Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Иммунология и гетероорганные антигены тимуса человека в норме и при некоторых патологических процессах (ревматизм, тяжелая миастения, ....)

шшютерсггво здравоохранения россипсш федерации

ИНСТИТУТ И и ц у н о л о г и и

?гб од

я П ЛОГ 13ПЗ

На правая рукописи

ГНШШЩАЯ Шгаонора Езлнльовна ЕЯШШЯ И ГЕТВРООРГАШЬЕ АНТИГЕНУ Т1ШУСЛ

чзлоезкл в шр'.з и при гшкоторнх ттологачншп

ПРОЦЕССАХ (Р1!Е".ЛТШ1!. Т5ШЕЛЛЯ ШАСТЕНИЯ, ШЮПЛТЩ 14. СЮ. 36 - Аллергология и ш-едунолопш

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора биолопгчэсгсга паук

Шсква - 1993

Работа выполнена в Научно-ксслэдоаательокоы ордена Трудового Красного Знаигни шютстуте Бпвдецколопш и шсроОкохопш кшнн портного екадошка а & Гаи&сан РАШ

Сфщнш&нш оппоиоити : доктор Оиохогкческнх пая:, профэссор

доктор шдкданскпх наук, профессор, екздеиш* АЕН РФ доктор бкашгичаских наук

А. А. Икайхопа

Д. Е Чэрздэев Л, 6. Шшсдо

Ездус1л оргшиаода: Каучио- иссхадоеательсгай имститу* шедш и сшорох'ок ш. IIII Шчникоаа РАШ

Зазвта дассерташш состоится "12 " се//-ГЯдрЗ 1993 г, в и/^» часов на еассдашш Спецшшшровазшого сошзта Д 074. 03.01 при Институт*) ИВД/НОХОПШ из РФ (116478, Иэоква, Катарсиса соссо, 24, (горя. 2)

С диссар^шкай шпю оашшэются в бкйшлонэ Института шдутшпш 13 РО

/второго раз- рааосхаа "££_" 1693 г.

Ученый секретарь с'пецналиоированного совета доктор ыэдицинскиа; наук

Л. С. Составила

^дуальность темы. Одна из центральных проблем современной Шфюттт состоит в изучении механизмов, посредством которых айяге-лиадьная ткань тимуса влияет на дифференцировку лимфоцитов Органа, обеспечивая их функциональное многообразие и состояние тюлерантност;. к антигенам собственного организма Репение этой проблема во многом сдерживается недостаточностью сведений о клеточном составе и принципах структурной организации паренхимы тимуса. Известно, что паренхима этого органа характеризуется необычайной гетерогенностью и полиморфизмом клеточных элементов, многие из которых обнаруживают на морфологическом, уль-трзструкгурном и антигенном уровне сходство с клетками других органов и тканей. Это свойство клэток паренхимы тимуса исследователи пытались связать с особенностями его закладки в эмбриогенезе, которая может сопровождаться патогенетическими наруш-ниями. Однако по мере изучения этого вопроса стало ясно, что присутствие в паренхиме тимуса тканевых аналогов является обли-гатным и поэтому не может быть аберрацией эмбрио- и гистогенеза. Наряду с этим была предпринята попытка объяснить гетерогенность клеточного состава паренхимы тимуса в рамках представления о нем как об эндокринном органе. Многообразие экспериментальных' данных подтверждает наличке у тимуса эндокринных функций и свидетельствует о том, что он находится в сложной взаимосвязи с эндокринной системой организма и оказывает влияние на все ее элементы (Кемилева 3., 1934). Вместе с тем, с . помоцыо этого предположения трудно объяснить присутствие в парэнхкш тимуса югаидных клеток, а также то обстоятельство, что ее преобладающ»« элементом являются эпителиальные клетки, по многим своим признакам сходные с клетками покровных зпителкев. Однако самый важный факт, который не находит объяснения в рамках представления о тимусе как об эндокринном органе состоит в том, что оно не учитывает функцию тимуса как центрального органа иммунной системы. Привлечение данных о гетерогенном составе паренхимы тимуса для объяснения его основной функции стало возможным после того как на антигенном уровне было доказано сходство ми-оидных клеток с компонентами скелетной мыицы и получены аналогичные данные в отношении эпидермальных антигенов тимуса (van der Geld et al. , 1964; Белёцкая Л. В. и др. , 1974,1976; Гнёздиц-

кая Э. Е и др. ,1974,1976; Sun et al. ,1983). Эти наблюдения позволили высказать предположение, что одна из функций тканеспеци-фических антигенов состоит в том, чтобы информировал» лимфоциты тимуса о структуре собственных антигенов организма в.процессе формирования к ним состояния толерантности {Берне? ф. IL, 1971; Белецкая Л. К , Гнездицкая 3. В., 1975; Beletskaya, Goezditskaya, 1985). При ?том реализация этой функции может оеуюествляться через их непосредственное влияние на процесс пролиферации и диффэренцлровки лимфоцитов органа (Гнездицкая Э. S и др. ,1987; Kamo et al,lS85).

Таким образом, существует настоятельная необходимость, во-первых, в доказательстве идентичности элементов паренхимы тимуса с соответствующим тканевыми аналогами на молекулярном, в первую очередь, антигенном уровне, и, во-вторых, в изучении роли этих факторов в функциональном созревании лимфоцитов тимуса.

Учитывая определяющую роль эпителиальной ткани тимуса в дифференцировке его лимфоцитов, правомерно предположить, что ее повреждение может привести к различным иммувдрегуляторнда расстройствам, в том числе к таким, которые обуславливают развитие аутоиммунного . процесса. В связи с этим расширение знаний о функции и принципах структурной организации паренхимы тимуса может стать основой для разработки одной из центральных проблем иммунопатологии - научение механизмов формирования нозологичес-•ки специфичных форм иммунологической недостаточности и методов их коррекции.

Дель и задачи исследования. Цель работы состояла в расширении спектру, представленных в паренхиме тимуса антигенов, характерных для других тканей организма {гетероорганные антигены), изучении их функции и изменений, которым подвергается система гетероорганных антигенов тимуса при различных патологических процессах (ревматизм, тяжелая миастения, миолатия).

В работе были поставлены следующие задачи:

1. Используя метод иммунофлуоресценции, провести поиск в клетках паренхимы тимуса антигенов, характерных для покровных и секреторных эпителиев и мышечной ткани.

2. С целью выяснения функции гетероорганных антигенов (факторов) исследовать вопрос о наличии рецепторов для них на тимо-

итах и изучить влияние этих факторов на способность лимфоцитов имуса зкспрессировать рецепторы для Fc-фрагмента иммуноглобу-инов класса M, А и G.

3. Учитывая этиологическую роль стрептококка группы А в па-огенезе ревматизма, исследовать вопрос о наличии у гетероор-анных антигенов тимуса общих детерминант с компонентами этого икроорганизма.

4. Исследовать иммуномодулирукщие свойства полисахарида трептококка группы А как носителя общих детерминант с одним из пителиальных факторов тимуса

5. Используя гетероорганныэ антигены в качестве маркеров пределенных элементов паренхимы тимуса, провести сравнительное зучение иммуноморфологических изменений этого органа при рев-атизме, тяжелой миастении и миопатии.

6. Принимая во внимание аутоиммунный характер ревматизма и яжелой миастении, исследовать наличие в крови Сольных, аутоан-ител к антигенам паренхимы и лимфоцитов тимуса при этих забо-яваниях.

7. Исследовать изменение свойств лимфоцитов тимуса, несущих ецепторы для гетероорганных антигенов при ревматизме и миопа-ии на примере их реакции на геофиллин, аденозин, левамиаол и ;екантат трехчасовой культуры тимоцитов.

8. Исследовать изменение характера модулирующего эффекта етероорганных антигенов на ^ , Т^ и клетки тимуса при ревма-изме и тяжелой миастении.

Научная новизна. В результате проведенного исследования оказано присутствие в паренхиме тимуса системы факторов, в ан-игенном отношении идентичных с компонентами ряда высокоспеци-лшзированных тканей (гетероорганные антигены) и получены новые анные о принципах морфо-функционадьной организации паренхимы ргана. Установлено, что система гетероорганных антигенов со-тоит из структурно обособленных подсистем, клеточные элементы оторых продуцируют субстанции, характерные для определенного ипа ткани. В настоящем исследовании впервые на антигенном ровне идентифицированы две гетероорганные подсистемы: зпидер-альная и секреторная. В цитоплазме клеток эпителиального рети-улума и телец Гассаля обнаружено четыре антигена, характерных

- б -

для эпидермиса и других покровных эпителиев эпидеркального типа Впервые в паренхиме •тимуса выявлены структуры типа железистых ацинусов, клетки которых продуцирует секреторный компонент -продукт экскреции эпителиев экго- и энтодермзлъного происхождения. Показано присутствие в тимусе клеток, продуцирующих лакто-феррин, который подобно секреторному компоненту входит в состав акскретов, выделяемых секреторными эпителия«и, и является важным фактором местного иммунитета.

Впервые обнаружены онтогенетические различия в функциональной активности гетероорганных подсистем и тем самым доказано, что созревание тимоцитов в процессе онтогенеза происходит в разных условиях микроокружения.

Впервые в тимусе идентифицированы лимфоциты с рецепторами для гетероорганных антигенов - лактоферрина и секреторного компонента (Тлф,Тек клетки), продемонстрирована их иммуномодулиру-ющая активность по отношению к Tj,, ту и Т^. клеткам органа и таким образом подтверждено представление о гетероорганных антигенах как о дифференцировочных факторах тимуса.

В представленных в паренхиме тимуса тканеспецифических антигенах (покровный эпителий, мышечная ткань) впервые обнаружены обшие детерминанты с полисахаридом стрептококка группы А и с компонентом стабилтчых L-форм этого микроорганизма. Впервые в тимусе идентифицирована субпопуляция лимфоцитов с рецепторами •для полисахарида стрептококка группы А (Тпс клетки) и продемонстрирована его иммуномодулмрушая активность по отношению к Туч и Т| клеткам органа

Впервые установлено, что при ревматизме, тяжелой миастении и миопатии повреждение элементов эпителиального ретикулума, ми-оидных клеток, изменение реакции Тлф, Тек и Тпс (слеток на икму-номодуляторы и модулируодзго эффекта лактоферрина, секреторного компонента и А-полисахарида на Т^. и Т* клетки органа имеет нозологически специфичный характер.

Проведенное нами исследование является приоритетным, таи как к моменту его начала (1974) вопрос об антигенном составе паренхимы тимуса в отечественной литературе не рассматривался, а в зарубежной печати имелись лишь единичные сообщения (van der Geld et al. , 1964; Pansky et al. , 19бь). Последующее развитие

зтой области знаний полностью подтвердило правомерность нашего гадхода к этой проблеме и правильность трактов^ полученных данных. Это предде всего касается результатов многочисленных «^следований, проведенных с помощьо моноклональных антител к эазным типам дитокератинов, которые убедительно продемонстрировали глубокое сходство клеток эпителиального ретикулума тимуса : покровными зпителиями зпидермального типа. Вместе с тем, ис-юльзованный нами подход позволил подойти к пониманию феномена штигенного сходства клеток паренхимы тимуса с разными тканями : учетом основной его функции как органа иммунитета.

основные положения. выносимые на защиту. 1. Гетероорганные штигены тимуса является частью единой системы иммуномодулиру-здих факторов нелимфоидной природы, характерных для многих возможно всех) тканей организма. Система иммуномодулирующих [¡акторов на основе тканеспецифических антигенов позволяет обе-:печить завершение начатого в тимусе процесса дифференцировки си Т клеток и выполнение некоторых функций этого органа при его говреждении и после возрастной инволюции.

2. Бактериальные антигены - носители общих детерминант с химическими факторами могут выступать в роли их функциональных шалогов и нарушать формирование иммунного ответа в процессе шфекции.

3. Формирование нозологически специфичных форм иммунологи-юской недостаточности при ревматизме, тяжелой миастении и мио-1атии происходит на уровне тимуса как центрального органа им-«унной системы.

' Научно-теоретическая значимость. Сформулировано новое на-[равление исследований - изучение роли гетероорганных антигенов •имуса как системы иммуномодулирувдих факторов, характерных для >азных тканей, в функциональном созревании его лимфоцитов и в >егуляции их активности за пределами органа

Использование рецепторов для гетероорганных антигенов в ачестве маркеров определенных субпопуляций лимфоцитов позволя-!Т идентифицировать их в тимусе и в периферических лимфоидных «рганах. На основе стимулирующего эффекта аденозина, теофиллина с декантата тимоцигоа созданы методические подходы к выделению г изучению функции этжг субпопуляций.

