Автореферат и диссертация по медицине (14.00.39) на тему:Иммунодиагностика и оценка эффективности терапии системной склеродермии на основе иммобилизованных гранулированных антигенов соединительной ткани с магнитными свойствами

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВ00ХРАНЕНИЯ РОССИИ ВОЛГОГРАДСКИЙ ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО , ЗНАМЕНИ

• МЕДИЦИНСКИЙ ИНСТИТУТ ФИЛИАЛ ИНСТИТУТА РЕВМАТОЛОГИИ РАМН

, На прс«-и.с рукописи

ЧЕРНОВА Светлана Ивановна

ИММУНОДИАГНОСТИКА И ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ ТЕРАПИЙ СИСТЕМНОЙ СКЛЕРОДЕРМИЙ НА ОСНОВЕ ИММОБИЛИЗОВАННЫХ ГРАНУЛИРОВАННЫХ АНТИГЕНОВ СОЕДИНИТЕЛЬНОЙ ТКАНИ С МАГНИТНЫМИ СВОЙСТВАМИ

14.00.39 — ревматология

А втореферат диссертации на соискание 'Ученой степени кандидата медицинских наук

Волгоград 1993 г.

Работа выполнена е филиале Института ревматологии РАМН, объединенном с 1 кафедрой внутренних болезней Волгоградского ордена Трудового Красного Знамени медицинского института.

Научный руководитель:

член-корреспондент РАМН, профессор А. С. ЗБОРОВСКИЙ.

Научный консул/• тонгп:

кандидат медицинских наук,

старший научный сотрудник II. П. ГОНТАРЬ.

Офі!‘і,ча:<ьиі.'.в оппоненты:

. доктор медицинских наук, профессор В, В. Цін БУЛИ Н А доктор медицинских наук, профессор Е. В. БЕІІЕНСОН

Ведущее учреждение: Минскимдієдиі їй некий институт.

- ^ защита состоится « ( » ч ас о в . на ч а сед а ним

К. 084.54.01. при: Волгоградском ордена Трудового Красного Знамени медицинском институте (г. Волгоград, площадь Павших борцо*., 1).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Волгоградского ордена Трудового Красного Знамени медицинского института.

Ученый: секретарь С неї і,иал и:; нрова г і ноги совета, кандидат медицинских наук Ю. К. ФИЛИМОНОВА

$$1995 года я

С п е ц и а л и з и р о б а н к о г о сонета

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ. Системная склеродермия среда диффузных заболеваний соединительной ткани занимает одно из первых мест по социально-экономическим последствиям из-за преимущественного поражения лиц трудоспособного возраста и прогрессирующего течения. Несмотря на значительные успехи, достигнутые в изучении этого тяжелого и, как правило, прогностически неблагоприятного заболевания проблема эта ещё далека от разрешения. В настоящее время течение ССД и воздействие медикаментов на её развитие мало поддаются прогнозированию. Затруднена диагностика начальной стадии склеродермии, хотя именно она является наиболее перспективной для лечения. Недостаточно разработаны показатели, позволяющие оценивать динамику и тяжесть процесса, решать вопросы дифференцированной патогенетической терапии. В связи с чем, исследования, подводящие к решению этих проблем,являются весьма актуальной задачей.

Свойственные ССД иадуративные изменения кожи и висцерофиб-роэы обусловлены значительным нарушением биосинтеза коллагена, повреждением клеточных структур с изменением юс антигенности и появлением иммунологически активных форм коллагена (Н.Г .Гусева, 19(39; А.М. Mackel,1985). Патологической перестройке в первую очередь подвергаются 1,Л и Ш типы коллагена в связи с наибольшим их распространением в органах и тканях. Иммунные реакции на эти изоформы коллагена играют ведущую роль в самопрогрессиругащем течении склеродермического процесса и генерализованном поражении соединительной ткани с быстрым нарастанием дегенеративных изменений и потерей функции внутренних органов ( В.А.Насонова 1989;

Н.Г.ГусеваД990; И.т . Haustein , 1990). Поэтому ию-унологичес-ким методам придается большое значение в диагностике этого заболевания. Однако далеко но всегда удается выявить минимальную динамику иммунологических показателей, а значит чётко определить

начало заболевания и прогнозировать поражения внутренних органов и систем.

Исходя из этого возникла необходимость разработки новых методов иммунодиагностики ССД с использованием иммобилизованных гранулированных антигенов с магнитными свойствами на основе коллагена 1,11 и Ш типов. .

Исследованиями, проведенными в филиале Института ревматологии РАШ, доказана большая информативность методов иммуноанализа с использованием антигенных сорбентов для диагностики висцеральных нарушений у больных СКВ (А.В.Зборовский,1991; С.ВЛевкин, 1991). .

Включение коллагена в пространственную решетку полиакриламидного геля придает антигенам ноше свойства, благодаря которым они приобретай? определенные преимущества перед растворимыми формами. При- иммобилизации достигается стабилизация фиксируемых белков, т.е. повышается их устойчивость к внешним воздействиям с сохранением их биологических свойств. Фиксация в носителе значительного количества антигенов способствует повышению чувствительности иммунологических методов. Включение магнитного материала позволяет ускорить и упростить ряд операций в твердофазных методах анализа, улучшить качественные характеристики определений (ЕЛ.ТрофимовД96Г7; В.И.Ефременко,1989; И.П.Гонтарь,1990). Таким образом, актуальность настоящего исследования обусловлена трудностями б иммунологической диагностике ССД, особенно её ранних стадий. Выбор антигенов обусловлен их патогенетическим значением, а разработка на их основе иммобилизованных гранулированных магносорбентов позволит расширить диагностические и технические возможности иммуноферментного и кшунофлюоресцентноро методов анализа.

