Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Иммуномодулирующие и гепатопротекторные эффекты различных лекарственных форм "Фосфоглива" при токсическом поражении печени

На правах рукописи

Ксдровская Наталья Александровна

ИММУНОМОДУЛИРУЮЩИЕ И ГЕПАТОПРОТЕКТОРНЫЕ ЭФФЕКТЫ РАЗЛИЧНЫХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ФОРМ «ФОСФОГЛИВА» ПРИ ТОКСИЧЕСКОМ ПОРАЖЕНИИ ПЕЧЕНИ

14.00.25 - фармакология, клиническая фармакология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

1 о ДЕК 2009

Курск-2009

003488695

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Курский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию».

Научные руководители:

доктор медицинских наук, профессор,

Заслуженный деятель науки РФ Конопля Александр Иванович

доктор медицинских наук, профессор Покровский Михаил Владимирович

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Лазарева Галина Анатольевна доктор медицинских наук, профессор Свистунов Андрей Алексеевич

Ведущее учреждение: Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Российский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию».

Защита состоится '2009 г. в часов на заседании

диссертационного совета Д 208.039.03 при Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Курский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» по адресу: 305041, г. Курск, ул. К. Маркса, 3.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО КГМУ Росздрава.

Автореферат разослан «

2009 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Количество пациентов с патологией печени ежегодно возрастает, причем увеличивается число больных с ее токсическим поражением. Причиной такого роста служит бурное развитие различных отраслей промышленности, в том числе пищевой, химической и фармацевтической, современный образ жизни, характер питания, а также; увеличение процента лиц, принимающих лекарственные препараты, в том числе неизвестного производства, наркотические средства, злоупотребляющих алкоголем и его суррогатами (Прокопенко Л.Г. и др., 1997; Подымова С.Д., 1998; Афанасьев В.А. и др., 2003; Наумова Т.А. и др., 2003; Мамедов Я.Д., 2009; Fukushima К. et al., 2008).

Попадая в организм различными путями, гепатотоксические агенты нарушают структуру и функцию клеточных мембран гепатоцитов, усиливают процессы перекисного окисления липидов, изменяют процессы регенерации и функции гепатоцитов, что сопровождается, прямо и косвенно, нарушениями иммунной реактивности (Прокопенко Л.Г. и др., 2000; Лазарева Г.А. и др., 2006). Применение гепатопротекторов позволяет снизить повреждающее действие продуктов перекисного окисления липидов и улучшить репаративные процессы в печени, а использование иммуномодуляторов воздействует на иммунитет, корригируя развивающиеся нарушения и улучшая репаративные процессы в гепатоцитах. В связи с этим при патологии печени желательно применение лекарственных средств с одновременной гепатопротекторной и иммуномоду-лирующей активностью (Конопля А.И., 2008; Земсков A.M. и др., 2008).

Особый интерес в этой ситуации представляет отечественный препарат «Фосфоглив». В состав этого лекарственного средства входят два действующих начала: лецитин и тринатриевая соль глицирризиновой кислоты. Наличие первого компонента позволяет восстанавливать фосфолипидный каркас мембраны гепатоцитов, снижать интенсивность процессов перекисного окисления липидов, генерацию активных метаболитов кислорода, устранять нарушения энергообеспечения клеток (Прокопенко Л.Г., Быстрова H.A., 2000; Прокопенко Л.Г., Утешев Д.Б., 2001; Лазарева Г.А. и др., 2006). Иммуномодулирующая, в основном противовирусная активность препарата «Фосфоглив» обусловлена наличием глицирризиновой кислоты, стимулирующей образование Т-лимфоцитов, естественных киллеров, выделение клетками цитокинов (Учайкин В.Ф. и др., 2000; Ипатова О.М., 2005; Beil W. et al., 1995; Tsuruoka N. et al., 2009). Кроме того, это один из немногих препаратов, содержащих эссенциальные фосфоли-пиды, производится в таблетированной и инъекционной формах. Исследований по их сравнительным иммуномодулирующим и гепатопротекторным свойствам в норме и при токсическом поражении печени не проводилось.

Цель - сравнить иммуномодулирующую и гепатопротекторную активность различных лекарственных форм «Фосфоглива» в норме и при острой токсической гепатопатии.

Задачи

1. Оценить влияние «Фосфоглива», «Фосфоглива Форте» и «Фосфоглива» для инъекций на формирование гуморального и клеточного иммунного ответа, функциональную активность нейтрофилов периферической крови, процессы перекисного окисления липидов, функциональную и митотическую активность гепатоцитов интактных животных.

2. Установить иммунометаболическую эффективность различных лекарственных форм «Фосфоглива» при токсическом поражении печени, вызванном иидометацином или четыреххлористым углеродом.

3. Выявить влияние различных форм «Фосфоглива» на морфологическую картину повреждения печени при ее остром токсическом поражении, вызванном индометацином или четыреххлористым углеродом.

4. Провести сравнительную оценку иммуномодулирующего и гепатопро-текторного эффектов различных лекарственных форм «Фосфоглива» при токсическом поражении печени.

5. Установить корреляционные связи между иммунными, оксидантными, биохимическими показателями, морфологическими критериями при токсическом поражении печени на фоне применения различных лекарственных форм «Фосфоглива».

Научная новизна. Установлено, что введение всех форм «Фосфоглива» интактным животным не влияет на процессы физиологической регенерации в гепатоцитах, повышает активность каталазы и щелочной фосфатазы в сыворотке крови. «Фосфоглив Форте» стимулирует формирование гуморального иммунного ответа, а инъекции препарата активируют развитие и гуморального и клеточного звеньев иммунитета у здоровых животных.

В условиях острой токсической гепатопатии, вызванной индометацином, более эффективными оказались «Фосфоглив Форте» и «Фосфоглив» для инъекций, а при поражении печени четыреххлористым углеродом - инъекционная форма препарата.

Выявлено, что для прогнозирования и оценки выраженности острого токсического поражения печени различными по химической структуре и механизму повреждающего действия токскантами, наиболее диагностически ценными являются показатели кислородзависимой активности нейтрофилов периферической крови, содержание малонового диальдегида и активность каталазы.

Практическая значимость. Экспериментально установлена различная степень эффективности применения различных лекарственных форм «Фосфог-лива» в коррекции иммунных, оксидантных, биохимических нарушений, процессов репаративной регенерации гепатоцитов при острой токсической гепато-патии, вызванной разными по химической структуре и механизму повреждающего действия токсикантами.

В условиях экспериментального острого токсического поражения печени применение «Фосфоглива», в отличие от пролонгированной и инъекционной форм, оказалось недостаточно эффективным.

Доказаны выраженные иммуномодулирующие эффекты «Фосфоглива Форте» и инъекционной формы препарата, что обосновывает перспективы для их дальнейшего изучения в области коррекции нарушений иммунного гомео-стаза.

Материалы доклинического изучения препаратов «Фосфоглив» и «Фос-фоглив Форте» производства ОАО «Фармстандарт-Лексредства» включены в состав Драгмастер файла, поданного на регистрацию в МЗ РФ (номер государственной регистрации ФР № 002528/01 от 12.07.2007 г. и ФФ ЛСР-008120/08 от 14.10.2008 г.).

Материалы диссертации вошли в учебные рабочие программы и используются в лекционных курсах и на практических занятиях ряда кафедр Курского и Самарского государственных медицинских университетов, Санкт-Петербургской государственной медицинской академии им. И.И. Мечникова, медицинского института Орловского государственного университета и медицинского факультета Белгородского государственного университета.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Различные лекарственные формы «Фосфоглива» у интактных животных повышают активность каталазы и щелочной фосфатазы, «Фосфоглив Форте» и инъекции препарата стимулируют развитие гуморального и клеточного иммунного ответа.

2. При острой токсической индометациновой гепатопатии наибольшей эффективностью в коррекции иммунных, биохимических нарушений и показателей процессов репаративной регенерации обладают «Фосфоглив Форте» и «Фосфоглив» для инъекций.

