Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Фармакологическая коррекция нарушений иммунного гомеостаза при сочетанном воздействии геатотоксических агентов и постоянного магнитного поля

□03062470

На правах рукопис

(и

ш;/

Литвинова Екатерина Сергеевна

ФАРМАКОЛОГИЧЕСКАЯ КОРРЕКЦИЯ НАРУШЕНИЙ ИММУННОГО ГОМЕОСТАЗА ПРИ СОЧЕТАННОМ ВОЗДЕЙСТВИИ ГЕПАТОТОКСИЧЕСКИХ АГЕНТОВ И ПОСТОЯННОГО МАГНИТНОГО ПОЛЯ

14.00.25 - фармакология, клиническая фармакология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Курск - 2007

003062470

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Курский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию».

Научные руководители:

доктор медицинских наук, профессор Лазарев Алексей Иванович кандидат медицинских наук, доцент Дудка Виктор Тарасович

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Филиппенко Николай Григорьевич кандидат медицинских наук Толмачев Николай Егорович

Ведущее учреждение:

Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Российский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию».

Защита состоится » <хл Ь_и$2007 г. в 1^-^^часов на заседании диссертационного совета К 208.039.01 при Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Курский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» (305041, г. Курск, ул. К. Маркса, 3).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО КГМУ Росздрава.

Автореферат разослан « -ЯЗ. » ьИСЦртСу 2007 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Взаимоотношения больших групп людей с внешней средой характеризуются высокой степенью неустойчивого равновесия, которое поддерживается постоянным напряжением механизмов адаптации. Периодическое или постоянное действие на организм человека экстремальных факторов предъявляет высокие требования к регуляторным системам организма и в случае превышения их резервных возможностей приводит к возникновению патологических состояний. Техногенные физические поля являются существенным экологическим фактором для человеческой популяции в каждом многонаселенном городе (Григорьев Ю.Г., 2004; Евдокимов Е.В. и др., 2006).

В настоящее время в литературе достаточно широко освещены эффекты воздействия переменного электромагнитного поля на организм человека, тогда как влияние постоянного магнитного поля, тем более на состояние иммунного гомеостаза, остается малоизученным (Калуцкий П.В., Вельский В.В., 1999; Ку-валдин А.Б., 2002; Мальчевский В.А. с соавт., 2003). Так, например, экспериментально установлено, что длительное воздействие аномального магнитного поля в постнатальном периоде приводит к напряжению фагоцитарного звена антиинфекционной защиты. Присоединение в этих условиях инфекционного агента вызывает срыв адаптационных систем и утяжеление течения инфекционного процесса (Разинькова Н.С., 2006).

Помимо этого, в настоящее время имеет место существенное учащение токсических, в том числе и лекарственных, поражений различных органов и тканей. Значение этих поражений возросло в связи с либерализацией доступа населения к медикаментам, появлением в свободной продаже большого количества безрецептурных лекарственных средств, широким распространением агрессивной рекламы при отсутствии объективной информации о возможном побочном действии (Конопля H.A., 2001).

Большой объем накопленной в последнее время информации о патомор-фологии печени заставляет по-новому взглянуть на механизмы развития печеночной патологии, роль печеночных клеток в развитии патологии других систем при поражении данного органа, в том числе и на нарушения иммунного гомеостаза (Зорькина A.B., 2003; Прокопенко Л.Г. с соавт., 2004; Лазарева Г.А. и др., 2006).

Таким образом, в современном мире каждый в той или иной степени подвергается сочетанному воздействию гепатотоксических ксенобиотиков и действию постоянного магнитного поля. Исходя из этого, представляется актуальным поиск адекватных фармакологических способов коррекции нарушений иммунного гомеостаза, возникающих при токсическом поражении печени в условиях воздействия постоянного магнитного поля.

Цель работы: разработка способов фармакологической коррекции нарушений иммунного гомеостаза, возникающих при сочетанном воздействии гепатотоксических агентов и постоянного магнитного поля.

Задачи исследования.

1. Оценить иммунную реактивность и функциональные нарушения в печени экспериментальных животных при отравлении гепатотропными ядами в условиях воздействия постоянного магнитного поля.

2. Изучить морфологические изменения в печени и селезенке при токсической гепатопатии в условиях воздействия постоянного магнитного поля.

3. Оценить взаимосвязь нарушений морфофункционального состояния гепатоцитов, иммунной реактивности и функции нейтрофилов периферической крови при токсическом поражении печени в условиях воздействия постоянного магнитного поля.

4. Разработать способы фармакологической коррекции иммунного гомео-стаза при токсических поражениях печени в условиях воздействия постоянного магнитного поля, вызывающих угнетение иммунной реактивности.

5. Разработать способы фармакологической коррекции иммунного гомео-стаза при токсических поражениях печени в условиях воздействия постоянного магнитного поля, вызывающих развитие иммунологической гиперреактивности.

Научная новизна. Расширены существующие представления о действии постоянного магнитного поля на иммунный гомеостаз. Получены новые данные о морфофункциональных нарушениях в печени, изменениях антиоксидант-ного статуса, иммунологической реактивности и функционально-метаболической активности нейтрофилов периферической крови при сочетан-ном воздействии различных гепатотоксических агентов и постоянного магнитного поля. Выявлена взаимосвязь нарушений показателей морфо-функциональной активности гепатоцитов и антиоксидантного статуса с изменениями иммунологических функций в условиях длительного воздействия постоянного магнитного поля при остром токсическом поражении печени. Установлено, что использование сочетаний полиоксидония с мексидолом, имунофа-на с мексикором, эссенциале с деринатом или с комплексом витаминов и вита-миноподобных соединений (никотинамид, тиамин, рибофлавин, а-липоевая кислота, коэнзим <3) или в сочетании с глутоксимом и рибоксином эффективно в коррекции нарушений иммунологической реактивности и функционально-метаболической активности нейтрофилов периферической крови. Выявлено, что в коррекции иммунной недостаточности, вызванной действием постоянного магнитного поля и индометацином, наиболее эффективна схема с использованием эссенциале и дерината, тогда как при иммунологической гиперреактивности, развивающейся на фоне длительного воздействия постоянного магнитного поля и токсического тетрахлометанового поражения печени, эффективно сочетание эссенциале с рибоксином и глутоксимом.

Практическая значимость. Экспериментально обоснована целесообразность клинического применения сочетаний полиоксидония и мексидола, иму-нофана и мексикора, эссенциале с деринатом или с комплексом витаминов (никотинамид, тиамин, рибофлавин) и витаминоподобных соединений (а-липоевая кислота, коэнзим 0) или в сочетании с глутоксимом и рибоксином в коррекции нарушений иммунного гомеостаза при токсическом поражении печени и длительном воздействии постоянного магнитного поля. Углублены существующие 4

представления о влиянии постоянного магнитного поля на иммунологическую реактивность и функционально-метаболическую активность нейтрофилов периферической крови и взаимосвязь этих изменений с нарушениями функционально-метаболической активности гепатоцитов и состояния антиоксидантной системы защиты организма в условиях острого токсического поражения печени.

Материалы диссертации вошли в учебные рабочие программы и используются в лекционных курсах и на практических занятиях ряда кафедр фармакологии, клинической фармакологии, биологической химии, внутренних болезней Курского, Российского, Северного, Самарского и Санкт-Петербургского государственных медицинских университетов и академий.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. У животных с острым индометациновым токсическим поражением печени на фоне воздействия постоянного магнитного поля по сравнению с изолированным влиянием токсического или физического воздействия повышается выраженность патоморфологических изменений в печени, синдромов иммунно-воспалительного, цитолиза, холестаза, снижается функционально-метаболическая активность нейтрофилов периферической крови, развивается вторичный иммунодефицит.

2. У животных с острым тетрахлорметановым токсическим поражением печени на фоне воздействия постоянного магнитного поля снижается функциональная активность гепатоцитов и повышается функционально-метаболическая активность нейтрофилов периферической крови и выраженность гуморального иммунного ответа, гиперчувствительность замедленного типа, чем у животных только с токсическим поражением печени.

3. В условиях развивающейся иммуносупрессии, вызванной совместным действием гепатотропного агента и постоянного магнитного поля, использование дерината и эссенциале эффективно корригирует морфофункциональные и иммунные нарушения.

4. Более эффективной схемой коррекции гиперфункции иммуноцитов при остром токсическом поражении и воздействии постоянного магнитного поля является сочетание эссенциале, глутоксима и рибоксина.