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ. Целью нашей работы является усовершенствование иммунологической диагностики,и контроля эф -фекгивности терапии ССД с помощью иммобилизованных гранулированных антигенных препаратов с магнитными свойствами на основе нол-лагена 1,П и Ш типов.

Для выполнения этой цели поставлены следующие задачи:

1. Разработать технику иммуноферментного и иммунофлюорес -центного анализа с использованием иммобилизованного коллагена I, П и Ш типов с магнитными свойствами.

2. На основе разработанных методов иммуноанализа изучить

содержание антител к коллагену I, П и 1 типов у больных ССД в зависимости от активности, стадии и характера течения заболевания. .

3. Оценить влияние различных видов терапии на динамику определяемых показателей у больных ССД. .

НАУЧНАЯ НОВИЗНА РАБОТЫ. Созданные иммобилизованные гранулированные препараты на основе коллагена I, П и Ш типов впервые применялись в иммуноферментном и иммунофлюоресцентном методах для выявления специфических антител у больных ССД. Показано, что уровень антител к коллагену при СОД отличается от здоровых лиц и больных с синдромом Рейно, обусловленным остеохондрозом позвоночника. Отмечена зависимость антител к различным типам коллагена от клинических форм ССД и характера висцеральных проявлений. Выявлено, что максимальные уровня исследуемых антител определя -ются при остром течении заболевания и третьей степени активности процесса. Установлено диагностическое значение исследуемых показателей и доказана возможность их использования как критерия эффективности проводимой терапии.

ФАКТИЧЕСКАЯ ЦЕННОСТЬ. Используемая технология создания иммобилизованных гранулированных препаратов с магнитными свойст-

вами на основе отдельных типов коллагена позволяет получить их с повышенной сорбционной ёмкостью, что расширяет диапазон применения таких веществ в иммунологических методах анализа.

Применение магносорбентов в иммуноферменгноы и иммунофлюо-ресцентном методах обеспечивает выявление антител к коллагену I, П и Ш типов на ранних стадиях ССД. Определение антител к различным типам коллагена у больных ССД монет быть использовано в качестве дополнительного диагностического теста для суждения об активности, стадии и характере течения заболевания,- а также позволяет прогнозировать клинические проявления и судить об адекватности проводимого лечения. .

НА ЗАЩИТУ ВЫНОСИТСЯ ПОЛОЖЕНИЕ о значении определения антител к коллагену I ,П и III типов имыуноферментным и имцунофлюорес-центньщ методом на основе иммобилизованных антигенов с магнитными свойствами для диагностики степени активности ССД, стадии, вариантов течения, характера висцеральных поражений и оценки эффективности проводимой терапии. • . . .

ПУБЛИКАЦИИ. По теме диссертации опубликовано 6 печатных работ, в том числе 4 в международной печати, I -в сборниках трудов Волгоградского медицинского института, I- в трудах 1У Всесоюзного съезда ревматологов. -

АПРОБАЦИЯ РАБ01К. Основные положения диссертации доложены . на годичных научных сессиях Волгоградского ордена Трудового Красного Знамени медицинского института (1991, 1992), на заседаниях Волгоградского отделения Всесоюзного общества иммунологов (Волгоград, 1992), на Всесоюзном съезде ревматологов (Шнек, 1991), на II Международной симпозиуме "Реабилитация иммунной системы".'(Дагомыс, 1990), на У Международном Средиземноморском конгрессе ревматологов (Испания, 1990), на XII Европейском конгрессе ревматологов (Венгрия, 1991).

ОВЪШ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ. Диссертация изложена на 10? страницах машинописного текста и состоит из введения, 5 глав, обсуждения полученных результатов, выводов и практических рекомендаций.

Диссертация иллюстрирована 14 таблицами, 4 рисунками,3 выписками из историй болезней. Библиографический указатель содержит 160 источников,в том числе 94 советских и 66 иностранных работ.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Под нашим наблюдением находился 121 человек, из которых 61 больной ССД, 30 больных с синдромом Рейно, обусловленным остеохондрозом позвоночника и 30 здоровых лиц. ,

При постановке диагноза ССД пользовались критериями Американской ревматологической ассоциации, а степень активности, характер течения и стадия заболевания определялись в соответствии с классификацией, предложенной Н.Г.Гусевой (Н.Г.Гусева, 1975).

В группе больных ССД было 55 женщин (90,2 %) и б цужчин (9,8?).

До 20 лет был I больной (I,6 %), от 21 до 30 - 5 (8,2 %). от 21 до 40 - 17 (27,9 %), от 40 до 50 - 23 (37,8 %), от 51 до 60

- 9 (14,7 %), свыше 60-6 (9,8 %).

Продолжительность заболевания менее I года отмечена в 3,3!£ случаев, от I до 5 лет - в 39,3 %, от 5 до 10 - в 24,5 более 10, лет - в 32,Й %.

I степень активности ССД выявлена у 22 (36,1 %), П степень

- у 24 (39,3 %) и И степень - у 15 (24,6 %) человек, 34 (55,8%) больных имели хроническое-^ечение заболевания, 25 (40,9 %) -подострое, а у 2 (3,5 %) течение заболевания расценено как острое. Начальная стадия диагностирована у 16 (26,2 %) человек,вторая - у 38 (62,3 %)ц третья - у 7 (11,5%).Всем больным было прове-

дено комплексное клинико-инструментальное и иммунобиохимическое обследование.

