Автореферат и диссертация по медицине (14.00.39) на тему:Клинико-диагностическое значение определения антител к глутатионпероксидазе у больных системной склеродермией с использованием иммобилизированной гранулированной формы фермента

ДИССЕРТАЦИЯ
Клинико-диагностическое значение определения антител к глутатионпероксидазе у больных системной склеродермией с использованием иммобилизированной гранулированной формы фермента - диссертация, тема по медицине
АВТОРЕФЕРАТ
Клинико-диагностическое значение определения антител к глутатионпероксидазе у больных системной склеродермией с использованием иммобилизированной гранулированной формы фермента - тема автореферата по медицине
Москвитина, Ольга Викторовна Волгоград 2009 г.
Ученая степень
кандидата медицинских наук
ВАК РФ
14.00.39
 
 

Автореферат диссертации по медицине на тему Клинико-диагностическое значение определения антител к глутатионпероксидазе у больных системной склеродермией с использованием иммобилизированной гранулированной формы фермента

На правах рукописи

МОСКВИТИНА

Ольга Викторовна

КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИТЕЛ К ГЛУТАТИОНПЕРОКСИДАЗЕ У БОЛЬНЫХ СИСТЕМНОЙ СКЛЕРОДЕРМИЕЙ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ИММОБИЛИЗИРОВАННОЙ ГРАНУЛИРОВАННОЙ ФОРМЫ ФЕРМЕНТА

(14.00.39 - ревматология)

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Волгоград 2009

003464945

Работа выполнена в Учреждении Российской академии медицинских наук «НИИ клинической и экспериментальной ревматологии РАМН» и ГОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет» Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию РФ

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор Зборовская Ирина Александровна

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Чижов Петр Александрович

доктор медицинских наук, профессор Заводовский Борис Валерьевич

Ведущая организация:

ГОУ ВПО «Российский Государственный медицинский университет Росздрава»

Защита состоится «_» _2009 г. в_часов на заседании

Специализированного Совета Д 208.008.02 Волгоградского медицинского университета по адресу: 400066, г. Волгоград, пл. Павших борцов, 1

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Волгоградского государственного медицинского университета

Автореферат разослан «_»_2009 г.

Ученый секретарь Диссертационного Совета доктор медицинских наук

профессор А.Р. Бабаева

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ

ССД является относительно редкой патологией с первичной заболеваемостью 2,7 -12 случаев на 1 ООО ООО населения в год, тем не менее, трудно переоценить ее социально-экономическое значение. Преимущественное поражение лиц трудоспособного периода жизни, высокий процент инвалидизации обуславливают большие экономические потери, включающие высокую стоимость диагностики и лечения, выключение больных из сферы производства, затраты на социальное обеспечение работающих пациентов и инвалидов (ФоломееваО.М. и соавт., 2004, Jonson S.R. et al., 2006).

За последние десятилетия произошел значительный прогресс в представлениях о ССД: исследованы патогенетические механизмы, детально изучены клиника и эволюция заболевания, разработаны основы диагностики и классификация, создана программа патогенетической терапии с дифференцированным использованием антифиброзных, иммуномодулирующих и сосудистых средств (Гусева Н.Г., 2007).

В числе основных задач, инициированных в 2000 - 2010 гг. под эгидой ВОЗ Всемирной декады по заболеваниям, поражающим двигательный аппарат человека (Bone and jont decade), были названы дальнейшее изучение патогенетических механизмов ревматических заболеваний, совершенствование и внедрение в практику новых методов ранней диагностики и лечения с учетом не только клинической, но и экономической эффективности и целесообразности (Насонова В.А. и соавт., 2001).

Как показали новейшие разработки в иммунодиагностике ревматических заболеваний, иммуноферментные методы анализа (ИФА) с использованием магнитоуправляемых сорбентов на основе антигенов нуклеиновой, липидной и белковой природы в полной мере отвечают указанным требованиям. Неоспоримые преимущества метода заключаются, в первую очередь, в повышении стабильности иммобилизированного биополимера, что делает его устойчивым к различным химическим и физическим воздействиям. Помимо этого, иммобилизация биологически активных веществ в поверхностном слое гранулы создает высокую концентрацию антигена именно в реакционно-активной зоне, тем самым, повышая чувствительность твердофазных методов анализа. Включение магнитного материала в гранулы дает возможность ускорить и упростить манипуляции на всех

этапах исследования, улучшая качественные характеристики определений и увеличивая число обрабатываемых проб. И, наконец, повторное использование сорбента после регенерации ведет к значительному экономическому эффекту (Гонтарь И.П., 2006).

Гранулированные препараты с магнитными свойствами (ИГАП) уже были использованы для усовершенствования иммунодиагностики ССД и выявление антител к кардиолипину, каталазе, фибронектину и другим биополимерам. Как показали исследования, преимущества метода ИФА с применением ИГАП делают его не только экономичным и легко применимым в практической медицине, но и позволяют решить вопросы ранней диагностики ревматических заболеваний благодаря высокой чувствительности и специфичности (Петрова Н.В., 2001, НаджибИ.В.,2006).

В настоящее время продолжается поиск маркеров системного склероза, позволяющих дифференцировать его с другими диффузными болезнями соединительной ткани (ДБСТ), ревматоидным артритом, псевдосклеродермическими и паранеопластическими синдромами, а также прогнозировать клиническую форму и течение заболевания. В этом свете представляют интерес результаты исследования роли активных форм кислорода (АФК) в патогенезе аутоиммунных заболеваний. Предполагается, что основное значение свободных радикалов при данной патологии связано с их способностью повреждать белки, липиды, ДНК, придавая им свойства аутоантигенов и провоцируя выработку антител. Достигается это значительным усилением выработки активных форм кислорода (перекись водорода, гидроксильный радикал, синглетный кислород и др.), которые приводят к деполимеризации гиапуроновой кислоты, окисляют белки, вызывают перекисное окисление липидов, стимулируют высвобождение протеолитических ферментов и вазоактивных аминов. Считают, что именно АФК ответственны за процессы инактивирования и трансформации ферментов, угнетения функциональной активности иммунокомпетентных клеток (Зборовская И.А., 2005, "Пк1у М. et а!., 2006).

Естественным препятствием патологическому воздействию АФК на собственные ткани является мощная антиоксидантная система (АОС) организма, включающая в себя ферментные и неферментные звенья. Основными энзимными компонентами АОС считают глутатионпероксидазу, супероксиддисмутазу, глутатионредуктазу,

каталазу и церулоплазмин. Они способны нейтрализовать высокоактивные супероксидные анионы, перекись водорода, гидроперекиси жирных кислот, предотвращая накопление особо токсичных вторичных продуктов перекисного окисления липидов.

В клинической практике использование прямых определений АФК, гидроперекисей и других продуктов свободнорадикапьных реакций в биологических жидкостях затруднено из-за технических сложностей. Однако об интенсивности свободнорадикальных процессов можно судить по состоянию и напряженности реакций антиоксидантной защиты. В качестве одной из причин функциональной недостаточности энзимов-антиоксидантов при аутоиммунных заболеваниях считают образование антител к ним (Сущук Е.А., 2002, Зборовская И.А., 2005).

Из всей группы ферментов АОС наименее изученным объектом иммунного ответа при ССД является глутатионпероксидаза (ГП). В связи с этим, представляется актуальным исследовать закономерности антителообразования к глутатионпероксидазе при системной склеродермии, используя иммобилизированную форму фермента. Высокая чувствительность модифицированной методики ИФА дает возможность усовершенствовать способы диагностики системного склероза, выяснить отдельные механизмы патогенеза данного заболевания и обозначить перспективы патогенетической терапии.

Цель работы

Целью настоящего исследования являлось усовершенствование иммунологической диагностики и оценки эффективности лечения системной склеродермии с помощью иммобилизированной формы глугатионпероксидазы.

Основные задачи исследования

1. Получить иммобилизированную форму глутатион-пероксидазы, изучить ее физико-химические свойства;

2. Адаптировать иммуноферментный метод анализа с использованием иммобилизированной глутатионпероксидазы к изучению образования антител к этому ферменту;

3. Изучить активность глутатионпероксидазы и содержание антител к этому ферменту у больных системной склеродермией и здоровых лиц. Исследовать данные показатели и корреляционные

связи между ними у больных ССД в зависимости от активности, стадии, длительности, характера течения заболевания и висцеральных поражений;

4. Изучить динамику антителообразования к глутатион-пероксидазе в процессе стационарного лечения.

Научная новизна работы

Впервые для диагностики ССД созданы и применены в варианте иммуноферментного метода анализа иммобилизированные препараты глутатионпероксидазы. В ходе работы в сыворотках крови больных ССД обнаружены антитела к глутатионпероксидазе. Показано, что их уровень достоверно отличается от содержания данных антител в сыворотке крове здоровых лиц. Выявлена достоверная корреляция между содержанием антител к ГП и активностью патологического процесса. Установлено, что поражение сердечно-сосудистой системы и легких при ССД сопровождается максимальными значениями исследуемых антител. Выявлены обратные корреляционные связи между активностью ГП и антителами к ней. Определена способность исследованных показателей к изменению под влиянием проводимой терапии, что обеспечивает возможность оценки ее эффективности.

Практическая ценность

Разработана доступная для применения в клинических лабораториях методика иммуноферментного определения уровня антител к ГП на основе иммобилизированных гранулированных препаратов с магнитными свойствами. Выявление антител к ГП в предложенной методике ИФА может быть использовано в качестве дополнительного теста для диагностики ССД, оценки активности патологического процесса и прогнозирования клинического варианта заболевания. Обнаружение антител к ГП на начальных сроках заболевания позволяет использовать их определение для ранней диагностики ССД. Динамика изученных показателей дает возможность судить об эффективности проводимой терапии.

Основные положения, выносимые на защиту

На защиту выносится положение о возможности определения антител к ГП с помощью методов иммуноферментного анализа на основе иммобилизированных антигенных препаратов с магнитными свойствами у больных ССД. Исследование антител к ГП может быть

использовано в качестве дополнительных тестов для диагностики ССД, выделения клинических вариантов заболевания и уточнения степени активности патологического процесса. Динамика этих показателей может служить для оценки эффективности проводимой терапии.

Внедрение в практику

Методы определения антител к ГП с помощью иммобили-зированных антигенных препаратов с магнитными свойствами внедрены в МУЗ ГКБ № 25 г.Волгограда.

Публикации

Основные положения диссертации изложены в 6 печатных работах, из которых4- в центральной и 2 - в местной печати.

Апробация работы

Материалы диссертации были представлены на ежегодной научной конференции студентов и молодых ученых ВолГМУ (2007 г.), II Международном молодежном медицинском конгрессе «Санкт-Петербургские научные чтения -2007», XV Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2008 г.).

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 140 страницах машинописного текста и состоит из введения, части I - обзора литературы, в которой изложены современные аспекты иммунопатогенеза системной склеродермии, участии в ее развитии активных форм кислорода и антиоксидантной системы; части II - собственных исследований, состоящей из 6 глав, содержащих клиническую характеристику больных, методики исследования, полученные результаты, их обсуждение, выводы, практические рекомендации и приложения. Диссертация иллюстрирована 13 таблицами и 7 рисунками, приведено две выписки из историй болезни. Указатель литературы содержит 253 источника, в том числе в 95 отечественных и в 158 зарубежных.

Клиническая характеристика больных

Под наблюдением находилось 47 больных системной склеродермией, 45 женщин (94,12%) и 2 мужчин (5,88%) в возрасте от 18 до 65 лет. Диагноз ставился по критериям Американской ревматологической ассоциации (1980 г.) в соответствии с рабочей классификацией Н.Г. Гусевой (1975 г.).

Из числа всех обследованных 35 человек (74,5%) относились к социально активному населению. Средний возраст пациентов -42,2±14,2 лет - приближен к опубликованным статистическим данным о возрастной медиане заболеваемости ССД, что дает возможность экстраполировать свойства выборочной совокупности на генеральную.

Средняя продолжительность болезни в исследуемой группе составила 9,0±3,8 лет. Стаж заболевания до 5 лет отмечался у 22 пациентов (46,8%), 6-10 лет - у 10 (21,3%), 11-15 лет - у 5 (10,6%) и более15лет-у11 (23,4%).

Средний возраст пациентов на начало заболевания составил 33,1 ±13,9 лет. "Пик" заболеваемости пришелся на возрастной период от 30 до 50 лет, когда практически половина больных опытной группы отметили первые признаки болезни (рис.1).

Среди наблюдаемых нами больных инвалидность по данному заболеванию имели 27 человек, из них 18 человек (66,7%) -трудоспособного возраста.

14 12 10 8 6 4 2 О

до 20 лет 21-30 лет 31-40 лет 41-50 лет старше 50 лет Рисунок 1. Кривая возраста начала болезни.

По степени активности патологического процесса больные распределились следующим образом: I степень была диагностирована у 24 человек (51,1%), II степень - у 22 человек (46,8%), Шстепень-у1 (2,1%) пациента.

У 20 больных (42,6%) течение заболевания расценено как хроническое (медленно прогрессирующее), у 26 (55,3%) - как подострое (умеренно прогрессирующее), у 1 (2,1%) - как острое

(быстро прогрессирующее). Ввиду малого количества больных с острым течением и максимальной активностью пациенты с острым и подострым течением, II и 111 степенями активности в дальнейшем будут рассматриваться в одной группе.

При хроническом течении ССД у подавляющего большинства больных (90%) наблюдалась низкая активность заболевания (рис. 2).

100% 90% 80% 70% 60% 50% 40% 30% 20% 10% 0%

'ШЖ

Й&ЙЙ; KiKSffi

Ж.'.::::.'.::

iiiiififtftiJ

□ III Щ]П

□ I

хроническое подострое острое

Рисунок 2. Зависимость характера течения от активности ССД.

Подострое течение в 76,9% случаев сопровождалось умеренной активностью заболевания. Максимальная степень активности патологического процесса имела место у пациентки с острым течением.

Стадия начальных изменений в исследуемой группе была диагностирована у 19 пациентов (40,4%), стадия генерализации процесса - у 26 больных (55,3%), поздняя (терминальная) стадия - у 2 больных (4,2%).

Среди пациентов с продолжительностью заболевания менее 5 лет стадия начальных проявлений была диагностирована в 66,7% случаев, II стадия - у 33,3% больных. У лиц со стажем болезни 6-10 лет это соотношение составило 50% (I стадия) против 50% (II стадия). При продолжительности заболевания 11 - 15 лет в 100% случаев наблюдалась стадия выраженных изменений (II). В группе больных с более чем 15-летним стажем болезни в 83,3% случаев была диагностирована II стадия, а в 16,7% - III (терминальная) стадия заболевания (рис. 3).

Продолжительность заболевания (лет)

Рисунок 3. Зависимость стадии ССД от длительности заболевания.