- а -

КЬзологически специфичный характер изменения реакции Тлф, Тек и Тпс клеток на аденозин, теофиллин и декантат тишцитов позволяет изучить механизмы повреждения этих клеток при каждом конкретном заболевании. Определение состояния этих клеток на основе их реакции на данные препараты может служить дополнительным критерием эффективности иммунокоррекции при различных им-мунорегуляторкых нарушениях.

Представление о полисахариде стрептококка группы А как о функциональном аналоге одного из химических факторов, а также дефицит предшественников Тпс клеток, чувствительных к иммуномо-дуляторам, в тимусе больных ревматизмом открывает новью подходы к изучению механизмов развития аутоиммунного процесса при этом заболевании. Определение состояния Тпс клеток в периферической крови может быть дополнительным критерием при оценке иммунного статуса больных при заболеваниях стрептококковой этиологии и адекватности методов его коррекции.

Обнаружение иммуномодулируидей активности у полисахарида стрептококка группы А является основой дальнейших исследований с целью его применение в качестве иммунокоррегирупцего препарата Идентификация тканеспецифического антигена покровных зпи-телиев эпидермадьного типа с помотаю антител к А-полисахариду легла в основу приор/тетной разработки и внедрения в клиническую практику нового катода, который позволяет осуществлять дифференциальную диагностику опухолей,_ возникающих из этих згогге-лиев, и контроль за эффективностью их лечения (Акт о внедрении в практику Московского областного научно-исследовательского клинического института им. У. Ф. Владимирского).

Диссертационная работа выполнена согласно темам основного плана НИР НЮШ им. Е Ф. Гамалеи РАЫН (номер гос. регистрации 79049011 и 80012127), в рамках Государственной программы 0.69.07 "Исследовать генетические и молекулярные механизмы нарушений иммунитета и наследственных болезней и разработать на этой основе методы и способы профилактики, диагностики и лечения" и Сошной программы С-03 "Научные основы борьбы с ревматическими болезнями".

Раздел работы по изучению общих детерминант в молекуле полисахарида стрептококка группы А и представленного в эпителии

тимуса тканеспецифического антигена покровных зпителиев эпидер-мального типа выполнен под руководством профессора И. М. Лямперт. Изучение иммунодарфологии тимуса больных миопатией выполнено совместно с Т. а. Валиковой (Томский медицинский институт) под руководством автора Препарат А-полисахарида к антитела к нему предоставлены а Ю. Саниной; препараты иммуноглобулинов, их фрагментов, дактофэррина, секреторного компонента и секреторного 1еА человека предоставлены Н. А. Захаровой, Л А. Панкиной, Р. Л. Па-нуриной (НИЛЭЫ им. Е Ф. Гамалеи РАЫН) для проведения совместных исследований.

Апробация диссертации проведена на объединенной научной конференции отдела иммунологии НИИЭИ им. а Ф. Гамалеи РАШ и на заседании секции N2 Ученого Совета Института иммунологии МЗ РФ. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на всесоюзных и международных конгрессах, симпозиумах и конференциях, перечень которых приведен в конце автореферата.

Публикации. Ш материалам диссертации опубликовано 56 печатных работ.

Структура и объем диссертации. Диссертационная работа изложена на 286 страницах машинописи и состоит из введения, об- , зора литературы (1 глава), описания материалов и методов, собственных исследований (4 главы), обсуждения результатов, выводов и списка литературы. Работа иллюстрирована 56 рисунка.™ и 14 таблицами. Библиографический указатель включает 348 источников.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Ткани. Исследован тимус и другие органы здоровых людей,погибших от острой травмы в возрасте 8-22 лет (46 случаев); тимус детей 4-15 лет с врожденным пороком сердца (20 случаев); тимус детей 8-15 лет больных ревматизмом (34 случая); тимус больных тяжелой миастенией в возрасте 8-42 лет (54 случая); тимус больных миопатией в возрасте 5-22 лет (20 случаев); тимус и другие органы плода человека 15-22 недель (15 случаев); тимус и другие органы животных (кролик, бык, морская свинка, крыса, мышь).

Сыворотка крови человека. Исследована сыворотка крови боль-

ных ревматизмом (28 случаев), тяжелой миастенией (120 случаев), рожистым воспалением (45 случаев),миопатией (52 случая), язвенным колитом (32 случая), вульгарной пузырчаткой (5 случаев), а также доноров (120 случаев) и здоровых детей 4-15 лет (32 случая) - всего 525 сывороток. Кровь у больных брали в первый день поступле.ния в клинику.

Препараты, использованные в работе. Препараты, выделенные методом ионообменной хроматографии на ДЕАЕ целлюлозе: иммуноглобулины класса М, A, G и его изотюты 61, 62 , 63 из сыворотки крови больных миздомой; суммарный IgG из сыворотки крови здорового человека; лактоферрин, секреторный IgA и секреторный компонент из женского молозива. Кроличьи антисыворотки против суммарного IgG и его изотипов, сывороточного IgA, секреторного IgA и лагаоферрина человека; кроличьи сыворотки против культуры стрептококка группы А, обработанной пепсином, и против стабильной культуры L-форм этого микроорганизма.

Меченные изотиоцианатом флуоресцеина (ФИГЦ) глобулиновые фракции против IgM, IgA, IgG и его (Fab)-2 и Fc-фрагментов, лактоферрина, секреторного IgA человека, IgG кролика (производство НИИЭЫ им. Е Ф. Гамалеи РАМН); СЗ-компонента комплемента человека (фирма Ну Hand, США).

Антитела против IgG (суммарный) человека и его изотипов, лактоферрина и секреторного компонента человека и IgG кролика ■выделяли из антисыворотки с помомщыо соответствующих антигенов, иммобилизированных глутаровым альдегидом (Avrameas.Terntnck, 1969). Антитела против IgG человека и кролика коньюгировали с ФИТЦ методом Riggs et al. (1958) в модификации Благовещенского В. А. и Кульберга А. Я. (1S62).

Полисахарид стрептококка группы А получали методом форма-мидной экстракции (ColUgan et al. ,1975; Колесникова RJ0 и др., 1980).

В работе использованы иммуномодуляторьс аденозин, теофшшш (Sigma, США), леваыизол (Рихтер, Венгрия); декантат нормальных тимоцитов (см. ниже).

Адсорбция сывороток проводилась взвесью клеток эпидермиса, суспензией эритроцитов группы крови АВ, гомогенатом ткани тимуса, печени, почки, сердца, мозга, се., .зенки человека.

Выделение лимфоцитов из тимуса проводили методом щадящего механического выдавливания. Клетки дважды промывали в среде Игла, содержащей 5Z сыворотки эмбриона коров, и оставляли на ночь в избытке среды при 4° С. На следующий день с помошьп окрашивания 0.2Х раствором трипановой синей определяли число живых клеток. Опыты проводили при наличии в суспензии 87-95% живых лимфоцитов.

Декантат тимоцитов получали в результате инкубации клеток из расчета 2x10 кл/мл в течение трех часов при 37°С в среде Игла, содержащей 52 сыворотки эмбриона коров. Клетки отделяли центрифугированием, декантат хранили при -20°С. Декантат сохранял активность в течение 6 месяцев.

Метод иммунофлуоресценции. Для определения антител к антигенам тканей тимуса и других органов использован метод непрямой иммунофлуоресценции (Coons,Kaplan,1950) с применением антител и глобулиновых фракций против IgS человека или 'кролика, коньюгированных с ФИТЦ. На нефиксированные криостатные срезы тимуса и других органов толгзиноЯ 4-5 мкм наносили испытуемую сыворотку или антитела и инкубировали 18 часов при 4"С во влажной камере. - После промывания забуференным физиологическим раствором (рН 7.2) срезы обрабатывали 45 мин меченным ФИТЦ препаратом против IffG человека иди кролика. Срезы заключали в 602 за-буферепный глицерин (рН 7.5) и просматривали в люминисцентном микроскопе ЖМАМ-И1 в ультрафиолетовом свете с объективом х40 (водная иммерсия).

Метод прямой иммунофлуоресценции использован для выявления связанных иммуноглобулинов и СЗ-компонента комплемента в клеточных элементах и структурах тимуса человека и отложений в этом органе иммунных комплексов. Срезы тимуса инкубировали 18 часов при 4°С с меченными ФИТЦ препаратами и после промывания заключали в 60Z глицерин.

Выявление рецепторов для дактоферрина, секреторного компонента и полисахарида стрептококка группы А на тимоцитах человека. 2x10 клеток инкубировали 1 час при 37° С в 0.1 ил раствора этих препаратов (концентрация 300 мкг/мл). После промывания клетки обрабатывали 30 мин при 37"С антителами против соответствующего фактора и меченным ФИТЦ препаратом против кроличь-

его 1ей Количество лимфоцитов с рецепторами для лактоферрина, секреторного компонента или А-полисахарида (Тлф, Гек и Тпс клетки) выражали в процентах от 500 малых лимфоцитов, выявляемых при одновременном наблюдении в синефиолетовом свете и с поыощыо фааово-контрастного устройства на микроскопе ЖШО-Ш с объективом хВО. В контроле клетки обрабатывали: кроличьими антителами против лактоферрина, секреторного компонента или А-полисахарида и меченным Ф5ПЦ препаратом против 1еб кролика; только меченным ФИТЦ препаратом против кролика Количество меченных клеток в контроле обычно не превышало 0.32 и вычиталось из числа Тлф, Тек или Тле клеток, подсчитанных в опыте.

Влияние шмуномодуляторов определяли в результате предварительной обработки тимоцитов 1 час рр» 27РС теофиллином (3 мМ), аденозином (0.5 иМ), левами^одо« 5 щ«г/щ) и декантатом тимоцитов с последующим подсчетов щоящ Т.яф, Тек и Тпс клеток. В контроле лимфоциты инкубировали в среде без добавления иммуно-ыодуляторов. Характер >юдулкруш,его эффекта оценивали по формуле (1): К — (А - В) / В, где А - количество Тлф, Тек, Тпс клеток после инкуб^ши с препаратом, Б - число этих клеток в контроле. Цри НН аффект оценивали как стимулирующий, при К<1 - ка> щгрбнругщй, яри К=1 - как отсутствие влияния препарата.

Доя оценки действия иммуномодуляторов на Тлф,Тек и Тпс идеяи В патологии использован дополнительный критерий - частот! ' проявления стимулирующего или ингибирушэго эффекта препарата РМраданная в процентах от количества исследованных случаев.

Иымукошдулируищая активность лактоферрина, секреторног компонента ¡и А-полисахарида выявлена в результате инкубации ти мощгаов 1 час при 37"С с этими факторами (концентрация 300 мкг Мд) и последующего определения числа лимфоцитов, зкспреесиру ЩИХ рецепторы для Яс-фрагмента 1гМ, и 1е6 (Гс^Р, Рс^

С этой целью клетки инкубировали 1 час при 37" С с ТеА ида ОД человека (концентрация 300 мкг/мл) и с меченнь ФЩЦ препаратом против соответствующего класса иммуноглобулин? Характер модулирующего эффекта дактоферрина, секреторного ко) понента и А-полисахарида оценивали по формуле (1).

Статистическая обработка результатов исследования. Дост( верность результатов оценивали сс .ласно 1-критерию Стьадент;

Разброс данных охарактеризован с помощью стандартной ошибки средних величин (М ±. га). 1

3. ГЕТЕРООРГАНВДЕ АНТИГЕНЫ ТИМУСА ЧЕЛОВЕКА 3.1. Зпидермальные антигены тимуса.

Известно, что при многих хронических и аутоиммунных заболеваниях в крови больных присутствуют антитела к антигенам клеток органа-мишени патологического процесса. Исходя из этого для выявления гетероорганных антигенов тимуса представлялось целесообразным в качестве источника антител использовать сыворотку крови больных заболеваниями, затрагивающими разные тканевые системы организма. На основании сказанного в наетопэй работе изучена реакция со срезами тимуса человека сыворотки крови больных ревматизмом, тяжелой миастенией, вульгарной пузырчаткой, родистым воспалением, язвенным колитом, рассеянным склерозом. В контроле изучена реакция сыворотки кров» здоровых людей (доноров)- и-деФей й; возрасте 4-13 лёт!-

В'результате проведенного исследования независимо от харак-• тера заболевания выявлено две основные группы сывороток, которые отличались уровнем аутоантител к двум антигенам эпителиальной ткани тимуса Первую группу составили сыворотки, содержащие антитела только к антигену клеток эпителиального ретикулума, и сыворотки, в которых уровень этих антител превышал титр антител к антигену клеток телец Гассаля. Вторую группу Ьоставили сыворотки, которые реагировали только с антигеном клеток телец Гассаля, и сыворотки, в которых титр этих антител был выше уровня антител к антигену клеток эпителиального ретикулума.

