Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Иммунобиохимические маркёры системного воспалительного ответа при гестозе беременных

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ НОВОСИБИРСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ МЕДИЦИНСКАЯ АКАДЕМИЯ

• На правах рукописи

Г

I

Малышенко Анна Олеговна

ИММУНОБИОХИМИЧЕСКИЕ МАРКЁРЫ СИСТЕМНОГО ВОСПАЛИТЕЛЬНОГО ОТВЕТА ПРИ ГЕСТОЗЕ БЕРЕМЕННЫХ

14.00.16 .-патологическая физиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание учёной степени кандидата медицинских наук

НОВОСИБИРСК-2005

Работа выполнена в Новосибирской государственной медицинской академии МЗ РФ и в научном центре клинической и экспериментальной медицины СО РАМН

Научный руководитель:

Доктор медицинских наук, Старкова Оксана Валентиновна

профессор

Официальные оппоненты:

Доктор медицинских наук, Начаров Юрий Владимирович

профессор

Кандидат медицинских наук, Хоптян Дмитрий Анатольевич

Ведущая организация: НИИ клинической и экспериментальной лимфологии СО РАМН

Защита состоится «_» .-_ 2005 года в_ часов на заседании диссертационного совета Д 208. 062.04 при Новосибирской государственной медицинской академии МЗ РФ (630091, г. Новосибирск, Красный проспект, 52)

С диссертацией можно ознакомится в библиотеке Новосибирской государственной медицинской академии МЗ РФ

Автореферат диссертации разослан «_»_ 2005 года

Учёный секретарь

диссертационного совета

доктор медицинских наук, профессор

Зубахин А. А

44446

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Атуальность темы. Гестозы беременных остаются одной из актуальнейших проблем акушерства, во многом определяя структуру материнской и перинатальной заболеваемости и смертности (Серов В.Н. и др., 1997,2002; Ми-лованов А.П., 1999; Saftlas A.F. et al., 1990).

Согласно статистическим данным частота беременностей и родов, осложненных поздним гестозом, в общей популяции беременных женщин варьирует от 10% до 15% (Douglas К.А., Redman C.W.G., 1994). В структуре материнской смертности в развитых странах доля поздних гестозов составляет 12%, а в развивающихся - 30% (Irgens H.U. et al., 2001). В России эти показатели достигают 20% и занимают второе место после акушерских кровотечений (Репина М.А., 2000; Гранатович H.H., 2002). Частота гестоза в городе Новосибирске -38,6% (Пасман Н.М., Черных Е.Р., Бурухина А.Н., Поздняков И.И 1998).

В последние годы удалось достичь определенных успехов в вопросах этиолатогенеза, диагностики и лечения гестозов беременных, но вместе с тем, регистрируется устойчивая негативная тенденция к увеличению числа их атипического течения, послеродовых кровотечений, перинатальной заболеваемости, смертности и инвалидизации новорожденных. В связи с чем изучение этиопатогенеза гестоза, и в настоящее время представляет собой актуальную проблему. При этом акцент должен ставиться на этапе прогнозирования и предупреждения развития гестоза с выявлением закономерностей его пусковых механизмов.

Считается, что гестоз - это клиническое проявление неспособности адаптационных механизмов материнского организма адекватно обеспечивать потребности развивающегося плода. Данная неспособность отражается в различной степени выраженности перфузионно-дифузионной недостаточности в морфо-функциональной системе «мать-плацента-плод». Этиологически это патологическое состояние в первую очередь определяется иммунологическими и аутоиммунными нарушениями. В последнее время гестоз рассматривается с позиции формирования системного воспалительного ответа.

Однако участие иммунной системы и воспаления в формировании патологического процесса при гестозе в разные периоды болезни остается дискуссионным.

В последнее время появились данные, содержащие сведения об универсальности пускового механизма гестоза (Кништ Д.Н. и др., 1999; Медвединский И.Д. и др., 2002; Кабанова Н.В., Полякова О.В., 2002; Löpez-Jaramillo Р. et al.,

РОС НАЦИОНАЛЬНАЯ БИБЛИОТЕКА Петербург

2001), в основе которого ведущая роль принадлежит синдрому системного воспалительного ответа (SIRS), в развитии которого выделяют три стадии (Лей-дерман И.Н. и др., 1997; Ackerman М. et al., 1994). В первой стадии в ответ на повреждающий фактор (иммунный или неиммунный агент) отмечается локальная продукция активированными клетками цитокинов. Для второй стадии характерна активизация цитокинями макрофагов, тромбоцитов, увеличение продукции гормона роста. При этом развивается острофазовая реакция, которая контролируется противовоспалительными медиаторами и их эндогенными антагонистами. В случае недостаточной функции регулирующих гомеостаз организма систем повреждающее действие цитокинов и других медиаторов прогрессирует и вызывает нарушение проницаемости и функции капилляров эндотелия, формирование отдаленных очагов системного воспаления и развитие органной дисфункции, что характерно для третьей стадии системного воспалительного ответа.

На современном этапе не существует идеального прогнозирующего теста системного воспалительного ответа отвечающего всем необходимым критериям.

В связи с чем, представляется возможным разработать новые подходы к комплексной оценке тяжести системного воспалительного ответа, как одного из ведущих патогенетических механизмов гестоза беременных. Это позволит в свою очередь проводить доклиническую диагностику у женщин группы риска по развитию гестоза и назначения профилактических, лечебных мероприятий, которые будут способствовать сохранению репродуктивного здоровья и повышать эффективность профилактики и лечения патологических состояний при беременности.

С этих позиций планируется и обосновывается выполнение настоящего диссертационного исследования.

