матер, конф., 21-22 мая 1998 г. — Ростов-на-Дону, 1998.-С. 91-92.

63. Ткачук В.Н., Аль-Шукри С.Х., Аль-Хани Ф.М. Ближайшие и отдаленные результаты БЦЖ-профилактики рецидивов рака мочевого пузыря после трансуретральной резекции. М. 2001. — С. 90-91.

64. Тоначева О.Г., Дыхно Ю.А., Медведева Н.В. Комплексное лечение рака мочевого пузыря // Рак мочевого пузыря: Матер, конф., 21-22 мая 1998 г. Ростов-на-Дону, 1998. - С. 92-93.

65. Чернышев И.В. Консервативное лечение местнораспространенного рака мочевого пузыря: Дис. . канд. мед. Наук. 1998.

66. Чкадуа Г.З. Использование дендритных клеток в иммунотерапии меланомы: Дисс. . канд. мед. Наук. -М., 2006. 104 с.

67. Широкорад В.И., Коршунов А.В., Хлебов О.П. и др. Сравнительная оценка отведения мочи после удаления мочевого пузыря. М., 2006. - С. 100-101.

68. Юрченко А.Н., Сафиуллнн К.Н., Карякин О.Б. Лечение поверхностного рака мочевого пузыря у больных с неблагоприятным прогнозом // Онкоурология. 2005. —№2. - С. 48-15.

69. Ягубянц Ю.Т., Мационис Э.Я., Матвеенко А.А. Экспрессия эпидермального фактора роста в поверхностных переходно-клеточных раках мочевого пузыря. М., 2005. С. 101-102.

70. Яненко Э.К., Кульга Л.Г., Поповкин Н.Н. и др. Распространенность рака мочевого пузыря в России и разработка методов его профилактики и лечения. М., 2003. С. 106-107.

71. Almand В., Clark J., Nikitina Е. et al. Increased production of immature myeloid cells in cancer patients: a mechanism of immunosuppression in cancer // J. Immunol.-2001; 166:678.

72. Almand В., Resser J., Lindman B. et al. Clinical significance of defective dendritic cell differentiation in cancer // Clin. Cancer. Res. 2000; 6:1755.

73. Banchereau J., Steinman R.M. Dendritic cells and the control of immunity //Nature. 1998; 392: 245.

74. Avigan D., Vasir B., Gong J. et al. Fusion cell vaccination of patients with metastatic breast and renal cancer induces immunological and clinical responses // Clin. Cancer Res. 2004; 10:4699

75. Bachleitner-Hofmann T., Stift A., Friedl J. et al. Stimulation of autologous antitumor T-cell responses against medullary thyroid carcinoma using tumor lysate-pulsed dendritic cells // J. Clin. Endocrinol. Metab. 2002; 87:1098.

76. Bedrosian I., Mick R., Xu S. et al. Intranodal administration of peptide-pulsed mature dendritic cell vaccines results in superior CD8+ T-cell function in melanoma patients // J. Clin. Oncol. 2003; 21: 3826.

77. Bender A., Sapp M., Schuler G. et al. Improved methods for the generation of dendritic cells from nonproliferating progenitors in human blood // J. Immunol. Methods. 1996; 196:121.

78. Berger T., Haendle I., Schrama D. et al. Circulation and homing of melanoma-reactive T cells to both cutaneous and visceral metastases after vaccination with monocyte-derived dendritic cells // Int. J. Cancer. 2004; 111:29.

79. Berkelhammer B., Kim Y. et al. A clinical histologic and immunologic study of a case of metastatic melanoma undergoing spontaneous remission // Cancer. 1976; 37:735.

80. Bettinotti M., Panelli M., Ruppe E. et al. Clinical and immunological evaluation of patients with metastatic melanoma undergoing immunization with the HLA-Cw*0702-associated epitope MAGE-A12:170-178 // Int. J. Cancer. -2003; 105:210.

81. Bulkley G., Cohen M., Banks P. et al. Long-term spontaneous regression of malignant melanoma with visceral metastases. Report of a case with immunologic profile // Cancer. 1975; 36: 485.

82. Butterfield L., Ribas A., Dissette V. et al. Determinant spreading associated with clinical response in dendritic cell-based immunotherapy for malignant melanoma // Clin. Cancer Res. 2003; 9:998.

83. Chen Y., Scanlan M., Sahin U. et al. A testicular antigen aberrantly expressed in human cancers detected by autologous antibody screening // PNAS. -1997; 94:1914.

