Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Иммунный механизм химического гомеостаза, его характеристика и значение для фармакологии

Мак?. ^ РО / ^ ^ . А X

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РСФСР

Казанский государственный Ордера Трудопого Красного Знамени медицинский институт им. С. В. Курашова

На правах рукописи

БЫКОВА Аделаида Александровна

УДК 615.015:615.373.3:612.112.94

№

И ММ У Н Н Ы Й МЕХА Н ИЗМ ХИМИЧЕСКОГО ГОМЕОСТАЗА, ЕГО ХАРАКТЕРИСТИКА И ЗНАЧЕНИЕ ДЛЯ ФАРМАКОЛОГИИ

(14.00.25 — фармакология) (14.00.36 — аллергология и иммунология)

Л впореферат диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Казань — 1989

Работа выполнена в Пермском государственном медицинском институте.

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор И. В. Заиконникова, доктор медицинских наук, профессор П. П. Денисенко, доктор медицинских наук, ст. научный сотрудник Г. А, Шальнова.

Ведущее учреждение — 2-й Московский ордена Ленина государственный медицинский институт им. Н. И. Пирогова.

Защита диссертации состоится «_»_

1990 г. >в_часов на заседании специализированного

созета Д.084.29.03 при Казанском ордена Трудового Красного Знамени государственном медицинском институте им. С. В. Курашови (420012, I. Казань, ул. Бутлерова, 49).

Автореферат разослан «----»______________ 1990 гС дисссртацией можно ознакомиться в научной библиотеке института (ул. Бутлерова, 496).

Ученый секретарь специализированного теоретического совета кандидат медицинских наук Р. X. Ахмедзянов

Актуальность проблемы. Постоянство внутренней среды организма - основное условие существования живого. Бесчисленные химические превращения, происходящие в нем, сопровождаются колебаниями содержания эндогенных веществ в узких пределах благодаря саморегуляции. Постоянство обеспечивает содружество нервной, гуморальной, эндокринной, детоксицирующей, ферментативной, выделительной систем,участвующих в сложном механизме гомеостаза /П.Д.Горизонтов, 1981; А.В.Вальдман, 1981/. Трудно представить, что при участии практически всех физиологических систем организма в гомеостазе, иммунная система остается инертной. Однако,классическая иммунология не постулирует ее участия в контроле за постоянством химической среды организма, несмотря на наличие в нем условий для образования химических иммуногенов /А.И.Николаев, 1969; И.Е.Ковалев, О.Ю.Полевая, 1985/. Последнее подтверждает постоянное обнаружение в крови больных антител к лекарственным веществам, вводимым парэнтерально и принимаемым внутрь. Из литературы известно, что любое вещество,присоединенное к макромолекулам, инициирует иммунный ответ /■¿а-" -пег,{93$) ВиШег ,¿982/. Эндобиотики,включая медиаторы, гормоны, ферменты, их предшественники, метаболиты, постоянно вступают в связь с белками и другими макромолекулами в организме, в связи с чем должны вызывать специфическую иммунную реакцию. Универсальная иимуногенность их агонистов позволила предположить наличие аутоан-тител к ним в здоровом организме, что подтверждается и некоторыми указаниями литературы /Ы.В.Полосатов, 1976; О.Г.Федоров, 1976;' Л/аке?а, Лгта^аспеп. ,1974; беа^гло^ е? <*е ,1977 /. Однако, данные о выявлении антител в крови людей и животных, не получавших химических соединений, немногочисленны и не систематизированы.Обнаружение их у здоровых людей и интактных животных считается случайным и необъяснимым, биологическое значение до конца неясно. Вопрос о синтезе антител к эндобиотикам как о постоянном явлении, необходимом для сохранения химического гомеостаза организма, до 1976 года не ставился. Единственным, обнаруженным нами, основательным исследованием является работа Макета. и УогтаМ^лем / 1974/, показавших широкую распространенность естественных антител к производным фенилуксусной кислоты. Но авторы не пошли дальше констатации факта обнаружения антител и предположения о их роли в инициации ответа на гаптены, вводимые извне.

Данные литературы, собственные исследования позволили обосновать /А.С.Зако,А.А.Быкова,1976-1988; А.А.Быкова,А.С.Закс,1980-1989/

концепцию о постоянном участии иммунной системы в химическом го-меостазе организма. Эта её функция условно названа иммунным механизмом химического гомеостаза /ИМХГ/.

Цель работы: характеристика иммунного механизма химического гомеостаза, то есть облигатной специфической реакции системы иммунитета на лекарственные соединения и другие биологически активные вещества /БАВ/, направленной на их связывание и нейтрализацию.

Основные задачи исследования:

1. Показать облигатность иммунного ответа организма людей и животных на субклеточном, клеточном,гуморальном и организменном уровнях на лекарственные соединения,эндогенные БАВ разной структуры, молекулярной массы и направленности действия.

2. Доказать обязательность иммунного ответа на всех уровнях на повышение содержания эндогенных веществ /медиаторы,ферменты,гормоны/ под влиянием лекарственных соединений и других воздействий.

3. Охарактеризовать механизм включения иммунного механизма химического гомеостаза,кинетику его ответа на лекарства, БАВ,вводимые или накапливающиеся в организме под влиянием различных факторов.

4. Изучить характер иммунного ответа на БАВ в плане его специфичности, каскадности и поликлональности, Т-и макрофагозависимости, возможности фармакологической регуляции.

5. Изучить возможность иммунного ответа на БАВ, в том числе и лекарственные соединения,при внесении их в суспензии клеток крови

и органов.

6. Оценить биологическую направленность функции ИМХГ, его роль в фармакокинетике и фармакодинашке БАВ, в том числе лекарственных соединений и ядов.

Научная новизна. Открыто явление участия иммунной системы человека и животных в физиологической регуляции баланса эндогенных соединений типа медиаторов,ферментов,гормонов,их предшественников и метаболитов и сохранении химического гомеостаза организма. Экспериментально и клинически доказан в лимфоидных органах эмбрионов человека,взрослых людей, .новороаденных и взрослых животных постоянный синтез аутоантител к эндобиотикам,инициируемый ими и активирующийся при их минимальном избытке в организме с целью сохранения постоянства его химизма. Показана облигатность ответа на действие БАВ, в том числе и низкомолекулярных, в не конъюгиро-ванном предварительно с белком виде, в условиях ин виво и ин витро, при парэнтеральном и энтеральном их введении. Впервые

установлено, что ответ на химический / и любой иной / агент носит каскадный характер,так как развивается как на вводимое,так и на эндогенные соединения,реализующие его биологические эффекты. Это многоступенчатое участие иммунных процессов в реакции на ксенобиотики представляет несомненный интерес при трактовке вопросов фармакокинетики,фармакодинамики,привыкания к лекарствам и ядам. Установлена практически немедленность ответа на химические вещества, обусловленная постоянством функционирования ИМХГ и необходимая для быстрого восстановления гомеостаза организма. Доказана её связь с наличием на лимфоцитах специфических функционально взаимосвязанных фармакологических и иммунологических рецепторов.Показана поликлональность ответа лимфоцитов на БАВ и с позиций концепции предложено объяснение её механизма и биологического смысла. По-новому,с позиций концепции,объясняется явление поликлональ-ности ответа лимфоцитов на митогены,чужеродные белки,эритроциты, микробные антигены и токсины; трактуется механизм предсуществования и многообразия на лимфоцитах рецепторов к химическим веществам, а в крови - специфичных им натуральных антител; явление естественной клонированности В-пула лимфоцитов. Впервые установлена заинтересованность ИМХГ в патогенезе таких состояний,как ожог,воспаление, адъювант-артрит, и заболеваний с изменением медиаторного /шшшнозы,миастения, паркинсонизм / и гормонального/сахарный диабет/ обменов.

Теоретическая и практическая значимость. Концепция ИМХГ -- новое направление медико-биологических исследований. Она углубляет представления о цензорной функции иммунной системы,показав постоянное её участие в химическом гомеостазе организма. Она расширяет знания об иммунных механизмах привыкания к лекарствам и ядам. В практическом отношении выявление иммунных лимфоцитов и антител к лекарствам способствует прогнозированию эффективности их применения и разработке профилактики резистентности к ним. На основе положений концепции создан способ выявления холинотроп-ных свойств БАВ /А.с. на изобретение & 1101768 от 7 марта 1981 года/. По-новому,с позиций запуска ИМХГ, рассмотрена роль фармакологических рецепторов лимфоцитов. Разработанные методы давт возможность анализа спектра эндобиотиков, участвующих в действии лекарств, в генезе физиологических и патологических состояний / стресс, воспаление, реакция отторжения, боль, перегрузки /. Концепция углубляет знания патогенеза заболеваний с заинтересо-

ванным медиаторным или гормональным обменом, дает возможность разработки способов их диагностики в до- и субклинической стадиях. На ее основе разработан экспресс-микрометод ранней диагностики попадания в организм химических веществ, микробных антигенов и токсинов /A.c. № 1268173 от 8 июля 1986 года/, способ иммунодиагностики миастении /A.c. Je 1363074 от 1 сентября 1987 года/, способ иммунодиагностики рассеянного склероза /Положительное решение на изобретение от 17 октября 1989 года/.

Внедрение -результатов в практику. Данные об иммунных механизмах привыкания к лекарствам используются при чтении лекций и проведении практических занятий на кафедрах фармакологии и биохимии Пермского, Горьковского, Башкирского, Казанского мединститутов. Разработанные методы исследований внедряются как диагностические тесты в практическое здравоохранение. В областной клинической больнице /ОКБ/ города Перш внедрены способы иммунодиагностики паркинсонизма, явных, доклинических и стертых форм миастении /прозериновая проба/, рассеянного склероза /рауседиловая проба/, способ оценки эффективности гистаглобулинотераши больных полли-нозами, тест иммунного РО с медиаторами аллергии для выбора десенсибилизирующей терапии, тест прямой дегрануляцки тучных клеток для оценки наличия и степени аллергизации организма, методы диагностики резистентности к инсулину и пероральным антидиабетикам у больных сахарным диабетом. В диссертационных работах сотрудников кафедры фармакологии и ЦНШ1 ПШИ используются разработанные автором способ сенсибилизации эритроцитов медиаторами аллергии и воспаления для оценки иммунного статуса ладей и животных на клеточном и гуморальном уровнях, в условиях клиники и эксперимента; способ изучения рецепторов к медиаторам на лимфоидных и тучных клетках; способ оценки иммунотропности лекарственных соединений /иммунное РО, бляшкообразованке, реакции гемагглютинации, преципитации/.

По теме работы имеются 63 публикации, из них 3 авторских свидетельства и положительное решение на изобретенья, методические рекомендации, утвержденные МЗ. РСФСР; 12 удостоверений на рацпредложения. Сделано 25 докладов на Международных, Всесоюзных, Всероссийских, институтских совещаниях, на заседаниях Московского общества фармакологов и проблемной комиссии МЗ РСФСР по экспериментальной фармакологии.

Основные положения, выносимве на защиту;

1. Иммунная система подобно другим физиологическим системам является непременным участником реакции организма на лекарственные соединения,яды, любые биологически активные вещества /БАВ/ экзо- и эндогенного характера. Это положение лежит в основе предлагаемой концепции иммунного механизма химического гомеостаза, расширяющей представления о цензорных функциях иммунной системы в плане ее участия в поддержании химического постоянства внутренних сред организма.