Адсорбция сывороток обеих групп гомогенатом тканей тимуса и суспензией клеток эпидермиса человека полностью ингибировала их реакцию с клетками эпителиального ретикулума и телец Гассаля. Адсорбция гомогенатом тканей других органов на их реакцию с антигенами клеток эпителия тимуса не влияла. Эти данные свидетельствуют о том, что в клетках эпителиального ретикулума и телец Гассаля присутствуют антигены, обще с эпидермисом.

Антиген клеток эпителиального ретикулума тимуса челове-

ка общий с антигеном шринуклеарной зоны клеток эпидермиса. В срезах тимуса человека, обработанных сыворотками первой группы, наблюдалось интенсивное свечение цитоплазмы клеток эпителиального ретикулума, расположенных на всей территории дольки органа, включая камбиальные элементы субкапсулярного слоя. В медуллярной зоне эти клетки присоединялись к тельцам Гассаля, однако в цитоплазме клеток, уже вошедших в состав этих структур, данный антиген отсутствовал, и только в некоторых из них он выявлялся в перинуклеарной зоне.

В срезах кожи, обработанных сыворотками этой группы, наблюдалось свечение перинуклеарной зоны клеток эпидермиса, интенсивность которого возрастала при переходе клеток из ростковых в дифференцированные слои. Реакция с собственно цитоплазмой клеток эпидермиса отсутствовала. При титровании сывороток .выявлено совпадение уровня аутоантител к антигену клеток эпителиального ретикулума тимуса и к антигену перинуклеарной зоны клеток эпидермиса

Таким образом установлено, что в клетках эпителиального ретикулума тимуса челопка присутствует антиген, общий с антигеном перинуклеарной зоны клеток эпидермиса (ПНА). Выявлена противоположная кинетика синтеза ПНА в зависимости от стадии диф-ференцировки клеток эпителия тимуса и кожи. Е тимусе количество ПНА резко снижается после перехода клеток к заключительной ета-'дии дифференцировки в составе тимических телец, тогда как в клетках эпидермиса, наоборот, продукция ПНА увеличивается по мере их дифференцировки и ороговения.

Антиген цитоплазмы клеток телец Гассаля общий с антигеном цитоплазмы клеток дифференцированных сдоев эпидермиса Использование сывороток второй группы, содержащих аутоантитела только к антигену цитоплазмы клеток тимических телец, позволило наблюдать процесс формирования этих структур р тимусе человека начиная с объединения отдельных полиморфных клеток медуллярной зоны в симпласты и кончая образованием типичных концентрических структур, имеющих в центре камеру, заполненную детритяым материалом. Клетки, входящие в состав молодых телец Гассаля, особенно в состав симпластов, характеризуются меньшей интенсивностью свечения цитоплазмы, чем клетки оолее зрелых структур.

Кроме того разной интенсивностью свечения могут обладать клетки в составе одного и того же тимического тельца. Особенно отчетливо неоднородность клеточного состава телец Гассаля выявлялась при титровании сывороток.

В срезах кожи, обработанных сыворотками, содержащими антитела только к антигену клеток телец Гассаля, наблюдалась реакция с цитоплазмой клеток дифференцированных слоев эпидермиса, причем ее интенсивность нарастала по мере перехода клеток в наружные слои. Реакция с перинуклеарной зоной клеток эпидермиса при этом отсутствовала. При титровании сывороток установлено, что уровень аутоантител к антигену клеток телец Гассалдя совпадает с титром антител к антигену цитоплазмы клеток дифференцированных слоев эпидермиса. Таким образом, в клетках эпителия тимуса, формирующих тельца Гассаля, выявлен антиген, общий с антигеном собственно цитоплазмы клеток дифференцированных слоев эпидермиса.

Тканеспецифический антиген покровных зпителиев зпидермаль-ного типа, перекрестно-реагирующий с полисахаридом стрептококка группы At в клетках эпителиального ретикулума тимуса человека и животных. Согласно сущзствущим представлениям, важная роль в развитии аутоиммунного процесса при ревматизме принадлежит аутоантителам, направленным к антигенам стрептококка группы А, имевшем общие детерминанты с антигенами тканей человека (Лям-перт И. М. и др. ,1976,1980,1988). Исходя из этого предположения представляло интерес выяснить, имеют ли присутствуйте в тимусе гетероорганные антигены обще детерминанты с компонентами этого микроорганизма.

При обработке срезов тимуса человека и животных антителами к А-полисахариду наблюдалось интенсивное свечение цитоплазмы клеток эпителиального ретикулума. Антиген, выявляемый с помощью этих антител, присутствует в цитоплазме клеток эпителиального ретикулума корковой и медуллярной зоны и не выявляется в клетках, формирующих тельца Гассаля.

При изучении распространения данного антигена в тканях других органов человека и животных установлено, что он содержится в цитоплазме клеток базального (камбиального) слоя всех покровных зпителиев (ороговевающих и неороговеваюящ) эпидер-

мааьного типа и следовательно является тканеспецифическим антигеном этих эпителиев.

Несмотря на различие в локализации базалъноклеточного антигена (БКА) и ПНА в клетках эпидермиса в тимусе оба антигена синтезируются в одних ч тех же клетках эпителиального ретикулума. Таким образом клетки эпителиального ретикулума тимуса сочетает в себе на антигенном уровне свойства клеток эпидермиса, находящихся на разных стадиях дифферекцировки. Это свидетельствует о глубоких органных особенностях эпителия тимуса, которые наблюдаются на фоне его очевидного антигенного сходства с покровными эпителиями апидермального типа

Антиген межклеточной склеивавшей субстанции в эпителии тимуса человека. В работе использована сыворотка крови больных вульгарной пузырчаткой, так как известно, что при этом заболевании наблюдается высокий уровень аутоантител к антигену меж-леточной склеивающей субстанции (ЮС) эпидермиса и других покровных эпителиев апидермального типа (Chorzelsky et al.,1973; Romanenko et al.,1979). Сыворотку крови больных этим заболеванием использовали в разведении, при котором она не реагировала с антигенами цитоплазмы клеток эпидермиса.

В срезах тимуса взрослого человека МСС выявлена между клетками эпителиального ретикулума, окружавшими тельца Гассаля, и в редких случаях - между клетками молодых тимических телец. В 'срезах тимуса плода человека реакция с УСС телец Гассаля наблюдалась значительно чаща и имела более интенсивный характер.

Таким образом, наряду с БКА, эпителиальные клетки тимуса синтезируют епр один тканеспецифический антиген, идентичный 1СС покровных эпителиев апидермального типа Локализация МСС в тимусе ограничена медуллярной зоной, где она выявляется иедцу эпителиальными клетками, прилегающими к тельцам Гассаля, а также в межклеточных пространствах молодых тимических телец. Невидимому эпителиальные клетки тимуса способны синтезировать МСС только на определенной стадии своей дифферекцировки.

а 2. (Секторы секреторных эпителиев в тимусе человека

Секреторный компонент в железистых и мембраноподобных

структурах тимуса человека При обработке срезов тимуса человека антителами против секреторного компонента в корковой и медуллярной зоне наблюдалось свечение мембраноподобных и-железистых образований, сходных с ацинусами железистых органов. Ра-мер железистые структур варьирует от нескольких десятков до сотен мкм. На поперечном срезе видно, что образующие их клетки расположены пареитадьно и внутри структур имеется полость. В цитоплазме клеток, образующих ацинусы, выявляется небольшое количество секреторного компонента, и поэтому она имеет значительно меньшую интенсивность свечения, чем мембраяоподобныэ структуры. Эти структуры расположены под капсулой долек и на всей территории паренхимы. Они характеризуются многообразием размеров и Форш, обладают способностью к ветвлению и образованию между собой анастамозов. С омощью таких анастамозов они соединяются с меибраноподобныгли структурами, окружающими келе-зистш ацинусы, и образуют единую систему, охватывающую всю паренхиму органа

Связь железистой системы с тельцами Гассаля подтверждается присоединением к ним мембраноподобных структур и присутствием секреторного компонента в составе материала, заполняющего их камеру. Наличие мембраноподобных структур является характерной особенностью тимуса взрослого человека, отличающей его от других органов-продуцентов секреторного компонента, ( миндалины, слюнная железа и др.). В срезах плода человека наблюдалось слабое диффузное свечение поверхности единичных железистых аци-нусов, расположенных в кортига-медуллярной зоне дольки. Система мембраноподобных структур в эмбриональном органе не выявлена. Тагам образом в количестве содержащегося в тимусе секреторного компонента наблюдается отчетливо выраженные онтогенетические различия.

Клетки, продуцирующие дактофзррин, в тимусе человека. В от- . личие от клеток, синтезирующих секреторный компонент, клетки, продуцирующие лактоферрин (ЛФ-клетки), расположены в тимусе дисперсно. Они выявляются в междольковой соединительной ткани, откуда проникают в субкапсулярнуп зону и постепенно переходят в глубокие слои паренхимы органа. Характерной особенностью ЛФ-клеток является зернистая структура их цитоплазмы, особенно ее

периферической зоны. ЛФ-клетки обладают высокой секреторной активностью, о чем свидетельствует отделение многочисленных гранул от их поверхности. Эти гранулы располагаются по границам прилежащих тимоцитов и во внутренней среде органа, В медуллярной зоне тимуса ЛФ- клетки присоединяются к тельцам Гассаля, постепенно переходят во внутренние слои этих структур и в просвет их камера В тимусе"плода количество и секреторная активность ЛФ-клеток заметно выше, чем в тимусе взрослого человека. Таким образом, для тимуса, ташке как и для ряда других жв.тсзип-тых органов, характерно сочетанное присутствие обоих факторов (лактоферрина и секреторного компонента), входящих в состав экскреторных жидкостей организма.

3. 3. Миоидные клетки в тимусе человека и животных

Иммуноморфологические особенности миоидных клеток эмбрионального тимуса. В связи с выявленными различиями в количестве ШС и секреторного компонента в тимусе плода и взрослого человека, представляло интерес выяснить, в какой мере эта закономерность характерна для других гетерооорганных элементов паренхимы тимуса, в частности для миоидных клеток. В качестве источника антител к антигенам миоидных клеток использована сыворотка крови больного »яжелой миастенией, содержащая аутоантитела к 'антигену мышечных волокон скелетной мышцы в титре 1:5000 и не реагирующая в этом разведении с клетками эпителиального ретику-луыа и телец Гассаля.

Согласно полученным данным, число миоидных клеток в эмбриональном тимусе составило 1.2±0.3 в одном поле зрения по сравнению с 0. 410. 03 в тимусе взрослого человека (р<0.01). Шоидные клетки в тимусе плода располагаются на всей территории дольки, тогда как во взрослом органе они локализуются только в медуллярной зоне. В эмбриональном периода миоидные клетки обладают высокой секреторной активностью, которая проявляется в отделении от их поверхности многочисленных гранул и пылевидного материала, в антигенном отношении идентичного антигенам мышечной ткани. Этот процесс очень интенсивен и обеспечивает повышенное содержание миоидных антигенов во вну.ренней среде эмбрионально-

го органа. Другая особенность миоидных клеток в тимусе плода состоит в том, что они в большом количестве присоединяются к тельцам Гассапя. В тимусе взрослого человека этот процесс, а также секреторная активность миоидных клеток наблюдается редко. Таким образом, функциональная активность миоидных клеток имеет четко выраженные онтогенетические различия, причем ее максимальный уровень наблюдается в эмбриональном органе, то есть з пе-иод наиболее активного формирования Т системы иммунитета.

Влияние температуры окружающей среды на состояние миоидных клеток в тимусе кролика В весенне-летний период (май-июль) в в срезах тимуса кролика наблюдалось интенсивное свечение (5+) цитоплазмы крупных (30-50 мкм) миоидных клеток, обладающих высокой секреторной активностью. Количество миоидных клеток в тимусе кролика в этот период составило 1.4 ± 0.4 в одном поле зрения. В сентябре-ноябре в тимусе кролика выявлялись миоидные клетки размером 15-20 мкм, свечение цитоплазмы которых соответствовало (2+). Число миоидных клеток в этот период составило 0. б±0.04 в одном поле зрения. В декабре-марте при содержании животных в открытом виварии количество миоидных клеток в тимусе составило 0.2 ± 0.04 в одном поле зрения и свечение их цитолаз-мы соотвествовало (1+ и ±). При переводе животных в теплое по-ыеирние наблюдалось постепенное повышение количества миоидных клеток и интенсивности свечения их цитоплазмы. Процесс накопления миоидных антигенов в клетках происходил неодновременно, так как в срезе выявлялись элементы с разной интенсивностью свечения цитоплазмы. К десятому дню количество миоидных клеток и содержание миоидных антигенов в их цитоплазме не отличались от клеток, выявляемых в тимусе кролика в осенний период.