Цель исследования: определить особенности иммунобиохимических параметров, характеризующих активность системного воспалительного ответа при гестозе беременных.

Задачи исследования

1. Изучить содержание уровня интерлейкина-ip, интерлейкина-4, интерферона- у и белка острой фазы воспаления лактоферрина в сыворотке крови беременных женщин с нормальным течением гестации и гестозом.

2. Проанализировать выраженность деструктивных процессов в организме беременных при гестозе по уровню аутоантител к нативной и денатурированной ДНК в сыворотке крови.

3. Провести оценку функционального состояния гуморального звена иммунной системы у беременных с гестозом путём определения содержания циркулирующих иммунных комплексов в сыворотке крови.

4. Провести сравнительный анализ параметров, характеризующих активность системного воспалительного ответа в зависимости от степени тяжести клинических проявлений гатта беременных.

Научная новизна исследования

Впервые, в результате иммунобиохимического обследования у пациенток с гестозом обнаружены достоверно высокие уровни ЦИК, аутоантител к на-тивной и денатурированной ДНК, провоспалительных цитокинов (ИЛ-1р, ИФН-у) и лактоферрина в крови по сравнению с нормой.

Наличие прямой корреляционной взаимосвязи между уровнями провоспалительных цитокинов и аутоантител к нативной и денатурированной ДНК отражает участие цитокинов в процессе ах деструкции и аутоиммунных нарушениях при гестозе.

Установлено, что с нарастанием степени тяжести патологического процесса наблюдается достоверное увеличение ЦИК, аутоантител к нативной и денатурированной ДНК и провоспалительных цитокинов (ИЛ-1р, ИФН-у) в сыворотке крови беременных женщин с гестозом.

Формирование при гестозе беременных дисбаланса цитокинов со смещением ТЬ - пути в сторону провоспалительных интерлейкинов (ИЛ-1р) является одним из патогенетических звеньев развития системного воспалительного ответа.

Практическая значимость исследования

Полученные данные расширили представления о патогенетически значимом иммунобиохимическом комплексе при гестозе, включающего провоспа-лительные цитокины ИЛ-1р; ИФН-у и белок острой фазы воспаления лактофер-рин; аутоантитела к антигенам нативной и денатурированной ДНК, свидетельствующие о выраженности деструктивных процессов; ИЛ-4 — показателя развития гуморального иммунного ответа и ЦИК, которые дают основание предполагать формирование при гестозе беременных клеточно-гуморального иммунного ответа, аналогичному синдрому системного воспалительного ответа.

Смещение баланса цитокинов ИЛ-1Р / ИЛ-4 в направлении ТЬ-2 регуляции при легкой степени тяжести гестоза может являться проявлением компенсаторных возможностей организма беременных женщин.

Результаты иммунобиохимических исследований, полученные при обследовании пациенток могут бьггь использованы в качестве диагностических критериев системного воспалительго ответа при гестозе беременных.

Положения выносимые на защиту

1. По мере развития гестоза происходит усиление процессов клеточной деструкции, лежащих в основе развития системного воспалительного ответа у беременных с гестозом.

2. Высокие концентрации в сыворотке крови провоспалительных цито-кинов, аутоантител к нативной и денатурированной ДНК, циркулирующих иммунных комплексов и лактоферрина являются критериями развития системного воспалительного ответа при гестозе.

3. Формирование дисбаланса цитокинов в сторону увеличения уровня провоспалительных цитокинов и его усиление по мере развития гестоза свидетельствуют о прогрессировании системного воспалительного ответа.

Апробация материалов диссертации.

Основные положения диссертации доложены на межлабораторном семинаре лаборатории иммунологии НЦ клинической и экспериментальной медицины СО РАМН и кафедре патофизиологии, проблемной комиссии «Функциональные основы гомеостаза» НГМА МЗ РФ.

Публикации.

По материалам диссертационного исследования опубликовано 5 печатных работ.

Результаты внедрения в практику.

Теоретические и практические аспекты, разрабатываемые в диссертационном исследовании, внедрены в научную, педагогическую и практическую деятельность кафедр патологической физиологии и акушерства и гинекологии Новосибирской государственной медицинской академии МЗ РФ, в центре планирования семьи и репродукции им. Гумилевского, отделение патологии беременности и женской консультации №1 Центрального района города Новосибирска.

Объём и структура диссертации.

Работа изложена на 117 страницах печатного текста, состоит из введения, обзора литературы, главы «материалы и методы исследования», глав результатов собственных исследований, обсуждения, выводов, практических рекомендаций. Список использованной литературы состоит из 233 источников, из

них 110 отечественных и 123 зарубежных. Работа иллюстрирована 17 таблицами, 6 диаграммами, 3 схемами. Весь материал получен, обработан и проанализирован лично автором.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Для выполнения цели и задач настоящего исследования было обследовано 110 женщин в сроке беременности от 24 до 36 недель, из них 22 беременные с неосложненным течением гесгации (контрольная группа) и 88 беременных с гестозом различной степени тяжести (основная группа).

По сравнению с контрольной группой у беременных основной группы значительно чаще был отягощен соматический и акушерско-гинекологический анамнез.

Среди сопутствующих заболеваний преобладали: хронический тонзиллит у 20 (22,7%) беременных с гестозом, частые ОРВИ - у 23 (26,1%), ожирение - у 16 (18,5%), хронический пиелонефрит - у 15 (16,7%), вегето-сосудистой дис-тонией - у 6 (6,8%). В контрольной группе зарегистрированы единичные случаи подобных заболеваний.

