Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Иммуномодулирующая эффективность мексикора и милдроната при эссенциальной артериальной гипертензии

На правах рукописи

Горетая Мария Олеговна

ИММУНОМОДУЛИРУЮЩАЯ ЭФФЕКТИВНОСТЬ МЕКСИКОРА И МИЛДРОНАТА ПРИ ЭССЕНЦИАЛЬНОЙ АРТЕРИАЛЬНОЙ ГИПЕРТЕНЗИИ (клинико-экспериментальное исследование)

14.00.36 — аллергология и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Курск - 2007

0030712БО

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Курский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Научные руководители:

доктор медицинских наук, профессор Конопля Евгения Никитична доктор медицинских наук, профессор Михии Вадим Петрович

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Горяйнов Игорь Иванович доктор медицинских наук, профессор Земсков Андрей Михайлович

Ведущее учреяедение:

Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Российский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Защита диссертации состоится « ¿?$"~>> мая 2007 г в « (& » часов на заседании диссертационного совета Д 208 039 01 при Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Курский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» по адресу 305041, г Курск, ул К Маркса, 3

I

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО КГМУ Рос-здрава

Автореферат разослан « » 0-Х-<—{ ^СсЛ 2007 г

Ученый секретарь диссертационного совета

Калуцкий П.В.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Проблема лечения и профилактики осложненной артериальной гипертонии является на сегодняшний день одной из ведущей в современной медицине в связи с ранней инвалидизацией, повышенным риском развития сердечно-сосудистых осложнений и преждевременной смертности (Перова Н В , 2004) Важная роль в развитии сосудистых осложнений принадлежит дисфункции эндотелия При артериальной гипертензии было доказано наличие эндотелиальной дисфункции для системы периферической, коронарной микро- и макроциркуляции (Perticone F , 2001) Развивающаяся эндоте-лиальная дисфункция в условиях ЭАГ обусловлена в первую очередь активацией свободнорадикальных процессов, приводящих к уменьшению синтеза эндогенного NO, являющегося самым мощным эндогенным вазодилататором (Воробьева Е Н и др , 2006, Davignon J , Ganz Р , 2002, Green DJ и др , 2004)

Генерация в результате ишемических, травматических, токсических и других воздействий на ткани свободных радикалов оказывает непосредственное влияние на выраженность иммунного ответа (Лазарева ГА и др , 2006) Активация процессов ПОЛ приводит к образованию большого количества окисленного оксида азота - пероксинитрита, который, в свою очередь, является достаточно мощным окислителем и усиливает процессы ремоделирования сосудов и апоптоз клеток (Battinelh Е и др , 2000, Зотова ИВ и др , 2002)

При этом окислительный стресс является одним из ведущих факторов, определяющих характер иммунологической реактивности организма в целом и реакцию местного иммунитета (Зенков Н К и др , 2001) Изучению иммунной системы при артериальной гипертензии посвящены немногочисленные работы В связи с этим, исследования механизма развития дисфункции эндотелия, изменений иммунной системы, фармакологическая коррекция возникающих нарушений у больных артериальной гипертонией представляет важную задачу (Амирова АР и др , 2006)

Перспективными в этом отношении являются препараты милдронат и мексикор, гипоксантные и антиоксидантные эффекты которых достаточно полно изучены как в эксперименте, так и в клинике (Иванов Ю В и др , 2000, Васильев ИТ и др , 2000, Сараева Ю В , 2005, Тюриков П Ю , 2005), тогда как исследования по изучению их иммунокорригирующих свойств имеют одиночный характер в экспериментальной практике (Лазарева Г А , 2006)

Все вышесказанное обусловливает необходимость дальнейшего изучения как в экспериментальных, так и в клинических условиях иммуномодулирую-щих свойств мексикора и милдроната

Цель работы: установление иммуномодулирующей активности мексикора и милдроната в эксперименте и у больных эссенциальной артериальной ги-пертензией 2-3 степени

Задачи исследования:

1 Экспериментально изучить закономерности влияния мексикора и мил-дроната на развитие гуморального иммунного ответа и гиперчувствительности замедленного типа

2 Выявить в условиях эксперимента воздействие мексикора и милдрона-та на функциональное состояние нейтрофилов периферической крови

3 Установить иммунокорригирующие эффекты мексикора и милдроната при эссенциальной артериальной гипертензии 2-3 степени

4 Оценить клиническую эффективность включения мексикора и милдроната в комплексную терапию больных эссенциальной артериальной гипертен-зией 2-3 степени

5 Разработать способ коррекции нарушений иммунного статуса у пациентов с артериальной гипертензией 2-3 степени с включением в комплексную фармакотерапию мексикора и милдроната

Научная новизна. В эксперименте установлено, что мексикор и милдро-нат стимулируют формирование гуморального иммунного ответа, гиперчувствительности замедленного типа и снижают функционально-метаболическую активность нейтрофилов периферической крови Уточнены характер и степень нарушений показателей иммунного статуса у больных эссенциальной артериальной гипертензией 2-3 степени и обоснована необходимость включения дополнительно в традиционную фармакотерапию этих больных иммунокорриги-рующих средств Доказана эффективность применения милдроната и мексикора у данной категории больных в коррекции нарушенных показателей Т- и В-клеточного звена иммунитета, баланса про- и противовоспалительных цитоки-нов и процессов свободнорадикального окисления липндов Установлена кли-нико-иммуннологическая эффективность использования мексикора и милдроната у больных эссенциальной артериальной гипертензией 2-3 степени Выявлена большая эффективность мексикора в сравнении с милдронатом в коррекции нарушения иммунного гомеостаза у пациентов с эссенциальной артериальной гипертензией.

Практическая значимость. Экспериментально обоснована целесообразность использования милдроната и мексикора в качестве иммунокорриги-рующих средств в клинической практике Углублены существующие представления о роли иммунной системы в патогенезе эссенциальной артериальной гипертензиии Клинически подтверждены иммуномодулирующие эффекты милдроната и мексикора при лечении больных эссенциальной артериальной гипертензией 2-3 степени Разработан способ иммунокоррекции у больных артериальной гипертензией с использованием мексикора и милдроната

Разработанные рекомендации внедрены в работу МУЗ «Городская клиническая больница № 1 и № 3» г Курска, медицинского отдела УВД Курской области, Курской и Брянской областных клинических больниц

Материалы диссертации включены в учебные рабочие программы и используются в лекционных курсах и на практических занятиях ряда кафедр Курского, Российского, Самарского, Воронежского и государственных медицинских университетов и академий и медицинского факультета Белгородского государственного университета

Основные положения, выносимые на защиту.

