Автореферат и диссертация по медицине (14.00.14) на тему:Иммуногистохимическое изучение антигена ядер пролиферирующих клеток / циклина в астроцитарных глиомах больших полушарий головного мозга

На правах рукописи УДК.-616.8-089

СЫЧЕВА Регина Валерьевна

ИММУНОГИСТОХИМИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ АНТИГЕНА ЯДЕР ПРОЛИФЕРИРУЮЩИХ КЛЕТОК/ЦИКЛИНА В АСТРОЦИТАРНЫХ ГЛИОМАХ БОЛЬШИХ ПОЛУШАРИИ ГОЛОВНОГО МОЗГА

14.00.14 — онкология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва — 1997 —

Работа выполнена в Научно-исследовательском Институте нейрохирургии им. акад. Н. Н. Бурденко РАМН (директор — академик РАМН А. Н. Коновалов).

Научный руководитель:

доктор медицинских наук А. Г. КОРШУНОВ.

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук Е. А. СМИРНОВА, доктор медицинских наук В. А. ЛОШАКОВ.

Ведущее учреждение: Московский Научно-исследовательский Институт онкологии им. >П. А. Герцена.

в . . . . часов на заседании Специализированного совета Д.001.17.01 (К. 001.17.01) Онкологического научного центра РАМН (115478, Москва, Каширское шоссе, 24).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Онкологического научного центра РАМН.

Автореферат разослан Ж,.*... . 1997 г.

Защита диссертации состоится

1997 г.

Ученый секретарь Специализированного совета академик РАЕН, (профессор

В. С. Турусов

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность исследования.

Астроцитарные глиомы - это наиболее часто встречающаяся категория интракраниальных новообразований, они составляют 40 - 50% от всех опухолей центральной нервной системы (ЦНС). В свою очередь, для астроци-тарных глиом достаточно типична локализация в веществе больших полушарий головного мозга, она отмечается примерно в 70% случаев (Russel & Rubinstein, 1989; Burger & Scheithauer. 1994).

Новообразования глиального происхождения уникальны в _ своей биологической сущности. С одной стороны, они возникают вследствие неопластической трансформации клеток, которые в нормальных условиях обладают крайне ограниченным пролиферативным потенциалом. С другой стороны, глиальные опухоли крайне редко метастазируют за пределы нервной системы, связи с чем основной детерминантой, определяющей прогноз у больных с астроцитарными глиомами является темп их роста, который обуславливает прогрессирующее увеличение объема содержимого полости черепа с развитием интракраниальной дистензии и грубым нарушением жизненных функций.

Клинико-морфологические исследования в нейроонкологии, установили наличие четкой взаимосвязи между степенью злокачественности астроцитар-ных глиом и темпами нарастания неврологической симптоматики. Это позволило высказать суждение о том, что пролиферативная активность злокачественных астроцитарных глиом значительно выше, чем доброка-

чественных. Тем не менее, очевидно, что светооптическое изучение рутинно окрашенных препаратов астроцитарных глиом не позволяет достоверно определить лролиферэтивный потенциал опухоли. Ряд гистологических признаков, традиционно расцениваемых в качестве критериев определения степени злокачественности глиальных новообразований {плотное расположение клеток, клеточно-ядерный полиморфизм, наличие в опухоли фигур митозов, пролиферации эндотелия сосудов и очагов некроза) не являются объективными показателями пролиферативной активности опухоли. Наличие в астроцитарных глиомах участков плотного расположения клеток может отмечаться и в доброкачественных, медленно растущих опухолях, кроме того достоверно установлено, что хотя наличие фигур митозов в клетках астроцитом несомненно свидетельствуют о ее злокачественности, число митотических фигур в опухоли реально не отражает ее пролиферативный потенциал. Так, например, абсолютное число фигур митозов в глиобластомах может быть меньшим, чем в анапластических астроцитомах. Очаги некроза и бпастоматозная трансформация клеток эндотелия, которые являются несомненными показателями злокачественности астроцитарных глиом могут отсутствовать в биоптате, что обусловлено гетерогенностью гистоструктуры опухоли и ограниченным объемом биопсийного материала, полученного в процессе операции.