2. Иммунный механизм химического гомеостаза обеспечивает сохранение химизма внутренних сред организма в условиях нормы, патологии, воздействия различных внешних и внутренних факторов, вмешивается

в фармакокинетику и фармакодинамику лекарственных соединений, ослабляя их терапевтические и токсические эффекты, способствуя развитию привыкания к шил.

3. В организме человека и животных постоянно протекает физиологический аутоиммунный процесс образования антител, специфичных медиаторам, ферментам, гормонам, различным эндогенным лигандам,участвующим в эффектах лекарственных соединений. Этот процесс обеспечивает предсуществование в крови и органах здоровых людей и ин-тактных животных лимфоцитов и антител,преадаптированных к различным БАВ эндо- и экзогенного характера, в том числе и к лекарственным соединениям.

4. Специфический иммунный ответ на клеточном и гуморальном уровнях развивается на действие БАВ, в том числе лекарственных соединений, разной структуры, молекулярной массы и направленности действия, без предварительной конъюгации их с макроносителем, вводимых в организм любым путем или вносимых в суспензию клеток крови и органов.

5. Иммунный ответ на лекарственные вещества каскаден и поликлона-лен. Его каскадность связана с развитием реакции на вводимое вещество, так и на накапливающиеся эндогенные соединения, реализующие его эффекты. Поликлональность ответа обусловлена активацией лимфоцитов, специфичных различным БАВ, имеющим в структуре радикалы, общие с радикалами в молекулах веществ-инициаторов ответа.

6. Иммунный ответ, подобно многим другим биологическим ответам на лекарственные соединения,вводимые парентерально, развивается практически немедленно.

7. Ранний иммунный ответ на БАВ реализуется через предсуществую-

щие на мембране иммунокошгетентных клеток специфические, функционально тесно сопряженные, иммунологические и фармакологические рецепторы; требует для своего осуществления участия макрофагов, Т- и В-систем иммунитета.

Апробация габоты. Материалы диссертации доложены на: II Всесоюзном симпозиуме "Ранние проявления тканевой несовместимости /Москва,1976/, 17 и У Всесоюзных съездах фармакологов /Ленинград, 1976; Ереван,1982/, Республиканской конференции "Краевые вопросы эндокринологии" /Ташкент,1978/, У1 и УП Северо-Кавказских конференциях "Актуальные вопросы иммунологии , аллергологии и молекулярной биологии" /Краснодар,1978,1983 /, 1У научной конференции "Теоретическая иммунология - практическому здравоохранению" /Таллин, 1978/, 1У Республиканской конференции ЩШ медвузов Узбекистана "Актуальные вопросы иммунологии, фармакологии и токсикологии" /Ташкент,1978/, Всероссийском пленуме анатомов, гистологов, эмбриологов /Москва,1979/, Всесоюзном симпозиуме "Ранние проявления тканевой несовместимости" /Москва,1979/, Пленуме научного Совета по эндокринологии при Президиуме АМН СССР /Иркутск,1979/, 8-к Уральской конференции фармакологов /Пермь,1980/, УП съезде фармакологов Польши /Познань,1980/, У Всесоюзной конференции "физиология соединительной ткани" /Новосибирск,1980/, Ш Всероссийском Пленуме по трансплантации и гемосорбции /Москва,1980/, У Всесоюзном коллоквиуме "Химия, биохимия и фармакология производных индола" /Тбилиси,1981/, научно-практической конференции "Достижения иммунологии и микробиологии - в лечебно-профилактическую практику здравоохранения" /Новокузнецк, 1981/, 1 Всесоюзной конференции "Теоретическая и прикладная инфекционная иымунологкя"/Москва, 1982/, УП Всесоюзном съезде патанатомов /Ташкент,1983/, заседании Пленума правления Всесоюзной проблемной комиссии "Нейрогумо-ральные механизмы регуляции иммунного гомеостаза /Пермь,1985/,на областной практической конференции невропатологов и психиатров /Пермь,1988/, на юбилейной конференции ПНИИВС /Пермь,1988/, на конференциях ПГМИ /1976-1989/.

Работа обсуждена на совместном заседании сотрудников кафедр фармакологии, патфнзиологии, ЦНШ1 и проблемной комиссии "Общая и прикладная иммунология" ПГШ , на заседании сотрудников кафедры фармакологии и ЦНЙЛ Казанского медицинского института.

Объем и структура работы: Диссертация изложена на 298 страли-

цах машинописного текста, включая введение, обзор литературы,описание методов исследований, их результатов, заключение и выводы; иллюстрирована 102 рисунками и 79 таблицами. Указатель литературы содержит 244 отечественных и 647 зарубежных источников.

Материалы и методы исследований. Эксперименты проведены на 2987 крысах весом 140-180 г, беспородных и популяции Вистар; на 298 мышах весом 8-12 г, беспородных, линии СБА и гибридах Si /СБА х C5yB<¡¿ /; 195 кроликах "Шиншилла" весом 2,5-3 кг; 10 новорожденных крольчатах той же породы весом 200 г; 18 морских свинках весом 300-350 г. Исследована кровь 775 людей.

Количество Т- и В-лшфоцитов в 1фови оценивали в реакции Е- и ЕАС-розеткообразования по методическим указаниям А.НЛередеева и др. /1980/ в нашей модификации. Лимфоциты из периферической крови выделяли седиментацией в одноступенчатом градиенте плотности фякол--верографан или в растворе желатины /Д.К.Новиков, В.И.Новикова, 1979/, из лимфоидных органов - их гомогенизацией с последующим фильтрованием через капроновый фильтр. Гаптен-специфические лимфоциты органов выявляли в реакции непрямого иммунного розеткообразо-вания /Р0/ по "Еааё&егд /1964/, лимфоциты крови - по Мс СоЛ-ne¿ et a¿ /1960/ в наших модификациях. Вещества на эритроцитах барана фиксировали глютаровым альдегидом. Свежие эритроциты трижды отмывали изотоническим раствором J/aC£ РН-7,2,центрифугируя взвесь 5 минут при 1500 об/мин.

Готовили Ъ% взвесь,соединяли с 0,25$ свежеприготовленным раствором альдегида в соотношении 1:1 и выдерживали при ¿*+37°С 15 минут. Затем эритроциты тщательно отмывали раствором и доводили взвесь ил же до первоначального объема. Для сенсибилизации готовили раствор химического вещества из расчета 1 мг на 10 ил забуфе-ренного раствораMqCÍ РН-6,4. Отмыв эритроциты этим раствором и доведя взвесь до первоначального объема,соединяли её с раствором вещества в соотношении 1:1. После инкубации при комнатной температуре 20 минут клетки отмывали дважды растворомMiC?РН-7,2. В реакции применяли 0,5% взвесь сенсибилизированных эритроцитов. Обработка глютаральдегидом лишала их способности к спонтанному Р0.

Изучая отношение иммунных РОК к популяции Т- или В-клеток, использовали принцип, описанный в литературе /Д.К.Новиков, В.И.Новикова, 1979/. Центрифугированием полностью элиминировали из исходной суспензии клеток Е- или ЕАС-розетки с последующим определением в ней РОК,иммунных к химическому веществу. Разделение иммунных

РОК производили, осаждая центрифугированием розетки той или иной специфичности.

Иммуноглобулин-несущие лимфоциты крови человека выявляли в тесте РО с применением глютаркзированных эритроцитов, нагруженных мо-ноопевдфическими антисыворотками к 3g. , м и А человека /производства ИЭ1Л им.Н.<ь.Гамалея/. В опытах на крысах использовали кроличий антикрысиный глобулин. Антисыворотки содержали 5 кг/мл белка. К 5% суспензии эритроцитов в среде 199 добавляли равный объем антисыворотки и инкубировали смесь 3 часа при температуре i"+ 37°С, после чего эритроциты пятикратно отмывали раствором МгС£ РН-7,2 и обрабатывали 0,1 ja раствором лизина. Докрытые антителами эритроциты испытывали на специфичность взаимодействия. Предварительно инкубированные с классовоспецифической антисывороткой лимфоциты не образовывали розетки с эритроцитам,несущими антитела против иммуноглобулинов соответствующего класса.

Ответ на БАВ характеризовали также в реакции бласттрансформац.;:; лимфоцитов. Реакцию с лимфоцитами крови ставили по методичеысил указаниям А.НЛередеева л др. /i960/, с клетками селезенки - по J}dРеъ et а£ /1970/ в наажх модификациях, оценивая её морфологически и по интенсивности включения в клетки %-тимиднна.

Автктелообразующие клетки /АОК/ выявляли в селезенке животных методом прямого пассивного локального гемолиза в геле по áine и Mot din /1963/ в нашей модификации. Как индикаторы применяли эритроциты барана,обработанные 0tCé3 и нагруженные химическим соединением согласно указанию PJaêCcki ujllífiez /1976/. Аутсбляш-кообразующиэ клетки /АБОК/, секоетирующие аутогеглолизины, выявляли по Н.Н.Клемпарской /1972/.

О синтезе антител судили по их наличию в супернатантах культур клеток, не стимулированных и стимулированных '¿ГА. Клетки культивировали по указаниям А.А.Михайловой /1973/.

Антитела выявляли нефелометрической реакцией Jíoigne /19136/, в реакции пассивной гемагглютинации по Sоycíen ' /1904/ в наших модификациях, в реакции энзим-меченых антител Д.В.Курманова и др. 1980/.

Макрофаги выделяли из суспензии клеток по Ii.Л.Учитель /1978/.

Для получения антисывороток к медиаторам кроликам вводили п/к в 4-5 точек туловища гадтен-протеиновые конъюгаты /0,3 мл/ в полном адъюванте ^рейнда /0,5 мл/ раз в 3 дня 4 недели. Гисташн дп-гидрохлорид !doêo Chemie, Австрия/, серотонин креатинин-суль-

фат / . Венгрия/, калликреин / KjLn.iiар .Англия/,

брадикинин триацетат / ¿аполог . Швейцария/, норадреналин битартрат / , ФРГ/ конъшгировали с человеческим альбумином

/ .Венгрия/ через карбодиимид то '¿/оае1ф*-£епс1 е-6 а£.

/1964/. Кровь забирали на 10® день по окончании иммунизации.

Белки щ)ови и культуральной жидкости фракционировали методом электрофореза в крахмальном блоке по Хилке£ и ¿¡¿оЛеъ. /1952/ в модификации И.И.Райхера и др. /1962/ и методом колоночной хроматографии на сефадексе -200 /Г.Детерман,1970/.

Сахар крови определяли ортотолуидиновым методом /З.И.Цюхно и др., 1981 /.

Содержание серотонкна в клетках определяли гистохимически с окраской по Фонтан-Массону /Б.Ромейс, 1953/.

Взаимодействие адреналина гидротартрата и норадречалина битарт-рата с глютаральдегидом изучали, анализируя спектры этих соединений и их эквимолекулярной смеси на спектрофотометре ИЯ. -20 и флю-орометрически / Э.Ш.Матлина и др.,1976/ на приборе ЕЙАН-130.

Зоспаление у крыс вызывали субплантарной инъекцией в заднюю лапу 0,1 мл водных растворов гистамина /0,1%/, серотонина /0,01$/, каллик^еина /0,Й/, брадикинина /0,006 %/, декстрана /2$/. Степень экссудации оценивали онкометрически.