Степень тяжести гестоза в основной группе оценивали по бальной шкале Соиске в модификации Г.М. Савельевой и др. (1989).

Из 88 беременных - у 49 (55,7%) выявлена легкая степень гестоза, у 24 (27,3%) - средняя степень тяжести и у 15 (17,0%) - тяжелая степень тяжести гестоза.

По возрасту, данным анамнеза, характеру перенесенных заболеваний, паритету беременности основная и контрольная группы были сопоставимы.

У всех обследованных пациенток до начала лечебных мероприятий дополнительно оценивали активность иммунных реакций в организме по уровню цитокинов (ИФН-у, ИЛ-1р, ИЛ-4), циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК), лактоферрину и аутоантител к нативной и денатурированной ДНК (ААТ к н-ДНК и ААТ к д-ДНК) в сыворотке крови.

Лабораторные методы исследования.

Забор крови.

Кровь у всех обследуемых лиц забирали натощак в утренние часы в положении сидя из локтевой вены в вакуумные пробирки в количестве 10 мл. После 1-3 часовой экспозиции при 20°С кровь охлаждали до 4°С и подвергали центрифугированию при скорости 1500 оборотов/мин в течение 15 минут для получения сыворотки. Сыворотка замораживалась и хранилась при - 60°.

Специальные методы исследования.

Определение концентрации ИФН-у в сыворотке крови.

Уровень ИФН-у в сыворотке крови определялся с помощью тест-системы "Интерферон-ИФА-БЕСТ" производства в ЗАО "Вектор-Бест" (п. Кольцово, Новосибирская область). Порядок приготовления проб, реагентов и схема опыта выполнялись строго по инструкции изготовителя тест-системы "Интерферон-ИФА-БЕСТ". Регистрацию результатов проводили спектрофотометр ически на вертикальном фотометре Multiskan (МСС-340) при длине волны 450 нм.

Определение уровней ИЛ-IB, ИЛ-4 в сыворотке крови.

В настоящем исследовании уровень ИЛ-1р в сыворотке крови определялся с помощью тест-системы РгоСоп ИЛ-ip, ИЛ-4 (ООО "Протеиновый контур", Санкт-Петербург), использовался твердофазный иммуноферментный метод. Порядок приготовления проб, реагентов и схема опыта выполнялись строго по инструкции изготовителя тест-системы РгоСоп ИЛ-1р, ИЛ-4. Регистрацию результатов проводили спектрофотометрически на вертикальном фотометре Multiskan (МСС-340) при длине волны 450 нм.

Определение циркулирующих иммунных комплексов в сыворотке

крови.

В настоящем исследовании определение циркулирующих иммунных комплексов проводили методом жидкостной преципитации 4% ПЭГ-600. Величину оптической плотности читали против контроля при длине волны 450 нм на вертикальном спектрофотометре Multiscan ММС-340. Количество циркулирующих иммунных комплексов выражали в условных единицах:

Определение аутоантител к нативной и денатурированной ДНК. Содержание аутоантител к нативной и денатурированной ядерной ДНК в сыворотке крови определялись с помощью наборов "ДНК-ТЕСТИ (ПМЦ "Сибмед-прибор", Россия). Порядок приготовления проб, реагентов и схема опыта выполнялись строго по инструкции изготовителя тест-системы "ДНК-ТЕСТ". Результаты иммуноферменгного анализа регистрировали на вертикальном фотометре Multiskan МСС-340 при длине волны 492 нм.

Определение лактоферрина в сыворотке крови.

Исследования мультифункционального железосвязывающего гликопро-теина выполняются на тест- системе Лактоферрин-стрип D-4106 производства ЗАО "Вектор-БЕСТ" (Новосибирск, Россия) по инструкции производителя.

Статистическая обработка. Полученные результаты обработаны статистически с помощью пакета стандартных программ Statistica for Windows

(5.5) и представлены в виде таблиц и графиков. Для расчетов использовали методы вариационной статистики (Гланц С., 1998): вычислялись среднее арифметическое (М) и ошибка среднего арифметического значения (ш), значения коэффициентов корреляции. Оценка значимости изменений средних арифметических значений и коэффициентов корреляции сравниваемых групп определялась с помощью (-критерия (Стьюдента). Достоверными считались результаты при уровне значимости р< 0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

В результате проведенного обследования указанных выше групп беременных были получены данные, отражающие изменения концентрации определяемых цитокинов в сыворотке крови.

Так, в контрольной группе женщин «средняя» концентраций ИЛ-1(3 составила 77,16 ± 10,36 пг/мл, верхняя границы нормативных значений, определяемая путем прибавления сигмального отклонения к полученной «средней» нормативных значений для тестируемого показателя (М + с) равнялась 154,3 пг/мл.

В группе беременных с диагнозом гестоза «средняя» концентрация тестируемого интерлейкина была равна 252,7 пг/мл, значения определяемого в этой группе пациенток показателя ИЛ-1Р были достоверно выше (р<0,05) в 3,27 раза «средней» контрольной группы. «Средняя» содержания тестируемого интерлейкина в сыворотке крови пациенток основной группы была выше верхней границы нормативных значений, составляющей 154,3 пг/мл.

Индивидуальный анализ полученных данных позволил выявить следующие закономерности. В основной группе концентрация ИЛ-1|3, находящаяся в границах нормативных значений, была тестирована у 48 пациенток, что составило 54,5% случаев наблюдения; превышающая верхнюю границу нормы -40 пациенток (45,5%).

При определении концентраций ИЛ-4 в контрольной группе беременных «средняя» величина составила 56,75 пг/мл, верхняя граница нормативных значений была равна 98,7 пг/мл.