Приведенные данные демонстрируют сравнительно быструю генерализацию процесса при ССД с развитием необратимых изменений у некоторых больных уже в первые 5 лет болезни.

Клиническая картина ССД в опытной группе отличалась полиморфностью и полисиндромностью, отражая системный характер заболевания. Однако изменения кожи, являющиеся одним из ведущих диагностических признаков заболевания, определялись у всех обследованных больных. Наиболее частыми проявлениями были маскообразность лица, склеродактилия, гиперпигментация и выпадение волос.

В зависимости от степени распространенности изменений кожи у 34 (72,3%) больных была диагностирована лимитированная форма ССД, у 13 (27,7%) - диффузная. У 40 (85,1%) пациентов выявлялось одновременное поражение слизистых оболочек в виде атрофического и субатрофического ринита, фарингита.

Вторым по распространенности проявлением ССД в исследуемой группе был синдром Рейно. Он встречался у 44 пациентов (93,6%). Дигитапьные ишемические нарушения имели место у 5 больных (10,6%).

Суставной и мышечный синдромы были диагностированы у 34 больных (72,3%), создавая наряду с кожными проявлениями и синдромом Рейно картину характерного для ССД периферического

симптомокомплекса. Поражение опорно-двигательного аппарата включало полиартриты - 19 пациентов (40,4%), полиартралгии - 11 (32,4%), миозиты и миалгии - 16 (34,0%), остеолиз - 2 (4,3%), кальциноз мягких тканей - 3(6,4%).

Из висцеральной патологии наиболее часто (в 59,6 % случаев) наблюдалось поражение ЖКТ в виде эзофагита, гастродуоденита, колита, гипотонии пищевода и кишечника, грыжи пищеводного отверстия диафрагмы. Диагноз во всех случаях был подтвержден данными рентгенологического и/или эндоскопического исследования.

Кардиальная патология выявлялась у 21 человек опытной группы (44,7%) и была представлена в основном ишемической болезнью сердца (стенокардия напряжения и покоя, острый инфаркт миокарда в анамнезе) - 13 человек. В 10,6% случаев при ЭхоКГ-исследовании выявлялось нарушение сократительной способности миокарда (снижение ФВ менее 55% по Тейкхольцу), обусловленное некоронарогенным кардиосклерозом. У 4 человек (8,5%) обнаруживались явления перикардита в виде утолщения оболочки и наличия небольшого количества жидкости, у 3 человек - пролапс митрального клапана.

Легочные проявления (базальный пневмофиброз, адгезивный плеврит, легочная гипертензия) встречались в 51,1% случаев. У 10 человек (27%) поражение легких было бессимптомным и выявлялось при рентгенологическом обследовании, иногда предшествуя кожным проявлениям и синдрому Рейно.

Поражение нервной системы отмечалось у 12 пациентов (25,5%) и включало явления церебрального васкулита - у 8 больных (17,0%) и сенсорной невропатии - у 4 больных (8,5%).

У 9 больных (42,3%) наблюдалось поражение почек, проявлявшееся умеренной лабораторной и клинической симптоматикой (олигурия, протеинурия, изменения мочевого осадка). Преходящая азотемия наблюдалась у 2 пациентов.

Из общих проявлений наиболее часто наблюдалась потеря массы тела. В период генерализации процесса данный симптом встречался у 23 больных.

В таблице 1 показана зависимость основных лабораторных показателей, определяемых у больных ССД, от степени активности заболевания.

Сравнение лабораторных показателей больных ССД с различной степенью активности заболевания

Показатель Норма* Активность

Минимальная (I) Умеренная (II)

Количество эритроцитов 3,7-5,1 -101г/л 4,2±1,8 3,4±1,2

Гемоглобин 115-164 г/л 126,4±18,7 116,1±16,4

Количество лейкоцитов 4-9 -Ю'/л 5,8±2,7 6,1±3,4

СОЭ# 2-15 мм/ч 10,1±7,6 26,5±11,5

Серомукоиды 0,22-0,28г/л 0,23±0,09 0,29±0,05

Г-шобулины 12,8 -19,0% 18,1±7,4 19,6±4,1

Аг-глобулины 5,1-9,2% 7,8±4,9 9,3±3,5

Фибриноген 2-4 г/л 3,41±0,28 4,1±0,84

Протеинурия <0,02 г/л 0,001±0,0007 0,018±0,004

Креатинин сыворотки 15-98ммоль/л 78,3±18,4 92,5±15,9

Общий белок сыворотки 62-83г/л 76,2±12,6 74,3±9,5

ЦИК# <4 усл.ед. 3,48±1,9 5,82±3,1

АНФ Отр. +/- +

Примечание

* Нормальные показатели даны согласно практическим рекомендациям, приведенным в соответствующих руководствах [28,70].

# -достоверные различия между группами.

Все больные ССД, находившиеся под нашим наблюдением, получали комплексную медикаментозную терапию, включавшую антифиброзные средства, противовоспалительные препараты, ангиопротекторы, иммунодепрессанты, метаболиты. Широко применялась экстракорпоральная, локальная, реабилитационная и симптоматическая терапия.

Базисную антифиброзную терапию D-пеницилламином в дозах 125 - 750 мг/сут. получали 23 человека (49%).

Глкжокортикостероиды системного действия в дозах 2,5 - 40 мг/сут принимали 25 (53,2%) больных, в основном с II (III) степенью

активности заболевания. Во всех случаях учитывались рекомендации EULAR по применению системной глюкокортикоидной терапии при ревматических заболеваниях (Jakods Y. et al., 2007)

Из НПВС, назначенных 34 больным (72,3%), предпочтение отдавалось селективным ингибиторам ЦОГ-2 (нимесулид, мелоксикам), несколько реже назначались кетопрофен и диклофенак.

В качестве патогенетических средств, влияющих на систему микроциркуляции, использовали блокаторы кальциевых каналов (нифедипин, амлодипин) и ингибиторы АПФ (каптоприл, энапаприл, периндоприл, лизиноприл), обладающие к тому же нефропротек-тивным действием. Дозы препаратов подбирались индивидуально в зависимости от уровня АД и переносимости.

В систему комплексного лечения больных ССД включали также ЛФК, массаж и локальную терапию. ФТЛ получали 35 больных (53,2%). Плазмаферез назначался 15 пациентам (31,9%).

Медиана продолжительности госпитализации составила 21,9±5,9 дней (диапазон от 14 до 40 дней).

Материалы и методы исследований

В качестве антигена использовался препарат глутатион-пероксидазы производства НПО "РЕАХИМ" серия 186-68 с активностью 380 ЕД/мг и концентрацией белка 94,5 мг/мл. Антитела к ГП определялись твердофазным иммуноферментным методом с использованием ИГАП. Иммобилизацию проводили методом эмульсионной полимеризации в потоке газообразного азота с включением магнитного материала в структуру полиакриламидного геля (Гонтарь И.П. с соавт., 2002 г.). Результаты учитывали на многоканальном спектрофотометре АС-8К (Белоруссия) при длине волны 492 нм. Полученные значения выражали в единицах оптической плотности (е.о.п.). Наличие антител считалось положительным при превышении величин экстинции на 2 стандартных отклонения от средних значений контрольной группы.

Определение активности ГП в плазме крови производили спектрофотометрическим методом по Flohe L., Ganzler W.A, 1984 г. При расчете активности фермента использовали рекомендации B.C. Асатиани. За единицу активности ГП принято количество фермента, которое при t=+37С за 1 час окисляет 1 мкМ GSH.

Обработка полученных результатов проводилась с использованием программных пакетов «STATGRAPHICS 3,0» И «STATISTICA 6,0», а также по оригинальным программам с использованием формул, приведенных в соответствующих руководствах (Зайцев В.М. и др., 2003 г.).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Активность ГП и уровень антител к ней у здоровых лиц

Среднее значение активности ГП в контрольной группе составило 0,150±0,083 ЕД/мл, амплитуда колебаний - 0,087 - 0,198 ЕД/мл. Зависимости показателей активности изучаемого фермента от пола и возраста выявлено не было (р>0,05).

Средняя концентрация антител к ГП в сыворотках крови здоровых лиц составила 0,0450,003 е.о.п. Уровень нормальных показателей определяли ^ак сумму среднего и двух среднеквадратических отклонений (X + 2а). Исходя из этого, значения экстинции 0,0785 в ЕУЗА-тесте с использованием ИГАП были приняты за верхнюю границу нормы.

Активность ГП и уровень антител к ней у больных ССД

У 47 больных ССД, обследованных нами, активность ГП в плазме крови при поступлении на стационарное лечение колебалась от 0,034 до 0,195 ЕД/мл и составила в среднем 0,082±0,006 ЕД/мл, т.е. была достоверно ниже аналогичного показателя у здоровых лиц (р<0,05).

Содержание сывороточных антител к ГП у больных ССД варьировало в пределах от 0,056 до 0,139 е.о.п. Медиана значения составила 0,097е.о.п., что достоверно превышало данный показатель в контрольной группе (р<0,001). Антитела к ГП выявлены у 17 больных (36,1%).

Влияние специфических антител к ГП на ее активность было показано нами при анализе активности фермента у больных ССД с наличием АТ к ГП и без АТ к ГП. У больных с наличием антител к ГП отмечено заметное снижение активности ГП (0,049±0,005 ЕД/мл, р<0,01), в то время как при их отсутствии оно было статистически незначимым (0,128±0,006 ЕД/мл, р>0,05).

Был проведен анализ показателей активности ГП в плазме крови и содержания антител к ней у больных с различной степенью активности патологического процесса. Результаты представлены в таблице 2.

Концентрация антител к ГП у больных с различной степенью активности ССД при поступлении на стационарное лечение была достоверно выше уровня аналогичного показателя у доноров (р<0,05). Имела место отчетливая тенденция к росту содержания аутоантител с повышением активности патологического процесса, что обусловило статистически достоверную разницу между подгруппами больных с минимальной и умеренно-максимальной степенью активности заболевания (р<0,05).

Активность ГП в плазме крови и содержание антител к ГП у больных с различной степенью активности ССД.

Группа Показатель Активность ССД

Низкая M (s) Умеренная и высокая M (s)

Все больные ССД (п=47) Активность ГП, ЕД/мл До лечения 0,121 (0,006) 0,061 *# (0,003)

После лечения 0,137 (0,004) 0,112А (0,007)

Антитела к ГП, е.о.п. До лечения 0,084* (0,003) 0,112*# (0,004)

После лечения 0,058A (0,009) 0,083*А (0,006)

Больные ССД с АТ кГП (п=17) Активность ГП, ЕД/мл До лечения 0,056* (0,009) 0,041* (0,005)

После лечения 0,098*A (0,006) 0,084*А (0,007)

Больные ССД без АТ к ГП (п=30) Активность ГП, ЕД/мл До лечения 0,134 (0,005) 0,126 (0,008)

После лечения 0,137 (0,008) 0,129 (0,007)

Примечание:

* -достоверные различия с группой доноров;

# -достоверные различия между клиническими группами;

Л -достоверные различия между показателями до и после лечения.

Сравнивая показатели крови больных с низкой активностью ССД при выписке из стационара с аналогичными показателями здоровых лиц, выявлено, что активность плазменной ГП в обеих группах практически не имеет достоверных различий. У больных с умеренной и высокой активностью заболевания в завершение курса лечения выявлено статистически значимое повышение активности ГП по сравнению с исходным уровнем (р < 0,05).

Анализ активности ГП и содержания антител к ней у больных с различным характером течения ССД представлен в таблице 3.

Как видно из таблицы, при поступлении в стационар у всех больных ССД, независимо от характера течения заболевания, отмечалось уменьшение активности ГП в плазме крови (р<0,05). Повышение сывороточных антител к ферменту также наблюдалось во всех группах (р<0,05), но было более выражено при подостром и остром течении заболевания, однако достоверных различий в показателях между рассматриваемыми категориями пациентов найдено не было. Как было показано ранее, наличие антител к ГП ассоциировалось с более выраженным снижением активности фермента (р<0,01).

По окончании курса лечения наблюдалось некоторое повышение активности ГП в плазме крови и снижение содержания аутоантител. В группе больных с хроническим течением заболевания концентрация исследуемых антител перед выпиской достигла нормальных значений, а при остром и подостром течении сохранялась достоверная разница с группой доноров, что обусловлено преобладанием среди них пациентов с умеренной и максимальной активностью заболевания.

У больных с антителами к ГП отмечалась более низкая активность ГП относительно исходных значений, атакже по сравнению с отрицательными по АТ к ГП пациентами. Статистически достоверной разницы между содержанием антител к ГП у больных ССД в зависимости от характера течения заболевания по окончании лечения выявлено не было.

Нами было проанализировано возможное влияние стадии заболевания на активность ГП и содержание антител к ней у больных ССД. Уровень антител к ГП в представленных группах, как в начале лечения, так и перед выпиской из стационара колебался в небольших пределах, что не обусловило статистически достоверных различий. В то же время у больных с терминальной стадией активность ГП была ниже, чем в остальных группах (таб.4).

Активность ГП в плазме крови и содержание антител к ГП у больных с различным характером течения ССД

Характер течения заболевания

Группа Показатель Хроническое M (s) Подострое и острое M (s)

Все Активность До 0,107* 0,088*

больные ГП, ЕД/мл лечения (0,006) (0,004)

ССД После 0,120 0,123А

(п=47) лечения (0,006) (0,009)

Антитела к До 0,086* 0,109*

ГП, е.о.п. лечения (0,004) (0,005)

После 0,069 0,084*л

лечения (0,008) (0,009)

Больные Активность До 0,052* 0,047*

ССД с AT ГП, ЕД/мл лечения (0,005) (0,006)

к ГП После 0,083* 0,076*

(п=17) лечения (0,009) (0,007)

Больные Активность До 0,131 0,129

ССД без ГП, ЕД/мл лечения (0,004) (0,008)

АТкГП После 0,139 0,130

(п=30) лечения (0,009) (0,007)

Примечание:

* -достоверные различия с группой доноров;

# -достоверные различия между клиническими группами;

Л -достоверные различия между показателями до и после лечения.

На закономерность подобных результатов указывалось ранее, при исследовании активности широкого спектра ферментов АОС при РЗ (Зборовская И.А., 1995). Снижение активности энзимов свидетельствует о резком угнетении буферной емкости антиоксидантной защиты и явном ослаблении резистентности организма больных, что характерно для терминальной стадии заболевания. При этом наблюдается интенсификация процессов ПОЛ, что выявляется по повышенному содержанию малонового диальдегида (МДА). Таким образом, депрессия активности

ферментов-антиоксидантов по мере увеличения продолжительности болезни и перехода болезни в завершающую стадию, вполне обоснованна: длительно текущий аутоиммунный воспалительный процесс, сопровождаясь хроническим стрессом, приводит к истощению продукции и индукции энзимов, и как следствие к снижению их активности.