Связывающую активность антител изучали ЭПР-спектроскопией /С.П. Смотров и др.,1981 /.

Результаты обработаны методом вариационной статистики по тесту Стьюдента и критерии /V и считались достоверными при Р0,05 /М.Л.Беленький, 1963/.

Результаты и их обсуждение. О функционировании в организме ИМХГ говорит наличие в крови и органах розеткообразующих клеток /РОК/, специфичных различным эндобиотикам. Определенные популяции лимфоцитов фиксируют на себе эритроциты,"несущие метку" в виде химического вещества,с образованием розеток. Существует мнение /И.Е. Ковалев, О.Ю.Полевая, 1985/, что с глютаризированными эритроцитами взаимодействуют только соединения, имеющие свободную аминогруппу. В наших исследованиях эритроциты фиксировали на себе вещества, имеющие /гистамин, серотонин, 5-ГОИУК, калликреин, брадикинин,тирозин, норадреналин, дофамин, инсулин, ГАШ.пирацетам, карбахолин, дитилин, букарбан, сульфаниламиды / и лишенные /адреналин, пред-низолон, резерпин, пиразидол, прозерин, эфедрин, индерал, мезатон, изадрин, морфзш, налорфин, строфантин / этой группировки. В пос-

леднем случае с альдегидом реагирует, очевидно, вторичные амино-или спиртовые гидроксильные группы,поскольку известно /Р.Бреттль, 1982/, что последние в мягких условиях образуют с альдегидами по-луацетали. 0 надежности фиксации веществ на эритроцитах говорит сохраняющаяся у них способность к Р0 после 10-кратного отмывания кислым /РН-4,0/ ацетатным буфером, разрушающим адсорбционные связи. Закономерности, установленные в опытах с веществами,лишеиными и имеющими -А/Нг -группу,аналогичны. Они выявлены в реакциях, требувдих /иммунное Р0, РИА/ и не требующих /бласто-,бляшкообра-зование,микропреципитация,имглуноферментный анализ / применения "меченых" эритроцитов. Надежность фиксации подтверждает возможность использования гаптенизированных эритроцитов в качестве иммуносор-бентов. Антисыворотка к адреналину не реагировала с ним после истощения "адреналиновыми", но не "гистаминовыми" эритроцитами. "Се-ротониновые" и "гистаминовые" эритроциты специфически сорбировали антитела подобно конъюгатам этих соединений с белком. В свою очередь антитела,связывая гаптен /серотонин,гистамин,рауседил,прозе-рин/на эритроцитах,лишали их способности специфически фиксироваться на лимфоцитах. Обработка глютаризированных и нагруженных серо-тоншом, адреналином или рауседилом эритроцитов 0,2^ раствором глицина, имеющим М\\г -группу, не изменяла их способности к специфическому Р0 с лимфоцитами крыс. Обработка же глютаризированных эритроцитов глицином до сенсибилизации гаптенами отменяла Р0 из-за отсутствия на них свободных альдегидных групп, уже прореагировавших с глицином. Взаимодействие адреналина гидротартрата и глютар-альдегида подтвердил анализ инфракрасных спектров этих соединений и их эквимолекулярной смеси. В спектре диальдегида имелся интенсивный пик альдегидной карбонильной группы 1712 см , в спектре адреналина в этой области - слабый широкий пик, обусловленный,очевидно, валентными колебаниями карбонильных групп в тартрат-анионе. В спектре смеси соединений поглощение, связанное с валентными колебаниями альдегидных групп, отсутствует, что подтверждает их химическое взаимодействие. Флюорометрически показано, что глютаризи-рованные эритроциты связывают 12,4$ адреналина и 24,5$ норадрена-лина, вносимых в равном количестве в ш. Ъ% суспензии эритроцитов. Отмывание не вызывает десорбции веществ с эритроцитов.

Исследования показали, что в крови, селезенке, костном мозге, аппендиксе, тонкой кишке, брыжеечных лимфоузлах здоровых людей, кроликов, крыс, мышей, морских свинок, не получавших в данный мо-

- И -

мент никаких химических веществ, постоянно присутствуют РОК, иммунные к моноаминам, кининам, ацетилхолину, катехоламинам, гормонам, ферментам, метаболитам /5-Г0ИУК/. предшественникам /тирозин/, лекарственным веществам. Это показывает, что в организме функционирует система клеток, иммунных к эндобиотикам, охватывающая вса лимфовдную ткань. Их специфичность доказана гашением РО предварительной обработкой лимфоцитов избытком соответствующего, но не другого, галтена. Апробированные вещества не нарушали жизнеспособности лимфоцитов /тест с трипановым синим /.

Наряду с иммунными РОК в крови и селезенке животных выявлялись антителообразунцие клетки /А0К/> синтезирующие антитела, в частности, к серотонину и рауседилу. Их специфичность доказана блокадой бляшкообразования предварительным внесением в гель избытка соответствующего БАВ. Наличие АОК, а также АБОК свидетельствует о постоянном синтезе в лимфоидных органах , специфичных экзо-и эндобиотикам.

С постоянным наличием антителопродуцентов связано постоянство обнаружения антител к гистамину, серотонину, адреналину, инсулину, ацетилхолину в супернатантах 120-часовых культур клеток лимфоидных органов интактных крыс и кроликов. Синтез предетерминирован генетически, так как антитела к гистамину и серотонину выявлены в культурах клеток костного мозга и кишечной трубки 8-9-13-недельных эмбрионов человека и всех лимфоидных органов, кроме тимуса, однодневных новорожденных крольчат. Число положительных реакций и титры антител повышались при внесении в культуры ФГА, цри совместном культивировании гистонесовместимых клеток. Культуральные антитела были термостабильны при С +56°С 30 минут, не диализова-лись против изотонического раствора ЯаС2 при Ь +4°С в течение 18 часов, являлись у -глобулинами.

Исследования вскрыли постоянную циркуляцию в крови здоровых людей и животных антител ко всем апробированным БАВ, что говорит об универсальной аутоиммунизации, инициируемой различными эндобио-тиками. В РПГА антитела к серотонину выявлены в крови всех лддей--доноров в титрах от ¿о$г 2,0±0,09 до 3,8±0,12. Их сыворотки в 50,9% случаев бшш положительны /титр г^ 2,32, реже 3,32 /ив реакции Уанье. Отмечена зависимость титра от времени года, суток, пола, гормональной активности организма, фазы овариально--менструального цикла, срока беременности. Специфичность антител доказана адсорбцией их из сыворотки только соответствующими гап-

тен-цротеиновш конъюгатом или гаптенизир'ованными эритроцитами, торможением реакций избытком гаптена. Антитела к серотонину извлекались из сыворотки серотонин-,но не гистамин-цротеиновым конъюгатом и наоборот. Антитела к гистамину блокировались избытком гиста-мина, но не серотонина, ацетилхолина или адреналина. Они не реагировали с соединениями далекой химической структуры.

Повышение содержания БАВ в организме вызывало обязательную реакцию ИМХГ с экспрессией специфических рецепторов на лимфоцитах и активацией РО. Инъекция бензодиазепина /5 мг/кг, п/к / увеличила в селезенке крыс число специфических РОК в 5,3 раза, введение ги-стамина /1 мг/кг, п/к / - в 3,8 раза. Мобилизация зндобиотиков в организме также усиливала РО. Через 30 минут после инъекции декст-рана /0,1 г/кг, в/бр / число дегранулированных тучных клеток в перитонеальном смыве крыс увеличилось в 7 раз и одновременно в селезенке в 5,4 раза возросло число РОК к гистамину, в 8,6 раза -- к серотонину. Повторное /через сутки/ введение декстрана усилило РО почти в 2 раза. Через 30 минут после введения рауседила /1,2 мг/кг, п/к / число иммунных к нему РОК увеличилось в крови в 2,7, в селезенке - в 4,6 раза. Параллельно возросло число РОК, иммунных к серотонину и норадреналину, баланс которых изменил рау-седил. Введение людям-волонтерам прозерина /0,3 мл 0,05$ раство-ра,п/к /, стабилизирующего ацетилхолин, через 15 минут повысило в крови число РОК, специфичных прозерину, в 2,5, ацетилхолину - в 2,6 раза. У крыс прозерин /0,05 мг/кг,п/к/ увеличил число ацетил-холиновых розеток в селезенке в Ю раз, в брыжеечном лимфоузле -в 14,6 раза. Энтеральное введение веществ также вызывало иммунный ответ. Число серотониновых РОК в селезенке крыс возрастало после перорального введения салицилата натрия,пиразидола, амитриптилина, сиднокарба.

Иммунная реакция на химические вещества всегда регистрировалась практически немедленно. Число РОК селезенки, иммунных к норадреналину, увеличилось в 5 раз уже через 3 минуты после его введения крысам /0,5 мг/кг,п/к /, через 30 минут - в 10 раз. В селезенке мышей в эти же сроки рауседил увеличил число специфичных ему РОК в 5 и 16 раз. Специфичность РО доказана тем, что введение гиста-мина / 1 мг/кг,ц/к /, увеличивая число гистаминовых РОК, не изменяло числа, иммунных к серотонину, норадреналину, ацетилхолину. Элиминация из суспензии клеток розеток одной специфичности не затрагивала числа иной. Введение крысам соединения 48/80 /1 мг/кг,

п/к / на фоне димедрола /15 мг/кг,п/к / или морфина / 5 мг/кг, п/к / снижало его розеткостимулирующий эффект в отношении гистами-на или серотонина. Обработка спленоцитов резерпинизированных крыс морфином /1x10"^ г/га на 10® клеток / уменьшала их способность к взаимодействию с "серотониновыми" эритроцитами.

По современным представлениям, иммунные РОК - Т- или В-лимфоци-ты /О.А.Гриневич,1973; Н.А.Краскина,1976 /. По надпил данным на изменение химизма в организме реагируют В-клетки. Удаление из суспензии лимфоцитов крови людей или селезенки крыс прозериновых или аце-тилхолиновых розеток числа Е-РОК не изменяло,число ЕАС-РОК уменьшало. сйиминация ЕАС-РОК снижала число РОК,иммунных к этим БАВ. Предварительная обработка спленоцитов резерпинизированных крыс кроличьей анти-Т-сывороткой не влияла на уровень РО,специфичного рау-седилу и серотонину. Внесение серотонина в суспензии клеток селезенки и тимуса крыс,увеличивая число иммунных РОК среди спленоцитов, не изменяло их исходного числа среди тимоцитов.

Введение БАВ усиливало бластогенную активность лимфоцитов. В культурах лимфоцитов крови крыс,взятой через 3 минуты после введения рауседила,число бластных форм возросло на 57,Ч/о,в культурах спленоцитов - на 75,1% по сравнению с фоном. О влиянии на бласто-генез серотонина и его специфичности говорит подавление серотони-нолитиком - морфином и усиление при повторном контакте лимфоцитов с медиатором. Внесение серотонина /10 мкг/мл/ в суспензию спленоцитов /10°/ крыс через 24 часа после его введения усилило бласто-генез в 2,4 раза. Через 30 минут после однократного введения серотонина /1 мг/кг,п/к/ интенсивность включения %-тимидина в сплено-цаты крыс возросла в 3,1 раза,а после повторного /через 24 часа/ -в 5,6 раза по сравнению с контролем.

