Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:IgE-регуляторная активность иммунокомпетентных клеток у больных атопическими заболеваниями в процессе иммунореабилитации

АКАДЕМИЯ МЩИЦИНСКИХ НАУК СССР

СИБИРСКОЕ ОТДЕЛЕНИЕ ИНСТИТУТ КЛИНИЧЕСКОЙ ИММУНОЛОГИИ

На правах рукописи

ЯКОЕИШВШШ Малхаз Абрамович

15Е - РЕШЯТОРНАЯ АКТИШОСТЬ ИМШСЖСЩЕГШГШЫХ КЛЕТОК У БОЛЬНЫХ АТСШЧЕСКЙМИ ЗАБОЛЕВАНИЯМИ В ПРОЦЕССЕ И«!МУНОРЕАБИЛИТА1Щ

14.00.36 - Аллергология и иммунология

' Автореферат

диссертации на соискание утеной степени кандидата медицинских наук

Новосибирск - 1991

Работа выполнена в Институте клинической иммунологии Сибирского отделения Академии медицинских наук СССР г. Новосибирска, в лаборатории иммунотоксикологии Кубанского государственного медицинского института им. Красной Армии МЗ РСФСР (зав. лабораторией докт. мед. наук Р.А.Ханферян), в Институте клинической иммунологии и аллергологии т. Цхалтубо.

Научные руководители: академик АЕН РС&СР, доктор медицинских

наук, профессор В.А.Козлов

доктор медицинских наук, профессор Р.И.Сепиашвили

Официальные оппоненты: член-корреспондент АМН СССР, доктор медицинских наук, профессор Л.А.Трунова

доктор медицинских наук, профессор А.И.Поляк

Ведущее учреждение: Институт иммунологии Министерства здравоохранения СССР

Защита диссертации состоится " "_1991 г.

в_часов на заседании специализированного совета

К.001.01.01 Института клинической иммунологии СО АМН СССР, по адресу: 630091, Новосибирск, ул. Ядринцовская, 14.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института клинической 'иммунологии СО АМН СССР.

Автореферат разослан " "_1991 г.

Ученый секретарь специализированного

совета, кандидат биологических наук Луул^аА.Т.Кудаева

; ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

КТУАЛЪНОСТЬ ТЕШ. Изучение аллергических реакций, опосредован-ых гиперпродукцией igE, выявило нарушение регуляции его синте-а, приводящее к развитии атопических заболеваний (Гущин И.С., 987; Ishizaka К., I983;Hsieh к.-H. et ai., 1985, 1989). Мно-очисленные исследования последних лет показали, что не мотря на свсго уникальность, процесс синтеза igE подпишется ем же закономерностям, •что и процесс синтеза иммуноглобулинов ругих классов. В исследованиях на грызунах было обнаружено, то дифференцировка В-лимфоцитов в igE-секретируищие клетки существляется при участии антигенслецифических и антигенне-пецифических Т-хелперов, а этот процесс контролируется Т-суп-ессорами посредством растворимых иммунорегуяяторннх факторов Katz D.H., Г983;Jelinek D.ï, et al., I984;i£iaata H. et al., 987). Существенная роль в регуляции синтеза igE принадлежит оноцитам-макрофагам (Круглеева О.Л., 1989; Ханферян Р.А., 990;Delespesse G., 1988).

Механизмы регулирующие синтез igE в чеяовочгаеася сргаптго-е, чрезвычайно' сложны. Гтаерпродукция igE у больйых атоотчео-ими заболеваниями обусловлена нарушением функции различных ипов иммунокошетентных клеток, ответственных как за продукта igE так и за регуляцию его синтеза (Бережная Н.М. с соавт., 982; Балаболкин И.И. с соавт., 1987; Fink J.N., 1985; Ledru Е. t ai., 1988). Показано, что эти нарушения обусловлены-измене-ияш медиаторной активности иммуноцитов (Knoeiier, 1987; hurlock В.,1990;Wierenga Е. et al.,- 1990). В рОГуЛЯЦИИ СИН-еза igK принимают участие практически все известные монокинн ЛШфОКИЯН (Hawrilko К., 1987; Репе J. et al., Г988, 1989). бнаружено, что основным фактором, стимулируташм синтез igE, вляется И1-4, а фактором, реотпрокно угнетепда эхо? процесс, вляется у-интерферонCRoaagnani s., l983;Jokota T. et al., 988; Не la B. et al., 1988).

