Автореферат и диссертация по медицине (14.00.14) на тему:Иммунный статус больных остеогенной саркомой и саркомой Юинга

-1 о

1 1 РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ МЕДИЦИНСКИХ НАУК ОНКОЛОГИЧЕСКИЙ НАУЧНЫЙ ЦЕНТР

На правах рукописи

МАЧАК ГЕННАДИЙ НИКОЛАЕВИЧ

ИММУННЫЙ СТАТУС БОЛЬНЫХ ОСТЕОГЕННОЙ САРКОМОЯ И САРКОМОЙ ЮИНГА

14. 00.14 - онкология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Москва - 1992 г.

у

'Я /,/

V/ / , Ч.

к

Работа выполнена в онкологическом научном'центре РАМН

Научные руководители: доктор медицинских наук, профессор Амираеланов А. Т. доктор медицинских наук, профессор Кадагидзе 3. Г.

Официальные оппонентки: доктор медицинских наук, профессор Барышников А. Ю. доктор медицинских наук Пашков 1й К.

Ведущая организация - Московский онкологический научно-исследовательский институт им. П. А. Герцена

Защита диссертации состоится ". (Я МО 1ц<\\992г. на заседании специализированного ученого совета/ ' / при (?Щ РАМН /Москва, 115478,Каширское шоссе,24/

С диссертацией можно ознакомится в библиотеке ОНЦ РАМН

О-

Автореферат разослан "./." 1992 г.

Ученый секретарь специализированного ученого совета доктор медицинских наук, профессор В. С. Турусов

■•')■' -____

■SI Ртпя ]

Актуальность темы. Остеогенную саркому и саркому Юинга от-зсят к наиболее агрессивно протекающим опухолевым заболеваем человека,что обусловлено,в основном,склонностью этих но-эобразований к ранней гематогенной диссеминации. Несмотря на эстигнутые в последние годы успехи в лечении этих заболева-1й,остаются малоизученными ряд аспектов,касающихся Ьиологи-;ских особенностей остеогенной саркомы и саркомы Кинга. Одним з направлений, исследование которого могкет оказать влияние на ззультаты лечения,является изучение иммунного статуса у дан-эй категории больных.

В последние годы в клиническую практику,активно внедрятся ряд новых методик для оценки иммунного статуса больных,в астности, изучение фенотипа лимфоцитов периферической крови с эмощьго моноклональных антител к их дифференцировочным анти-энам. (Барышников А. 1й ,1988, Филатов А. В. , 1989, W. Кпарр, 1989).

В то же время,информация о состоянии иммуннитета у боль-ах остеогенной саркомой и саркомой Юинга была получена,глав-ьол образом, с помощью недостаточно информативных методов исс-эдования.на небольшом клиническом материале. (Скуинь JLM. , 379, Родионов С. В. ,1978,Keleova А., 1990). Имеющиеся в настоя-эе время сведения не позволяют в полной мере описать хэрак-ерные для этих заболеваний изменения иммунного статуса на ровне популяций и субпопуляций лимфоцитов крови. Практически е изучались иммунологические сдвиги,происходящие на фоне омбинированного лечения,а таган при генерализации опухолево-о процесса. В связи с этим, нам представляется актуальным альнейшее изучение иммунитета больных остеогенной саркомой и аркомой Юинга.

Цель работы. Целью данного исследования явилось изучение иммунного статуса у больных остеогенной саркомой и саркомой Юинга до и в процессе комбинированного лечения.

Задачи исследования.

1. Сравнить исходный иммунный статус больных с остеоген-ой саркомой,саркомой Шнга и здоровых лиц в возрасте 17-19 ет.

2. Определить.признаки остеогенной саркомы,изменчивость оторых находит свое отражение в иммунологической картине.

3. Исследовать иммунный статус больных с остеогенной cap-

комой на различных этапах комбинированного лечения.

4. Провести сравнительный анализ влияния на иммунологические показатели применяемых при остеогенной саркоме методов лечения.

5. Изучить особенности иммунологической картины при генерализованных формах остеогенной саркомы и саркомы Кинга.

Научная новизна работы. Представленная работа является первой,в которой для оценки иммунного статуса больных остеогенной саркомой и саркомой Кинга использована широкая панель моноклональных антител к дифференцировочным антигенам лимфоцитов периферической крови. Впервые изучены иммунологические показатели на уровне популяций и субпопуляций лимфоцитов в зависимости от основных признаков остеогенной саркомы,исследованы изменения иммунного статуса на фоне комбинированного лечения данного заболевания,проведен сравнительный анализ иммунологической картины при генерализованных формах остеогенной саркомы и саркомы Юинга. „

Научно-практическая ценность. Установлены особенности иммунного статуса больных остеогенной саркомой и саркомой Шнга по сравнению со здоровыми лицами. Выявлены признаки остеогенной саркомы,изменчивость которых находит свое отражение в картине иммунологических показателей. Изучены изменения в популяциях и субпопуляциях лимфоцитов,происходящие на фоне комбинированного лечения остеогенной саркомы. Определены иммунологические показатели,характерные для генерализованных форм остеогенной саркомы и саркомы Юинга

Апробация работы. Материалы диссертации доложены на совместной научной конференции отделения опухолей опорно-двигательного аппарата,лаборатории радиоиммунологии,диагностического отделения, кафедры онкологии 1-го Московского медицинского института им. Сеченова (июнь 1992г.)

Публикация результатов исследования. По теме диссертаци]

опубликовано три научные работы.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения,обзора литературы,описания больных и методов исследования, 3-х глав собственных исследований,заключения,выводов и указателя литературных источников.

КЛИНИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА БОЛЬНЫХ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В исследование были включены 106 больных саркомами косей, которые наблюдались или находились на лечении с 1988 по 992 годы. У 84 больных был установлен диагноз остеогенная :аркома,у 22-саркома Юинга. Средний возраст больных составил 8 лет. Для сравнения был изучен иммунный статус у 60 практи-1ески здоровых подростков, которые вошли в контрольную группу. 1реди больных и в контрольной группе распределение по полу и юзрасту было идентичным,при этом преобладали лица мукекого юла-ббХ. Остеогенная саркома локализовалась преимущественно в иинных трубчатых костях конечностей-99% случаев. Саркома Юинга чаще локализовалась в диафизах длинных трубчатых костей *ижних конечностей-68Х случаев.

Учитывая данные рентгенологического исследования,компьютерной томографии,артериографии и данных патоморфологичес-кого исследования при остеогенной' саркоме определяли размеры . и расчитывали объем первичной опухоли.

(11 х с!2 х аз ОБЪЕМ ОЛУХОМ - 3,14 х - ;

6

Комбинированное лечение остеогенной саркомы включало несколько этапов: проведение регионарной химиотерапии в виде внутриартериальной инфузии Адрибластина по 30 мг на кв. метр поверхности тела в течении 72 часов непрерывно или Платидиама по 150 мг на квадратный метр поверхности тела в течении 4 часов. В среднем проводилось 2-3 курса предоперационной химиотерапии. Через 3-4 недели после ее завершения,проводилось хирургическое лечение. В зависимости от локализации и степени местной распространенности выполнялись калечащие или сохранные операции. После установления степени терапевтического па-томорфоза в удаленной опухоли,выбиралась схема адьювантной химиотерапии.

Иммунологическое обследование больных остеогенной саркомой проводилось до и на различных этапах лечения: ,на фоне регионарной химиотерапии,после операции,на фойе адьювантной химиотерапии. При саркоме К&жга больные обследованы преимущественно до лечения.

Количественный анализ популяций лим{оцитов,субпопуляций

- б -

и фракций Т-лимфоцитов периферической крови осуществляли путем определения антиген-положительных лимфоцитов с помощью реакции непрямой иммунофлюоресценции. Относительное содержали лимфоцитов,экспрессирующих различные дифференцировочные анти гены определяли в гейте лимфоцитов на клеточном цитофлюориме

Таблица 1: ПЕРЕЧЕНЬ ШНОКЛОНАЛЬНЫХ-АНТИТЕЛ К ДИФФЕРЕНЦИРОВОЧ НЫМ АНТИГЕНАМ,ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ДЛЯ ФЕНОТИПИРОВАНИЯ ЛШЮЦИТОВ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ.

НАЗВАНИЕ МКА ОБОЗНАЧЕНИЕ АНТИГЕНА МОЛЕКУЛЯРНАЯ МАССА АНТИГЕНА(кД) СПЕЦИФИЧНОСТЬ В ГЕЙТЕ ЛИШОЦИТОВ

ИКО-ГШ CDllb . 155, 95 МК-клетки

ИКСЫ HLA-Dr 29, 34 В-кл., активирован. Т-кл.

ИК0-20 CD38 45 тимоциты, ЫК-клетки, активированные Т-клетки

ико-йо мю-цепь IgM . - В-лимфоциты

ИКО-31 CD8 32 супрессорные/цитоток-сические Т-клетки, активированные клетки

ИК040 RFB-1 - активированные, кл. , гемо-поэтич. предшественники

ИКО-44 ИКО-46 CDlc CD45 200 субпоп. В-клеток, субпоп М- клеток, кортик, тимоцит на всех лейкоцитах

ИКО-53 HLA-1 45, 12 на всех лейкоцитах

ИКО-60 CD18 95 на всех лейкоцитах

ИКО-66 CD37 . 40-52 В-кл. , субпопул. Т-клето

ИК0-80 CD5 67 все Т-кл. .субпопул. В-кл

ИКО-86 CD4 60 Т-хелперы/индукторы

ИКО-87 CD7 40 все Т-клетки,Ж-клетки

ИКО-88 CD71 - рецептор к трансферрину

ИКО-90 CD3 26 все Т-клетки

ИКО-91 CD22 130/140 В-клетки

ИК0-105 CD25 - рецептор к интерлейкину :

тре "FACScan" фирмы "Becton Dickinson"(США). В работе использована панель МКА серии ИКО, полученная в лаборатории клинической радиоиммунологии ОЩ РАМН( Барышников А. Ю. 1090). Таб. 1 Изучение иммунного статуса предусматривало и проведение функциональных тестов: реакция бласттрансформации,определение функциональной активности индометацин-чувствительных клеток по методу Goodwin,определение функциональной активности эндогенных супрессоров по методу Galanaud. Уровень иммуноглобулинов крови классов G,A и М определяли по методу Manchini.

При статистической обработке материала для оценки степени достоверности различий пользовались критерием Стьюдента.и U-критерием Вилкоксона-Уайта.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Иммунный статус больных с локализованной формой остео-генной саркомы и саркомы Юинга до начала лечения. При сравнении результатов иммунологического обследования больных с локализованной формой остеогенной саркомы и лиц контрольной группы мы выявили ряд особенностей (табл. 2).В этой xs таблиц? представлены статистически достоверные р;гзлк-чия (р<0,05) между средними показателями иммунитета в указанных группах.

Полученные результаты свидетельствуют об увеличении у данного контингента больных популяций клеток,экспрессирующих антигены CD38 и CD71,которые относят к группе активационных.