В современной нейроонкоморфологии ведется интенсивный поиск параметров, которые бы реально определяли степень злокачественности любой астроцитарной глиомы, независимо от объема ее биоптата. Учитывая, что кинетика пролиферации глиальных опухолей несомненно отражает

истинную степень злокачественности опухоли, наибольшее применение получили методы, позволяющие количественно определить число делящихся клеток новообразования, т.е. "фракцию роста" опухоли (Но5Ь1по, 1984).

Наиболее широкое применение в 90-ые годы получили методы иммуно-гистохимического выявления в ядрах опухолевых клеток белков, играющих важную роль в процессе клеточного деления, среди которых наиболее известны белок Кг67, альфа - дезоксирибонуклеаза (ДНК-аза) и циклин или антиген ядер пролиферирующих клеток (АЯПК).

Исследование иммуногистохимической экспрессии всех вышеперечисленных маркеров в астроцитарных глиомах выявило, что средние значения их индекса мечения (ИМ) в опухолях с различной степенью злокачественности существенно отличаются друг от друга. Несмотря на это, в проведенных исследованиях имеет место целый ряд неясностей, таких как существенный разброс показателей а сериях различных авторов, относительно низкие показатели ИМ в некоторых глиобластомах, значительная вариабельность ранговых показателей ИМ среди астроцитарных глиом, идентичных по степени гистологической злокачественности и тд. Кроме того, в литературе отсутствуют исследования, в которых проводились бы попытки корреляционного анализа ИМ экспрессии вышеупомянутых маркеров пролиферации с различными особенностями гистологической структуры и иммунофенотипа астроцитарных глиом.

Все вышеизложенное позволило нам прийти к заключению об актуальности изучения пролиферативной активности астроцитарных глиом

методом иммуногистохимического выявления антител к циклину в ядрах опухолевых клеток на репрезентативном по количеству биопсийном материале.

Цель и задачи исследования.

Целью настоящего исследования было изучение пролиферативного потенциала астроцитарных глиом больших полушарий различной степени злокачественности методом иммуногистохимического выявления АЯПК/ циклина в ядрах клеток этих новообразований.

Для достижения цели были поставлены следующие задачи.

1. Количественная оценка иммуногистохимической экспрессии циклина в ядрах астроцитарных глиом, предварительно фенотипированных в соответствии с критериями, принятыми в современной нейроонкоморфологии.

2. Определение возможных корреляций между пролиферативной активностью астроцитарных глиом и различными особенностями гистологической структуры исследованных опухолей.

3. Определение возможных взаимосвязей между пролиферативной активностью астроцитарных глиом и выраженностью иммуногистохимической экспрессии глиального фибриллярного кислого белка (ГФКБ) в опухолевых клетках.

4. Анализ полученных данных для разработки объективных диагностических критериев степени злокачественности астроцитарных глиом и для совершенствования гистобиологической классификации этих новообразований нервной системы.

Научная новизна. Впервые при изучении гистобиологии астроцитарных глиом проведен мультипараметрический количественный анализ показателей пролиферативной активности этих новообразований, особенностей их гистоструктуры и иммунофенотипа.

В результате проведенного исследования установлено, что показатель "фракции роста" анапластических астроцитом примерно в 6 раз выше чем у доброкачественных, тогда как ИМ АЯПК в анапластических астроцитомах и глиобластомах различается не столь существенно.

Впервые была верифицирована четкая зависимость между пролиферативной активностью опухоли и иммунореактивностью АЯПК в ядрах эндотелиоцитов опухолевых сосудов, что может быть использовано для диагностики ранних этапов злокачественной трансформации в астроцитарных глиомах.

Настоящее исследование не выявило корреляции между ИМ АЯПК в астроцитарных глиомах "и содержанием в них клеток с экспрессией ГФКБ а цитоплазме, что свидетельствует о независимости различных иммунофеноти-пических признаков в этих новообразованиях.

При сравнительном анализе различных особенностей гистоструктуры астроцитарных глиом с иммунореактивностью АЯПК, было установлено, что наиболее статистически значимые различия ИМ АЯПК имели место в опухолях с наличием и отсутствием пузырьковидных ядер, многоядерных клеток и фигур митозов. На основании полученных данных предложена новая модификация гистологической классификации астроцитарных глиом, включающая четыре категории этих новообразований ЦНС.

Практическая значимость. Пол ученные данные могут быть использованы для совершенствования патологоанатомической биопсийной диагностики астроцитарных глиом, а также для совершенствования методов лечения этих опухолей и для дальнейшей разработки критериев их прогностической оценки.