3. У животных при интоксикации тетрахлорметаном максимальными им-муномодулирующими, гепатопротекторными и репаративными эффектами обладает инъекционная форма «Фосфоглива».

4. Для прогнозирования и оценки выраженности острого токсического поражения печени различными по химической структуре и механизму повреж-

дающего действия токсикантами, наиболее диагностически ценными являются показатели кислородзависимой активности нейтрофилов периферической крови, содержание малонового диальдегида и активность каталазы.

Апробация работы. Основные положения диссертации представлены на научных конференциях Курского государственного медицинского университета: 69-й межвузовской научной конференции студентов и молодых ученых «Молодежная наука и современность» (Курск, 2004), 72-й итоговой межвузовской научной конференции студентов и молодых ученых «Молодежная наука и современность» (Курск, 2007), симпозиуме «Магнитные поля и здоровье человека» (Курск, 2007), 73-й итоговой межвузовской конференции студентов и молодых ученых «Молодежная наука: от фундаментальной идеи до инновационных проектов» (Курск, 2008), 73-й научной конференции КГМУ и сессии Центрально-Черноземного научного центра РАМН «Университетская наука: теория, практика, инновации» (Курск, 2008), I Международной дистанционной научной конференции «Инновации в медицине» (Курск, 2008), II Международной научной конференции молодых ученых-медиков (Курск, 2008), 74-й научной конференции КГМУ и сессии Центрально-Черноземного научного центра РАМН «Университетская наука: теория, практика, инновации» (Курск, 2009), 71-й международной итоговой студенческой научно-практической конференции, посвященной 130-летию со дня рождения профессора В.Ф. Войно-Ясенецкого и 65-летию КрасГМА (Красноярск, 2007), III Всероссийской конференции молодых ученых, организованной ВГМА им. H.H. Бурденко и КГМУ (Воронеж, 2009), XIII Международном конгрессе по реабилитации в медицине и иммунореабилитации (Дубай, 2008), VII съезде аллергологов и иммунологов СНГ (Санкт-Петербург, 2009), XVI Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2009).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 13 работ, в том числе в 3 изданиях, рекомендованных ВАК для публикаций материалов докторских и кандидатских диссертаций.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 114 страницах машинописного текста, иллюстрирована 21 таблицей и 17 рисунками, состоит из введения, обзора литературы (2 главы), описания методов исследования, изложения собственных результатов (5 глав), заключения, выводов, практических рекомендаций, библиографического указателя, включающего 114 отечественных и 79 иностранных источников.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ Материал и методы исследования. Эксперименты проводили на 377 здоровых половозрелых крысах линии Вистар, массой 150-200 г. В опытах использовали животных, прошедших карантинный режим вивария Курского государственного медицинского университета и не имевших внешних признаков каких-либо заболеваний. Все животные содержались в одинаковых условиях, на обычном пищевом режиме. Для получения статистически достоверных результатов группы формировали из 10-12 животных. В контрольные и опытные группы входили животные одного возраста, полученные из питомника РАМН «Столбовая» одновременно. Разброс в группах по исходной массе не превышал ±10%. Все исследования проводили в одно и то же время суток, с 8 до 12 ч, с соблюдением принципов, изложенных в Конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и других целей (г. Страсбург, Франция, 1986) и согласно правилам лабораторной практики РФ (приказ МЗ РФ № 267 от 19.06.2003 г.). Животных умерщвляли передозировкой средств для наркоза через 24 часа после последнего введения препарата и/или токсиканта.

Дизайн исследования. Способы введения и дозировки фармакологических препаратов. Расчет дозировок препаратов для введения экспериментальным животным проводили при помощи коэффициентов пересчета доз (мг/кг на мг/м2) для крысы и человека в зависимости от массы тела (Рге1-геюЬ ЕЛ., 1966) (табл. 1).

Таблица 1

Использованные препараты, дозировки, способы и кратность введения интактным крысам и животным с острым токсическим поражением печени_

Препарат Доза, мг/кг, в пересчете на: Введение

Эссенциаль-ные фосфоли-пиды гк Способ Количество Кратность

«Фосфоглив» 1500 800 внутрижелудочно в 1% крахмальной суспензии 14 Через 24 часа

«Фосфоглив Форте» 1500 240 внутрижелудочно в 1% крахмальной суспензии 14 Через 24 часа

«Фосфоглив» для инъекций 1500 600 внутрибрюшинно 14 Через 24 часа

Моделирование токсической гепатопатии. Токсическое поражение печени моделировали внутрижелудочным введением индометацина в дозе 5 мг/кг, внутрижелудочно, трехкратно, через 24 часа (Саратиков A.C., 1995) или внутримышечным введением 3 мл/кг четыреххлористого углерода в виде 50% рас-

твора в оливковом масле, трехкратно, через 24 часа (Алексеева H.H., 1991). Токсикант вводили в последние 3 дня получения препаратов «Фосфоглива».

Оценка иммунной реактивности и функциональной активности ней-трофилов периферической крови. Для развития гуморального иммунного ответа антиген (ЭБ) вводили внутрибрюшинно однократно из расчета 2 х Ю9 клеток на 1 кг массы тела. Выраженность ГИО оценивали на пятые сутки после иммунизации путем определения в селезенке числа антителообразующих клеток (Мальберг К., Зигль Э., 1987).

ГЗТ у крыс индуцировали внутрибрюшинным введением 108 ЭБ в 0,5 мл 0,15 М раствсра натрия хлорида (сенсибилизирующая доза). Через 4 суток в подушечку стопы правой лапки вводили 106 ЭБ в 0,1 мл 0,15 М раствора хлорида натрия (разрешающая доза). Спустя 24 ч выделяли регионарный (по месту введения ЭБ) и контрлатеральный подколенный лимфоузлы. О выраженности ГЗТ судили по разнице масс регионарного и контрлатерального лимфатических узлов и по разнице количества в них кариоцитов (Федосеева В.Н. и др., 1993).

Забор крови у экспериментальных животных осуществлялся под наркозом, путем внутрисердечной инъекции. Выделение нейтрофилов проводили на градиенте плотности фиколл-урографина (р= 1,078). Фагоцитарная активность нейтрофилов периферической крови и перитонеальных макрофагов оценивалась по фагоцитарному показателю, фагоцитарному числу и индексу активности фагоцитоза (Медведев А.Н., Чаленко В.В., 1991). Кислородзависимую активность оценивали НСТ-тестами - спонтанным и стимулированным опсонизи-рованным и неопсонизированным зимозаном, коэффициентами активации на опсонизированный и неопсонизированный зимозан, коэффициентом опсониза-ции (Зинкин В.Ю., Годков В.Г., 2004).

Биохимические методы. Для оценки функционального состояния гепа-тоцитов в сыворотке крови стандартными наборами реактивов определяли активность аспартат- и аланинаминотрансфераз и щелочной фосфатазы, ставили тимоловую пробу. Концентрацию фибриногена исследовали методом Рутберг (Люблина А.Я. и др., 1984).

Интенсивность процессов перекисного окисления липидов оценивали по содержанию в сыворотке крови диеновых конъюгатов жирных кислот и малонового диальдегида (Стальная И.Д., Гаришвили Т.Г., 1977). Кроме этого, определяли активность каталазы (Королюк М.А, и др., 1988).

Морфологические методы. Морфологически изучали печень и селезенку сразу после выведения животных из опыта. Кусочки органов фиксировали в 10% нейтральном формалине и жидкости Карнуа. Использована заливка тканей

в парафин, частично в желатину; в части случаев в криостате приготовлялись нефиксированные свежезамороженные срезы.

Гистологические срезы толщиной 5-7 мкм окрашивали гематоксилином и эозином. Для выявления рибонуклеопротеидов использована окраска метиловым зеленым-пиронином по Браше с контролем специфичности окрашивания рибонуклеазой. Для выявления жиров использовали окраски Суданом IV и сульфатом нильским голубым. Нейтральные мукополисахариды выявляли PAS-реакцией по Мак-Манусу, гликоген - PAS-реакцией с дополнительной обработкой срезов амилазой. Коллагеновые волокна окрашивали по Ван Гизону.