Таким образом» впервые установлено, что зависимость состояния миоидных клеток от условий внешней среды, прежде всего от ее температуры, характерна на только для тимуса холоднокровных (Васюгочкин А. М. ,1937), но и теплокровных животных. Это делает миоидные клетки тимуса теплокровных животных удобным объектом для изучения функции и влияния модуляции- активности миоидных клеток на процесс дифференцировки лимфоцитов тимуса

Антиген сарколеммы миокарда, перекрестно-реагирующий с антигеном L-форм стрептококка группы А. в миоидных клетках тиму-

муса При обработке срезов тимуса человека сывороткой кроликов, иммунизированных стабильной культурой L-форм стрептококка группы А, наблюдалось свечение периферической зоны цитоплазмы мио-идных клеток. В срезах миокарда человека, обработанных антисывороткой к культуре L-форм, наблвдалось ' свечение сарколеммы кардиомиоцитов. Адсорбция ишункой сыворотки гомогенатом ткани сердца и взвесью культуры L-форм устраняла ее реакцию с цитоплазмой миоидных клеток и сарколеммой кардиомиоцитов.

Выявление в цитоплазме миоидных клеток антигена, характерного для сарколеммы кардиомиоцитоз, расшряет имеющиеся сведения об антигенном составе этих элементов тимуса и является евдз одним свидетельством их глубокого антигенного сходства с разными типами мышечных тканей организма. Кроме того наш данные свидетельствуют о том, что перекрестные антигены стрептококка группы А и его L-форм присутствуют не только в специализированных тканях, но и в гетероорганных элементах паренхимы тимуса.

3. 4. Гетероорганные антигены как факторы диффрренцировки лимфоцитов тимуса

Результаты, представленные в предыдущих разделах, свидетельствует о том, что гетероорганные антигены являются обязате-" льным компонентом внутренней среды тимуса и невидимому необходимы, наряду с другими её факторами, для диффаренцировки лимфоцитов органа Исходя из этого в настоящем разделе исследования предпринята попытка определения на тимоцитах рецепторов для лактоферрина, секреторного компонента и А-полисахарида как носителя общих детерминант с одним из эпидермальных антигенов тимуса Показано, что рецепторы для лактоферрина и секреторного компонента имеются на клетках периферических лимфоидных органов (Stafford et al. ,1982;Bennet et al., 1984; Broxmeyer et al. ,1982; Lima et al. ,1985; Brier et al. ,1988). Вопрос о наличии на лих^ фоидкых клетках рецепторов для А-полисахарида не исследован.

Известно, что теофиллин и аденозин, действуя через систему цАШ>, вызывают фенотипические и функциональные изменения клеток иммунной системы, во многом сходные с такими гормонами тимуса, как тимопоатин и сывороточный фактор ^.Bach et al. ,1975; Nay lor

е1а1. ,1975; Ыирошиченко Й.Е. и др. ,1985). Левамизол действует на другой компонент системы циклических нуклеотидов - цГШ и в этом отношении: сходен с тимозинои (Седеров Н. А., 1979). Кроме того в настощее время доказано влияние одних субпопуляций лимфоцитов тимусч на дифференцировку других посредством лимфоки-нов, в том числе ИЛ-2 (Lindquist е1 а1. ,1988; ЕпсЗзЬгот еЪ а1., 1988). Исходя из этого вторая задача настоящего раздела исследований состояла в том, чтобы, используя набор достаточно изученных иммуномодуляторов, а тага® декантат трехчасовой культуры тимоцитов, как возмодньгй источник их медиаторов, получить под- -тверядение рецепторной природы связывания тимоцитами лактофер-рина, секреторного компонента и А-полисахарида

Рецепторы тимоцитов для лакгоферрина, секреторного компонента и полисахарида стрептококка группы А. Влияние на их экспрессия теофиллина, аденозина, левамизода и декантата тимоцитов. При последовательной обработке лимфоцитов тимуса лакто-фэррлном, секреторным компонентом и А-полисахаридом, кроличьими антителами против этих факторов и меченными ФИТЦ антителами против кролика на поверхности клеток наблюдается свечение точечных структур и образований в виде шляпки. Количество . лимфоцитов, связывающих лактоферрин, секреторный компонент и А-полисахарид в тимусе человека составляет соответственно 3.5 ± 0. ЭХ; б. 3 ± 1.5Х и 5.7 + 1.52. Поскольку теофиллин, аде-нозин, левамизол и декантат тимоцитов оказывают одинаковый аффект на Тлф,Тек и Тпс клетки, мы ограничимся подробным ■изложением полученных данных только в отношении Тлф клеток.

' Стимулирующее действие теофиллина на способность лимфоцитов тимуса зкспрессировать рецепторы для лакгоферрина (Рлф) отмечено в 70±15% случаев. Число Тлф клеток увеличилось под его влиянием до 7.8+1.3% и достоверно превышало контроль и исходный уровень Тлф клеток (р<0.05). Снижение числа Тлф клеток под влиянием теофиллина*не наблюдалось. Аналогичные результаты получены в отношении аденозина и декантата тимоцитов. В отличие -от этого левамизол не оказывал влияния на способность тимоцитов зкспрессировать Рлф и нэ вызывал изменения числа Тлф клеток. Стимулируюшэе действие теофиллина и аденозина, повидимому, обусловлено тем, что они действуют на предшественники, то есть на

клетки, потенциально способные экспрессировагь Рлф, Рек или Рпс, что и приводит к повышению числа Тлф, Тек и Тпс клеток. Выесге с тем опьггы с теофиллином и аденозшом показывают, что экспрессия этих рецепторов, подобно таким дифференцировочным маркерам, как ГЬу-1 антиген и рецептар для эритроцитов барана, является цАДО-- зависимым процессом и повидимому регулируется гормонами тимуса, действующими через систему цАМФ (АзЬаШ ей а1., 1976; филин А. А. ,1985). Обнаружение равного с теофиллином и аденози-ном стимулирующего аффекта декантата тимоцитов свидетельствует о том, что,дифференцировка Тлф, Тек и Тпс клеток происходит не только под влиянием факторов паренхимы тимуса, но и медиаторов, выделяемых другими субпопуляциями лимфоцитов органа.

Влияние лакгоферрина. секреторного компонента и полисахарида стрептококка группы А на способность лимфоцитов тимуса зке-прессировать рецепторы для Рс-фрагмента иммуноглобулинов класса М.А и а В связи с данными, подученными в предыдущем разделе, очевидна необходимость исследования функции гетероорганных антигенов тимуса, их роли в дифференцировке его лимфоцитов. Один из подходов к высневго этого вопроса состоит в изучении влияния гетероорганных факторов на способность тимоцитов зкспрессиро-вать определенные маркеры. В настоящем разделе исследовано влияние лакгоферрина, секреторного компонента и А-полисахарида на способность лимфоцитов тимуса экспрессировагь рецепторы для Тс-фрагмента 1вМ, 1еА и

Согласно полученным данным, количество Т^ и клеток в тимусе человека составляет соответственно 1.9+0.632; 0.9810.172 и 2.2±1.02. Установлено, что наиболее широким спектром .иммуномодулирупщзго действия в использованной нами модельной системе обладает лагсгоферрин, так как он оказывает влияние на все три субпопуляции лимфоцитов органа Направленность его модулирующего эффекта на Т^ клетки определяется их . количеством в тимусе. При их низком уровне (< 22), лактофэррин стимулирует экспрессию Гс^Р на тимоцитах и вызывает увеличение числа 1}* клеток. Цри повышенном уровне Тг клеток (> 32) лактоферрин ингибирует их способность зкспрессировать Рс^Р и вызывает сни-, женив числа этих клеток. Эти данные свидетельствуют о том, что влияние лакгоферрина на сублопуляцгоо ¡у клеток тимуса имеет ре-

гуляторный характер. В отличие от этого, на ту и ТЛ клетки он оказывает только стимулирующее действие, вызывая повышение их кодиичества независимо от их исходного уровня в тимусе.

Секреторный компонент, в отличие от лактоферрина, оказывает регуляторное действие не только на Т^, но и на клетки, но при этом не действует на клетки тимуса.

Иммуномодулирушэя активность А-полисахарида токе проявля- , ется в способности модулировать экспрессию Рс^Р и ^ Р на лимфоцитах тимуса Подобно секреторному компоненту, влияние А-по-лисахарида на и Т^- клетки тимуса имеет регуляторный характер.

Таким образом, в результате проведенного исследования впервые на антигенном уровне доказано присутствие в паренхиме тимуса системы факторов, идентичных с компонентами ряда высокоспециализированных тканей организма (гетероорганных антигенов). Анализ взаиморасположения клеточных элементов, синтезирующих эти факторы, свидетельствует о том, что гетероорганная система паренхиш тимуса состоит из структурно обособленных подсистем, клетки которых продуцируют субстанции, характерныв для определенного типа тканей. Структурная организация изученных наш подсистем основана на двух разных принципах. Одни из них пред- . ставляют пространственно разобщенную совокупность клеток, не объединенных в целостные образования (миоиднш клетки, клетки-продуценты лактоферрина). В отличие от этого клетки, синтезирующие зпидермальныэ антигены, образуют единую пространственно связанную систему - эпителиальный ретикудум, а клетки-продуценты секреторного компонента объединены в структуры типа ацину-сов, характерных для железистых органов. Важным элементом этой подсистемы в тимусе являются мембраноподобные образования,в которых аккокулируется секреторнй компонент. Вместе с тем в организации всех изученных подсистем имеется обдря закономерность, в соответствии с которой клеточные элементы каждой из них на заключительной стадии жизнедеятельности проникает на территорию телец Гассаля.

Благодаря мозаичному строению паренхимы тимуса и секреторной активности клеток, продуцирующих гетероорганные факторы, обеспечивается их сочетанное влияние на лимфоциты органа Вместе с тем гетероорганные подсистемы могут оказывать и неза-

висимое влияние на тимоциты. Существование такой автономности подтверждается онтогенетическими различиями в функциональной активности гетероорганных подсистем, особенно четко выраженные у миоидных клеток и клеток, продуцирующих секреторный компонент. Участие гетероорганных факторов в дифференцировке тимо-цитов подтверждается присутствием на их поверхности рецепторов для лактоферрина и секреторного компонента, а также наличием у этих факторов иммуномодулирующей активности. Аналогичные ладные в отношении А-полисахарида позволяют предположить, что благодаря общим детерминантам с одним из зпидермальных факторов тимуса, он может выступать в роли его функционального аналога. Это предположение, повидимому, справедливо и в отношении антигена Ь-форм стрептококка группы А,, обшэго с антигеном миоидных клеток.

Полученные данные позволили сформулировать две концепции. Одна их них касается представления о гетероорганных антигенах тимуса как о система иммуношдулирувщих факторов неликвидной природы, которые продуцируются клетками паренхимы тимуса и которые принимает участче в дифференцировке его лимфоцитов. Вторая концепция рассматривает бактериальные антигены - носители перекрестных детерминант с гетероорганными антигенами и другими факторами паренхим?' тимуса в роли их функциональных аналогов, способных нарушать формирование иммунного ответа при инфекцирнт 'них процессах.

На основе полученных данных в следующем разделе исследований проанализированы особенности повреждения гетероорганных элементов паренхимы тимуса и изменения свойств Тлф, Тек, Тпс, Т^, Т^ и Тд, клеток этого органа при таких заболеваниях как ревматизм, тяжелая миастения и миопатия.

4. ШМУЮЮР<ЮЮГИЧЕСКИЕ ИЗИЩЕНИЯ В ТИМУСЕ БОЛЬНЫХ РЕШАГИЗЮМ

Аутоантитела к зпидермальным антигенам тимуса в крови больных ревматиамом. В 82% случаев при первичном ревматиаме и в 751 случаев в норме в крови детей обнаружены аутоантитела к антигену клеток эпителиального ретикулума, обп^му ПНА. Повышенный

• - 25 -

уровень аугоантител к этому антигену (титр 1:32-1:128) выявлен у 57.0±9.4% Сольных ревматизмом и только у 15.0±б. 3% здоровых детей (р<0.05), причем в норме уровень этих антител не превышал.1:64.

Аутоантитела к антигену клеток телец Гассаля, общему с антигеном цитоплазмы клеток дифференцированных слоев эпидермиса, при ревматизме, такие как и в норме, выявлены в 1002 случаев. Высокий уровень антител (1:120) наблюдался в 70.0±8. IX случаев при ревматизме и в 49.Ctt8.7S случаев в норме (р<0. 05).