Иммобилизованные гранулированные антигенные сорбенты получали методом эмульсионной полимеризации в потоке газообразного азота с включением биополимера и магнитного материала в структуру полиакриламидного геля. Полученные препараты имели форму гранул с размерами 10-100 ш.

Выявление антител к коллагену Х,П и И типов непрямым им -цуноферменткым к имыунофлзмзресцентным методами с использованием магносорбенгов проводилось по В.Н.Пушкарю с соавторами (1984) б нашей модификации. Количественная индикация определяемых антител осуществлялась с помощью спектрофотометра с вертикальным лучем-миниридера П (Дайнатек, США) и фотометрической приставки к виыивдсцентноцу микроскопу ЗШЛ-1А с цифровым вольтметром. Исследование специфических антител в сыворотках крови больных ССД проводилось при поступлении в стационар, через 2 недели по-сче начала лечения и перед выпиской. Статистическая обработка полученных результатов выполнена на ЭВМ "АГАТ" по программе,составленной в филиале Института ревматологии РАМН. '

. РЕЗУЛЬТАТЕ ИССЗЩД0ВА1МЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Перед определением количества антител к коллагену 1,П и 111 типов з сыворотках больных ССД изучили их содержание у практически здоровых лиц и установили нормальные значения оптической плотности и флюоресценции для кавдого типа ксллагена (таб. I).

Уровни антител ко всем.трем антигенам у больных с синдромом Рейно, обусловленный остеохондрозом позвоночника, не отли-чзли с ь от .показателей доноров (р^ 0,05) и были значительно нике, чем у больных ССД. Таким образом, определение антител к колла-

Таблица I

Содержание антител к коллагену 1,П и Ш типов у представителей контрольных групп

! ! 1 Кол-во 1 I т и п 1 П т и п 1 Ш тип

Группы 1 Г ! обеле- ! дован- 1 ных ! ' ИФА !иммунофлюо-! 1ресценция ! {иммунофлюо-! ИФА |ресценция | {ишунофлюо-ИФА {ресценция

Г 1 Т~ 1 М * ш * 1 * ! Ц ±и ! м ± и ! М *ш ! * 1 4. м * ш 1 м ± а

Доноры 30 0,050*0,005 5,773*0,351 0,053*0,004 4,345±0,271 0,049*0,005 5,212*0,223

ю

Больные с

синдромом 30 0,061*0,003 5,961*0,326 0,047*0.006 3,696*0,624 0,056*0,0(77 7,131*0,642

РеЙно

гену мояет быть использовано для дифференциальной диагностики начальных проявлений ССД и вертеброгенного синдрома Рейно.

' У больных ССД повышенный уровень антител к различным чипам коллагена встречался значительно чаще, чем в контрольных группах. Наиболее часто и в более высоких титрах обнаруживались антитела к I типу коллагена. Почти у половины обследованных (42,6 %) оказалось повышенным содержание антител ко всем трем типам коллагена. .

По данный Ш?А антитела к коллагену I типа выявлены у 55 больных (90,2 %), к коллагену П типа - у 26 больных (42,6 %) и к коллагену Ш типа - у 44 больных ССД (72,1 %). Методом непрямой имцунофлиоресценции антитела к X типу определялись у 47 больных (77 %), ко П типу - у 12 больных (19,7 %) и к Ш типу -у 35 больных (57,4 %). '

У большое СОД с первой степенью активности (таб.2) при поступлении в стационар содержание антител к 1,П и Ш типам коллагена превышало нормальные показатели (р<0,01) за исключением уровня антител ко П типу в им^унофлюоресцентньк тестах (таб.З). При повторном обследовании наметилась тенденция к снижения количества антител ко всем трек изоформам коллагена, но лишь для Ш типа в ивдуноферментноы методе различие в значениях экстинции статистически достоверно (р-=0,05). В целой в подгруппе в процессе лечения не наступило нормализации исследуемых показателей, но количество больных с повышенным содержанием антител к коллагену уменьшилось.

У больных СОД со второй степеньо активности (таб.2) уро -вень специфических антител в ко всем трем антигенам до-

стоверно превышал соответствующие значения у больных с минимальной активностью (р<0,001), увеличилась и доля больных с повышенным содержанием этих антител. В процессе лечения количество

Содержание антител к коллагену 1,11 и Ш типов у больных ССД в зависимости от активности процесса по данным ,иммуноферментного метода

Днтитела к коллагену П тип

Активность

Кол-во ;Время

больных

обсле-

1 тип г

дования {Доля бо- Оптическая

jno^eS-j™0™ оным соде! М - m •ржанием { jантител j

! % !

Т

Доля бо-1 Оптическая Тцоля бо-1Оптическая

пп^рн Iплотность !ппнт!рн 1плотность повышн-о . . ^повышен-»

ным соде! М - ш ;ным соде! М - т

ржанием | {ржанием |

ТО ТИП

т,

антт ел

антител

I степень 22 При пос- 81,8 туплении В процес- 77,2 се лечения 0,221±0,046 0,174*0,031 13,6 4,5 0,072*0,004 0,063*0,003 63,6 54,5 0,197*0,039 0,162*0,034

При go 2 выписке 0,134*0,025 4,5 0,061*0,003 40,9 0,119*0,027

При пос- от 7 туплении • 0,431*0,055 50 0,126*0,008 70,8 0,235*0,048

п степень 24 В процес- 87,5 се лечения 0,351*0,044 з;,5 0,064*0,003 66,6 0,ІЄГ7*0,043

При g выписке • 0,306*0,034 25 0,074*0,001 58,3 0,138*0,030

При ПОС- тАА туплении 1,003*0,121 73,3 0,164*0,018 86,6 0,357*0,090

ш степень 15 В процес- 100 се лечения 0,826*0,105 53,3 0,094*0,009 86,6 0,302*0,074