Статистическая обработка материала. Статистическую обработку результатов исследования проводили, используя непараметрические методы: критерии Вилкоксона-Манна и Уитни, а также коэффициент ранговой корреляции Спирмена (Гублер Е.Г., Генкин А.Р., 1973). Для редукции количества данных был проведен факторный анализ (Harman, 1976). Статистически значимыми считали различия с р<0,05.

По всем показателям рассчитывали коэффициент диагностической ценности, с его помощью определяли формулу расстройств, путем выбора из всех изученных параметров трех ведущих, наиболее отличающихся от уровня нормы. После расчета степени расстройств для лабораторных показателей устанавливали рейтинговый алгоритм степени расстройств, для чего исследованные лабораторные показатели выстраивали в порядке снижающейся значимости отличий от заданных значений (Земсков A.M. и др., 1994,2003).

Для каждой схемы лечения вычисляли собственные корригирующие эффекты препаратов и сумму показателей степеней коррекции (Земсков A.M., Земсков В.М., Полякова С.Д., 1997).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Иммуномодулирующие и гепатопротекторные эффекты различных лекарственных форм «Фосфоглива» у интактных животных. При исследовании влияния различных лекарственных форм «Фосфоглива» на формирование ГИО на ЭБ у здоровых животных установлено, что по сравнению с контролем «Фосфоглив», «Фосфоглив Форте», в большей степени инъекции препарата стимулируют развитие гуморальной формы иммунного ответа. При изучении формирования клеточной формы иммунного ответа стимулирующий эффект обнаружен только в отношении инъекционной формы «Фосфоглива» (рис. 1).

тыс./свло )вииу

АОК

РК

•1,2

А

Р

Рис. 1. Влияние различных лекарственных форм «Фосфоглива» на иммунную реактивность здоровых животных.

Обозначения: 1 - горизонтальная линия - показатели здоровых животных;

2 - показатели животных, получавших крахмал;

3 - показатели животных, получавших «Фосфоглиа»;

4 - показатели животных, получавших «Фосфоглив Форте»;

5 - показатели животных, получавших инъекции «Фосфоглива».

Учитывая то, что подопытные животные получали по 1500 мг/кг эссенци-альных фосфолипидов (в основном лецитина) в составе «Фосфоглива», «Фосфоглива Форте» или «Фосфоглива» для инъекций, а тринатриевой соли глицир-ризиновой кислоты соответственно по 800, 240 и 600 мг/кг, можно предположить отсутствие дозозависимой и ведущей роли ГК в стимуляции иммунной реактивности в условиях наших исследований. При этом, по-видимому, на первый план выступают как совместный эффект эссенциальных фосфолипидов и ГК, так и разная биодоступность препаратов.

На показатели функциональной активности нейтрофилов периферической крови, содержание промежуточных (ДК) и конечных продуктов (МДА) пере-кисного окисления липидов здоровых крыс ни одна лекарственная форма «Фосфоглива» влияния не оказывала, но установлено однотипное повышение активности одного из основных ферментов антиоксидантной защиты - катала-зы.

На фоне применения различных лекарственных форм «Фосфоглива» активность трансаминаз, содержание фибриногена и тимоловая проба оставались на нормальном уровне. Исключение на введение различных лекарственных форм «Фосфоглива» составляла щелочная фосфатаза, активность которой возрастала.

Показатели, характеризующие процессы физиологической регенерации в гепатоцитах, ни одна из лекарственных форм «Фосфоглива» не изменяла.

Таким образом, у интактных животных изученные лекарственные формы «Фосфоглива» оказывают следующие эффекты:

1. «Фосфоглив», «Фосфоглив Форте», в большей степени «Фосфоглив» для инъекций стимулируют развитие гуморального иммунного ответа на эритроциты барана.

2. Инъекции «Фосфоглива» стимулируют формирование гиперчувствительности замедленного типа.

3. Все изученные формы «Фосфоглива» повышают активность каталазы и щелочной фосфатазы в сыворотке крови.

Иммуномодулирующие и гепатопротекторные эффекты «Фосфоглива» в условиях индометацинового токсического поражения печени. У крыс с острой токсической гепатопатией, вызванной введением индометацина, развивалось вторичное иммунодефицитное состояние, о чем свидетельствовало снижение показателей ГИО и ГЗТ на ЭБ. Внутрижелудочное введение «Фосфоглива» повышало показатели ГИО, но не до уровня здоровых животных. «Фосфоглив Форте» нормализовал количество иммунных АОК в селезенке, а инъекционная форма дополнительно стимулировала формирование ГИО даже по сравнению со здоровыми животными. «Фосфоглив» или «Фосфоглив Форте» повышали, но не до уровня нормы, а инъекции этого препарата нормализовали показатели ГЗТ (табл. 2).

При острой токсической гепатопатии, вызванной введением индометацина, снижалась фагоцитарная и повышалась кислородзависимая активность гра-нулоцитов периферической крови. Введение «Фосфоглива» нормализует показатели фагоцитарной активности, НСТ-сп. и корригирует, но не до уровня нормы, показатели НСТ-ст. опсонизированным и неопсонизированным зимоза-ном. При этом КАо и КО остаются высокими, а КАн повышается еще сильнее по сравнению с крысами, получавшими токсикант. «Фосфоглив Форте» нормализовал все изученные показатели функциональной активности полиморфно-ядерных лейкоцитов, а инъекции «Фосфоглива» стимулировали фагоцитарную и нормализовали кислородзависимую активность нейтрофилов периферической крови (табл. 2).

На повышенные показатели ПОЛ «Фосфоглив» и инъекционная форма этого препарата оказывали корригирующее влияние, а при введении «Фосфоглива Форте» отмечалась их нормализация. Активность каталазы снижалась, но не до уровня здоровых животных, при использовании «Фосфоглива Форте» и инъекционной формы препарата (табл. 2).

При введении экспериментальным животным индометацина развивались биохимические синдромы поражения печени: цитолитический (повышение АЛТ), холестатический (повышение ЩФ) и гепатодепрессивный (снижение концентрации ФГ). Введение «Фосфоглива» частично нормализовало, но не до уровня нормы, активность АЛТ, ЩФ и содержание ФГ. «Фосфоглив Форте» полностью нормализовал активность АЛТ, ЩФ и частично концентрацию ФГ. Инъекции препарата нормализовали активность АЛТ и корригировали, но не до показателей контрольной группы, ЩФ и уровень ФГ (табл. 2).

Таблица 2

Изменение иммунных н биохимических показателей при экспериментальном токсическом гепатите, вызванном иидометацином, на фоне применения различных лекарственных форм «Фосфоглив»

Показа тел и 1 2 | 3 | 4 | 5

Здоровые животные Поражение печени индометацином

Крахмал «Фосфоглив» «Фосфоглив Форте» «Фосфоглив» инъекционный

АО К И,3±1,0 6,1±0,12"' 7,91=0,И"и 10,51=1,4"'"1

РМ 3,7±0,3 1,9±0,5"' 2,6±0,4'и 2,7±0,2'и 3,61=0,5"'-"

РК 1,9±0,2 0,51=0, Г' 0,81=0,3'''' 0,91=0,4"'' 1,81=0,4''"4

ФП 80,31=2,2 70,11=2,1"' 79,3±3,2'' 83,11=2,3'' 89,31=2,2 "'•4

ФЧ 1,71=0,03 0,6±0,06"' 1,61=0,07'' 1,6±0,07"' 2,8±0,07'м

ИАФ 1,41=0,02 0,41=0,06"' 1,31=0,06'' 1,31=0,08'' 2,5±0,08"'"4

НСТ-сп. 0,6±0,20 1,11=0,15"' 0,71=0,1 б'' 0,51=0,18'' 0,61=0,16''