Активация ИМХГ отмечена и на уровне зрелых антителопродуцонтов. При первом исследовании через 30 минут после введения рауседила число АОК.секретирующих антитела к серотонину,возросло в селезенке крыс в 4,2 раза. Специфичность бляшкообразования доказана тем, что внесенный в гель серотонин /1мг/мл/,связав антитела, уменьшил число бляшек в 4 раза. Предварительная блокада серотонинорецепторов лимфоцитов морфином гасила бляшкообразование в ответ на серотонин. О специфичности говорит и его усиление после повторной инъекции рауседила через 24 часа после первичной с увеличонием числа АОК в 4 раза. Изменение гуморального звена проявлялось ростом титров специфических антител.Спустя 3 минуты после введения крысам норадре-

нашила титр преципитинов увеличился в 2,1 раза, через 30 минут -в 3 раза по сравнению с контролем. Через 30 минут после введения мышам серотониаа титр -гемагглютининов возрос с 2,3±0,3 до 7,2±0,2 /Р-<• 0,001 /. Значительное увеличение титра антител к се-ротонину в крови крыс через 30 минут после его введения отмечено в реакции энзим-меченых антител. Титры антител изменялись и при мобилизации эндобиотиков в организме. Через 3 минуты после инъекции соединения 48/80 /1 мг/кг,в/бр / нарастали титры гемагглютининов к гистамину и серотонину, при введении прозерина - к нему и ацетилхолину; букарбана - к нему и инсулину; эфедрина - к нему и катехолачинам. Их специфичность доказана торможением реакций избытком соответствующего БАВ, отсутствием положительных реакций с далекими по строению от апробируемых веществами, адсорбцией из сывороток специфическими иммуносорбентами, эффектами антагонистов. Предварительное введение морфина предупреждало рост титра антител к серотонину в ответ на декстран, рауседил, соединение 48/80. Атропин и бензогексоний ограничивали повышение прозерином титра антител к ацетилхолину. Титры антител к ксено- и эндобиотикам нарастали при однократном и длительном введении БАВ. В последнем случае эффект усиливался по типу реиммунизации.

Изучение динамики развития ответа на однократное введение ра-уседила показало, что все показатели изменены уже через 3 минуты, повышены в течение 120 минут, ослабевают через 4 часа наблюдения. Через 12 часов число РОК, специфичных рауседилу, не отличалось от фона, антитела к нему выявлялись в крови только части крыс. Число РОК и титр антител к серотонину снизились до фона через 24 часа. В течение последующих 7 суток показатели не превышали фоновые, за исключением числа АБ0К, максимум которого наблюдался через 4 часа и снижение - к 7 суткам наблюдения. Эти данные указывают, что ИМХГ в ответ на ксено- и эндобиотики включается практически немедленно, возбуждаются различные популяции иммунокомпетентных клеток, в крови нарастают титры иммуноглобулинов, секреторных и сброшен-н:и рецепторных, способных быстро связать соединения, нарушившие гомеостаз организма.

Лимфоцит взаимодействует с антигеном через рецепторы,являющиеся составной частью его гжмбранц. Обнаружение B-P0K, иммунных к различным БАВ, говорит о наличии на них специфических рецепторов. У интактных животных и в условиях повышенного содержания в организме эндобиотиков проведен их пммунофармакологичесюш анализ с

применением агонистов и антагонистов медиаторов,антииммуноглобулинов. Содержание гистамина изменяли подкожным введением соединения 48/80 /1 ыг/кг/;серотонина - 48/80 или рауседила /1.2 мг/кг/; аце-тил^-холина - прозерина /0,05 мт/ю/; адреналина - эфедрина /5 мг/кг/; брадикинина - введением его самого /1 мг/кг/. Анализ проводили,вводя предварительно антагонисты или инкубируя лимфоциты с ними или агонистами ин витро до постановки РО. В опытах с ацетилхолином применяли атропин /10 мг/кг/ и бензогексоний /3 мг/кг/; с катехол-аминами - аминазин /8 мг/щ/.фентоламин /10лг/кг/,индерал /1,5 мг/кг/; с серотонином - морфин и типиндол /5 мг/кг/,дезерил /0,5 мг/кг/; с гистамином - димедрол /15 мг/кг/,пипольфен и метиамид /5 мг/кг/; с брадикинином - пармидин /0,004 мг/кг,в/бр/, которые вводили животным в/м за 30 минут до ксенобиотика или агониста, а в контроле - изотонического раствора ШСЕ. Через 3-30-120 минут определяли число РОК среди лимфоцитов щзови или органа.

В опытах ин витро клетки /10®/ обрабатывали растворами агонис-тов/1 мг/мл/ или антагонистов /1х10~°г/мл/при ¿'+37°С 45 минут и тщательно отмывали. Их жизнеспособность не нарушалась. Анализ се-ротонинсвязывающих структур показал,что избыток серотонина и его антагонисты - морфин,дезерил,типиндол ин витро снижают способность лимфоцитов интактных и получивших соединение 48/80 или рауседил животных к Р0 с эритроцитами,нагруженными серотонином. Обработка спле-ноцитов крыс морфином уменьшала среди них число розеток в 5,7 и 6,9,дезерилом - в 3 и 3,2,типиндолом - в 3,8 и 4,1 раза соответственно. Аналогичные данные получены на мышах Зг/С^В^хСВА/. Снижение активности лимфоцитов отмечено и в случае введения животным серотонинолитиков до инъекции серотонина,соединения 48/80 или рауседила. Эти данные показали наличие на лимфоцитах М-Д-Т-серотони-норецепторов. Наличие Н^-Ь^-рецепторов и их заинтересованность в ответе на гистамин доказаны тем,что последний утрачивался,если животным предварительно вводили гистаминолитики или ими или избытком гистамина обрабатывали лимфоциты до постановки РО. Аналогичный анализ с применением агонистов и антагонистов адреналина,ацетилхолина,брадикинина показал наличие на лимфоцитах человека и животных фармако-логическихоС - и^-адрено-; М-и Н-холино-;брадикининорецепторов, участвующих в запуске ИМХГ и реализации специфического РО. На лимфоцитах обнаружены также рецепторы к катехол&минам /дофамин, норад-реналин/, их предшественникам /тирозин/, ферментам /калликреин.ХЭ/, гормонам / АК1Т, гидрокортизон, инсулин /.метаболитам / 5-ГОЙУК /,

опиатам, ГАМК, лекарственным веществам.

Считается бесспорным, что рецепторы В-клеток иммуноглобулино-воё природы / Л da. , ^¿¿,1969; 1974/. Наш по-

казано, что обработка лимфоцитов /10®/ интактных крыс до ввода в реакцию РО антикрысиным глобулином /500 мкг/мл / снижала число се-ротониновых розеток в селезенке на 58,1$, брыжеечном лимфоузле -на 73,3$, костном мозге - на 57%, тонкой кишке - на 76,27°. Обработка спленоцитов резерпинизированных крыс снижала число розеток на 52$. При увеличении дозы антиглобулина до 1000 мкг/мл и удлинении времени инкубации с ним лимфоцитов вдвое ингибиторный эффект возрастал до 78,2$, но полное подавление достигалось дополнительной обработкой морфином. Антисыворотка к глобулинам человека на лимфоциты 1фыс не влияла. Обработка лимфоцитов крови людей, взятой через 30 минут после инъекции прозерина, антисывороткой к глобулинам человека снижала среди них число ацетилхолиновых розеток с 25,6$ до 4,7$ /Р-¿0,001 /. Антисыворотка к глобулинам крысы таким эффектом не обладала. Данные свидетельствуют,что в рецепции БАВ мембранами лимфоцитов заинтересованы иммуноглобулины. При помощи классовоспецифических антииммуноглобулиновых сывороток показано, что антисыворотка к Лд 41 человека снижала число серотонино-вых розеток в крови здоровых людей в 7 раз, к Пд Ы - в 2,7 раза. Антисыворотка к Щ А и нормальная кроличья сыворотка торможения РО не вызывали. Параллельно увеличенш в селезенке крыс числа РОК, иммунных к серотонину и рауседилу, через 3 минуты после введения последнего на 42,2$ нарастало число РОК, реагирующих с антикрысиным глобулином. Предварительная обработка спленоцитов /10®/ рау-седилом или серотонином /1мг/мл / тормозила этот рост. Введение людям прозерина, увеличив в крови число ацетилхолиновых и прозе-риновых РОК, повысило и число М-РОК /прирост 207$/, Здй -РОК /75$/ и А-РОК /69$/. По этим данным мембрана лимфоцитов людей и животных имеет серотонино- и холинорецепторы иммуноглобулиновои природы. В целом иммунофармакологический анализ показал наличие на В-клетках рецепторов иммуноглобулкновой и неиммуноглобулиновой природы. Последние обладают подобно первым специфическими центрами распознавания и связывания БАВ. Иммуноглобулины, выполняющие роль гаптенсвязывающих рецепторов, синтезируются лимфоцитом. Азид натрия, блокируя с-рецепторы /Б.Д.Брондз, 1972/, не влиял па способность лимфоцитов к РО, что отрицает пассивную сорбцию на них иммунных комплексов или агрегированного Ug через ?с-ре-

цепторы их мембраны/ /А.Я,Кульберг,1978/. О синтетической природе рецепторов говорят результаты опытов ин витро. Возможность прямого влияния БАВ,не конъюгированных предварительно с белком,на рецепторы изучали,внося их в краткосрочные /3,30,120 минут/ культуры лимфоцитов с последующим изучением розетко-,бласто-и бляшкооб-разования. При внесении в суспензию интактных спленоцитов /10®/ серотонина /100 мкг/мл/ число РОК возросло в 4,5 раза,при внесении гистамина - в 7,3 раза. Реакция клеток регистрировалась спустя 3 минуты,через 30 и 120 минут нарастала,снижаясь к исходу третьего часа наблюдения. РО связано с В-пулом,так как ярче проявлялось среди клеток костного мозга,селезенки,слабее- крови,отсутствовало среда тимоцитов. Внесение в суспензию клеток крови интактных крыс серотонина ми рауседила /100 мкг/мл/ в 31,4 и 19,6 раза соответственно увеличило фоновое число бластных форм лимфоцитов. При дозах 10 и 1 мкг/мл эффект был меньше. Внесение в суспензию клеток крови ацетилхолина /100 мкг/мл/ увеличило число АБОК с 0,1/» до 1,7$,внесение прозерина в той же доге - с О,Ц0> до 2%. О специфичности говорит гашение феноменов предварительной блокадой рецепторов соответствующими антагонистами,большая их выраженность после предварительной /за сутки/ инъекции рауседила в опытах с серотони-ном и норадреналином или прозерина в опытах с ацетилхолином.Цри этом ответ вызывала меньшая доза вещества /0,001 мкг/мл/,а дозы, эффективные у интактных крыс,были чрезмерными и блокировали РО. После обработки в течение 6 часов ин витро актиномицином Д спленоциты крыс не реагировали на вносимый серотонин.Их жизнеспособность при этом сохранялась. Введение крысам циклогексимида /0,25 мг/кг,п/к/ за 30 Мнут до рауседила значительно угнетало розеткостимулирующий эффект последнего. Опыты с блокаторами белкового синтеза показали,что рост числа РОК при химическом дисбалансе в организме связан с усилением синтетической активности клеток. В этом плане мы подтвердили данные Л/осах , /1975/.