1 Мексикор и милдронат стимулируют формирование гуморального иммунного ответа и гиперчувствительности замедленного типа на эритроциты барана и супрессируют кислородзависимую активность нейтрофилов у интактных животных

2 Уточнены характер и степень нарушений иммунного статуса у больных эссенциальной артериальной гипертензией 2-3 степени

3 Мексикор и милдронат у больных эссенциальной артериальной гипертензией 2-3 степени корригируют большинство нарушенных показателей иммунного статуса

4 Разработан способ иммунокоррекции у больных эссенциальной артериальной гипертензией 2-3 степени с включением мексикора или милдроната в традиционную фармакотерапию

Апробация работы. Основные положения диссертации представлены на научных конференциях Курского государственного медицинского университета и Центрально-Черноземного научного центра РАМН (2006), конференции Российской академии естествознания (Мальта, 2006), Российской научно-практической конференции «Современные технологии в иммунологии иммунодиагностика и иммунотерапия» (Курск, 2006), VI Съезде аллергологов и иммунологов СНГ, Российском национальном конгрессе аллергологов и иммунологов, III Российской конференции по иммунотерапии (Москва, 2006), совместном заседании кафедр пропедевтики внутренних болезней, биологической химии, микробиологии, внутренних болезней № 1 и № 2 Курского государственного медицинского университета (2007)

Публикации. По материалам диссертации в центральной и местной печати опубликовано 7 работ, в том числе в 2 рекомендуемых изданиях ВАК РФ, в которых содержится полный объем информации по теме диссертации

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 112 страницах машинописного текста, иллюстрирована 18 таблицами и 5 рисунками, состоит из введения, обзора литературы (2 главы), описания методов исследования, изложения собственных результатов (5 глав), заключения, выводов, практических рекомендаций, библиографического указателя, включающего 105 отечественных источников и 91 иностранных

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ Материалы и методы исследования Экспериментальные исследования. Эксперименты проведены на 168 крысах Вистар массой 120-180 г В опытах использовали животных, прошедших карантинный режим вивария Курского государственного медицинского университета и не имевших внешних признаков каких-либо заболеваний Все животные содержались в одинаковых условиях, на обычном пищевом режиме Для получения статистически достоверных результатов группы формировали из 8-10 животных В контрольные и опытные группы входили животные одного возраста, полученные из питомника одновременно Разброс в группах по исходной массе не превышал ±10% Все исследования проводили в одно и то же время суток с 8 до 12 часов с соблюдением принципов, изложенных в Конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и других целей (г Страсбург, Франция, 1986) Животных выводили из опыта декапитацией под эфирным наркозом Исследованию подвергали плазму, сыворотку крови, полинуклеарные лейкоциты, лимфоциты периферической крови, ткань селезенки и подколенных лимфатических узлов

Используемые препараты, способ и кратность их введения экспериментальным животным представлены в таблице 1 Способ введения препарата соответствовал рекомендациям, приведенным в справочнике М Д Машковского «Лекарственные средства», и инструкциям по применению препаратов

Таблица 1

Применение препаратов _

Разовая доза, мг/кг Схема введения

Препарат Фирма-изготовитель Способ введения Количество введений Интервал между введениями, часы

Милдронат «Оппс1ек5», Латвия внутримышечно 0,3 3,0 30,0 5 12

Мексикор «ЭкоФарм-Инвест», Россия внутримышечно 1,0 10,0 100,0 20 24

Для развития гуморального иммунного ответа ЭБ вводили внутрибрю-шинно однократно из расчета 2х109 клеток на 1 кг массы тела Выраженность ГИО оценивали на пятые сутки после иммунизации путем определения в селезенке числа антителообразующих клеток (Мальберг К , Зигль Э , 1987)

ГЗТ у крыс индуцировали внутрибрюшинным введением 108 ЭБ в 0,5 мл 0,15 М раствора натрия хлорида (сенсибилизирующая доза) Через 4 суток в подушечку стопы правой лапки вводили 10б ЭБ в 0,1 мл физраствора (раз-

решающая доза) Спустя 24 ч выделяли регионарный (по месту введения ЭБ) и контрлатеральный подколенный лимфоузлы О выраженности ГЗТ судили по разнице масс регионарного и контрлатерального лимфатических узлов и по разнице количества в них кариоцитов (Федосеева Т.В и др , 1993)

Клинические исследования. Основной комплекс исследований, представленных в работе, выполнен на базе МУЗ «Городская клиническая больница № 3» и МУЗ «Городская клиническая больница № 1» г Курска Обследование пациентов проводилось с 2004 г по 2006 г

Под постоянным наблюдением было 45 пациентов с верифицированным, согласно рекомендациям ВОЗ/МОГ (1999), диагнозом эссенциальная артериальная гипертензия II-IH степени, основанном на данных комплекса клинико-инструментальных методов обследования Ведущим критерием включения в исследование больных ЭАГ было наличие у них стойкой ночной гипертензии и «поп-dipper» типа суточной кривой по результатам двойного СМАД для исключения влияния случайных факторов на профиль АД Все больные находились на безнитратной диете

Группу контроля составили 30 здоровых доноров (14 женщин и 16 мужчин), средний возраст которых составил 32,7±3,1 лет Критерии включения пациентов в исследование: мужчины и женщины в возрасте 40-60 лет, артериальная гипертензия 2-3 степени с анамнезом заболевания более 5 лет

Больным проводили общее клиническое обследование, общий анализ крови и мочи, ЭКГ в покое, в 12 общепринятых отведениях, консультацию окулиста, биохимические анализы крови (холестерин, триглицериды, глюкоза, билирубин, активность аланин- и аспартатаминотрансфераз, креатинин, мочевина, общий белок)

Критериями исключения пациентов из исследования были гемодинами-чески значимые нарушения ритма и проводимости, пороки сердца, инфаркт миокарда, постинфарктный кардиосклероз и прогрессирующая стенокардия или наличие указаний на них в анамнезе, симптоматическая артериальная гипертензия, хроническая сердечная недостаточность более II ФК в соответствии с классификацией Нью-Йоркской ассоциации кардиологов (NYHA), сахарный диабет или нарушенная толерантность к глюкозе

Исследования основывались на применении открытого рандомизированного метода лечения различными схемами пациентам 1-й группы (15 человек) назначалось традиционное лечение, включающее ингибиторы ангиотензинпрев-ращающего фермента (эналаприл - 10,0-20,0 мг/сут) и /3-блокаторы (атенолол -50-100 мг/сут), пациентам 2-й группы (15 человек) дополнительно назначался мексикор (400,0 мг/сут в течение 2 месяцев), пациентам 3-й группы - милдронат (750,0 мг/сут в течение 2 месяцев) Подбор дозы препаратов осуществлялся путем пошаговой титрации доз препаратов

Группы формировались по следующим стратификационным признакам степень ЭАГ (2,3 степень), пол (мужской, женский), возраст (менее 45 лет, 46 -55 лет, более 55 лет), длительность ЭАГ (5-10 лет, более 10 лет) и были сопоставимы друг с другом по оцениваемым параметрам

Лечение мексикором или милдронатом проводилось на фоне длительной антигипертензивной терапии вышеуказанными препаратами, которые применялись больными не менее 4-х месяцев до начала исследования и в течение всего периода лечения мексикором или милдронатом Дозовые режимы гипотензивных средств определялись их эффективностью так, чтобы величина артериального давления достигла целевого уровня (не выше 140/90 мм рт ст) При этом у всех обследуемых пациентов сохранялся неблагоприятный «поп-dipper» тип суточного профиля АД

Оценка качества проводимой терапии осуществлялась с помощью анализа динамики показателей СПАД, полученных путем СМАД СМАД проводилось с использованием монитора АВРМ-02 («MEDITECH», Венгрия) Исследование проводилось в 1, 5 и 10-е сутки лечения с интервалами измерения 15 минут днем (во время бодрствования пациента) и 30 минут ночью (во время сна) (Кобалава Ж Д , Котовская Ю В , 1999) В ходе мониторирования проводилась оценка следующих параметров усредненные показатели систолического, диастолического, среднего, пульсового АД и ЧСС за сутки, день, ночь, почасовые, максимальные и минимальные значения АД и ЧСС за различные периоды суток, показатели «нагрузки давлением» индекс времени гипертензии, индекс площади гипертензии, суточный индекс - степень ночного снижения АД