Апробация работы. Основные положения диссертации представлены на научных конференциях Курского государственного медицинского университета и Центрально-Черноземного научного центра РАМН (2002-2004 гг.), 5-м Конгрессе Российской ассоциации аллергологов и клинических иммунологов «Современные проблемы аллергологии, иммунологии и иммунофармаколо-гии», Москва (2002 г.), II Международной конференции «Клинические исследования лекарственных средств», Москва {2002 г.), II конференции Российской академии естествознания «Практикующий врач», Москва (2003 г.), I Всероссийской научно-практической конференции патологоанатомов «Актуальные вопросы патологической анатомии», Орел (2005 г.), X Российской конференции «Гепатология сегодня», Москва (2005 г.), VI съезде аллергологов и иммунологов СНГ, Российском национальном конгрессе аллергологов и иммунологов, III Российской конференции по иммунотерапии (Москва, 2006), совместном засе-

дании кафедр фармакологии, фармацевтической и токсикологической химии с курсом аналитической химии, клинической фармакологии, патологической анатомии, биологической химии Курского государственного медицинского университета (2006 г.).

Публикации. По материалам диссертации в центральной и местной печати опубликована 21 работа, в том числе 5 - в рекомендованных ВАК РФ, в которых содержится полный объем информации, касающейся темы диссертации.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 143 страницах машинописного текста, иллюстрирована 39 таблицами и 28 рисунками, состоит из введения, обзора литературы (2 главы), описания методов исследования, изложения собственных результатов (б глав), заключения, выводов, практических рекомендаций, библиографического указателя, включающего 141 отечественный и 62 иностранных источников.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ Материалы и методы исследования

Объект исследования. Исследования проведены на 353 крысах Вистар массой 120-180 г. В опытах использовали животных, прошедших карантинный режим вивария Курского государственного медицинского университета и не имевших внешних признаков каких-либо заболеваний. Все животные содержались в одинаковых условиях, на обычном пищевом режиме. Для получения статистически достоверных результатов группы формировали из 8-10 животных. В контрольные и опытные группы входили животные одного возраста, полученные из питомника одновременно. Разброс в группах по исходной массе не превышал ±10%. Все исследования проводили в одно и то же время суток, с 8 до 12 часов, с соблюдением принципов, изложенных в Конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и других целей (г. Страсбург, Франция, 1986). Животных выводили из опыта декапитацией под эфирным наркозом. Исследованию подвергали плазму, сыворотку крови, эритроциты, полинуклеарные лейкоциты, лимфоциты периферической крови, ткань печени и селезенки и подколенных лимфатических узлов.

Экспериментальные модели. Токсическую гепатопатию у лабораторных животных моделировали путем внутримышечного введения четыреххло-ристого углерода (3 мл/кг в виде 50% раствора в оливковом масле пятикратно с интервалом 24 ч.) (Алексеева H.H. и др., 1991) и внутрижелудочным введением индометацина (трехкратно, с интервалом 24 ч., по 5 мг/кг) (Скакун Н.П., Клим-нюкЕ.В., 1990) (табл. 1).

ПМП, соизмеримое с аномальным геомагнитным полем, воспроизводили в специально созданной установке, состоящей из высокостабилизированного источника постоянного тока и колец Гельмгольца с радиусом 1,5 м. Внутри колец создавалось ПМП с индукцией 3x10"4 Тл, вектор которого находился на суперпозиции с вертикальной составляющей вектора геомагнитного поля на территории г. Курска. Испытуемые лабораторные животные помещались в центр установки, где неоднородность поля не превышала 30% (Калуцкий П.В., 1997).

Таблица 1

Моделирование острого токсического поражения печени на фоне воздействия ПМП

А. На первые сутки

ЧХУ + + + + +

им + + +

ПМП + + + + + + cd СП

Дни 1-25 26 27 28 29 30 31

ЧХУ + + + + +

им + + + «

ПМП + + + + + + + & РЗ го

Дни 1-11 12 13 14 15 16 17-30 31

Примечание. Фармакологическая коррекция при А и Б начинается с 11, 16 или 21 дня воздействия ПМП.

Использование фармакологических препаратов. Исследовали влияние на иммунологическую реактивность и ФМА нейтрофилов периферической крови фармакологических препаратов, перечень, схемы и способы введения которых представлены в табл. 2.

Таблица 2

Применение препаратов _

Препарат Фирма-изготовитель Способ введения Разовая доза, мг/кг Схема введения

Количество введений Интервал между введениями, часы

Эспа-липон «Esparma» внутривенно 15 20 24

Коэнзим Q «ВитаЛ айн» внутрижелудоч-но 1 20 24

Тиамин «Верофарм» внутримышечно 1 20 24

Рибофлавин «Дальхимфарм» внутримышечно 0,15 20 24

Никотином ид «Борисовский ЗМП» внутримышечно 1,5 20 24

Глутоксим «ФАРМА ВА» внутримышечно 0,5 20 24

Рибоксин «Вирион» внутривенно 5 15 24

Эссенциале H «Рон-Пуленк Рорер» внутривенно (по фосфолипидам) 12 15 24

Деринат «Техномедсервис» внутримышечно 20 10 48

Имунофан «Бионокс» внутримышечно 0,001 10 48

Мексикор «ЭкоФармИнвеет» внутримышечно 6 20 24

Полиоксидо-ний «Петровакс Фарм» внутримышечно 0,15 10 48

Мексидол «Элл ар а» внутримышечно 3 20 24

Способ введения препарата соответствовал рекомендациям, приведенным в справочнике М.Д. Машковского «Лекарственные средства» (2002), и инструкциям по применению препаратов.

Приготовление антигена. Схемы иммунизации. Оценка интенсивности развития иммунного ответа н функционально-метаболической активности нейтрофилов периферической крови. В качестве антигенов в опытах использовались эритроциты барана.

Для развития гуморального иммунного ответа ЭБ вводили внутри-брюшинно однократно из расчета 2x109 клеток на 1 кг массы тела. Выра-

женность ГИО. оценивали на пятые сутки после иммунизации путем определения в селезенке числа АОК (Мальберг К., Зигль Э., 1987).

ГЗТ у крыс индуцировали внутрибрюшинным введением 108 ЭБ в 0,5 мл 0,15 М раствора натрия хлорида (сенсибилизирующая доза). Через 4 суток в подушечку стопы правой лапки вводили 10б ЭБ в 0,1 мл физраствора (разрешающая доза). О выраженности ГЗТ судили по разнице масс регионарного и контрлатералыюго лимфатических узлов и по разнице количества в них карио-цитов (Федосеева Т.В. и др., 1993).

Функционально-метаболическую активность нейтрофилов периферической крови оценивали по величинам фагоцитарного числа, фагоцитарного индекса и индекса активности фагоцитов (Медведев А.Н., Чаленко В.В., 1991), показателей спонтанного и индуцированного зимозаном НСТ-теста, индексу стимуляции и функциональному резерву нейтрофилов (Щербаков В.И., 1989).

Определение биохимических параметров. В сыворотке крови экспериментальных животных определяли концентрацию общего билирубина, фибриногена и активность аспартат- и аланинаминотрансфераз, щелочной фосфатазы, 7-глутамилтранспептидазы, ставили тимоловую пробу. Величины всех перечисленных показателей определяли унифицированными методами с использованием стандартных наборов реактивов (Меньшиков В.В., 1987). Для определения повреждения печени индикаторами синдрома цитолиза являлась активность ACT и АЛТ; синдрома холестаза - активность ЩФ, ГГТ и концентрация билирубина; иммуновоспалительного синдрома - тимоловая проба; нарушения синтетической функции гепатоцитов - концентрация фибриногена (Титов В.Н., 1996; Подымова С.Д., 1998).

Выраженность перекисного окисления липидов оценивали по содержанию ацилгидроперекисей и малонового диальдегида (Бенисович В.И., Идель-сон Л.И., 1973; Гаврилов В.Б., Мишкорудная М.И., 1983). Кроме этого, в сыворотке крови определяли активность каталазы (Кушманова О.Д., Ивченко Е.М., 1983).

Морфологические методы исследования. Морфологически изучали печень и селезенку сразу после выведения животных из опыта. Кусочки изучаемых органов фиксировали в 10% нейтральном формалине и жидкости Карнуа. Использована заливка тканей в парафин, частично в желатину; в части случаев в криостате приготовлялись нефиксированные свежезамороженные срезы.