НСТ-ст. н/з 0,7±0,20 1,91=0,27'' 1,2±0,16*''' О.б^О.П''-' 0,8±0,10"',:1

НСТ-ст. о/з 0,8±0,18 2,31=0,12'' 1,6±0,20''' 0,71=0,18''-' 0,91=0,18"'3

КАн 1,2±0,11 1,41=0,07'' 1,7±0,1Г,'г 1,2±0,02*'"' 1,3*0,01''^

КАо 1,3±0,18 2,0±0,24"' 2,2±0,17'' 1,4±0,08"'и 1,5±0,04"'"'

КО 1,1±0,02 1,51=0,09'' 1,3±0,09 1 1,21=0,13'' 1,11=0,12"'

Дк 1,4±0,06 2,3±0,10"' 1,91=0,12'''' 1,34±0,2"''3 1,8±0,13'''''4

МДА 11,8±0,2 27,3±2,0б"' 20,8±0,48'1'■' 12,21=0,62'" 18,91=2,ОЗ'12'4

Кат. 250,3=ь41,2 944,4±83,5"' 913,71=58,4'' 737,3=1=115,7''-' 639,9±105,6'1''1

АСТ 1,21=0,1 1,41=0,11 1,21=0,07 1,3±0,12 1,3±0,08

АЛТ 1,1 ±0,06 1,951=0, Г' 1,4±0,05"''' 1,01=0,16"'-1 1,11=0,16"'"1

ЩФ 450,4±41,3 794,11=45,б'1 630,81=55,4'''' 430,11=33,в"" 552,2±69,0"'''-4

тп 4,1±0,3 4,21=0,01 4,21=0,01 4,2±0,11 4,2±0,02

ФГ 5,0±0,2 2,71=0,89'' 3,91=0,15"''' 4,2±0,12"'' 4,0±0,13"''

ми 0,22±0,01 0,51±0,02"' 0,51=0,03"' 0,53±0,02"' 0,62±0,02"'-4

дяг 3,93±0,21 5,231=0,22'' 5,331=0,24"' 5,41±0,3"' 6,22±0,27"'-4

При гистологическом исследовании образцов печени крыс, отравленных индометацином, обнаруживалась картина гиалиново-капельной и гидропиче-ской дистрофии гепатоцитов, некроз отдельных клеток, нарушение балочной структуры печеночной ткани. У животных с острой индометациновой интоксикацией, получавших «Фосфоглив», равно как и «Фосфоглив Форте», в печени морфологически развивалась в основном гиалиново-капельная дистрофия гепа-

тоцитов, преимущественно мелкоочагового характера без нарушения общей гистоархитектоники долек (рис. 2).

тштшж

Морфологические изменения в печени у крысы с острой индометациновой интоксикацией, получавшей «Фосфоглив» внутриже-лудочно. Микрофото. Окр. гематоксилином и эозином,х 150

Печень крысы с острым токсическим поражением индометацином, получавшей внут-рибрюшинно «Фосфоглив» для инъекций. Микрофото. Окр. гематоксилином и эозином, х 150

Рис. 2. Морфологические изменения в печени у крыс с токсической индометациновой гепатопатией, получавших различные лекарственные формы «Фосфоглива».

При острой индометациновой интоксикации на фоне инъекций «Фосфоглива», морфологически гистоархитектоника ткани печени сохранялась, отмечалась гипертрофия гепатоцитов, увеличение размеров ядер, в части клеток имела место эозинофильная зернистость цитоплазмы (рис. 2).

У крыс с токсической индометациновой гепатопатией параллельно с деструкцией идут процессы репаративной регенерации, о чем свидетельствовало увеличение МИ и ДЯГ в гепатоцитах по сравнению со здоровыми животными. Введение «Фосфоглива» не влияет на этот процесс, «Фосфоглив Форте» или инъекционная форма этого препарата дополнительно стимулирует репаратив-ную регенерацию в печени, о чем свидетельствуют более высокие значении МИ и ДЯГ в гепатоцитах данных животных по сравнению с крысами, получавшими только токсикант (табл. 2).

Иммуномодулирующие и гепатопротекторные эффекты «Фосфоглива» в условиях токсического поражения печени, вызванного введением че-тыреххлористого углерода. Отравление животных тетрахлорметаном повышает иммунную реактивность, о чем свидетельствуют более высокие показатели ГИО и ГЗТ на ЭБ по сравнению с контрольной группой. Введение «Фосфоглива» или «Фосфоглива Форте» частично корригировало изученные иммунные показатели, а использование инъекционной формы препарата нормализовало развитие гуморальной и клеточной форм иммунитета (табл. 3).

У животных с тетрахлорметановой моделью острого токсического поражения печени наблюдалось снижение фагоцитарной при повышении кислород-зависимой активности нейтрофилов периферической крови. Введение «Фос-фоглива» не влияло на измененные тетрахлорметаном показатели функциональной активности гранулоцитов. Применение «Фосфоглива Форте» нормализовало фагоцитарные показатели и не изменяло повышенные токсикантом НСТ-сп. и НСТ-ст. опсонизированным и неопсонизированным зимозаном. Только парентеральное применение «Фосфоглива» нормализовало все показа-' тели функциональной активности нейтрофилов периферической крови. Резервы функциональной активности полиморфноядерных лейкоцитов изменялись аналогично (табл. 3).

Таблица 3

Изменение иммунных, оксидантных и биохимических показателей

у животных с токсическим поражением печени, вызванным введением тетрахлорметана, на фоне применения различных _ лекарственных форм «Фосфоглива» _

Препарат Иммунная реактивность Нейтрофилы Сыворотка крови Гепатоциты

ГИО гзт Фагоцитоз Кислород-зависимая активность Показатели ПОЛ Ката-лаза Функциональная активность Репара-тивная регенерация

ЧХУ т т 1 т t Г т t

«Фосфог-лив» к к I I t т+ К +

«Фосфоглив Форте» к к Н т т т+ к ++

«Фосфоглив» для инъекций 11 и н II н к н +-Н-

Примечание: | - повышение показателей, I - снижение показателей, К - корригирующий эффект, Н - нормализующий эффект, +...+++ - различная степень стимулирующего эффекта.

У крыс с токсическим поражением печени, вызванным введением ЧХУ, в сыворотке крови отмечалось повышение концентрации МДА, ДК и активности каталазы. Введение «Фосфоглива» и «Фосфоглива Форте» не влияло на повышенный уровень ДК и МДА, но еще в большей степени по сравнению с животными, не получавшими препаратов, повышало активность каталазы. При использовании инъекционной формы отмечалась нормализация концентрации ДК и МДА, а активность каталазы снижалась, но не до уровня контроля (табл. 3).

Поступление в организм ЧХУ приводит к развитию цитолитического (повышение активности АЛТ и ACT в сыворотке крови по сравнению с контрольной фуппой животных), холестатического (повышение активности ЩФ), ме-

зенхимально-воспалительного (повышение тимоловой пробы) и печеночно-клеточной недостаточности (снижение концентрации ФГ) биохимических синдромов поражения печени. Следует отметить более высокие показатели поражения печени ЧХУ по сравнению с индометациновой интоксикацией.

Введение «Фосфоглива» и «Фосфоглива Форте» полностью нормализовало показатели ACT, ЩФ, ТП, частично AJIT, но не влияло на сниженное содержание ФГ. Применение инъекционной формы «Фосфоглива» при токсическом поражении печени, вызванном ЧХУ, нормализовало активность ами-нотрансфераз, ЩФ, ТП и повышало, не до уровня нормы, концентрацию ФГ (табл. 3).

В условиях токсического поражения печени ЧХУ наблюдается стимуляция процессов репаративной регенерации в гепатоцитах, на выраженность которых введение «Фосфоглива» не влияло. Пролонгированная форма препарата, а в еще большей степени инъекционная, значительно увеличивала показатели, характеризующие восстановительные процессы в печени отравленных животных (табл. 3).