Оценка самочувствия пациента, его двигательной активности, продолжительности сна проводилась с помощью дневниковых записей в день проведения мониторирования

Иммунологические методы исследования. При оценке гемограмм брались за основу физиологические нормы, соответствующие международной системе единиц (СИ) в экспериментально-клинических исследованиях (Меньшиков ВВ, 1987) Кроме этого, определялись индексы сдвига лейкоцитов по Н И Ябучинскому и лейкоинтоксикационный

В работе исследован иммунный статус больных и здоровых лиц с помощью наборов тестов I и II уровней по Р В Петрову (Караулов АВ, 1999) Фенотип лимфоцитов определялся методом иммунофлюоресцеитного анализа с помощью моноклональных антител (ООО «Сорбент», г Москва) к структурам CD3 (общие Т-лимфоциты), CD 19 (В-лимфоциты), CD4 (Т-хелперы), CD8 (ци-тотоксические клетки), CD 16 (NK-ютетки), CD25 (маркер ранней активации), CD95 (индукторный фактор апоптоза) (Чередеев АН, Горлина НК, Козлов И Г, 1999).

Содержание С3, С4 компонентов комплемента определяли в плазме крови методом радиальной иммунодиффузии по Манчини, используя диагностиче-

ский набор ООО НПЦ «Медицинская иммунология» (г Москва). Количественная оценка уровней ФНОа, ИЛ-4, ИЛ-6, ИЛ-10, ИЛ-1/3 проводилась с помощью набора реагентов РгоСоп (ООО «Протеиновый контур», г Санкт-Петербург) методом твердофазного иммуноферментного анализа

Функционально-метаболическую активность нейтрофилов периферической крови экспериментальных животных и пациентов с ЭАГ оценивали по величинам фагоцитарного числа, фагоцитарного индекса и индекса активности фагоцитов (Медведев А Н , Чаленко В В , 1991), показателей спонтанного и индуцированного опсонизированным и неопсонизированным зимозаном НСТ-теста, функциональным резервам нейтрофилов и степени дискретности (Зинкин В Ю , Годков М А , 2004)

Определение биохимических параметров. Выраженность перекисного окисления липидов экспериментальных животных и пациентов с ЭАГ оценивали по содержанию диеновых конъюгатов и малонового диальдегида (Бенисе-вич В И , Идельсон Л И , 1973, Гаврилов В Б , Мишкорудная М И , 1983) Кроме этого, в сыворотке крови определяли активность каталазы (Подильчак М А , 1967)

Статистическая обработка материала. Статистическую обработку результатов исследования проводили путем вычисления средних арифметических (М), стандартных ошибок (а) и стандартных ошибок средних (ш) (Лакин Г Ф , 1980) Существенность различий средних величин оценивали, используя непараметрические методы критерии Вилкоксона, Крускала-Уоллиса, Фишера, Фридмана и непараметрический вариант критерия Ньюмена-Кейлса, а также коэффициент ранговой корреляции Спирмена Статистически значимыми считали различия с р<0,05 (Гублер Е В , Генкин А А , 1973)

Степень иммунных расстройств для иммунологических показателей рассчитывали по формуле (Земсков А М и др , 1994)

Показатель конкретного больного

--1 х 100%

Показатель, принятый за норму Если рассчитанная ветчина имеет знак "минус", у пациента определяется иммунная недостаточность, при знаке «плюс» — гиперфункция иммунной системы Когда получашая величина пежит в интервале от 1 до 33%, то это соответствует первой степени иммунных расстройств, от 34 до 66% — второй, ботее 66% — третьей

По всем показателям рассчитывали коэффициент диагностической ценности (Земсков В М и др , 1996)

К] =

2(ст,2+а22) (М, - М2)2

где а] Ст2 - среднее квадратичное отклонение, М| и Мт - средние арифметические величины показателей

С помощью коэффициента диагностической ценности определяли фор-

мулу расстройств иммунной системы путем выбора из всех изученных параметров трех ведущих, наиболее отличающихся от уровня нормы (Земсков В М, Земсков А М , Золоедов В И , 1993)

Рейтинговый алгоритм устанавливали по величине степени иммунных расстройств, для чего исследованные параметры иммунного статуса выстраиваются в порядке снижающейся значимости отличий от заданных значений (Земсков А М , 1986)

Степень изменения иммунологических показателей под влиянием фармакологических средств и физиотерапевтических факторов определялась по формуле (Земсков А М , Земсков В М , Полякова С Д , 1997)

% больных со 2-3 степенью расстройств показателей после лечения разработанными методами

1 _ _______х 100%

% больных со 2-3 степенью расстройств показателей после базисного лечения

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Влияние мексикора и милдроната на иммунную реактивность и ан-тиоксидантный статус у ннтакгных животных. Введение мексикора интакт-ным животным в дозе 1,0 мг/кг не влияет на количество иммунных АОК в селезенке, тогда как его введение в дозах 10,0 и 100,0 мг/кг равнозначно повышает количество АОК Инъекции милдроната в дозе 0,3 не влияют на формирование ГИО на ЭБ, введение его в дозе 3,0 и 30,0 мг/кг повышает содержание иммунных АОК в селезенке, но в меньшей степени, чем в группе животных, получавших мексикор

Аналогичная динамика наблюдается при изучении влияния иследованных фармакологических препаратов на формирование ГЗТ на ЭБ Выявлено, что мексикор, вводимый в дозе 10,0 мг/кг, повышает РМЛ и РКЛ более чем в 2 раза по сравнению с контрольными животными, тогда как инъекции милдроната в дозе 3,0 мг/кг повышают показатели ГЗТ в меньшей степени (табл 2)

Таблица 2

Влияние мексикора и милдроната на иммунологическую реактивность, антиоксидантный статус и функцию нейтрофилов

Пнтактные живогиые ГИО ГЗТ ФМА нейтрофилов периферической крови Продукты ПОЛ Активность ка-талазы

Фагоцитарная активность Кислородзави-симая активность

Милдронлт т Не влияет ^ Не влияет т

Мексикор ТТ Не влияет 1 Не влияет ТТ

Оценка влияния цитопротекторов на показатели ПОЛ крови в группе ин-тактных животных показала, что инъекции как мексикора (10,0 мг/кг), так и

милдроната (3,0 мг/кг) никак не отражались на концентрации продуктов ПОЛ МДА и ДК При этом оба препарата повышали активность каталазы в сыворотке крови у данной группы животных При этом мексикор в большей степени, чем милдронат, повышал активность фермента (табл 2)

Таким образом, мексикор и милдронат у интактных животных усиливал формирование ГИО и ГЗТ на ЭБ и повышал активность каталазы - одного из главных ферментов антиоксидантной системы защиты организма, не влияя на концентрацию в сыворотке крови продуктов ПОЛ При этом установлено, что иммуностимулирующий эффект мексикора был выше, чем у милдроната

Фагоцитарная активность полиморфноядерных лейкоцитов периферической крови опытных животных, получавших исследованные препараты, от интактных крыс статистически не отличалась (табл 2)