Гистологические срезы толщиной 5-7 мкм окрашивали гематоксилином и эозином. Для выявления рибонуклеопротеидов использована окраска метиловым зеленым-пиронином по Браше с контролем специфичности окрашивания рибонуклеазой. Для выявления жиров использовали окраски Суданом IV и сульфатом нильским голубым. Нейтральные мукополисахариды выявляли PAS-реакцией по Мак-Манусу, гликоген - PAS-реакцией с дополнительной обработкой срезов амилазой. Коллагеновые волокна окрашивали по Ван Гизону.

Статистическая обработка полученных результатов. Статистическую обработку результатов исследования проводили путем вычисления средних арифметических (М), стандартных ошибок (а) и стандартных ошибок средних (т) (Лакин Г.Ф., 1980). Существенность различий средних величин 8

оценивали, используя непараметрические методы: критерии Вилкоксона-Манна-Уитни, Крускала-Уоллиса, Фишера, Фридмана и непараметрический вариант критерия Ньюмена-Кейлса, а также коэффициент ранговой корреляции Спирмена. Статистически значимыми считали различия с р<0,05 (Гублер Е.Г., Генкин А.Р., 1973).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Морфологические и биохимические признаки токсического индоме-тацинового поражения печени в условиях воздействия постоянного магнитного поля. Критериями моделирования токсического поражения печени в наших исследованиях служили патоморфологические изменения в паренхиме печени, а также сдвиги биохимических показателей сыворотки крови экспериментальных животных.

После воздействия ПМП у экспериментальных животных повышается в 2,0 раза активность ACT, но снижается в 1,6 раза концентрация фибриногена, что говорит о развитии синдрома цитолиза и снижении синтетической функции гепатоцитов.

При микроскопическом исследовании печени общая гистоархитектоника ткани сохранена. Местами, преимущественно в перипортальных отделах долек, развивалась мелкокапельная жировая дистрофия гепатоцитов. В части гепатоцитов обнаруживалась слабо выраженная зернистая дистрофия.

Уже через сутки после последнего введения токсического агента (индо-метацина) в сыворотке крови экспериментальных животных происходит повышение активности АЛТ, ACT, ЩФ и ГГТ, возрастает тимоловая проба, концентрация общего билирубина и снижается содержание фибриногена. Эти изменения свидетельствуют о возникновении у отравленных животных синдрома хо-лестаза, цитолиза, снижении синтетической активности гепатоцитов и возникновении иммунного воспаления.

Гистологические изменения в ткани печени представлены выраженной гиалиново-капельной дистрофией гепатоцитов преимущественно в центральных и средних отделах долек с нарушением четкости балочного строения, местами отдельные гепатоциты были подвергнуты коагуляционному некрозу. По периферии долек балки четкие, гепатоциты в состоянии зернистой дистрофии. Данный факт свидетельствует о развитии у крыс острого токсического поражения печени, что согласуется с данными литературы (Иванова А.П., 1995).

После совместного воздействия индометацина и ПМП на первые сутки после последнего поступления токсиканта увеличиваются, по сравнению с изолированным влиянием, все изучаемые показатели, за исключением активности щелочной фосфатазы и ГГТ и концентрации в сыворотке крови фибриногена. Морфологически в печени развивались значительно более тяжелые дистрофические и деструктивные изменения, чем у животных с изолированной острой индометациновой интоксикацией.

Через 2 недели после острого отравления индометацином наблюдается лишь неполное купирование синдрома цитолиза и холестаза. При гистологическом исследовании через 2 недели после острого отравления индометацином в

ткани печени отмечается положительная динамика восстановления патоморфо-логических изменений: в гепатоцитах, расположенных непосредственно вокруг центральных вен, почти полностью исчезают явления гиалиново-капельной дистрофии, значительно уменьшается выраженность последней и в средних отделах долек, становится более четкой балочная структура ткани печени.

В группе животных, подвергнутых сочетанному воздействию токсического яда и ПМП, через 2 недели после отравления остаются повышенными все изучаемые показатели функциональной активности гепатоцитов. Морфологически отмечается очень слабое уменьшение распространенности и выраженности дистрофических и некробиотических изменений: восстановление структуры гепатоцитов наблюдается в основном непосредственно вокруг центральных вен; наряду с этим в части перипортальных отделов долек в гепатоцитах развиваются явления слабо выраженной мелкокапельной жировой дистрофии, в области некоторых портальных трактов развивается лимфогистиоцитарная инфильтрация, в паренхиме ткани встречаются единичные очаги некроза гепатоцитов с лимфоцитарной инфильтрацией, сохраняется дискомплексация долек.

Воздействие ПМП на экспериментальных животных по сравнению с контролем приводит к снижению активности каталазы, накоплению продуктов пе-рекисного окисления липидов: концентрация МДА повышается почти в 2 раза, тогда как концентрация АГП - в 2,7 раза. Через сутки после острого отравления индометацином в сыворотке крови экспериментальных животных концентрация ацилгидроперекисей повышается более чем в 5 раз, а малонового диальде-гида - в 2,3 раза при сниженной активности каталазы. При совместном воздействии токсического агента и ПМП концентрация АГП в 5,6 раза, МДА почти в 2,4 раза выше, чем их концентрация у животных контрольной группы, тогда как активность каталазы снижается еще ниже, по сравнению с животными, отравленными индометацином без воздействия ПМП.

Через 14 дней после отравления сохраняются высокие концентрации АГП и МДА, но ниже, чем в предыдущей группе животных, и остается сниженной активность каталазы. В условиях острого отравления на фоне воздействия ПМП на 14 сутки концентрация продуктов перекисного окисления и активность каталазы остаются без изменений по сравнению с показателями в первые сутки после отравления.

Иммунные нарушения при остром токсическом индометацнновом поражении печени в условиях воздействия постоянного магнитного поля,

В группе экспериментальных животных, подвергнутых воздействию ПМП, не изменяется выраженность ГИО на ЭБ, тогда как угнетается развитие ГЗТ, о чем свидетельствует снижение РМЛ и РКЛ (рис. 1). При макроскопическом и гистологическом исследовании селезенки не было выявлено четких видимых отличий от морфологической картины селезенки у животных контрольной группы.

ММ

2

'' А

I 1 -

*1,г

■Ь *13

4|

(Ь

А

А

Рисунок 1. Формирование реакций ГИО и ГЗТ через сутки после получения индометацина и воздействия ПМП.

Примечание: 1 - интактные животные; 2 - вочдействис ПМП; 3 - введение ипдометацнна;

4 - введение индометацина и воздействие ПМП; здесь и на последующих рисунках и таблицах звездочкой отмечены достоверные отличия средних арифметических (р < 0,05 ): цифры рядом со звездочкой - по отношению к показателям какой группы эти различия.

Отравление животных индометацином угнетает формирование ГИО и ГЗТ на ЭБ (рис. I), При патом орфологи чес ком исследовании селезенки отмечается уменьшение ее размеров и массы, редукция лимфоидпой ткани: уменьшение количества лимфокдных фолликулов, большинство из них мелких размеров, разрыхлены, с нечеткими границами и плохо определяемой перифоллику-лярной мантийной зоной; лишь единичные лимфоидные фолликулы содержали мелкие реактивные центры, состоящие преимущественно из макрофагов, и были окружены резко разрыхленной и с нечеткими границами мантийной зоной.

Еще более выраженное развитие вторичного иммунодефицита наблюдается у животных, подвергнутых воздействию гепатотропным ядом (индомета-цнк) и ПМП (рис, 5). При этом п атом орф о логическая картина ткани селезенки в основном сходна с таковой у животных, подвергнутых острой индомстацино-вой интоксикации, но в отличие от нее имеющиеся в целом немногочисленные лимфоидные фолликулы, в том числе и единичные с реактивными центрами, практически не имели дифференцированной перифолликулярной мантийной зоны.

Воздействие ПМП на организм животных приводит к снижению ФЧ и повышению ФИ, при этом повышается кислородзависимая активность нейтро-филов.

При отравлении индометацином у животных на первые сутки выявлено снижение всех изучаемых показателей ФМА нейтрофилов, за исключением ИСН, который остается в пределах контрольных значений.