84. Chi K., Liu S., Li C. et al. Combination of conformai radiotherapy and intratumoral injection of adoptive dendritic cell immunotherapy in refractory hepatoma // J. Immunother. 2005; 28:129.

85. De Vries J., Krooshoop D., Scharenborg N. et al. Effective migration of antigen-pulsed dendritic cells to lymph nodes in melanoma patients is determined by their maturation state // Cancer Research. 2003; 63:12.

86. Dhodapkar M., Steinman R., Krasovsky J. et al. Antigen-specific inhibition of effector T cell function in humans after injection of immature dendritic cells//J.Exp. Med.-2001; 193:233.

87. Evans T. and Kaye S. Vaccine therapy for cancer fact or fiction? // QJM: An Int. J. of Med. - 1999; 92:299.

88. Feili-Hariri M., Falkner D. and Morel P. Polarization of naive T cells into Thl or Th2 by distinct cytokine-driven murine dendritic cell populations: implications for immunotherapy // J. Leukoc. Biol. — 2005; 78:656.

89. Fong L., Brockstedt D., Benike C. et al. Dendritic cells injected via different routes induce immunity in cancer patients // J. Immunol. 2001; 166:4254.

90. Gabrilovich D., Corak J., Ciernik I. et al. Decreased antigen presentation by dendritic cells in patients with breast cancer // Clin. Cancer. Res. 1997; 3:483.

91. Germeau C., Ma W., Schiavetti F. et al. High frequency of antitumor T cells in the blood of melanoma patients before and after vaccination with tumor antigens // J. Exp. Med., Jan; 2001:241.

92. Gilliet M., Kleinhans M., Lantelme E. et al. Intranodal injection of semimature monocyte-derived dendritic cells induces T helper type 1 responses to protein neoantigen // Blood. 2003; 102:36.

93. Hsueh E., Morton D. Antigen-based immunotherapy of melanoma: Canvaxin therapeutic polyvalent cancer vaccine // Seminars in Cancer Biology. -2003; 13:401.

94. Jansen B., Wacheck V., Heere-Ress E. et al. Chemosensitisation of malignant melanoma by BCL2 antisense therapy // Lancet. 2000; 356:1728.

95. Jonuleit H., Giesecke-Tuettenberg A., Tuting T. et al. A comparison of two types of dendritic cell as adjuvants for the induction of melanoma-specific T-cell responses in humans following intranodal injection // Int. J. Cancer. 2001; 93:243.

96. Kirkin A.F., Dzhandzhugazyan K.N. and Zeuthen J. Cancer/testis antigens: structural and immunobiological properties // Cancer Invest. 2002; 20:222.

97. Kitajima T., Ariizumi K., Bergstresser P. et al. A novel mechanism of glucocorticoid-induced immune suppression: the inhibition of T cell-mediated terminal maturation of a murine dendritic cell line // J. Clin. Invest. 1996; 98: 142.

98. Koido S., Kashiwaba M., Chen D. et al. Induction of antitumor immunity by vaccination of dendritic cells transfected with MUC1 RNA // J. Immunol. -2000; 165:5713.

99. Kubo M., Morisaki T., Kuroki H. et al. Combination of adoptive immunotherapy with Herceptin for patients with HER2-expressing breast cancer // Anticancer Res. -2003; 23:4443.

100. Lau R., Wang F., Jeffery G. et al. Phase I trial of intravenous peptide-pulsed dendritic cells in patients with metastatic melanoma // J. Immunother. — 2001; 24:66.

101. Lodge P., Jones L., Bader R. et al. Dendritic cell-based immunotherapy of prostate cancer: immune monitoring of a phase II clinical trial // Cancer Research. -2000; 60:829.

102. Lyman M., Nugent C., Marquardt K. et al. The fate of low affinity tumor-specific CD8+ T cells in tumor-bearing mice // J. Immunol. — 2005; 174:2563.

103. Maldonado-Lopez R., Maliszewski C., Urbain J. et al. Cytokines regulate the capacity of CD8cr+ and CD8cr" dendritic cells to prime Thl/Th2 cells in vivo // J. Immunol.-2001; 167:4345.

104. Morse M., Coleman R., Akabani G. et al. Migration of human dendritic cells after injection in patients with metastatic malignancies // Cancer Res. 1999; 59:56.

105. O'Neill D., Adams S. and Bhardwaj N. Manipulating dendritic cell biology for the active immunotherapy of cancer // Blood. — 2004; 104:2235.

106. O'Rourke M., Johnson M., Lanagan C. et al. Durable complete clinical responses in a phase I/II trial using an autologous melanoma cell/dendritic cell vaccine // Cancer Immunol. Immunother. 2003; 52: 387.

