Автореферат и диссертация по медицине (14.00.39) на тему:Иммунодиагностика и оценка эффективности терапии ревматоидного артрита с помощью иммобилизованных гранулированных антигенных препаратов с магнитными свойствами на основе антигенов хряща

РГ6 оа

2 2 РЕ О ^!СГЕРСТВ0 ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИИ

ВОЛГОГРАДСКИЙ ОРДЕНА ТРУДОВОГЪ КРАСНОГО ЗНАМЕНИ

ВДйЩНСКИЙ ИНСТИТУТ ФИЛИАЛ ,НСГИТУТА РЕВМАТОЛОГИИ РОССИЙСКОЙ АКАДЕШИ

На правах рукописи

мэшмад якуб РАЗА.

• м-шдаАгностикА. и оценка эффективности терапии ревматоидного артрита с помощью иммобилизованных гранулированных антигенных препаратов с магнитные свойства® на основе антигенов хряща

14.00.39 - ревматология

Автореферат диссертация н? соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Волгоград 1Э93 г.

м

,у ■ *

Работа тгполнена б филиале Института' ревматологии Росси' скс9 Академии медицинских наук, объединенном с 1-* кафедрс-Я внутренних болезней Волгоградского ордена Трудового Красно Знамени медицинского института.

Научик" руководитель: . Член-корреспондент Росси^ско" Академии Медицинских няук, заслуженно4 деятель науки России, профессор А.Е.ЗГОРОЗСКИЯ

Научт**' консультант: Кандидат медицинских наук, старти" научь!.-* сотрудник И.П.Гонтарь

Официальна оппснентт-!:

доктор медицине ::их: наук, профессор Б.Я.Бобылев доктор медицинских паук, профессор А.А.Лэеыдов Ведуцее учреждение: Минский ордена Трудового Красного Знамени медицинский институт

Запита состоится " " _1903 года б час ср. • на

заседании Специализированного совета

при Волгоградском ордена Трудового "рзсного Знамен-' медицине институте (г.Волгоград, плодадь Пазтгпх борце, I).

С диссертацие4 мсжчо сзнекомиться в библиотек? Вслгсграцскег ордена Трудового Красного Знамени медицинского института.

Автореферат разослан " " _.1993 года

Учет* секретарь Специализиоозанного совета,

кандидат медицинских наук Ю.К.ЕПКХНСВА

АКТУАЛЬНОСТЬ ИССЛЕДОВАНИЯ. Значительное распространение ревматоидного артрита, котерта, согласно данным ВОЗ (1978), страдает примерно населения, Тяжелое.прогрессирующее-тепе- •

кие заболевания делает проблему изучения его патогенеза, а такте разработки методов диагностики сдксЧ из центральных за-дя'-' современно4, артрологии.

Учитывая прогрессируют^? характер течения ревматоидного артрита CPA?, страдание им лиц преимущественно молодого, трудоспособного возраста, опасность потери .больным возможности к самссбо.тут^ганяп'и ранняя инвалидизацию, [ложно говорить, о том, "тс Р.". зачимсе? особое место среди ревматических заболеваний.

Мчсгсобразие клинических вариантов течения РА ветшает проходимости использования объективных критериев, позволяя-оценивать динамику и тяжесть заболевания, решать вопросы гл-Черенцирпваннс" пятсгенетическо"» терапии, медицинской и тгу-тгвг4 реабилитации таких больных.

Ранняя диагностика РА остается актуально'' задаче«» ссвре-MeiiHC" ревматологии. Это определяется, в частности, отсутстви-s\! на доклинических этапах специфических для РА признаков, сб-легчзгтгх выявление его начальных форм в условиях практического здравоохранения (Астапенко М.П., 1979, Зверева К.В. и др., 1923, AI-.0 et al. _ , 1935).

■ Установлено значение нарутенип иммунологического гемао- ' < стаза в возникновении и развитии иммунокомплексного процесса при РА (Лаврова Т.Р., 1978, Матулис А.А., Станкаутес Д. и др., 1932, lar^sby G. et al., 1990; Penelope I.!.A. , 1989, ■•'illiaras .1.2. et al. ,-1986).

Сложные нарушения иммунерегуляции при РА приводят к выработке различии аутоантител. Среди них наиболее значительными, несомненно, являятся ревматоидные факторы, которые выступают

истинными аутоантигенами. Вместе с тем, определяются антитела к ряду компонентов соединительно^ ткани, которь-е могут появляться вторично в ответ на их кенфорчацчокш'о изменения, воз-пика-эцие при воспалении. В периферической крови наиболее часто обнаруживают антитела (АТ) к коллагену II типа, причем большую роль играет чувствительность вобранного метода определения.