Еще большие нарушения развиваются при совместном воздействии на экспериментальных животных ПМП и гепатотоксического яда. Так, если без воздействия магнитного поля ФИ и ФЧ были ниже контроля на 28,0% и 30,0% соответственно, то при сочетанном токсическом воздействии с ПМП данные показатели снижаются уже на 48,0% и 52%. Наряду с этим отмечалось повышение показателей кислородзависимой активности нейтрофилов: если у животных, отравленных индометацином, показатели НСТ-сп. и НСТ-инд. были снижены на 30,0% и 34,0%, то у животных, подвергнутых помимо этого еще и воздействию ПМП, эти показатели оказались ниже контрольных значений соответственно на 70,0% и 31,0%, что приводит к снижению ИСН.

На 14 день после отравления или воздействия ПМП достоверно не изменяется выраженность ГИО на ЭБ, тогда как токсическое поражение печени на фоне воздействия ПМП приводит к снижению количества АОК почти в 2 раза от контрольных значений. Сохраняется ингибирование развития ГЗТ на ЭБ, которое более выражено в группе животных, подвергнутых воздействию ПМП и токсического яда.

Интересным является факт, что к 14 дню после последнего поступления в организм животных индометацина все показатели ФМА нейтрофилов периферической крови в пределах контрольных значений, тогда как в группе животных, подвергнутых дополнительно воздействию ПМП, повышается фагоцитарная и кислородзависимая активность нейтрофилов.

При анализе матрицы множественной корреляции в группе животных с острым индометациновым отравлением в условиях воздействия ПМП выявлены достоверные корреляционные связи: отрицательная взаимосвязь между изменением количества АОК и активностью АЛТ, ЩФ, концентрацией билирубина и значением тимоловой пробы; положительная связь между МДА и активностью каталазы; отрицательная связь между изменением ФИ и активностью ЩФ.

Фармакологическая коррекция иммунного гомеостаза при индоме-тациновом токсическом поражении печени на фоне воздействия постоянного магнитного поля. Сочетанное применение имунофана и мексикора на 1-е сутки после отравления и воздействия ПМП повышает количество АОК, РМЛ, ФИ, но не до контрольных значений. Из показателей кислородзависимой активности нейтрофилов данное сочетание препаратов лишь нормализует НСТ-стим., что еще больше снижает ФРН и ИСН (табл. 3).

Еще менее эффективно использование имунофана и мексикора в коррекции нарушенных иммунологических показателей через 2 недели после последнего поступления токсиканта. Так, имунофан и мексикор нормализуют лишь ФИ, не влияя на показатели развития ГИО, ГЗТ на ЭБ и остальные показатели ФМА нейтрофилов периферической крови (табл. 3).

Таблица 3

Состояние иммунологической реактивности в условиях острого токсического поражения печени индометацином и воздействия ПМП до и _после различных схем фармакологической коррекции_

Группы животных Показатели

ГИО ГЗТ Фагоцитарная активность нейтрофилов Кислородза-висимая активность нейтрофилов

Через сутки после последнего поступления ИМ

Без введения препаратов 1 1 1 Т

Имуиофан+мексикор корр. корр. корр. норм.

Полиоксидоний+мексидол корр. корр. корр. норм.

Деринат+эссенциале корр. корр. корр. норм.

Через 14 дней после последнего поступления ИМ

Без введения препаратов 1 4 т 1

Имунофан+мексикор - _ - _

Полиоксидоний+мексидол норм. норм. - корр.

Деринат+эссенциале норм. норм. норм. норм.

Примечание: I - снижение; "Г - повышение; - - отсутствие изменений.

Совместное использование полиоксидония и мексидола уже на первые сутки после последнего поступления индометацина корригирует показатели развития ГИО, ГЗТ и фагоцитарной активности нейтрофилов периферической крови (ФИ, ФЧ, ИАФ), нормализуя НСТ-тест спонтанный и индуцированный. К 14 суткам после острого токсического поражения печени полиоксидоний и мексидол нормализуют иммунологическую реактивность, снижают, но не до контрольных значений показатели кислородзависимой активности, не влияя на фагоцитарную активность нейтрофилов в периферическом русле крови (табл. 3).

Введение экспериментальным животным, подвергнутым воздействию ПМП на фоне токсической индометациновой гепатопатии, дерината и эссен-циале уже на первые сутки после отравления повышает количество АОК, РМЛ, ФИ, ФЧ, соответственно и ИСН, но не до контрольных значений (рис. 2). При этом данные фармакологические препараты нормализуют показатели спонтанного и индуцированного НСТ-теста (рис. 2). К 14 суткам после острого отравления на фоне воздействия ПМП деринат в сочетании с эссенциале нормализует все показатели развития ГИО и ФМА нейтрофилов периферической крови, корригируя лишь выраженность ГЗТ на ЭБ (табл. 3).

Морфологически в ткани селезенки по сравнению с контролем отмечается незначительное уменьшение количества лимфоидных фолликулов, которые достаточно плотно заселены лимфоцитами, окружены несколько разрыхленной перифолликулярной мантийной зоной, в большей части фолликулов имеются реактивные центры с признаками бластграсформации. Промежуточной по эффективности является схема с использованием полиоксидония и мексидола.

АОК

Рисунок 2. Иммуномодулирующая эффективность дерината в сочетании с эс-сенциапе через сутки после индометацинового токсического поражения печени и воздействия ПМП.

Примечание: 1 радиусом окружности отмечены показатели у интактных животных (1 группа); 2--воздействие ИМ в сочетании с ПМП (2 группа); 3--

введение ИМ и воздействие ПМП на фоне приема дерината и эссенциале (3 группа); 4 О - р < 0,05 между показателями по отношению к контрольной группе; 5 О - р < 0,05 между показателями 2 и 3 групп; 6 I I различия показателей 3 группы по отношению к контрольной группе недостоверны.

Морфофункциональные нарушения в печени экспериментальных животных при остром токсическом поражении печени четыреххлористым углеродом в условиях воздействия постоянного магнитного поля. Уже через сутки после последнего введения ЧХУ в сыворотке крови экспериментальных животных происходит резкое повышение активности аминотрансфераз: в большей степени АЛТ и в меньшей АСТ, снижение АСТ/АЛТ-индекса, что является маркером развития в паренхиме печени цитолиза и печеночно-клеточного некроза (табл. 4). У этих животных наблюдается повышение активности ЩФ и ГГТ и повышение концентрации билирубина, что свидетельствует о возникновении у отравленных животных синдрома холестаза. Кроме этого, развивается иммуновоспалительный синдром с повышением по сравнению с контролем тимоловой пробы, и происходит угнетение синтетической функции печени со снижением концентрация фибриногена. Патоморфологически при этом развивалась картина жировой дистрофии печени: преимущественно в центральных отделах долек обнаруживается нарушение четкости балочного строения ткани печени, гепатоциты в состоянии крупно- и среднекапельной жировой дистрофии, местами имеют место явления некроза отдельных клеток и слабая лимфо-гистиоцитарная реакция. По периферии долек балочная структура ткани сохранена, гепатоциты в состоянии зернистой дистрофии.

Таблица 4

Функциональная активность гепатоцитов через сутки после

Показатели Интактные животные Отравление ЧХУ Воздействие ПМП Отравление ЧХУ + ПМП

1 группа 2 группа 3 группа 4 группа

АЛТ 10,5±1,0 31,4±2,7*' 9,6±1,3"2 29,3±3,1*1,3

ACT 11,3±1,1 27,3±2,2*' 22,5±2,7*' 37,lil^*1'3

ЩФ 5,7±0,2 17,1±1,Г' 5,6±0,13*2 20,1±1,3*'"J

ГГТ 0,91 ±0,02 3,2±0,3*1 0,63±0,11*';2 3,3±0,2*|;з

Билирубин 0,27±0,02 1,31±0,11м 0,31±0,07*2 1,73±0,12*'"3

Фибриноген 3,35±0,2 1,83±0,Г' 2,2±0,12*''2 1,71±0,1*м

Тимоловая проба 0,64±0,02 1,74±0,12*' 0,68±0,03*2 1,97±0,Г'"3

При совместном воздействии ЧХУ и ПМП через сутки после отравления увеличиваются по сравнению с изолированным влиянием агентов все изучаемые биохимические показатели, за исключением концентрации в сыворотке крови общего белка и фибриногена (табл. 4). При гистологическом исследовании печени у животных с сочетанным воздействием ЧХУ и ПМП, в отличие от отравленных крыс вне действия ПМП, дистрофические изменения были значительно более выраженными и распространенными.