Внедрение в практику. Результаты исследования используются в отделении патоморфологии НИИ нейрохирургии им.акад. ННБурденко РАМН для диагностики степени злокачественности астроцитарных глиом и других опухолей нервной системы. Данные о пролиферативной активности опухолей используются для планирования лечебной тактики в нейрохирургических и радиологическом отделениях Института. Разработанная в настоящем исследовании методика иммуногистохимическоге изучения АЯПК в опухолях человека рекомендована к использованию в Московском городском онкологическом диспансере.

Апробация работы. Основные положения работы доложены:

1. На научных конференциях Института нейрохирургии им. Н.Н.Бурденко (1996.1997).

2. На 9-ом Европейском конгрессе нейроморфологов (Париж, 1996).

3. На 1-ом Съезде Всероссийского общества патологоанатомов (Москва,

1997)

4. Диссертация апробирована на заседании межотделенческой проблемной комиссии "Биология и комплексное лечение внутримозговых опухолей" НИИ нейрохирургии имакад Н.Н.Бурденко РАМН 10 июля 1996 года.

Публикации. По теме диссертации опубликованы четыре научные работы (список опубликованных работ приведен в конце автореферата).

Содержание и объем диссертации. Диссертация изложена на 1Б5 страницах машинописного текста, состоит из введения, четырех глав, общего заключения, выводов, указателя литературы. Текст иллюстрирован 38 рисунками и 4 таблицами. Указатель литературы содержит 15 работ отечественных авторов и 260 зарубежных.

Содержание работы.

Материал и методы исследования. Объектом настоящего исследования был материал 258 биопсий астроцитарных глиом больших полушарий головного мозга, полученных от 258 больных, первично оперированных в Научно-Исспедовательском Институте нейрохирургии им. акад. Н.Н.Бурденко РАМН на протяжении 1993-1995 годов. У всех больных материал был получен после операции удаления опухоли, материал пункционных стереотаксических биопсий в настоящее исследование включен не был.

Среди больных было 175 лиц мужского пола и 83 женского, возраст больных был от 6 до 78 лет (средний возраст 42 года), детей до 16 лет было 14.

Материал биопсии был немедленно фиксирован в 10% нейтральном забуференном формалине на протяжении 12-24 часов. Длительность фиксации

определялась в зависимости от размера и количества биоптатов. Фиксация проводилась в охлажденном формалине при температуре +4С.

После фиксации производилась заливка материала в парафин (Histowax, Leica). Полученные парафиновые срезы толщиной 5 мкм, окрашивались гематоксилином и эозином и на основании их изучения отбирались фрагменты для последующего иммуногистохимического исследования,

Иммуногистохимическое исследование выполнялось на серийных парафиновых срезах со средней площадью не менее 1 см. Срезы помещали на небелковэнные адгезивные стекла, депарафинировали и обрабатывали 3% раствором перекиси водорода на протяжении 10 минут с целью блокирования активности эндогенной пероксидазы. После промывки в фосфатном буфере на срезы наносили блокирующую сыворотку с аппликацией на протяжении 20 минут. После стряхивания сыворотки, срезы инкубировали с моноклональными антителами к АЯПК (Boehringer Mannheim, клон РС-10, рабочее разведение 1 : 200) на протяжении 18 часов при t +4 С. Эти антитела специально синтезированы для обработки материала с предварительной фиксацией формалине. Кроме этого срезы инкубировали с моноклональными антителами к ГФКБ (Boehringer Mannheim, клон Y-535, рабочее разведение 1 : 50) в термостате при t +37 С на протяжении 1 часа. Для выявления иммунного окрашивания был использован стандартный пероксидазно-антипероксидазный метод с использованием окрашивающего набора реагентов DAKO LSAB Kit. В качестве окрашивающего субстрата был использован раствор 3,3 -диаминобензидина, содержащий перекись водорода. Контрольные препараты обрабатывали по приведенной выше схеме, заменяя антитела "первого слоя"

на фосфатный буфер. Во всех случаях проводилось докрашивание ядер гематоксилином.