Особый интерес представляют результаты исследования содержания антител к ГП у пациентов, имевших продолжительность заболевания менее 1 года: они обнаруживались у обоих пациентов этой группы. Данный факт свидетельствует о том, что антитела к ГП появляются на начальных стадиях болезни и могут, таким образом, служить в качестве раннего диагностического признака.

Таблица4.

Активность ГП в плазме крови и содержание антител к ГП у больных ССД в зависимости от стадии заболевания

Стадия заболевания

Группа Показатель I II III

М(в) М(8) М(э)

Все Активность До лечения 0,096* 0,072* 0,068*

больные ГП, ЕД/мл (0,008) (0,005) (0,004)

ССД После 0,124 0,092* 0,094

(п=47) лечения (0,007) (0,008) (0,004)

Антитела к До лечения 0,094* 0,099* 0,106*

ГП, е.о.п. (0,005) (0,005) (0,007)

После 0,065 0,059 0,084*

лечения (0,009) (0,006) (0,003)

Больные с Активность До лечения 0,059* 0,051* 0,039*

АТкГП ГП, ЕД/мл (0,004) (0,005) (0,006)

(п=17) После 0,081* 0,088* 0,069*

лечения (0,006) (0,004) (0,006)

Больные Активность До лечения 0,131 0,127 0,122

без АТ к ГП, ЕД/мл (0,008) (0,004) (0,007)

ГП После 0,136 0,128 0,134

(п=30) лечения (0,005) (0,007) (0,006)

Примечание:*-достоверные различия с группой доноров.

Исследование механизмов поражения тех или иных органов при аутоиммунных заболеваниях показало, что зачастую оно связано с избирательным действием аутоантител или иммунокомплексным воспалением. Диагностика поражения того или иного органа на доклиническом этапе несомненно является чрезвычайно важным направлением современных исследований, т.к. коррекция начинающихся нарушений дает возможность предотвратить дальнейшее развитие органной патологии, что, несомненно, положительно отразится на качестве жизни больного и на ее прогнозе. Так, по мнению ряда авторов, крайне редкое развитие в настоящее время острой склеродермической нефропатии - грозного и прогностически неблагоприятного проявления ССД, обусловлено превентивным эффектом современной фармакотерапии ф-пеницилламин, ингибиторы ангиотензинпревращающего фермента).

Изучение активности ГП в плазме крови больных ССД с различными клиническими проявлениями выявило достоверное снижение данного показателя во всех рассматриваемых группах (табл.5). Минимальные значения выявлялись у больных с поражением сердца и легких, обуславливая достоверные различия между представленными клиническими группами (р<0,05). В этих же группах отмечался наиболее высокий уровень антител к ГП, превосходя аналогичные показатели больных с другими висцеральными проявлениями (р<0,001). Действительно, из 17 положительных по АТ к ГП больных у 15 выявлялась кардиапьная патология по типу ИБС или некоронарогенного кардиосклероза, а у 16-поражение легких.

Динамическое наблюдение за уровнем антител к ГП показало, что значимое снижение исследуемого показателя происходило в половине рассматриваемых групп: у больных с поражением костно-мышечной системы, легких и сердца (р<0,05), в ряде случаев достигая нормальных значений.

По мнению ряда авторов, поражение сердечно-сосудистой системы является основной причиной внезапной смерти больных ССД. При этом на первый план выступают нарушения, не связанные с иммунноопосредованными механизмами повреждения тканей и органов. Речь идет о раннем атеросклеротическом поражении сосудов. Аутоиммунное воспаление рассматривается как один из основных факторов риска развития раннего атеросклероза и связанных с ним кардиоваскулярных заболеваний (Невская Т.А. и соавт., 2007; Шабанова Т.А. и соавт., 2007). В качестве механизма интенсификации атеросклеротического процесса при коллагенозах

называют накопление продуктов перекисного окисления: гидроперекисей липидов и окисленных липопротеинов низкой плотности (ЛПНП). В атероскперотических бляшках обнаруживаются модифицированные гидроперекисями липидов белки, являющиеся антигенными эпитопами и мишенями для антител к окисленным ЛПНП. В этих условиях дефекты функционирования АОС являются важным механизмом, способствующим прогрессированию атероскперо-тического процесса.

Таблица 5.

Активность ГП в плазме крови и содержание антител к ГП у больных ССД в зависимости от клинических проявлений заболевания

Группы п До лечения После лечения

Активность ГП, ЕД/мл AT к ГП, е.о.п. Активность ГП, ЕД/мл АТкГП, е.о.п.

Поражение кожи 47 0,110* (0,002) 0,080* (0,004) 0,113 (0,005) 0,066 (0,008)

Поражение костно-мышечной системы 34 0,100* (0,005) 0,084* (0,004) 0,115 (0,008) 0,034 л (0,009)

Поражение почек 7 0,098* (0,007) 0,081* (0,005) 0,126 (0,007) 0,084* (0,006)

Поражение сердца 21 0,063*# (0,006) 0,120*# (0,004) 0,129 л (0,003) 0,084* А (0,008)

Поражение легких 24 0,065 *# (0,004) 0,117*# (0,008) 0,128л (0,005) 0,066 л (0,007)

Синдром Рейно 44 0,103* (0,008) 0,080* (0,006) 0,118 (0,005) 0,074 (0,004)

Поражение ЖКТ 28 0,113* (0,006) 0,085* (0,004) 0,121 (0,006) 0,079 (0,007)

Поражение нервной системы 12 0,104* (0,008) 0,083* (0,007) 0,117 (0,009) 0,069 (0,004)

Примечание:

*-достоверные различия с группой доноров; #-достоверные различия между клиническими группами; Л -достоверные различия между показателями до и после лечения.

Известно, что снижение активности ГП сопряжено с повышенным риском возникновения сердечно-сосудистых заболеваний (именно с этим связывают рост ИБС в селендефицитных зонах). Обнаруженные нами закономерности позволяют предположить, что антитела к ГП, подавляя ее антиоксидантную активность, являются еще одним фактором в цепи развития атероскперотического процесса.

Другой путь влияния ГП на развитие ишемических процессов -участие в обмене эйкозаноидов, являющихся ключевым звеном эндотелиальной дисфункции. Есть данные, что ГП регулирует синтез эйкозаноидов: под ее влиянием повышается продукция простацикпинов, и, напротив, при дефиците фермента происходит сдвиг в сторону тромбоксанов. Очевидно, что эндотелиальная дисфункция является главным механизмом ишемической болезни сердца у больных ССД (вгиоэ в. е1 а1., 2007). В пользу васкулопатии свидетельствует относительно молодой возраст пациентов: средний возраст среди наблюдаемых нами в группе с ишемическим поражением сердца составил 43,7±5,9 лет.

Учитывая выявленные закономерности антителообразования к ГП у этих больных, можно сделать вывод, что среди известных сегодня механизмов участия ГП в патогенезе ишемии не последнюю роль играют иммунные.

Повышение уровня антител к ГП, сопровождающееся снижением ее ферментативной активности, выявленное в группе пациентов с поражением легких, позволило предположить о возможном их участии в развитии указанной патологии. Как известно, патогенез фиброзирующего альвеолита и интерстициального фиброза -основных составляющих легочной патологии при ССД - связан с иммунными нарушениями, усилением свободнорадикальных реакций и процессов фиброгенеза. Важное значение имеет повышение на территории легочного интерстиция функциональной активности клеток: альвеолярных макрофагов, фибробластов, лимфоцитов. Показано, что альвеолярные макрофаги имеют ведущее значение для развития межклеточных нарушений вследствие синтеза различных цитокинов (фактор некроза опухолей, факторы роста) и свободных радикалов. В группе больных с высокими показателями функциональной активности альвеолярных макрофагов чаще отмечается быстро прогрессирующее течение болезни. При этом варианте менее чем за год формируется "сотовое легкое", что проявляется тяжелой дыхательной недостаточностью, развитием

легочного сердца. Кроме того, поражение легких по типу фиброзирующего альвеолита при ДБСТ сопряжено с высоким риском развития бронхоальвеолярного рака (до 17% случаев) (Корнев Б. и соавт.,2000).

Использование определения антител к ГП в качестве предиктора развития угрожающих жизни осложнений со стороны легких при ССД позволяет обоснованно и дифференцированно подходить к назначению дорогостоящих методов диагностики (компьютерная томография, МРТ) и своевременно производить коррекцию начинающихся нарушений, используя тактику "агрессивной" терапии.

Другая немаловажная проблема, которая была включена нами в задачи исследования - объективизация оценки эффективности проводимой терапии. Сегодня контроль лечения включает в себя стандартный набор клинико-лабораторных тестов, характеризующих, в основном активность патологического процесса (показатели острой фазы) и мониторинг уровня отдельных классов антител (анти-ДНК, антифосфолипидные антитела (АФЛ), антинуклеарный фактор (АНФ)).

В этом свете особый интерес представляет оценка влияния проводимой терапии на динамику антител к ГП и ее активность. Для повышения достоверности полученных результатов нами были отобраны больные с подострым течением и умеренной активностью заболевания, имевшие сходные кпинико-лабораторные лабораторные показатели. Эта достаточно однородная выборка была разделена на три группы в зависимости от вида проводимой терапии. В I группе (10 человек) - получали антифиброзную терапию (D-пеницилламин) в комбинации с сосудистыми препаратами; во II группе (4 человек) помимо основной терапии пациенты получали ГКС per os; в III группе (2 человек) основное лечение дополнялось методами экстракорпоральной терапии (плазмаферез).

Результаты изучения активности плазменной ГП и содержания аутоантител к ней в зависимости от вида проводимой терапии представлены в таблице 6.

Отмечена тенденция к повышению активности ГП в плазме крови под влиянием рассматриваемых видов терапии, однако статистически достоверные различия между показателями до и после лечения отмечены лишь в случае использования экстракорпоральных методов (р<0,05).

Во всех группах произошло уменьшение количества антител к ГП к моменту выписки из стационара, но достоверное снижение наблюдалось у больных, получавших ГКС системного действия (р<0,05), и особенно у принимавших процедуры плазмафереза (р<0,01). В результате иммуносупрессивной терапии доля положительных по АТ к ГП пациентов снизилась с 36% до 25%.

Таблица 6.

Активность ГП и АТ к ГП у больных ССД в зависимости от вида проводимой терапии

Группы п До лечения После лечения

Активность ГП, ЕД/мл АТ к ГП, е.о.п. Активность ГП, ЕД/мл АТ к ГП, е.о.п.

I 10 0,070* (0,004) 0,117* (0,005) 0,093 (0,007) 0,084 (0,005)

II 4 0,069* (0,002) 0,108* (0,004) 0,089 (0,006) 0,063 А (0,006)

III 2 0,053* (0,004) 0,124* (0,005) 0,127 л (0,006) 0,083* л (0,007)

Примечание:

* -достоверные различия с группой доноров;

# -достоверные различия между клиническими группами;

Л -достоверные различия между показателями до и после лечения.

Полученные результаты свидетельствуют о преимуществах включения в комплексное лечение больных ССД глюкокортикостероидных препаратов и экстракорпоральных методов, приводящих к быстрому значимому снижению интенсивности антителогенеза и уменьшению активности патологического процесса. Тем не менее, учитывая накопленный опыт применения экстракорпоральных методов, всякий раз необходимо оценивать риск развития осложнений, достигающий, по данным ряда авторов, 10-20%. Наиболее частыми из них являются тромбозы, кровотечения, гемолиз,

цитратная гипокапьциемия, иммунодефицитные состояния. Так, отмечена более высокая частота бактериальных и вирусных инфекций при сочетании плазмафереза и пульс-терапии ГКС и/или цитостатиками по сравнению с монотерапией указанными препаратами. Кроме того, эффект от плазмафереза наступает быстро, но часто носит кратковременный характер, в то время как прием иммуносупрессивных препаратов приводит к более стойкому подавлению поликлональной В-клеточной активации и гиперпродукции аутоантител. Базисная терапия способствует замедлению прогрессирования заболевания и препятствует фиброзообразованию, существенно не изменяя интенсивность иммунного ответа. Таким образом, экстракорпоральные методы являются элементом комплексного лечения ССД и не могут служить альтернативой противовоспалительной и базисной терапии, но должны применяться в случае необходимости быстрого подавления аутоиммунной активности.

Характеристические кривые исследуемых параметров показали удовлетворительные параметры для использования их в качестве диагностических тестов (рис.4). Площадь под кривой (AUC) для активности ГП составила 0,973 (95% ДИ 0,856 - 0,983), для антител к ГП - 0,943 (95%ДИ 0,904 - 1,000). Для обеих переменных отличие кривых от диагонали было статистически значимым (р<0,001).

Поиск точек разделения между исследуемыми группами производили, руководствуясь максимальной суммой значений чувствительности и специфичности. Точкой разделения, удовлетворяющей этому требованию, для активности ГП являлось значение 0,135 Ед/мл (при этом чувствительность составила 85,0%, специфичность - 95,7%), а для анти-ГП - 0,079 е.о.п., (чувствительность-36,1 %, специфичность-100%).

Как уже было отмечено, иммунные механизмы играют ведущую роль в развитии системных заболеваний соединительной ткани, поэтому именно иммунологическим методам придается большое значение в диагностике ССД. Используемые для объективизации диагноза, они позволяют верифицировать заболевание, определить его активность, представить ориентировочный прогноз по течению и выбрать оптимальную терапевтическую тактику. Повышение чувствительности и специфичности иммунологических методов, а также совершенствование технических аспектов постановки реакций является важным методическим направлением современной ревматологии.

1 - специфичность

Рисунок 4. Характеристическая кривая активности ГП в диагностике ССД.

Для выявления специфических антител в сыворотках крови больных ССД нами был выбран иммуноферментный метод с использованием иммобилизированных гранулированных антигенных препаратов с магнитными свойствами. ИФА, будучи высокоспецифичным и чувствительным, является наиболее информативным методом в диагностике ревматических заболеваний (РЗ), а применение иммобилизированных биополимеров дает ему целый ряд неоспоримых преимуществ. Сорбенты обладают механической прочностью, устойчивы к экзогенным физико-химическим и биологическим воздействиям, а возможность проведения регенерации позволяет добиться неоднократного их применения, что ведет к значительному экономическому эффекту.