При изучении кислордозависимого метаболизма нейтрофилов периферической крови выявлено, что мексикор, вводимый в дозе 10,0 мг/кг, снижает показатель НСТ-теста спонтанного более чем в 2 раза, показатели индуцированного зимозаном опсонизированным, так же, как и функциональные резервы, у данной группы животных повышаются, а показатель индуцированного неопсо-низированным зимозаном и степень дискретности ответа у нейтрофилов остался в пределах нормы

Милдронат в дозе 3,0 мг/кг в большей степени, чем мексикор, снижает НСТ-тест спонтанный, но в отличие от него снижает НСТ-тест стимулированный неопсонизированным зимозаном, не влияя на НСТ-стим опсонизированным зимозаном При этом функциональные резервы в ответ на стимуляцию у данной группы животных повышаются, а КО остается в пределах контрольных значений

Полученные результаты можно расценить как сипрессирующее влияние препаратов на кислородзависимую активность нейтрофилов периферической крови у интактных животных (табл 2)

Показатели иммунного статуса у больных эссенциальнои артериальной гнпертензией без и при включении мексикора и милдроната в традиционную фармакотерапию. У больных ЭАГ при первичном обращении выявлено повышение общего содержания в крови лейкоцитов за счет повышения абсолютного и относительного повышения количества лимфоцитов, тогда как абсолютное и относительное количество палочкоядерных лейкоцитов снижено У таких пациентов наблюдается эозинопения (почти в 3 раза) Кроме этого, имеет место снижение как ЛИИ, так и ИСЛ (на 11,1% и на 20,3% соответственно)

При изучении иммунофенотипированных лимфоцитов у больных артериальной гнпертензией по сравнению со здоровыми донорами установлено уменьшение относительного и абсолютного содержания общего количества Т-лимфоцитов (СБЗ) и Т-хелперов (СЭ4) и повышение относительного содержа-

ния МК-клеток (С016), клеток-индукторов фактора апоптоза (С095), клеток-маркеров ранней активации (СБ25), при этом количество С08-лимфоцитов (цитотоксических Т-клеток) не изменяется (рис 1)

При исследовании показателей В-системы иммунитета у пациентов, страдающих ЭАГ, по сравнению с группой здоровых доноров, выявлено повышение относительного (в 1,6 раза) содержания В-лимфоцитов (С019) (рис 1)

При исследовании концентрации в плазме крови цитокинов и компонентов системы комплемента выявлено, что по сравнению со здоровыми донорами при ЭАГ наблюдается значительное повышение концентрации провоспали-тельных цитокинов Концентрация ФНОа повышается в 3,1 раза, ИЛ-1|3- в 1,8 раза, а ИЛ-6 - на 31,1% При этом концентрация противовоспалительного цито-кина ИЛ-4 остается на уровне контроля, тогда как концентрация ИЛ-10 повышается на 45,6% по сравнению со здоровыми донорами (рис 1)

При ЭАГ резко повышается активность системы комплемента, что проявляется повышением концентрации в плазме крови С3 и С4 компонентов системы комплемента (в 2,6 и 1,6 раза, соответственно), что согласуется с данными других авторов (Бочарова К А , Князева Л А , Степченко М А , 2005)

CD3

Рис 1. Показатели клеточного звена иммунитета, цитокинового статуса и системы комплемента у бочьпых ЭАГ II-III степени по сравнению с группой здоровых доноров Обозначения. 1 - радиус окружности - показатели у здоровых доноров добровольцев (1 группа), 2---показатечи у больных ЭАГ II-III степени до лечения (2 группа), 3 -О - Р < 0,05 между показателями обеих групп

Таким образом, у больных артериальной гипертензией 2-3 степени имеет место снижение показателей Т-звена и повышение В-звена иммунитета, активация системы комплемента и развитие системного воспаления, проявляющегося повышением концентрации провоспалительных (ФНОа, ИЛ-1/3, ИЛ-б) и противовоспалительных цитокинов (ИЛ-10) (рис 1)

Традиционная фармакотерапия у таких пациентов увеличивает абсолютное количество палочкоядерных нейтрофилов, снижает количество NK-клеток (CD16), нормализует количество клеток-маркеров ранней активации (CD25) и не влияет на количество CD3, CD4, CD19, СВ95-лимфоцитов, нормализует концентрацию в плазме крови ИЛ-6 и позволяет снизить, но не до контрольных значений, концентрацию ИЛ-1/3 и С4 компонента системы комплемента Концентрация ИЛ-4, ФНОа и С3 компонента системы комплемента после традиционной фармакотерапии остается без изменений Интересной особенностью является наблюдаемое после традиционного лечения таких пациентов повышение концентрации противовоспалительного цитокина ИЛ-10

Традиционная фармакотерапия в сочетании с мексикором, по сравнению с его отсутствием, дополнительно нормализует в крови содержание CD25 и С019-лимфоцитов, снижает концентрацию ФНОа, ИЛ-1/3 и С4 компонента системы комплемента, еще больше повышает концентрацию ИЛ-10 (концентрация его превышает показатели до лечения более чем в 2,5 раза) (рис 2)

По сравнению с пациентами, получавшими традиционную терапию, у больных после включения милдроната незначительно корригируется эозинопе-ния, повышается содержание в крови СОЗ-лимфоцитов, снижается количество В-лимфоцитов и клеток-индукторов фактора апоптоза (CD95) (рис 2)

Включение милдроната также позволяет снизить концентрацию ФНОа и нормализовать содержание в плазме крови ИЛ-1/3 При этом в данной группе пациентов не изменяется концентрация изучаемых компонентов системы комплемента и меньше, чем в группе больных, получавших мексикор, повышается концентрация противовоспалительного цитокина - ИЛ-10 (рис 2)

Таким образом, традиционное лечение у больных ЭАГ 2-3 степени корригирует меньшее количество нарушенных показателей клеточного и гуморального звеньев иммунного статуса по сравнению с включением в него мекси-кора или милдроната Данные препараты эффективно корригируют и нормализуют большинство показателей Т- и В-звена иммунитета, концентрацию компонентов системы комплемента и провоспалительных цитокинов в плазме крови

CD3

Рис 2 Показатели клеточного звена иччунигета, цитокинового стагуса и системы комплемента у бо1ьных ЭАГ П-Ш степенн после традиционного лечения, дополненного мек-енкором или милдронатом Обозначения 1 - радиус окружности - показатели у бо п.пых ЭАГ II-III степени nocie традиционного лечения (1 группа), 2---показатели у больных ЭАГ II-

III степени после традиционного лечения + мексикор (2 группа), 3----

- показатечи у больных ЭАГ И-Ш степени носче традиционного лечения + милдронат (3 группа), 4 - О- р < 0,05 между показателями 2, 3 групп по отношению к 1 группе

Состояние нейтрофилыгого звена и антиоксидантного статуса у больных эссенциальной артериальной гнпертензней без и с включением в терапию мексикора и милдроната. Исследование фагоцитарной активности нейтрофилов периферической крови показало, что у больных ЭАГ традиционная терапия не оказывала на нее какого-либо воздействия, а изученные параметры не отличались от соответствующих значений в группе здоровых доноров

Включение в комплексную терапию мексикора приводило к повышению количества фагоцитирующих клеток (ФИ повышался на 16,3%), однако не влияло на число поглощенных ими частиц латекса и индекс активности фагоцитоза