Для количественного изучения препаратов, окрашенных рутинно и иммуногистохимически был использован компьютерный анализатор цветового изображения Quantimet color 500+ (Leica Cambrige). Изображение анализировалось на мониторе персонального компьютера, имеющего встроенные видеоплаты и оснащенного специальным пакетом программ для цитометрического исследования. Количественные измерения проводились в 20 репрезентативных полях зрения со стандартной измерительной рамкой при увеличении х 400. ,

При исследовании препаратов, окрашенных моноклональными антителами к АЯПК и ГФКБ был использован метод многоцветового сканирования изображения (multicolor detection) с раздельным выявлением структур, окрашенных в синий и коричневый цвета. Процент иммуногистохимически позитивных клеток рассчитывался как соотношение клеток с позитивно окрашенной цитоплазмой к общему числу ядер. ИМ АЯПК рассчитывался как соотношение числа позитивно окрашенных ядер к общему числу ядер.

Статистическая обработка полученных данных проводилась с помощью пакета программ ECXEL. Проводился корреляционный анализ полученных данных, сравнительный анализ с расчетом критерия Стьюдента (t-тест) и анализ с помощью log-rank теста с расчетом показателей Х2 и p-value.

Результаты исследования и обсуждение.

Исследованные нами астроцитарные глиомы были подразделены на три гистологические разновидности - доброкачественные астроцитомы (или астроцитомы низкой степени злокачественности), анапластические астроцитомы и спнобпастомы. Разделение опухолей на вышеупомянтые категории проводилось в соответствии с критериями, представленными в последней редакции классификации опухолей нервной системы ВОЗ от 1993 года.

Доброкачественные астроцитомы. В эту группу отнесены 42 астроцитарные глиомы с относительно редким распределением небольшого количества клеточных элементов, располагающихся поодиночке или в виде отдельных мелких комплексов. Доброкачественные астроцитомы имели смешанное клеточное строение, в их структуре выявлялись фибриллярные астроциты с ветвящимися отростками, а также округлой формы протоплазматические астроциты, имеющие богатую эозинофильную цитоплазму и тонкие отростки небольшой длины. В опухолях отмечалось наличие кистозных полостей, заполненных эозинофильным содержимым. На отдельных участках выявлялся умеренный полиморфизм клеток и ядер. Количество сосудов в доброкачественных астроцитомах было небольшим, пролиферации клеток эндотелия сосудов не наблюдалось. Фигуры митотического деления в доброкачественных астроцитомах не обнаруживались.

В 22 доброкачественных астроцитомах были обнаружены клетки с крупным ядром, которое имело светлую нуклеоплазму и гиперхромный конденсированный хроматин; эти ядра, были обозначены термином "пузырьковидные". В тех же 22 астроцитомах, помимо пузырьковидных ядер,

часто обнаруживались клетки содержащие несколько ядер, как правило два. Ядра в этих клетках были мелкие, гиперхромные, хроматин в них был распределен равномерно.

Иммуногистохимическое исследование доброкачественных астроцитом с антителами к ГФКБ выявило сильнопозитивное окрашивание цитоплазмы и отростков многих фибриллярных и протоплазматических опухолевых астроцитов, причем в первых продукт реакции чаще выявлялся в виде волокнистых структур, а во вторых - в виде множества темных гранул. Интенсивно окрашивались также глиальные волокна, разделяющие комплексы опухолевых клеток, при этом наиболее интенсивное окрашивание отмечено в структурах, формирующих стенки опухолевых кист. Среднее число клеток позитивных к ГФКБ в астроцитомах составило 39,5%.

Экспрессия АЯПК в ядрах опухолевых клеток доброкачественных астроцитом была выражена незначительно. Средний показатель ИМ АЯПК для 42 доброкачественных астроцитом составил 4,4 + 2,6%. Имелась определенная зависимость между показателем ИМ АЯПК, особенностями распределения иммуногистохимически окрашенных ядер и наличием в опухоли клеток с пузырьковидными ядрами и двуядерных клеток. В 20 доброкачественных астроцитомах с отсутствием двух вышеупомянутых цитологических признаков ИМ АЯПК был менее 2,5% (средний 1.9%). в этих опухолях выявлялись только отдельные окрашенные ядра клеток, разбросанные на значительном расстоянии друг от друга. В 22 доброкачественных астроцитомах с наличием пузырьковидных ядер и двуядерных клеток показатели ИМ АЯПК превышали 2,5% (средний ИМ -

6,9%), в этих опухолях отмечалось наличие скоплений 3-7 окрашенных ядер, а также наблюдались периваскулярные скопления клеток с позитивно окрашенными ядрами.