В основной группе «средняя» концентраций тестируемого интерлейкина была равна 157,5 пг/мл, значения определяемого показателя достоверно превышали (р<0,05) в 2,77 раза «среднюю» контрольной группы значений. «Средняя» содержания тестируемого интерлейкина в сыворотке крови па-

циенток основной группы была выше верхней границы нормативных значений, составляющей 97,3 пг/мл.

Индивидуальный анализ полученных данных позволил выявить, что в основной группе содержание ИЛ-4, находящееся в границах нормативных значений, было тестировано у 36 пациенток, что составило 40,9% случаев наблюдения; превышающее верхнюю границу нормы - 52 пациентки (59,1%).

Большой интерес для понимания патогенеза гестоза беременных и особенностей иммунной регуляции при нем представляет рассмотрение баланса интерлейкинов. Причем такую оценку целесообразно проводить с учетом возможной патогенетической значимости интерлейкинов, основываясь на их про-воспалительных и противовоспалительных свойствах (Ва1км11 Р., 2001).

Действительно, при расчете соотношения провоспалительных и проти-воспалительных интерлейкинов было установлено (Рис. 1), что коэффициенты соотношения [ИЛ-10] / [ИЛ-4] у пациенток основной группы значимо превышает в 1,2 раза (р<0,05) аналогичный показатель у женщин с нормальной беременностью (контрольная группа).

Контрольная группа Основная группа

Рис. 1. Величина коэффициентов соотношений [ИЛ-1р] / [ИЛ-4] у женщин с нормальным течением и гестозом.

При анализе концентраций ИФН-у в контрольной группе беременных «средняя» составила 47,3 пг/мл, верхняя границы нормативных значений для указанного цитокина составила 75,9 пг/мл.

В группе беременных с диагнозом гестоза «средняя» концентраций ИФН-у была равна 166,6 пг/мл, что достоверно превышало (р<0,05) в 3,52 раза аналогичные значения в контрольной группе. «Средняя» содержания ИФН-у в сыворотке крови пациенток основной группы была выше верхней границы нормативных значений, составляющей 75,9 пг/мл.

Индивидуальный анализ полученных данных показал, что в основной группе содержание ИФН-у, находящееся в границах нормативных значений, было тестировано у 33 пациенток (37,5%), а превышающие верхнюю границу нормы - 55 пациентки (62,5%).

Определение уровня циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) в сыворотке крови (Табл. 1) пациенток контрольной группы позволило зафиксировать «среднюю» их содержания, равную 81,2 усл. ед, верхняя граница (М + о) нормативных значений для ЦИК в контрольной группе равнялась 113,5 усл. ед.

При определении уровней содержания ЦИК у беременных с гестозом (Табл. 1) была получена «средняя», составляющая 124,7 усл. ед., полученное значение достоверно превышает (р < 0,05) в 1,53 раза «среднюю» контрольных показателей. Полученная «средняя» уровней тестируемого показателя, также превышает верхнюю границу нормативных значений, выведенную в контрольной группе.

Таблица 1

Содержание циркулирующих иммунных комплексов в сыворотке крови

у беременных с физиологическим течением и гестозом (М±ш)

ГРУППЫ п ЦИК (уел ед)

95% С1 М±ш

Контрольная 22 60,2— 100,1 81,2 ±4,61

Основная 88 115,0-134,4 124,7+4,89*

Примечание: р< 0,05 к контрольной группе

Высокие значения ЦИК в основной группе свидетельствуют о резко выраженном повышении уровня образования комплексов антиген-антитело при изучаемом патологическом процессе.

Индивидуальный анализ полученных данных позволил выявить, что в основной группе содержание ЦИК в сыворотке крови, находящихся в границах нормативных значений, было определено у 25 пациенток, что составило 28,4% случаев наблюдения, а превышающие верхнюю границу нормы - 63 пациентки (71,6%).

Представляет несомненный интерес вьивление выраженности деструктивных процессов у беременных с гесгозами.

Одним из универсальных маркеров деструкции тканей организма является появление в циркуляции повышенного содержания аутоантигел к ядерным

ДНК, связанным с разрушением клеточных мембран и освобождением ядерного вещества (Кудрявцева И.В. и др., 1999; Якорева И.Г., 2003).

При определении уровней аутоантител к нативной ДНК (ААТ к нДНК) в сыворотке крови (Табл. 2) у беременных контрольной группы была зафиксирована «средняя» коэффициента их содержания, равная 2,15 усл. ед, верхняя граница (М + о) нормативных значений для тестируемого показателя равнялась 2,92 усл. ед.

При определении уровней содержания изучаемого показателя у беременных с гестозом (Табл. 2) была получена «средняя» коэффициента их содержания, составляющая 4,55 усл. ед., полученное значение достоверно (р < 0,05) превышает в 2,12 раза «среднюю» нормативных показателей. «Средняя» уровней аутоантител к нативной ДНК в основной группе обследованных, также превышают верхнюю границу нормативных значений, выведенную в контрольной группе.

Таблица 2

Уровень аутоантител к нативной ДНК в сыворотке крови у беременных

с физиологическим течением и беременных с гестозом (М±ш)

ГРУППЫ п ААТкнДНК

95% С1 М±т

Контрольная 22 1,84-2,31 2,15+0,11

Основная 88 4,08 - 5,02 4,55 ±0,23*

Примечание: р< 0,05 к контрольной группе

Индивидуальный анализ полученных данных позволил установить, что в основной группе коэффициент уровней аутоантител к нативной ДНК находившийся в границах нормативных значений был тестирован у 17 (19,3%) беременных с гестозом, а превышение верхней границы нормы было зафиксировано у 71 (80,7%) пациентки данной группы.