Через 2 недели после острого отравления ЧХУ наблюдается неполное купирование синдромов цитолиза и холестаза (активность ACT, ГГТ и концентрация билирубина остаются выше контроля). Концентрация фибриногена остается ниже, чем в контрольной группе животных. Морфологически отмечается значительное уменьшение выраженности дистрофических изменений в ткани печени: отсутствуют явления крупнокапельной жировой дистрофии гепатоцитов, но вместе с тем обнаруживается зернистая и гиалиново-капельная дистрофия.

В группе животных, подвергнутых сочетанному воздействию ЧХУ и ПМП, через 2 недели после отравления остаются повышенными активность ACT, ГГТ и концентрация общего билирубина, содержание же фибриногена в сыворотке остается сниженным, при этом нарушения оказались более выраженными, чем в группе животных, не подвергавшихся воздействию ПМП. При микроскопическом исследовании в ткани печени отмечается определенная положительная динамика в уменьшении распространенности и выраженность дистрофических изменений и в восстановлении структуры ткани. Однако по сравнению с группой животных, отравленных вне воздействия ПМП, эти процессы относительно замедлены.

Через сутки после острого отравления ЧХУ в сыворотке крови экспериментальных животных повышается концентрация ацилгидроперекисей в 4,2 раза и малонового диальдегида в 2,0 раза и на 34,0% снижается активность ка-талазы (табл. 5). При совместном воздействии ЧХУ и ПМП концентрация АГП в 4,6 раза, МДА почти в 3,5 раза выше, чем их концентрация у животных кон-

трольной группы, а концентрация МДА почти в 2 раза выше по сравнению с животными, отравленными ЧХУ без воздействия ПМП (табл. 5).

Таблица 5

Показатели процессов перекисного окисления после острого отравления ЧХУ и воздействия ПМП

Показатели Интактные животные Отравление ЧХУ Воздействие ПМП Отравление ЧХУ + ПМП

1 группа 2 группа 3 группа 4 группа

Через сутки

АГП 0,52±0,02 2,2±0,Г 1,39±0,09*''" 2,41±0,ГМ

МДА 13,1±1,0 26,1±2,4'' 24,1±1,8'' 44,1±4,0''"3

Катал аза 121,0±7,1 90,6±4,7'' 92,3±6,Г 84,3±5,4''

Через 14 суток

АГП 0,52±0,02 1,12±0,07*' изэ^годо*1'2 1,37±0,06*''2

МДА 13,1±1,0 . 33,1±4,Г 24,1±1,8'''2 27,2±2,0*1'2

Катал аза 121,0±7,1 160,8±10,2*' 92,3±6,Г1>:г 81,2±6,ГЫ

Через 14 дней после последнего поступления в организм животных ЧХУ сохраняются высокие концентрации АГП и МДА, но повышается активность каталазы. Тогда как в условиях острого отравления на фоне воздействия ПМП на 14 сутки снижается концентрация АГП и МДА и остается без изменения активность каталазы по сравнению с показателями на первые сутки (табл. 5).

Для оценки степени нарушений биохимических показателей в условиях острого токсического поражения печени и/или воздействия ПМП были рассчитаны коэффициенты по отношению к контрольной группе животных. Максимальные нарушения наблюдаются в условиях сочетанного воздействия ЧХУ и ПМП, минимальные - при воздействии только магнитного поля, при этом наиболее выраженные изменения приходятся на первые сутки после развития острого токсического поражения гепатоцитов, что подтверждается суммой коэффициентов.

Иммунные нарушения при остром токсическом поражении печени четыреххлористым углеродом в условиях воздействия постоянного магнитного поля. Введение животным ЧХУ уже на первые сутки после отравления повышает иммунологическую реактивность. Так, уже через 24 часа после последнего приема гепатотоксического яда количество АОК повышается в 1,7 по сравнению с контрольными значениями, увеличивается выраженность развития ГЗТ.

Более выраженная стимуляция формирования ГИО и ГЗТ на ЭБ наблюдается у животных, подвергнутых сочетанному воздействию ЧХУ и ПМП. При этом морфологически в ткани селезенки развивались гиперпластические изменения: лимфоидные фолликулы увеличены в размерах, в своем большинстве содержат относительно крупные, хорошо дифференцируемые реактивные центры, состоящие преимущественно из макрофагов и лимфобластов, мантийная зона широкая с четкими границами, красная пульпа полнокровна.

При отравлении ЧХУ у животных на первые сутки выявлено повышение почти всех изучаемых показателей ФМА нейтрофилов. Еще большие нарушения факторов неспецифической защиты организма развивались при совместном воздействии на экспериментальных животных ЧХУ и ПМП.

На 14 день после отравления или воздействия ПМП имеет место повышение количества АОК, более выраженное при сочетании ПМП и токсического агента. Если через 2 недели после токсического поражения печени снижается до контрольных значений выраженность ГЗТ на ЭБ, то в группе животных, подвергнутых воздействию ПМП и токсического яда, показатели остаются выше контроля.

Интересным является факт, что к 14 дню после последнего поступления в организм животных ЧХУ почти все показатели ФМА нейтрофилов периферической крови в пределах контрольных значений, тогда как в группе животных, подвергнутых дополнительно воздействию ПМП, повышается фагоцитарная и кислородзависимая активность нейтрофилов, при этом значения ФЧ, ИАФ и НСТ-сп. выше не только контрольных значений, но и выше, чем в группе животных, не подвергнутых воздействию ПМП.

При морфологическом исследовании установлено, что у животных с острой интоксикацией ЧХУ в условиях ПМП развивающиеся в селезенке гиперпластические изменения лимфоидной ткани сохранялись в течение 2 недель, причем в большей степени, чем у отравленных животных вне действия ПМП,

Фармакологическая коррекция иммунного гомсостаза при тетра-хлорметановом токсическом поражении печени на фойе воздействия постоянного магнитного поля. Введение дерината и эссенциале животным, подвергнутым тетрахлорметановому острому токсическому поражению печени, и в условиях действия ПМП, приводит к снижению ФЧ и ИАФ и НСТ-стим., но не до контрольных значений, тогда как на развитие ГИО, ГЗТ и остальные показатели ФМА нейтрофилов периферической крови данное сочетание препаратов не оказывает влияния (рис. 3). Также недостаточно эффективным оказалось сочетание эссенциале и дерината через 14 суток после последнего поступления в организм животных ЧХУ и воздействия ПМП: корригируются лишь значения ФИ и НСТ-сп.

В связи с этим нами изучалось влияние в условиях действия ПМП и острого токсического поражения печени ЧХУ эссенциале вместе с комплексом водорастворимых витаминов и витаминоподобных соединений: тиамин хлорид, рибофлавин моноаденозинфосфат, никотинамид, ог-липоевая кислота и коэн-зим р.

Введение таким животным КВВ вместе с эссенциале уже на первые сутки после последнего поступления ЧХУ снижает выраженность ГИО, ГЗТ на ЭБ и все показатели ФМА нейтрофилов периферической крови, но не до контрольных значений (рис. 3). При этом КВВ и эссенциале не влияет на развитие ГИО и ГЗТ через 14 дней после последнего поступления токсиканта: нормализует ФИ и корригирует ФЧ и кислородзависимую активность нейтрофилов (НСТ-сп., НСТ-инд.).

лок

А Б

Рисунок 3. Иммуномодулирующая эффективность дерината (А) и КВВ (Б) в сочетании с эс-сенциале через сутки после тетрахлометанового токсического поражения печени и воздействия ПМП.

Примечание: 1 радиусом окружности отмечены показатели у интактных животных (1 группа); 2 - - воздействие ЧХУ в сочетания с ПМП (2 группа); 3---

введение ЧХУ и воздействие ПМП на фоне приема дерината (А) или КВВ (Б) в сочетании с эссенциале (3 группа); 4 О - р < 0,05 между показателями по отношению к контрольной группе; 5 О - р < 0,05 между показателями 2 и 3 групп.

Использование сочетания глутоксима, рибоксина и эссенциале при остром токсическом поражении печени ЧХУ в условиях действия ПМП позволило уже через сутки нормализовать ГИО, ГЗТ и кислородзависимую активность нейтрофилов, при этом снизить, практически до значений контрольной группы, показатели фагоцитарной активности нейтрофилов периферической крови (ФИ, ФЧ и ИАФ). Применение данного сочетания фармакологических препаратов к 14 суткам нормализует все показатели иммунологической реактивности и ФМА нейтрофилов периферической крови в условиях действия ПМП и острой токсической тетрахлорметановой гепатопатии.