Для совершенствования иммунологической диагностики ССД нами были разработаны и целенаправленно апробированы при выявлении специфических антител у 47 больных ССД и у 40 здоровых

лиц иммобилизированные гранулированные антигенные препараты на основе глутатионпероксидазы. Унифицированный способ получения полиакриламидных гранул позволил качественно и количественно увеличить сорбционную емкость препарата. Применение метода эмульсионной полимеризации, при котором водорастворимые антигены фиксируются в пространственную решетку полиакриламидного геля методом "механического" включения без образования ковалентных связей, дает возможность сохранить антигены в максимально нативном состоянии, а иммобилизация биологически активных веществ в поверхностном слое "двойной" гранулы создает высокую концентрацию антигена именно в реакционно-активной зоне, что значительно повышает чувствительность ИФА. Включение магнитного материала производилось с целью ускорить и упростить ряд операций в твердофазных методах анализа, улучшить качественные характеристики определений и увеличить число обрабатываемых проб, что создает необходимые условия для разработки автоматизированных систем диагностики.

Таким образом, в результате проведенных исследований были разработаны и применены в варианте твердофазного иммуно-ферментного анализа иммобилизированные гранулированные препараты с магнитными свойствами на основе глутатионпероксидазы. С их помощью нам удалось продемонстрировать определенную диагностическую ценность исследования антител к ГП при ССД. Систематизация накопленных знаний об антитело-образовании к ГП и другим энзимам этой системы, возможно, позволит в дальнейшем разработать иммуноферментный тест на основе ИГАП, улавливающий минимальные отклонения в содержании специфических антител к большинству ферментов АОС. Это, несомненно, упростит диагностику и дифференциальную диагностику ревматических заболеваний, и что немаловажно, прольет свет на общие механизмы их патогенеза.

Коррекция начинающихся нарушений функционирования АОС препаратами, подавляющих окислительные процессы, в совокупности с антифиброзными, сосудистыми препаратами, иммуносупрессивной терапией, плазмаферезом и иммуносорбцией позволит достигать стойкой ремиссии заболевания в более короткие сроки, что приведет к повышению продолжительности и качества жизни больных ССД.

выводы

1. Применение иммобилизированной формы глутатион-пероксидазы в непрямом варианте иммуноферментного метода анализа позволило впервые выявить антитела к данному ферменту у больных системной склеродермией.

2. Максимальные значения сывороточных антител к глутатионпероксидазе отмечены при высокой активности системной склеродермии. Они наиболее часто обнаруживаются в терминальной стадии заболевания и при вовлечении в патологический процесс сердечно-сосудистой системы и легких.

3. Снижение показателей ферментативной активности глутатионпероксидазы при одновременном повышении уровня антител к ней выявляется у больных системной склеродермией с умеренной и высокой степенью активности патологического процесса, что позволяет использовать этот критерий в комплексной оценке патологического процесса как неблагоприятный прогностичекий фактор.

4. Применение на стационарном этапе лечения больных системной склеродермией иммуносупрессивных препаратов и особенно методов экстракорпоральной терапии (плазмаферез) приводит к значительному снижению уровня антител к глутатионпероксидазе.

5. Уровень антител к глутатионпероксидазе может служить дополнительным критерием активности системной склеродермии и использоваться для оценки эффективности проводимой терапии наряду с традиционными клинико-лабораторными критериями.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Полученные иммобилизированные гранулированные антигенные препараты с магнитными свойствами на основе глутатионпероксидазы рекомендуется использовать для выявления антител к ней у больных ССД в разработанном варианте иммуноферментного анализа.

2. При определении антител к глутатионпероксидазе иммуноферментным методом за норму следует считать показатели здоровых лиц - менее 0,045 е.о.п, положительным следует считать значение, превышающее 0,082 е.о.п.

3. Рекомендуется использовать определение уровня антител к ГП в сыворотке крови как дополнительный лабораторный критерий активности системной склеродермии, а также для диагностики возможного вовлечения в патологический процесс сердца и легких.

4. При системной склеродермии наряду с общепринятыми клинико-лабораторными показателями следует использовать определение уровня антител к ГП в сыворотке крови в качестве дополнительного критерия эффективности проводимой терапии.

ПУБЛИКАЦИИ

1. Роль антител к супероксиддисмутазе, глутатионпероксидазе в развитии склеродермического процесса / Соавторы - Романов А.И, Шилова Л.Н., Гонтарь И.П. // Кремлевская медицина. Клинический вестник. - 2007, №4. - С. 54-55.

2. Иммунодиагностика системной склеродермии / Соавторы -Кочнева Л.И., Ненашева Н.В. // II Международный молодежный медицинский конгресс «Санкт-Петербургские научные чтения - 2007. Тезисы докладов. - Санкт-Петербург, 2007.-С. 52.

3. Клинико-патогенетическое значение антител к ферментам антиоксидантной защиты у больных с системным склерозом / Соавторы - Шилова Л.Н. // Научно-практическая ревматология. -2008. - N22 (Приложение). - С. 48.

4. Роль антител к ферментам антиоксидантной системы в развитии патологии при системной склеродермии / Соавторы -Шилова Л.Н., Красильников А.Н., Зборовская И.А., Гонтарь И.П. // Материалы XV Российского национального конгресса «Человек и лекарство». - Москва. -2008. - С. 372-373.

5. Клинико-иммунологические закономерности при синдроме Рейно / соавт. - Шилова Л.Н., Маслакова Л.А., Красильников А.Н., Трубенко Ю.А., Емельянова О.И. //Актуальные проблемы современной ревматологии. Сборник научных работ. - Волгоград, 2008. -С. 130-131.

6. Общебиологический принцип регулирования энзиматической активности антителами/ соавт. - Гонтарь И.И., Романов А.И., Александров A.B., Маслакова Л.А., Емельянов Н.И., Кочнева Л.И. // Актуальные проблемы современной ревматологии. Сборник научных работ. - Волгоград, 2008. -С. 20-21.

МОСКВИТИНА Ольга Викторовна

КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИТЕЛ К ГЛУТАТИОНПЕРОКСИДАЗЕ У БОЛЬНЫХ СИСТЕМНОЙ СКЛЕРОДЕРМИЕЙ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ИММОБИЛИЗИРОВАННОЙ ГРАНУЛИРОВАННОЙ ФОРМЫ ФЕРМЕНТА

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Подписано в печать 12.03.2009. Формат 60x84/16. Тираж 100. Заказ Na 201 п.

Отпечатано с готовых диапозитивов заказчика в ООО "ПК "Панорама-Вельт". 400001, г. Волгоград, ул. КИМ, 6.

 
 

Оглавление диссертации Москвитина, Ольга Викторовна :: 2009 :: Волгоград

ПЕРЕЧЕНЬ ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИИ.

ВВЕДЕНИЕ.

ЧАСТЬ I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

ГЛАВА 1. Современные аспекты иммунопатогенеза системной склеродермии, роль активных форм кислорода и антиоксидантной системы.

1.1 Физиологическая и патофизиологическая роль активных форм кислорода.

1.2 Глутатионпероксидаза, её структура и функции.

1.3 Современные представления об иммунопатогенезе системной склеродермии, роль активных форм кислорода и антиоксидантной системы.

ЧАСТЬ II. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

ГЛАВА 2. Клиническая характеристика обследованных больных и здоровых лиц.

2.1. Больные системной склеродермией.

2.2. Здоровые лица.

ГЛАВА 3. Материалы и методы

3.1. Получение образцов исследуемого материала.

3.2. Иммунологические методы исследования.

3.2.1. Характеристика антигена.

3.2.2. Иммобилизация фермента.

3.2.3. Определение антител к глутатионпероксидазе иммуноферментным методом с использованием гранулированных антигенных препаратов с магнитными свойствами.

3.3. Определение активности глутатионпероксидазы.

3.4. Общеклинические и иммунологические методы исследования

3.5. Статистическая обработка полученных результатов.

ГЛАВА 4. Активность глутатионпероксидазы и уровень антител к ней у здоровых лиц.

ГЛАВА 5. Активность глутатионпероксидазы и уровень антител к ней у больных системной склеродермией.

5.1. Активность глутатионпероксидазы и уровень антител к ней у больных системной склеродермией с различной степенью активности заболевания.

5.2. Активность глутатионпероксидазы и уровень антител к ней у больных системной склеродермией с различным характером течения заболевания.

5.3. Активность глутатионпероксидазы и уровень антител к ней у больных системной склеродермией с различной стадией заболевания.

5.4. Активность глутатионпероксидазы и уровень антител к ней у больных системной склеродермией с различными клиническими проявлениями.

5.5. Влияние терапии на активность глутатионпероксидазы и антител к ней у больных системной склеродермией.

ГЛАВА 6. Диагностическое значение активности глутатионпероксидазы и антител к ней при системной склеродермии.

ГЛАВА 7. Обсуждение результатов.

ВЫВОДЫ.

 
 

Введение диссертации по теме "Ревматология", Москвитина, Ольга Викторовна, автореферат

Системная склеродермия (ССД) является полисиндромным воспалительным заболеванием, клинические проявления которого варьируют в диапазоне от мягко протекающего недуга с преимущественным поражением кожи, опорно-двигательного аппарата и сосудистой патологии по типу облитерирующей микроангиопатии до тяжелого инвалидизирующего поражения с развитием полиорганной недостаточности [17,23,25,26,81].

ССД является относительно редкой патологией с первичной заболеваемостью 2,7 — 12 случаев на 1 ООО ООО населения в год, тем не менее, трудно переоценить ее социально-экономическое значение. Преимущественное поражение лиц трудоспособного периода жизни, высокий процент инвалидизации обуславливают большие экономические потери, включающие высокую стоимость диагностики и лечения, выключение больных из сферы производства, затраты на социальное обеспечение работающих пациентов и инвалидов [32,33,45,69,84,196,218].

За последние десятилетия произошел значительный прогресс в представлениях о ССД: исследованы патогенетические механизмы, детально изучены клиника и эволюция заболевания, разработаны основы диагностики и классификация, создана программа патогенетической терапии с дифференцированным использованием антифиброзных, иммуномодулирующих и сосудистых средств [23,24,26,71,81,141,174,237].

Несмотря на достигнутые успехи, прогноз при системной склеродермии остается зачастую неблагоприятным: согласно статистике, 40% больных с острым и подострым течением погибает в течение первых 5 лет заболевания, 70% — в течение 10 лет [3,25,51,196]. Исходя из этого, актуальными задачами для клиницистов являются своевременная постановка диагноза, назначение адекватной терапии и объективная оценка ее эффективности. Только выполнение всех трех задач дают возможность модифицировать болезнь и повлиять на ее исход.

В числе основных задач, инициированных в 2000-2010 гг. под эгидой ВОЗ Всемирной декады по заболеваниям, поражающим двигательный аппарат человека (Bone and jont decade), были названы дальнейшее изучение патогенетических механизмов ревматических заболеваний, совершенствование и внедрение в практику новых методов ранней диагностики и лечения с учетом не только клинической, но и экономической эффективности и целесообразности [69,84].

Как показали новейшие разработки в иммунодиагностике ревматических заболеваний, иммуноферментные методы анализа (ИФА) с использованием магнитоуправляемых сорбентов на основе антигенов нуклеиновой, липидной и белковой природы в полной мере отвечают указанным требованиям. Неоспоримые преимущества метода заключаются, в первую очередь, в повышении стабильности иммобилизированного биополимера, что делает его устойчивым к различным химическим и физическим воздействиям. Помимо этого, иммобилизация биологически активных веществ в поверхностном слое гранулы создает высокую концентрацию антигена именно в реакционно-активной зоне, тем самым повышая чувствительность твердофазных методов анализа. Включение магнитного материала в гранулы дает возможность ускорить и упростить манипуляции на всех этапах исследования, улучшая качественные характеристики определений и увеличивая число обрабатываемых проб. И, наконец, повторное использование сорбента после регенерации ведет к значительному экономическому эффекту [21,31,39].

Гранулированные препараты с магнитными свойствами уже были использованы для усовершенствования иммунодиагностики ССД и выявления антител к кардиолипину, каталазе, фибронектину и другим биополимерам. Как показали исследования, преимущества метода ИФА с применением иммобилизированных гранулированных антигенных препаратов (ИГАП) делают его не только экономичным и легко применимым в практической медицине, но и позволяют решить вопросы ранней диагностики ревматических заболеваний благодаря высокой чувствительности и специфичности [59,60,74,88,95].

В настоящее время продолжается поиск маркеров системного склероза, позволяющих дифференцировать ею с другими диффузными болезнями соединительной ткани, ревматоидным артритом, псевдосклеродермическими и паранеопластическими синдромами, а также прогнозировать клиническую форму и течение заболевания. В этом свете представляют интерес результаты исследования роли активных форм кислорода в патогенезе аутоиммунных заболеваний. Предполагается, что основное значение свободных радикалов при данной патологии связано с их способностью повреждать белки, липиды, ДНК, придавая им свойства аутоантигенов и провоцируя выработку антител. Достигается это значительным усилением выработки активных форм кислорода (перекись водорода, гидроксильный радикал, синглетный кислород и др.), которые приводят к деполимеризации гиалуроновой кислоты, окисляют белки, вызывают перекисное окисление липидов, стимулируют высвобождение протеолитических ферментов и вазоактивных аминов. Считают, что именно активные формы кислорода (АФК) ответственны за процессы инактивирования и трансформации ферментов, угнетения функциональной активности иммунокомпетентных клеток [37,38,57,158,188].

Естественным препятствием патологическому воздействию АФК . на собственные ткани является мощная антиоксидантная система организма (АОС), включающая в себя ферментные и неферментные звенья. Основными энзимными компонентами АОС считают глутатионпероксидазу, супероксидцисмутазу, глутатионредуктазу, каталазу и церулоплазмин. Они способны нейтрализовать высокоактивные супероксидные анионы, перекись водорода, гидроперекиси жирных кислот, предотвращая накопление особо токсичных вторичных продуктов перекисного окисления липидов [37,38,88,112,124,134,148,158].

В клинической практике использование прямых определений АФК, гидроперекисей и других продуктов свободнорадикальных реакций в биологических жидкостях затруднено из-за технических сложностей. Однако об интенсивности свободнорадикальных процессов можно судить по состоянию и напряженности реакций антиоксидантной защиты. Согласно данным ряда авторов, при ревматической патологии наблюдается накопление вторичных токсических продуктов свободнорадикальных реакций вследствие дисбаланса между продукцией и утилизацией АФК. В качестве одной из причин функциональной недостаточности энзимов-антиоксидантов при аутоиммунных заболеваниях считают образование антител к ним [12,37,38,40,74,88,95].

Из всей группы ферментов АОС наименее изученным объектом иммунного ответа при ССД является глутатионпероксидаза (ГП). В связи с этим представляется актуальным исследовать закономерности антителообразования к глутатионпероксидазе при системной склеродермии, используя иммобилизированную форму фермента. Высокая чувствительность модифицированной методики ИФА дает возможность усовершенствовать способы диагностики системного склероза, выяснить отдельные механизмы патогенеза данного заболевания и обозначить перспективы патогенетической терапии.