При анализе коэффициентов уровней аутоантител к денатурированной ДНК (ААТ к дДНК) также было обнаружено, что у беременных контрольной группы (Табл. 3) была зафиксирована «средняя» величина их содержания, равная 131 усл. ед, верхняя граница (М + о) нормативных значений для тестируемого показателя равнялась 2,01 усл. ед.

При определении уровней содержания изучаемого показателя у беременных с гестозом (Табл. 3) была получена «средняя» коэффициента их содер-

жания, составляющая 3,15 усл. ед., полученное значение достоверно (р < 0,05) превышает в 2,41 раза «среднюю» нормативных показателей.

Таблица 3

Уровень аутоантител к денатурированной ДНК в сыворотке крови у беремен-

ных с физиологическим течением и беременных с гестозом (М±ш)

ГРУППЫ п ААТкдДНК

95% С1 М±т

Контрольная 22 0,66-1,97 1,31 ±0,01

Основная 88 2,79-3,50 3,15±0,18*

Примечание: р< 0,05 к контрольной группе

Индивидуальный анализ полученных данных позволил установить, что в основной группе коэффициент уровней аутоантител к нативной ДНК находившийся в границах нормативных значений был тестирован у И (12,5%) беременных с гестозом, а превышение верхней границы нормы было зафиксировано у 77 (87,5%) пациенток данной группы.

При определении уровней лактоферрина в сыворотке крови у беременных контрольной группы была зафиксирована «средняя» его содержания, равная 1622,1 нг/мл, верхняя граница (М + <т) нормативных значений для тестируемого показателя равнялась 2192,3 нг/мл.

При определении уровней содержания изучаемого показателя у беременных с гестозом была получена «средняя» его содержания, составляющая 2171,0 нг/мл, полученное значение достоверно (р < 0,05) превышает в 1,34 раза «среднюю» нормативных показателей.

Индивидуальный анализ полученных данных позволил установить, что в основной группе уровни лактоферрина находившиеся в границах нормативных значений были тестированы у 50 (56,8%) беременных с гестозом, а превышение верхней границы нормы было зафиксировано у 38 (43,2%) пациенток данной группы.

При проведении корреляционного анализа для выяснения силы, направленности и достоверности взаимосвязей между изучаемыми показателями у беременных женщин с гестозом была обнаружена обратная коррелятивная взаимосвязь между концентрацией ААТ к нДНК и уровнем ЦИК (г = - 0,35, р < 0,05), содержанием ААТ к дДНК и уровнем ЦИК (г = - 0,27, р < 0,05), которая отражает взаимозависимость и баланс между наработкой антител и их утилизацией посредством связывания в циркулирующий иммунный комплекс.

Кроме этого у пациентов основной группы были выявлены прямая коррелятивная взаимосвязь между концентрацией ИЛ-1 (3 и уровнями ААТ к нДНК (г = +0,30, р < 0,05), ААТ к дДНК (г = +0,25, р < 0,05), которая свидетельствует, что нарастающие в организме процессы клеточной деструкции с выходом ядерных ДНК сопровождаются усиленным синтезом провоспалительных цито-кинов. Уровень ИЛ-1Р, в свою очередь, имеет отрицательную взаимосвязь с содержанием ЦИК (г = -0,32, р < 0,05), что может являться, по-видимому, отраже- ) нием активности иммунопатологических реакций при гестозе беременности.

Индивидуальный анализ полученных данных, позволивший зафиксировать достоверное превышение верхней границы нормативных значений у об- ' следованных беременных с гестозом по уровням ЦИК, аутоантител к натив-ной и денатурированной ДНК, а также данные корреляционного анализа подтверждают сделанное заключение.

При оценке показателей, отражающих баланс цитокинов, играющих значимую роль в патогентических механизмах гестоза, были выявлены следующие закономерности. У беременных с гестозом тестируется достоверное повышение концентраций ТЫ цитокинов (ИЛ-1р, ИФН-у) на фоне тенденции к снижению синтеза ТЬ2 цитокинов (ИЛ-4). В группе беременных с диагнозом гестоз тестируется повышение соотношения провоспалитель-ные/противовоспалительные интерлейкины.

Полученные данные свидетельствуют, что при гестозе беременных в отличие от физиологической беременности, определяется выраженный дисбаланс цитокинов, значимость которого в механизмах системного воспалительного ответа при гестозе не вызывает сомнений.

Однако остается открытым вопрос о динамике изучаемых иммунобио-химических показателей в зависимости от степени тяжести гестоза.

Поэтому следующий раздел работы был посвящен рассмотрению этого вопроса.

Сравнительный анализ иммуиобиохимических показателей у беременных женщин с разной степенью тяжести гестоза.

Уровень ЦИК достаточно вариабелен внутри отдельных групп </

(табл. 4), но при этом как у беременных с тяжелой степенью гестоза концен- '

трация ЦИК выше данных группы I (легкая степень тяжести). При этом полученные значения концентрации во всех сравниваемых группах статистически щ значимо (р< 0,05) отличаются от «нормативных» значений контрольной группы (81,2 ± 4,61 уел ед). Так, в группе I уровень ЦИК был в 1,25 раза больше значений группы контроля, а в группах II и III - более чем в 1,5 и 1,67 раза соответственно.