Основным методом иммулореабижтают большк с атоническим аболеваниями, является специфическая иммунотерапия (СИТ). Од-ако, механизмы ее, в свете последних данных об учаерпт различ-ых цитокинов в регуляции синтеза igis недостаточно изучены.

Исхода из того, что каязшй из типов иммунокошетентных клеток явяяза'ся истсг^няяоы различных медиаторов иммунной системы, как (ижБахруг.?:^. синтез igB, так и угнетаетцих его, представлялось интересным наследовать суммарную igs-регуляторную функцию (активность) эхйх клеток у больных с атоническими заболеваниями по сравнению со здоровыми субъектами, а также в процессе имму-нореабилитации этих больных.

ЦЕЛЬ РАБОТЫ: дифференцированно изучить роль суммарной igE-pery-ляториой активности иммунокошетентных клеток в патогенезе атонических заболеваний и в процессе гаадунореабилитации.

ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ:

1) создать методические приемы,приемлемые для опенки igE-регуляторной активности каждого из типов иммунокошетентных клеток (моноцитов, Т-лим£оцитов и В-лш|сцитов);

2) дифференцированно оценить igE-регуляторную активность отдельных популяций иммунокошетентных клеток у больных атоническими заболеваниями по сравнению со здоровыми субъектами и в процессе иммунореабилитации;

3) изучить антигенспецифические и антигеннеспецифические механизмы индукции igE-регуляторной активности'иммунокощтетент-ных клеток у больных атоническими заболеваниями;

4) создать методические подходы для изучения продукции ИЛ-4 Т-хелперными клетками человека, изучить продукцию ШГ-4 при атопической патологии и отвечаемость мононуклеарных клеток и не-Т-лимфоцитов от больных поллинозами на рекомбинантный ИЛ-4 синтезом IgE in Vitro;

5) оценить.клиническую эффективность препарата "Димефос-фон" по сравнению с СИТ у детей с амброзийннм поллинозом.

НАУЧНАЯ НОЕИЖА РАБОТЫ:

В работе впервые проведена дифференцированная оценка igs-регуляторной активности иммунокошетентных клеток (моноцитов, Т-лимфоцитов и В-лимфоцитов) у детей при атонических заболеваниях, в процессе иымунореабилитации• Показаны разнонаправленные изменения IgE- регуляторной активности отдельных популяций имму-нетщтов у детей с,атопическими заболеваниями.

Выявлено, что в результате СИТ у детей с атопическими заболеваниями в иммунной системе развивается генерализованная ин-

[бицияigE-регуляторной активности иммунокомпетентннх клеток, источающаяся в снижении ise- стимулирующей активности моноот- . >в и В-лимфоцитов и в уменьшении igE-супрессирущей активно-ги Т-лимфоцитов.

У больных атоническими заболеваниями, в отличие от здоро-гх, обнаружено отсутствие простатландин Б2 (ПТЕдЭ-завясийого эханизма индукции igE-стимулирующей активности моноцитов.

Определено, что ИЛ-4-подобная активность супернатаитов элгосрочно культивированных Т~хеяпернзх клеток, у большее с топическими заболеваниями не отличалась от таковой у здоро-лс доноров, однако, отвечаемость как мононуклеарннх клеток, ак и не-Т-лимфоцитов на рекомбинантннй ШГ-4 синтезом igE n vitro у больных была достоверно сильнее, чем в контрольной pyime.

РАКТИЧЕСКАЯ. ЗНАЧИМОСТЬ. Предложена тест-система для оценки ■ gE-регуллторной активности иммуношшегентных клеток, которая ожет быть использована для изучения нарушений иммунной систе-н при атопических заболеваниях и для осуществления контроля а эффективностью проводимого лечения.