Для локализованной формы саркомы Шнга характерна несколько иная чем при остеогенной саркоме иммунологическая картина. Во-первых, для этой группы пациентов не свойственно увеличение уровня клеток,экспрессирующих активационные антигены-их уровень существенно не отличается от контрольных значений. Во-вторых у больных саркомой Юинга в стадии локального процесса отмечена тенденция к уменьшению общего количества лимфоцитов, экспрессирующих Т-клеточные маркеры,причем наиболее существенная разница при сравнении с группой больных остеогенной саркомой и контрольной группой наблюдалась в отношении общего количества CD4+ лимфоцитов(Т-хелперы/."ндукторы). табл. 3

Таблица 2. ОСОБЕННОСТИ ИММУННОГО СТАТУСА БОЛЬНЫХ ОСТЕОГЕННОЙ САРКОМОЙ ДО НАЧАЛА ЛЕЧЕНИЯ

БОЛЬНЫЕ п-55 КОНТРОЛЬ п-60

1. Повышение абсолютного и относительного количества СБ38+ лимфоцитов 42+2% 729+53 33+2Х 566+41

2. Повышение абсолютного и относительного количества лимфоцитов,экспрес-сирующих рецептор к трансферрину 12+27. 218+50 5+1Х 70+12

3. Швышение концентрации сывороточных иммуноглобулинов класса б и и. 1Я МЕ/мл): М(МЕ/мл): 147+18 168+12 91+5 124+11

4. Снижение способности лимфоцитов к пролиферации. а) пролиферативная активность в ответ на ФГА( имп. /мин.) б) индекс стимуляции 26885+8105 27+7 55589+758С 67+9

5. Появление макрофагальной супрессии, индекс чувствительности к индомета-цину 1,6+0,2 0,9+0,1

Таблица 3: СУБПОПУЛЯЦИИ Т-ЛИМФОЦИТОВ И ИММУНОГЛОБУЛИНЫ КРОВИ У БОЛЬНЫХ ОСТЕОГЕННОЙ САРКОМОЙ,САРКОМОЙ КМНГА И У ЗДОРОВЫХ лиц

М+т

АНТИГЕН ОСТЕОСАРКОМА п-55 САРКОМА ЮИНГА п-13 КОНТРОЛЬ п-60

7. абс. 7. абс. X абс.

С08 27+1 469+37 22+2 343+43 25+1 439+27

СБ4 33+2 545+39 27+3* 420+49 * 36+2 591+37

СЦ7 77+2 1294+59 70+6 1039+125 76+1 1303+58

СБЗ 58+2 1007+55 54+3 864+90 61+1 1027+45

1г 6 (МЕ/мл) 147+18* 130+11 * 91+5

А (МЕ/мл) 160+17 239+53 134+13

1г м (МЕ/мл) 168+12* 144+23 124+11

*-р<0,05 при сравнении с контрольной группой.

В-третьих,следует отметить,что у больных с локализованной формой саркомы Юинга,наблюдаются повышенные концентрации иммуноглобулинов класса 6,но в отличие от больных остеогенной саркомой, не отмечается повышение уровня 1дМ..табл. 3/ И,на- ■ конец,необходимо указать на то,что отмеченное у больных саркомой Юинга снижение пролиферативной активности лимфоцитов не связано с супрессией макрофагальной природы. Об этом свидетельствует то,что при пониженном индексе стимуляции (39+ 19),индекс чувствительности к индометацину существенно не отличается от нормы.

Таким образом,полученные данные говорят о том,что несмотря на существование многих общих черт в клиническом течении саркомы Юинга и остеогенной саркомы,иммунологическая картина при этих заболеваниях различна

В дальнейшем были изучены показатели иммунитета в зависимости от основных признаков, характеризующих биологические особенности остеогенной саркомы.

1. Морфологический вариант. При составлении групп руководствовались тем,что различные морфологические варианты остеогенной саркомы имеют неодинаковую степень-дифференцировки а также влияние на течение и прогноз заболевания. Больные,у которых установлены варианты III-IV степени анаплазии (остео-5ластическая остеогенная саркома,периостальная,типичная,ана-:лазированная,телеангиозктатическая) были включены в первую 'руппу. Во вторую группу вошли 5 пациентов с более дифферен-даро ванными вариантами опухоли (хондробластическая остеоген-1ая саркома,паростальная). Группы рандомизированы по объему юрвичной опухоли. Для сравнения была образована 3-я группа. 5е составили 8 больных с опухолями костей,имеющих более вы-¡окую степень дифференцировки (гигантоклеточная опухоль кос-■и.фибросаркома.адамантинома длинных трубчатых костей). Резу-[ьтаты обследования в этих группах представлены в таблице 4.

Было установлено,что среди больных с высокодифференциро-1анными остеогенными саркомами отмечаются более низкие чем у стальных пациентов с данной опухолью количества практически сех изученных субпопуляций лимфоцитов. Обращают на себя вни-ание выраженные различия между субпопуляциями Т-лимфоцитов С04+,С08+,СБ7+),В-лимфоцитов(мю-цепь 1г№,С02^+) .между уров-

нем активированных лимфоцитов (СБ38+, ИРВ-1+) и ПК-клеток

(СВ11Ь+). У больных с высокодифференцированными вариантами о(

теогенной саркомы численность отмеченных выше субпопуляций

почти в 2 раза меньше, чем у остальных больных с остеогенной

саркомой. Различия в отношении других субпопуляций клеток в

изучаемых группах выражены менее значительно. Говоря о струк-

Таблица 4: ПОКАЗАТЕЛИ ИММУНИТЕТА В ЗАВИСИМОСТИ ОТ МОРФОЛОГИЧЕСКОГО ВАРИАНТА ОСТЕОСАРКОМЫ

М+т

АНТИГЕН ГРУША 1 п=36 ГРУША 2 п=5 ГРУППА 3 п=8

7. абс. % абс. X абс.