Между группами животных с острым токсическим поражением печени, вызванным ЧХУ, и получавших «Фосфоглив» или «Фосфоглив Форте», в пато-морфологической картине печени различий не выявлено. Однако у этих животных по сравнению с группой крыс, получавших только токсикант, распространенность и степень выраженности дистрофических и некробиотических изменений гепатоцитов была менее выраженной. Жировая дистрофия гепатоцитов преимущественно мелкокапельного характера развивалась в основном лишь центролобулярно, с сохранением структуры ткани в других отделах долек (рис. 3).

У животных с острой тетрахлорметановой гепатопатией, получавших «Фосфоглив» для инъекций, в отличие от крыс с внутрижелудочным введением «Фосфоглива» и «Фосфоглива Форте», при морфологическом исследовании в печени выявлялась лишь мелкоочаговая центролобулярная преимущественно мелкокапельная жировая дистрофия гепатоцитов с сохранностью структуры ткани в большей части площади долек (рис. 3).

Дистрофические изменения в ткани печени у крысы с острым токсическим воздействием ЧХУ, получавшей «Фосфоглив» внутриже-лудочно. Микрофото. Окр. гематоксилином и эозином, хЮО

Мелкоочаговая жировая дистрофия гепато-цитов у крысы с острым токсическим воздействием ЧХУ, получавшей внутрибрю-шинно «Фосфоглив» для инъекций. Микрофото. Окр. гематоксилином и эозином, хЮО

Рис. 3. Морфологические изменения в печени у крыс с токсической тет-рахлорметановой гепатопатией, получавших различные лекарственные формы «Фосфоглива».

Сравнительная иммуноморфологическая эффективность применения различных лекарственных форм «Фосфоглива» при токсической гепа-топатии, вызванной введением индометацина или тетрахлорметана. В условиях поражения печени индометацином оказались нарушенными 14 показателей из 21 изученного в различной степени, причем в ФР вошли НСТ-сп., ЩФ и каталаза с III СР. Введение «Фосфоглива» снижает число нарушенных показателей до 10, а ФР состояла из фибриногена, НСТ-ст. опсонизированным зи-мозаном и каталазы с III СР. Дополнительное включение в схему «Фосфоглива Форте» снижало количество нарушенных показателей до 7, а ФР оказалась: уровень ДК, активность каталазы с III CP и содержание фибриногена со II СР. Инъекции «Фосфоглива» снижали количество нарушенных показателей до 8, а ФР состояла из: фибриногена с III CP, НСТ-ст. опсонизированным зимозаном и каталазы со II СР. Моделирование токсической гепатопатии введением ЧХУ вызывало нарушение 18 из 21 изученного показателя, а ФР состояла из: МДА, НСТ-ст. неопсонизированным и опсонизированным зимозаном с III СР. Введение «Фосфоглива» снижало число нарушенных параметров до 13, при этом ФР была: AJ1T, АОК и МДА с III СР. Использование «Фосфоглива Форте» также снижало количество нарушенных показателей до 13, но ФР составляла: МДА, AJ1T и НСТ-ст. неопсонизированным зимозаном с III СР. Инъекции «Фосфоглива» оказались наиболее эффективными, так как снижали число нарушенных показателей до 8 из 21, а ФР состояла из: АЛТ, НСТ-ст. опсонизированным зимозаном и фибриногена с III СР.

Вычисление суммы собственных корригирующих эффектов для индоме-тациновой модели поражения печени показало, что после включения в схему «Фосфоглива» сумма показателей степеней коррекции составляла 1036, после применения «Фосфоглива Форте» - 1207, а при применении «Фосфоглива» для инъекций - 1192. При токсическом поражении печени четыреххлористым углеродом после введения «Фосфоглива» сумма степеней коррекции оказалось равной 219, при применении «Фосфоглива Форте» - 283, а при использовании инъекционной формы - 900.

Таким образом, по убыванию степени эффективности при токсическом поражении печени индометацином препараты можно расположить в следующей последовательности: «Фосфоглив Форте» = «Фосфоглив» для инъекций —» «Фосфоглив». При поражении печени ЧХУ: «Фосфоглив» для инъекций —* «Фосфоглив Форте» —» «Фосфоглив».

При помощи факторного анализа установлено, что наиболее чувствительными факторами к воздействию использованных схем оказались ЩФ и ФП. Именно эти показатели являются основными точками приложения влияния различных лекарственных форм «Фосфоглива».

После вычисления коэффициентов корреляции Спирмена у крыс с токсическим поражением печени индометацином положительные корреляционные связи обнаружены между морфологическими показателями и количеством АОК, индексами клеточной цитотоксичности КАн и КАо, активностью ами-нотрансфераз, а отрицательные - с показателями кислородзависимой активности полиморфноядерных лейкоцитов, уровнем МДА и активностью каталазы. При моделировании токсического поражения печени ЧХУ положительные корреляционные связи обнаружены между морфологическими показателями и НСТ-тестами спонтанным и стимулированным неопсонизироавнным зимоза-ном, а отрицательные - с количеством АОК на ЭБ, НСТ-тестом, стимулированным опсонизированным зимозаном, и индексами кислородзависимой активности плиморфноядерных лейкоцитов, концентрацией конечных и промежуточных продуктов перекисного окисления липидов, активностью каталазы и ACT, уровнем фибриногена. Полученные математические методики позволяют рекомендовать использование для прогнозирования развития и оценки степени выраженности токсического поражения печени показатели кислородзависимой активности нейтрофилов периферической крови, содержание малонового ди-альдегида и активность каталазы.

По данным литературы известно, что механизм токсического действия индометацина заключается в снижении гепатоцитом синтеза гликогена, повышении процессов ПОЛ, проницаемости мембран гепатоцитов, нарушении

структуры ДНК, что приводит к нарушению белково-синтетической функции клетки. Прямо или косвенно, индометацин угнетает иммунитет, что дополнительно отрицательно сказывается на процессах репарации в поврежденной печени. Вероятно, в этих условиях эффекты составных компонентов «Фосфогли-ва» оказывают синергическое действие: лецитин проявляет антиоксидантный, замещающий и стабилизирующий мембраны гепатоцитов эффекты. Глицирри-зиновая кислота не только дополнительно стабилизирует лецитин, но и обладает прямым иммуномодулирующим эффектом на клетки иммунной системы, что совместно ускоряет репаративные процессы в гепатоцитах. Более выраженные эффекты «Фосфоглива Форте», вероятно, обусловлены дополнительными веществами, входящими в состав препарата, по сравнению с «Фосфогливом», а инъекционной формы - большей биодоступностью препарата.

В другом случае, при токсическом поражении печени, вызванном введением четыреххлористого углерода, помимо цитолитического, холестатического и гепатодепрессивного синдромов развивается мезенхимально-воспалительный биохимический синдром поражения печени. Это обусловлено прямыми повреждающими эффектами тетрахлорметана на мембраны гепатоцитов (не только на внешние, но и на внутренние мембраны эндоплазматического ретикулума). В совокупности все это приводит к повышению процессов перекисного окисления липидов и выходу в кровеносное русло соединений, в первую очередь про-теолитических ферментов, обладающих иммуностимулирующими эффектами. В данном случае благодаря своей высокой биодоступности оказался более эффективным «Фосфоглив» для инъекций, введение которого, вероятно, позволяет стабилизировать мембранные структуры гепатоцитов и уменьшить процессы перекисного окисления липидов и снизить выход в кровеносное русло иммуностимулирующих соединений, что сопровождается нормализацией большинства исследованных показателей иммунного статуса.

ВЫВОДЫ

1. Введение «Фосфоглива», «Фосфоглива Форте» или инъекционной формы препарата в дозе 1500 мг/кг (в пересчете на эссенциальные фосфолипи-ды) однократно в течение 14 суток иитактным животным не влияет на процессы физиологической регенерации в гепатоцитах, повышает активность катала-зы и щелочной фосфатазы в сыворотке крови; «Фосфоглив», «Фосфоглив Форте», в большей степени инъекции, стимулируют формирование гуморального иммунного ответа; инъекционная форма активирует развитие клеточного иммунитета.