Показано, что "Димефосфон" в лечении детей с вкброгойта» оллинозом, не является средством, альтернативным СИТ, однако, азначение этого препарата детям, не прошедшим СИТ, может об-егчить тяжесть клинической симптоматики в период экспозиции ллергена.

'СНОБНЫЕ ПОЛСОТОМ. Б.ЩОСШЫЕ НА ЗАМУ:

1. У детей, больных атоническими заболеваниями, имеется :аругаения ire- регуляторной активности отдельных популяций т-[унокомпетентных клеток.

2. В процессе СИТ у детей с атошчвекими заболеваниями в шмунной системе развивается генерализованная тагибиция XgE->егуяяторной активности иммунокомпетентных клеток, закяючазэща-1ся в снижении i^s- стимулирующей активности аллэрген-индуциро-занных моноцитов тт В-лимфоцитов, а таякк в умеггмгентга igS-cyn-жссирухщей активности ФГА- и ажлерген-етдуттрованных Т-лимйо-датов.

3. Нарушение ХсЕ-регуляторной активности Т-хеяперннх кле-гок при атопической патологии не обусловлено язменрняей секре-

б

цки Ш-4 этими клетками.

ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ. Диссертация состоит из введения, 7 глав, еак»зз";снря и выводов. Материалы изложены на страницах ыашншгси, иллюстрирована таблицами и рисунками. Библиография содоретт 73 отечественных и 125 зарубежных источника литературы.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. Апробация диссертации состоялась на научном семинаре НИИ клинической иммунологии и аллергологии в г. Цхал-тубо 7 мая 1991 года и на научном семинаре Института клинической иммунологии СО АМН СССР в г. Новосибирске 27 июня 1991 года.

Положения:, выносимые на защиту были также доложены на рабочем совещании по изучению региональных особенностей иммунного статуса здорового человека на востоке страны (Новосибирск, 1987), на I Всесоюзной симпозиуме "Реабилитация иммунной системы" (Цхалтубо, 1988), на научно-практических семинарах в НИИ клинической иммунологии и аллергологии г. Цхалтубо, в НИИ педиатрии и детской хирургии МЗ РСФСР г. Москвы, е НИИ клинической иммунологии СО АМН СССР г. Новосибирска, представлены на УП Международном конгрессе Европейской Академии аллергологии и иммунологии (Цюрих, Швейцария, 1991).

ПУБЛИКАЦИИ. По основным результатам исследований опубликовано 9 научных работ, внедрено I рационализаторское предложение.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Общая хашктетастика обследованных. Основным материалом исследования послужили данные клинического, аллергологического и ишунологкческого обследования 144 детей от 5 до 14 лет с атоническими заболеваниями (поллиноз, атопическая бронхиальная астма), а также 32 взрослых больных с различными проявлениями поллинозов. Контрольную группу при иммунологическом обследовании детей составил материал, полученный из периферической крови 41 практически здорового ребенка и 20 взрослых здоровых доноров. Аллергологическсе обследование включало сбор аллергологяческсго анамнеза, постановку скарификациоиных кожных проб, определение уровня общего в специфического сывороточного ХёЕ.

Методы лечения. Специфическую иммунотерапию проводили к лас-

сическими общепринятыми методами - у детей с амброзийннм полли- . нозом водно-солевыми экстрактами пыльцы амброзии (Ставрополь-, ское НПО "Аллерген"), у детей с атонической бронхиальной астмой, с сенсибилизацией к домашней пыли водно-солевыми экстрактами аллергена домашней пыли (Московское ШО "Биомед"). Лечение ди-мефосфоном проводилось методом Святкиной О.Б., 1987, в дозе 50-75 мг 15^-ного водного раствора препарата на кг массы тела в сутки в течение 3-4 недель и заканчивалось аа 1-2 недели до начала сезона поллинации причинно-значимого аллергена. Препарат принимался перорально. Эффективность лечения у больных с амброзийннм поллинозом оценивалась с помощью 5-бальной системы. Мошкевича B.C., 1985.