Таблица 4

Концентрация ЦИК в сыворотке крови у беременных с разной степенью тяжести гестоза (М±т)

ГРУППЫ (по степени тяжести) п ЦИК (уел ед)

95% CI М±ш

(I) легкая 49 78,9-123,3 101,1± 6,24

(II) средняя 24 105,5-134,7 120,1 ± 7,04

(III) тяжелая 15 120,5 -148,9 134,7 ±7,06*

Примечание: р< 0,05 по сравнению с лёгкой степенью тяжести

Межгрупповое сравнение показало наличие статистически значимых (р< 0,05) различий в содержании ЦИК между группами с легкой и тяжелой степенью гестоза.

Таким образом, можно отметить, что во всех исследуемых группах беременных с гестозом разной степени тяжести концентрация ЦИК была значительно выше значений группы контроля, в большей степени это касалось больных с тяжелой формой гестоза, у которых уровень ЦИК в сыворотке крови был значимо (р<0,05) выше, чем при легком течение гестоза.

Одним из универсальных маркеров развития деструктивных и аутоиммунных процессов в организме является повышение уровней ауто антител к антигенам нативной и денатурированной ДНК (ААТ к нДНК и дДНК). При гесто-зе такого рода исследований не проводилось.

Полученные результаты о величине аутоантител к антигенам нативной ДНК в сыворотке крови у беременных с разной степенью тяжести гестоза свидетельствуют (Табл. 5), что с нарастанием выраженности проявлений гестоза наблюдается активизация деструктивных процессов.

Таблица 5

Уровень аутоантител к нативной ДНК в сыворотке крови у беременных с разной степенью тяжести гестоза (М±ш)

ГРУППЫ (по степени тяжести) п ААТкнДНК

95% CI М±ш

(I) легкая 49 3,42-4,29 3,86 ± 0,22

(II) средняя 24 4,42-6,90 5,66 ± 0,39*

(III) тяжелая 15 3,91 - 6,57 5,23 ±0,61

Примечание: р< 0,05 по сравнению с лёгкой степенью тяжести

При этом полученные значения во всех сравниваемых группах статистически значимо (р< 0,05) отличаются от «нормы» (2,15 ± 0,11). Так, в группе I уровень аутоантител к антигенам нативной ДНК в сыворотке крови был в 1,79 раза больше значений группы контроля, а в группах II и III - более чем в 2,63 и 2,43 раза соответственно.

Межгрупповое сравнение показало наличие статистически значимых (р< 0,05) различий в содержании аутоантител к антигенам нативной ДНК меж- '

ду группами. Так, например, уровень аутоантител к антигенам нативной ДНК в сыворотке крови у беременных средней степенью тяжести гестоза достоверно i

(р< 0,05) выше данных группы беременных с легкой степенью тяжести.

При анализе величин аутоантител к антигенам денатурированной ДНК в сыворотке крови у беременных с разной степенью тяжести гестоза (Табл. 6) также было обнаружено, что с утяжелением патологического состояния отмечается тенденция к их нарастанию. О чем свидетельствует наличие достоверных различий (р< 0,05) между показателями I и III групп беременных с гесто-зом.

Таблица 6

Уровень аутоантител к денатурированной ДНК в сыворотке крови

у беременных с разной степенью тяжести гестоза (М±ш)

ГРУППЫ (по степени тяжести) п ААТкдДНК

95% CI М±ш

(I) легкая 49 2,44-3,08 2,76 ±0,15

(II) средняя 24 2,63-4,58 3,61 ± 0,36

(III) тяжелая 15 2,64-4,89 3,76 ±0,42*

Примечание: р< 0,05 по сравнению с легкой степенью тяжести

Полученные значения величин аутоантител к антигенам денатурированной ДНК в сыворотке крови во всех сравниваемых группах статистически значимо (р< 0,05) отличались от «нормативных» показателей контрольной группы (1,31 ± 0,01). Так, в группе I уровень аутоантител к антигенам денатурированной ДНК в сыворотке крови был в 2,11 раза больше значений группы контроля, а в группах II и III - более чем в 2,76 и 2,87 раза соответственно.

Аналогичная закономерность была обнаружена и при анализе содержания лактоферрина в сыворотке крови у беременных с разной степенью тяжести гестоза.

Полученные величины содержания лактоферрина в сыворотке крови в сравниваемых группах статистически значимо (р< 0,05) отличались от «нормативных» показателей контрольной группы (1622,1 ± 122,01 нг/мл). Так, в группе II (средняя степень) содержание лактоферрина в сыворотке крови было в 1,60 раза, а в группе III (тяжелая степень) в 1,44 раза выше значений контроля.

Межгрупповое сравнение не выявило наличие статистически значимых (р< 0,05) различий в содержании лактоферрина в сыворотке крови у беременных женщин с разной степенью тяжести гестоза.

Учитывая огромную роль цитокинов в кооперации функции иммунной системы как в норме, так и в патологии, а так же имеющиеся сведения относительно практического применения определения концентрации цитокинов в диагностическом и прогностическом плане, было проведено изучение концентрации ИЛ-lß, ИЛ-4 и у-ИНФ в зависимости от степени тяжести гестоза беременных.

Таблица 7

Содержание интерлейкина-lß в сыворотке крови у беременных с разной степенью тяжести гестоза (М±т)

Группы (по степени тяжести) п ИЛ-lß (пг/мл)

95% CI М ± m

(I) легкая 49 49,7-69,7 59,7 ± 5,03

(II) средняя 24 159,1-235,6 197,4 ± 18,44**

(III) тяжелая 15 846,6-1000,5 923,6 ± 35,62**

Примечание: р< 0,001 по сревнению с лёгкой степенью тяжести

При исследовании уровней цитокинов было обнаружено, с нарастанием выраженности клинических проявлений гестоза беременных наблюдается достоверное увеличение в сыворотке крови содержания ИЛ-1Р (Табл. 7). При этом полученные значения во II и III группах статистически значимо (р< 0,001) отличаются огг «нормы» (77,2 ± 10,36 пг/мл). Так, в группе II уровень ИЛ-1(5 в сыворотке крови был в 2,56 раза больше значений группы контроля, а в группе III - более чем в 11,9 раза соответственно.