Существует ряд работ, в которых обсуждается вопрос об участии антител к коллагену II типа в патогенезе РА ( 'Л с ¡с С. е! аЗ,, 1976, 1-.1+сЬеП. 1-.М., УгЦз о.*'., , 1932, Тгеи^ли Г».К.,

1989).

, Однако, в доступно'5 отечественно! литературе отсутствуют работы пс изучению гуморального иммунитета к коллагену I! типа при РА в зависимости от клинических особенносте" течения забо--■левания и нет данных об использовании такого теста как критерия эффективности проводимой терапии.

Особое значение в плене освериенстэсвания методов определения антител имеет создание иммобилизованных гранулирование антигенных препаратов с магнитнтгш свойствами, которые находят гаироксе применение в бактериологии и ревматологии (Гонтарь и др., 1990).

Применение иммобилизованных гранулированных препаратов -с магнитн™и свойствами на основе коллагена II типа я.еляетея дальне"тим шагом по созданию униф;!цирг>Еанко<* диагнсстическо? тест-систею, позволяющей повысить чувствительность и специфичность используемых методов, упрощает ряд технических мани-. пуляци'1 при постановке реакции, способствует выявлению аутоиммунного процесса на ранних стадиях заболевания и делает специфические ыагносорбенты препаратами выбора в лабораторнС диагностике РА.

#

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ. Целью работы является усовер- •• шенствование иммунодиагностики ревматоидного артрита и оценки эффективности проводимой терапии с помощью иммобилизованных гранулированных препаратов с магнитными свойствами на основе коллагена II типа.

Для достижения намеченной цели были поставлены следусцие задачи:

1. Осуществить постановку тамун(флюоресцентного и иммуно-ферментного методов иммуноанализа на иммобилизованных гранулированных антигенных препаратах (ИГАЛ) с магнитнши свойствами.

2. Провести сравнительное изучение методов выявления антител к коллагену II типа иммунофлюоресцентным и иммунофермен-тньм методами на иммобилизованных гранулированных антигенных препаратах с магнитными свойствами.

3. Проанализировать наличие антител к коллагену II типа у' больных РА в зависимости от активности, характера течения и • стадии заболевания.

4. Оценить эффективность проводимой терапии с помощью иммобилизованных гранулированных антигенов с магнитными свойствами. .

НАУЧНАЯ НОВИЗНА РАБОТЫ. В данной работе для иммунодиагностики РА в зависимости от активности,характера течения и стадии заболевания впервые использованы антигенные ыагносорбенты с повышенной сорбционной емкостью. Созданные иммобилизованные гранулированные препараты впервые применены при РА в иммунофермен-тном и иммунофлюоресцентном методах иммуноанализа для выявления специфических АТ к коллагену II типа.

Методами иммунодиагностики с использованием ИГАЛ показано, что уровень АТ к коллагену II типа у больных РА выше, чем у больных деформирующим остеоартроэом и здоровых лиц.

б

Отмечена существенная корреляция между титрами АТ и активность» заболевания, а также -.сказана большая информативность методов иммуноанализа с использованием антигеннюс магно-сорбентов.'

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЦЕННОСТЬ. Практическая важность работы заключается в усовершенствовании ит/мунсдиагнсст-/!".!•РА с применением КГ АЛ с магнитны® свойствами. От.с является ва*ным пятом для выявления ранне" стадии и малоактивно" формы_РА.

Определение АТ именно к суставному толлагену II -:нп может свидетельствовать о степени ревматоидного деструктивного процесса хрящевой ткани и применяться для дифференциальн.-я диагностики с дегенеративнпли заболеванием^ суставов.

Определение количества АТ к коллагену 17 типа в динамик«-может бьть использована как один из критериев эффективности проводимой терапии.

НА ЗАЩИТУ ВЫНОСИТСЯ ПОЯСНЕНИЕ об использовании 5ТГАП на основе коллагена II типа для иммунодиагностики РА о помоиь:? вариантов иммуноферментного и иммунсфлюсресцентнсго анализа и оценки эффективности проводимо" терапии.

ПУЕЛИКАЦЖ. По теме диссертации опубликовано 7 пе^а^нис _ работ, в тем числе 4 в нейтрально" печати, 2 - международно", I в сборнике трудов Волгоградского медицинского института.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. Основные положения диссертации доложены на международном научном конгрессе в Кельне (ФРГ, 15 июня 1991 года), на годичных научных сессиях 'Волгоградского медицинского, института (1991, 1992 г.г.на заседании Волгоградского отделения общества иммунологов (1992 г.).

СЕЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ. Диссертация изложена на . страницах машнописного текста, состоит из введения, части I - обзора литературы, представленной двумя главами,в котори

кратко излеиенн сведения о рели специфических антител к ксл^а- • гену I, II и И типов, а также вопросы иммобилизации биологически активных веществ; части II - собственных исследован^**, состоящей из 4 глав, содержащих клиническую характеристику больны, методики используемых исследовани", результаты иссле-чевани", их обсуждение, а такта выводы, практические рексмен-' дации и приложение.

Диссертация иллпстрирсвана 12 таблицами, 2 рисунка!,и, 4 выписками из истории болезни. Библиографически'' указатель содержит 243 источника, в том числе 107 советских и 136 иностранных работ.

СЕДАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА. МАТЕРИАЛЫ И ГКГОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Под натпгм наблюдением находилось 152 человека. Основную группу составляли 92 больных РА. В состав контрольно? группы входило 30-больных ДОА и 30 здоровых лиц. Большинство(76)больных РА (82,61%) были лица трудоспособного возраста (от 20 до 59 лет). Среди наблюдаемых бсльных РА 18 человек имели инвалидность по РА (19,56^). В группу инвалидов входили лица трудоспособного возраста (от 30 до 59 лет).

У большинства больных 80 (86,96$) РА протекал по типу полиартрита. В процесс вовлекались преимущественно меяфалйнго--вые, пястно- и плюснефаланговые суставы кистей н стоп, лучеза-пястньте, голеностопные, коленные и локтевые суставы. Болевой синдром, утренняя скованность, симметричность поражения отмечались почти у всех больних полиартритом. Также у них внявлена стойкая припухлость периартикулярных мягких тканей, экссудация в полость сустава, пролиферативнке явления. Изменились значения лейкоцитоза, белкового спектра, 003. У 35 (38,04^)

' 8

больных РА отмечались висцеральные поражения. При этом часто обнаруживалось ревматоидное поражение сердца, почек и легких. У 3 (3,26^) больных бьио выявлено развитие ревматоидного вас кулита с тяжелым общеклиничиским течением заболевания: с выражении* и стойким сдвигом СО?, наличием лейкоцитоза, острофазовых показателей, резистенцией к глюкокортикоидн™ средствам.

При постановке диагноза большое внимание уделяли сценке ■ степени активности РА. В результате I степень активности выявлена у 16 больных, 2 - у 60, 3 - у 16 больных.

Г ол г х РА разделили на группу с мед-.енно прогрессирующим течением - 79 человек (85,87^) и на группу с быстропрогрессиру! щиы течением - 13 (14,13%). Таксе разделение проводилось в эав> симости от характера течения болезни, на основании анализа ана» нестических данных, сопоставления продолжительности зьболевани* с выраженностью рентгенологических изменений в суставах по Ште" брокеру и степенью функционально" недостаточности суставов.

Прямая зависимость, выявленная при этом, очевидно, носит объективный характер и связана с хроническим прогрессирующим те чениеы болезни.

Таким образом, представленные данные показывают взаимосвяз между анатомическими и функциональными нарушениями в суставах. -Среди обследованных нами больных РА преобладали лица с достаточ но высокой функциональной недостаточностью суставов и выраженной стадией развития заболевания.

Под нашим наблюдением находились 30 больных первичньм ДОА, среди них 12 мужчин и 18 женщин в возрасте от 38 до 62 лет с продолжительностью заболевания от 0,5 до 14 лет. У этих больных, главным образом, были поражены крутите суставы, а также дистальные и проксимальные межфаланговые сочленения. Как правило, развитие болевого синдрома отмечалось в конце дня, после физической

нагрузки, длительной ходьбы и нахождения в ортостазе. При объективном обследовании была выявлена деформация суставов за счет костных изменений, а у ряда больных признаки вторичного синсвита. По даннга лабораторное показателе* воспалительного процесса у большое ДОА не наблюдалось. При рен-генологическом обследовании отмечачись признаки остеосклероза, сссификации хряпа, остеофиты.

3 основном, бгльнге "СА находились на обследовании в период усиления болевого синдрома, что расценивалось как обострение.