Определение igE-регуляторной активности отдельных пстртляпиЁ иммунокомпетентных клеток.igE- регуляторную активность иммуно-компетентных клеток определяли по влиянию супернатантов кратко-срочнокультивированных моноцитов, Т-лимфоцитов,и В-лимфоцитов на синтез IgE in vitro в тест-культуре аллогенных лимфоцитов.

Мононуклеарные клетки Еыделяли из периферической крови стандартным методом на фиколл-верографиновом градиенте. Моноциты получали методом прилипания к пластиковой посуде, затем не прилипающую фракцию клеток разделяли на Т- и В-лимфоциты с л помощью розегкообразования с эритроцитами барана, обработанными нейроминидазой (Parkas R. et al., 1986). Выделение Т-лимфоцитов, обогащенной хелперно-индукторной популяцией клеток проводили методом раннего розеткообразования с эритроцитами бара^ на (Киселев C.B., 1989).

Сепарированные клетки культивировали в среде RfMi-iet-o (Flow, Англия), содержащей 5-10^ эмбриональной телячьей сыворотки (Plow) инактивированной в течение 30 минут при 56°С, 2 мМ -L-глутамина (Flow), 5 Ш hepss öyäepa(Fiow) и 80 мг/мл гента-мицина (Hiarmachim), в присутствии или в отсутствие различных . индукторов. В качестве индукторов для моноцитов применялись -ЛПС е.coli Olli;В4(Sigma,- США) в конечной концентрации 10 мкг/ии, индометацин в конечной-концентрации I. мкг/мл (Pharmachim) и -антиген'Е»;(А1'-Е). из пыльцы амброзии в концентрации 0,1 мкг/мя (Allergen.'Control Products', США). ДЛЯ Т-лимфоцитов в качестве индукторов-применялись,5rA-n(Sigma) в конечной концентрации 2 мкг/мл, субстрат ий аллергена домашней пыли (НПО "Биомед",

Москва) в конечной концентрации 0,8 мкг/мл. Для взвеси клеток, обогащенной В-лимфоцитами в качестве индукторов применялись митоген лаконоса (№I)(Serva, ФРГ) и субстрат из аллергена домашней пыла в KvHsvhoh концентрации 0,8 мкг/мл. Такие концентрат«- индукторов были подобраны в предварительных исследованиях. Дкя получения супернатанта, взвесь моноцитов культивировали в течение 20-22 часов, взвеси Т- и Влимфоцитов в течение 4 суток при 37°С, во влажной; среде в присутствии 5% COg-

После окончания культивирования, взвесь моноцитов центрифугировали при 6000 в в течение 30 минут, супернатанты собира-, . ли, лиофилизировали,-разводили в 33% среды от изначального, объ-, • ема, фильтровали через фильтры (Miliipore, 0,23 мк, Франция) и хранили - при-,-20°С до. применения. Для получения супернатантов' от Т- и В-Лимфоцитов, после окончания культивирования, их взве- , си центрифугировали аналогично.взвеси моноцитов и ставили е присутствие 0,1-пррцентного раствора полиэтиленгликоля (М.м. 6000, мегсй, ФРГ) при -20?С до тестирования. -;,•■.

Для получения взвеси клеток, спонтанно продуцирующих .igE-антитела in vitro; использовали, неприлипающую фракцию мононук- . леарных клеток миндалин - от больных -хроническим декошгенсировая- • ным тонзиллитом, удаленных в результате тонзилзктомии. Неприли-павдая фракция .клеток миндалин содержала 4% зстеразо-позитлвных ,, клеток, 65#-0КВ-7+клеток и ,31$ 0КТ-3+клеток. Тестируемые, супернатанты добавляли в тест-культуру,аллогенкых лимфоцитов в соотношении 1/3; объем на объем, ;послв' чего-их культивировали в течение 5-7-9 суток, в зависимости от поставленной ,задачи в тех же условиях, которые-были .изложены выше, После культивирования, жадосадочную жидкость ,собирали и измеряла е ней количество IgE.:' ' ......; .-vs.;; .>.. ,. ,у . •