107. Osanto S.: Vaccine trials for the clinician: prospects for tumor antigens // Oncologist.- 1997; 2:284.

108. Paczesny S., Banchereau J., Wittkowski K. et al. Expansion of melanoma-specific cytolytic CD8+ T cell precursors in patients with metastatic melanoma vaccinated with CD34+ progenitor-derived dendritic cells // J. Exp. Med.-2004; 199:1503.

109. Plosker G.L. and Figgitt D.P. Rituximab: a review of its use in non-Hodgkin's lymphoma and chronic lymphocytic leukaemia // Drugs. 2003; 63:803.

110. Rea D., Kooten C., Meijgaarden K. et al. Glucocorticoids transform CD40-triggering of dendritic cells into an alternative activation pathway resulting in antigen-presenting cells that secrete IL-10 // Blood. 2000; 95:3162.

111. Renkvist N., Castelli C., Robbins P. et al. A listing of human tumor antigens recognized by T cells // Cancer Immunol. Immunother. 2001; 50:3.

112. Ridolfï R., Riccobon A., Galassi R. et al. Evaluation of in vivo labelled dendritic cell migration in cancer patients // J. Transi. Med. 2004; 2:27.

113. Riker A., Cormier J., Panelli M. et al. Immune selection after antigen-specific immunotherapy of melanoma // Surgery. 1999; 126: 11.

114. Rongcun Y., Salazar-Onfray F., Charo J. et al. Identification of new HER2/neu-derived peptide epitopes that can elicit specific CTL against autologous and allogeneic carcinomas and melanomas // J. Immunol. — 1999; 163:1037.

115. Salcedo M., Bercovici N., Taylor R. et al. Vaccination of melanoma patients using dendritic cells loaded with an allogeneic tumor cell lysate // Cancer Immunol. Immunother. Sep. 2005; 1.

116. Santin A., Bellone S., Ravaggi A. at al. Induction of ovarian tumor-specific CD8+ cytotoxic T lymphocytes by acid-eluted peptide-pulsed autologous dendritic cells // Obstet. Gynecol. 2000; 96:422.

117. Scandella E., Men Y., Gillessen S. et al. Prostaglandin E2 is a key factor for CCR7 surface expression and migration of monocyte-derived dendritic cells // ,Blood. 2002; 100:1354.

118. Scandella E., Men Y., Legler D. et al. CCL19/CCL21-triggered signal transduction and migration of dendritic cells requires prostaglandin E2 // Blood.i2004; 103:1595.

119. Thomas R., Padmanabha J., Chambers M. Metastatic lesions in the joint associated with acute inflammatory arthritis after dendritic cell immunotherapy for metastatic melanoma // Melanoma Research. 2001; 11:167

120. Thumann P., Moc I., Humrich J. et al. Antigen loading of dendritic cells with whole tumor cell preparations // J. Immunol. Methods. 2003; 277:1.

121. Tokunaga N., Murakami T., Endo Y. et al. Human monocyte-derived dendritic cells pulsed with wild-type p53 protein efficiently induce CTLs against p53 overexpressing human cancer cells // Clin. Cancer Res. 2005; 11:1312.

122. Triozzi P., Kliurram R., Aldrich W. et al. Intratumoral injection of dendritic cells derived in vitro in patients with metastatic cancer // Cancer. 2000; 89:2646.

123. Vanderheyde N., Aksoy E., Amraoui Z. et al. Tumoricidal activity oft ' monocyte-derived dendritic cells: evidence for a caspase-8-dependent, Fasassociated death domain-independent mechanism // J. Immunol. 2001; 167:3565.

124. Vieira P., de Jong E., Wierenga E. et al. Development of Thl-inducing capacity in myeloid dendritic cells requires environmental instruction // J. Immunol. 2000; 164:4507.

125. Waeckerlc-Men Y., Scandclla E., Allmen E. et al. Phenotype and functional analysis of human monocyte-derived dendritic cells loaded with biodegradable poly(lactide-co-glycolide) microspheres for immunotherapy // J. Exp. Med.-2001; 176:1538.

126. Yu Z., Theoret M., Touloukian C. et al. Poor immunogenicity of a self/tumor antigen derives from peptide-MHC-I instability and is independent of tolerance // J. Clin. Invest. 2004; 114:551.

Оглавление диссертации Шоуа, Анри Бесланович :: 2009 :: Москва

Введение диссертации по теме "Хирургия", Шоуа, Анри Бесланович, автореферат

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2009 года, Шоуа, Анри Бесланович

Похожие научные работы

Каталог диссертаций