Таким образом, при первичном ревматизме достоверно чакр, чем в норме, наблюдается повышенный уровень аугоантител к двум епидермалъныы антигенам тимуса, один из которых локализован в цитоплазме клеток эпителиального ретикулума и другой - в цитоплазме клеток телец Гассаля.

Наряду с этим, прямым методом иимунофлуоресценции у 10% больных ревматизмом выявлена очаговая деструкция эпителиальных клеток наружных слоев корковой зоны тимуса В цитоплазме пов-редленных клеток и в расширенных иежпеточяых пространствах обнаружены 1гА, и СЗ-компонент комплемента В 25% случаев отмечена фиксация 1гв и 1гА в цитоплазме неизмененных клеток эпителиального ретикулума корковой и медуллярной зона

Изменение миоидных клеток в тимусе больных ревматизмом. В отличие от элементов эпителиального ретикулума изменение миоид-ных клеток наблюдается у всех больных ревматизмом. Число миоидных клеток в тимусе больных ревматизмом составляет 1.20л0. Об в одном поле зрения по сравнению с 0.40±0.03 в норма (р< 0.001), Наряду с элементами обычной (округлой или овальной) формы в нем присутствует болыпое количество удлиненных клеток, напоминающих мышечное волокно. Миоидные клетки в тимусе больных ревматизмом обладают высокой секреторной активностью, которая по своей интенсивности сравнима с секреторной активностью миоидных клеток эмбрионального органа Локализация миоидных клеток в тимусе больных ревматизмом не ограничивается, как в норме, медуллярной зоной, и они выявляются на всей территории дольки, в том числе и в субкапсулярном слое среди камбиальных элементов эпителия. В сочетании с высокой секреторной активностью это обеспечивает особые, отличные от нормального тимуса, условия, благодаря ко-

- га -

торым дифференцировка тишцитов, начиная с самых ранних ее этапов, происходит в условиях повышенного уровня и тесного контакта с факторами секреции миоидных клеток. Вместе с тем, в тимусе больных ревматизмом присутствуют дегенерирующие элементы, подвергающиеся распаду, в цитоплазме которых присутствуют связанные IgM и IgG и СЗ-компонент комплемента.

Отложение иммунных комплексов в стенке сосудов тимуса больных ревматизмом. Методом прямой иммунофлуоресценции в тимусе больных ревматизмом в 40Х случаев в цитоплазме зндотелиальных клеток, выстилающих сосуды органа, выявлены связанные IgM и IgG. В 80Z случаев наблюдалось отложение гранул иммунных комплексов в зоне эластической мембраны стенки сосудов тимуса

Отложение иммунных комплексов по границам лимфоцитов корковой зоны тимуса больных ревматизмом. Методом прямой иммунофлуоресценции в корковой зона тимуса больных ревматизмом выявлены очаговые отложения иммунных комплексов. В 75% случаев в их составе обнаружен IgG, в 50Z - IgA ив 20% - IgM. В ЗОХ случаев в иммунных комплексах содержался СЗ-компонент комплемента Иммунные комплексы в виде зернистых и пылевидных образований заполняют межклеточные пространства вокруг тимоцитов. Кроме того, иммунные комплексы могут иметь форму крупных конгломератов неправильной формы. Размеры очаговых отложений иммунных комплексов очень варьируют и могут достигать значительной величины, охватывая большие группы лимфоцитов, начиная от субкапсулярно расположенных клеток и до границы медуллярной зоны. В медуллярной гоне тимуса отложения иммунных комплексов при ревматизме не выявлены. Такая локализация иммунных комплексов свидетельствует . о том, что патологический процесс при ревматизме затрагивает наименее арелые в функциональном отношении, находящееся на ранних стадиях дифференцировки, лимфоциты тимуса Продуцентами антител, входящих в состав иммунных комплексов, могут быть многочисленные плазматические клетки, присутствующие в паренхиме органа и в его интерстициальной соединительной ткани.

Влияние теофиллина, аденозина, левамизола и декаятата тишцитов на способность лимфоцитов тимуса больных ревматизмом акспресскровать рецепторы для лактоферрина, секреторного компонента и полисахарида стрептококка группы А. Количество Тлф, Тек

и Тпс клеток в тимусе Сольных ревматизмом не отличается от нормы, однако реакция этих клеток и особенно их предшественников на иммуномодудяторы подвергается глубоким изменениям, которые имеют специфичный для каждой субпопуляции клеток характер.

Изменение свойств Глф клеток затрагивает только их реакцию на аденозин. Увеличение числа Тлф клеток под его влиянием отмечено при ревматизме только в 20.0±9.0Z случаев по сравнению с 64.0±13. ОХ в норма (р<0.05). Вместе с тем при проявлении стимулирующего эффекта аденозина выявлено такое же количество Тлф клеток, что и в корме. Из этого следует, что снижение частоты проявления стимулшрующэго эффекта аденозина не связано с дефицитом предкественников Тлф клеток в тимусе больных ревматизмом и обусловлено их ареакхизностью, то есть неспособностью экспре-ссировать Рлф под влиянием этого препарата. Изменение реакции самих Тлф клеток на аденозин проявляется в том, что в абсолютном большинстве случаев он ингибирует их способность зкспрессировать Рлф, что приводит к достоверному снижению их количества по сравнению с исходным показателем.

Изменение свойств предшественников Тек клеток в тимусе больных ревматизмом имеет более глубокий характер, так как в абсолютном большинстве случаев они не способны зкспрессировать Рек не только под влиянием аденозина, но и теофиллина и декантата тимоцитов. Такта как и в случае предшественников Тлф меток, это обусловлено их ареактивностью. Влияние на Тек клетки эти препараты, также как и в норме, не оказывают.

Частота проявления стимулирующего эффекта теофиллина и аденозина на способность тимоцитов зкспрессировать Рпс при ревматизме не отличается от нормы, однако количество выявляемых при этом Тпс клеток в два раза ниже, чем в норме (р<0.01). Стимулирующее действие декантата при ревматизма проявляется достоверно реже, чем в норме, и под его влиянием образуется такое же количество Тпс клеток, что и при действии аденозина и теофиллина. Изменение реакции самих Тпс клеток на декантат заключается в том, что в абсолютном большинстве случаев он ингибирует их способность зкспрессировать Рпс и вызывает достоверное снижение числа Тпс клеток по сравнению с исходным уровнем. Частота проявления стимулирующего эффекта левамиаола при ревматизме не от-

личается от нормы- Вместе с тем при стимулирующем эффекте лева-мизола образуется число Тпс клеток, сравнимое с тем, которое обнаруживается при действии аденозина, теофиллина и декантата на нормальные тимоциты. Из этого следует, что снижение частоты проявления стимулируюирго эффекта декантата и слабый стимулирующий эффект аденозина и теофиллина при ревматизме не связаны с дефицитом предшественников в тимусе больных ревштизмом и, по-видимому, обусловлены нарушением процесса их дифференциров-ки. В результате этого нарушения предшественники не достигают стадии, чувствительной к декантату, и только часть из них (вдвое меньшая, чем в норме) приобретает способность экспресси-ровать Рпс под влиянием аденозина и теофиллина. Различие в характере реакции Тпс клеток и их предшественников на декантат по сравнению с теофшшином и аденозином свидетельствует о том, что в основе действия декантата и этих препаратов лежат разные механизмы. Вместе с тем изменение реакции на декантат указывает на нарушение взаимодействия Тпс клеток с другими субпопуляциями лимфоцитов в тимусе больных ревматизмом.

Особенности реакции Тц,Ту и Ъ. клеток тимуса больных ревматизмом на дактоферрик, секреторный компонент и полисахарид стрептококка группы А. Количество ^ клеток в тимусе больных ревматизмом и их реакция на лакгоферрин, секреторный компонент и А-полисахарид не отличается от нормы, и влияние этих факторов имеет регуляторный характер.

Количество Т^ клеток в тимусе больных ревматизмом и модулирующий эффект лактоферрина на эти клетки тоже не отличается от нормы, гак как его влияние направлено на увеличение числа Т^ клеток независимо от их 'исходного уровня. Стимулирушиэе действие на Т^ клетки тимуса больных ревматизмом оказывают также секреторный компонент и А-полисахарид, тогда как в норме их влияние имеет регуляторный характер. Кроме того действие А-по-лисахарида на Т^ клетки при ревматизме наблюдается достоверно чаще, однако в количественном отношении его эффект не отличается от нормы.

Количество клеток в тимусе больных ревматизмом составляет 0.30±0.05Х, что достоверно ниже их уровня в нормальном органе- (2.2±0. 81). Наряду с дефицитом клеток при ревматизме об-

нарушено изменение реакции их предшественников на лактоферрин и секреторный компонент, которые оказывают на них противоположна по сравнению с нормой аффект. Предшественники клеток в тимусе больных ревматизмом не обладают способностью экспрессировать Рс^Р под влиянием лактоферрина, так как он не вшивает ушлнче-ния числа ТА клеток. Вместо с тем, выралннное стимулирукззе действие оказывает на предшественники Т^ клеток секреторный компонент, приводя к повышенна их количества до нормального уровня. Наряду с глубоким изменением свойств предшественники и дефицитом Т^ клеток в тимусе больных ревматизмом, эти данные свидетельствуют о том, что секреторный компонент, подобно лак-тоферрину, способен модулировать не только экспрессию Гс^Р я Рс^Р, но, при определенных условиях, и Рс^Р на лимфоцитах тимуса.

. 5, ИШУНОЮРФОЛОГИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ В ТИМУСЕ

БОЛЬНЫХ ТЯЖЕЛОЙ ШАСТЕНИЕЯ

Аутоантитела к зпидермальным антигенам тимуса в крови больных тяиэлой миастенией. У 902 больных миастенией и у 402 здоровых людей в крови обнаружены аутоантитела к антигену клеток эпителиального ретикудума тимуса, сбцэму с ПНА. Швккенвый уровень антител (1:32-128) выявлен у 5й±8. 21 больных миастенией. В норме титр антител не превышал 1:64 и наблюдался только в Ш5. а случаев (р<0.05).

Аутоантитела к антигену клеток телец Гассадя, обпдаму с антигеном цитоплазмы клеток дифференцирована слоев гпидершгса, при миастении и в норме выявлены в 100%. У б5±7.87. больных миастенией титр злтител состзвил 1:120-1:240. В корма уровень этих антител не превыпал 1:120 и отмечен только в 30.0±б. 4% случаев (р<0.05).

Таким образом при миастении, тага® как и при ревматизме, достоверно чаще, чем в норме, наблюдается повышенный уровень аутоантител к двум зпидермадьнш антигенам тимуса.

При обработке срезов тимуса больных миастенией антителами против 1ё<33 человека в 602 случаев наблюдаюсь свечение цитоплазмы клеток эпителиального ратикулума медуллярной зоны. В 502 случаев наряду со связанным 1еОЗ в цитоплазме эпителиальных кле-

ток выявлен СЗ компонент комплемента Антитела против IgGl и IgQ с цитоплазмой эпителиальных клеток тимуса больных миастенией не реагировали.

Изменение миоидных клеток в тимусе больных тяжелой миастенией. Увеличение числа миоидных клеток до 0.9б±0.16% в одном поле зрения по сравнению с 0.4±0.03 в норме (р<0,01) и их высокая секреторная активность обеспечивает повышенное содержание миоидных антигенов во внутренней среде тимуса больных тяжелой миастенией. В отличие от нормы миоидные клетки при этом заболевании локализуются на всей территории дольки за исключением субкапсулярного слоя корковой зоны, размер миоидных клеток при миастении увеличен до 30-40мкм (в норме 1Б-20мкм) и в их цитоплазме содержится большее количество миоидных антигенов, чем в клетках нормального органа. Об атом свидетельствует значительно большая интенсивность свечения их цитоплазмы и то, что с миоид-ными клетками тимуса больных миастенией сыворотки реагируют в большем разведении, чем с элементами нормального органа Наряду с этим в медуллярной зоне тимуса Сольных миастенией присутствуют дегенерирующие миоидные клетки, которые подвергаются распаду или присоединяются к тельцам Гассаля. Этот процесс при миастении наблюдается значительно чашэ, чем в норме. В цитоплазме дегенерирующих миоидных элементов выявлен связаннный IgM, IgG и СЗ компонент комплемента

Аутоантитела к поверхностному антигену лимфоцитов в крови больных тяжелой миастенией. При обработке срезов тимуса, селезенки и лимфоузла взрослого человека сывороткой крови больного миастенией наблюдалось свечение точесной антигенной структуры (TAC) на поверхности лимфоидных клеток этих органов. Антитела к ГАС выявлены у 42% больных миастенией. Их титр не превышал 1:100 и в большинстве случаев составлял 1:40. В норме антитела к TAC выявлены в 18% случаев, причем их титр не превышал 1:16 (по результатам титрования на срезах эмбрионального тимуса, см. ниже). На лимфоцитах тимуса взрослого человека TAC обладала значительно меньшей интенсивностью свечения, чем на клетках периферических лимфоидных органов. О меньшем содержании этого антигена на тимоцитах взрослого человека свидетельствуют и ре-ультаты титрования, так как с лимфоцитами тимуса сыворотки ре-

агировали в меньшем разведении, чем с лимфоцитами селезенки и лимфоузлов взрослого человека Содержание данного антигена на лимфоцитах тиыуса и селезенки плода человека одинаково и не отличается от лимфоцитов -селезенки и лимфоузла взрослого человека. Следовательно в. онтогенезе происходит снижение количества TAC на тимоцитах, и оно не изменяется на клетках периферических лимфоидных органов.