2. В условиях токсического индометацинового поражения печени, сопровождающегося снижением иммунной реактивности, фагоцитоза и повышением

кислородзависимой активности нейтрофилов периферической крови, введение «Фосфоглива» или инъекций «Фосфоглива» в течение 14 суток полностью нормализует процессы фагоцитоза, частично формирование гуморального и клеточного иммунного ответа и кислородзависимую активность полиморфно-ядерных лейкоцитов; инъекции препарата нормализуют развитие гиперчувствительности замедленного типа, кислородзависимую активность гранулоцитов, стимулируют гуморальный иммунный ответ и фагоцитоз.

3. У крыс, отравленных тетрахлорметаном, на фоне повышения иммунной реактивности, сниженной фагоцитарной и повышенной кислородзависимой активности полиморфноядерных лейкоцитов, введение «Фосфоглива» или «Фосфоглива Форте» корригирует развитие гуморального иммунного ответа, гиперчувствительности замедленного типа; «Фосфоглив Форте» нормализует фагоцитоз, а инъекции «Фосфоглива» - все показатели иммунной реактивности и функции нейтрофилов периферической крови.

4. При остром токсическом индометациновом поражении печени, введение «Фосфоглива» или «Фосфоглива» для инъекций частично, а «Фосфоглива Форте» полностью нормализует повышенные токсикантом содержание диеновых конъюгатов жирных кислот и малонового диальдегида; повышенную ин-дометацином активность каталазы частично снижают «Фосфоглив Форте» и инъекции «Фосфоглива».

5. При токсической гепатопатии, вызванной отравлением четыреххлори-стым углеродом, введение «Фосфоглива» или «Фосфоглива Форте» не изменяет повышенный уровень продуктов перекисного окисления липидов, повышает активность каталазы; инъекционная форма препарата полностью нормализует содержание диеновых конъюгатов жирных кислот и малонового диальдегида и частично активность каталазы.

6. На модели острого токсического поражения печени, вызванного индо-метацином, «Фосфоглив», «Фосфоглив» для инъекций, в большей степени «Фосфоглив Форте» корригируют показатели цитолитического, холестатиче-ского и гепатодепрессивного биохимических синдромов поражения печени, при токсическом поражении печени, вызванном тетрахлорметаном, более высокой эффективностью обладает инъекционная форма препарата.

7. На животных с острой индометациновой или тетрахлорметановой токсической гепатопатией «Фосфоглив» не влияет, «Фосфоглив Форте», в большей мере инъекционная форма препарата стимулируют процессы репаративной регенерации гепатоцитов.

8. Для прогнозирования развития и оценки степени выраженности острого токсического поражения печени наиболее диагностически ценным является

определение показателей кислородзависимой активности нейтрофилов периферической крови, содержания малонового диальдегида и активности каталазы.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Рекомендовать клиническую апробацию препаратов «Фосфоглив» для инъекций и «Фосфоглив Форте» в качестве иммуномодулирующих средств при острой токсической гепатопатии, сопровождающейся нарушениями иммунного статуса.

2. Использовать для прогнозирования развития и оценки степени выраженности токсического поражения печени показатели кислородзависимой активности нейтрофилов периферической крови, содержание малонового диаль-дегид и активность каталазы.

3. Использовать в учебном процессе медицинских вузов знания об иммуномодулирующих и гепатопротекторных эффектах различных лекарственных форм «Фосфоглива» при токсическом поражении печени.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Кедровская, H.A. Влияние «Фосфоглива» на функциональную активность гепатоцитов при острой гепатопатии / H.A. Кедровская // Мат. 72-й итоговой межвузовской конференции студентов и молодых ученых «Молодежная наука и современность». - Курск, КГМУ, 2007. - Ч. I. - С. 16.

2. Кедровская, H.A. Иммунометаболические эффекты «Фосфоглива» при острой гепатопатии / H.A. Кедровская // Сб. Материалов 71-й международной итоговой студенческой научно-практической конференции, посвященной 130-летию со дня рождения проф. В.Ф. Войно-Ясенецкого и 65-летию КрасГМА. -Красноярск: I ООО «Версо», 2007. - С. 281.

3. Артюшкова, Е.Б. Эндотелио- и кардиопротективные эффекты препаратов фосфоглив и фосфоглив Форте / Е.Б, Артюшкова, H.A. Кедровская, К.В. Полонская // Сб. трудов 73-й научной конференции КГМУ и сессии Центрально-Черноземного научного центра РАМН «Университетская наука: теория, практика, инновации». - Курск: ГОУ ВПО КГМУ Росздрава, 2008. - Т. 3. -С. 173.

4. Кедровская, H.A. Влияние «Фосфоглива» на функциональную активность нейтрофилов периферической крови при остром токсическом поражении печени / H.A. Кедровская, Е.Б. Артюшкова // Мат. I Международной дистанционной научной конференции «Инновации в медицине». - 2008. - С. 125.

5. Кедровская, H.A. Сравнительная оценка гепатопротекгорной активности «Фосфоглива Форте» и «Фосфоглива» на модели четыреххлористого поражения печени / H.A. Кедровская, Т.А. Денисюк И Мат. 73-й итоговой межвузов-

ской конференции студентов и молодых ученых «Молодежная наука и современность: от фундаментальной идеи до инновационных проектов» (15-16 апреля 2008 г., г. Курск). - Курск: ГОУ ВПО КГМУ Росздрава, 2008. - Ч. I. - С. 12.

6. Кедровская, H.A. Сравнительная оценка гепатопротекторной активности «Фосфоглива Форте» и «Фосфоглива» на модели поражения печени индо-метацином / H.A. Кедровская, Т.А. Денисюк // Мат. 73-й итоговой межвузовской конференции студентов и молодых ученых «Молодежная наука и современность: от фундаментальной идеи до инновационных проектов» (15-16 апреля 2008 г., г. Курск). - Курск: ГОУ ВПО КГМУ Росздрава, 2008. - Ч. I. - С. 13.

7. Кедровская, H.A. Экспериментальное исследование гепатопротекторной активности «Фосфоглива Форте» при остром токсическом поражении печени / H.A. Кедровская // Мат. II Международной научной конференции молодых ученых-медиков. - 2008. - С. 49.

8. Эндотедиопротективные эффекты нового иммуномодулятора «Фос-фоглив форте», содержащего фосфотидилхолин и тринатриевую соль глицирри-зиновой кислоты / Е.Б. Артюшкова, М.В. Покровский, H.A. Кедровская и др. // Мат. XIII Международного конгресса по реабилитации в медицине и иммуно-реабилитации (26-29 апреля 2008 г., г. Дубай) // Аллергология и иммунология. -2008.-Т. 9, № 1,-С. 153.

9. Кедровская, H.A. Гепатопротекторные и антиоксидантные эффекты препарата «Фосфоглив» при токсическом поражении печени индометацином / H.A. Кедровская, P.A. Нетяга // Мат. III Всероссийской конференции молодых ученых, организованной Воронежской государственной медицинской академией им. H.H. Бурденко и Курским государственным медицинским университетом (20-21 февраля 2009 г., г. Воронеж) / под ред. проф. И.Э. Есауленко и проф. В .А. Лазаренко. - Воронеж, 2009. - Т. II. - С. 141-144.

10. Кедровская, H.A. Иммунометаболические и гепатопротекторные эффекты препарата «Фосфоглив» при острой токсической гепатопатии / H.A. Кедровская, А.И. Конопля, М.В. Покровский // Сб. трудов 74-й научной конференции КГМУ, сессии Центрально-Черноземного научного центра РАМН и отделения РАЕН «Университетская наука: теория, практика, инновации». -Курск: ГОУ ВПО КГМУ Росздрава, 2009. -Т. I. -С. 118-123.

11. Кедровская, H.A. Применение «Фосфоглива» для коррекции иммунных нарушений при острой экспериментальной токсической гепатопатии / H.A. Кедровская, О.В. Белоконова / Сб. мат. XVI Российского национального конгресса «Человек и лекарство» (тез. докл.) (6-10 апреля 2009 г., г. Москва). -С. 672-673.