При тпл выписке •LUU 0,6I4±0,07I 46,6 0,080*0,003 86,6 '

! ! ! Антитела к коллагену

! обсле- •Іоосле- ! I тип J п тип 1 ш тип

Активность !дован-! них 1 ! 1 » І •їдованияідоля бо-|Имцунофлюо!Доля бо-ІИммунофлюоІДоля бо—| } льных с {льных с jnPf,ITPHira„ Ільних с I !ПСвьглен-,Расг?ВНЧИЯ Iповышен-(РбСЦЙНЦНЯ |пошшен_! ] {ным сода} ( мВ ) 1ным соде) ( мВ ) !ным соде| < {ржанием і м + ш Іржанием | м + m Іржанием j { іантител і “ !антител “ fантител ; I \ t \ ! % 1 I % I Иммунофлюорес -ценция . ( мВ ) М ± Ш

I степень 22 При ПОС- сл с тупленим * В процес- 50 се лечения 14,2*0,3 І2,4±0,6 4.5 4.5 5.2 ± 0,4 5.3 ± 0,6 40,9 31,6 12,1 + II,б ± 0,7 0,3

При 27 2 выписке ’ 9,3±0,5 0 4,9 ± 0,3 22,7 9,6 ± 0,06

При ПОС- оо 3 туплении ’ 28,6±І,3 16,б 12,3 і 0,9 54,1 18,7 ± 0,9

П степень 24 В процес- 75 се лечения 22,І±0,8 8,3 6,2 ± 0,8 54,1 17,2 і 0,8

При 55 выписке w І8,4±0,7 8,3 5,1 ± 0,2 45,8 16,9 ± 0,7 __

При ПОС- т00 туплении iw 37,5±І,4 46,6 15,3 ±0,9 86,6 27,2 ± 1,9

ill степень 15 В процес- 100 се лечения 29,3±І,б 33,3 9,2 і 0,3 86,6 23,2 ± 1,2

При о3 з выписке 570,0 22,3+0,9 26,6 8,3 ± 0,1 86,6 21,1 ± 0,8

антител к I и П типам коллагена достоверно снизилось (р< 0,001). Изменения в содержании антител к Ш типу коллагена менее заметны (р>0,05). Нормализации уровня специфических антител перед выпиской из стационара и в этой группе не отмечено (р< 0,001).

Динамика содержания антител в иммунофлюоресцентном методе такая же, кейс в ИФА (таб.З), но для II типа коллагена значения флюоресценции приблизились к нормальным у абсолютного большинства больных.

У больных с третьей степенью активности (тай.2,3) выявлены максимальные уровни антител к 1,П и Ш типам коллагена. Изначально высокие значения экстинции и флюоресценции, превышающие не только уровни доноров (р< 0,001), но и больных с минимальной и умеренной активностью (р<0,02) достаточно быстро снизились в процессе лечения (р<0,05), кроме антител к Ш типу (р>0,05), но несмотря на отчетливую динамику остались высокими и перед выпиской (р< 0,001).

И* приведенных данных видно, что количество антител к каждое типу коллагена достоверно возрастало при переходе от одной степени активности к другой. Увеличивалась и доля больных, у которых выявлены антитела к гдму или иному типу коллагена. Раз-шща в количестве больных, имеющих повышенное содержание антител в начале и в конце лечения, наоборот уменьшалось. При минимальной активности снижение содержания антител до нормы за время госпитализации отмечалось у 27,3 % больных, при высокой.активности ни у одного из находившихся под нашим наблюдением больных не произошло нормализации исследуемых показателей.

У больных с хроническим течением СОД (таб.4) количество антител к каждому типу коллагена при поступлении по данным Шк было достоверно вше, чем у доноров (р<0,001). Динамика содержания антител у.больных этой подгруппы в период госпитализации

малозаметна. Ни для одного типа коллагена снижение экстинции перед выпиской не достигало статистически достоверных значений (р<0,005). Уровень антител к каждому типу коллагена и перед выпиской был выше, чем у здоровых лиц (р<0,01). В имцунофлюо-ресцентных тестах значения флюоресценции для коллагена П типа не отличались от нормальных показателей (таб.5), .

Содержание антител к коллагену I, П и Ш типов у больных с подострым течением ССД (таб.4,5) превосходило соответствующие показатели больных с хроническим течением (р< 0,001). В ходе наблюдения количество антител к I и П типу коллагена довольно быстро снизилось (р< 0,002), но не достигло нормальных значений (р< 0,001). Доля больных с повышенным содержанием антител изменилась только для коллагена П типа.

С острым течением (таб.4,5) под нашим наблюдением находилось всего двое больных, оба они имели третью степень активности заболевания. Содержание антител к I и Ш типу коллагена в этой подгруппе было значительно вше, чем у больных с подострым и хроническим течением (р<0,02). Но динамика экгтинции и флюоресценции у больных с острым течением менее выражена, чем при подостром течении. Ни для одного типа коллагена не произошло достоверного уменьшения количества антител за время стационарного лечения.

Прк изучении уровней антител у больных с различными стадиями развития болезни (таб.6,7) выявлено, что уже в начальной стадии ССД значения оптической плотности и флюоресценции для каждого типа коллагена превышали показатели доноров (р<0,02).

У данной категории больных наблюдалось наиболее быстрое уменьшение исследуемых антител в процессе наблюдения. После прове -денного лечения различие в содержании антител достоверно для всех типов коллагена (р<0,02), но только в иммунофлгаоресцентных

1--------Г----------!—

!Кол-во! Время !— !обсле-!обслецо- I !дован-!вания !пппо !ных !