TAC на лимфоцитах тимуса Сольных миастенией обладала значительно большей интенсивностью свечения, чем на тимоцитах нормального тимуса При титровании сывороток установлено, что по содержанию данного антигена тимоциты больных миастенией не отличаются от лимфоцитов тимуса и селезенки плода и периферических лимфоидных органов взрослого человека Таким образом,при миастении не только повышается уровень и частота встречаемости антител к антигену лимфоцитов, но и увеличивается количество данного антигена на лимфоцитах тимуса больных этим заболеванием.

Отложение иммунных комплексов по границам лимфоцитов медуллярной зоны тимуса больных тяжелой миастенией. Методом прямой ишухюфлуоресценции в 901 случаев в тимусе больных миастенией обнаружены очаговые отложения гранул иммунных комплексов, содержащих IgQ, IgM, IgA и С компонента комплемента. Гранулярный материал локализуется по границам групп лимфоидных клеток, расположенных эксцентрично в средних сдоях медуллярной зоны тимуса Как правило в дольке присутствует один очаг отложений, размер которого и количество гранулярного матэриала подвержено значительным индивидуальным колебаниям. В корковой зоне тимуса больных миастенией, в отличие от ревматизма, отложений иммунных комплексов не обнаружено. В тимусе больных миастенией выявлено большое количество плазматических оеток, синтезирущих IgG, IgM и IgA, причем в медуллярной зоне они иногда располагаются в непосредственной близости от отложений иммунных комплексов.

Особенности реакции Тц и %¡, клеток тимуса больных тяжелой миастенией на дактоферрин, секреторный компонент и полисахарид стрептококка группы А. фи тяжелой миастении количество , и Хс клеток в тимусе подвержено резко выраженным индивидуальным колебаниям и варьировало у исследованных больных от 0.1 до 30X.

Среднее количество Т^, Tj и \ клеток в тимусе больных миастенией составило соответственно 7.2+2.3Z; 3.2±1.0£ и 5.4±1.8Z, что достоверно выше этих показателей в норме (р<0.05).

Установлено, что действие лактоферрина на Т^ клетки при миастении не отличается от нормы и имеет регуляторный характер. Изменение реакции на секреторный компонент и А-полисахарид при миастении наблюдается в основном на уровне предшественников и не затрагивает лимфоциты, уже несуще Fc^P. Так, при низком уроЕне fy клеток А-полисахарид в отличие от нормы не оказывает стимулирующего аффекта, а стимулирующее действие секреторного компонента проявляется реже, чем в норме. При этом на фоне увеличения числа у клеток в контроле оба фактора оказывают ингиби-рующее действие, снижая юс количество до исходного уровня. При повышенном уровне Т)« клеток в тимусе больных миастенией оба модулятора, также как и в норме , оказывают ингибирующге действие, вызывая снимание числа Т^клеток.

Влияние лактоферрина на fy клетки тимуса при миастении, в отличие от нормы, имеет не стимулирующий, а регуляторный характер. В модулирующем эффекте секреторного компонента и А-полисахарида на 1J- клетки при миастении не выявлено четкой закономерности, так как направленность их действия не зависела от исходного уровня этих клеток в тимусе и в каждом конкретном случае определялась'свойствами этих клеток и их предсественников.

При миастении, также как и при ревматизме, наблюдается инверсия в реакцйи предшественников %, клеток на лактоферрин и секреторный компонент. В соответствии с этим они ареактивны к лакто-феррину и чувствительны к стимулирующему эффекту секреторного компонента, который стимулирует экспрессию FcyP на их поверхности и вызывает увеличение числа Т^ клеток независимо от их исходного уровня в тимусе.

6. ИШУНОШРФОЛОГИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ В ТИМУСЕ БОЛЬНЫХ ШШАТИЕЙ

Аутоантитела к зпидермальныи антигенам тимуса в крови больных миопаткей. Установлено, что частота выявления и уровень ау-тоантител к антигену клеток эпителиального ретикулума тимуса,

общему о ПНА, и к антигену клеток телец Гассаля, общэму с антигеном цитоплазмы дифференцированных слоев эпидермиса, при иио-патии не отличается от нормы.

Вместе с тем в срезах тимуса больных миопатией в 95% случаев независимо от формы заболевания методом прямой кммунофлуо-ресценции обнаружены связанные ГеС, !еА и СЗ компонент комплемента в мембраноподобньи образованиях, расположенных под капсулой дольки и на границе медду корковой и медуллярной зоной, а также в цитоплазме эпителиальных клеток субкалсулярнсго слоя.

При обработке срезов тимуса больных миопатией сывороткой крови, содержащей антитела к антигену клеток телец Гассаля, выявлено кистозное перерождение этих структур, увеличение их количества и размеров, что согласуется с результатами морфологических исследований (Валикова Т. А. ,1983).

Изменение миоидных клеток в тимусе больных миопатией. В отличие от клеток эпителиального ретикулума, изменение «мощных элементов органа при ммопатии имеет нозологически специфичный характер. При миолатии Двшена (наиболее тяжелая форма заболевания) в тимусе обнаружен дефицит миоидных антигенов. Это связано со снижением числа миоидных клеток до 0.25Ю. Об в одном поле зрения. (р<0. 001) и с резким уменьшением их размеров. ■ Во многих случаях типичные ыиоидныо клетки в тимусе не выявлялись и миод-ные антигены содержались только в мелких гранулах. В отличие от этого при миопатии Эрба набдвдается повышенное содержание миоидных антигенов во внутренней среде органа в результата увеличения числа миоидных клеток до 1.2±0.2 в одном поле зрения (р<0.01) и их высокой секреторной активности. Шоидиш клетки вывлялись на всей территории долек органа, в том числе и а суб-капсулярном слое среди камбиального эпителия. Они характеризуются выраженным полиморфизмом, связанным с преобладанием элементов удлиненной формы, и заметным колебанием количества миоидных антигенов в цитоплазме, так как во многих клетках они располагаются только по её периферии. В тимусе больных миопатией Зрба присутствует большое количество дегенерирующих миоидных элементов, однако связанны® иммуноглобулины в их цитоплазма не обнаружены.

Отложение иммунных комплексов по границам лимфоцитов корти-

ко-медуллрной зоны в тимусе больных миопатией. В ЗОХ случаев в тимусе больных миопатией обнаружено отложение иммунных комплексов, содержащих и СЗ компонент комплемента йммуные комплексы имеют форму удлиненных образований и локализуется по границам небольших групп тимоцитов кортика-медуллярной зоны долек органа В междольковой соединительной ткани и в паренхиме тимуса больных миопатией црисутсвуют многочисленные плазматические клетки, продуцирующие и

Влияние теофиллина, аденозина, левамизола и декантата тимоцитов на способность лимфоцитов тимуса больных миопатией зкспрессировать рецепторы для лактоферрина, секреторного компонента и полисахарида стрептококка группы А. Количество Тлф клеток и реакция их предшественников на иммуномодуляторы при миопатии не отличается от нормы.

Среднее число Тек клеток в тимусе больных миопатией составило 2.3+0.58%, по сравнению с 6.3±1. 52 в норме (р<0.05). Частота проявления стимулируадэго аффекта аденозина, теофиллина и декантата тимоцитов и количество образующихся под их влиянием Тек клеток при миопатии не- отличались от нормы. Стимулирующее действие левамизола при миопатии наблюдалось достоверно чашз, чем в норме, причем при его проявлении обнаруживалось такое же количество Гек клеток, что и при действии других препаратов. Следовательно предшественники Тек клеток в тимусе больных миопатией в отличие от нормы способны зкспрессировать Рек не только под влиянием препаратов, повышающих внутриклеточный уровень цАМФ, но и цГМФ. Кроме того для миопатии характерно несоответствие между нормальным уровнем предшественников, чувствительных к действию иммуномодуляторов, и дефицитом Тек клеток в тимусе.

Среднее число Тпс клеток в тимусе больных миопатией составило 2. по сравнению с 5.7±1.51 в норме (р<0.05). Частота проявления" стимулирующего эффекта аденозина, теофиллина и де-канта тимоцитов при миопатии не отличалась, а левамизола была достоверно выше, чем в норме. В тоже время при действии всех этих препаратов выявлялось в два раза меньшее число Тпс клеток, чем при их действии на нормальные тимоциты (р<0.05). Таким образом, в отличие от Тек клеток дефицит Тпс клеток в тимусе больных миопатией коррелирует со сниежением уровня предшествен-

' - 35 -

Ников, чувствительных к действию иммуномодуляторов. Вместе с тем при миопатии в отличие от ревматизма ни в одном из исследованных случаев число Тпс клеток при действии иммуномодулирущих препаратов не достигало нормального уровня. Это не позволяет определить, связано ли снижение количества Тпс клеток с ареак-тивностыо предшественников или же с их истинным дефицитом, который и приводит к уменьшению числа Тпс клеток в тимусе больных ыиопатией. Следует также отметить, что выявленные при миопатяи изменения свойств Тек и Тпс клеток не зависят от формы заболевания.

Таким образом, совокупность данных, полученных в результате сравнительного иммуиоморфологического исследования тимуса больных ревматизмом, тяжелой миастенией и миопатией, позволяет констатировать, что формирование нозологически специфичных форм иммунологической недостаточности при этих заболеваниях происходит с участием тимуса как центрального органа ишунной системы.

Результаты проведенного исследования свидетельствуют также о том, что патологический процесс при этих заболеваниях в равной мере затрагивает как различные гетероорганнь© подсистемы паренхимы тимуса, так и функционально связанные с ниш суОпопу-ляции его лимфоцитов. Такая взаимосвязь является веским подтверждением высказанного наш предположения, согласно которому диф-ференцировка и формирование субпопуляционной струга?ры лимфоцитов тимуса происходит под непосредственным влиянием системы факторов, в антигенном отношении идентичных тканеспэцифическим компонентам.

В настоящее время можно считать установленным, что глубокое антигенное сходство эпителия тимуса и кожи отражает наличие у них общих функций (Sander,1983; Bos & Kapsenberg,1986). Представление о коже как об органе иммунитета основано на данных о способности клеток эпидермиса продуцировать различные иммуно-модулирующие факторы, в том числе и гормоны тимуса (Kato et al. 1981; 1983; Chu et al. ,1983; Luger et al. ,1985; Coleman et al., 1987). Принципиальный интерес для обсуждаемого вопроса представляют данные о структурном сходстве молекулы СФГ с одним из тканеспецифических компонентов покровных зпителиев - цитокера-

- 36 -

тиной 56К (Kato et al. ,1983).

Вместе с тем присутствие в тимусе системы гетероорганкых антигенов дает основание полагать, что функиональное сходство его паренхимы не ограничивается покровными апителиями и в равной мере характерно и для других, возможно всех, типов тканей.

Б отношении нервной ткани это подтверждается способностью клеток паренхимы тимуса продуцировать нейрогормоны и нейромеди-аторы, а также тем фактом, что их синтез в тимус'е увеличивается не только при развитии в органе первичных карцином, но и в процессе иммуннного ответа на инфекционные агенты (Fontana,1982; Carr et al. ,1986). Установлено также, что астроциты глии и нейроны вырабатывают ряд лимфокинов и гормон тимуса В4-тимозин (Fontana, 1982; Ногескег, 1984; Robins et al. ,1987).