HLA-Dr 13+1 213+17 5+1* 82+23 * 11+2

CD38 44+2 761+53 26+9 * 466+223 22+3*

мх>-цепь1вМ 10+1 145+24 4+2* 85+36 9+1

CD8 28+1 493+39 15+3* 244+63 * 23+3*

RFB-1 42+2 693+49 20+5* 328+112* 21+3*

CDlc 6+1 107+26 1+0* 24+9 * 3+1*

CD45 87+2 1504+73 79+9 1234+183 84+3

HLA-1 89+2 1434+111 77+6* 1244+117 86+4

CD18 88+2 1504+76 65+9* 1011+155 82+6

CD37 66+3 1133+79 60+13 897+194 57+8

CD5 62+2 1033+54 66+6 1082+152 52+8

CD4 35+3 570+42 21+5* 307+67 27+4*

CD7 78+2 1324+62 64+9* 955+54 68+6*

CD3 60+2 986+63 54+8 838+58 51+5

CD22 8+1 128+15 3+1* 62+22 7+1

CDllb 18+3 303+44 7+2* 121+57 7+2*

Лейкоциты 6200+224 6520+545

Лимфоциты 27+1 1677+85 25+2 1657+200

* - р<0,05 по сравнению с группой 1.

уре популяции лимфоидньгх клеток,следует заметить,что во вто-ой группе больных,по сравнению с первой,наблюдается снижение :оличества антиген-позитивных лимфоцитов в целом, хотя более ыражено уменьшение.доли активированных клеток, НЬА-0г+,С08+ имфоцтов,В-клеток и естественных киллеров. Кроме этого,было становлено.что во второй группе больных содержание клеток ольшинства изученных субпопуляций ниже чем у здоровых лиц, ри этом достоверно отличаются количества С04+,С08+,С022+ :ГВ-1+,НЬА-0г+ и СИс+ лимфоцитов. В то же время, показатели ммунитета среди остальных пациентов с остеогенной саркомой преимущественно остеобластической) мало чем отличаются от юнтрольных значений. Исключение составили различия уровней леток,зкспрессирущих антигены CD38.RFB-1.CD71 и СОНЬ. Таким бразом, высоко и низкодифференцированным остеогенным саркомам оответствуют различные иммунологические картины. Характерное ;ля группы больных остеогенной саркомой в целом увеличение убпопуляций активированных клеток,обусловлено,главным обра-ом, за счет пациентов с низкодифференцированными морфологи-:еским разновидностями данной опухоли. Для больных с высоко-;ифференцироваными вариантами остеогенной -саркомы и более целыми опухолями костей не характерно увеличение числен-гасти субпопуляций активированных клеток,а наоборот,уровень ¡тих клеток, а также МК- клеток, ниже нормы.

Рентгенологический вариант. Все больные остеогенной сар-гамой,обследованные иммунологически до начала лечения,в соот-¡етствии с наблюдаемым у них рентгенологическим вариантом шухоли были разделены на три группы. Таблица 5.

Полученные результаты свидетельствуют о том,что для груп-[ы больных с остеолитическим вариантом по сравнению с осталь-1ыми больными характерно увеличение численности субпопуляций шмфоцитов.зкспрессирующих активационные антигены С038,1?ГВ-1, Ю71,Т-клеток несущих на своей поверхности антигены С04,С08 и Ю7,В-лимфоцитов( СБ22+) и клеток, зкспрессирущих линия-неог->аниченные антигены. Наиболее выражены различия в указанных ■руппах в отношении субпопуляций активированных клеток; коли-гество СБ38+ и ЯРВ-1+ лимфоцитов в 1,4 раза,а СБ71+ -в 1,8 )аза больше среди больных с остеолитическим вариантом,чем в . 'руппе больных с остеопластическим вариантом опухоли. К этому

Таблица 5: ПОКАЗАТЕЛИ ИММУНИТЕТА В ЗАВИСИМОСТИ ОТ РЕНТГЕНОЛОГИЧЕСКОГО ВАРИАНТА ОСТЕОГЕННОЙ САРКОМЫ М+ш

АНТИГЕН ОСТЕОБЛАСТИЧЕСКИЙ п-25 ОСТЕОЛИТИЧЕСКИЙ п-22 СМЕШАННЫЙ п-8

% абс. % ' абс. 7. абс.

С038 38+3* 612+77 * 48+3 884+87 39+2* 689+84*

мю-цепЫдМ 9+1 141+23 10+1 163+29 6+1 110+17*

СБ8 25+2* 412+56 * 29+2 551+60 25+3 444+83

№В-1 35+3* 567+70 * 44+3 786+78 35+3* 627+95

СОЮ 7+2# 124+44 5+1# 88+15 2+1 39+14

СБ45 85+2* 1336+97 * 91+2 1656+112 86+3 1465+149

ни-1 86+2 1382+107 8 89+2 1600+108 93+2 1596+130

СИ 8 81+3 1280+195 К 89+3 1627+121 92+2 1577+129

С037 66+4 1029+96 * 67+4 1240+135 61+6 1047+185

С05 61+3 965+75 * 64+2 1156+81 60+6 966+106

СБ4 ' 31+3 500+61 * 31+2 535+45 41+6 696+99*

С137 73+3* 1173+86 * 80+3 1430+95 77+6 1300+125

С071 10+4* 176+73 * 16+4 309+93 7+3 119+64

СБ22 7+1* 107+24 * 1 Ти СП 150+21 5+1* 94+16*

а - р<0,05 при сравнении с остеолитическим вариантом # - р<0,05 при сравнении со смешанным вариантом

следует добавить,что уровень С038+ и ЯРВ-1+ клеток при осте-опластическом варианте существенно не отличается от нормальных значений,а количество СИ71+ лимфоцитов в 2,5 раза больше чем в контрольной группе (при остеологическом варианте -в 4,< раза больше). Характеризуя структуру лимфоидной популяции.следует отметить,что в группе больных с остеолитическим вариантом опухоли по сравнению с остальными пациентами наблюдается увеличение доли лимфоцитов,экспрессирующих активационные антигены С038.ИГВ-1 и СБ71,а также Т-лимфоцитов,несущих антиге-

ны CD8 и CD7. В этой же группе имеется тенденция к увеличению доли В-лимфоцитов(С022+) и клеток, экспрессируюших линия-неограниченные антигены.