> | |ЛЬНЫХ с

I • {повышен-

I тип

Антитела к

—

коллагену

Течение

СОД

4-

П

}ным уров }нем антител %

{Оптическая !Доля бо.

{плотность !льных с [ПЛОТНОСТЬ |пошшен.

I и * в 1ним уро.

!внем антител с/

тип. ; Ш т и п

'I ......... ....— р—" — ■" ■ —

■ {Оптическая !Доля бо-,Оптическая !плотность !по^шен-|плотность •I Ц*т !кш уров, М

• I !нем анти,

> |тел % ,

При поступлении 85,2 0,303*0,049 17,6 0,076*0,003 67,6 0,166*0,025

Хроническое 34 В процессе лечения 79,4 0,254*0,035 14,7 0,069*0,003 61,7 0,137*0,022

При выписке 73,5 0,248*0,033 11,8 0,068*0,002 47,1 0,123*0,021

При поступлении 96 , 0,709*0,082 72 0,138*0,011 76 0,316*0,061

Подострое 25 В процессе лечения 96 0,560*0,069 44 0,092*0,005 72 0,269*0,043

При выписке 96 0,417*0,048 Зо 0,080*0,003 72 0,210*0,038

При поступлении 100 1,460*0,279 100 0,195*0,035 100 0,715*0,294 *

Остров 2 В процессе лечения 100 1,161*0,089 100 0,172*0,035 100 0,610*0,229

При выписке 100 со 1 8 1 I ‘ о 1 100 0,166*0,005 100 0,480*0,209

-------!-----------,-------------------------------------------------

Кол-во ! Время 1_______________Антитела к коллагену__________________

об еле- ! обследо- ! : т ~ ' ! п „ „ п Г

дованньк!вания- I-------тт —■-----!----2—Т—-Д--------»------п---------

! !Доля бо-|Иммунофлюо!Доля бо-:Иммуно(5люо!Доля бо^!Иммунофлюо

! Iповшен-!^^^.{ресденция

Течение

сод

шишаїен-і- . • ^ ишаяси-г , інииьшизп-і: . • \

\нт уроаі 1 ми > !тт уров! їннм уров! I >

!нем адти м+т «нем анти} м +ш Інем анти! м + ш

Ітел % I ы-а !тел % і м !тел %\ ы-

При гос-туплении 64,7 17,6 ± 0,8 2,9 5,6 ± 0,3 41,1 14,2 1+ О

Хроническое 34 В процессе лечения 55,8 15,3 ± 0,4 2,9 5,2 ± 0,2 38,2 11,7 со о +1

При выписке 35,2 12,2 ± 0,6 2,9 5,2 ± 0,3 26,4 9,7 ± 0,7

При поступлении 95,8 32,4 ± 1,7 36 14,2 ± 0,8 76 23,3 ± 1,2

Подоетрое 25 В процессе лечения 95,8 26,2 ±1,3 36 9,6 - 0,3 72 19,2 ± 0,9

, 1 При выписке 68 18,2 ± 0,9 28 8,7 ± 0,5 72 17,3 ± 0,8

1 При поступлении 100 39,2 ± 2,2 100 16,2 ± 0,8 100 31,1 ± 2,5

Острое , 2 - В процессе лечения 100 37,3 ± 2,6 50 15,8 ± 0,3 100 29,3 ± 1,3

При выписке 100 35,8 ± 1,4 50 15,6 ± 0,6 100 27,2 ± 1,5

1 I IКол-во! Время ! обсле-1 обследовав Антитела к коллагену

1тип 1 Птип ■ 1 ш тип

Стадия ссд !дован-{ ния !ных ! ! ! ! ! ! 1 ! ! Доля бо-}Оптическая !Доля бо-|Оптическая 1Доля бо—} льных с тплотность |льных ^ ! плотность |льньсс с * повышен-} !повышен-| 2 Гпошшен-! нш уров, 11*1 !нш уров, И! в !ншуров, нем анти, !нем анти, !нем анти, тел % } |тел % } |тел % | Оптическая плотность М ± ш

. При поступлении I стадия 16 в процессе ^ лечения 75 62,5 0,217^0,054 0,160^0,034 25 18,7 0,083±0,009 0,072-0,003 56,3 43,7 0,171*0,041 0,125*0,036

При выписке При поступлении 56х2 97,4 0,126^0,021 0,582-0,071 18,7 42,1 0^064*0^04 0,139^0,011 37,5 78,9 0^092-0^019 0,270*0,084

П стадия В процесс0 ^ лечения 97,4 0,488^0,058 26,3 0,087*0,004 76,3 0,201*0,064

• При выписке 94,7 0,425^0,041 21Д 0,074*0,002 68,4 0,151-0,048

При поступ- Л6НИИ 85,7 0,668±0,187 85,7 0,151*0,028 71,4 0,276*0,046

Ш стадия В процессе лечения 85,7 0,524^0,139 71,4 0,132*0,012 71,4 0,228*0,039

При выписке 85,7 0,458+0,143 57,1 0,129±0,006 57,1 0,200*0,033

Кол-во обсле- Время обследова- ния Г""" "" ! Антитела к коллагену

Стадия сел ! I тип 1 { П тип 1 Ш тип

дован- ных !Доля бо-!Иммунофлюо- !повыгпен-!Рес^енция !ным уров! и - и •нем анти! |тел % | -!Доля бо-£Иммунофлюо-!Долк бо-;Имэдунофлюо - !повшен-|Рес^нция !пот-| ресценция ?ным уров} М ± “ !ным уров} М £ ш !нем анти} !нем анти} |тел % | |тел % |