Межгрупповое сравнение показало наличие статистически значимых (р< 0,05) различий в содержании ИЛ-1(5 между группами. Так, уровень ИЛ-1р в сыворотке крови у беременных тяжелой степенью гестоза был достоверно (р< 0,001) выше данных группы беременных с легкой и средней степенью тяжести.

Аналогичная закономерность отмечалась и при сравнении I и II групп беременных с гестозом (р< 0,001).

При тестировании ИЛ-4 - цитокина, обладающего противовоспалительными свойствами и отвечающего за синтез антител, развитие гуморального иммунного ответа, аутоиммунных реакций (Кашкин К.П., 1998) в сыворотке крови у обследованных пациенток было установлено (Табл. 8), что его величина с ухудшением состояния беременных женщин практически не меняется. Хотя при сравнении с «нормативными» показателями (56,7 ± 5,45 пг/мл) они достоверно (р< 0,01) превышают их. Так, в группе I уровень ИЛ-4 был в ЗД8 раза больше значений группы контроля, а в группах И и III - более чем в 3,18 и 3,86 раза соответственно.

Таблица 8

Содержание интерлейкина-4 в сыворотке крови у беременных с разной степенью тяжести гестоза (М±т)

ГРУППЫ (по степени тяжести) п ИЛ-4 (пг/мл)

95% CI М±ш

(I) легкая 49 137,6-234,0 185,8 ±23,97

(II) средняя 24 87,6-273,9 180,7 ±44,77

(III) тяжелая 15 86,1-352,4 219,2 ± 60,50

Примечание: р< 0,05 по сревнению с лёгкой степенью тяжести

При расчете соотношения ИЛ-1Р/ИЛ-4 было обнаружено (Рис. 2), что при тяжелой степени гестоза отмечается увеличение этого соотношения в 3 раза по сравнению с контролем. Но в тоже время у пациенток с легкой степенью гестоза отмечается снижение в 14 раз величины соотношения ИЛ-1р/ИЛ-4 по сравнению с пациентками тяжелой степени, что по нашему мнению является проявлением компенсаторно-защитных механизмов организма на начальных этапах развития осложнения гестации.

с; 3 • s

I2

Контроль Легкая Средняя Тяжелая

Рис. 2. Величины соотношения ИЛ-1р/ИЛ-4 у беременных с разной степенью тяжести гестоза (М ± ш)

Полученные данные о концентрации интерферона-у (ИФН-у) в сыворотке крови у беременных с разной степенью тяжести гестоза представлены в (табл. 9).

Таблица 9

Уровень интерферона^ в сыворотке крови у беременных с разной степенью тяжести гестоза (М±ш)

ГРУППЫ (по степени тяжести) п ИФН-у (пг/мл)

95% CI М±т

(I) легкая 49 69,1 -136,4 102,8 ±16,22

(II) средняя 24 67,3-211,8 139,6133,46

(III) тяжелая 15 146,7-266,3 206,5 ± 29,74*

Примечание: р< 0,05 по сравнению с лёгкой степенью тяжести

Установлено, что уровень ИФН-у достаточно вариабелен внутри отдельных групп, но при этом как у беременных с тяжелой, так и средней степенью тяжести гестоза концентрация ИФН-у в сыворотке крови выше данных группы I (легкая степень тяжести). При этом полученные значения концентрации во всех сравниваемых группах статистически значимо (р< 0,05) отличаются от «нормативных» значений контрольной группы (47,3 ± 4,26 пг/мл). Так, в группе I уровень ИФН-у был в 2,17 раза больше значений группы контроля, а в группах II и III - более чем в 2,95 и 4,36 раза соответственно.

Межгрупповое сравнение показало наличие статистически значимых (р< 0,05) различий в содержании ИФН-у между I и III группами беременных с гестозом.

При проведении корреляционного анализа для выяснения силы, направленности и достоверности взаимосвязей между изучаемыми показателями у беременных в зависимости от степени тяжести патологического процесса было обнаружено, что у беременных с гестозом легкой степени присутствует прямая коррелятивная связь между уровнем ААТ к нДНК и ААТ к дДНК (г = + 0,78, р < 0,05), содержанием лактоферрина и у-ИНФ (г = + 0,38, р < 0,05), уровнем ИФН-у и ИЛ-10 (г = + 0,48, р < 0,05), уровнем ЦИК и ИЛ-4 (г = + 0,56, р < 0,05) и обратная взаимосвязь между содержанием ИЛ-1Р и ИЛ-4 (г = - 0,47, р < 0,05), ААТ к нДНК и уровнем ЦИК (г = - 0,38, р < 0,05).

У беременных с гестозом средней степени были выявлены прямые коррелятивные связи между ААТ к нДНК и ААТ к дДНК (г = + 0,90, р < 0,05), ААТ к нДНК и ИЛ-1Р (г = + 0,34, р < 0,05), ЦИК и ИФН-у (г = + 0,40, р < 0,05), ЦИК и ИЛ-4 (г = + 0,48, р < 0,05), ИЛ-1Р и лакгоферрином (г = + 0,29) и обратные взаимосвязи между уровнем ААТ к нДНК и ЦИК (г = - 0,28), ААТ к нДНК и ИФН-у (г = - 0,37, р< 0,05).