В группе больных со смешанным вариантом остеогенной саркомы отмечены наиболее высокие количества CD4+ лимфоцитов и с шлю низкие уровни CD22+ и CD71+ клеток.

После рандомизации групп по объему первичной опухоли отмечено, что тенденция к увеличению субпопуляций активированных клеток у больных с остеолитическим вариантом остеогенной саркомы становится более отчетливой. Табл. 6

Таблица б: КОЛИЧЕСТВО АКТИВИРОВАННЫХ ЛИМЮЦИТОВ В ЗАВИСИМОСТИ ОТ РЕНТГЕНОЛОГИЧЕСКОГО ВАРИАНТА ОПУХОЛИ (рандомизация по объему первичной опухоли) М+т

АНТИГЕН О/ЛКТИЧЕСКАЯ п-15 О/ПЛАСТИЧЕСКАЯ' п-15

7. абс. % абс.

CD38 51+4* 948+105* 38+4 651+89

RFB-1 49+5* 895+83 * 33+3 569+67

CD71 20+4* 393+114* 7+2 139+33

Объем первичной опухоли. В соответствии с частотным расп-,.'3делением значений данного признака больные остеогенной саркомой были разделены на три группы. Табл. 7

Количественные изменения объема опухоли связаны с уровнем лимфоцитов в периферической крови. По мере увеличения значений объема первичной опухоли наблюдаются две противоположные тенденции: снижение относительного количества лимфоцитов и увеличение количества лейкоцитов крови. Проведенный анализ показал, что среди пациентов с опухолями больших размеров наблюдается уменьшение субпопуляций зрелых Т-лимфо"Нтов(С04+,С08+) В-клеток (С022+,мю-цепь 1(*М+) .лимфоцитов,несущих линия-неогра-

- 14 -

Таблица 7: ПОКАЗАТЕЛИ ИММУНИТЕТА В ЗАВИСИМОСТИ ОТ ОБЪЕМА ПЕРВИЧНОЙ ОПУХОЛИ М+ш

ГРУППА 1 п=22 ■ до 300 куб. см ГРУППА 2 п=17 300-600 куб. см ГРУППА 3 п-16 более 600 куб. см

АНТИГЕН % абс. % абс. X абс.

С038 48+3# 849+78 39+5 681+86 38+4* 616+81*

мю-цепь1дМ 10+1* 169+25 * 8+1 125+20 8+2 122+32

СБв 27+2 495+64 * 29+3 517+67 24+2# 395+63 #

етв-! 43+3* 765+76 * 38+4 666+77 33+3# 506+86 #

С01с 6+1 103+17 4+1 77+23 6+4 110+68 Я

НЬА-1 87+3 1512+109* 91+2 1636+129 87+3 1359+118

С018 87+3 1515+123* 89+2 1576+113 82+5 1283+131 Я

С04 3б+3# 639+69 « 27+3 452+61 34+3# 513+66 *

СО 7 73+3* 1263+100 79+3 1414+98 80+4 1243+101

С022 9+1* 144+24* 7+1 109+17 7+4 111+28

СБИЬ 22+3# 366+59/ 12+4 186+47 17+1 281+100 *

Лейкоциты 5974+298 6644+330 6636+322 *

Лимфоциты 29+2 1744+122 26+1 1710+123 24+1* 1571+120

Щ<Х> (Ед/л) 468+86 698+233 1046+100 *

* - р<0,05 при сравнении в группах 1 и 3.

# - при сравнении с группой 2

ниченные антигены и активированных клеток (С038+, ИРВ-1+).В этой же группе больных было обнаружено уменьшение субпопуляции С011Ь+ лимфоцитов,среди которых основная доля приходится на ЯК клетки. Изучение структуры популяции лимфоидных клеток показало,что у Сольных с небольшими опухолями по сравнению с пациентами у которых опухоль достигла больших размеров наряду с понижением доли зрелых Т-клеток (С03+,С07+) имеются более высокие относительные количества активированных клеток (С038+ ЯРВ-1+),В-клеток (СВ22+,мю-цепь 1гМ+) и естественных киллероЕ (С011Ь+). Среди больных с опухолями средних размеров мы отме-

тили наиболее высокие уровни лимфоцитов, экспрессирующих антиген CD8,также как и наиболее низкие количества CD4+ и CDllb+ клеток.

Рандомизация сравниваемых групп по такому признаку как морфологический вариант первичной опухоли (учитывались 26 случаев остеобластической остеогенной саркомы) показала,что этмеченные выше особенности иммунного статуса при опухолях различных размеров носят несколько иной характер. При сравнении групп больных с остеобластическими опухолями малого и большого эбгема не отмечено достоверных различий по уровню лейкоцитов ■срови, процентному содержанию лимфоцитов, по относительному и 1бсолютному количеству В-лимфоцитов, активированных клеток :RFB-1+),Т-хелперов/индукторов (CD4+) и естественных киллеров ;CDllb+). Остальные тенденции,в целом,сохраняются,а некоторые становятся более отчетливыми. Было отмечено,что у больных с опухолями больших размеров доля лимфоцитов,экспрессирующих антиген CD7,достоверно выше чем у пациентов с опухолями малого збъема. Кроме этого, в группе больных с опухолями больших раз-<еров,наблюдается тенденция к уменьшению численности субпопу-ыций клеток,несущих на своей поверхности линия-неограниченные штигены CD45, HLA-1 и CD18.