При этом, в отличие от аналогичной группы животных без применения корригирующей терапии данным сочетанием препаратов, в селезенке морфологически не развивались явления выраженной гиперплазии лимфоидной ткани: лимфоидные фолликулы преимущественно средних размеров, хорошо заселены лимфоцитами, некоторые с реактивными центрами, в основном с наличием четкой мантийной зоны, красная пульпа умеренно полнокровна.

выводы

1. Воздействие постоянного магнитного поля приводит к развитию дистрофических изменений, цитолитического синдрома повреждения гепатоцитов, их синтетической недостаточности, иммуновоспалительного синдрома, угнетает формирование гиперчувствителыюсти замедленного типа и повышает функционально-метаболическую активность нейтрофилов периферической крови.

2. Нахождение в постоянном магнитном поле экспериментальных животных, отравленных индометацином, уже через сутки после поступления токсиканта морфологически проявляется развитием редукции лимфоидной ткани селезенки и резко усугубляет выраженность супрессии гуморального иммунного ответа, гиперчувствителыюсти замедленного типа и функционально-метаболической активности нейтрофилов периферической крови, сохраняющихся на протяжении 14 дней.

3. При остром токсическом поражении печени четырех хлористым углеродом, особенно в сочетании с воздействием постоянного магнитного поля, морфологически в селезенке развиваются гиперпластические изменения, повышается иммунологическая реактивность и функционально-метаболическая активность нейтрофилов периферической крови.

4. Изменения иммунологической реактивности и функционально-метаболической активности нейтрофилов периферической крови при токсической гепатопатии в условиях действия постоянного магнитного поля коррелируют с выраженностью биохимических синдромов повреждения гепатоцитов (цитолиза, холестаза, иммуновоспалительного и недостаточности синтетической функции), степенью дистрофических и некротических изменений в ткани печени и нарушениями антиоксидантной системы защиты.

5. Применение в условиях иммуносупрессии, вызванной острой индоме-тациновой токсической гепатопатией и действием постоянного магнитного поля, дерината и эссенциале наиболее эффективно корригирует нарушенные мор-фо-функциональные показатели, по сравнению с сочетаниями полиоксидоний и мексидол или имунофан и мексикор.

6. Использование сочетания препаратов «эссенциале + глутоксим + рибоксин» при остром тетрахлорметановом токсическом поражении печени и в условиях действия постоянного магнитного поля более эффективно, чем «эссенциале + комплекс витаминов» и «эссенциале + деринат», корригирует степень выраженности гиперплазии лимфоидной ткани селезенки и нарушенные показатели гуморального иммунного ответа, гиперчувствителыюсти замедленного типа и функционально-метаболической активности нейтрофилов периферической крови.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. При острых токсических поражениях печени в условиях воздействия постоянного магнитного поля, сопровождающихся развитием иммуносупрессии, с целью коррекции иммунных нарушений использовать сочетание препаратов эссенциале и дерината.

2. Использовать сочетания препаратов эссенииале с рибоксином и глу-токсимом в случаях острых токсических поражений печени в условиях воздействия постоянного действия магнитного поля, сопровождающихся развитием иммунологической гиперреактивности и повышением функционально-метаболической активности нейтрофилов периферической крови.

3. С целью расширения знаний включить в учебный процесс медицинских вузов сведения о влиянии постоянного магнитного поля на функциональную активность гепатоцитов и иммуноцитов в условиях токсического поражения печени,

4. Рекомендовать углубленное изучение в эксперименте молекулярных аспектов действия магнитного поля на состояние клеточных мембран как ин-тактных гепатоцитов и иммуноцитов, так и при воздействии гепатотоксических агентов.

5. На территориях, расположенных в зонах естественных геомагнитных аномалий, при расчете допустимых концентраций гепатотропных токсических веществ учитывать особенности развивающихся нарушений иммунного гомео-стаза при их воздействии на фоне постоянного магнитного поля.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Романова, Е,С. Иммунокорригирующий эффект деманола при токсическом поражении печени в условиях длительного воздействия постоянного магнитного поля / Е.С. Романова, A.B. Пигарева // Сб. работ 68-й итог. сес. КГМУ и отд-ния мед.-биолог. наук Центр,-Чернозем. науч. центра РАМН. - Курск, 2002. - Ч. 1. - С. 83.

2. Романова, Е.С. Изучение восстановительных процессов в печени в условиях длительного воздействия постоянного магнитного поля / Е.С. Романова, A.B. Пигарева // Сб. работ 68-й итог. сес. КГМУ и отд-ния мед.-биолог. наук Центр.-Чернозем, науч. центра РАМН.-Курск, 2002. -Ч. 1.-С. 84.

3. Дудка В.Т. Гепатопротекторные и регенерационные эффекты деманола при токсическом поражении печени в условиях длительного воздействия постоянного магшпного поля / В.Т. Дудка, Е.С. Романова, А.И. Конопля // Матер. II Международной конференции «Клинические исследования лекарственных средств». - М., 2002. - С. 65-66.

4. Романова, Е.С. Изучение влияния электромагнитных волн крайне высокой частоты на восстановительные процессы в печени в условиях длительного воздействия постоянного магнитного поля / Е.С. Романова, В.Т. Дудка, А.И. Конопля // Сб. трудов 5-го Конгресса росс, ассоц. аллергологов и клинич. иммунологов «Современные проблемы аллергологии, иммунологии и иммунофармакологии». - М., 2002. - Т. 2. - С.47.

5. Романова, Е.С. Иммунные нарушения при токсическом поражении печени в условиях длительного воздействия постоянного магнитного поля / Е.С. Романова, В.Т. Дудка, А.И. Конопля // Сб. трудов 5-го Конгресса росс, ассоц. аллергологов и клипич. иммунологов «Современные проблемы аллергологии, иммунологии и иммунофармакологии». - М.,

2002. - Т. 2. - С.48.

6. Особенности репаративной регенерации печени при острой токсической гепатопа-тии в условиях длительного воздействия постоянного магнитного поля / В.Т. Дудка, Е.С. Романова, А.И. Конопля, A.B. Пигарева // Успехи современного естествознания. - М.,

2003.-№12.-С. 44.

7. Морфология печени при токсическом поражении в условиях длительного воздействия постоянного магнитного поля / В.Т. Дудка, A.B. Пигарева, А.И. Конопля, Е.С. Романова // Науч.-практ. вестник «Человек и его здоровье». - Курск, 2003. - № 2. - С. 28-31.

8. О влиянии постоянного магнитного поля на иммунную реактивность при токсическом поражении печени / В.Т. Дудка, A.B. Пигарева, Е.С. Романова, А.И. Конопля // Сб. ра-20

бот 69-й итог. науч. сес. КГМУ и отд-ния мед.-биолог, наук Центр.-Чернозем, науч. центра РАМН. - Курск, 2004. - Ч. I. - С. 91-92.

9. Патоморфология гепатопротекторного и репараггивного эффектов дсманола при экспериментальном токсическом поражении печени в условиях длительного воздействия постоянного магнитного поля / A.B. Пигарева, Е.С. Романова, В.Т. Дудка //«Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины». Сб. тез. М.: Издательский дом «Русский врач», -2004. - С. 236.

10. О влиянии постоянного магнитного поля на репаративную регенерацию печени / A.B. Пигарева, А.И. Конопля, Е.С. Литвинова // Сб. трудов юбилейной научн. конф. КГМУ и сес. Цеитр.-Чернозем. науч. «einpa РАМН, посвященной 70-летию КГМУ «Университетская наука: взгляд в будущее».-Курск, 2005.-Т. 2. -С. 180-181.

11. Особенности репаративной регенерации печеш! при сочетанием воздействии токсиканта и постоянного магнитного поля / В.Т, Дудка, A.B. Пигарева, А.И. Конопля, Е.С. Романова // Сб. науч. работ I Всероссийской научно-практической конференции патологоанатомов «Актуальные вопросы патологической анатомии». - Орел, 2005. - С. 172-174.

12. Гепатопротекторный и регенерационпый эффекты демаиола при экспериментальном токсическом поражении печени в условиях длительного воздействия постоянного магнитного поля / В.Т. Дудка, A.B. Пигарева, Е.С. Романова, А.И. Конопля // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологаи, колопроктологии. - 2005. - прил. Л4 24.- С. 100.