12. Иммуномодулирующая активность различных форм «Фосфоглива» при экспериментальной токсической гепатопатии / И.А. Кедровская, А.И. Конопля, М.В. Покровский и др. // Мат. VII съезда аллергологов и иммунологов СНГ // Аллергология и иммунология. - 2009. - Т. 10, № 2. - С. 288.

13. Кедровская, H.A. Иммуномодулирующие и гепатопротекторные эффекты различных лекарственных форм «Фосфоглива» в условиях индометаци-нового токсического поражения печени / H.A. Кедровская, О.В. Белоконова // Человек и его здоровье. - 2009. - №. 4. - С. 5-8,

ПРИНЯТЫЕ СОКРАЩЕНИЯ

АЛТ - аланинаминотрансфераза, ЕД/ч-л

АОК - антителообразующие клетки, тыс./селезенка

АСТ - аспартатаминотрансфераза, ЕД/ч*л

ГЗТ - гиперчувствительность замедленного типа

ГИО - гуморальный иммунный ответ

ГК - глицирризиновая кислота

ДК - диеновые конъюгаты жирных кислот, мкмоль/л

ДЯГ - диаметр ядер гепатоцитов, мкм

ИАФ - индекс активности фагоцитоза

КАн - коэффициент активации на неопсонизированный зимозан

КАо - коэффициент активации на опсонизированный зимозан

Кат. - каталаза, кат/л

МДА - малоновый диальдегид, мкмоль/л

МИ - митотический индекс, количество митозов, %о

НСТ-сп. - спонтанный тест восстановления нитросинего тетразолия, тОБ

НСТ-сг. - стимулированный тест восстановления нитросинего тетразолия

н/з; о/з неопсонизированным или опсонизированным зимозаном, тСЮ

РК - разница кариоцитов, 106

РМ - разница массы лимфоузлов регионарного и

контрлатерального, мг СР - степень расстройств ТП - тимоловая проба, ЕД ФГ - фибриноген, г/л ФП - фагоцитарный показатель, % ФР - формула расстройств ФЧ - фагоцитарное число ЧХУ - четыреххлористый углерод ЩФ - щелочная фосфатаза, ЕД/ч»л ЭБ - эритроциты барана

Лицензия ЛР № 020862 от 30.04.99 г. Сдано в набор 16.11.2009 г. Подписано в печать 19Л1.2009 г. Формат 30х4278. Бумага офсетная. Гарнитура Times New Rom. Печать офсетная. Усл. печ. л. 1,0. Тираж 100 экз. Заказ № 107А. Издательство Курского государственного медицинского университета 305041, г. Курск, ул. К. Маркса, 3.

Актуальность проблемы. Количество пациентов с патологией печени ежегодно возрастает, причем увеличивается число больных с ее токсическим поражением. Причиной для такого роста служит бурное развитие различных отраслей промышленности, в том числе пищевой, химической и фармацевтической, современный образ жизни, характер питания, а также увеличение процента лиц, принимающих лекарственные препараты, в том числе неизвестного производства, наркотические средства, злоупотребляющих алкоголем и его суррогатами (Прокопенко Л.Г. и др., 1997; Подымова С.Д., 1998; Афанасьев В.А. и др., 2003; Наумова Т.А. и др., 2003; Мамедов Я.Д., 2009; Fukushima К. et al., 2008).

Попадая в организм различными путями, гепатотоксические агенты нарушают структуру и функцию клеточных мембран гепатоцитов, усиливают процессы перекисного окисления липидов, изменяют процессы регенерации и функции гепатоцитов, что сопровождается, прямо и косвенно, нарушениями иммунной реактивности (Прокопенко Л.Г. и др., 2000; Лазарева Г.А. и др., 2006). Применение гепатопротекторов позволяет снизить повреждающее действие продуктов перекисного окисления липидов и улучшить репаратив-ные процессы в печени, а использование иммуномодуляторов воздействует на иммунитет, корригируя развивающиеся нарушения, и улучшая репаратив-ные процессы в гепатоцитах. В связи с этим, при патологии печени желательно применение лекарственных средств с одновременной гепатопротек-торной и иммуномодулирующей активностью (Конопля А.И., 2008; Земсков A.M. и др., 2008).

Особый интерес в этой ситуации представляет отечественный препарат «Фосфоглив». В состав этого лекарственного средства входят два действующих начала: лецитин и тринатриевая соль глицирризиновой кислоты. Наличие первого компонента позволяет восстанавливать фосфолипидный каркас мембраны гепатоцитов, снижать интенсивность процессов перекисного окисления липидов, генерацию активных метаболитов кислорода, устранять нарушения энергообеспечения клеток (Прокопенко Л.Г., Быстрова Н.А., 2000; Прокопенко Л.Г., Утешев Д.Б., 2001; Лазарева Г.А. и др., 2006). Иммуномо-дулирующая, в основном противовирусная активность препарата «Фосфог-лив» обусловлена наличием глицирризиновой кислоты, стимулирующей образование Т-лимфоцитов, естественных киллеров, выделение клетками цито-кинов (Учайкин В.Ф. и др., 2000; Ипатова О.М., 2005; Beil W. et al., 1995; Tsuruoka N. et al., 2009). Кроме того, это один из немногих препаратов, содержащих эссенциальные фосфолипиды, производится в таблетированной и инъекционной формах. Исследований по их сравнительным иммуномодули-рующим и гепатопротекторным свойствам в норме и при токсическом поражении печени не проводилось.

Цель — сравнить иммуномодулирующую и гепатопротекторную активность различных лекарственных форм «Фосфоглива» в норме и при острой токсической гепатопатии.

Задачи }

1. Оценить влияние «Фосфоглива», «Фосфоглива Форте» и «Фосфоглива» для инъекций на формирование гуморального и клеточного иммунного ответа, функциональную активность нейтрофилов периферической крови, процессы перекисного окисления липидов, функциональную и митотическую активность гепатоцитов интактных животных.

2. Установить иммунометаболическую эффективность различных лекарственных форм «Фосфоглива» при токсическом поражении печени, вызванном индометацином или четыреххлористым углеродом.

3. Выявить влияние различных форм «Фосфоглива» на морфологическую картину повреждения печени при ее остром токсическом поражении, вызванном индометацином или четыреххлористым углеродом.

4. Провести сравнительную оценку иммуномодулирующего и гепато-протекторного эффектов различных лекарственных форм «Фосфоглива» при токсическом поражении печени.

5. Установить корреляционные связи между иммунными, оксидантны-ми, биохимическими показателями, морфологическими критериями при токсическом поражении печени на фоне применения различных лекарственных форм «Фосфоглива».

Научная новизна. Установлено, что введение всех форм «Фосфоглива» интактным животным не влияет на процессы физиологической регенерации в гепатоцитах, повышает активность каталазы и щелочной фосфатазы в сыворотке крови. «Фосфоглив Форте» стимулирует формирование гуморального иммунного ответа, а инъекции препарата активируют развитие и гуморального и клеточного звеньев иммунитета у здоровых животных.

В условиях острой токсической гепатопатии, вызванной индометаци-ном, более эффективными оказались «Фосфоглив Форте» и «Фосфоглив» для инъекций, а при поражении печени четыреххлористым углеродом - инъекционная форма препарата.

Выявлено, что для прогнозирования и оценки выраженности острого токсического поражения печени различными по химической структуре и механизму повреждающего действия токскантами, наиболее диагностически ценными являются показатели кислородзависимой активности нейтрофилов периферической крови, содержание малонового диальдегида и активность каталазы.

Практическая значимость. Экспериментально установлена различная степень эффективности применения различных лекарственных форм «Фосфоглива» в коррекции иммунных, оксидантных, биохимических нарушений, процессов репаративной регенерации гепатоцитов при острой токсической гепатопатии, вызванной разными по химической структуре и механизму повреждающего действия токсикантами.