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ

Целью настоящего исследования являлось усовершенствование иммунологической диагностики и оценки эффективности лечения системной склеродермии с помощью иммобилизированной формы глутатионпероксидазы.

Для достижения поставленной цели были поставлены следующие задачи: 1 .Получить иммобилизированную форму глутатионпероксидазы, изучить ее физико-химические свойства;

2 .Адаптировать иммуноферментный метод анализа с использованием иммобилизированной глутатионпероксидазы к изучению образования антител к этому ферменту;

3.Изучить активность глутатионпероксидазы и содержание антител к этому ферменту у больных системной склеродермией и здоровых лиц. Исследовать данные показатели и корреляционные связи между ними у больных ССД в зависимости от активности, стадии, длительности, характера течения заболевания и висцеральных поражений;

4.Изучить динамику антителообразования к глутатионпероксидазе в процессе стационарного лечения.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА

Впервые для диагностики ССД созданы и применены в варианте иммуноферментного метода анализа иммобилизированные препараты глутатионпероксидазы. В ходе работы в сыворотках крови больных ССД обнаружены антитела к глутатионпероксидазе. Показано, что их уровень достоверно отличается от содержания данных антител в сыворотке крове здоровых лиц. Выявлена достоверная корреляция меледу содержанием антител к ГП и активностью патологического процесса. Установлено, что поражение сердечно-сосудистой системы и легких при ССД сопровождается максимальными значениями исследуемых антител. Выявлены обратные корреляционные связи между активностью ГП и антителами к ней. Определена способность исследованных показателей к изменению под влиянием проводимой терапии, что обеспечивает возможность оценки ее эффективности.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЦЕННОСТЬ

Разработана доступная для применения в клинических лабораториях методика иммуноферментного определения уровня антител к ГП на основе иммобилизированных гранулированных препаратов с магнитными свойствами. Выявление антител к ГП в предложенной методике ИФА может быть использовано в качестве дополнительного теста для диагностики ССД, оценки активности патологического процесса и прогнозирования клинического варианта заболевания. Обнаружение антител к ГП на начальных сроках заболевания позволяет использовать их определение для ранней диагностики ССД. Динамика изученных показателей дает возможность судить об эффективности проводимой терапии.

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ

На защиту выносится положение о возможности определения антител к ГП с помощью методов иммуноферментного анализа на основе иммобилизированных антигенных препаратов с магнитными свойствами у больных ССД. Исследование антител к ГП может быть использовано в качестве дополнительных тестов для диагностики ССД, выделения клинических вариантов заболевания и уточнения степени активности патологического процесса. Динамика этих показателей может служить для оценки эффективности проводимой терапии.

ПУБЛИКАЦИИ

Основные положения диссертации изложены в 6 печатных работах, из которых 4 - в центральной и 2 - в местной печати. Материалы диссертации были представлены на ежегодной научной конференции студентов и молодых ученых ВолГМУ (2008 г.), II Международном молодежном медицинском конгрессе «Санкт-Петербургские научные чтения - 2007» (Санкт-Петербург, 2007 г.), XV Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2008 г.).

ВНЕДРЕНИЕ В ПРАКТИКУ

Методы определения антител к ГП с помощью иммобилизированных антигенных препаратов с магнитными свойствами внедрены в МУЗ ГКБ №25 г.Волгограда.

ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ

Диссертация изложена на 140 страницах машинописного текста и состоит из введения, части I — обзора литературы, в которой изложены современные аспекты иммунопатогенеза системной склеродермии, участии в ее развитии активных форм кислорода и антиоксидантной системы; части II — собственных исследований, состоящей из 6 глав, содержащих клиническую характеристику больных, методики исследования, полученные результаты, их обсуждение, выводы, практические рекомендации и приложения. Диссертация иллюстрирована 13 таблицами и 7 рисунками, приведено 2 выписки из историй болезни. Указатель литературы содержит 253 источника, в том числе 95 -отечественных и 158 - зарубежных.

 
 

Заключение диссертационного исследования на тему "Клинико-диагностическое значение определения антител к глутатионпероксидазе у больных системной склеродермией с использованием иммобилизированной гранулированной формы фермента"

выводы

1. Применение иммобилизированной формы глутатионпероксидазы в непрямом варианте иммуноферментного метода анализа позволило впервые выявить антитела к данному ферменту у больных системной склеродермией.

2. Максимальные значения сывороточных антител к глутатионпероксидазе отмечены при высокой активности системной склеродермии. Они наиболее часто обнаруживаются в терминальной стадии заболевания и при вовлечении в патологический процесс сердечно-сосудистой системы и легких.

3. Снижение показателей ферментативной активности глутатионпероксидазы при одновременном повышении уровня антител к ней выявляется у больных системной склеродермией с умеренной и высокой степенью активности патологического процесса, что позволяет использовать этот критерий в комплексной оценке патологического процесса как неблагоприятный прогностичекий фактор.

4. Применение на стационарном этапе лечения больных системной склеродермией иммуносупрессивных препаратов и особенно методов экстракорпоральной терапии (плазмаферез) приводит к значительному снижению уровня антител к глутатионпероксидазе.

5. Уровень антител к глутатионпероксидазе может служить дополнительным критерием активности системной склеродермии и использоваться для оценки эффективности проводимой терапии наряду с традиционными клинико-лабораторными критериями.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Полученные иммобилизированные гранулированные антигенные препараты с магнитными свойствами на основе глутатионпероксидазы рекомендуется использовать для выявления антител к ней у больных ССД в разработанном варианте иммуноферментного анализа.

2. При определении антител к глутатионпероксидазе иммуноферментным методом за норму следует считать показатели здоровых лиц — менее 0,045 е.о.п, положительным следует считать значение, превышающее 0,082 е.о.п.

3. Рекомендуется использовать определение уровня антител к ГП в сыворотке крови как дополнительный лабораторный критерий активности системной склеродермии, а также для диагностики возможного вовлечения в патологический процесс сердца и легких.

4. При системной склеродермии наряду с общепринятыми клинико-лабораторными показателями следует использовать определение уровня антител к ГП в сыворотке крови в качестве дополнительного критерия эффективности проводимой терапии.

112

 
 

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2009 года, Москвитина, Ольга Викторовна

1. Алекперов Р.Т., Баранов А.А., Абаитова Н.Е. Клинические ассоциации С-реактивного белка при системной склеродермии / Алекперов Р.Т., Баранов А.А., Абаитова Н.Е. // Тер.архив. - 2006. - Т.78.№6. - С. 3035.

2. Алекперов Р.Т., Тимченко А.В., Насонов Е.Л. Молекулы адгезии при системной склеродермии / Алекперов Р.Т., Тимченко А.В., Насонов Е.Л. // Тер. архив. 2003. - №5. С.91-95.

3. Анализ летальных исходов при ревматических заболеваниях в Москве / Эрдес Ш., Демина А.Б., Фоломеева О.М. и др. // Тер. архив.2003.- №5. — С.78-82.

4. Антинейтрофильные цитоплазматические антитела у больных с диффузными болезнями соединительной ткани / Дадонене И., Редайтене Э., Шаулаускене и др. // Тер. архив. 2002. - №5. - С. 38-43.

5. Антитела к кардиолипину при первичной легочной гипертензии / Чазова И.Е., Насонов Е.Л., Самсонов М.Ю. и др. // Тер. архив. 1994. - №12. - С.20-23.

6. Антиэндотелиальные антитела при системной склеродермии и болезни Рейно / Саложин К.В., Щербаков А.Б., Насонов Е.Л. и др. // Тер. архив. 1995. - №5. - С. 54-57.

7. Асатиани B.C. Ферментные методы анализа / Асатиани B.C. -М., 1969.-489 с.

8. Аутоантитела при системной склеродермии / Мелкумова К.Л., Иванова С.М., Гусева Н.Г. и др. // Научно-практическая конференция «Актуальные вопросы диагностики и лечения системных заболеваний соединительной ткани». Тез. докл. - Москва, 1996. - С.49.

9. Бажанов Н.Н., Пак Ю.В. Поражение миокарда и коронарных артерий сердца у пациентов с системной красной волчанкой и антифосфолипидным синдромом / Бажанов Н.Н., Пак Ю.В. // Тер. архив.2004.-№5.-С.86-90.

10. Бащинский С.Е. Как следует представлять данные рандомизированных исследований / Бащинский С.Е. // Журнал международной мед. практики. 1997. - №1. - С.6-10.

11. Биленко М. В. Ишемические и реперфузионные повреждения органов. / Биленко М. В. // М.: Медицина. 1989. - С.367.

12. Боброва Л.Н. Клинико-диагностическое значение определения антител к супероксиддисмутазе, глутатионредуктазе у больных ревматоидным артритом. Автореф. Дисс. .канд.мед.наук / Боброва Л.Н. -Волгоград, 1995. 132 с.

13. Бондарь Т.Н. Ферментативная утилизация липопероксидов в норме и при атеросклерозе: Автореф. Дис. . канд. биол. наук / Бондарь Т.Н. М.:ВНКЦ,1989. - 23 с.

14. Вест С.Дж. Секреты ревматологии. Пер. с англ. / Вест С.Дж. — М.-Спб.: Издательство «Бином» «Невский диалект», 1999. — 768 с.

15. Владимирская Е.Б., Масчан А.А., Румянцев А.Г. Апоптоз и его роль в развитии опухолевого роста / Владимирская Е.Б., Масчан А.А., Румянцев А.Г. // Гематол. и трасфузиол. 1997. - Т.42, №5. - С.4-9.

16. Влияние свободнорадикальных процессов на гемокоагуляцию и фибринолиз / Азизова О.А., Ройтман Е.В., Дементьева И.И. и др. // Гематол. и трансфузиол., 1997, - Т.42, №6, — С.3-6.

17. Волков А.В., Старовойтова М.Н., Гусева Н.Г. Особенности клинических проявлений и течения системной склеродермии в зависимости от пола и возраста начала болезни / Волков А.В., Старовойтова М.Н., Гусева Н.Г. // Тер. архив. 2004. - №5. - С.5-7.

18. Выживаемость и прогностические факторы риска смерти при антифосфолипидном синдроме: результаты 8-летнего наблюдения / Решетняк Т.М., Алекберова З.С., Котельникова Г.П. и др. // Тер. архив. -2003.-№5.-С. 46-51.

19. Ганджа И.М., Сахарчук В.М., Свирид JI.M. Системные болезни соединительной ткани / Ганджа И.М., Сахарчук В.М., Свирид JI.M. Киев: Выща школа, 1998. - 321 с.

20. Герасимов A.M., Фурцева JI.H. Биохимическая диагностика в травматологии и ортопедии / Герасимов A.M., Фурцева JI.H. М.: Медицина, 1986. - 236 с.

21. Гонтарь И.П., Зборовский А.Б., Левкин С.В., Сычева Г.Ф. Способ получения магнитных полиакриламидных гранул. / Авторское свидетельство на изобретение № 1582657, — 1990.

22. Гусева Н.Г. Системная склеродермия и псевдосклеродермические синдромы / Гусева Н.Г. М.: Медицина, 1993. -268 С.

23. Гусева Н.Г. Системная склеродермия и склеродермическая группа болезней / Гусева Н.Г. // Р. М.Ж. Ревматология. — 2000. №9. — С.383-387.

24. Гусева Н.Г. Системная склеродермия: ранняя диагностика и прогноз / Гусева Н.Г. // Научно-практическая ревматол. 2007. - №1. — С.39-45.

25. Гусева Н.Г. Эволюция представлений о системной склеродермии / Гусева Н.Г. // Тер. архив. 1995. - №5. - С.50-53.

26. Давиденкова Е.Ф., Шафран М.Г. Атеросклероз и процесс перекисного окисления / Давиденкова Е.Ф., Шафран М.Г. // Вестн. АМН СССР. 1989. - № 3. - С. 10-18.

27. Данилова Л.А. Анализы крови и мочи. — СПб: Салит-Медкнига, 2000.-128 С.

28. Десинова О.В., Старовойтова М.Н., Гусева Н.Г. Особенности перекрестной формы системной склеродермии с ревматоидным артритом (ССД-РА OVERLAP- синдром) / Десинова О.В., Старовойтова М.Н., Гусева Н.Г. // Научно-практич. ревматол. 2007. - №4. - С. 18-23.

29. Дисфункция эндотелия. Причины, механизмы, фармакологическая коррекция / Под ред. Н.Н.Петрищева. СПб.: Изд-во СПбГМУ, 2003.-184 с.

30. Ефременко В.И. Магнитосорбенты в микробиологических исследованиях / Ефременко В.И. Ставрополь: государственное предприятие издательско-полиграфическая фирма «Ставрополь», 1996. -131 с.

31. Заболеваемость населения России ревматическими болезнями (анализ за 10 лет) / Фоломеева О.М., Амирджанова В.Н., Якушева Е.О. и др.-// Тер. архив. 2002. - №5. - С.5-11

32. Заболеваемость населения России ревматическими заболеваниями в начале нового столетия / Фоломеева О.М., Дубинина Т.В., Логинова Е.Ю. и др. // Тер. архив. 2003. - №5. - С.5-9

33. Заводовский Б.В. Иммобилизированные гранулированные антигенные препараты с магнитными свойствами как лечебные иммуносорбенты при системной красной волчанке: Дисс. .канд. мед.наук. / Заводовский Б.В.: ГУ НИИ КиЭР РАМН. Волгоград, 1995. -148 с.

34. Зайцев В.М., Лифляндский В.Г., Маринкин В.И. Прикладная медицинская статистика / Зайцев В.М., Лифляндский В.Г., Маринкин В.И. СПб: ООО «Издательство ФОЛИАНТ», 2003. - 432 с.

35. Зборовская И.А. Вопросы клинической ревматологии. Пособие для практических врачей / Зборовская И.А. М.: Велес, 1999. — 277 с.

36. Зборовская И.А. Клинико-патогенетическое значение антиоксидантной системы крови при воспалительных ревматическихзаболеваниях: Дисс. доктора мед. наук / Зборовская И.А. Волгоград, 1995,-341 с.

37. Зборовская И.А. Ревматические болезни и антиоксидантная система/ Зборовская И.А. М.: «Медицина», 2005. - 127 с.

38. Зборовский А.Б., Гонтарь И.П. Применение магнитосорбентов в иммунодиагностике и лечении системной красной волчанки и ревматоидного артрита / Зборовский А.Б., Гонтарь И.П. // Клин, медицина. 2001. - №2. — С.42-45.

39. Идиопатический фиброзирующий альвеолит и хронические идиопатические интерстициальные пневмонии: современные аспекты диагностики и лечения / Е.Н.Попова, Л.В.Козловская, В.В.Фомин и др.// Consilium medicum/ 2005. - Том 7.№4. - С.12-15.

40. Иммунология: в 3 томах. Т.1. / Под ред. У.Пол а. - М.:Мир, 1987.-476 с.