13. Фармакологическая коррекция нарушений функциональной активности ге-патоцитов и антиоксидантного статуса в условиях острого токсического поражения печени и воздействии постоянного магнитного поля / В.Т. Дудка, А.И. Конопля, A.B. Пигарева и др. // Вестник новых медицинских технологий. - 2006. - Т. 13, № 1. - С. 35-36.

14. Морфофункциональные изменения в печени при сочетанном воздействии гепато-тропного токсиканта и постоянного магнитного поля / В.Т. Дудка, A.B. Пигарева, Е.С. Литвинова, А.И. Конопля // Сб. тр. 71-й науч. конф. КГМУ и сес. Центр.-Чернозем. науч, центра РАМН «Университетская наука: взгляд в будущее». - Курск, 2006. - Т. 1. -С. 286-287.

15. Функциональная активность гепатоцитов в условиях острого токсического поражения печени и воздействия постоянного магнитного поля / В.Т. Дудка, A.B. Пигарева, Е.С. Романова и др. Н Системный анализ и управление в биомеднцинских системах. - 2006. - Т. 5, № 2. - С. 223-225.

16. О влиянии постоянного магнитного поля на морфофункциональные нарушения в печет! при острой токсической гепатопатии / В.Т. Дудка, A.B. Пигарева, Е.С. Литвинова,

A.И. Конопля // Успехи современного естествознания. - 2006. - № 5. - С. 80-82.

17. Поиск средств фармакологической коррекции иммунного гомеостаза при острой токсической индометацшювой гепатопатии и воздействии постоянного магнитного поля / Е.С. Романова, А.И. Лазарев, В.Т. Дудка, В.П. Гаврилюк // Сб. тр. 71-й науч. конф. КГМУ и сес. Центр.-Чернозем. науч. центра РАМН «Университетская наука: взгляд в будущее». -Курск, 2006.-Т. 1.-С. 55-56.

18. Фармакологическая коррекция нарушений иммунитета при сочетанном воздействии гепатотропного яда и постоянного магнитного поля / Е.С. Романова, А.И. Лазарев,

B.Т. Дудка, В.П. Гаврилюк // Сб. тр. 71-й науч. конф. КГМУ и сес. Центр.-Чернозем. науч. центра РАМН «Университетская наука: взгляд в будущее». - Курск, 2006, - Т. 1. - С, 57-58.

19. Иммунные нарушения и их коррекции при воздействии постоянным магнитным полем в условиях острого токсического индометацинового поражения печени / Е.С. Литвинова, В.Т. Дудка, А.И. Конопля, В.П. Гаврилюк // Аллергология и иммунология. - 2006. - Т. 7, Л4 3. - С. 435-436.

20. The influence of constant magnetic field on morpho-functional disturbances in liver in acute toxic hepatopathy / A.V. Pigareva, E.S. Litvinova, V.T. Dudka, A.I. Konoplya // Europen journal of natural history. - 2006. - № 3. - P. 74-75.

21. Патоморфологические и функциональные нарушения в печени при ее токсическом поражении в условиях постоянного магнитного поля / В.Т. Дудка, Е.С. Литвинова, A.B. Пигарева, А.И. Конопля // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатоло-гии, колопроктологин.- Москва, 2006. - Л» 1, Т. XVI. - С. 83-84.

Принятые сокращения АГГ1 - ацилгидроперекиси, усл. ед. АЛТ - аланинаминотрансфераза, ммоль/(ч*л) АОК - антителообразующие клетки, 103/селсзенка ACT - аспартатамииотрансфераза, ммоль/(ч*л) ГИО - гуморальный иммунный ответ ГЗТ - гиперчувствительность замедленного типа ГГТ - т-глутамилтранспептидаза, кат/л ИАФ- индекс активности фагоцитов ИМ - индометацин

ИСН - индекс стимуляции нейтрофилов

КВВ - комплекс водорастворимых витаминов

МДА - малоновый диальдегид, мкмоль/л

ОБ - общий билирубин, мкмоль/л

HCT - тест восстановления ннтросииего тетразолия, %

НСТ-сп. - НСТ-тест спонтанный, %

НСТ-стим. - НСТ-тест стимулированный, %

ПОЛ - перекисное окисление липидов

ПМП - постоянное магнитное поле

РКЛ - разница количества кариоцитов в регионарных и контрлатеральпых лимфатических узлах, 106

РМЛ - разница массы регионарных и контрлатеральных лимфатических узлов, мг

ФИ - фагоцитарный индекс, %

ФМА - функционально-метаболическая активность

ФРН - функциональный резерв нейтрофилов, %

ФЧ - фагоцитарное число

ЧХУ - четыреххлористый углерод

ЩФ - щелочная фосфатаза, моль/(ч<л)

ЭБ - эритроциты барана

Лицензия ЛР № 020862 от 30.04.99 г. Сдано в набор 12.03.2007 г. Подписано в печать 19.03.2007 г. Формат 30х42'/8. Бумага офсетная. Гарнитура Times New Rom. Печать офсетная. Усл. печ. л. 1,0. Тираж 100 экз. Заказ № 153А. Издательство Курского государственного медицинского университета 305041, г. Курск, ул. К. Маркса, 3.

Актуальность проблемы. Взаимоотношения больших групп людей с внешней средой характеризуются высокой степенью неустойчивого равновесия, которое поддерживается постоянным напряжением механизмов адаптации. Периодическое или постоянное действие на организм человека экстремальных факторов предъявляет высокие требования к регуляторным системам организма и в случае превышения их резервных возможностей приводит к возникновению патологических состояний. Техногенные физические поля являются существенным экологическим фактором для человеческой популяции в каждом многонаселенном городе (Григорьев Ю.Г., 2004; Евдокимов Е.В. и др., 2006).

В настоящее время в литературе достаточно широко освещены эффекты воздействия переменного электромагнитного поля на организм человека, тогда как влияние постоянного магнитного поля, тем более на состояние иммунного гомеостаза, остается малоизученным (Кувалдин А.Б., 2002; Мальчевский В.А. с соавт., 2003). Так, например, экспериментально установлено, что длительное воздействие аномального магнитного поля в постнатальном периоде приводит к напряжению фагоцитарного звена антиинфекционной защиты. Присоединение в этих условиях инфекционного агента вызывает срыв адаптационных систем и утяжеление течения инфекционного процесса (Разинькова Н.С., 2006).

Помимо этого, в настоящее время имеет место существенное учащение токсических, в том числе и лекарственных, поражений различных органов и тканей. Значение этих поражений возросло в связи с либерализацией доступа населения к медикаментам, появлением в свободной продаже большого количества безрецептурных лекарственных средств, широким распространением агрессивной рекламы при отсутствии объективной информации о возможном побочном действии (Конопля Н.А., 2001).

Большой объем накопленной в последнее время информации о патомор-фологии печени заставляет по-новому взглянуть на механизмы развития печеночной патологии, роль печеночных клеток в развитии патологии других систем при поражении данного органа, в том числе и на нарушения иммунного гомеостаза (Зорькина А.В. и др., 2003; Прокопенко Л.Г. и др., 2003; Лазарева Г.А. и др., 2006).

Таким образом, в современном мире каждый в той или инои степени подвергается сочетанному воздействию гепатотоксических ксенобиотиков и действию постоянного магнитного поля. Исходя из этого, представляется актуальным поиск адекватных фармакологических способов коррекции нарушений иммунного гомеостаза, возникающих при токсическом поражении печени в условиях воздействия постоянного магнитного поля.

Цель работы: разработка способов фармакологической коррекции нарушений иммунного гомеостаза, возникающих при сочетанном воздействии гепатотоксических агентов и постоянного магнитного поля.

Задачи исследования:

1. Оценить иммунную реактивность и функциональные нарушения в печени экспериментальных животных при отравлении гепатотропными ядами в условиях воздействия постоянного магнитного поля.

2. Изучить морфологические изменения в печени и селезенке при токсической гепатопатии в условиях воздействия постоянного магнитного поля.

3. Оценить взаимосвязь нарушений морфофункционального состояния гепатоцитов, иммунной реактивности и функции нейтрофилов периферической крови при токсическом поражении печени в условиях воздействия постоянного магнитного поля.

4. Разработать способы фармакологической коррекции иммунного гомеостаза при токсических поражениях печени в условиях воздействия постоянного магнитного поля, вызывающих угнетение иммунной реактивности.

5. Разработать способы фармакологической коррекции иммунного гомеостаза при токсических поражениях печени в условиях воздействия постоянного магнитного поля, вызывающих развитие иммунологической гиперреактивности.