Полученные результаты показали возможность ответа ин витро при действии низкомолекулярных веществ,не конъюгированных предварительно с белком,на рецепторы иммунокомпетентных клеток. По существующим представлениям активировать лимфоцит могут только бивалентные и поливалентные антигены. Однако,не исключено,что неполивалентные БАВ "становятся функционально поливалентными за счет взаимодействия с факторами Т-хелперов и клетками, презентиругацими антиген" / -Дзктап , 1987 /. Ответ,оче-

видно, может вызывать и воздействие БАВ на специфичные фармакологические рецепторы Т-В-лимфоцитов и макрофагов, что подтверждает его торможение ин витро'блокаторами фармакологических рецепторов. В опытах ин виво и ин витро установлена необходимость участия в ответе на БАВ Т-системы иммунитета. Истощение пула Т^-лшлфоцитов у крыс через 3 месяца после тимэктомии угнетало ответ на рауседил, прозерин, ацетилхолин /РО, Уд крови/, не изменяя на Т2-зависимый предшзолон. Ответ на вносимые в суспензии клеток крови человека рауседил и серотонин отсутствовал после элиминации из них Т-лимфо-цитов. Торможением Е-РО избытком БАВ на Т-клетках обнаружены серо-тонино- и морфинорецепторы, обеспечивающие участие Т-клеток в ответе на серотонин и морфин. Полученные данные несомненно свидетельствуют о контроле Т-системой функционирования ИМХГ.

№1 реализации ответа на БАВ необходимы макрофаги. Внесение в суспензию спленоцитов серотонина /100 мкг/ыл х 10° яск / повышало в ней через 30 минут число серотониновых розеток в 9,4 раза. После элиминации из нее макрофагов ответ на серотонин отсутствовал, а после их возврата - восстанавливался.

Ответ на апробированные БАВ был поликлонален. Постоянное наличие у здоровых людей и животных В-лимфоцитов с рецепторами к эн-до- и экзобиотикам указывает на их активацию. Изменение химизма организма активировало лимфоциты различной специфичности, что связано с действием введенного вещества и эндобиотиков, баланс которых изменился. Рауседил увеличивал число клеток с рецепторами к нему, серотонину, норадреналину, но не к гистамину и ацетилхолину. В ответ, однако, вовлекались лимфоциты,специфичные веществам, которые в данный момент в организм не вводились и не участвуют,насколько известно, в эффекте введенных веществ. Активация в этом случае связана с действием различных группировок в структуре вводимого ми мобилизуемых БАВ на рецепторы всех клеток, имеющих субцентры, комплементарные этим группировкам, с учетом того, что центр связывания Зд состоит из подцентров / ,1974/, и возбуждение клетки

возможно через действие на один из них /Ясекаи^я <^Д981 /. В целом-, поликлональный ответ - реакция многих клонов лимфоцитов на действующие в данный момент БАВ и различные структурные группировки их молекул. При введении рауседила росло число РОК,специфичных ему и никогда ранее не вводимому животным пиразидолу, что можно объяснить наличием у них общего ивдол-элемента. Опыты с сульфаниламидами показали предсуществоваше в селезенке интактных крыс

лимфоцитов,имеющих рецепторы к этим БАБ, и поликлональноеть ответа на букарбан с ростом числа РОК к нему и структурно близким стрептоциду и сульфавдл-натрию. Через 30 минут после введения ацетилхолина в селезенке крыс в 4,2 раза возросло число ацетил-холиновых, в 4,4 раза - карбахолиновых, в 3,2 раза - дитилиновых и в 3,5 раза - прозериновых розеток, что объясняется,возможно, общностью строения их катионных центров и эфирных связей. Поликлональноеть ответа характерна для гормонов, ферментов, медиаторов, их предшественников, то есть она универсальна, но и селективна. Возбуждались не любые лимфоциты, а те, рецепторы которых полностью или частично комплементарны действующим в данный момент на иммунную систему БАВ, обеспечивающие организм иммуноглобулинами, способными связать вещества, изменившие его гомеостаз. На клетке выявлялись рецепторы одной специфичности, так как элиминация из суспензии клеток РОК одной специфичности числа другой не меняла. Элиминация из суспензии спленоцитов резершнизированных крыс РОК, специфичных серотонину, не изменяла числа специфичных раусе-дилу. 0 моноспецифячностн говорит насыщение избытком вещества или блокада антагонистом рецепторов только одной специфичности. Предварительная обработка спленоцитов резерпинизированных крыс избытком серотонина на 88% снижала среди них число серотониновых розеток.,не изменяя числа специфичных рауседилу и норадреьалину. Аналогичные результаты получены в опытах с другими веществами. Введение крысам морфина блокировало ответ на серотонин, введение атропина - только на ацетилхолин. Поликлональноеть ответа характерна для однократного и повторного применения БАВ.

Известно, что ползклональная активация индуцируется митогена-ми, например, липополисахаридом, туберкулином /Яегтап , ,

1277/. В наших опытах введение ¿ГА / 1 мг/кг,п/к / увеличило в органах крыс число серотониновых розеток. Поликлональноеть ответа касалась чужеродных эритроцитов, белков, микробных антигенов и токсинов. Их введение вызывало активацию лимфоцитов, специфичны;: различным эндобиотикам, что, очевидно, связано с изменением их баланса в организме. Ее исключено,что эти данные объяснят механизм иолшелональнок активации лимфоцитов в ответ на различные ■ антигены / СоиЦпНо, Л/аМег , 1975/, синтеза не специфических антпгензависпмых иммуноглобулинов /Е.В.Сидорова, 1980/. Ответ ин еит^о также поликлонален. После 30-минутной инкубации спленоцитов крыс с рауссделом число РОК,специфичных ему, возросло в 5,1,

серотошшу - в 4,5 раза по сравнению с фоном, специфичных гиста-мину - не изменилось. Поликлональная активация лимфоцитов накапливала в крови различные по специфичности Og , способные связывать структурно сходные вещества. При введении ацетилхолина нарастали титры , специфичных ему, карбахолину, прозерину, дитилину. Внесение в сыворотку его избытка /1 мг/мл / тормозило реакции с указанными соединениями. Рауседил увеличивал титры , специфичных себе, серотонкку, норадреналину, а также структурно близким шрфкну и пнразидолу, преднизолон - себс и близкому по кольцевой структуре строфантину. Полиспецифичность сывороток отмечена и при длительном применении БАВ. При всей полиспецифичности сыворотки, однако, реагировали только с соединениями, структурно сходными с веществами-инициаторами ответа. Биологический смысл поликлональной реакции - быстрое обеспечение организма иммуноглобулинами, способным! практически немедленно связать вещества, нарушившие его гомеостаз.

Рост титра Од усиливал свойство сыворотки связывать химическое вещество. При внесении в мл сыворотки интактных крыс 150 ист спин-меченого норадреналина /НА/ связалось 47±0,77 мкг его. Через 3 и 30 минут после однократного введения НА / 0,5 ыг/кг,в/м / титр прециштинов к нему возрос с /аде 1,16±0,37 до 2,49±0,16 к 4,24 + 0,12 / Р 0,001 /, а сыворотка связала 55,8±0,54 и 67,4±3,0 мкг НА /Р< 0,001/. Иммунизация кроликов конъюгатом норадреншшн-белок / 4 инъекции / повысила титр гемагглвтининов с 2,16±0,48 до 11,3i 1,58 /Р-< 0,001 / и связывание НА с 45,9il,32 /30,6if до 79,3±4,89 мкг/мл /52,9%/. Рост титра прециштинов к ПА при иммунизации кроликов рауседилом с l,16io,37 до 5,78±0,18 увеличил связывание до 76,613,64 мкг/мл 0,001 /.

Повышение связывающей активности сывороток снижало биологические эффекты веществ, что установлено нами в ранние сроки после однократного введения БАВ-и при многократном его применении. Через 120 минут после введения гамма-глобулина человека /100 ст/кг, п/к / в селезенке морских свинок в 2,4 раза выросло число гпста-миновых розеток, а в крови - титр противогистаминовых антител, что предохранило животных от гистамоидной реакции /А.С.Лопатин, Т.А. Филиппенко,1984 / на гистампк /0,3 мг/кг,в/бр /. Десятидневное введение стимулятора надпочечников-АК1Т /6 мг/кг,п/к /.повысившего титр антител к гидрокортизону, ослабило влияние последнего на серотошшовое воспаление. В контроле гидрокортизон уменьшил при-

рост объема лап крыс на пике экссудации на 45,6%, а через неделю после применения АКГГ его эффект ослабился до 19,2%. Гипогликеми-зирующее действие инсулина-препарата отсутствовало у крыс с усиленным синтезом антител к эндогенному инсулину в ответ на 10-дневное применение букарбана. В контроле инсулин /0,25 ед/кг,п/к / снижал сахар крови с 3,76 ± 0,12 до 2,63 ± 0,12 м/моль/л /Р^ 0,0 01/? а в той же дозе у крыс, иммунных к букарбану, не изменял. У крыс, получивших за 16 часов до инсулина антисыворотку к букарбану /2 Ш1/100 г массы /, отсутствовал сахароснижающий эффект гормона. У животных,получавших длительно букарбан, изменялось поведение,повышался аппетит, развивались жажда и агрессивность, увеличивалась масса тела, отмечены изменения углеводного /сахар крови, сахарная кривая / обмена, характерные для недостатка гормона в организме. Эти, несколько парадоксальные, данные о диабетогенности антидиабетических препаратов вскрывают причину известной необходимости назначения сразу больших доз инсулина больным диабетом, у которых перестают действовать сульфаниламиды. Они перекликаются с данными Ка.еита.$а /1977/ о дегенеративных изменениях в островках Лал-герганса животных, получавших толбута\шд,об ухудшении лшндных показателей крови больных при лечении хлорпрояамидом, бут&дадом /П.А. Сильницкий, 1968 /, глибенкламядом /Е.П.Кашрина, Е.С.Трученкова, 1979 /. Речь идет о несомненной связи диабетогенности с аутоиг.^1уп-ной реакцией на собственный инсулин, усиленно сецерняруемый в ответ на букарбан. Этот сугубо защитный ответ при определенных условиях может привести к развитию патологического процесса.

Учитывая, что реакция на гаптен-протеиновые конъюгаты - вариант усиленного ответа на БАВ, а основная функция иммунной систегы всегда -"нейтрализация, разрушение или элиминация именно тех субстанций, которые стимулировали иммунный ответ"/Р.В.Петров,1982 /, при изучении биологической роли ИМХГ использованы сыворотка животных, получивших несколько инъекций механической смеси БАВ с чужеродной сывороткой, того или иного гаптен-протеинового конъетата. С их помощью показано, что антитела к медиаторам воспаления обладают противовоспалительным эффектом. Они влияли не только на вводимые извне медиаторы, но и на их естествешше аналога. Противовоспалительный эффект антимедиаторных сывороток отмечен црз декс-трановом воспалении, обусловленном дегрануляцией тучных клеток,выбросом и действием не только гаста!лина и серотошша / Яои;£еу , ЛепЫсИ ,1956 /, но и кининов. Вллянае антител на эндогенные

медиаторы имеет значение в плане возможности их применения для анализа медиаторной структуры различных видов воспаления и его регуляции. Эффект антител проявлялся и в условиях ин витро. Обработка срезов органов крыс антисывороткой к серотонину уменьшала число и ослабляла окраску серотонинсодержащих гранул масгоцитов коли и ар-гентофинных клеток Кульчицкого в тонкой кишке, что свидетельствует об истощении внутриклеточных резервов серотонина. В мазках крови, обработанных нормальной кроличьей сывороткой, 84$ тромбоцитов имели гранулы серотонина, обработанных антисывороткой - лишь 2,8$.