После использования милдроната наблюдалось снижение всех изученных показателей фагоцитарной активности полиморфноядерных лейкоцитов по сравнению с больными, получавшими традиционную фармакотерапию ФИ на 13,1%, ФЧ - на 27,1%, а ИАФ - на 35,7%

Показатели кислородзависимой активности нейтрофилов периферической крови у больных ЭАГ до и после традиционного лечения статистически не отличались от показателей контрольной группы (табл 3)

На фоне комплексного лечения, включавшего мексикор, уровни спонтанного и стимулированных опсонизированным и неопсонизированным зимозаном НСТ-тестов снижались (на 55,0, 43,0 и 46,8%, соответственно), при этом оказался повышенным КАо (на 34,8 %) (табл 3)

Таблица 3

Влияние мекснкора и милдроната на кислородзавнсимую активность

нейтрофилов периферической крови у больных ЭАГ

Показатели 1 2 1 3 | 4 | 5

Здоровые Больные ЭАГ

До лечения Традиционное лечение Традиционное лечение + мексикор Традиционное лечение + милдронат

тОО-си 1,31±0,14 1,29±0,19 1,37±0,21 0,58±0,08 ОДШ.ОЗ'1"4

тСЮ-ст (н/з) 1,41 ±0,20 1,34±0,10 1,39±0,09 0,74±0,09"'' 0,52±0,07"1

т(Ю-ст (о/з) 1,54±0,16 1,61±0,13 1,58±0,19 0,90±0,09''3 0,85±0,04-13

КАо 1,18±0,15 1,25±0,15 1,15±0,11 1,55±0,14'1"' 2,07±0,18"м

КАн 1,08±0,07 1,04±0,07 1,02±0.03 1,28±0,10 1,27±0,28

КО 1,09±0,23 1,20±0,23 1,14±0,31 1,22±0,10 1,63±0,13"м

Примечание: звездочкой отмечены достоверные отличия средних арифметических (р < 0,05), а цифры рядом со звездочкой - по отношению к показателям какой группы эти разтичия

После применения милдроната наблюдалось еще более выраженное угнетение НСТ-тестов спонтанного и стимулированного неопсонизированным зимозаном (на 70,1% и 46,2%, соответственно), но ПСТ-тест, стимулированный опсонизированным зимозаном, был таким же, как и в группе больных, получавших мексикор За счет описанных изменений у этих пациентов наблюдались максимальные значения КАо и КО, что свидетельствует о росте резерва клеточной дискретности (табл 3)

Исследование концентрации продуктов перекисного окисления и активности каталазы - ключевого фермента антиоксидантной системы защиты организма у пациентов, страдающих ЭАГ, выявило развитие окислительного стресса, проявляющегося повышением концентрации диеновых конъюгатов (в 2,1 раза) и малонового диальдегида (почти в 2 раза) и снижением активности каталазы (на 27,6%)

Традиционная фармакотерапия больных с ЭАГ не влияет на активность каталазы в сыворотке крови и концентрацию МДА, но снижает содержание ДК

Применение дополнительно мексикора у пациентов с ЭАГ позволяет нормализовать концентрацию ДК и активность каталазы в сыворотке крови и снизить содержание МДА Назначение милдроната таким пациентам на фоне традиционной фармакотерапии приводит лишь к коррекции концентрации изучаемых продуктов ПОЛ и не влияет на активность каталазы

Резюмируя все вышесказанное, можно сделать вывод о том, что нарушенные показатели иммунного статуса и состояния ПОЛ у больных эссенци-альной артериальной гипертензией недостаточно полно корригируются традиционной фармакотерапией (табл 4)

Включение в комплексную фармакотерапию у данных пациентов мексикора или мидцроната приводит к коррекции или нормализации изучаемых показателей иммунитета и ПОЛ (табл 4)

Очень важным является установление наиболее важных в прогностическом плане показателей иммунного статуса при различных видах патологии, что позволяет использовать их для оценки степени нарушения иммунного го-меостаза у данной категории больных Для этого в данном исследовании составлялся рейтинговый алгоритм иммунных нарушений и рассчитывались формулы расстройств иммунной системы у больных ЭАГ 2-3 степени до и после различных схем лечения

Рейтинговый алгоритм иммунологических показателей у пациентов с ЭАГ до лечения со II-III СИР включает 10 показателей из 19 исследованных (6 из которых имеют III СИР, 4 остальных - II СИР) ФРИС составила ФНОа+3, С3+з, и CD95+3

Тогда как рейтинговый алгоритм иммунологических показателей у пациентов ЭАГ на фоне традиционной фармакотерапии со II-III СИР включает 9 показателей (5 показателей имеют III СИР, а 4 - II СИР) ФРИС составила ФНОа з, ИЛ10+3 и СЗ+3

После добавления в традиционную схему лечения ЭАГ мексикора рейтинговый алгоритм иммунологических показателей у таких пациентов со II-III СИР включает 5 показателей (4 показателя имеют III СИР, лишь один - II СИР) ФРИС составила ИЛ10+3, СЗ+3 и CD16+3

Назначение же дополнительно милдроната приводит к тому, что у больных ЭАГ со II-III СИР включает 6 показателей (5 показателей имеют III СИР, лишь 1-Й СИР) ФРИС составила ИЛ10+3, ФНОа^иСЗ^

Таким образом, использование мексикора позволило максимально улучшить показатели иммунного статуса у больных ЭАГ 2-3 степени по сравнению с традиционной фармакотерапией и терапией, дополненной милдронатом, что проявляется снижением количества показателей, требующих коррекции, те. имеющих II и III СИР

Таблица 4

Состояние иммунного статуса и состояние ПОЛ у больных эссенциальной артериальной гипсртензней

2-3 степени до и после различных схем лечения

Больные Т-звено иммунитета В-звено иммунитета ФМА нейтрофилов периферической крови Цптокнповый стагус Система комплемента Продукты ПОЛ Активность ка-талазы

фагоцитарная кнслородза-висимая

провоспа-лительные противовоспалительные

До лечения П Т - - Г Г 1 т

Традициогаюе лечение не влияет не влияет пе влияет пе влияет слабая коррекция п не влияет пе влияет не влияет

Традиционное лечение + мек-сикор коррекция нормализует т коррекция ш коррекция нормализация нормализация

Традиционное лечение + мил-ронат коррекция коррекция 1 и коррекция тт не влияет коррекция не влияет

Примечание -1- - снижение, Т - повышение по сравнению с показателями группы здоровых доноров

При этом схема фармакотерапии, включавшая милдронат, оказалась по эффективности средней между традиционной терапией больных ЭАГ и лечением с включением мексикора

При определении собственных иммуномодулирующих эффектов схемы лечения, включающей дополнительно мексикор или милдронат, по сравнению с традиционной терапией, установлено, что практически по всем показателям иммунного статуса обе схемы эффективнее традиционной, так как средняя степень коррекции практически по всем показателям оказалась положительной величиной Сумма показателей коррекции для мексикора составила 335, а для милдроната 182 балла, что свидетельствует о более эффективной схеме лечения, дополненной мексикором, чем при использовании милдроната