Определение количества*!^: синтезипуемого in vi,ty>. .Для определения количества igE, синтезируемого.in- vitro.клетками . 'тест-культуры,' был использован метрд^тэш1г H., ;et,,ai. ,1986, в нашей^модафгкаши (Якобищвюрг M.A.s.c соавт. 1989). Сут^, метода- состоит -в том, что для радиоиымуиного определения, ксличест-ва igE 'В супернатантах клеточных iкультур, в качестве твердой. r г фазнисиользовалибумажные диски с, анта-1вЕ-антителами из набо- ,, pa Riadebas IgE PEXST(Pharmacia, Швеция), прИМвНЯе^ОГОДЛЯ/ОП- ■ ределений уровней общего igE в сыворстке, ав качестве конъюга-

та применяли анти- 1еВ-1251-аНТИТела Phadebas-IgE RAST (Pharmacia), используемого для выявления антигенспецифических igE-антител в сыворотке. Часть измерений синтезированного in vitro igE в супернатантах производили с помощью оригинальной тест-системы на моноклональных антителах'(Behringwerke, ФРГ), согласно прилагаемой инструкции. При радиоиммунном исследовании чувствительность метода составляла 50 пг igE/мл, при иммуно-ферментном - 160 пг igs/мл.

Для расчета количества igü, синтезированного in vitro de novo из количества igE, выявляемого в каждом образце супер-наганта опытной культуры, вычитали количество пронормированного igE, обнаруживаемого в супернатантах .контрольных культур клеток, обработанных циклогенсемидом (Fiuka Chemical, Швейцгь рия).

Оценка №1-4-подоброй активности стпернатантов долгосрочно культивированных Т-хелпет>ных клеток. ЙЛ-4-подобную.активность супернатангоЕ долгосрочно культивированных Т-хелперных клеток определяли -по -костииулирующей активности .данных.-супернатантов с анти-16м-монокяояальными антителами ® -тест-культуре покоящихся В-глмфойитов человека. . Прототипом данного метода послужили 'исследования Eabin.-к. -et ,vu, 198?, в которыхбнло обнаружено, .что особенностью' 1И-4, отжчащего его от другихпитокинов, является способность' костимулировать с анти- igii-моноялональны-ми "антителами пролиферацию покоящихся :В-лимфоцитов из - .миндалин человека.

Для • получения 'супернатантов 'с ■'пстншенной ИЛ-4-подобной ак-- тайностью от Т-хелтерншсклеток," -использовали-метод активатга и -выведения ;аллореакттшх Т-хелперных =клолов;№гАше1 ,1988).. .Для этого, -йблучейййе'- дт 5-4 больных-атогшей Т-хнян^рш/е .-клетки пу-лгф'ойаот и- стимулировали их ;е смешанной культуре 'Лимфоцитов пу-шрованными Т-л!п.Агбойиттт от 3-4 таких т.е больных, предварительно 'обработйтшйли ,што1эдинш ' Ctsigiqa) -и 'ФРА*-в .течение• 72.часов. :Затем-клйта -оттгеали Ьт лГА и. ресуспоядировали в. культуральной сроде, пбСле-.чего.'их тжубярЬвялв 120 часе« тех .же.-условиях, -В нрнсутстсий 1"Л-2-Е К01П10ЯтрайНГИ '4Пи .-'/мл. В : 70ЧвН?ге. такого.,., ' Гулътурашюго периода ггрои^ерадаяспулировятьгх Т-хелперных ' клеток*'Црёкращаяась - из-за -истощения ■ Р»2 .э сред$> .Посла ¿центрифугирования, супернаталтн собирали и дополнительно- стерилизова-

ли фильтрованием. Для уменьшения, активности ^-интерферона, возможно, присутствующего в супернатантах, образцы подвергали 2-кратаойу замораживанию и оттаиванию методом Defrance т. et ai., 1986. Затем супернатантн хранили при -80°С до дальнейшего тестирования. Супернатантн, полученные таким путем, в отличие от супернатантов краткосрочно культивированных Т-лимфоци-тов, которые супрессировали синтез igE in vitro в тест-культуре неприлипавдих клеток миндалин, в данном случае демонстрировали igE-сгимулиругацую активность.