Полученные данные показали необходимость пополнения представлений о диапазоне цензорных функций иммунной системы в связи с обнаружением её участия в балансе эндобиотиков. Они позволили обосновать концепцию генетически предетерминированного физиологического ИМХГ, базирующуюся на явлении закономерного синтеза лимфоцитами Зд. к различным эндогенным соединениям , инициируемого и активирующегося при их избытке в организме. Принципиально важно, что активация постоянно функционирующего ИМХГ цроисходит практически немедленно и изменения его клеточного и гуморального звеньев регистрируются через минуты. Согласно Э.Куперу /1980/, процесс синтеза антител во многом аналогичен ответной реакции различных систем на раздражение. Без немедленности ответа существование ИМХГ физиологически бессмысленно.

Бри анализе возможных механизмов раннего ответа на БАВ необходимо учитывать, что в лимфоцитах идет постоянный синтез небольших количеств антител, специфичных различным антигенам /Г.В.Петров, 1982 /, на основе которого возможен быстрый усиленный ответ на повторный контакт с ними. Разумеется, выявление малых количеств антител возможно высокочувствительными методами. В опытах с культурами клеток животных и эмбрионов лвдей, не получавших никаких БАВ, антитела к медиаторам, ферментам, гормонам начинали выявляться в супернатантах 120-часовых культур. Очевидно, все это время происходили синтез небольших количеств и накопление антител, не улавливаемое использованной реакцией Уанье. В культурах клеток животных, иммунизированных белковыми конъюгатами БАВ, антитела выявлялись той же реакцией в 6-часовых культурах. Рост титра и большая выявляемость натуральных антител отмечены в ксеногенных и стимулированных ФГА культурах клеток. 0 постоянстве их синтеза говорит наличие у интактных животных АОК, секретирущих аутоантитела к БАВ, рост в крови здоровых людей в ответ на прозерин числа йе

только'З^М-, но и Зд -несущих лимфоцитов. Подобно реакции на различные антигены ранний ответ на ЕАВ реализуется макрофагами, Т-и В-лимфоцитами, подавляется иммунодепрессантамя, регистрируется общепринятыми метода;.®.

В реализации ранних феноменов ИМХГ участвуют мембранные способные специфически связываться с БАВ, выявляться в крови теш ке методами, что и антитела. В ответ на действие БАВ регистрируется экспрессия специфических Зд -рецепторов на лимфоцатах с ростом числа РОК в крови и органах. Согласно А.Я.Кульбергу /1987/, "... в случае активации В-лимфоцитов и превращения в лкмфобластц скорость полуобмена -рецепторов возрастает в очень большой степени: время полуобмена уменьшается до 20 минут". Рост числа РОК сопровождался активацией бластообразования, усилением включения ^Н-тимпдина в клетки, увеличением числа АОК. Утверждая иммунную природу ранних ответов на БАВ, мы допускаем участие в их реализации Я -белков нелимфювдных клеток, способных специфически взаимодействовать с эцдобиотнкагли, сбрасываться с клеток. "... Можно уже сегодня с достаточным основанием говорить о едином эволюционном происхождении всей систем распознавания,которой располагают клетки вне зависимости от своей органной локалн-зацш и функции"/А.Я.Кульберг,1987/. Мы полагаем, что рецэпторные ^и К -<5елки участвуют не только в распознавания БАВ, но а в я кинетике и эффектах.

Существующие представления связывают наличие на лимфоцитах рецзп-торов к эндобиотикаы с участием последних в Евйро-гуморальной регуляции ответа на антиген /Е.А.Корнева, 1985 /. По налим даннш рецепторы необходимы и для включения ИМХГ с целью инзпдациз а активации синтеза Зд. , специфичных эндо-и экзобкотдкхи. Известно, что до контакта с антигеном В-пул является набором шкм нов лимфоцитов, рецепторы ка-здого из которых специализированы я определенным гаптенным детерминантам /Б.Д.Брондз, О.В.РохлинДЭТЗ/. То, что ИМХГ заранее готов к реакции на различные, в тем чзеле и на не контактировавшие с организмом вещества, определяется ирод-существованием рецепторов, механизм которого до конца пэ Ескрпт. По существующем представлениям, дело в предшествующих контактах с антигенами, в случайных соматических нутацэях и хромосоззшс ро комбинациях /Бернет, 1971 /. Согласно концепции ИМХГ.уже на Е.-.брио-нальных этапах развития идет постоянная стимуляция клеток многочисленными эндобиотикама, их кетаболитаки, входащя-я в них радл-

калами, каждый из которых может играть роль антигенной детерминанты согласно представлению о многозвеньевой структуре гаптенсвя-зываыцих центров tlcj. , возможности активации клетки возбуждением одного из субцентров рецептора, поликлональности любой иммунной реакции. Иными словаки, механизм предсуществования рецепторов, натуральных антител ко многим, в том числе и к впервые встречающимся с организмом БАВ, является механизмом аутоиммунного ответа. Абсолютно не отрицая значимости предшествующих и настоящих контактов организма с химическими факторами внешней среды, мы полагаем, что наличие предетерминированных рецепторов к экзогенным веществам связан и со способностью эндобиотиков тонизировать лимфоциты, синтезирующие специфические , в том числе и рецепторные, с наличием в организме структурных аналогов экзобиотиков, входящих, между прочим, в состав различных антигенов. Цредсуществование рецепторов обеспечивает поликлональность реакций ИШ1, хотя ,в основном, она зависит от мозаичной структуры области связывания - 3g, , включающей множество субцентров / Rasen stein., RLcLoid.%. Д976/. Поскольку те -или иные субцзктрн входят в различные антигенраспоз-нандие центры 'Qq. -рецепторов лимфоцитов, последние активируются любым веществом, имеющим соответствующие радикалы. Отсюда способность простой по структуре молекулы ДНФ стимулировать тысячи клонов лимфоцитов /K"zeik. , . Наш данные о поликлональности ответа на мобилизуемые в организме вещества являются, на наш взгляд, доказательством роли эндобиотиков в поддержании предсуществования на лимфоцитах рецепторов к структурно близким ксенобиотикам. Признано, что B-лимфоциты спонтанно, по неизвестной причине, в отсутствие антигена дифференцируются в клетки, синтезирующие антитела к различным антигенам , ,1980/. Нам представляется, что одна из причин "спонтанного" синтеза -постоянная тонизация лимфоцитов эндогенными БАВ.

Теоретическое и практическое значение концепции в том, что она углубляет знание иммунных механизмов привыкания к лекарствам и ядам, показав участие в его развитии иммуноглобулинов, специфичных не только вводимому веществу, но и эндобиотикам, реализующим его эффекты; иммуноглобулинов, образующихся вследствие поликлональной активации лимфоцитов; антирецепторных антител /А.А.Быкова и др. ..989; А.С.Закс, A.A.Быкова,1988/. Концепция показывает возможные 1.ути регуляции этих механизмов воздействием на рецепторы , Т-систе-щ, макрофаги; прогнозирования и профилактики резистентности к йе-

карствам. Иммунная реакция, вызываемая лекарственным веществом и эндобиотиками, баланс которых оно нарушает , изменяет условия действия лекарства, ослабляет его эффекты, что представляет несомненный интерес при изучении его фармакокинетики и фармакодинамики. Отсюда целесообразно,очевидно, включение в характеристику фармакокинетики и фармакодинамики лекарственного вещества данных о его иммуногенности, характере и динамике иммунных сдвигов при действии его'самого и заинтересованных в его эффектах эцдобиотиков, что позволит прогнозировать развитие привыкания к нему. Способность практически любого химического вещества вызывать специфический каскадный ответ с активацией всех звеньев иммунопозза необходимо учитывать при оценке иимзшомодулирувдях свойств фармакологических веществ. Целесообразно оценивать их иммунотропность не только по влиянию на В-ответ, вызываемый чужеродными эритроцитама, белкаля / конкурентные взаимоотношения/, но и по влиянию на мешшзточннз кооперативные процессы, избирательному воздействию на субпопуляции регуляторннх клеток, определяющих развитие всех вариантов иммунного ответа, причем на фоне их функционального угнетения /с1фз-нинг иммуностимуляторов/ или активацги / скрининг иммукодепрессан-тов/, в условиях ин виво и ин витро.

Значение концепции выходит за рамки вопросов шялунофариаколо-гии. ИМХГ заинтересован при ожоговой болезни, стрессе, заболеваниях с нарушением медиаторного / паркинсонизм, поллинозы, растения, рассеянный склероз / и гормонального /сахарный диабет/ обменов. Не исключено, что в патогенезе многих заболеваний инэет место нарушение иммунной регуляции баланса эндобкотиков. Шлогзння концепции важны в плане разработки новых методов иммунодиагностики ряда заболеваний, особенно их дебютов. Разработанные и апробированные в клинике /А.А.Быкова и др.,1986-1989/ диагностические тесты - црозериновая, рауседиловая, серотониновая пробы-основаны на особенностях иммунного ответа больных указанным забодавшшЕа на действие определенных эндобиотиков, баланс которых изменяется тем или иным лекарственным веществом.

ОСНОВНЫЕ ВЫВОДЫ

1. Иммунная система человека и животных подобно другим физиологическим системам участвует в обеспечении; химического постоянства внутренней среды организма / иммунный механизм хашческого гсьгао-стаза- ЙМХГ/.

2. Введение биологически активных веществ /БАБ/, в том числе лекарственных соединений разной структуры, молекулярной массы и направленности действия, медиаторов, ферментов, гормонов вызывает у человека и животных специфичный им иммунный ответ на клеточном и гуморальном уровнях /РОК, бласты, АОК, антитела/ без предварительной конъюгации их с макроносителями. Ответ развивается на вводимое вещество / рауседил, эфедрин, прозерин, букар-бан, АКТ и другие/ и на эндогенные соединения, заинтересованные в его действии /серотонин, норадреналин, дофамин, ацетилхолин, инсулин, гидрокортизон и другие /. При повторных введениях БАВ ответ усиливается.

3. Нарастание содержания эндогенных БАВ по ходу физиологических и патологических процессов также включает ИМХГ. Это выражается изменением числа РОК, АОК, титров антител, специфичных эндобио-тикам: при смене сезона, времени суток; изменении гормональной активности организма; при ожоговой болезни, воспалении, адъювант-артрите, паркинсонизме, миастении, поллинозах, сахарном диабете; в ответ на введение чужеродных эритроцитов, белков, микробов и их токсинов.

4. Внесение различных БАВ / рауседил, прозерин, серотонин, гис-тамин, норадреналин, адреналин / в суспензию иммунокомпетентных клеток также сопровождается специфическим иммунным ответом на них и параллельно на вещества, высвобождающиеся под их влиянием из клеток крови и органов.