Влияние мексикора и милдроната на суточный профиль артериального давления больных эссенцнальной артериальной гипертензией. Подтверждением важности наблюдаемых положительных сдвигов в иммунном статусе от применения мексикора и милдроната у больных эссенцнальной артериальной гипертензией является определение их клинической эффективности

Медикаментозная терапия на уровень АД практически во всех случаях приводила к снижению средних цифр до уровня 140/90 мм рт ст, то есть они приближались к целевым значениям Вместе с тем показатели «нагрузки» давлением у всех больных оставались повышенными (ИВ > 50%), а степень ночного снижения АД - недостаточной (СИ<10%) Достоверных различий по указанным параметрам между исследуемыми группами до лечения обнаружено не было, что свидетельствует об исходной однородности исследуемых групп больных

В результате анализа полученных данных суточного мониторирования было выявлено, что при сочетанной терапии мексикором и гипотензивными препаратами в среднем за сутки как систолическое, так и диастолическое АД достоверно не изменилось В частности, среднесуточное САД снизилось в основной группе всего лишь на 1,44% и 4,4% соответственно для лиц, дополнительно принимавших мексикор или милдронат

В контрольной группе были получены аналогичные результаты САД уменьшилось на 0,86% в группе лиц, получавших только атенолол и эналапри-лом ДАД в группе больных, получавших сочетанную терапию, включавшую мексикор или милдронат, в среднем за сутки уменьшилось на 3,8% и 4,45% соответственно В контрольной выборке ДАД снизилось на 1,0% При этом статистические различия в динамике показателя во всех случаях отсутствовали Отсутствие достоверного снижения среднесуточного АД со всей очевидностью подтвердило тот факт, что мексикор и милдронат не являются гипотензивными препаратами

При исследовании суточной кривой отдельно за дневной период отмечено, что статистически значимого снижения АД как систолического, так и диа-столического также достигнуто не было

Однако при анализе уровня ночного АД оказалось, что достоверно изменилось ДАД - в группе больных, получавших мексикор, оно снизилось на 9,3% по сравнению с исходным (с 84,7 до 76,83 мм рт ст), а группе лиц, которые принимали милдронат, снижение ДАД составило 10,7% (с 87,43 до 77,8 мм рт ст) САД ночью также снизилось в группах, получавших мексикор или милдронат в сочетании с эналаприлом и атенололом, однако эти изменения не были статистически достоверными

Так как ночное ДАД на фоне терапии мексикором и милдронатом снижалось, изменились и соответствующие ему индекс времени и индекс площади гипертензии ИВ в основной группе больных, получавших мексикор, уменьшился на 35,9%, а в группе лиц, лечившихся милдронатом, разница с исходным уровнем данного показателя составила 38,8%

Указанные параметры в контрольной группе статистически значимым изменениям не подверглись При анализе ИП гипертензии установлено, что этот показатель достоверно изменился только в отношении ДАД, зарегистрированного в ночной период Для АД, взятого в другие промежутки времени, ИП не имел статистически значимой динамики

При анализе степени ночного снижения АД, оцениваемого по СИ, было установлено, что в группе пациентов, получавших сочетанную терапию мексикором, отмечалось значительное улучшение суточного ритма АД как систолического, так и диастолического При этом в выборке больных, лечившихся мексикором, по сравнению с исходом, СИ САД возрос в 3,8 раза (с 2,62 до 10,03%), прирост показателя для ДАД составил 2,03 раза (с 6,63 до 13,5%) В группе больных, получавших на фоне гипотензивной терапии в качестве метаболической терапии милдронат, степень ночного снижения САД увеличилась в 2,5 раза (с 3,9 до 9,8%) и ДАД - в 2,2 раза (с 7,3 до 16,09%) В контрольной группе больных, учитывая незначительный перерыв между проведением СМАД (5 суток), изменений суточного ритма АД не происходило, т е сохранялся неблагоприятный «поп-dipper» тип суточной кривой как для САД, так и для ДАД

Для подтверждения устойчивости достигнутых изменений суточного профиля СМАД проводилось на 10 сутки наблюдения больных Оценка данных показала, что полученные в ходе исследования результаты сохранялись практически на том же уровне, что и на 5 сутки наблюдения СИ САД составил 9,3 и 9,6% в группах больных, исходно пролеченных дополнительно мексикором и милдронатом, СИ ДАД для тех же выборок пациентов был 11,1 и 12,3%, соответственно

Таким образом, у больных ЭАГ, имеющих суточный профиль «noti-dipper» типа, добавление к схеме лечения цитопротекторов мексикор или милд-роната, обладающих антиоксидантными свойствами, в рамках осгрой пробы приводило к нормализации суточной кривой, т е достоверно увеличивало сте-

пень ночного снижения АД По данным СМАД, статистически значимым изменениям подверглись показатели ночного ДАД и соответствующие ему параметры «нагрузки давлением» - ИВ и ИП гипертензии Вместе с тем, учитывая тот факт, что мексикор и милдронат не являются прямыми антигипертензивными препаратами, развернутого гипотензивного эффекта достигнуто не было Кроме этого, не было получено достоверных различий в разнице наблюдаемых эффектов между группами пациентов, получавших либо мексикор, либо милдронат

ВЫВОДЫ

1 Мексикор, в большей степени чем милдронат, стимулирует у интактных животных формирование гуморального иммунного ответа и гиперчувствительности замедленного типа, повышает активность каталазы в сыворотке крови, не влияя на концентрацию продуктов перекисного окисления липидов

2 Милдронат и мексикор снижают кислородзависимую активность поли-морфноядерных лейкоцитов крови у интактных животных, не влияя на их фагоцитарную функцию

3 У больных эссенциальной артериальной гипертензией 2-3 степени при поступлении в клинику в крови снижены показатели Т-звена иммунитета, повышено содержание В-лимфоцитов, концентрация провоспалительных (ФНОа, ИЛ-1/3, ИЛ-6), противовоспалительного цитокина ИЛ-10 и компонентов системы комплемента (С3 и С4)

4 Традиционная фармакотерапия у больных эссенциальной артериальной гипертензией 2-3 степени нормализует в плазме крови концентрацию ИЛ-б, снижает, но не до контрольных значений, концентрацию ИЛ-1/3 и С4 компонента системы комплемента

5 Включение в комплексную фармакотерапию пациентов с эссенциальной артериальной гипертензией мексикора, по сравнению с традиционной фармакотерапией, повышает общее количество Т-лимфоцитов, нормализует содержание В-лимфоцитов, клеток-индукторов апоптоза, снижает концентрацию ФНОа, ИЛ-1/3 и С4 компонента системы комплемента, стимулирует фагоцитарную активность и супрессирует кислородзависимый метаболизм нейтрофилов периферической крови

6 Применение милдроната у больных эссенциальной артериальной гипертензией 2-3 степени на фоне традиционной фармакотерапии снижает в плазме крови концентрацию про- и противовоспалительных цитокинов и угнетает функционально-метаболическую активность нейтрофилов периферической крови.