Для получения чистой популяции покоящихся В-лимфоцитов производили фракционирование общего пула В-лимфоцитов, полученного вышеизложенным путем из периферической крови донора, на плавучей плотности многоступенчатого градиента перколла (Pharmacia) методом Kusetti F.w., 1986. После центрифугирования, которое производили в течение30 минут при 1800 об/мин, искомую фракцию покоящихся В-лимфодатов собирали с 4-ой сту- -пеньки перкольного градиента. ." .

Мышиные антикроличьй 'моноклональные антитела против £'аь 2-фратаента igM были любезно предоставлены доктором Kaminsky s. ¿Department of Pathology, State University of New Гогк of Buffalo, США). ' •

Покоящиеся В-лимфоциты культивировали с анти-1еМ-монокло-нальными антителами в концентрации I мкг/мл, в течение I. суток, после чего в культуру добавляли супернатэнты от Т-хелперных . клеток в соотношении Г/3, объем на объем. Через 3 суток, куль- • ■гивирования, клетки импульсивно метили ^-тимидином <8 час, 5 мКи/йл), радиоактивность определяли после переноса клеток . на фильтры (Whatman, Англия): И1-4-подобную.активность • супернатантов Т-хелперных клеток оценивали по индексу '.елияния (ИВ) по формуле: i -■

уровень пролисберации в культуре покоящихся В-лимфоцитов ; с анти-IgM с добавлением супернатавта , "' >

ИВ = I . ". v ' ...... . 1 ■ t-.. ' . -

уровень пролиферации в культуре покоящихся В^лямфоцитов '' ' с анти- igM без добавления супернатанта

В качестве контроля в данной системе тестировались сле,ду-щие'цитоктщ - ИЛ-I ji ( Geiizime^corpnrnbiorii США',) в конечной концентрации 50 и /мл, ЮГ-2 (Институт,биоорганической химии, Ри-

га) 3 конечной концентрации 40 и /мл, JDI-4(&enzime Corporation, США) в конечной концентрации 45и /мл, ^-интерферон (Институт биоорганического синтеза АН СССР) в конечной концентрации 20 ц/мл. В качестве bcgf (фактора а активностью ИЛ-5) использовали супернатанты от пулированнюс Т-лимфоцитов здоровых доноров, полученные методом Киселева С.В., 1989. Такие супернатанты добавлялись в тест-культуру в соотношении I/I, объем на объем.

Статистический анализ полученных данных. Стандартная обработка вариационных рядов включала подсчет значения средних арифметических величин (М) и ошибгж средних (т). Рисунки сояергат информацию в виде значений м£п. Достоверность различий в сравниваемых группах оценивали по критерию и Вгогкоксона-Манна-Уит-ни. При оценке igE-cynpeccupyiomett активности краткосрочно культивированных Т-лимфоцитов, рассчитывали индекс супрессии (КС) по формуле:

igE-секреция в тест-культуре без супернатанта - igE-

секреция в тест-культуре с супернатантом ИС --х 100$

igE-секреция. в тест-культуре без супернатанта

Обработка результатов проводилась с пшощьа .коапкеяса про-грат bistat на двк-згл, разработанного в группе Ш и СОД ики со АМН ссср.

Взаимосвязь параметров определялась с помощью коэффициента корреляции Спирмена.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБОТДЕНИЕ

Закономерности синтеза Хкё in vitroклетками тест-культуры. В качестве тест-культуры была использовала культура из не-прилипающих клеток миндалин, так как она отвечала следующим требованиям: I) из миндалин удавалось получить достаточно большое количество клеток, что позволяло тест-г:совать неограниченное количество сулернатаптов от иммунокомпетртептогх клеток исследуемых субъектов в одних и тех же услови.х,: 2) клетки тест-культуры продуцировали, спонтанно количества igB, которые можно было бк уловить с П0';0':'.ью гшевдихся габерев дг: определения igE; 3) синтез igij в тест-культуре нл8'-с>:-'..;т,гш1як вй изменялся под

вавянием тег ксякчвста штогенов и антигенов, которые могли бы попасть в культуру шесте с тестируемыми супернатантами.