При поступлении 02,5 15,2-0,7 18,7 7,3 ± 0,5 56,2 13,3 ± 0,6

I стадия 16 В процессе лечения 50 12.7 ± 0,6 6,2 6,4 ± 0,2 37,9 10,6 ± 0,4

При выписке 18,7 9,2 ± 0а2 ._6.2 _5А1 ^0А6 31,2 9Х9 ± 0А5

При поступлении 84,2 27,6 ±1,0 19,9 8,5 ± 0,7 57,8 16,2 ± 0,5

Л стадия за В процессе лечения 81,5 25,2 ± 0,9 13,1 7,7 ± 0,5 52,6 14,3 ± 0,4

При выписке 73,6 22,6 ± 0,8 10,5 6,4 ± 0,3 52,6 13,6 ± 0,7

При поступлении 71,2 31,5 ± 2,3 42,8 9,3 ± 0,6 57 21,7 ± 1,6

Ш стадия В процессе лечения 71,2 30,1 ± 1,6 57,8 8,2 ± 0,3 57 19,1 ± 1,2

При выписке 71,2 2а,6 ± 0,9 57,8 8,0 ± 0,6 57 18,6 ± 0,8

тестах концентрация антител ко П типу приблизилась к значениям здоровых лиц.

При второй стадии ССД содержание антител в ША (таб.6) достоверно увеличилось и превышало соответствующее значение у больных с начальными проявлениями (р< 0,001). Эффект лечения во второй стадии менее отчётлив. Содержание антител к I и Ш типам коллагена за время госпитализации почти не изменилось (р> 0,05), но для П типа различие в уровне антител значительное (р< 0,001).

В иммунофдюоресцентном методе (таб.7) динамика показателей соответствовала данным ИМ, но исследуемые антитела определялись несколько реже. Перед выпиской значения экстинции и флюоресценции для каждого типа коллагена превысили норму (р< 0,001).

Различие в уровнях антител к коллагену I, Л и Ш типов у больных со второй и с третьей стадиями ССД статистически недостоверно (р>0,05), Динакика антител при третьей стадии ещё менее убедительна. Уровни антител ко всем типам коллагена несмотря на активное лечение очень медленно снижались и перед выпиской значительно превышали показатели здоровых лиц (р< 0,001).

Таким образом, когда дифференциальная' диагностика представляет с одной стороны наибольшие трудности, а с другой является наиболее важной для своевременного назначения патогенетической терапии, иммуноанализ на основе 'иммобилизованных антигенов с магнитными свойства!® за счёт своей высокой чувствительности может быть информативнее других методов исследования.

Анализ данных о содержании антител к коллагену в зависимости от характера висцеральных проявлений представляет спреде -ленные сложности из-за генерализованного поражения соединительной ткани при ССД и вовлечения в патологический процесс многих органов и систем. Поэтому мы выбирали в группы для исследования вольных с преимущественным поражением того или иного органа.

Результаты изучения содержания антител к коллагену I, П и Ш типов у больных с различными висцеральными нарушениями представлены в таблице 8. Вовлечение в патологический процесс легких с развитием диффузного пневмосклероза или фиброзирующего альвеолита сопровождалось значительным повышением уровня антител к коллагену I типа. У больные с поражением легких откеча -лось также достаточно высокое содержание антител к Ш типу коллагена. За время госпитализации содержание антител ко всем типам коллагена в этой группе достоверно снизилось (р<0,05).

Почечная патология ассоциировалась с максимально повышенным содержанием антител к коллагену Ш типа. В эту группу были включены бальные с поражением почек по типу хронического гломе-рулонефрита и с истинной склеродермической почкой. Уменьшение количества антител к Ш типу коллагена в процессе лечения у больных с поражением почек статистически недостоверно (р>0,05).

В группе больных с наиболее тяжёлым ревматоидноподобным поражением суставов, с выраженными деструктивными изменениями в суставном хряще определялось высокое содержание антител к коллагену П типа, практически такое же, как при максимальной активности процесса. У больных с артритом выявлялись также сравнительно высокие уровни антчтел к Щ типу коллагена, выше, чем у больных с кожным синдромом (р<0,01). За время наблюдения получено достоверное уменьшение количества антител к I и 0 типам коллагена (р< 0,001) и в несколько меньшей степени - антител к 1 типу (р>0,05). Ни для одного типа коллагена содержание антител не приблизилось к нормальным значениям (р< 0,001).

У больных с язвенно-некротическими изменениями кожи уровень антител к коллагену I типа был несколько ниже, чем у больных с поражением легких (р< 0,01) и превышал соответствующие показатели в других группах.

Таблица 8

Содержание антител к коллагену I, П и Ш типа у больных ССД в зависимости от характера висцеральных поражений

" " ! I . !Кол-во !Время !больных!обсле Антитела к коллагену

I т и п П т и п ; Ш т и п

Поражение ' ' ■ тдова- !ния 1 1 МбА (Иммунофлю-Г {оресцекция !1±т } (мВ) ИФА М 1 т Иммунофлю- оресценция (мВ) | ш [Иммун’офлю-! " ;оресценция ! М 1 и ; ^ (мВ)