Аналогичная ситуация справедлива и в отношении секреторных зпителиев экто- и энтодермального происхождения. Известно, что местный иммунитет обеспечивается не только клетками иммунной системы, но и продуктами. экскреции ряда жвлеаистых органов, эпителия кишечника и дыхательных путей. В состав. экскреторных жидкостей входят лактоферрйн и секреторный компонент, которые обладают широким спектром иммуномодулиругшрго действия-»' оказывают влияние на разные элементы кшуннной4системы (Fox, 1982; Stafford et al. ,1982; Broxmeyer et al. ,1984; Lima et al. ,1985; Slatter et al. ,1937; Brler et al. ,1988). В наших исследованиях установлено, что эта функция лактоферрина и секреторного компонента проявляется- и на уровне тимуса. Участие лактоферрина и секреторного компонента в дифференцировке тимоцитов продемонстрировано наш на примере юс влияния на Т^, и ^клетки тимуса. Возможно, что их функция этим не ограничивается, и они принимают участие в дифференцировке других субпопуляций органа.

Способность миокдных клеток вырабатывать иммуномодулирухвде факторы экспериментально доказана Капо et al. (1983). Эти авторы показали, что миоидные клетки секретируиг фактор, стимулирующий пролиферацию тимоцитов и моноцитов. Антигенные свойства этого фактора не изучены, однако результаты наших исследований свидетельствуют о том, что секретируемый миоидными клетками материал в антигенном отношении идентичен компонентам мышечных тканей. Это позволяет предполагать наличие иммуномодулирущих

свойств не только у миоидных клеток, но и у соответствующих тканеспецифических компонентов мышечных тканей. Правомерность этого предположения подтверждается тем фактом, что миобласты, подобно клеткам других тканей (эпителий печени, нейробласты и др.), являются активными продуцентами В4-тимозина (Ногескег, 1984). Имеется ряд данных, указывающих на структурную связь молекулы В4-тимозина с цитоскелегоы клеток этих тканей, подобно тому, как это показано в отношении сходства молекулы <CffiT с ци~ токератином 56К - маркером покровных эпителиев зпидермального типа(КаЮ et al. ,1983;Ногескег, 1984). Несомненный интерес представляют данные о тесной связи между состоянием мышечных тканей организма и миоидными клетками тимуса. Так, в наших исследованиях показано, что патологические процессы, затрагиваю^ разные элементы и типы мышечных тканей, сопровождаются глубокими изменениями миоидных клеток тимуса, которые имеет нозологи-чески специфичный характер. Экспериментальное подтверждение такой взаимосвязи получено Болдыревым R В. с соавт. (1989). Со-лагласно данный этих авторов, ужа в первые часы после удаления сердца и его замены искусственным органом в тимусе животных наблюдается резкое повьшение секреторной активности миоидных клеток. Еае более убедительным доказательством существования тесной взаимосвязи между состоянием гэтероорганных подсистем паренхимы тимуса и соответствующих тканей, основанной на обкяоеги их иммуномодулируодих функций, является гот факт, что у оести-мусных мышей уровень продукции В4-тимогина в тканях значительно выше, чем у нормальных животных (Ногескег,1984).

Таким образом, совокупность имешихся данных свидетельствует о том, что способность вырабатывать факторы, вдиящие на дифференцировку и функциональную активность элементов иммунной системы, не является исключительной прерогативой тимическо-го эпителия и присуща клеткам многих тканей организма. Это дает основание рассматривать гетероорганные антигены тимуса как часть единой системы иммуномодулирувщкх факторов нелимфоидной природы, структурно связанных или идентичных с тканеспецифи-ческими антигенами разных тканей. Существование единой системы иммуномодулирувщих факторов на основе тканеспецифических антигенов позволяет обеспечивать завершение начатого в тимусе про-

цесса дифференцировки Г клеток и выполнение некоторых функций этого органа (прежде всего тех, которые связаны с гетероорган-ными антигенами) при его повреждении и после возрастной инволюции.

ВЫВОДЫ

1. Впервые проведенное целенаправленное исследование позволило экспериментально доказать присутствие в паренхиме тимуса системы гетероорганных антигенов, идентичных с компонентами покровных, секреторных и мышечных тканей, и получить новые данные о принципах морфо-функциональной организации этой системы факторов:

- система гетероорганных антигенов состоит из структурно обособленных подсистем, клетки которых продуцируют субстанции, характерные для определенного типа ткани;

- выявлено два типа структурной организации изученных подсистем: (1) объединение клеток в единую, пространственно связанную и обособленную структуру (клетки-продуценты эпидермаль-ных антигенов образуют эпителиальный ретикулум; клетки-продуценты секреторного компонента формируют железистые ацинусы); пространственно раз об ¡ценные популяции клеток (миоидные элементы; клетки-продуценты лактоферрина);

- внутри каждой подсистемы имеется вектор дифференцировки клеток, которая начинается в корковой и заканчивается в медуллярной зоне на территории телец Гассаля;

- сочетанное влияние гетероорганных антигенов на тимоциты обеспечивается благодаря секреторной активности клеток, продуцирующих эти факторы. На иммуноморфологическом уровне секреторная активность впервые обнаружена у миоидных элементов и клеток, продуцирующих секреторный компонент и лактоферрин. Это позволяет рассматривать гетероорганные антигены как систему факторов внутренней среды тимуса.

2. Впервые обнаружены онтогенетические различия в функциональной активности гетероорганных подсистем. Установлено, что в эмбриональном тимусе повышено количество и секреторная активность миоидных клеток к снижено содержание секреторного компонента в клетках железистых ацинусов. Это доказывает, что созре-

вание тимоцитов в процессе онтогенеза происходит в разных условиях микроокружвния.

3. В тимусе человека впервые идентифицированы лимфоциты с рецепторами для гетероорганных факторов - лактоферрина, секреторного компонента ж полисахарида стрептококка группы А, имеющего общую детерминанту с одним из зпидермаяьных антигенов органа (Тлф.Тск и Гпс клетки). Выявлены предшественники этих клеток - лимфоциты, способные экспрессировать Рлф, Рек и Рпс под влиянием адеиозина, теофилдина и декантата трехчасовой культуры тимоцитов. Тлф.Тск.Тпс клетки и их предшественники присутствует в тимусе в равном соотношении.

4. Ери изучении функции гетерооорганных факторов установлена их способность при действии in vitro модулировать экспрессию рецепторов для Fc- фрагмента 1еЫ, IgG и IgA на тимоцитах. Влияние лактоферрина на 7р клетки, секреторного компонента и полисахарида стрептококка группы А на Т^ и Т^ клетки имеет регуля-торный характер: при низком уровне они повышают, а при высоком - снижают число этих клеток. Лакгоферрин увеличивает число Т^-и клеток независимо от их исходного уровня в тимусе. Влияние секреторного компонента на клетки проявляется только в патологии. .

5. Впервые проведено сравнительное иммуиоморфологическое исследование изменений тимуса при ревматизме, тяжелой миастении и миопатии. Установлено, что повреждение элементов эпителиального ретику дума и миоидных клеток при этих заболеваниях имеет нозологически специфичный характер.

6. В крови больных ревматизмом и тяжелой миастенией впервые обнаружен повышенный уровень аутоантител к антигену клеток эпителиального ретикулуш тимуса, общему с антигеном перинуклеар-ной зоны клеток эпидермиса. В крови больных миастенией выявлены аутоантитела к поверхностному антигену лимфоцитов тимуса и периферических лиыфоидных органов. Установлено повышенное содержание эпидермальных антигенов в клетках эпителиального рети-кулума, мышечных антигенов в миоидных клетках и поверхностного антигена на лимфоцитах тимуса Сольных миастенией по сравнению с нормальным органом. Это свидетельствует о связи антигенной модуляции с присутствием аутоаятител к этим антигенам при тяжелой

миастении.

7. В тимусе больных ревматизмом, тяжелой миастенией и ревматизмом впервые выявлены отложения иммунных комплексов. При ревматизме они локализуются по границам тимоцитов корковой зоны, при миопатии - вокруг отдельных групп лимфоцитов кортико--медуллярного слоя, при миастении - по границам лимфоцитов медуллярной зоны. Различие в локализации иммунных комплексов означает, что патологический процесс при этих заболеваниях затрагивает тимоциты, находящееся на разных стадиях дифференцировки.

8. Обнаружен дефицит Тек и Тпс клеток в тимусе больных мио-патией. Дефицит Тпс клеток, в отличие от Тек клеток, коррелирует с дефицитом предшественников, чувствительных к ишуномодуля-торам. При ревматизме число Глф, Тек и Тпс клеток не отличается от нормы. Число предшественников Тпс клеток, чувствительных к действию иммуномодудяторов, снижено в два раза. Предшественники Тек клеток у большинства больных ревматизмом ареактивны к действию иммуномодудяторов и не способны зкспрессировать Рек под их влиянием. Таким образом, при ревматизме и миопатии изменение свойств тимоцитов, функционально связанных с гетероорганными факторами, имеет нозологически специфичный характер.

9. Обнаружен дефицит клеток в тимусе больных ревматизмом и повышенное их содержание в тимусе больных тяжелой миастенией. В отличие от нормы, предшественники клеток в тимусе больных этими заболеваниями обладает способностью зкспрессировать Рс*,--рецептор под влиянием секреторного компонента и ареактивны к лактоферрину. Выявлены изменения в характере модулирующего эффекта секреторного компонента и полисахарида стрептококка группы А на ^ к Ту клерки тиыуса при этих заболеваниях.

10. Совокупность полученных данных свидетельствует о том,что формирование нозологически специфичных форм иммунологической недостаточности при ревматизме, тяжелой миастении и миопатии происходит на уровне тимуса как центрального органа иммунной системы.

11. Обнаружение антигенной общности между полисахаридом стрептококка группы А и эпителием тимуса в сочетании с данными о наличии для него рецепторов на тимоцитах и регуляторным характером его влияния на Т* и Т. клетки органа позволяет сформу-

' - 41 -

лировать концепцию, согласно которой антигены микроорганизмов -носители общих детерминант с тимическими факторами могут выступать в роли их функциональных аналогов и нарушать формирование иммунного ответа в процессе инфекции.

12. На основании,полученных данных сформулировано представление о гетерооргакйых антигенах как о единой системе иммуномо-дулирущих факторов нелимфоидной природы, характерных не только для паренхимы тимуса, Но И для других тканей организма, система иммуномодулирующих факторов на основе тканеслецифических антигенов позволяет обеспечить завершение начатого в тимусе процесса дифференцировки Г клеток и выполнять некоторые функции этого оргайа при его повреждении и после возрастной инволюции.

Список работ, опубликованных по теме диссертации:

1. Гнездицкая Э. Е , Белецкая Л. Е, Шагал Д. И. Изучение »лето-дом иммунофлуоресценции кератина телец Гассаля и эпидермиса кожи человека// Бюл. зксперим. биологии и медицины. - 1974. - N4. - С. 89-92.

2. Белецкая л. а , Гнездицкая Э. В., Ежов Е Я Реакция сывороток больных вульгарной пузырчаткой с антигенами склеивающей субстанции эпителия телец Гассаля тимуса человека и животша // Вал. эксперт*. биологии и медицина - 1974. - N б. - С. 87-90.

а Белецкая А Е, Гнездицкая 3. Е Научение эпителиальной ткани тимуса методом иммунофлуоресценции (гетерооргашше антигены тимуса) // Вопроси иммунологии.- 1974,- N 6 - С. 124-130.

4. Гнездицкая Э. Е, Белецкая Л Е Изучение методом иммунофлуоресценции антигена коркового эпителия тимуса человека // Вопросы иммунологии.- 1974.- N 6. - С. 131-137.

5. Реакция антител к полисахариду стрептококка группы А с эпителиальными клетками тимуса и других органов / Лямлерт И. М., Белецкая Л. В, Гнездицкая 3. Е и др. // Вопросы иммунологии. -1974. - N 6. - С. 113-123.

6. Реакция антител к Полисахариду стрептококка группы А с антигенами клеточных элементов тимуса, кожи и других эпителиальных тканей / Белецкая Л. Е , Гнездицкая Э. Е и др. // Проблемы стрептококковых инфекций в этиологии и патогенезе ревматиз-

ма. Суставной синдром в ревматологии: ОЗ. науч. трудов. - М. ,1075.

- С. 52-53.

7. Белецкая Л R , Гнездицкая Э. Е Роль эпителиальной ткани тимуса в формировании естественной иммунологической толерантности // Успехи соврем, биологии. - 1975.- N 1.- С. 128-137.

8. Reaction оГ thymus epithelial cells with antibodies to group A streptococcal polysaccharide / Lyampert I.M. .Beletskaya L. V., Gnezditskaya E. V. et al. // Scand. J. Iiraunol. - 1975. -J 1

- P. 409-412.

9. A cross-reactive antigen of thymus and skin epithelial cells common with polisaccharide of group A streptococci / Lyampert I.M,, Beletskaya L. V., Gnezditskaya E. V. et al. // Immunology. - 1976.- V.31. - P. 415-418.