При изучении иммуногистохимической экспрессии циклина в ядрах эндотелиоцитов опухолевых сосудов доброкачественных астроцитом было обнаружено, что она имела место только в 22 опухолях с наличием пузырьковидных ядер и многоядерных клеток. Таким образом, средние показатели ИМ АЯПК в доброкачественных астроцитомах с окрашенными и неокрашенными ядрами эндотелиоцитов составили 6,2 и 1,9 соответственно (различие статистически достоверно, р< 0,0001).

Анапластические (злокачественные) астроцитомы. В группу анапластических астроцитом, включающую 84 наблюдения были отнесены астроцитарные глиомы, отличающиеся от вышеописанных доброкачественных форм наличием в их гистоструктуре фигур митотического деления, а также очаговых скоплений плотно расположенных клеток с полиморфизмом и гиперхромазией ядер. Среди анапластических астроцитом нами было выделено 2 разновидности, существенно различающихся по клеточному составу - полиморфноядерные анапластические астроцитомы и гемисто-цитарные анапластические астроцитомы.

В полиморфноядерных анапластических астроцитомах выраженная экспрессия ГФКБ была отмечена в цитоплазме всех без исключения тучных астроцитов, тогда как среди полиморфноядерных.астроцитов экспрессия этого антигена была неоднородной. В гемистоцитарных анапластических астроцитомах, при инкубации срезов с антителами к ГФКБ, отмечалось сильно

позитивное гранулярное окрашивание цитоплазмы всех тучных астроцитов, при этом у некоторых клеток импрегнировались мелкие отростки.

Экспрессия АЯПК в обоих гистологических вариантах анапластических астроцитом характеризовалась выраженной гетерогенностью в распределении иммуногистохимически окрашенных ядер. В большинстве этих опухолей ИМ АЯПК варьировал от 1% на одних участках до 90% на других. Средний ИМ АЯПК для 84 анапластических астроцитом составил 33,7 + 9,2%. В полиморфноядерных анапластических астроцитомах выявлялось преимущественное окрашивание более крупных ядер, средний индекс мечения составил для полиморфноядерных астроцитом 38,4%. В гемистоцитарных анапластических астроцитомах чаще окрашивались ядра тучных астроцитов, средний ИМ АЯПК составил для гемистоцитарных анапластических астроцитом 31,3%.

Глиобластомы. В эту категорию отнесены 132 астроцитарные глиомы, имеющие следующие отличительные особенности гистоструктуры.

1) максимальная степень атипии клеток опухоли и их ядер с формированием уродливых клеточных форм и наличием в опухоли скоплений светооптически мало- и недифференцированных клеток.

2) наличие большого числа фигур патологических митозов.

3) разнообразные изменения в структуре сосудов опухоли, которые можно разделить на диспластические и бластоматозные. К первым относятся общее увеличение количества сосудов различного калибра, формирование кзверномо-лодобных полостей и каналов. Ко вторым относится выраженная пролиферация клеток эндотелия и адвентиции сосудов.

4) формирование очагов некроза различного размера, часть из которых окружена так называемыми "псевдолалисадами" - частоколом из опухолевых клеток, ядра которых ориентированы перпендикулярно некротическим массам.

У исследованных нами 132 глиобластом наблюдалось четкая выраженность всех вышеприведенных гистологических особенностей, однако в зависимости от цитоморфологических особенностей этих опухолей мы выделили три нижеследующих варианта глиобластом: мультиформные или полиморфно-клеточные - 55 наблюдений, изоморфноклеточные -48 наблюдений и гемистоцитарные - 29 наблюдений.

Экспрессия ГФКБ была верифицирована во всех 132 глиобластомах, однако ее интенсивность и особенности распределения окрашенных клеток находились в зависимости от особенностей клеточной структуры опухоли. Среднее число ГФКБ-позитивных клеток в мультиформных глиобластомах составило 53%, в изоморфноклеточных глиобластомах - 48%, в гемистоци-тарных глиобластомах - 58%.

Иммунореактивность АЯПК в глиобластомах характеризовалась относительно равномерным распределением иммунопозитивных ядер, в различных участках опухоли показатели ИМ АЯПК варьировали незначительно. Средний ИМ АЯПК составил для 132 глиобластом 47,3 + 1,7%; в мультиформных

,-г". АС. ЛЯ/ - --------............ ......---------лг\ -\о/ г

гемистоцитарных глиобластомах - 47,4%.