41. Иммунология: в 3 томах. Т. 2: Пер. с англ. / Под ред. У.Пола.-М.:Мир, 1987.-456 с.

42. Инвалидность, обусловленная ревматическими заболеваниями / Фоломеева О.М., Лобарева Л.С., Ушакова М.А. и др. // Научно-практическая ревматология. 2001. - № 1. - С. 15-21.

43. Исследование сиаловых кислот и сиалотрансферазной активности в крови пациентов с системной склеродермией / Габриэлян Н.Д., Комлева А.В., Насонов В.В. и др. // Биохимия. 1999. - №5. - С.561-564.

44. Кароли Н.А., Ребров А.П., Орлова Е.Е. Легочная гипертония у больных системной склеродермией с CREST-синдромом и без такового / Кароли Н.А., Ребров А.П., Орлова Е.Е. // Тер. архив. 2004. - №5. - С.15-18.

45. Кислородные радикалы в химии, биологии и медицине / Ланкин В.З., Борунов Е.В., Щепеткин И.А. и др. // Рига. 1988. - С. 163.

46. Клиническая иммунология: Руководство для врачей. / Под ред. Е.И. Соколова М.: Медицина, 1998. - 272 с.

47. Клиническая иммунология и аллергология: Учебное пособие. / Под ред. А.В. Караулова. М.: Медицинское информационное агентство, 2002.-651 с.

48. Клиническая иммунология и аллергология: в 3 томах. Т.2: Пер. с нем. / Под ред. Л. Йегера. - М.: Медицина, 1990. - 560 с.

49. Клиническое значение высокочувствительного С-реактивного белка при системной склеродермии / Невская Т.А., Новиков А.А., Александрова Е.Н. // Научно-практич. ревматол. 2007. - №4. - С. 10-17.

50. Корнев Б., Попова Е., Коган Е. Поражение легких при системных заболеваниях соединительной ткани / Корнев Б., Попова Е., Коган Е.// Врач 2000. - №9. - С.22-25.

51. Кулинский В.И., Колесниченко Л.С. Структура, свойства, биологическая роль и регуляция глутатионпероксидазы / Кулинский В.И., Колесниченко Л.С. // Успехи современно биологии. 1993. - С.107 - 122.

52. Лабораторные методы исследования в клинике / Под.ред. В.В. Меньшикова М.: Медицина, 1987. -458 с.

53. Лемперт Б.А. Параметры определения циркулирующих иммунных комплексов и специфичности ПЭГ-теста с использованием в качестве модели агрегированного IgG / Лемперт Б.А. //Лаб. Дело. 1988. — №1. — С.28-29.

54. Лисицина Т.А., Иванова М.М., Дурнев А.Д. Активные формы кислорода и патогенез ревматоидного артрита и системной красной волчанки / Лисицина Т.А., Иванова М.М., Дурнев А.Д. // Вести. Росс. акад. мед. наук. 1996. - №12. - С. 15-20.

55. Молодкина О.А. Функциональное состояние микроциркуляторного русла при системных васкулитах и системных заболеваниях соединительной ткани: Дисс. . канд.мед.наук / Молодкина Л.А. -Ярославль, 2005. 186 с.

56. Маслакова Л.А. Иммобилизированные гранулированные антигены нуклеиновой, липидной и белковой природы с магнитными свойствами в иммунодиагностике системной склеродермии: Дисс. . канд.мед.наук / Маслакова Л.А. Волгоград, 1999. - 137 С.

57. Наджиб И.В. Клинико-диагностическое значение определения антител к глутатионпероксидазе у больных системной красной волчанкой при помощи магнитоуправляемых иммуносорбентов: Дисс. канд.мед.наук / наджиб И.В. Волгоград, 2006. - 140 с.

58. Нарушения реологических свойств крови при системной склеродермии / Алекперов Р.Т., Вышлова М.А., Балабанова P.M., Фирсов Н.Н. // Тер. архив. 2002. - №5. - С.43-47.

59. Насонов Е.Л. Проблема атеросклероза в ревматологии / Насонов Е.Л. // Вестник РАМН. 2003. - №7. - С.6-10.

60. Насонов Е.Л. Профилактика и лечение антифосфолипидного синдрома: современные рекомедации и перспективы / Насонов Е.Л. //

61. Русский медицинский журнал. Ревматология. 2004. - Т. 12, №6. - С. 377385.

62. Насонов E.JT. Современные направления иммунологических исследований при хронических воспалительных и аутоиммунных заболеваниях человека / Насонов E.JT. // Тер. архив. 2001. - Т. 74, №8. -С.43-46.

63. Насонов E.JT. Современные подходы к профилактике и лечению антифосфолипидного синдрома / Насонов E.JI. // Тер. архив. -2003.-№5.-С. 83-87.

64. Насонов Е.Л., Баранов А.А., Шилкина Н.П. Васкулиты и васкулопатии / Насонов Е.Л., Баранов А.А., Шилкина Н.П. Ярославль: Верхняя Волга, 1999. - 612 с.

65. Насонова В.А., Астапенко М.Г. Клиническая ревматология / Насонова В.А., Астапенко М.Г. М.: Медицина, 1989. - 592 с.

66. Насонова В.А., Сигидин Я.А. Патогенетическая терапия ревматических заболеваний / Насонова В.А., Сигидин Я.А. М.: Медицина, 1985.-325 с.

67. Насонова В.А., Фоломеева О.М. Медико-социальное значение XIII класса болезней для населения России / Насонова В.А., Фоломеева О.М. // Научно-практическая ревматология. 2001. — №1. - С.7-15.

68. Норма в медицинской практике: справочное пособие / Под ред. Литвинова А.В. //М.:МЕДпресс-информ, 2007. 144 с.

69. Олюнин Ю.А. Лефлюномид в клинической практике: итоги и перспективы / Олюнин Ю.А. // Клиницист. 2007. - №4. - С.1-7.

70. Панченко Л.Ф., Герасимов A.M., Антоненков В.Д. Роль пероксисом в патологии клетки / Паченко Л.Ф., Герасимов A.M., Антоненков В.Д. //М.: Медицина. 1981. - 207 с.

71. Пастухов В.И. Активные формы кислорода в прогрессировании хронического миелолейкоза: перспективы применениянекоторых антиоксидантов / Пастухов В.И. // Тер. архив. 2000. - Т. 72, №5. - С.25-29.

72. Растворимые формы адгезии при антифосфолипидном синдроме, связанном с системной красной волчанкой, и первичном антифосфолипидном синдроме / Александрова Е.Н., Новиков А.А., Решетняк Т.М. и др. // Тер. архив. 2002. - №5. - С.23-27.

73. Рациональная фармакотерапия ревматических заболеваний: руководство для практикующих врачей / Насонова В.А., Насонов Е.Л., Алекперов Р.Т. и др.; под общ. ред. В.А. Насоновой, Е.Л. Насонова. — М.: Литера, 2003.-507с.

74. Ревматические болезни. Руководство для врачей / Под ред. В.А.Насоновой, Н.В.Бунчука. М.: Медицина, 1997. - 520 с.

75. Ревматические заболевания среди умерших в Москве / Демина А.Б., Горячев Д.В., Раденска-Лоповок С.Г. и др. // Научно-практическая ревматология. 2002. - №2. - С.30.

76. Ройт А., Бростофф Дж., Мейл Д. Иммунология. Пер. с англ. / Ройт А., Бростофф Дж., Мейл Д. М.: Мир,2000. - 529 с.

77. Сигидин Я.А., Гусева Н.Г., Иванова М.М. Диффузные болезни соединительной ткани / Сигидин Я.А., Гусева Н.Г., Иванова М.М. — М.: Медицина, 1994.-542 С.

78. Системная склеродермия: современные аспекты проблемы / Малахов А.Б., Давтян В.Г., Геппе Н.А. и др. // Consilium medicum. 2006. -Том 8.№2. - С.25-28.

79. Скулачев В.П. Возможная роль активных форм кислорода в защите от вирусных инфекций / Скулачев В.П. // Биохимия. 1998. - Т.63, №12. - С.1691-1694.

80. Соловьев С.К., Асеева Е.А. Место плазмафереза в лечении ревматических заболеваний / Соловьев С.К., Асеева Е.А. // Научно-практич. ревматол. 2007. - №4. - С.47-54.

81. Старовойтова М.Н., Десинова О.В., Гусева Н.Г. Перекрестные формы системной склеродермии / Старовойтова М.Н., Десинова О.В., Гусева Н.Г. // Научно-практич. ревматол. — 2007. №1. - С.52-58.

82. Статистически-картографическое моделирование распространен-ности ревматических болезней среди населения различных регионов Российской Федерации / Эрдес III., Фоломеева О.М., Дубинина Т.В., Жукова О.В. // Тер. архив. 2004. - №5. - С.76-82.

83. Струков А.И., Серов В.В. Патологическая анатомия: Учебник / Струков А.И., Серов В.В. М.: Медицина, 1993. - 688 с.

84. Сущук Е.А. Клинико-диагностическое значение определения антител к церулоплазмину у больных системной красной волчанкой с использованием гранулированных антигенных препаратов с магнитными свойствами: Дисс. . канд.мед.наук. Волгоград, 2002. - 237 с.

85. Таова М.Х., Курданов Х.А. Антитела к коллагену I типа и фибронектин у больных системной склеродермией / Таова М.Х., Курданов Х.А. // Клин. мед. 1996. - №7. - С.50-51.

86. Т-клеточные иммунные нарушения при ранней системной склеродермии / Невская Т.А., Гусева Н.Г, Раденска-Лоповок С.Г. и др.// Научно-практи. ревматол. -2006. №4. - С.35-44.

87. Традиционные кардиоваскулярные факторы риска и атеросклероз у больных системной склеродермией / Шабанова С.Ш.,Ананьева Л.П., Попкова Т.В. и др. // Научно-практич. ревматол. -2007. №4. - С.24-28.

88. Тюрин Ю.Н., Макаров А.А. Анализ данных на компьютере / Тюрин Ю.Н., Макаров А.А. М.: Финансы и статистика, 1995. - 385 с.

89. Уровень растворимого рецептора I типа фактора некроза опухоли у больных системной склеродермией / Алекперов Р.Т., Тимченко

90. A.В., Самсонов М.Ю. и др.// Тер. архив. 2004. - №5. - С. 11-14.

91. Участие антиоксидантов в регуляции клеточного иммунитета / Новоселова Е.Г., Макар В.Р., Семилетова Н.В.и др. // Иммунология. -1998. №4. - С.33-37.

92. Язид Аль Раави. Клинико-диагностическое значение определения антител к церулоплазмину у больных ССД с использованием иммобилизированной формы магнитоуправляемого сорбента.: Дисс.канд. мед. наук. / Язид Аль Раави Волгоград,2002. - 159 с.

93. Abnormal nitric oxide metabolism in systemic sclerosis: increased levels of nitrated proteins and asymmetric dimethylarginine / Dooley A., Gao

94. B., Bradley N. et al. // Annals of the New-York-Academy-of-Sci. 2005 Jun. -1051:455-64.

95. A model for p53-induced apoptosis / Polyak K., Xia Y., Zweier J.L. et al. // Nature. 1997. - Vol.389. - P.300-305.

96. Accelerated atherosclerosis in autoimmune rheumatic diseases / Shoenfeld Y., Gerli R., Doria A. et al. // Circulation. 2005. - №112. - P.3337-3347.

97. Actions of Melatonin in the Reduction of Oxidative Stress / Reiter R.J., Tan D., Osuna C., Gitto E. // J. Biomed. Sci. 2000. - Vol.7. - P.444-458.

98. Activation of hypoxia-inducible transcription factors depends primarily upon redox-sensitive stabilization of its alpha subunit / Huang L.E.,

99. Arany Z., Livingston D.M., Bunn H.F.// J. Biol. Chem. 1996. - Vol.271. -P.32253-32259.

100. Activation of protein kinase С by tyrosine phosphorylation in response to H2O2 / Konishi H., Tanaka M., Takemura Y. et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1997. - Vol.94. - P.l 1233-11237.

101. Ahmad R., Alam K., Ali R. Antigen binding characteristics of antibodies against hydroxyl radical modified thymidine monophosphate / Ahmad R., Alam K., Ali R. // Immunol. Lett. 2000. - Vol.71, №2. - P.l 11115.

102. Ahmad J., Ashok B.T., Ali R. Reactive oxygen species modified thymine and poly(dT) present unique epitope for human anti-DNA autoantibodies / Ahmad J., Ashok B.T., Ali R. // Immunol. Lett. 1997. -Vol.58, №2. - P.69-74.

103. Alam K., Ali R. Human anti-DNA autoantibodies and induced antibodies against ROS-modified-DNA show similar antigenic binding characteristics / Alam K., Ali R. // Biochem. Mol. Biol. Int. -1999. Vol.47, №5. - P.881-890.

104. Altered dermatan sulfate proteoglycan synthesis in fibroblast cultures established from skin of patients with systemic sclerosis / Westergren-Thorsson G., Coster L., Akesson A. et al. // J. Rheumatol. 1996. - №23. -P.1398-1406.

105. Altered expression level of a systemic nuclear autoantigen determines the fate of immune response to self / Kawahata K., Misaki Y., Komagata Y. et al. //J. Immunol. 1999.-Vol. 162.№11.-P.6482-6491.

106. Angiographically provencoronary artery disease in scleroderma / AkramM. R., Handler С. E., WilliamsM. et al.//Rheumatology. 2004. - №30.-P.2435-2501.

107. Anti-centromere antibodies in patients with systemic lupus erythematosus / Respaldiza N., Wichmann I., Ocana C. et al. // Scand.J.Rheumatol. 2006. -Vol. 35.№4. - P. 290-294.

108. Antineutrophil cytoplasmic antibodies induce human monocytes to produce oxygen radicals in vitro / Weidner S., Neupert W., Goppelt-Struebe M., Rupprecht H.D. // Arthritis Rheum. 2001. - Vol.44, №7. - P. 1698-1706.

109. Antiubiquitin antibodi in localised and systemic scleroderma / Fujimoto M., Sato S., Ihn H. Et al. // Ann. Rheum. Dis. 1996. - Vol.55. №6. -P. 399-402.

110. Artlett C.M. Immunology of systemic sclerosis / Artlett C.M. // Front.Biosci. 2005. - №10. - P. 1707-1719.

111. Aruoma O.I. Nutrition and health aspects of free radicals and antioxidants / Aruoma O.I. // Food Chem. Toxicol. 1994. - Vol.32. - P.671-676.

112. Autoantibodies against malondialdehyde-modified lipoprotein(a) in antiphospholipid syndrome / Romero F.I., Atsumi Т., Tinahones F.J. et al. // Arthritis Rheum. 1999. - Vol.42, №12. - P.2606-2611.