5. Иммунный ответ на БАВ требует кооперативного взаимодействия макрофагов, Т-и В-лимфоцитов: ответ спленоцитов на серотонин не развивается при элиминации из их суспензии ма1фофагов, но восстанавливается после их внесения; ответ на рауседил и серотонин предупреждается элиминацией Т-лимфоцитов; истощение пула Т^-лим-фоцитов /тимэктомия/ подавляет ответ на рауседил, прозерин, ацетилхолин, не затрагивая ответ на Т2~зависимые вещества /предни-золон/.

6. Иммунный ответ на БАВ реализуется через специфические рецепторы, предсуществующие на иммунокомпетентных клетках. Реакцией гаптен-специфического розеткообразования /РО/ на В-лимфоцитах крови и органов человека и животных обнаружены рецепторы к рау-седилу, прозерину, эфедрину, букарбану, ивдералу, мезатону, пи-разидолу, морфину, сульфаниламидам, пирацетаму, аминалону, кар-бахолину, дитилину, налорфину, изадрину, строфантину, а также к

серотонину, гистамину, ацетилхолину, катехоламинам, кшшнам, стероидным и пептидным гормонам. Это подтверждено эффектами антагонистов: атропина, метиамида, бензогексония, индерала, аминазина, дезерила, типиндола, морфина, пармидина, димедрола, пипольфена. Использование антиглобулинов и антииммуноглобулинов позволило на примере серотонино- и холино-рецепторов лимфоцитов людей и животных установить их иммуноглобулиновую природу. Функциональная сг ■ пряженность фармакологических и иммунологических рецепторов В-. .л-фоцитов подтверждается влиянием как антагонистов, так и антиглобулинов ин виво и ин витро на специфическое РО. Торможением Е-РО избытком серотонина и морфина показано наличие специфических рецепторов на Т-лимфоцитах.

7. Специфичность иммунного ответа на БАВ подтверждается: ин витро - торможением реакций на клеточном и гуморальном уровнях избытком вещества-стимулятора; возможностью селективной элиминации

РОК и иммуносорбции антител; ин виво и ин витро - эффектом блокады ответа на серотонин, ацетилхолин, адреналин, гистамин, бради-кинин соответствующими антагонистами; дозозависимостью ответа в определенных пределах.

8. Любое БАВ вызывает поликлональный иммунный ответ, связанный с активацией клонов лимфоцитов, специфичных вводимому веществу, эндогенным соединениям, реализующим его эффекты, различным БАВ,икающим в структуре радикалы, общие с радикалами в молекулах ведестэ-инициаторов ответа: рауседил вызывает появление РОК а иммуноглобулинов, специфичных себе и индолсодердащим шразидолу и серотонину; сульфаниламид букарбан - себе, стрептощду и сульфацзлу; преднизолон - себе и имеющему близкую кольцевую структуру строфантину; ацетилхолин - себе и включающим катионную головку нарба-холину, дитилину, прозерину.

9. Иммунный ответ ин виво и ин витро на все апробированные вещества развивается практически немедленно с повышением числа специфичных РОК, бластов ,А0К и титров антител в крови и органах уге через 3 минуты, достижением максимума через 30-60 минут и затуханием при однократном введении через 12-24 часа. Немедленность обеспечивается предсуществованием лимфоцитов, способных к специфическому распознаванию молекул и радикалов, что придает любоЗ реакции на БАВ напоминающий характер. В крови и органах здоровых лвдей и интактных животных разного возраста, не получавиих аго-нистов эндобиотиков и ксенобиотиков, постоянно обнаруживаются

РОК, АОК, аутоантитела, специфичные гормонам, ферментам, медиаторам, их предшественникам и метаболитам, различным эндогенным ли-гацдам и химическим соединениям, Предсуществование связано с включением ИМХГ в эмбрио- и онтогенезе, реагирующего на эндогенные вещества, в том числе имеющие радикалы, общие с ксенобиотиками.

10. Иммунная природа описываемого ответа на БАВ доказывается: его системностью и обеспечением ма!фо$агами, Т-и В-лимфоцитама; динамикой накопления в крови, органах к культурах клеток специфических РОК, АОК, бластов, антител; реализацией через специфические имму-ноглобулиновые рецепторы и торможением при блокаде их антииммуноглобулинами; возможностью получения анамнестического эффекта; нейтрализующим характером иммуноглобулинов, циркулирующих в крови, возможностью их пассивного переноса; регистрацией стандартными иммунологическими методами.

11. Биологическая роль иммунного механизма химического гомеостаза в основном заключается в том, что он вмешивается в фармакокинетику и фармакодинамику лекарственных соединений, ослабляя их терапевтические и токсические эффекты, участвует в поддержании постоянства химизма внутренних сред организма в условиях нормы, патологии, воздействия различных внешних и внутренних факторов.

12. Особое значение концепции ИМХГ для фармакологии и токсикологии связано с необходимостью учета её феноменологии при трактовке механизмов привыкания к лекарственным веществам и борьбы с ним, при определении тактики назначения и смены лекарственных препаратов, разработке методов терапии интоксикаций, при скрининге ш-ыунотропных средств, с возможностью использования лимфоцитов и антител, специфичных БАВ экзо- и эндогенного характера,в качестве маркеров этих соединений, позволяющих судить о их содержании в биологических средах по ходу физиологических процессов, реакций на лекарственные вещества, дцы, различные воздействия.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. A.c. 1101768,СССР Способ определения холинотропных свойств веществ /А.А.Быкова, В.В.Савкин, Г.А.Попыванова /СССР/. -Заявлено 03.02.81. Опубликовано 07.07.84//Бш.открытий и изобрет.- Ji25.-3c.

2.A.c. 1268173, СССР ' Способ выявления антигенов / А.С.Закс, АаА.Быкова, Т.А.&пкова /СССР/.-Заявлено 25.01.82. Опубликовано 07.11.86.//Бюл.открытий и изобрет.- й 41.- Зс.

3. A.C. 1363074, СССР Способ диагностики миастении /А.А.Быкова, М.Ф.Гаришина,Т.А.Юшкова /СССР/.-Заявлено 11.03.86.Опубликовано 30.12.87 //Бш.открытий и изобретений,- М8. -7с.

4. Аутоиммунный механизм регуляции химического гомеостаза и его роль в норме и патологии /А.А.Быкова, А.С.Закс.Т.А.Евтеева и др. //Сб.тр. Новые методы исследования в экспериментальной и клинической медицине.- Куйбышев, 198Ü. - С.21-23.

5. Быкова A.A. Способ оценки эффективности лечения больных гистаглобулином //Лабораторная диагностика: Тез.докл. П Всесоаз. съезда врачей-лаборантов.-М.,1979.- С.87-88.

6. Быкова A.A. Характеристика гаптенсвязывающих структур лимфоцитов, участвующих в иммунной реакции на лекарственное соединение //Фармакологически активные вещества - медицине: Тез.докл.

У Всесоюз.съезда фармакологов.- Ереван,1982.- С.58.

7. Быкова A.A., Гаришина М.Ф., Слаутина Г.М. О состоянии аутоиммунного механизма регуляции баланса катехоламинов и ацетилхолина у больных с синдромом паркинсонизма //Достижения иммунологии и микробиологии - в лечебно-профилактическую практику здравоохранения: Тез.докл. областной научно-практической конф.-Новокузнецк, 1981,- C.100-1U1.

8. Быкова A.A.,3акс A.C. Об условиях образования и некоторых свойствах антител к основным медиаторам нервного импульса и воспаления //Роль иммунных механизмов в развитии различных заболеваний: Сб.науч.тр. /Пермский мед.ин-т.-1976. - Т.138.- С.35-37.

9. Быкова A.A.,3акс A.C. Клеточный компонент иммунного механизма регуляции баланса эндогенных биологических соединений.//Актуальные вопросы иммунологии,аллергологии и молекулярной биоло-гии:Сб.науч.тр. /Кубанский мед.ин-т.-Краснодар,1978.-Т.63.-С.77--79.

Ю.Быкова A.A.,3акс A.C.Клеточный уровень иммунного механизма поддержания химического гомеостаза //Теоретическая иммунология -практическому здравоохранению: Тез.докл. 1У науч.конф. по проблеме клинической иммунодиагностики.- Таллин,1978.- С.145-146.

11.Быкова A.A.,3акс A.C. Антитела к медиаторам,ферментам,гормонам как регуляторы их баланса в организме //Там же.-С.439-440.

12. Быкова A.A.,3акс A.C. Иммунный механизм регуляции содержания гормонов в организме//Экспериментальная разработка и применение в клинике современных методов иммунологических исследований^.науч.тр./Пермский мед.ин-т.-1978.- Т.144,- С.26-28.

13. Быкова A.A., Закс A.C. Иммунные механизмы регуляции содержания медиаторов// Нейромедиаторы в норме и патологии: Тез.докл. 1У Всесошз.симпоз.- Казань, 1979.- С.51-52.

14. Быкова A.A.,Закс A.C. 0 рецепторах лимфоидных клеток к медиаторам воспаления и отторжения и их роли в иммунном ответе организма// Ранние проявления тканевой несовместимости: Тез.докл. Ш Всесоюз.симпоз. М.,1979.- С.15-16.

15. Быкова A.A.,Закс A.C. Клеточный компонент иммунного механизма сохранения химического гомеостаза внутренней среды организма //ЖГЭЛИ /Прага/.-1980.- Т.24.- № 2.- С.201-207.

16. Быкова A.A.,Закс A.C. Иммунный механизм баланса экзо- и эндогенных химических соединений //Фармакологические пути решения актуальных клинических проблем: Тез.докл. 8-ой Уральской науч.конф. фармакологов.- Пермь,1980.- С.19-20.

17.Быкова A.A.,Закс A.C. Лимфоидная ткань и механизм иммунной регуляции химического гомеостаза // Физиология и патология соединительной ткани: Тез.докл. У Всесоюз.конф.-Новосибирск,1980.-Т.1.~ С.7-8.

18. Быкова A.A.,Закс A.C. Иммунофармакологический анализ гап-тенсвязыващих структур мембраны .лимфоцитов крыс //Иммунология.-1981.- № 5.- С.15-19.

19. Быкова A.A., Закс A.C. Эндогенные индолы и предсуществование рецепторов к резерпину на мембранах лимфоидных клеток //Химия, биохимия и фармакология производных индола: Тез.докл. У Все-соиз.коллоквиума,- Тбилиси, 1981.- С.159.

20. Быкова A.A.,Закс A.C. Аутоантитела к медиаторам воспаления как факторы естественной резистентности организма //Теоретическая и прикладная инфекционная иммунология: Тез.докл. 1-й Всесоюз.конф. М., 1982.- С.16-17.

21. Быкова A.A.,Закс A.C. Поликлональный характер иммунного ответа на лекарственные вещества - производные индола //Химия, биохимия и фармакология производных индола: Тез.докл. 1-й Всесоюз. конф. - Тбилиси,1986.- С.192.

22. Быкова A.A.,Закс A.C., Евтеева Т.А. Клеточные и гуморальные показатели иммунного механизма химического гомеостаза у больных поллинозами // Актуальные вопросы иммунодиагностики и иммуно-регуляции: Тез.докл. У науч.конф. по проблеме клинической иммунологии.- Таллин,1982.- С.257-258.