При анализе результатов количественного изучения экспрессии АЯПК в астроцитарных глиомах больших полушарий, имеющих различную степень злокачественности, было установлено, что средний ИМ для доброкачественных

астроцитом составил 4,4%, для анапластических астроцитом -37,2% , для глиобластом - 47,3%. Различие показателей ИМ АЯПК для отдельных гистологических разновидностей астроцитарных глиом было статистически достоверным (р< 0,0001).

Существенных и статистически достоверных различий между средними величинами ИМ АЯПК в отдельных фенотипах анапластических астроцитом (полиморфноядерные 38,4% и гемистоцитарные 31,3%), а также глиобластом (мультиформные 46,4%, изоморфноклеточные - 49,7% и гемистоцитарные 43,4%) обнаружено не было, что свидетельствует об отсутствии устойчивой зависимости между фенотипом опухолевых клеток злокачественных астроцитарных глиом и их пролиферативной активностью.

При сравнительном анализе между ИМ АЯПК и различными особенностями гистоструктуры опухолей были выявлены следующие закономерности.

Наличие крупных клеток с гиперхромными полиморфными ядрами выявлено в 17 доброкачественных астроцитомах (средний ИМ АЯПК 4,6% против 4,2% в опухолях с отсутствием этого признака), в 67 анапластических астроцитомах (средний ИМ АЯПК 37,1% против 34,7% в опухолях с отсутствием этого признака) и в 103 глиобластомах (средний ИМ АЯПК 47,3% против 41,7% в опухолях с отсутствием этого признака). Средний ИМ АЯПК в целом по группе из 258 астроцитарных глиом составил при наличии этого признака 27%, а при его отсутствии - 2)% (различие статистически недостоверно, р=0,09)

Клетки с пузырьковидными ядрами, светлой нуклеоплазмой и гиперхромным коденсированным хроматином выявлены в 22 доброкачественных астроцитомах (средний ИМ АЯПК 6,9% против 1,9% в опухолях с отсутствием этого признака), во всех анапластических астроцитомах (средний ИМ АЯПК 34,7%) и во всех глиобластомах (средний ИМ АЯПК 47,3%). Средний ИМ АЯПК в целом по группе из 258 астроцитарных глиом составил при наличии этого признака 39%, а при его отсутствии - 1,9% (различие статистически достоверно, р< 0,0001).

Наличие многоядерных клеток отмечено в 22 доброкачественных астроцитомах (средний ИМ АЯПК 6,9% против 1,9% в опухолях с отсутствием этого признака), во всех анапластических астроцитомах (средний ИМ АЯПК -34,7%) и во всех глиобластомах (средний ИМ АЯПК 47,3%). Наиболее часто верифицировались двуядерные клетки, большее число ядер отмечалось значительно реже и было типичным главным образом для глиобластом. Средний ИМ АЯПК в целом по группе из 258 астроцитарных глиом составил при наличии этого признака 39%, а при его отсутствии - 1,9% (различие статистически достоверно, р< 0,0001).

Светооптически верифицируемая пролиферация клеток эндотелия опухолевых сосудов была обнаружена в 23 из 82 анапластических астроцитом, где она носилэ очаговый характер (средний ИМ АЯПК 34,2% протиз 34% и опухолях с отсутствием этого признака) и во всех глиобластомах (средний ИМ АЯПК 47,3%). Ни в одной из 42 доброкачественных астроцитом этого гистологического признака обнаружено не было. Средний ИМ АЯПК в целом по группе из 258 астроцитарных глиом составил при наличии этого признака

39,7%. а при его отсутствии - 19,3% (различие статистически достоверно, р< 0,01).

Очаги некроза были верифицированы только в 132 глиобластомах. Средний ИМ АЯПК в целом по группе из 258 астроцитарных глиом составил при наличии этого признака 47,3%, а при его отсутствии - 213% (различие статистически достоверно, р< 0,01).