В условиях экспериментального острого токсического поражения печени применение «Фосфоглива», в отличие от пролонгированной и инъекционной форм, оказалось недостаточно эффективным.

Доказаны выраженные иммуномодулирующие эффекты «Фосфоглива Форте» и инъекционной формы препарата, что обосновывает перспективы для их дальнейшего изучения в области коррекции нарушений иммунного гомеостаза.

Материалы доклинического изучения препаратов «Фосфоглив» и «Фосфоглив Форте» производства ОАО «Фармстандарт-Лексредства» включены в состав Драгмастер файла, поданного на регистрацию в МЗ РФ (номер государственной регистрации-ФР № 002528/01 от 12.07.2007 г. и ФФ JICP-008120/08 от 14.10.2008 г.).

Материалы диссертации вошли в учебные рабочие программы и используются в лекционных курсах и на практических занятиях ряда кафедр Курского и Самарского государственных медицинских университетов, Санкт-Петербургской государственной медицинской академии им. И.И. Мечникова, медицинского института Орловского государственного университета и медицинского факультета Белгородского государственного университета.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Различные лекарственные формы «Фосфоглива» у интактных животных повышают активность каталазы и щелочной фосфатазы, «Фосфоглив Форте» и инъекции препарата стимулируют развитие гуморального и клеточного иммунного ответа.

2. При острой токсической индометациновой гепатопатии наибольшей эффективностью в коррекции иммунных, биохимических нарушений и показателей процессов репаративной регенерации обладают «Фосфоглив Форте» и «Фосфоглив» для инъекций.

3. У животных при интоксикации тетрахлорметаном максимальными иммуномодулирующими, гепатопротекторными и репаративными эффектами обладает инъекционная форма «Фосфоглива».

4. Для прогнозирования и оценки выраженности острого токсического поражения печени различными по химической структуре и механизму повреждающего действия токсикантами, наиболее диагностически ценными являются показатели кислородзависимой активности нейтрофилов периферической крови, содержание малонового диальдегида и активность каталазы.

Апробация работы. Основные положения диссертации представлены на научных конференциях Курского государственного медицинского университета: 69-й межвузовской научной конференции студентов и молодых ученых «Молодежная наука и современность» (Курск, 2004), 72-й итоговой межвузовской научной конференции студентов и молодых ученых «Молодежная наука и современность» (Курск, 2007), симпозиуме «Магнитные поля и здоровье человека» (Курск, 2007), 73-й итоговой межвузовской конференции студентов и молодых ученых «Молодежная наука: от фундаментальной идеи до инновационных проектов» (Курск, 2008), 73-й научной конференции КГМУ и сессии Центрально-Черноземного научного центра РАМН «Университетская наука: теория, практика, инновации» (Курск, 2008), I Международной дистанционной научной конференции «Инновации в медицине» (Курск, 2008), II Международной научной конференции молодых ученых-медиков (Курск, 2008), 74-й научной конференции КГМУ и сессии ЦентральноЧерноземного научного центра РАМН «Университетская наука: теория, практика, инновации» (Курск, 2009), 71-й международной итоговой студенческой научно-практической конференции, посвященной 130-летию со дня рождения профессора В.Ф. Войно-Ясенецкого и 65-летию КрасГМА (Красноярск, 2007), III Всероссийской конференции молодых ученых, организованной ВГМА им. Н.Н. Бурденко и КГМУ (Воронеж, 2009), XIII Международном конгрессе по реабилитации в медицине и иммунореабилитации (Дубай, 2008), VII съезде аллергологов и иммунологов СНГ (Санкт-Петербург, 2009), XVI Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2009).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 13 работ, в том числе в 3 изданиях, рекомендованных ВАК для публикаций материалов докторских и кандидатских диссертаций.

Объем и структура диссертации.

Диссертация изложена на 114 страницах машинописного текста, иллюстрирована 21 таблицами и 17 рисунками, состоит из введения, обзора литературы (2 главы), описания методов исследования, изложения собственных результатов (5 глав), заключения, выводов, практических рекомендаций, библиографического указателя, включающего 114 отечественных и 79 иностранных источника.

ВЫВОДЫ

1. Введение «Фосфоглива», «Фосфоглива Форте» или инъекционной формы препарата в дозе 1500 мг/кг (в пересчете на эссенциальные фосфолипиды) однократно в течение 14 суток интактным животным не влияет на процессы физиологической регенерации в гепатоцитах, повышает активность катал азы и щелочной фосфатазы в сыворотке крови; «Фосфоглив», «Фосфоглив Форте», в большей степени инъекции, стимулируют формирование гуморального иммунного ответа; инъекционная форма активирует развитие клеточного иммунитета.

2. В условиях токсического индометацинового поражения печени, сопровождающегося снижением иммунной реактивности, фагоцитоза и повышением кислородзависимой активности нейтрофилов периферической крови, введение «Фосфоглива» или инъекций «Фосфоглива» в течение 14 суток полностью нормализует процессы фагоцитоза, частично формирование гуморального и клеточного иммунного ответа и кислородзависимую активность полиморфно-ядерных лейкоцитов; инъекции препарата нормализуют развитие гиперчувствительности замедленного типа, кислородзависимую активность гранулоцитов, стимулируют гуморальный иммунный ответ и фагоцитоз.

3. У крыс, отравленных тетрахлорметаном, на фоне повышения иммунной реактивности, сниженной фагоцитарной и повышенной кислородзависимой активности полиморфноядерных лейкоцитов, введение «Фосфоглива» или «Фосфоглива Форте» корригирует развитие гуморального иммунного ответа, гиперчувствительности замедленного типа; «Фосфоглив Форте» нормализует фагоцитоз, а инъекции «Фосфоглива» - все показатели иммунной реактивности и функции нейтрофилов периферической крови.

4. При остром токсическом индометациновом поражении печени, введение «Фосфоглива» или «Фосфоглива» для инъекций частично, а «Фосфоглива Форте» полностью нормализует повышенные токсикантом содержание диеновых конъюгатов жирных кислот и малонового диальдегида; повышенную индометацином активность каталазы частично снижают «Фосфоглив Форте» и инъекции «Фосфоглива».

5. При токсической гепатопатии, вызванной отравлением четыреххло-ристым углеродом, введение «Фосфоглива» или «Фосфоглива Форте» не изменяет повышенный уровень продуктов перекисного окисления липидов, повышает активность каталазы; инъекционная форма препарата полностью нормализует содержание диеновых конъюгатов жирных кислот и малонового диальдегида и частично активность каталазы.

6. На модели острого токсического поражения печени, вызванного индометацином, «Фосфоглив», «Фосфоглив» для инъекций, в большей степени «Фосфоглив Форте» корригируют показатели цитолитического, холестатиче-ского и гепатодепрессивного биохимических синдромов поражения печени, при токсическом поражении печени, вызванном тетрахлорметаном, более высокой эффективностью обладает инъекционная форма препарата.

7. На животных с острой индометациновой или тетрахлорметановой токсической гепатопатией «Фосфоглив» не влияет, «Фосфоглив Форте», в большей мере инъекционная форма препарата стимулируют процессы репа-ративной регенерации гепатоцитов.

8. Для прогнозирования развития и оценки степени выраженности острого токсического поражения печени наиболее диагностически ценным является определение показателей кислородзависимой активности нейтрофилов периферической крови, содержания малонового диальдегида и активности каталазы.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Рекомендовать клиническую апробацию препаратов «Фосфоглив» для инъекций и «Фосфоглив Форте» в качестве иммуномодулирующих средств при острой токсической гепатопатии, сопровождающейся нарушениями иммунного статуса.

2. Использовать для прогнозирования развития и оценки степени выраженности токсического поражения печени показатели кислородзависимой активности нейтрофилов периферической крови, содержание малонового ди-альдегид и активность каталазы.

3. Использовать в учебном процессе медицинских вузов знания об иммуномодулирующих и гепатопротекторных эффектах различных лекарственных форм «Фосфоглива» при токсическом поражении печени.