При тяжелом течении гестоза, также были обнаружены прямые коррелятивные взаимосвязи между ААТ к нДНК и ААТ к дДНК (г = + 0,85, р < 0,05) и отрицательная связь между ААТ к нДНК и уровнем ЦИК (г = - 0,23).

Причем последняя взаимосвязь, имеющая отрицательный характер во всех сравниваемых группах, по всей вероятности, отражает баланс между наработкой антител и их утилизацией посредством связывания в циркулирующий иммунный комплекс. Наличие положительной связи между уровнем ЦИК и ИЛ-4 отражает активацию при гестозе В-лимфоцитов и как следствие синтетических процессов гуморального иммунитета. В тоже время наличие положительной взаимосвязи между уровнем ИЛ-1Р и ААТ к нДНК, ИФН-у отражает участие провоспалительных цитокинов в механизмах деструкции и аутоиммунных нарушений при гестозе.

ВЫВОДЫ

1. Развитие гестоза сопровождается прогрессирующим увеличением концентрации в сыворотке крови провоспалительных цитокинов ИЛ-1р и ИФН-у, соотношения ИЛ-1Р/ИЛ-4 и лактоферрина, что свидетельствует об усилении провоспалительного потенциала и развития системного воспалительного ответа у беременных женщин с гестозом.

2. При развитии гестоза отмечается увеличение в сыворотке крови содержания аутоантител к нативной и денатурированной ДНК, обусловленное

активацией процессов клеточной деструкции, поддерживающих развитие системного воспалительного ответа.

3. У пациенток с гестозом отмечается увеличение концентрации в сыворотке крови циркулирующих иммунных комплексов, что свидетельствует об активации гуморального звена иммунной системы.

4 Усиление степени тяжести гестоза сопровождается прогрессирующим увеличением в сыворотке крови содержания провоспалительных цитоки-нов ИЛ-1р и ИФН-у, аутоанпггел к нативной и денатурированной ДНК, иммунных комплексов и лактоферрина, свидетельствующим об прогрессировании системного воспалительного ответа.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. При обследовании пациенток, которые находятся в группе риска по развитию гестоза ( в ранние сроки гестации) или его наличии наравне с оценкой клинической картины данного осложнения беременности целесообразно определение содержания ЦИК, аутоантител к нативной и денатурированной ДНК, у-ИНФ и лактоферрина в сыворотке крови.

2. Смещение баланса цитокинов в сторону противовоспалительного ИЛ-1р/ИЛ-4 при легком гестозе, является проявлением компенсаторно-защитных механизмов организма беременной женщины на начальных этапах развития осложнения гестации. При наличии их патологических уровней пациентки должны быть отнесены к группе высокого риска репродуктивных потерь, в силу несостоятельности механизмов адаптивной регуляции на действие патогенных факторов.

Список публикаций

1. Макаров, К.Ю., Малышенко, А.О., Тихонова, О.В., Малкова, В. В. Анализ нарушений репродуктивной функции у больных хроническим сальпин-гоофоритом // Актуальные вопросы современной медицины: Тезисы докладов тринадцатой научно-практической конференции врачей. - Новосибирск, 2003. -С.49-50.

2. Малышенко, А О., Тихонова, О. В. Иммунодиагностика беременных женщин с гестозом легкой и средней степени тяжести, имеющих на момент обследования генитальную инфекцию // Современные технологии в клинической

практике: Тезисы докладов сетевой научно-практической конференции, посвященной 110-летию Дорожной клинической больницы ст. Новосибирск Западно- Сибирской железной дороги. - Новосибирск, 2003. - С. 36.

3. Малышенко, А.О., Старкова, О.В. Гестоз с позиции системного воспалительного ответа // Ежегодный конкурс- конференция студентов и молодых учёных «Авиценна- 2004»: Тезисы докладов. - Новосибирск, 2004. - С. 6.

4. Малышенко, А.О., Старкова, О.В., Сафронов, И. Д. Состояние иммунных реакций в организме беременной при гестозе // Успехи современного естествознания: Тезисы докладов,- Москва, 2004.-№4. - С. 106-107. !

5. Малышенко, А.О., Старкова, О.В., Сафронов, И. Д. Маркёры деструктивных и системных воспалительных реакций при гестозе беременных // Тюменский медицинский журнал,- 2004,- №4. - С. 30-31.

6. Малышенко, А.О., Старкова, О.В., Сафронов, И. Д. Иммунобиохими-ческие маркёры системного воспалительного ответа при гестозе беременных// Клиническая и экспериментальная медицина.-2005. (в печати).

Список использованных сокращений.

ААТ - аутоантитело

ДНК - дезокеирибонуклеиновая кислота

нДНК - нативная ДНК

дДНК — денатурированная ДНК

ИЛ - интерлейкин

ИЛ-1Р - интерлейкин -1 бета

ИЛ-4 - интерлейкин - 4

у-ИНФ - гамма интерферон

ЦИК - циркулирующие иммунные комплексы

#

t

Соискатель Малышенко А.О

♦

Подписано в печать 21.03.05 г. Формат 60 х 84 /16 Усл. печ. л. 1,0. Тираж 100 экз. Заказ № 27п/05

Отпечатано в типографии издательства «Сибмедиздат» НГМА 630091, г. Новосибирск, Красный пр., 52 Тел./факс: (3832) 25-24-29. E-mail: sibmedizdal@yandex.ro

РНБ Русский фонд

2005-4

41446 г

2 2 ДПР2005 1 325