113. Autoantibodies to malondialdehyde-modified epitope in connective tissue diseases and vasculitides / Amara A., Constans J., Chaugier C. et al. // Clin. Exp. Immunol. 1995.-Vol. 101, №2.-P.223-23 8.

114. Autocrine overexpression of CTGF maintains fibrosis: RDA analysis of fibrosis genes in systemic sclerosis / Shi-wen X., Pennington D., Holmes A. et al. // Exp. Cell. Res. 2000. - Vol.259. №1. - P.213-224.

115. Beutler E. Red cell metabolism: A manual of biochemical methods / Beutler E.: New York, 1975. P. 71-73.

116. Blood coagulation, fibrinolysis and markers of endothelial dysfunction in systemic sclerosis / Matucci-Cerinic M., Valentini G., Sorano G.G. et al. // Sem. Arthr. Rheum. 2003. - №32. - P.285-292.

117. Bouros D., Wells A.U., Nicolson A.G. Histopathologic subsets of fibrosing alveolitis in patients with systemic sclerosis and their relationship to outcome / Bouros D., Wells A.U., Nicolson A.G.// Care Med. 2002. - №165. -P.1581-1586.

118. Bruce I.N., Gladman D., Urowitz M.B. Premature atherosclerosis in systemic lupus erythematosus / Bruce I.N., Gladman D., Urowitz M.B. // Rheum. Dis. Clin. North. Am. 2000. - Vol.26, №2. - P.345-412.

119. Carr A.C., Winterbourn C.C. Oxidation of neutrophil glutathione and protein thiols by myeloperoxidase-derived hypochlorous acid / Carr A.C., Winterbourn C.C. // Biochem. J. 1997. - Vol.327. - P.275-281.

120. Carr A.C., McCall M.R., Frei B. Oxidation of LDL by myeloperoxidase and reactive nitrogen species reaction pathways and antioxidant protection / Carr A.C., McCall M.R., Frei B. // Atheroscler Thromb. Vase. Biol. - 2001. - Vol.20. - P.1716-1723.

121. Characterization of antinucleolar antibody reactivity in patients with systemic sclerosis and their relatives / Harvey G., Black C., Maddison P. et al. // J. Rheumatol. 1997. - №24(3). - P.477-484.

122. Connective tissue growth factor: potential role in glomerulosclerosis and tubulointerstitial fibrosis / Gupta S., Clarkson M.R., Duggan J. et al. // Kidney Int. 2000. - - Vol.58. №4. - P. 1389-1399.

123. Davies K.J. Oxidative stress: the paradox of aerobic life / Davies K.J. // Biochem Soc Symp.- 1995. Vol.61. - P. 1 -31.

124. DeLeo F.R., Quinn M.T. Assembly of the phagocyte NADPH oxidase: molecular interaction of the oxidase proteins / DeLeo F.R., Quinn M.T. // J Leukoc Biol, 1996. - Vol.60. - P.677-691.

125. Denton C.P., Black C.M., Abraham D.J. Mechanisms and consequences of fibrosis in systemic sclerosis / Denton C.P., Black C.M., Abraham D.J. // Nat.Clin.Pract.Rheumatol. 2006 - Vol.2.№3. - P. 134-44.

126. Direct association with thioredoxin allows redox regulation of glucocorticoid receptor function / Makino Y., Yoshikawa N., Okamoto K. et al. //J. Biol. Chem.- 1999.-Vol.274, №5.-P.3182-3188.

127. DNA damage and oxidation of thiols peroxynitrite causes in rat thymocytes / Salgo M.G., Bermudez E., Squadrito G., Pryor W. // Arch. Biochem. Biophys. 1995. - Vol.322. - P.500-505.

128. Dolphin D., Poulson R., Avramovic O. Glutathion: Chemical, biochemical and medical aspects. / Dolphin D., Poulson R., Avramovic O. // Pt A: Coenzymes and cofactors. N. Y.: J. Wiley and Sons. 1989 - Vol.3 - P.930.

129. Effects of a factor derived from polymorphonuclear leukocytes on the growth and collagen metabolism in normal and scleroderma skin fibroblast cultures / Sasaki Т., Hori H., Arai K. et al. // J. Dermatol. Sci. 1996. -№11.-P.10-18.

130. Endothelial dysfunction precedes atherosclerosis in systemic sclerosis—relevance for prevention of vascular complications / Szucs G., Timar O., Szekanecz Z. et al. // Rheumatology (Oxford). 2007. - Vol.46.№5. - P. 759-762.

131. Endothelins: effect on matrix biosynthesis and proliferation in normal and scleroderma fibroblasts / Xu S., Denton C.P., Holmes A. et al. // J. Cardiovasc. Pharmacol. 1998. -№31, Suppl 1. - P.360-363.

132. Epidermal growth factor (EGF)-induced generation of hydrogen peroxide / Bae Y.S., Kang S.W., Seo M.S. et al. 1997.- Vol.272. - P.217-221.

133. Estimates of the prevalence of arthritis and selected musculoskeletal disorders in the United States / Lawrence RC, Helmick CG, Arnett FC et al. // Arthritis Rheum, 1998, - Vol.41, №5, - P.778-799.

134. Expression of plasma glutathione peroxidase in human liver in addition to kidney, heart, lung and breast in humans and rodents / Chu F.F., Esworthy R.S., Doroshow J.H. et al. // Blood 1992. - Vol.79,№12. - P. 32333238.

135. Famularo G., De-Simone C. Systemic sclerosis from autoimmunity / Famularo G., De-Simone C. // South. Med. J. -1999. Vol.92.№5. - P.472-476.

136. Fas-induced programmed cell death is mediated by a ras-regulated O2" synthesis / Gulbins E., Brenner В., Schlottmann K. et al. // Immunology. -1996.-Vol.89.-P.205-212.

137. Fibroblast matrix gene expression and connective tissue remodeling: role of endothelin-1/ Shi-Wen X., Denton C.P., Dashwood M.R. et al. // J. Invest. Dermatol. 2001. - Vol. 116. №3. - P.417-425.

138. Fibronectin gene polymorphisms associated with fibrosing alveolitis in systemic sclerosis /Avila J.J., Lympany P.A., Pantelidis P. et al. // Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 1999. - Vol.20.№ 1. - P. 106-112.

139. Fibronectin synthesis by human tubular epithelial cells in culture: effects of PDGF and TGF-beta on synthesis and splicing /Burger A., Wagner C., Viedt С et al. //Kidney Int. 1998. - Vol.54.№2. -P.407-415.

140. Finkel T. Oxygen radicals and signaling / Finkel T. // Current Opinion in Cell Biology. 1998. - Vol.10. -P.248-253.

141. Flohe L. Free radical in biology / Flohe L. // Ed. Pryor W. A. N. Y.: Acad, press.-1982. Vol.5. - P.223.

142. Flohe L. Glutathione: chemical, biochemical and medical aspects. Pt. A: Coenzymes and cofactors. / Flohe L. // Eds Dolphin D. et al. N. Y.: J. Wiley and Sons. 1989. - Vol.3. - P.643.

143. Flohe L., Ganzler W.A. Assay for Glutathione peroxidase / Flohe L., Ganzler W.A. // Metod Enzymology. 1984.- Vol. 105. - P. 114-121.

144. Follow up investigation of patients with antiphospholipid syndrome and cerebrae manifestations / Miesbach W., Gilzinger A., Claus D.et al. // Zeitschrift fur Rheumatologie. 2003. - Vol.62.№ 1. - P.91.

145. Gene regulation by reactive oxygen species / Cimino F., Esposito F., Ammendola R., Russo T. // Curr. Top Cell Regul. 1997. - Vol.35. - P. 123148.

146. Generation of a polyclonal antibody against lipid peroxide-modified proteins / Kim J.G., Sabbagh F., Santanam N. et al. // Free Radic. Biol. Med. -1997. Vol.23, №2. - P.251 -259.

147. Generini S., Kahaleh В., Matucci-Cerinic M. Raynaud's phenomenon and systemic sclerosis / Generini S., Kahaleh В., Matucci-Cerinic M. // Ann. Ital. Med. Int. 1996. - №11. - P. 125-131.

148. Gromnica-Ihle E. Antiphospholipid Syndrom update 2003 fur die Praxis / Gromnica-Ihle E. // Zeitschrift fur Rheumatologie. 2003. -Vol.62.№l. - P.6.

149. Growth and characterization of fibroblasts obtained from bronchoalveolar lavage of patients with scleroderma / Ludwicka A., Trojanowska M., Smith E.A. et al. // J. Rheumatol. 1992. - Vol.l9.№l 1. -P.1716-1723.

150. Halliway В., Gutteridge J.M.C., Cross C.E. Free radicals, antioxidants, and human disease: Where are we now? / Halliway В., Gutteridge J.M.C., Cross C.E. //J. Lab. Clin. Med. 1992. - Vol.114. -P.598-620.

151. Halliwell В., Gutteridge J.M. The antioxidants of human extracellular fluids. / Halliwell В., Gutteridge J.M. // Arch. Biochem. Biophys. — 1990.-Vol.280.-P. 1-8.

152. Herrick A.L., Clark S. Quantifying digital vascular disease in patients with primary Raynaud's phenomenon and systemic sclerosis / Herrick A.L., Clark S. // Ann. Rheum. Dis. 1998. - №57. - P.70-78.

153. Herrick A., Matucci Cerinic M. The emerging problem of oxidative stress and the role of antioxidants in systemic sclerosis / Herrick A., Matucci Cerinic M. // Clin. Exp. Rheumatol. 2001. - №19. - № 1-4.

154. Hippeli S., Elstner E.F. Transition metal ion-catalyzed oxygen activation during pathogenic processes / Hippeli S., Elstner E.F. // FEBS Lett, -1999,- Vol.443,-P.l-7.

155. Hydrocortisone-induced inhibition of reactive oxygen species by polymorphonuclear neutrophils / Dandona P., Suri M., Hamouda W.et al. // Crit. Care Med. 1999. - Vol.27, №11 - P.2442-2444.

156. Identification of hydrogen peroxide as the relevant messenger in the activation pathway of transcription factor NF-кВ / Schmidt K.N., Amstad P., Cerutti P., Baeuerle P.A. // Adv. Exp. Med.Biol. 1996. - Vol.387. - P.63-68.

157. Implication of an increased oxidative stress in the formation of advanced glycation end products in patients with end-stage renal failure / Miyata Т., Wada Y., Cai Z. et al. // Kidney Int. 1997. - Vol.51. - P. 1170-1181.

158. Increased glutathione and glutathione peroxidase in lungs of individuals with chronic beryllium disease / Comhair S.A., Lewis M.J., Bhathena P. R. et al. // Respir. Crit. Care Med.- 1999. Vol.159. - P. 18241829.

159. Increased interferon-gamma (IFN-gamma) levels prodused in vitro by alloactivated T lymphocytes in systemic sclerosis and Raynaud's phenomenon / Molteni M., Delia-Bella S., Mascagni B. et al. // Clin. Exp. Immunol. 1999. - Vol.116.№1. - P. 164-168.

160. Increased lipid peroxidation in children with autoimmune diseases / Michel P., Eggert W., Albrecht-Nebe H., Grune T. // Acta Paediatr. 1997. -Vol.86.-P.609612.

161. Inhibition of type I collagen gene expression in normal and systemic sclerosis fibroblasts by a specific inhibitor of geranylgeranyl transferase I / Hamilton A.D., Sebti S.M., Kucich U. et al. // Arthritis Rheum. -2000. Vol.43. №7. - P. 1624-1632.

162. International Conference on Systemic Sclerosis: Pathogenesis, clinical features and treatment. Montecatini Terme, Italy, 22-26 March, 1998. // Clin. Exp. Rheum. 1998. - №16. -P.357-3.

163. Interstitial lung disease in systemic sckerosis / Ostojic P., Cerinic M.M., Silver R. et al.// Lung. 2007. - Vol. 185. №4. - P.211 -220.

164. Jakods Y., Hoes J., Bijlsma J. EULAR recommendations on the management of systemic qlucocorticoid therapy in Rheumatic diseases / Jakods Y., Hoes J., Bijlsma J. // Ann. Rheum. Dis. 2007. - Vol.66.Suppl. 11. - P8-9.

165. Jialal I., Devaraj S., Venugopal S.K. C-reactiveprotein: risk or mediator inatherogenesis? / Jialal I., Devaraj S., Venugopal S.K. // Hypertension. 2004 - №44. -№6-11.

166. Kaal E., van-Den-Hoogen F.H., de-Jong E.M. Systemic sclerosis: new insights in autoimmunity / Kaal E., van-Den-Hoogen F.H., de-Jong E.M. // Proc. Soc. Exp. Med. 1999. - №1. - P.l-8.

167. Kantola M., Saaranen M., Varha-Perttula T. Selenium and glutathione peroxidase in seminal plasma of men and bulls / Kantola M., Saaranen M., Varha-Perttula T. // J. Reprod. Fert. 1988. - Vol. 83, №. 2. - P. 785-794.

168. Karrar A., Sequeira W., Block J.A. Coronary artery disease in systemic lupus erythematosus: A review of the literature / Karrar A., Sequeira W., Block J.A. // Semin. Arthritis Rheum. 2001. - Vol.30, №.6. - P.436-443.

169. Kim D.S., Yoo В., Lee J.S. The major histopathologic pattern of pulmonary fibrosis in scleroderma is non specific interstizial pneumonia / Kim D.S., Yoo В., Lee J.S. // Diffuse Lung Dis., 2002. №19. - P. 121-127.

170. Klonowski K.D., Primiano L.L., Monestier M. Atypical VH-D-JH rearrangements in newborn autoimmune MRL mice / Klonowski K.D., Primiano L.L., Monestier M. // J Immunol, 1999, - Vol.l62, № 3, - P.566-572.

171. Knight J.A. Diseases related to oxygen-derived free radicals / Knight J.A. // Clin Lab Sci, 1995.- Vol.25. - P.l 11-124.

172. Le Roy E.C. Systemic sclerosis. A vascular perspective. // Rheum.

173. Dis. Clin. North. Am. 1996. - №22. - P.675-694.

174. Liochev SI, Fridovich I. The role of superoxide in the production of hydroxyl radical: In vitro and in vivo / Liochev SI, Fridovich I. // Free Radical Biol Med. 1994.-Vol.16.-P.29-33.

175. Lipid peroxidation and trace elements in systemic sclerosis / Tikly M., Channa K., Theodorou P. et al. // Clin.Rheumatol. 2006. - Vol.25.№3. -P.320-324.

176. Lipoprotein-a andthelipidprofileinpatientswithsystemic sclerosis / Lippi G., Caramaschi P., Montagnana M. et al. // Clin. Chim. Acta. 2006. -Vol.364. №1-2. - P. 345-348.