Таким образом, статистически достоверные отличия средних показателей ИМ АЯПК были выявлены между группами астроцитарных глиом с наличием или отсутствием следующих гистологических признаков - любого числа фигур митозов, клеток с пузырьковидными ядрами, многоядерных клеток, пролиферации клеток эндотелия сосудов и очагов некроза. Помимо этого, ИМ АЯПК имел статистически достоверные отличия при наличии или отсутствии микрокист в доброкачественнных астроцитомах, однако в целом по группе из 258 астроцитарных глиом подобной закономерности обнаружено не было.

Значимость различий, определенная для каждого из вышеупомянутых критериев с помощью теста X (chi-square), распределилась в следующей последовательности.

1. Показатели ИМ АЯПК при наличии клеток с пузырьковидными ядрами против показателей при его отсутствии - значимость критерия X = 38,7 (р value < 0,001).

2. Показатели ИМ АЯПК при наличии многоядерных клеток против показателей при их отсутствии - значимость X = 38,7 (р value < 0,001).

3. Показатели ИМ АЯПК при наличии любого числа фигур митозов в опухоли против показателей при их отсутствии - значимость X = 28,3 (р value < 0,001).

4. Показатели ИМ АЯПК при наличии пролиферации эндотелия сосудов против показателей при ее отсутствии - значимость X = 5,4. (р value < 0,01)

5. Показатели ИМ АЯПК при наличии очагов некроза в опухоли против показателей при их отсутствии - значимость X = 3,4. (р value < 0,01)

Проведенный нами количественный анализ числа клеток, окрашенных антителами к ГФКБ, выявил, что его показатели не имели статистически достоверных отличий у разных форм астроцитарных глиом - в доброкачественных астроцитомах этот показатель составил 39,5%, в анапластических астроцитомах - 44%, а в глиобластомах - 43%. Корреляционный анализ пoкaзaíeлeй числа ГФКБ-позитивных клеток и ИМ АЯПК в этих опухолях не выявил какой-либо взаимосвязи между этими величинами.

Четкое определение гистологических различий между отдельными разновидностями ординарных астроцитарных глиом продолжает оставаться наиболее важным аспектом современной нейроморфологии. В настоящее время существуют многочисленные классификации и градационые схемы, однако многие из них изобилуют субъективными критериями.

Mui предлагаем свой ьариат *л<л_<.ификсщии астроцитарных глиом в зависимости от степени злокачественности этих новообразований.

Астроцитомы 1-ой степени злокачественности - опухоли с отсутствием пузырьковидных ядер и многоядерных клеток - (ИМ АЯПК 1,9%)

Астроцитомы 2-ой степени злокачественности - опухоли с наличием пузырьковидных ядер и многоядерных клеток, но отсутствием фигур митозов - (ИМ АЯПК 6.9%)

Астроцитомы 3-ей степени злокачественности или анаплас-тические астроцитомы - опухоли с обязательным наличием любого числа фигур митозов - (ИМ АЯПК 33,7%)

Астроцитомы 4-ой степени злокачественности или глиобластомы -опухоли с обязательным наличием очагов некроза и выраженной пролиферации эндотелия сосудов (ИМ АЯПК 47,3%).

Несмотря на то, что настоящее исследование нельзя считать абсолютно завершенным, а предложенный нами вариант классификации астроцитарных глиом окончательным, мы хотели бы особо подчеркнуть некоторые практически значимые аспекты выполненного исследования.

С одной стороны, из полученных нами результатов абсолютно очевидно, что иммуногистохимическая детекция АЯПК в ядрах опухолевых клеток является важным, а зачастую и основным критерием для дифференциальной диагностики доброкачественных и злокачественных астроцигом. В этом аспекте иммуногистохимический метод приобретает решающее значение при исследовании материала, полученного при пункционных стереотаксических биопсиях.

С другой стороны, в последние годы у всех больных с астроцитомами низкой степени злокачественности широко практикуется использование лучевой терапии (нередко предоперационной или же вообще без операции), при назначении которой особенности гистоструктуры опухоли, как правило, в

расчет не принимаются. Согласно литературным данным, оценка результатов при использовании подобной лечебной тактики неоднозначна. С нашей точки зрения, использование метода адыовантной лучевой терапии при доброкачественных астроцитомах с крайне низкими показателями пролифера-тивной активности не вполне оправдано. Поэтому мы считаем, что проведение лучевой терапии больным с гистологически диагностированными доброкачественными астроцитомзми целесообразно только после определения фракции роста этих новообразований.