I 1 1 ? ! ! М - т I I ! М 1 т ! | м 1 ш | I

Легких 18 I 0,62210,066 33,211,4 0,08710,006 8,510,6 0,31210,042 23,211,4

2 0,55210,057 29,312,6 0,07710,003 7,310,3 0,23910,048 19,710,3

3 0,46010,047 26,711,2 0,069Ю,005 6,210,7 0,19210,037 15,210,5

I 0,377±0,053 19,3±0,5 0,113*0,016 Ю,2±0,7 0,49610,126 26,211,2

Почек 15 2 0,55210,057 17,а±0,3 0,07610,006 8,310,6 0,428±0,Ю2 25,410,8

3 0,22410,032 12,110,6 0,073*0,003 6,1*0,2 0,421*0,032 23,9*0,6

I 0,221±0,00б 14,310,3 0,16310,020 15.210,3 0,27910,077 20,210,7

Суставов 15 г 0,19410,005 12,310,1 0,093Ю,005 13,7Ю,4 0,247+0,064 17,210,3

3 0,168±0,004 9,610,7 0,07810,003 10,410,3 0,19110,008 16,110,2

I 0,431^0,071 27,2*1,4 0,062*0,004 7,2*0,3 0,172*0,021 17,1*0,8

Кожи 13 2 0,37210,049 23,14,6 0,0оБ±0,003 5,7*0,6 0,139*0,033 14,2*0,3

3 0,22110,033 21,7-10,8 0,06410,002 4,910,6 0,12710,044 П,3±0,7

Примечание : 1 - при поступлении; 2 - в процессе лечения; 3 - при выписке

Таким образом, выявление иммунных реакций на различные типы коллагена может быть полезным не только для уточнения степени активности, характера течения и стадии заболевания, но и для выявления особенностей висцеральных нарушений у конкретного больного. ,

Изучение влияния лекарственных средств на содержание антител к различным типам коллагена, при ССД, несомненно, очень важно и может оказать существенную помощь в решении терапевтических вопросов, в частности, выборе лечебного комплекса, адекватных дозировок, продолжительности лечения и особенно контроле за его эффективностью.

В зависимости от вида проводимой терапии все находившиеся под нашим наблюдением больные разделены на 4 группы: 10 человек с хроническим и малоактивным течением ССД применяли в комплексе лечения БЛВС; 1в человек получали в качестве базисной терапии глюнокортикоиды (преднизолон 10-40 кг в сутки); 14 больных принимали системное лечение Д-пенициялинамином и 19 больным был назначен фзкофорез Д-пенициллинамина с гидрокортизоном и дамек-сидом.

В группе больных, получавших в качестве основного метода лечения Ш1ВС в сочетании с сссудистьп.ш препаратами (таб.9), несмотря на изначально невысокий уровень антител, не произошло достоверного уменьшения количества антител по всем типам коллагена (р>0,05) за исключением антител ко П типу в иммунофлюо -ресцэнтньк тестах, содержание которых приблизилось к нормальным значениям.

Наиболее выраженный эффект лечения наблюдается у больных, принимавших глвкокортикоиды (таб.9). В этой группе уровень антител к I и II типу коллагена снизился почти в два раза (р<0,001). Динамика антител к.Ш типу коллагена менее заметна (р >0,05). Но

(ЛОЛ~ВО}ЬреМЯ| . Антитела к коллагену

Терапия (дован-|Дова . I т и п | П 1 ТИП' I ' ' Ш т и п

|НЫХ ния | ! ! !. ! ! 1 |Иммунофлю! ' ИФА |оресцекц.! Шк ' :д * ш } ;(1 + т 1 Иммунофлю! , ,'оресценц.! ‘ )(мЬ) | (Иммунофлю ИМ (оресценц. Ч±-т !(&)

НПВС

10

VI ■ . 2 3

0,2П±0,035

0,194*0,043

0,185^0,031

13,4*0,8

12,6*0,3

12,2*0,6

Зз75±1Тб"

24,3*0,9

17,3*1,2

21,3*0,9

15,4±0,8

0,064*0,003 5,4±0,6 0,056-0,002 ' 5,2*0,3 О,053±0,001 4,с±0,9

0,139*0,006 и~&о~э 0,091*0,003 Ю,8±0,6 0,072-0,002 8,2*0,4

О,142^3,007 Д474±0Тб" О.СЬо-О,004 9,2±0,4 0,069^0,005 7,3±0,2

олзГ*о.сЬб 7з“з±о7б'

0,112*0,005 10,2*0,4 0,073*0,004 7,6*0,2

0,188*0,038

0,176*0,044

0,169±0,024

11,3*0,7

10,8*0,3

10,2*0,4

аортико -стероиды

18

1

2 3

0,756*0,039

.0,536*0,026

0,412*0,031

7з7сЗв*о7о5:"

0,512*0,033

0,031*0,026

0,287*0,046

0,265*0,031

0,231*0,024

0,292^0,038

0,267*0,016

0,241*0,023

21,2*1,3

19,7*0,9

18,9*0,8

2073*М

18,7*0,7

17,4*0,3

Д-пеницил-

ламин

14

1

2 3

Оонофорез о -Д-пеницилла,-. мином, димек-сидом, гидрокортизоном

19

1

2

3

0,581*0,034

0,372*0,023

0,290*0,013

28,8*1,8

20,6*0,6

16,2*0,7

0,253*0,031

0,231*0,048

0,214*0,016

19,3*0,7

18,4*0,8

18,4*0,4

Примечание: I - при поступлении; 2 - в процессе лечения; 3 - при выписке

■ : 24 - . ни для одного типа количество антител не приблизилось к показателям здоровых лиц. ■ . . . ■ ' .

Пероральное применение Д-пенициллашна привело к достаточно быстрому уменьшению концентрации антител к коллагену, особенно I а II типов (р< 0,001).