Рандомизация по такому признаку как рентгенологический 1ариант остеогенной саркомы показала,что тенденция к увеличе щю абсолютного и относительного количества активированных леток,экспрессирующих дифференцировочные антигены CD38.RFB-1 [ CD71,y больных с опухолями небольших размеров сохраняется, [аиболее отчетливо это проявляется среди пациентов,у которых ентгенологически наблюдался остеолитический вариант опухоли, абл. 8

Изучение иммунологической картины в зависимости от таких ризнаков как длительность анамнеза до начала лечения,степень атологической васкуляризации опухоли (по данным артериогра-ии),уровень щелочной фосфатазы в сыворотке крови не позволило ыявить каких-либо отчетливых тенденций в изменениях на уровне опуляций и субпопуляций лимфоцитов.

Таблица 8. КОЛИЧЕСТВО АКТИВИРОВАННЫХ ЛИМФОЦИТОВ В ЗАВИСИМОСТИ ОТ ОБЪЕМА ОПУХОЛИ (остеолитический вариант) М+т

АНТИГЕН <-300 куб. см п«8 >-600 куб. см п-12

% .абс. X абс.

CD38 54+4* 1043+147* 39+3 681+104

RFB-1 52+6* 982+124* 33+4 525+73

CD71 19+4* 365+170* 6+2 92+31

* - р<0,05

ИЗМЕНЕНИЯ ПОКАЗАТЕЛЕЙ ИШШТЕТА В Ш ОДЕССЕ КОМБИНИРОВАННОГО ЛЕЧЕНИЯ ССТЕОГЕНШЯ САРКОМЫ

Регионарная химиотерапия. По нашим данным у 81Х больных остеогенной саркоиой,которым проводились внутриартеркальныо кнфузик.на данном этапе лечения в области пербичной опухоли преобладали явления частичной репарации,увеличения плотности пакостного юшонейта, гаторыз расценивались как положительная рентгенологическая динамика.

На фоне регионарной х. .лгатерапин < 'руктура популяции Т-лимфоцитов,в целом»сусественно ие мекяе'-^я.хотя наблюдает тенденция к умеренному повышению доли CD3+ и СШ+клеток. Рис Наряду с этим,отмечена тенденция к уменьшению абсолютного к личества CD3+.CD4+.CD7+ лимфоцитов,особенно после 3-4 инфу эий Платидиама. Рис. 2

Субпопуляция В-лимфоцитов (С022+.мю-цепь lgM+ клетки) на данном этапе лечения уменьшается,также как уменгиается доля В .клеток в структуре популяции лимфоидных клеток. Даннг тенденция была отмечена уже после первых курсов лечения. Абсолютное и относительное количество В-лимфоцитов в процесс

CD3+,CD4-hCD8-h®7+ ЛИМФОЦИТЫ У БОЛЬНЫХ ОСЖАРКОМОЙ

динамика'на фоне регионарной химиотерапии паатидианоы

100

-i— -' /ьлг—;— —i/уу,-___ s .;. ..¡^L^S._

CD3+ CD4+ СЭД+ CD7+

О ТОЧКА "О" Щ ТОЧКА "1" О ТОЧКА "2" ^ ТОЧКА "З" ТОЧКА "4"

ÍMC1

ДИНАНИКА НА ФОНЕ РЕГИОНАРНОЙ ХИМИОТЕРАПИИ ПААТИДЙАНОЦ

П ТОЧКА "0" [Щ ТОЧКА "I" О ТОЧКА "2" £3 ТОЧКА "3" ^ ТОЧКА "4"

РИС. 2.

«

провдения регионарной химиотерапии оставалось ниже исходных и ниже контрольных значений.

Наиболее информативными оказались изменения на уровне субпопуляций активированных клеток. Независимо от использованного противоопухолевого препарата,у большинства пациентов после первого курса лечения происходило снижение исходно высокого уровня лимфоцитов,экспрессирующих антигены С038,НРВ-1, СЭ71 и СОНЬ. Рис. 3 и 4. Однако,низкие уровни активированных клеток не сохранялись на протяжении всего этапа лечения. Тенденция к частичному восстановлению исходного уровня активированных лимфоцитов, в большей степени ¡?ГВ-1+ С011Ь+ и в меньшей степени С[)38+-,С071+,отмечена наиболее отчетливо среди больных получивших 4-5 курсов лечения Платидиампм. Среди больных леченных Адрибластином тенденция к восстановлению исходного уровня СК38+ и НГВ-1+ лимфоцитов наблюдается уже после 2-го курса лечения. Таким образом, в целом, на фоне регионарной, химиотерапии происходит уменьшение исходно высоких уровней активированных клеток. Проведенный корреляционный анализ между показателями иммунитета,определяемыми на фоне регионарной химиотерапии и числом внутриартериальных инфузий выявил достоверную отрицательную корреляционную связь числа инфузий с относительным и абсолютным количеством СБ38+ лимфоцитов-коэффициенты 0,32 и "-" 0,35 соответственно-абсолютным количеством ЯГВ-1+ лимфоцитов-коэффициент 0,22.