177. Lo Y.Y.C., Cruz T.F. Involvement of reactive oxygen species in cytokine and growth factor induction of c-fos expression in chondrocytes / Lo Y.Y.C., Cruz T.F. // J. Bio.l Chem., 1995. - Vol.270. - P. 11727-11730.

178. Mamula M.J., Craft J. The expression of self antigenic determinants: implications for tolerance and autoimmunity/ Mamula M.J., Craft J. // Curr. Opin. Immunol. 1994. - Vol.6. - P.882-886.

179. Mannervik В., Carlberg J., Larson K. Glutathion: chemical, biochemical and medical aspects. / Mannervik В., Carlberg J., Larson K. // Pt. A: Coenzymes and cofactors. Eds Dolphin D. et al. N. Y.: J. Wiley and Sons. -1989.-Vol.3.-P.475.

180. Manzi S. Systemic lupus erythematosus: a model for atherogenesis? / Manzi S. // Rheumatology (Oxford). 2000. - Vol.39. - P.353-359.

181. Manzi S., Wasko M.C.M. Inflammation-mediated rheumatic diseases and atherosclerosis / Manzi S., Wasko M.C.M. // Ann. Rheum. Dis. -2000. Vol.59. - P.321-325.

182. Mayes M.D. Classification and epidemiology of scleroderma / Mayes M.D. // Semin. Cutan. Med. Surg. 1998. - №17. - P.22-26.

183. McCay P.B, Gibson D.D. Lipid peroxides in biologi and medicine. / McCay P.B., Gibson D.D. // Orlando: Acad, press. 1982. - P.179.

184. Mitogenic signaling mediated by oxidants in Ras-transformed fibroblasts / Irani K., Xia Y., Zweier J.L. et al. // Science. 1997. - Vol.275. -P. 1649-1652.

185. Modification of the 6-Hydroxydopamine technique for the correct determination of superoxide dismutase / Crosti N., Servidei Т., Bajer J., Serra A. // J. Clin. Chem. Clin. Biochem. 1987. - Vol. 25. - P. 265-266.

186. Mohan I.K., Das U.N. Oxidant stress, anti-oxidants and essential fatty acids in systemic lupus erythematosus / Mohan I.K., Das U.N. // Prostaglandins Leukot Essent Fatty Acids. 1997. - Vol.56, №3. - P. 193-198.

187. Moodley Y.P., Lalloo U.G. Exhaled Nitric Oxide is elevated in patients with progressive systemic sclerosis without interstitial lung disease / Moodley Y.P., Lalloo U.G. // Chest/ 2001. - №119. - P. 1449-1454.

188. Morel Y., Barouki R. Repression of gene expression by oxidative stress / Morel Y., Barouki R. // Biochem. J. -1999. Vol.342. - P.481-496.

189. Nc -(carboxymethyl)lysine, a product of the chemical modification of proteins by methylglyoxal, increases with age in human lens proteins / Ahmed M.U., Frye E.B., Thorpe S.R., Baynes J.W. // Biochem. J. 1997. -Vol.324. -P.565-57.

190. Nonselenium glutathione peroxidase in human brain: elevated levels in Parkinson's disease and Dementia with Lewy Bodies / Power J.H.T., Shannon J.M., Blumbergs P.C., Gai W.P. // Am J. Path. 2002. - Vol.161. - P. 885-894.

191. Ongoing prothrombotic state in patients with antiphospholipid antibodies: a role for increased lipid peroxidation / Pratico D., Ferro D., Iuliano L. et al. // Blood. 1999. - Vol.93, №10. - P.3401-3407.

192. Ooi G.C., Мок M.Y., Tsang K.W. Interstizial lung disease in systemic sclerosis / Ooi G.C., Мок M.Y., Tsang K.W. // Acta Radiol. 2003 -№44. — P.258-264.

193. Oxidative DNA damage and cellular sensitivity to oxidative stress in human autoimmune diseases / Bashir S., Harris G., Denman M.A. et al. // Ann. Rheum. Dis.- 1993. Vol.52, №9. -P.659-666.

194. Oxidative stress and antioxidant defense mechanism in glomerular diseases / Turi S., Nemeth I., Torkos A. et al. // Free Radic Biol. Med. 1997. -Vol.22, №1-2.-P.161-168.

195. Oxidative stress in systemic lupus erythematosus and allied conditions with vascular involvment / Ames P.R.J., Alves J., Murat I. et al. // Rheumatology (Oxford). 1999. - Vol.38. -P.529-534.

196. Peroxynitrite-mediated formation of free radicals in human plasma: EPR detection of ascorbyl, albumin-thiyl and uric acid-derived free radicals / Squez-Vivar J.V., Santos A.M., Junqueira V.B.C., Augusto O. // Biochem. J.1996. Vol.314. - P. 869-876.

197. Platelet-activating factor stimulates gene expression and synthesis of matrix proteins in cultured rat and human mesangial cells: role of TGF-beta / Ruiz-Ortega M., Largo R. et al. // J. Am. Soc. Nephrol.- 1997. Vol.8.№8. -P.1266-1275.

198. Pope J.E. Musculoskeletal involvement in scleroderma / Pope J.E. // Rheum. Dis.Clin. North Am. 2003. - Vol.29.№2. - P.391-408.

199. Pope J.E., Thompson A. The frequency and significance of anticardiolipin antibodies in scleroderma / Pope J.E., Thompson A. // J.Rheumatol.-2000. -№27. P. 1450-1452.

200. Predictors of end stage lung diseases in a cohort of patients with scleroderma / Morgan C., Knight C., Lunt M. et al. // Ann. Rheum. Dis. 2003. -№62.-P. 146-150.

201. Prevalence and correlates of accelerated atherosclerosis in systemic lupus erythematosus / Roman M.J. et. al. //New England Journalof Medicine. -2003. Vol. 349, №25. - P. 2399-2406.

202. Protein modification by lipid peroxidation products: formation of malondialdehyde-derived N-(2-propenal)Lysine in proteins / Uchida K., Sakai K., Itakura K. et al. // Arch. Biochem. Biophys. 1997. - Vol.346. - P.45-52.

203. Quality of life and functional status in systemic sclerosis compared to other rheumatic diseases / Johnson S.R., Glaman D.D., Schentag C.T. et al. // J.Rheumatol. 2006 Jun. - VoI.33.№ 6. - P. 1117-1122.

204. Rahman I., MacNee W. Lung glutathione and oxidative stress: implicationsin cigarette smoke-induced airway disease / Rahman I., MacNee W.// J.Physiol. 1999. - Vol.277, №6. - P. 1067-1088.

205. Regional differences in bronchoalveolar lavage and thoracic high-resolution computed tomography results in dispno patients with systemic sclerosis / Clements P., Goldin J., Kleerup E. et al. // Arthr. Rheum. — 2004. — №50. P.1909-1917.

206. Reilly C.A., Aust S.D. Peroxidase substrates stimulate the oxidation of hydralazine to metabolites which cause single-strand breaks in DNA / Reilly C.A., Aust S.D. // Chem. Res. Toxicol. 1997. - Vol.10, №.3. -P.328-334.

207. Requirement for generation of H202 for platelet-derived growth factor signal transduction / Sundaresan M., Yu Z.X., Ferrans V.J.et al. // Science. 1995. - Vol.270.- P.296-299.

208. Riley P.A. Free radicals in biology: oxidative stress and the effects of ionizing radiation / Riley P.A. // Int J Radiat Biol, 1994, - Vol.65. - P.27.

209. Risk factors for coronary heart disease in women with systemic lupus erythematosus / Bruce I.N. et al. // Arthritis and Rheumatism. 2003. - Vol. 48, №11.-P. 3159-3167.

210. Role of oxygen radicals generated by NADPH oxidase in apoptosis induced in human leukemia cells. / Hiraoka W., Vazquez N., Nieves-Neira W.et al. // J.Clin. Invest. 1998. - Vol. 102. - P. 1961 -1968.

211. Romero F.I., Khamashta M.A., Hughes G.R. Lipoprotein(a) oxidation and autoantibodies: a new path in atherothrombosis / Romero F.I., Khamashta M.A., Hughes G.R. // Lupus. 2000. - Vol.9, №3. - P.206-209.

212. Seibold J. R. Scleroderma. — In: Textbooc of Rheumatology, ed. By Kelley W.N., Harris E.D., Ruddy Sh., Siege S.B. Philadelphia. - 1993. - P. 1113-1143.

213. Serum pulmonary and activation-regulated chemocine/ CCL 18 levels in patients with systemic sclerosis: A sensitive indicator of active pulmonary fibrosis / Kodera M., Hasegava M., Komura K. et al. // Arthr. Rheum. 2005. - Vol.52.№9. - P. 2889-2896.

214. Serum xylosyltransferase: a new biochemical marker of the sclerotic process in systemic sclerosis /Gotting C., Sollberg S., Kuhn J. et al. // J. Invest. Dermatol. 1999. - Vol.112.№6. - P.919-924.

215. Sherer Y., Shoenfeld Y. Mechanisms of disease: atherosclerosis in autoimmune diseases / Sherer Y., Shoenfeld Y. // Nat. Clin. Pract. Rheumatol. -2006. Vol.2.№2. - P. 99-106.

216. Sies H., Ketterer B. Glutathione conjugation: mechanisms and biological significance / Sies H., Ketterer B. // L.: Acad, press. 1988. - P.480.

217. Smith E.A. Connective tissue metabolism including cytokines in scleroderma / Smith E.A. // Curr. Opin. Rheumatol. 1992. - Vol.4.№6. -P.869-877.

218. Soszynski M., Bartosz G. Effect of peroxynitrite on erythrocytes / Soszynski M., Bartosz G. // Biochim. Biophys Acta. 1996. - Vol.1291. -P.107-114.

219. Steen V.D. Autoantibodies in systemic sclerosis / Steen V.D. // Bull. Rheum. Dis. 1996. - №45. - P.6-8.

220. Steen V.D., Medsger T.A.Jr. Predictors of isolated pulmonare hypertension in patients with systemic sclerosis and limited cutaneus involvement / Steen V.D., Medsger T.A.Jr. // Arthr.Rheum. 2003. -№48. -P.516-522.

221. Successful treatment with leflunomide of arthritis in systemic sclerosis patients / Sebastiani M., Giuggioli D., Vesprini E. et al. // Rheumatology (Oxford).-2006. Vol.45.№9.-P. 1175-1176.

222. Systemic sclerosis and impotence: a clinicopathological correlation / Nehra A., Hall S.J., Basile G. et al. // J. Urol. 1995. - Vol. 153.№4. - P.l 1401146.

223. TGF beta a role in systemic sclerosis? / Cotton S.A., Herrick A.L., Jayson M.I. et al. //J. Pathol. - 1998. - Vol.184.№1. - P.4-6.

224. The advanced glycation end products, Nc -(carboxymethyl) lysine, is a product of lipid peroxidation and glycoxidation reactions / Fu M.X., Requena J.R., Jenkins A.J. et al. // J. Biol. Chem. 1996. - Vol.271. - P.9982-9986.

225. The genetic basis for the association of the 8.1 ancestral haplotype (Al, B8, DR3) with multiple immunopathological diseases / Price P., Witt C., Allcock R. et al. // Immunol. Rev. 1999. - Vol.167. - P.257-274.

226. The human plasma glutathione peroxidase-encoding gene: organization, sequence and localization to chromosome 5q32 / Yoshimura. S., H. Suemizu, Y. Taniguchi et al. // Gene. 1994. - Vol.195. - P. 293-297.

227. Thannickal V.J., Fanburg B.L. Reactive oxygen species in cell signaling / Thannickal V.J., Fanburg B.L. // Am. J. Physiol. 2000. - Vol.279. -P.1005-1028.

228. TNF-ainduces peroxynitrite-mediated depletion of lung endothelial glutathione via protein kinase С / Phelps D.T., Ferro T.J., Higgins P.J. et al.// Am J. Physiol. 1995. - Vol.269. - P. 551-559.

229. Toyokuni S. Reactive oxygen species induced molecukar damage and its application in pathology / Toyokuni S. // Pathology Int, - 1999, -Vol.49, № 2, — P.91-102.

230. Tsokos G.C., Liossis S.N. Lymphocytes, cytokines, inflammation, and immune trafficking / Tsokos G.C., Liossis S.N. // Curr. Opin. Rheumatol. -1998.- Vol. 10.№5.-P.417-425.

231. Urowitz M., Gladman D., Bruce I. Atherosclerosis and Systemic Lupus Erythematosus / Urowitz M., Gladman D., Bruce I. // Curr. Rheumatol. Rep. 2000. - Vol.2, № 1.-P. 19-23.

232. Wendel A. Enzymathic basis of detoxication / Wendel A. // Ed. Jakoby W. B. N. Y.: Acad, press. 1980. - Vol.1 -P.333.

233. White B. Immunopathogenesis of systemic sclerosis / White B. // Rheum. Dis. Clin. North. Am. 1996. - №22. - P.695-708.

234. Wiseman H., Halliwell B. Damage to DNA by reactive oxygen and nitrogen species: role in inflammatory disease and progression to cancer / Wiseman H., Halliwell B. //Biochem. J. 1996. - Vol.313. - P. 17-29.

235. Woods J.R Jr., Plessinger M.A., Fantel A. An introduction to reactive oxygen species and their possible roles in substance abuse / Woods J.R Jr., Plessinger M.A., Fantel A. // Ob. Gyn. Clin., 1998. - Vol.25, №1. -P.219-236.

236. Yamamoto Т., Eckes В., Krieg T. Bleomycin increases steady-state levels of type I collagen, fibronectin and decorin mRNAs in human skin fibroblasts / Yamamoto Т., Eckes В., Krieg T. // Arch. Dermatol. Res. 2000. -Vol.292. №11.-P.556-561.

237. О ВНЕДРЕНИИ МЕТОДА ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ В1. КЛИНИЧЕСКУЮ ПРАКТИКУ

238. Название метода: "Определение антител к глутатионпероксидазеиммуноферментным методом с помощью магнитосорбентов в сыворотке крови больных системной склеродермией"

239. Исполнители: О.В.Москвитина, И.П. Гонтарь, Л.И. Кочнева

240. Дата внедрения: 16 апреля 2008 года1. Место внедрения:

241. Муниципальное учреждение здравоохранения городская клиническая больница скорой медицинской помощи №25 г.Волгограда

242. Организация, осуществляющая внедрение:

243. ГУ НИИ Клинической и экспериментальной ревматологии РАМН, объединенный с кафедрой госпитальной терапии ВолГМУl м к аврач МУЗ ГКБ1. V- \ * JTi1. Jg r^V y41. Ж'5s-Ьfop ГУ НИИ КиЭР ик РАМН1. А.И. Егин1. Б. Зборовский1. АКТf