Дри местной назначении Д-пенициллашна в сочетании с гидрокортизоном и димексидом также наблюдалось отчетливая тенденция к уменьшению количества антител к коллагену I и П типов (р<0,001). Перед выпиской содержание антител к коллагену I, П и Ш типов у больных, получавших пероральное и местное лечение Д-пеницилла -миноы было практически одинаковым. Динамика клинических проявлений в последней группе была даже более выражена.

Итак, в процессе проведенных исследований были разработаны ' иммобилизованные гранулированные антигенные препараты с магнитными свойствами на основе коллагена I, П и 111 типов для выявления специфических антител в сыворотках крови больных ССД. Предложенные магносорбенты обладают рядом преимуществ перед растворимыми формами и позволили повысить чувствительность и специфичность иммуноферменгного и имцунофдюоресцентного методов анализа.

Полученные результаты подтверждают возможность использования антигенных сорбентов на основе коллагена I, 11 и Ш типов для ранней диагностики, прогнозирования, выделения факторов риска ССД и для контроля эффективности терапии.

вывода

I. Использование иммобилизованных гранулированных антигенных препаратов на основе коллагена I, П и Ш типов в иммунофер-ментном и иммунофлгаоресцентнсм анализе усовершенствует метода иммунодиагностики -ССД. ■

2.,Содержание антител к коллагену I, П а Ш типов у больных уССД зависит от активности, стадии, варианта.течения заболевания..

3. Максимальные уровни иссяедуешх антител у больных ССД

отмечены при остром течении и третьей степени активности процесса. ' - - . - - • - • . . ' • ■ -

4. Повышенное, содержание антител к коллагену, I типа ассо --

циируется с поражением легких и тяжёлым язвенно-некротическим поражением кожи, к коллагену П типа - с артритом и деструктивными изменениями в суставном хряще, к Щ типу г с почечной патологией и выраженными нарушениями шкроциркуляции. , .• ...

5. Динамика уровней антител к коллагену I, И и Ш типов на фоне лечения больных ССД позволяет использовать эти показатели как критерий эффективности проводимой терапии, , .

6. По данным изучения содержания антител к коллагену I, П

и Ш типов и клиническое анализу местное применение Д-пеницил-ламина не уступает по, эффективности воздействия системному ле -чению Д-пеницилламином.,. . -

. . .. ПРЖШЧЕШИЕ РЁКОЩДАДИИ '

I. Полученные стабильные шсокоёмкие’ыагносорбенты на основе коллагена I, П и И типов рекомендуется использовать для выявления специфических антител у больных ССД в ищуноферментном и в иммунофшооресцентном методах анализа.

2. С целью ранней диагностики минимальных проявлений акти-.вности патологического процесса у больных ССД целесообразно определять антитела к коллагену, считая за норму показатели здо -рошх лиц: в иммуноферментном методе значения экстинции для коллагена I типа - до 0,060, для коллагена П типа - до 0,061, для коллагена Ш тйпа - до 0,059; в иммунофлюоресцентном методе значения интенсивности флюоресценции для коллагена I типа - до 7,135 мВ, для коллагена П типа - до 4,837 мВ, для коллагена Ш типа - до 7,758 мВ. Патологическим считается содержание антител, превышающее данные показатели.

3. В процессе лечения рекомендуется исследование динамики содержания антител к коллагену I, П и 01 типов с целью контроля эффективности проводимой терапии.

4’. В комплексе лечения больных ССД рекомендуется исполь -зование фонофореза с мазью, содержащей 3 % Д-пеницилламина, I % гидрокортизона и 50 % димексида.. ...

СПИСОК НАУЧНЫХ РАБОТ, 0ПЖШ0ВАНШХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ '

1. Иммобилизованные антигенные препараты с магнитными свой-

ствами в иммунодиагностике ССД и РА // П Международный симпозиум "Реабилитация иммунной системы ?:Тез .докл.■.- Дагомыс, 1990. -С.122 (соавт. А.Б.Зборовский, И.П.Гонтарь, М.В.Никитин, В.Ю.Ива-шков, Ы.Якуб Раза). ■

2. Динамика уровней специфических антител как критерий эффективности терапии при СКВ, ССД, РА '// ІУ Всесоюзный съезд ревматологов: Тез.докл. - Минск, 1991. - С.235-236. (соавт.И.П.Гонтарь, С.В.Левкин, М.Якуб Раза, И.А.Зборовская, Н.А.Фофанова).

3. Клиническое значение определения антигел к коллагену I,

П и Ш типов у больных системной склеродермией // Актуальные проблемы медицинской науки и практики: Тез.докл. ХП конференции молодых учёных. - Волгоград, 1992. - С.74-75.

4. Inmunodiagnoais of Slstenils Sclerosis end Rheumatoid

Arthritis// 7 Cougreaao de Reumatolog.ia de Xoe Palses Mediterra-neos: Res.- Madrid, 1990*- P.140 (at. el. A.B, Zborovekl, I.P.Gontar, G.F. Sychova, M.Ycub Rase ). .

5. Antigen magnosorbents in diagnosis оt JUieuiaatlo Diseases// ХІХ-th European Congress of Rheumatology: A'oetr.- Budapest, v9Э1•— 0.142. (at. al. A.B.Zborovsky, I.P. Gontar, S. V.levlcin).

6. Imfflunodlagnosia of Rheumatoid Arthrltla, Syatealo Sclerosis and Sistemlo Lupue Eritenatosis// Verkinimng Nordinestdeuscher Orthopaden E.V. 40. Jehrestegungtn in Koln.// Res.- Koln, 1991.-P.95 ( et al. A.B.2borovelca, i.i'.Gontar, S.V.LGvkxn, (j.F.tiyoho-va, M.Ycub Reua)