7 Иммуномодулирующая активность мексикора и милдроната коррелирует с их клинической эффективностью, что проявляется достоверным увеличением степени ночного снижения артериального давления и нормализацией его суточной кривой

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1 Включать в традиционную терапию больных эссенциальной артериальной гипертензией мексикор в дозе 400,0 мг/сут или милдронат в дозе 750 мг/сут в течение двух месяцев с целью коррекции нарушенных показателей иммунного статуса

2 Определять у больных эссенциальной артериальной гипертензией в плазме крови концентрацию ФНОог, ИЛ-10 и С3 компонента системы комплемента для оценки степени выраженности нарушений показателей иммунного статуса и эффективности их коррекции

3 Рекомендовать изучение эффективности использования мексикора и милдроната в клинической практике в условиях патологии, характеризующейся развитием иммунного воспаления

4 Использовать в учебном процессе медицинских вузов знания об имму-нокорригирующих свойствах мексикора и милдроната у больных эссенциальной артериальной гипертензией 2-3 степени

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1 Иммуномодулирующие и аптиоксидантные эффекты мексикора у больных гипертонической болезнью /МО Горетая, Е Н Конопчя, В П Михин, В П Гаврилкж // Russian journal of immunology Материалы Рос науч -практ конф «Современные технологии в иммунологии иммунодиагностика и иммунотерапия» - 2006 - Vol 9, Supplement 3 - Р 141

2 Горетая, М О Влияние мексикора и милдроната на функционо-метаболическую активность нейтрофилов на фоне гипертонической болезни /МО Горетая, С Н Конопля, А Л Локтионов // Russian journal of immunology Материалы Рос науч -практ конф «Современные технологии в иммунологии иммунодиагностика и иммунотерапия» - 2006 - Vol 9, Supplement 3 -Р 141

3 Горетая, М О Мексикор как иммунокорректор у больных гипертонической болезнью/МО Горетая, В П Гаврилюк//Молодежная наука и современность 71-я итог межвузовская конф студентов и молодых ученых - Курск КГМУ, 2006 -Ч I - С 12-13

4 Горетая, М О Функщюно-метаболнческая активность нейтрофилов у больных гипертопической болезнью на фоне приема мексикора и милдроната /МО Горетая, В П Гаврилюк, АЛ Локтионов // Молодежная наука и современность 71-я итог межвузовская конф студентов и молодых ученых - Курск КГМУ, 2006 - Ч I - С 13-14

5. Мексикор как иммуномодулятор при гипертонической болезни / М.О. Горетая, E.H. Конопля, В П Михин, В П Гаврилюк // Аллергология и иммунология - 2006 -Т. 7, №3.-С. 345.

6 Горетая, М О Клшшко-экспериментальная эффективность использования мексикора в качестве иччунокоррсктора /МО Горетая // Современные наукоемкие технологии -2006 -№6 - С 56-57

7. Нарушения иммунного статуса и нммунокоррскция у больных гипертонической болезнью /МО Горетая, Е II Конопля, В П. Мнхин, В.П. Гаврилюк // Вестник новых медицинских технологий - 2007. - Т. XIV, № 2 С. 108-110

Принятые сокращения

АД - артериальное давление, мм рт ст

АОК - антителообразующие клетки, 103/селезенка

ДАД - диастолическое артериальное давление, мм рг ст

ГИО - гуморальный иммунный ответ

ГЗТ - гиперчувствителыюсть замедленного типа

ДК - диеновые коныогаты ненасыщенных жирных кислот, нмоль/л

иАПФ - ингибитор ангиотензишфевращающего фермента

ИАФ - индекс активности фагоцитов

ИВ - индекс времени гипергензии

ИП - индекс площади гипертензии

ИСЛ - индекс сдвига лейкоцитов по Н И Ябучинскочу

КАо - функциональный резерв в ответ на опсонизированиый зимозалом НСТ-тест, абс

КАн - функциональный резерв в ответ на неопсонизированпый зимозаном НСТ-тест, абс

КО - степень дискретности ответа на опсонизированиый и неопсонизнрованный

зимозаном НСТ-тест ЛИИ - лейкоинтоксикационный индекс МДЛ - малоновый диальдегид, мкмоль/л НСТ - тест восстановления ни гросинего тетразолия ПОЛ - перекисное окисление липидов ПЯЛ - полиморфноядерные лейкоциты

РКЛ - разница количества кариоцитов в регионарных и контралатеральных лимфатических узлах, 106

РМЛ - разница массы регионарных и контралатеральных лимфатических узлов, мг

САД - систолическое артериальное давление, мм рт ст

СИ - суточный индекс

СИР - степень иммунных расстройств

СМАД - суточное мониторирование артериального давления

СПАД - суточный профиль артериального давления

ФИ - фагоцитарный индекс, %

ФМА - функционально-метаболическая активность

ФЧ - фагоцитарное число

ФРИС - формула расстройства иммунной системы ЭАГ - эссенциальная артериальная гипертензия ЭБ - эритроциты барана

Лицензия ЛР № 020862 от 30 04 99 г Сдано в набор 20 04 2007 г Подписано в печать 21 04 2007 г Формат 30х42'/8 Бумага офсетная Гарнитура Times New Rom Печать офсетная Уел печ л 1,0 Тираж 100 экз Заказ № 157А Издательство Курского государственного медицинского университета 305041, г Курск, ул К Маркса, 3

Актуальность проблемы. Проблема лечения и профилактики осложненной артериальной гипертонии является на сегодняшний день одной из ведущей в современной медицине в связи с ранней инвалидизацией, повышенным риском развития сердечно-сосудистых осложнений и преждевременной смертности (Перова Н.В., 2004). Важная роль в развитии сосудистых осложнений принадлежит дисфункции эндотелия. При артериальной гипертензии было доказано наличие эндотелиальной дисфункции для системы периферической, коронарной микро- и макроциркуляции (Perticone F., 2001). Развивающаяся эндоте-лиальная дисфункция в условиях ЭАГ обусловлена в первую очередь активацией свободнорадикальных процессов, приводящих к уменьшению синтеза эндогенного N0, являющегося самым мощным эндогенным вазодилататором (Воробьева Е.Н. и др., 2006; Davignon J., Ganz P., 2002; Green D.J. и др., 2004).

Генерация в результате ишемических, травматических, токсических и других воздействий на ткани свободных радикалов оказывает непосредственное влияние на выраженность иммунного ответа (Лазарева Г.А. и др., 2006). Активация процессов ПОЛ приводит к образованию большого количества окисленного оксида азота - пероксинитрита, который, в свою очередь, является достаточно мощным окислителем и усиливает процессы ремоделирования сосудов и апоптоз клеток (Battinelli Е. и др., 2000; Зотова И.В. и др., 2002).

При этом окислительный стресс является одним из ведущих факторов, определяющих характер иммунологической реактивности организма в целом и реакцию местного иммунитета (Зенков Н.К. и др., 2001). Изучению иммунной системы при артериальной гипертензии посвящены немногочисленные работы. В связи с этим, исследования механизма развития дисфункции эндотелия, изменений иммунной системы, фармакологическая коррекция возникающих нарушений у больных артериальной гипертонией представляет важную задачу (Амирова А.Р. и др., 2006).

Перспективными в этом отношении являются препараты милдронат и мексикор, гипоксантные и антиоксидантные эффекты которых достаточно полно изучены как в эксперименте, так и в клинике (Иванов Ю.В. и др., 2000; Васильев И.Т. и др., 2000; Сараева Ю.В., 2005; Тюриков П.Ю., 2005), тогда как исследования по изучению их иммунокорригирующих свойств имеют одиночный характер в экспериментальной практике (Лазарева Г.А., 2006).