При исследовании кинетических закономерностей синтеза ise in vitro, культурами клеток неприлипагацей Фракции миндалин было обнаружено, что наибольшего уровня этот синтез достигал на 5-7 сутки, после чего происходило торможение нарастания igE в культуре (Рис. I). Резкое усиление синтеза igE in vitro в культуре клеток от больных атоническими заболеваниями, происходило на 3 сутки, в то время как в культуре клеток от миндалин, полученных от неатопикс® оно наблюдалось на 5 сутки. Хотя уровень синтеза igE в культурах неприлипащей фракции клеток миндалин достигая наибольших результатов на 9 сутки, жизнеспособность клеток к атому времени падала до 45%. Падение жизнеспособности наблюдалось после 7 суток (Рис. I), поэтому для замеривания количеств IgE в гест-культурах клеток-миндалин были выбраны 5-7 сутки, когда жизнеспособность была 75-80?.

i^e-тегуляторная активность моноцитов ? больных с атоническими заболеваниями. В результате исследований igE регуляторной активности моноцитов у детей, больных амброзийным поллино-зом, было выявлено (Рис. 2), что почти во всех случаях, супер-натанты моноцитов как от практически здоровых детей, так и от больных детей, обладали igE-стимулирующей активностью. Обнаружено, что супернатанты спонтанно культивированных моноцитов, исследованные у больных детей как до лечения, так и после лечения, обладали одинаковой igE-стимулирующей активностью, но более сильной, чем супернатанты нестимулированных моноцитов здоровых детей. Исходя из того, что все супернатанты моноцитов, использованные вами, обладали ige-стимулгоугацей активностью в дайной системе, был сделан вывод, что участие моноцитов в рефляции синтеза IgE осуществляется, вероятно, посредством растворимых иыиунорех^ляторных факторов, вырабатываемых ими, и в этом процессе не является обязательным непосредственный^контакт моноцитов с Т-линйсцитамя.

Оказалось, что супернатанты обработанных ЛПС моноцитов, подученные от детей всех 3 групп (леченых, нелеченых и здоровых детей), обладали одинаковой х^-стимулирувэдей активностью, в данных экспериментальных условиях, но достоверно более высокой, чем супарнатанты иесгамулпроваягшх моноцитов. Шло предположи-

123456789

Рис. I. Закономерности синтеза 1оЕ в культуре непри.тапа-ющх. клеток «индалин.

1 - общая шзнеспособность клеток от всех культи-

вированиях в данное эксперимент® миндалин,

2 - синтез 1оЕ чепрллипащими к четками миндалян

от Зольных атопией /п=3/,

3 - синтез непршшшюкума клетками кквдалвн

от неатопиков /п=4/,

нелеченые дети леченые дети здоровые дети

bic. 2. Влияние супернатантоп «онод/.тов на олктез IgE в культууе .непуичпииыщих. клеток иднчалнн.

Pi.5-9 ¿ °*05 Р5-7 L °-05 Рз-ь L °-С5 Р3-6 L о .ОБ

i'l_3 L 0,00 pa_IL ¿ 0,05 pg_I2 i 0,05 . К - уровень Iqü, спонтанно с-4нтезируе»юго в культуре не-пр&шкыцхх клеток кацдаллн,

□ Cii 01 нестлму ирония- ||||||] ОН от иоконлтов, индуп;!-ííjx mijhojmtob, 1ш1| fobihuihx .'iil'j,

C;i от .лоноц/.топ, лн- ИНН СИ от спонтанно куяьти-jLyiUij.Jor-'ajíJiux АГ-д, в.цмнниинх »ю.чопитэн,

о'^а'гатаннкх пндометащ-.иок.

о, что одной из причин последних различий может быть усиление продукции ИЛ-1 под влиянием ЛПС. С целью проверки данного предположения исследовалось елиянис рекомбинантного шг-т^ на синтез igE in vitro в тест-культуре непрюгапалщих клеток миндалин.. Было обнаружено, что добавление Ш-Ip дозозависимо усиливало синтез igE in vitro.