10. Распространение перекрестно-реагирупаэго антигена, общего для эпителия и стрептококка группы А в тканях человека и животных / Белецкая Л. Е , Гнездицкая Э. Е , Лямперт И. М. и др. // Вш. эксперим. биологии и медицины. - 1976. - N 2. - С. 212-214.

11. Immunological' cross-reactions between group A streptococcal polysaccharide and epithelial cells of the thymus and skin / Lyampert I.M. , Beletskaya L.V., Gnezditskaya E.V. et al. // Abstracts of VI Intern. Sympos. on Streptococcus pyogenes. --Prague, 1975. - P. 39-40.

12. Белецкая Л В., Гнездицкая Э. Е Изучение миоидных клеток тимуса методом иммунофлуоресценции // Архив анатомии, гистологии и эмбриологии. - 1977. - N 2. - С. 5-10.

13. Перекрестно-реагирующий антиген эпителия экгодермального происхождения в опухолях мышей / Белецкая JLE .Гнездицкая 3.Е , Райхлин Е Т. и др. // Вопросы онкологии. - 1977. - N 10. С. 83-87.

14. Гнездицкая Э. В , Белецкая Л Е , Шагал Д. И. Антитела к антигену эпителиальной ткани тимуса человека общему с эпидермисом при миастении // Вол. эксперим. биологии и медицины. - 1978.

- N 1.- С.60-62.

15. Изучение связанных иммуноглобулинов класса М, А и G в тимусе больных миастений гравис/ Гнездицкая Э.Е .Белецкая Л.Е , Ипполитов И. X и др. // Вш. эксперим. биологии и медицины. -1978.

- N 6,- С. 709-712.

16. Гнездицкая 3.Е.Белецкая Л.Е Сравнительное изучение ми-

оидных клеток тимуса эмбриона и взрослого человека методом непрямой иммуиофдуоресценции // Бш. эксперим. биологии и медицина- 1978.- N 4. - С. 616-620.

17. Cross-reactive CCR) antigens of group A streptococci: Their role in the ^utoumrune process / Lyanpert I.)A , Belets-kayaL-V., Gnezditskaya E. V. et al. // Abstracts VII Intern Sympos. on Streptococci and Streptococcal Diseases. - Oxford, 1978,- P. 87.

18. Перекрестно- реагирующие антигены миоидных клеток тимуса человека я стабильных L-форм стрептокока группы А / Бэ-лецкая Л. Е .Зульфович Ю. Е .Гнездицкая Э. Е и др. //Бш, эксперим. биологии и медицина - 1981. - N 6. - С. 704-706.

19. Изучение методом иммуиофдуоресценции клеток тимуса человека, синтезирующих дактоферрин /Гнездицкая Э. Е .Белецкая JL Е , Захарова Н. А. и др. // Бш. эксперим. биологии и медицины. -1980.

- N 2. - С. 580-583.

20. Реакция сывороток больных миастение с антигенной структурой поверхности лимфоцитов тимуса здоровых ладей и больных миастенией гравис / Гнездицкая Э. Е, Белецкая Л. R , Ипполитов И. X и др. // Бюл, эксперим. биологии и медицины. - 1980. - N 10.

- С. 461-463.

21. Изучение перекрестно-реагирующих антигенов тимуса, общ« с антигенами стрептококка группы А /Лямперт И. М., Кочегкова Е. Е Гнздицкая Э.Е и др. /7 Иммунология.- 1980.- N 4,- С.86-89.

22. Белецкая JL Е , Гнездицкая Э. Е Гетероорганные антигены тимуса // Иммунология.- 1980.- N4.- С.89-92.

23. Autoimmunity and cross-reactive antigens (CRA) of microorganisms / Lyanpert I.M, , Kolesnikova V.Yu., Gnezditskaya E. V. et al. // Congress of Immunology. Abstracts of Scientific Communications.- Paris, 1980.- P. 271.

24. Beletskaya L. V., Gnezditskaya E V. Detection of squamous epithelial intercellular substance antigen (s) in Hassal's corpuscles of human and animal thymus // Scand. J. Inminol. - 1980. -N 12.- P. 93-98.

25. Изучение изменений миоидных клеток тимуса больных миаас-тенией методом иммунофлуоресценции / Гнездицкая Э. В., Белецкая Л. Е , Ипполитов И. X. и др. // Бюл. эксперим. биологии и медици-

ны. - 1981. - N 2. - С. 197-199.

26. Некоторые данные о шгаидных клетках тимуса у больных ми-опатией. / Валикова Т. А., Гнездицкая 9. Е , Белецкая JL Е и др. // Вол. зксперим. биологии и медицины. - 1982. - N 1. - С. 101-104.

27. Гнездицкая Э. Е , Белецкая Л В. Б Косач Г. А. Иммуноиорфо-логические особенности миоидных клеток тимуса больных" ревматизмом // Бш. зксперим. биологи и медицины.- 1982.- N 3. - С. 65-68.

28. Гнездицкая Э. Е , Белецкая А В. Реакция сыворотки крови здорового человека с эпидермисом // Бш. зксперим. биологии и медицины. - 1980.- N4.- С. 68-90.

29. Gnezditskaya Е. V., Beletskaya L. V. The immunopathology of the thymus in Rheumatic fever // Basic consepts of Streptococci and Streptococcal Oiseses. Proo. of VI I Intern Sympos. -

- Lund (Sweden) ,1981.- P. 255-257.

30. Гнездицкая Э. E , Белецкая J1R, Косач Г. А. Иммунные комплексы в тимусе больных ревматизмом // Бил. зксперим. биологии и медицины, - 1982. - N 4. - С. 76-79.

31. Иммунные комплексы и связанные иммуноглобулины в тимусе больных миопатией // Гнездицкая Э.Е .Валикова Т. А., Белецкая л. Е и др. // Бш. эксперт биологии и медицины. - 1982. - N 12. -

- С. 71-73.

32. Гнездицкая Э. Е , Белецкая л. В., Косач Г. А. Связанные иммуноглобулины и иммунные комплексы в тимусе больных ревматизмом // Тез. X Европ. конгр. ревматологов. - Ц., 198а - С. 281.

33. Рецепторы для лакгоферрина на лимфоцитах тимуса челове- • ка. Стимуляция экспрессии при действии аденозина, теофилдина и декантата лимфоцитов тимуса / Гнездицкая 3. Е , Бухова Е IL , Белецкая Л Е и др. // йсд. зксперим. биологии и медицины. - 1984.

- N 7. - С. 79-81.

34. Выявление секреторного компонента в тимусе человека методом иммуйофлуоресценади / Гнездицкая 3. Е , Белецкая Л. Е , Бухова Е П. и др. // Бш. зксперим. биология и медицины. - 1984. -

- N 7.- С. 79-81.

35. Beletskaya L. V., Gnezditskaya E.V. Heteroorganic thymus antigens // Thymus. - 1985. - V.7. - P. 377-385.

36. Белецкая Д E, Гнездицкая 3. E , Беляев Д. JL Структурно-функциональная организация тимуса // Успехи соврем, биологии.

' - 45 -

- 1986.- ВЫП. 1 (4).- С.82-96.

37. Рвездицкая Э. Е , Бухова В. П., Захарова Е А- Рецепторы для секреторного компонента на лимфоцитах тимуса человека. > Стимуляция экспрессии при действии аденозина, тэофиллина и декал-тата тимоцитов человека // Бюл. эксперии. биологии и медицины.

- 1987. - П 7. - С. 87-69.

38. ГнездицкаяЭ. а , Бухова а П., Базанова Е. А. Рецепторы для полисахарида стрептококка группы А на лимофитах тимуса челове-

*ка Стимуляция экспрессии при действии аденозина, теофиллина и декантата тимоцитов. // Бил. зкеперим. биологии и медицины. -1988. - N 10. - С. 467-469.

39. Гнеадицкая Э. Е , Бухова Е П. , Захарова Е А. Влияние лак-тоферрина на экспрессию рецепторов для Fo-фрагмента IgM и IgG на тимоцитах человека при действии in vitro // Бая. эксперт биологии И медицины.- 1987.- N 4.- С. 447-449.

40. Базанова Е.А., Гнеадицкая Э. В., Вородиюк Я. A. A'yroaimrre-ла к разным слоям эпидермиса при иммунизации мышей линии Balb/c культурой стрептококка группы А, обработанной пепсином // Ж. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. - 1989. - N б. --С. 86-89.

41. Полисахарид стрептококка группы А - стимулятор неспецифических цитотоксических реакций в аугодогической системе ые-ток селезенки / Гнездицкая 3. Е , Базанова Е. А., Лямперт И. Е и др.// Бол.эксперт биологии и медицины.- 1990.- N2.-С. 167-169.

42. Влияние полисахарида стрептококка группы Л на способность лимфоцитов тимуса человека зкспрессировать рецепторы для Fc-фрагмента IgM и IgG при действии in vitro / Гнеадицкая Э. Е, Бухова ЕЕ , Базанова Е. А. и др. // Иммунология.- 1990,- N 4. -

- С. 68-71.

4а Гнездицкая 3. Н , Базанова Е. А., Белецкая Л. Е Особенности локализации антигенов цитоплазмы щеток дифференцированных слоев эпидермиса в эпителии тимуса человека // Вод. зкеперим. биологии и медицины.- 1990.- N 3.- 0.308-310.

44. Влияние иммунизации стрептококком группы А на цитотокси-ческий эффект, связанный с гиперчувствительностью замедленного типа к антигенам БЦЖ, у мышей разных линий / Базанова Е. А., Гнездицкая 3. Е , Еородиюк Н. А. и др. // Я. микробиологии, эпидемио-

- 46 -

логии-и иммунологии.- 1990.- N 1.- С. 80-84.

45. Супрессия цитотоксических клеточных реакций при продукции антител к рамногным детерминантам полисахарида стрептококка группы А, перекрестно-реагирующих с антигенами эпителия кожи / Базанова Е. А. , Гнездицкая Э. Е , Лямперт И.11 и др. // Бел. зке-перим. биологии и медицины. - 1990. - К 8. - С. 99-103.

45. Гнездицкая 3. В., Базанова £. А., Еаликова Т. А. Лимфоциты с рецепторами для полисахарида стрептококка группы А в тимусе больных миопатией. Особенности реакции на теофиллин, вденозкн, левамиаол и декантат нормальных тимоцитов // Я. микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. - 1991.- Н 12.- С. 55-58.

47. Гнездицкая Э. В., Базанова Е. А., Бухова R П. Лимфоциты с рецепторами для полисахарида стрептококка группы А в тимусе больных ревматизмом, изменение их реакции на аденозин, теофиллин и декантат нормальных тимоцитов // Боя. эксперт*, биологии и медицины.- 1993.- N 3.- С.274-275.

48. Полисахарид стрептококка группы А - ингибитор функциональной активности Т супрессоров, индуцированных Con А в культуре ыононуклеарных клеток крови человека / Гнездицкая"Э. В. .Базанова Е. А., Нестеренко а Г. и др. // Бюл. зкеперим. биологии и медицина - 1993, - N 4. - С. 291-293.

Материалы диссертации доложены на-

1. IV Всесоюзной конференции по обдай и прикладной иммунологии, Иосква, 1974.

2. Всесоюзном симпозиуме "Иммунологические аспекты патогенеза ревматизма и других коллагеновых болезней", Вильнюс- Москва, 1974.

3. Всесоюзной конференции по стрептококковым инфекциям, Минск, 1975.

4. IV Международном симпозиуме по Strept. pyogenes, Прага, (ЧСФР), 1975.

5. Всесоюзном симпозиуме "Стрептококки группы А и стрептококковые заболевания", Ленинград, 1977.

6. VII Международном симпозиуме по стрептококкам и стрептококковым заболеваниям, Оксфорд (Англия), 1978.

7. V Вгзсогзг,оЗ KQii^pamm по щагуа--»'"-^ грс0лзиг.и ишуао лзгка и азлзртшгка, 1£шхчзсша, 1970.

0. IV Draictpncu гаагрзсса тогхмхагоз, Парк* (Срзлц,'«).

ífíZQ.

9. У1И Шядлйроямы сг^таз:tyta сэ стрзтгсмакм:! a crpon-

p.zCoioz^ir^t, Л-дщ {Daten), 1ÛS1. 10. S ЕпропоГжкви raurp-ссз рэв1г.ташгаз, Нзасз, lü3a

?7)0П!17ГП!>»СЯ"7ПЛИП:£":» О IIM !» t.'.It r^o ru tt- n/nAT. Л 3» . Hb 1 il р Ал № Sit S.