В процессе лечения у ¿ЗХ больных элучавших Платидиам и у 50% больных леченных Адрибластином произошло увеличение исходной доли клеток,экспрессирующих линия-неограниченные антигены. При этом процентное содержание С045+ клеток коррелировала с числом инфузий-коэффициент + 0,21.

В 28 случаях одновременно были исследованы показатели иммунитета и оценен лечебный патоморфоз опухоли,достигнутый после регионарной химиотерапии. Щюведенный корреляционный анализ показал,что степень патоморфоза коррелирует с процентным содержанием лимфоцитов крови (коэфф. +0,49) и с уровнем спонтанной бласттрансформации лимфоцитов (козфф.+0,67).

Иммунный статус после удаления первичной опухоли.

Обследование через 4-5 недель после операции показало, что у больных,которым в предоперационном периоде проводилась

тада-i и cdi iBf лимфоциты у больных осжлркомои

ДИНАМИКА НА ФОНЕ РЕГИОНАРНОЙ ХИМИОТЕРАПИИ ПААТИДИЛМОМ

■(5 40 35 30 25 20 15 10.

j Щ

frn,l

i ■

А.

¡г; }-•" -

ZSS

CD38+

п

} - I'/Wr

г:

f j--.-:

!

i

XX!

ТОЧКА "О" ЕШ ТОЧКА "Г

P.FB-1+ О ТОЧКА "2"

CD71+

ТОЧКА "3"

. NN

СШ11Н

ТОЧКА ' V

Рис. i

ДШ1А11ИКА НА СОНЕ РЕГИОНАРНОЙ ХИЫИОТЕРАПИИ ПААТИДИАШ1

□ ТОЧКА "0" О ТОЧКА "Г ГЗ ТОЧКА "Г ' [23 ТОЧКА "3" g3 ТОЧКА "4'

?ис 4,

- го-

регионарная химиотерапия,иммунологическая картина существенш

не отличается от той которая наблюдалась среди больных с ос-

геогенной саркомой до начала комбинированного лечения,хотя

отмечена тенденция к снижению общего уровня С08+ лимфоцитов

(22+3%,абсолютное количество 369+71). Для группы больных

оперированных без предоперационного лечения,по сравнению с

остальными оперированными пациентами характерны более высоки«

уровни активированных клеток, мю-цепь 1еМ+ лимфоцитов, а также

снижение общего количества Сй4+ и СВ22+ лимфоцитов. Табл. 9

Таблица 9: ПОКАЗАТЕЛИ ИММУНИТЕТА ПОСЛЕ ХИРУРГИ1 ЯСНОГО УДАЛЕНИЯ ПЕРВИЧНОЙ ОПУХОЛИ.

М+ш

АНТИГЕН ПОСЛЕ ОПЕРАНИ" с per. х/терап. ПОСЛЕ ОПЕРАЦИИ без рег. х/тер.

X абс. % абс.

HLA-Dr 10+1 178+39 16+2 246+87

CD33 42+5 667+86 53+4 852+7Í

мю-цепь1еМ 6+1* 98+18* 14+2 209+23

RFB-1 32+3 552+91 44+14 683+209

CD4 34+5* 537+78* 29+6 458+68

CD22 7+1 д.жО+12* 6+1 90+15

* - р<0,05

Адьювантная химиотерапия. На данном этапе лечения остео-генной саркомы наблюдается тенденция к снижению абсолютного количества лимфоцитов в периферической крови а также абсолютного количества лимфоцитов всех изученных субпопуляций. Менее выражена эта тенденция среди популяций Т лимфоцитов,уровень которых на фоне лечения существенно не меняется,в -о время как субпопуляции НЬА-0г+,С038+,1?РВ-1+,С022+ лимфоцитов уменьшается в два раза. Относительное количество клеток, принадлежащих различным субпопуляциям,на фоне профилактического лечени!

арьирует незначительно. Исключение составляют активированные летки и HLA-Dr+ лимфоциты для которых характерно уменьшение абсолютного и относительного количества. Таким образом,на авершающих эталах адьювантной химиотерапии,на фоне сниженных э сравнению с контрольным значениями абсолютных количеств леток всех изученных субпопуляций,структура лимфоидной попу 1ции существенно не отличается от нормы.

Иммунный статус при генерализованных формах остеогенной аркомы. Полученные результаты показали,что иммунологические артины при ранней гематогенной диссеминации и генерализации а фоне проводимого лечения отличаются. При первично-генерали-званных остеогенных саркомах характерным является лимфоци-зз,главным образом,за счет увеличения субпопуляций лимфоци-эв.зкспрессирующих линиия-неограниченные антигены,а также ггигены CD5.CD7 и CDlc. В то же время, наблюдаются ряд разли-1й в структуре популяций. У больных с ранней гематогенной кзсеминацией происходит уменьшение доли CD3+,CD8+,CD7+, Dllb+ и CD38+ лимфоцитов. Однако, из-за имеющегося у Зтих зльных лимфоцитоза, абсолютные количества данных субпопуля-1й не отличаются от аналогичных показателей у леченных )льных с наличием признаков диссеминации и остаются близки-i к норме.

Рассматривая особенности иммунологической картины при шней гематогенной диссеминации саркомы Кинга нами было •мечено,что для данного заболевания характерна лимфопения, ¡условленная снижением количества всех популяций и субпопу-[ций лимфоцитов. Возможно это связано с нарушением дифферен-|ровки на уровне стволовой лимфоидной клетки. Таким образом, мунологические картины при ранней гематогенной диссеминации >и остеогенной саркоме и саркоме Кинга отличаются между со-1й,что может говорить о различных патогенетических механиз-ix,стоящих в основе ранней генерализации этих заболеваний.