23. Быкова A.A..Юшкова Т.А..Быкова К.В. Антирецепторные анти-

тела: эффекты, способы выявления, роль в привыкании к лекарствам, диагностические возможности //Мат. 1 Всесоюз.съезда иммунологов,-М., 1989." T.I.- C.I6.

24. Закс A.C., Быкова A.A. Иммунный механизм регуляции содержания в крови некоторых медиаторов реакции воспаления и отторжения //Ранние проявления тканевой несовместимости: Тез.докл. 2-го Всесоюз.симпоз.-М. ,1976,- С.143.

25. Закс A.C., Быкова A.A. Антитела против ацетилхолина и их влияние на его биологические эффекты //Вопросы экспериментальной

и клинической иммунологии: Сб.науч.тр. /Пермский мед.ин-т./-1976,-Т.135.- С.97-99.

26. Закс A.C.,Быкова A.A. Медиаторы нервного импульса и воспаления как индукторы специфического антителообразования у лщцей и животных //Роль иммунных механизмов в развитии различных заболеваний: Сб.науч.тр./Пермский мед.ин-т/.- 1976.- Т.238.- С.37-39.

27. Закс А.С.,Быкова A.A. Об иммунном механизме регуляции баланса химических соединений эндогенного происхождения //Физиол. журн. СССР.- 1977.- Т.63.- Ii 9.- С.1319-1325.

28.Закс A.C., Быкова A.A. О состоянии иммунного механизма регуляции баланса медиаторов, ферментов,гормонов при стрессе и при реакции отторжения //Инфекдаонно-аллергический и аутоаллергический процессы в патогенезе неинфекционных заболеваний: Сб.науч.тр./ Пермский мед.ин-т/.-1977.- Т.142.- С.40-44.

29. Закс A.C., Быкова A.A. Антитела против брадикинина.калли-креина и воспаление //Патол.физиология.-1978,- № 3.- С.66-67.

30. Закс А.С.,Быкова A.A. Физиологическая система аутоиммуни-тета к медиаторам,ферментам,гормонам при гомотрансплантацяи кожи //Актуальные вопросы пересадки органов и тканей: Сб.науч.тр./ МОЛГМИ им. Н. И. Пирогов а.-1978.- Т.СХ111.- С.84-85.

31. Закс A.C., Быкова A.A. Об участии аутоиммунного механизма регуляции химического гомеостаза в реакциях на стрессорные воздействия //Патол.физиология.-1979.- & 4.- С.23-28.

32. Закс A.C.,Быкова A.A. Иммунный механизм регуляции химического гомеостаза при перегрузках //Авиакосмическая медицина: Тез. докл. У1 Всесоюз.конф. по космической биологии и авиакосмитаскоä медицине,- Москва-Калуга, 1979.- 4.2.-С.172-173.

33.Закс А.С.,Быкова A.A. Об участии иммунной системы химического гомеостаза в фармакокинетике, механизме действия и привыкания к лекарственным веществам //Фармакологические пути решения клина-

ческих проблем: Тез.докл. 8-й Уральской науч.конф.фармакологов.-

Пермь, 1980,- С.40-41. , л ,, , . .

34. Zaks, Л. укоОаА-Д- С/гет^с ■Homoesia.stS Lmrnune

JUtchanism and ¿is Rote in 2b s^ ¿ciian and JdaptaiL -an //Mstia-ctg of. Ptese/rtaliai's.; VI/ Сапдге.^ af -¿he tPo^iSk ^czmocoiogicoi. - Фенпап., /PSO. - Р. 255.

35. Закс А.С.,Быкова A.A. 0 раннем включении иммунного механизма химического гомеостаза в ответ на экзо- и эндогенные химические соединения //Фармакология и токсикология.-1981,- № 4.- С. 453-459.

36. Закс A.C.,Быкова A.A. Рецепторы лимфоцитов и иммунный механизм химического гомеостаза // Актуальные вопросы иммунофарма-кологии: Сб.науч.тр.- М., 1987.- С.152-158.

37.Закс A.C., Быкова A.A., Болотская Н.В. Иммунный механизм химического гомеостаза и феномен десенсибилизации //Актуальные вопросы иммунологии, аллергологии и молекулярной биологии: Тез. докл. УП Северо-Кавказской конф.- Краснодар, 1983.- С.182-193.

38. Закс A.C..Быкова A.A., Евтеева Т.А. Устойчивость к гипо-гликемизирующим сульфаниламидам и бигуанидам и еёиммунный генез //Фармакология и токсикология.- 1978,- А 5,- С.594-597.

39. Закс А.С.,Быкова A.A..Евтеева Т.А. Иммунные и аутоиммунные реакции в механизме действия лекарственных веществ, их дето-ксикации, развития привыкания к ним //фармакология и токсикология. - 1979.- J6 5.- С.541-545.

40. Закс A.C., Быкова A.A., Пономарева С.И. О бионейтрализу-ющих свойствах антител к серотонину //фармакология и токсикология. -1976.- № 6.- С.675-678.

41. Закс A.C., Быкова A.A., Слаутина Г.М. Участие иммунного механизма химического гомеостаза в действии и адаптации к действию лекарственных веществ, ядов и факторов малой интенсивности //Всесоюз •учредительская коыф. по токсикологии: Тез.докл,— М., 1980,- С.94.

42. Закс A.C., Быкова A.A., Суслина М.Я. Антитела к ацетилхо-лину, гистамину,серотонину, брадикинину, калликреину, их характеристика и эффекты применения //Фармакология - здравоохранению: Тез.докл. 1У Всесоюз.съезда фармакологов.- №.,1976.- С.77-78.

43. Закс А.С.,Быкова A.A. .Суслина ИЛ. Антитела к медиаторам воспаления как его ингибиторы и анализаторы //Фармакология и токсикология.- 1977.- & 2.- С.190-193.

44. Закс A.C.,Быкова A.A..Юшкова Т.А. Аутоиммунный и диабето-

генный эффекты букарбана //Фармакология и токсикология.-1983,-№ 4,- С.79-82.

45. Закс A.C., Быкова A.A., Юшкова Т.А. Экспресс-микрометод определения количества Т- и B-лимфоцитов в крови человека /Даб. дело.- 1986.- № 4.- С.242-243.

46. Закс A.C., Быкова A.A..Юшкова Т.А. B-клеточная реакция иммунитета в диагностике инфекционной и неинфекционной патологии // Актуальные проблемы прикладной иммунологии, биотехнологии и производства бактерийных препаратов: Тез.докл.науч.конф. Пермского НИИ вакцин и сывороток,-Пермь, 1988.- С.142-143.

47. Закс А.С.,Быкова A.A..Юшкова Т.А. Макрофаги и иммунный механизм химического гомеостаза //Биологическая активность новых продуктов органического синтеза: Межвузовский сб.науч.тр./Пермский гос.университет.- 1989.- С.29-31.

48. Изучение иммунного механизма химического гомеостаза методом ЭПР-спектроскопии /А.С.Закс,А.А.Быкова, П.М.Аширов и ^.//Современные проблемы гемосорбции и трансплантации: Мат.Ш Воерос.Пленума по трансплантации и гемосорбции.- М.,1980,- С.112.

49. Иммунологический анализ участия эндогенных опиатов и бен-зодиазепинов в эффектах акупунктуры /А.А.Быкова,А.С.Закс,Н.В.Бо-лотская и др.//Актуальные вопросы иммунологии, аллергологии и молекулярной биологии: Тез.докл. УП Северо-Кавказской конф. - Краснодар, 1983.- С.94-95.

50. Иммун-охимический гомеостаз /A.A.Быкова, А.С.Закс, Т.А.Ев-теева и др.// Регуляция иммунного гомеостаза: Мат.Ш Всесоюз.симпозиума.-!., 1982.- С.130-131.

51. Иммунный механизм химического гомеостаза и зоспаление /HjC.

Ефимова, A.C.Закс,A.A.Быкова и др.//Воспаление, гиперчувствительность, иммунопатология: Тез.докл. УП Всесоюз.съезда патологоанатомов,- Ташкент,1983.- С.145-156.

52. Иммунологический способ изучения химической структуры лаб-роцитов /А.С.Закс, А.А.Быкова, Г.А.Попыванова и др.// Экспериментальная разработка и применение в клинике современных методов иммунологических исследований: Сб.науч.тр. /Пермский мед.ин-т/.-1978.- Т.144.- С.23-26.

53. Некоторые данные к механизму действия интала /А.А.Быкова, А.С.Закс, Т.А.Евтеева и др./Димико-фармацевтич.журн.1980.- & 9.-С.11-13.

54. О наличии на лимфоидных клетках рецепторов к эндо- и эк-

зогеннш химическим соединениям, их характеристике и взаимосвязи /А.С.Закс, А.А.Быкова, Т.А.Евтеева и др.//Регуляция иммунного гомеостаза: Мат. Ш Всесоюз.симпоз. -Л., 1982.- С.143-144.

55. Способ иммунодиагностики миастении /А.А.Шутов,А.А.Быкова и др.//Методические рекомендации.-Пермь, 1989.- 5с.

56. О ранней специфической иммунной реакции на экзо- и эндогенные соединения /А.А.Быкова, А.С.Закс, Т.А.Евтеева и др.//Механизмы регуляции иммунитета и ранняя иммунологическая диагностика инфекций: Сб.науч.тр./Пермский мед.ин-т/.- 1980,- Т.149.- С.31-35.

57.0 фармакологической регуляции иммунного ответа на химическое вещество /A.C.Закс,А.А.Быкова,Т.А.Евтеева и др.//Там же.-С. 35-38.

58. Об изменениях иммунного механизма регуляции баланса медиаторов при стрессе, воспалении, реакции отторжения и сепсисе /A.C. Закс,А.А.Быкова,Т.А.Евтеева и др.//Нейромедиаторы в норме и патологии: Тез.докл.Всесоюз.симпоз.- Казань,1979,- С.129-131.

59. Об иммунном механизме резистентности больных сахарным диабетом и животных к инсулину и букарбану при их длительном применении /A.C.Закс,А.А.Быкова,Т.А.Евтеева и др.//Инфекционно-аллерги-ческий и аутоаллергический процессы в патогенезе неинфекционных заболеваний: Сб.науч.тр./Пермский мед.ин-т/.- 1977.- ТД42.- С.44--47.

60. Поликлональность реакции иммунного механизма 'Химического гомеостаза на эндо- и экзогенные биологически активные вещества /А.С.Закс, А.А.Быкова, Т.А.Евтеева и др.//Перспективы развития исследований по естественным наукам на Западном Урале в свете решений ХХУ1 съезда КПСС: Сб.науч.тр. /Пермский гос.университет/.-1981,- С.99.

61. Селективный медиаторный иммунодефицит у больных рассеянным склерозом, его наследственный характер, значение в диагностике заболевания /МЖГаришина, А.А.Быкова, Т.А.Юшкова //Сб.тр. "Основные проблемы в неврологии!- Пермь,1990 /в печати/.

62. Способ диагностики рассеянного склероза /Т.А.Йдкова,А.А. Быкова,М.Ф.Гаришина //Положительное решение по заявке на изобретение от 17.10.89 г.

63. Способ иммунодиагностики миастении /А.А.Быкова,М.Ф.Гари-шина, А. А. Шутов и др. //Журн. неврологии и психиатрии.- 1989,- .-С.79-83.