Определение антител к коллагену I, II и Ш типа классическим иммунсфер^.ентнкм методом осуществлялось в соответствии с рекомендациями Н.5.Ястребове4 (1533), Е.Л.Насонова (1987;. Иммобилизованные антигены получали методом емульсисннС полимеризации в потеке газ (-образного азота с фиксацией биологически активного вещества в структуру геля. Выявление специфических • антител непрямта иммунофлюсресцентчкм и имчунсферментнки метода>.я с использованием иммобилизованных гранулированных антяген-лух препаратов с ?/агннтнч/и свойствами проводилось по В.Г.Пуз-карг с ссаэт. (1934) в.нате" модификации. Количественная индикация содержания антител осуществлялась с по?<оцьв фотометрической приставки к люминесцентному микроскопу ФУЗЯ-1А и цифрового вольтметра Ц-4300, а такте с использованием спектрофотометра с вертикально лу^ем - 'йкиридера II (Да^натек, СЯА). Исследование специфических показателе" в екзсрстке крови больных проводилось при поступлении в стационар, в середине лечения и перед выпискс*. Статистическая обработка полученных результатов осуществлена на ЭВМ "Агат" по программе составленно** в филиале Института Ревматологии Рсссийско" Академии медицинских наук.

.10 ' РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ К ИХ СЕСТЦ5.ЧИЕ

Содержание антител к коллагену I, I! и !" типа определялrcî у 30 здоровых лиц в возрасте от ??. до 46 лет. из них мужчин бг-ло 16, а женщин - ТЛ. В возрасте до 40 лет - 21 человек, старее 40 лет - 9. '

Среди обследованных н«й 30 больных ДО А был о 13 женщин и 12 мужчин в возрасте от 33 дс 62 лет.

Необходимо отметить, ■иго у одного доноре (3,3'") был с р^з-ко повышено количество антител к кгл.т^глг/ Т т::пч, а у белы;**-: ДОА у двух человек (С.*^*). Среди бельч-х 1С', б'-.-г пг человеку (3,3?), у которых было несколько ncw-чне анччгс'-:? тител к коллагену TJ и Я тггпсв. Тикая дает-т-; тельных зъачепи4 антител к кслля"рням гт.г:ч:-'л->' «г'-пс* не г.-"—. на достоверность раллиин* в изучаемы*' псдгру.:лах.

Уровень Алгоресценвгг ня 'ГЧЦТ, не ппегт-1а"ч::п 1Л v2, и зкетинцня в €115J -тесте ке белее 0,1 приняты за верхнгю границу нормы.

У больных, поступивших в стационар для леяекиг РА. г;г тайное содержание антител v коллагену ГТ типа рссре^-алс от- значительно иаче, t?e\i у ценерев л больных ДСА.

По данным KîA у 63 из 92 насих больных обнаружены.антитела к коллагену II типа (c3,4S(*5. Ииф'нсфлясресцентнкм метедгу AT к коллагену TI типа выявлены у 56 больны* (С0,8Т*).

Антитела к коллагену I типа определялись камкеге реже, чем к коллагену II типа. Они были выявлены у 0 больных РА (8,69?), и среднее значение зкетинции коллагена Т типа составило О,С? + 0,03, т.е. оно достоверно не отличалось у больных и доноров (pj> 0,05). Иммунофлюорео.центным методом антитела к коллагену I типа обнаружены у 5 больных (5,43?), среднее значение флюоресценции составило 5,97 + 0,37.

Антитела к коллагену Ш типа встречались несколько чаще, .. •■ чем к коллагену I типа и выявлены кммуноферуентнш методом у 12 больных (13,04"*), а иммукофлкоресцентным методом - у 9 <5оль-н:-*х (9,8?). Но уровень их также был невысок, не отличался достоверно от среднего уровня этих антител у доноров и составил 0,05 + 0,04 и 6,12 + 0,42 соответственно. Учитывая незначительный процент положительных проб на АТ к коллагену I и И типа .у бсльнюс РА, отсутствие в отдельных случаях достоверности и коррелятивно"1 связи, данные показатели в диагностическом плане нами рассматриваться не будут.

Не получены корреляции между содержанием антител к коллагенам различных типов. Коэффициент корреляции для АТ к коллагену I и коллагену II типов составил 0,16, для коллагена II и коллагена П типов - 0,19.

Средне'' силы корреляция 'выявлена между АТ к коллагену II и РФ ( г = 0,34).

Хорошо коррелировало содержание АТ к коллагену II типа-и ( Г- = 0,82).

Коэффициент корреляции между содержанием АТ к коллагену II типа и уровнем показателями ^ Л и ^ М составил 0,28 и 0,36 соответственно.

Содержание АТ к коллагену II типа: имелось полное соответствие между полученными с помощью иммуноферментного и иммуно-флюоресценткого методов.

Нами наблюдались 16 больных с I степенью активности патологического процесса. При поступлении в стационар уровень АТ к коллагену II типа по данным И5А был вьгле, чем у здоровых лиц (р <[ О,СО. В процессе лечения отмечена отчетливая тенденция к укенытени^ содержания АТ к коллагену II типа. Перед выписной из стационара уровень АТ к коллагену II типа у больных в зтой ' подгруппе не отличался достоверно от нормальных величин .