В заключение хотелось бы особо подчеркнуть, что включение в арсенал современной нейроонкологии новых методов терапии - таких как иммунотерапия, векторная лучевая терапия, терапия фрагментами вирусного генома, требуют для своего успешного применения у больных с астроцитарными глиомами максимально полной информации о пролиферативном потенциале, а также других особенностях структуры и молекулярной биологии этих новообразований. Применительно к этой ситуации, иммуноморфологическое изучение пролиферативного потенциала и других особенностей антигенной структуры астроцитарных глиом выходит за рамки обычной диагностики, поскольку является важной теоретической предпосылкой к разработке рационального терапевтического подхода у каждого конкретного больного.

ВЫВОДЫ

1. Иммуногистохимическое изучение АЯПК/циклина в астроцитарных глиомах больших полушарий головного мозга выявило статистически достоверные отличия его показателей в трех различных категориях этих новообразований, разделенных в соответствии с критериями международной гистологической классификации опухолей ЦНС. ИМ АЯПК составил для доброкачественых астроцитом 4,4%, для анапластических астроцитом - 33,7%, а для глиобластом - 47,3%.

2. Средний показатель ИМ АЯПК в анапластических астроцитомах превышает аналогичный показатель доброкачественных астроцитом более чем семь раз, тогда как различия в показателях ИМ АЯПК в анапластических астроцитомах и глиобластомах не столь значительны. Это свидетельствует- о том, что именно начальные этапы злокачественной трансформации астроцитарных глиом характеризуются резким увеличением "фракции роста" опухоли.

3. В опухолях с высокими ИМ АЯПК одновременно наблюдается экспрессия этого онкопролиферативного маркера в эндотелии опухолевых сосудов. Это свидетельствует о том, что пролиферативные процессы в клетках астроцитарных глиом и в эндотелиоцитах опухолевых сосудов имеют определенную взаимосвязь.

4. В настоящем исследовании не обнаружено какой-либо корреляции между показателями "фракции роста" астроцитарных глиом и особенностями

экспрессии в этих опухолях глиоспецифического протеина ГФКБ. Число ГФКБ-поэитивных клеток в доброкачественных и в злокачественных астроцитомах фактически полностью идентично. Это свидетельствует о дивергентности и независимости различных признаков опухолевой прогрессии астроцитарных глиом.

5. При анализе взаимосвязей между экспрессией АЯПК в астроцитарных глиомах и особенностями их гистоструктуры, наиболее значимыми гистологическими признаками являеются фигуры митозов, пролиферация эндотелия сосудов, некрозы, а также наличие пузырьковидных ядер и многоядерных клеток. Два последних признака отмечаются как в доброкачественных астроцитомах, так и в злокачественных, в связи с чем их можно рассматривать в качестве критериев для диагностики злокачественной трансформации астроцитарных глиом на светооптическом уровне..

6. Количественное изучение иммунореактивности АПЯК/циклина может быть использовано в дифференциальной диагностике доброкачественных и анапластических астроцитом, особенно в биоптатах малого объема. Поскольку показатели ИМ АЯПК в анапластических астроцитомах и глиобластомах различаются менее значимо и даже могут перекрываться, этот метод менее пригоден для точной верификации вышеупомянутых гистологических вариантов злокачественных астроцитарных глиом.

СПИСОК НАУЧНЫХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Экспрессия глиального фибриллярного кислого белка и белка Б-100 в астроцитарных глиомах головного мозга различной степени злокачественности (иммуногисгохимическое исследование).// Архив патологии. - 1995. - Выл.4. -С. 30-38. (соавт А.Г.Коршунов).

2. Иммуногисгохимическое изучение экспрессии антигена ядер пролиферирующих клеток в астроцитарных глиомах больших полушарий головного мозга.// Архив патологии - 1996. - Вып.2.- С. 32-37. (соавт А.Г.Коршунов).

3. Иммуногисгохимическое изучение экспрессии онкобелка р53 в астроцитарных глиомах больших полушарий головного мозга.// Архив патологии - 1996. - Вып.6,- С. (соавт А.Г.Коршунов).

4. Иммуногисгохимическое изучение экспрессии онкобелка р53 в 672 нейроэпигелиальных опухолях ЦНС. В кн.:Труды 1-го съезда Всероссйск. общ-ва патологоанатомов. М. 1996. стр. 113-114. (соавт А.ГКоршунов, А.В.Голанов).