Все вышесказанное обусловливает необходимость дальнейшего изучения как в экспериментальных, так и в клинических условиях иммуномодулирую-щих свойств мексикора и милдроната.

Цель работы: установление иммуномодулирующей активности мексикора и милдроната в эксперименте и у больных эссенциальной артериальной ги-пертензией 2-3 степени.

Задачи исследования:

1. Экспериментально изучить закономерности влияния мексикора и милдроната на развитие гуморального иммунного ответа и гиперчувствительности замедленного типа.

2. Выявить в условиях эксперимента воздействие мексикора и милдроната на функциональное состояние нейтрофилов периферической крови.

3. Установить иммунокорригирующие эффекты мексикора и милдроната при эссенциальной артериальной гипертензии 2-3 степени.

4. Оценить клиническую эффективность включения мексикора и милдроната в комплексную терапию больных эссенциальной артериальной гипертен-зией 2-3 степени.

5. Разработать способ коррекции нарушений иммунного статуса у пациентов с артериальной гипертензией 2-3 степени с включением в комплексную фармакотерапию мексикора и милдроната.

Научная новизна. В эксперименте установлено, что мексикор и милдро-нат стимулируют формирование гуморального иммунного ответа, гиперчувствительности замедленного типа и снижают функционально-метаболическую активность нейтрофилов периферической крови. Уточнены характер и степень нарушений показателей иммунного статуса у больных эссенциальной артериальной гипертензией 2-3 степени и обоснована необходимость включения дополнительно в традиционную фармакотерапию этих больных иммунокорригирующих средств. Доказана эффективность применения милдроната и мексикора у данной категории больных в коррекции нарушенных показателей Т- и В-клеточного звена иммунитета, баланса про- и противовоспалительных цитоки-нов и процессов свободнорадикального окисления липидов. Установлена кли-нико-иммуннологическая эффективность использования мексикора и милдроната у больных эссенциальной артериальной гипертензией 2-3 степени. Выявлена большая эффективность мексикора в сравнении с милдронатом в коррекции нарушения иммунного гомеостаза у пациентов с эссенциальной артериальной гипертензией.

Практическая значимость. Экспериментально обоснована целесообразность использования милдроната и мексикора в качестве иммунокорриги-рующих средств в клинической практике. Углублены существующие представления о роли иммунной системы в патогенезе эссенциальной артериальной гипертензиии. Клинически подтверждены иммуномодулирующие эффекты милдроната и мексикора при лечении больных эссенциальной артериальной гипертензией 2-3 степени. Разработан способ иммунокоррекции у больных артериальной гипертензией с использованием мексикора и милдроната.

Разработанные рекомендации внедрены в работу МУЗ «Городская клиническая больница № 1 и № 3» г. Курска, медицинского отдела УВД Курской области, Курской и Брянской областных клинических больниц.

Материалы диссертации включены в учебные рабочие программы и используются в лекционных курсах и на практических занятиях ряда кафедр Курского, Российского, Самарского, Воронежского и государственных медицинских университетов и академий и медицинского факультета Белгородского государственного университета.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Мексикор и милдронат стимулируют формирование гуморального иммунного ответа и гиперчувствительности замедленного типа на эритроциты барана и супрессируют кислородзависимую активность нейтрофилов у интактных животных.

2. Уточнены характер и степень нарушений иммунного статуса у больных эссенциальной артериальной гипертензией 2-3 степени.

3. Мексикор и милдронат у больных эссенциальной артериальной гипертензией 2-3 степени корригируют большинство нарушенных показателей иммунного статуса.

4. Разработан способ иммунокоррекции у больных эссенциальной артериальной гипертензией 2-3 степени с включением мексикора или милдроната в традиционную фармакотерапию.

Апробация работы. Основные положения диссертации представлены на научных конференциях Курского государственного медицинского университета и Центрально-Черноземного научного центра РАМН (2006), конференции Российской академии естествознания (Мальта, 2006), Российской научно-практической конференции «Современные технологии в иммунологии: иммунодиагностика и иммунотерапия» (Курск, 2006), VI Съезде аллергологов и иммунологов СНГ, Российском национальном конгрессе аллергологов и иммунологов, III Российской конференции по иммунотерапии (Москва, 2006), совместном заседании кафедр пропедевтики внутренних болезней, биологической химии, микробиологии, внутренних болезней № 1 и № 2 Курского государственного медицинского университета (2007). й

Публикации. По материалам диссертации в центральной и местной печати опубликовано 7 работ, в том числе в 2 рекомендуемых изданиях ВАК РФ, в которых содержится полный объем информации по теме диссертации.

ВЫВОДЫ

1. Мексикор, в большей степени чем милдронат, стимулирует у интактных животных формирование гуморального иммунного ответа и гиперчувствительности замедленного типа, повышает активность каталазы в сыворотке крови, не влияя на концентрацию продуктов перекисного окисления липидов.

2. Милдронат и мексикор снижают кислородзависимую активность поли-морфноядерных лейкоцитов крови у интактных животных, не влияя на их фагоцитарную функцию.

3. У больных эссенциальной артериальной гипертензией 2-3 степени при поступлении в клинику в крови снижены показатели Т-звена иммунитета, повышено содержание В-лимфоцитов, концентрация провоспалительных (ФНОа, ИЛ-1 р, ИЛ-6), противовоспалительного цитокина ИЛ-10 и компонентов системы комплемента (Сз и С4).

4. Традиционная фармакотерапия у больных эссенциальной артериальной гипертензией 2-3 степени нормализует в плазме крови концентрацию ИЛ-6, снижает, но не до контрольных значений, концентрацию ИЛ-1р и С4 компонента системы комплемента.

5. Включение в комплексную фармакотерапию пациентов с эссенциальной артериальной гипертензией мексикора, по сравнению с традиционной фармакотерапией, повышает общее количество Т-лимфоцитов, нормализует содержание В-лимфоцитов, клеток-индукторов апоптоза, снижает концентрацию ФНОа, ИЛ-1(3 и С4 компонента системы комплемента, стимулирует фагоцитарную активность и супрессирует кислородзависимый метаболизм нейтрофилов периферической крови.

6. Применение милдроната у больных эссенциальной артериальной гипертензией 2-3 степени на фоне традиционной фармакотерапии снижает в плазме крови концентрацию про- и противовоспалительных цитокинов и угнетает функционально-метаболическую активность нейтрофилов периферической крови.

7. Иммуномодулирующая активность мексикора и милдроната коррелирует с их клинической эффективностью, что проявляется достоверным увеличением степени ночного снижения артериального давления и нормализацией его суточной кривой.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Включать в традиционную терапию больных эссенциальной артериальной гипертензией мексикор в дозе 400,0 мг/сут или милдронат в дозе 750 мг/сут в течение двух месяцев с целью коррекции нарушенных показателей иммунного статуса.

2. Определять у больных эссенциальной артериальной гипертензией в плазме крови концентрацию ФНОа, ИЛ-10 и Сз компонента системы комплемента для оценки степени выраженности нарушений показателей иммунного статуса и эффективности их коррекции.

3. Рекомендовать изучение эффективности использования мексикора и милдроната в клинической практике в условиях патологии, характеризующейся развитием иммунного воспаления.

4. Использовать в учебном процессе медицинских вузов знания об имму-нокорригирующих свойствах мексикора и милдроната у больных эссенциальной артериальной гипертензией 2-3 степени.