Нами изучен иммунный статус среди больных,у которых при-

:аки генерализации опухолевого процесса были отмечены на фо-

проводимой адьювантной химиотерапии. Полученные результаты

авнивались с показателями больных без явных метастазов,кото-f

м проводилось аналогичное лечение. Табл. 10

- 22. -

Таблица 10: ИММУННЫЙ СТАТУС ПРИ ПОЯВЛЕНИИ ОТДАЛЕННЫХ МЕТАСТАЗОВ НА ФОНЕ АДЬЮВАНГНОЙ ХИМИОТЕРАПИИ М+п

АНТИГЕН БЕЗ МЕТАСТАЗОВ п»35 С МЕТАСТАЗАМИ п-16

г абс. Z абс.

HLA-Dr • 131+21 12+3 186+46

CD38 43+3 574+49 40+5 580+81

мю-цепь IgH 6+1 80+10 10+2 А 161+32 *

CD8 25+2 336+28 32+2* 475+47 л

RFB-1 40+3 529+45■ 43+6 662+106*

CD37 55+3 747+70 68+4* 989+119*

CD4 30+2 385+25 30+2 454+53 А

CD71 12+5 197+е' 6+2 91+35

CDllb 20+3 278+47 12+3* 206+65 л

Лейкоциты 4806+239 5706+503А

Лимфоциты £9+1 1361+72 26+2А 1456+128

Ig G (ЫЕ/ыл) 101+5 153+15 л

1е А (},Е/1.;л) 129+16 218+29 А

1е Ы (МЕ/мл) 120+15 180+23 а

* - р<0,05

Как откэчалось вышз.на фоне адыовани й химиотерапии наблюдается тенденция к лимфопениии и снижен;® абсолютного количества большинства субпопуляций. Оказалось,что в большей степени это характерно для больных без отдаленных метастазс у которых отмеченная лимфопения связана с субпопуляциями кл ток несушпх линия-неограниченные,HLA-Dr,CDS,CDlc,CD4,CD7,СП антигены,а субпопуляции CD22+ и мю-цепь IgM+ лимфо .итов в £ раза меньше нормы. В то же время,при метастазировании тенде! ция к лимфопении и уменьшению субпопуляций выражена меньше,

а уровень клеток,несущих на своей поверхности рецептор к ин-герлейкину-2 в 2 раза вышо нормы. Сравнивая структуры популяций и субпопуляций мы.отметили,что при метастазировании на £оне адыовантной химиотерапии возрастает доля лимфоцитов,эк-зпрессирующих антигены С08,С037 и мю-цепь 1гМ и снижается доля клеток,несущих на своей поверхности антиген СБНЬ.встреча-ощийся преимущественно на NK клетках. Еще одной особенностью иммунологической картины при генерализации процесса на фоне здьювантной химиотерапии является повышение концентрации сы-зороточных иммуноглобулинов всех классов.

ВЫВОДЫ

1. Иммунный статус больных с локализованной формой остео-'енной саркомы характеризуется рядом особенностей: увеличение 1а 27% субпопуляции клеток,несущих на своей поверхности ре-;ептор к трансферрину и более чем в 2 раза-клеток,экепресси-)ующих антиген С038;понижение в 2 раза пролиферативной актив-гости лимфоцитов; появление макрофагальной супрессии; повышение $1,5 раза концентрации иммуноглобулинов классов в и М.

2. Особенностями иммунного статуса больных с локализован-юй формой саркомы Шнга являются снижение доли всех субпопу-тций Т-лимфоцитов,преимущественно клеток экспрессирующих (ифференцировочный антиген СЭ4 (на 33%) и повышение в 1,-1 ра-1а уровня иммуноглобулинов класса О.

3. При остеогенной саркоме изменчивость таких клинических [ризнаков как морфологический,рентгенологический варианты и 1бъем первичной опухоли находит свое отражение в иммунном :татусе больных.

4. Наиболее выраженными изменениями в процессе проведения егионарной химиотерапии являются уменьшение субпопуляций актированных клеток (СЮ38+, !?РВ-1+, С071+), В-лимфоцитов (С022 +)

I естественных киллеров (С011Ь+).

5. После удаления первичной опухоли наблюдается повышение ровня активированных клеток,более выражено среди больных не олучавших предоперационного лечения.

6. Адьювантная полихимиотерапия пр схеме САР приводит к меньшению большинства популяций и субпопуляций лимфоцитов, реимущестнеино ,Н1А-0Я+,С038+,РГВ-1+,С022+,не нарушая струк-

- 24 -

туры лимфоидной популяции в целом.

7. Ранняя гематогенная диссеминация по сравнению с генерализацией на фоне проводимого лечения имеет характерные иммунологические признаки: снижение на фоне лимфоцитоза доли СГО8+ , [?РВ-1+, С03+ и СШ+ клеток.

8. Широкая панель моноклоналышх антител серии ИКО к дк<[ ференцировочным антигенам лимфоцитов может быть рекомендовав для иммуномониторинга больных остеогенной саркомой и саркомс Юинга.

СПИСОК РАБОТ, ОПУВЛИКОВАНШХ Ш ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Моноклональные антитела к дифференцировочным антигенг лимфоцитов в оценке иммунного статуса онкологических больны] Кн. Реабилитация иммунной системы,тезисы, докл. Ь,:алтубо 1990 ] стр. 19-20 (соавт. Ившина А.Е .Кадагидзе Г. .Тулендиева К. Т., Яворский ЕЁ.)-

2. Иммунный статус больных остеогенной саркомой. Тезисы докл. на конференции онкологов Таджикистана г. Душанбе 1992 г, (соавт. Ившина А. Е) (в печати).