Научная новизна. Расширены существующие представления о действии постоянного магнитного поля на иммунный гомеостаз. Получены новые данные о морфофункциональных нарушениях в печени, изменениях антиоксидантного статуса, иммунологической реактивности и функционально-метаболической активности нейтрофилов периферической крови при сочетанием воздействии различных гепатотоксических агентов и постоянного магнитного поля. Выявлена взаимосвязь нарушений показателей морфо-функциональной активности гепатоцитов и антиоксидантного статуса с изменениями иммунологических функций в условиях длительного воздействия постоянного магнитного поля при остром токсическом поражении печени. Установлено, что использование сочетаний полиоксидония с мексидолом, имунофа-на с мексикором, эссенциале с деринатом или с комплексом витаминов и вита-миноподобных соединений (никотинамид, тиамин, рибофлавин, а-липоевая кислота, коэнзим Q) или в сочетании с глутоксимом и рибоксином эффективно в коррекции нарушений иммунологической реактивности и функционально-метаболической активности нейтрофилов периферической крови. Выявлено, что в коррекции иммунной недостаточности, вызванной действием постоянного магнитного поля и индометацином, наиболее эффективна схема с использованием эссенциале и дерината, тогда как при иммунологической гиперреактивности, развивающейся на фоне длительного воздействия постоянного магнитного поля и токсического тетрахлометановопх поражения печени, эффективно соче- тание эссенциале с рибоксином и глутоксимом.

Практическая значимость. Экспериментально обоснована целесообразность клинического применения сочетаний полиоксидония и мексидола, иму-нофана и мексикора, эссенциале с деринатом или с комплексом витаминов (никотинамид, тиамин, рибофлавин) и витаминоподобных соединений (а-липоевая кислота, коэнзим Q) или в сочетании с глутоксимом и рибоксином в коррекции нарушений иммунного гомеостаза при токсическом поражении печени и длительном воздействии постоянного магнитного поля. Углублены существующие представления о влиянии постоянного магнитного поля на иммунологическую реактивность и функционально-метаболическую активность нейтрофилов периферической крови и взаимосвязь этих изменений с нарушениями функционально-метаболической активности гепатоцитов и состояния антиоксидантной системы защиты организма в условиях острого токсического поражения печени.

Материалы диссертации вошли в учебные рабочие программы и используются в лекционных курсах и на практических занятиях ряда кафедр фармакологии, клинической фармакологии, биологической химии, внутренних болезней Курского, Российского, Северного, Самарского и Санкт-Петербургского государственных медицинских университетов и академий.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. У животных с острым индометациновым токсическим поражением печени на фоне воздействия постоянного магнитного поля по сравнению с изолированным влиянием токсического или физического воздействия повышается выраженность патоморфологических изменений в печени, синдромов иммунно-воспалительного, цитолиза, холестаза, снижается функционально-метаболическая активность нейтрофилов периферической крови, развивается вторичный иммунодефицит.

2. У животных с острым тетрахлорметановым токсическим поражением печени на фоне воздействия постоянного магнитного поля снижается функциональная активность гепатоцитов и повышается функционально-метаболическая активность нейтрофилов периферической крови и выраженность гуморального иммунного ответа, гиперчувствительность замедленного типа, чем у животных только с токсическим поражением печени.

3. В условиях развивающейся иммуносупрессии, вызванной совместным действием гепатотропного агента и постоянного магнитного поля, использование дерината и эссенциале эффективно корригирует морфофункциональные и иммунные нарушения.

4. Более эффективной схемой коррекции гиперфункции иммуноцитов при остром токсическом поражении и воздействии постоянного магнитного поля является сочетание эссенциале, глутоксима и рибоксина.

Апробация работы. Основные положения диссертации представлены на научных конференциях Курского государственного медицинского университе-. та и Центрально-Черноземного научного центра РАМН (2002-2004 гг.), 5-м

Конгрессе Российской ассоциации аллергологов и клинических иммунологов «Современные проблемы аллергологии, иммунологии и иммунофармаколо-гии», Москва (2002 г.), II Международной конференции «Клинические исследования лекарственных средств», Москва (2002 г.), II конференции Российской академии естествознания «Практикующий врач», Москва (2003 г.), I Всероссийской научно-практической конференции патологоанатомов «Актуальные вопросы патологической анатомии», Орел (2005 г.), X Российской конференции «Гепатология сегодня», Москва (2005 г.), VI съезде аллергологов и иммунологов СНГ, Российском национальном конгрессе аллергологов и иммунологов, III Российской конференции по иммунотерапии (Москва, 2006), совместном заседании кафедр фармакологии, фармацевтической и токсикологической химии с курсом аналитической химии, клинической фармакологии, патологической анатомии, биологической химии Курского государственного медицинского университета (2006 г.).

Публикации. По материалам диссертации в центральной и местной печати опубликована 21 работа, в том числе 5 - в рекомендованных ВАК РФ, в которых содержится полный объем информации, касающейся темы диссертации.

ВЫВОДЫ

1. Воздействие постоянного магнитного поля приводит к развитию дистрофических изменений, цитолитического синдрома повреждения гепатоцитов, их синтетической недостаточности, иммуновоспалительного синдрома, угнетает формирование гиперчувствительности замедленного типа и повышает функционально-метаболическую активность нейтрофилов периферической крови.

2. Нахождение в постоянном магнитном поле экспериментальных животных, отравленных индометацином, уже через сутки после поступления токсиканта морфологически проявляется развитием редукции лимфоидной ткани селезенки и резко усугубляет выраженность супрессии гуморального иммунного ответа, гиперчувствительности замедленного типа и функционально-метаболической активности нейтрофилов периферической крови, сохраняющихся на протяжении 14 дней.

3. При остром токсическом поражении печени четыреххлористым углеродом, особенно в сочетании с воздействием постоянного магнитного поля, морфологически в селезенке развиваются гиперпластические изменения, повышается иммунологическая реактивность и функционально-метаболическая активность нейтрофилов периферической крови.

4. Изменения иммунологической реактивности и функционально-метаболической активности нейтрофилов периферической крови при токсической гепатопатии в условиях действия постоянного магнитного поля коррелируют с выраженностью биохимических синдромов повреждения гепатоцитов (цитолиза, холестаза, иммуновоспалительного и недостаточности синтетической функции), степенью дистрофических и некротических изменений в ткани печени и нарушениями антиоксидантной системы защиты.

5. Применение в условиях иммуносупрессии, вызванной острой индометациновой токсической гепатопатией и действием постоянного магнитного поля, дерината и эссенциале наиболее эффективно корригирует нарушенные морфо-функциональные показатели, по сравнению с сочетаниями полиоксидоний и мексидол или имунофан и мексикор.

6. Использование сочетания препаратов «эссенциале + глутоксим + рибоксин» при остром тетрахлорметановом токсическом поражении печени и в условиях действия постоянного магнитного поля более эффективно, чем «эссенциале + комплекс витаминов» и «эссенциале + деринат», корригирует степень выраженности гиперплазии лимфоидной ткани селезенки и нарушенные показатели гуморального иммунного ответа, гиперчувствительности замедленного типа и функционально-метаболической активности нейтрофилов периферической крови.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. При острых токсических поражениях печени в условиях воздействия постоянного магнитного поля, сопровождающихся развитием иммуносупрес-сии, с целью коррекции иммунных нарушений использовать сочетание препаратов эссенциале и дерината.

2. Использовать сочетания препаратов эссенциале с рибоксином и глутоксимом в случаях острых токсических поражений печени в условиях воздействия постоянного действия магнитного поля, сопровождающихся развитием иммунологической гиперреактивности и повышением функционально-метаболической активности нейтрофилов периферической крови.

3. С целью расширения знаний включить в учебный процесс медицинских вузов сведения о влиянии постоянного магнитного поля на функциональную активность гепатоцитов и иммуноцитов в условиях токсического поражения печени.

4. Рекомендовать углубленное изучение в эксперименте молекулярных аспектов действия магнитного поля на состояние клеточных мембран как интактных гепатоцитов и иммуноцитов, так и при воздействии гепатотоксических агентов.

5. На территориях, расположенных в зонах естественных геомагнитных аномалий, при расчете допустимых концентраций гепатотропных токсических веществ учитывать особенности развивающихся нарушений иммунного гомео-стаза при их воздействии на фоне постоянного магнитного поля.