Учитывая возможное ингибирующее действие простагландина Eg (ETEg) на индукцию синтеза монокинов и лимфокинов, включая и Ш-4 (Репе J. et al., 1989), была проведена оценка IgE-регу-ляторной активности супернатантов нестимулированных моноцитов в условиях блокады простагландинов индометахщном. Установлено, что обработка моноцитов индометацином усиливала IgE- стимулирующую активность супернатантов от них по сравнению с супернатан-тами нестимулированных моноцитов у леченых детей, а также у практически здоровых детей. igE-^егуляторная активность супернатантов нестимулированных моноцитов и обработанных индометацином моноцитов не отличалась между собой. Эти результаты позволили предположить, что у больных, в отличие от здоровых детей отсутствует ПИ^-зависимый механизм индукции igE-стимули-рующей активности моноцитов. В результате СИТ наблюдается появление указанного механизма.

Следовательно, нарушения функции моноцитов при атспии, ОПИСаЛНЫе раЗЛИЧНЫМИ авторами (Hsieh iC.-H. et al., 1987; Dina-reiio с.A., 1989), обусловлены, скорее всего, не изменениями синтеза и высвобождения моноцитами ИЛ-I, а дисбалансом синтеза и высвобождения других регуляторных монокинов, продуцируемых ими.

Исходя из того, что fe период экспозиции аллергена резко усиливается как содержание ige в сыворотке кроЕИ (Burgio j.h. et al., 1978; Leung D.X. et al.,I986), так И выработка IgE in vitro мононуклеарными клетками больных атопическшт заболеваниями (Spiegelberg H.L. et al., 1983; Ring J. et al., 1987), a первым барьером при проникновении аллергена в организм яеляются клетки моноцитарно-макрофагального ряда, было решено исследовать igE-регуляторную активность моноцитов, индуцированных причинно-значимым аллергеном, в данном случае антигеном Е из пыльцы амброзии (АГ-Е). В исследованиях по изучению влияния антигена Е на igE-регуляторную активность супернатантоЕ моноцитов,

было выявлено, что igE-стимулиругацая активность моноцитов у больных детей достоверно выше, чем у здоровых. В процессе спе-. цифического лечения наблюдалось снижение igE-стймулирувдей активности аллерген-индуцированных моноцитов.

Таким образом, результаты наших исследований показывают, что моноцитам принадлежит значительная роль как в регуляции синтеза igE, так и в осуществлении иммунологических механизмов СИТ.Таковыми являются ингибиция igE-стимулирующей активности аллерген-индуцированных моноцитов и деблокирование продукции ■ IlTEg в процессе СИТ у детей, больных амброзийным поллинозом.

т^Е-тзегулятотэная активность Т-лимфоцитов у больных атот-ческими заболеваниями. В результате исследований lgE-регулятор-ной активности у больных с атонической бронхиальной астмой с сенсибилизацией к домашней пыли, было выявлено, что супернатан-ты как от спонтанно культивированных Т-лимфоцитов, так и от Т-лф, индуцированных специфическим (аллергеном домашней пыли), и не-, специфическим индукторами(ФГА), обладали igE-супрессирующей активностью (Рис. 3).

Было обнаружено, что супернатанты спонтанно культивированных Т-лимфоцитов как от больных, так и от здоровых детей, обладали одинаковой igE-супрессирущей активностью, однако в результате СИТ отмечалось достоверное угнетение данной активности. При индукции лимфоцитов неспецифическш стимулятором ФГА-П, igE-супрессирующая активность супернатантов Т-лимфоцитов у больных детей также не отличалась от. таковой у здоровых детей, но в результате СИТ выявлена ее достоверная, ингибиция.(Рис. 3): Возможно, что такая ингибиция igE-супрессирующей активности супернатантов Т-лимфоцитов, обработанных ТА, "является .следствием снижения продукции IUI-2, которая выявлялась в аналогичных супер-натантах в процессе СИТ как у больных атопической бронхиальной астмой (Hsiell it.-H. et ai., T985), так и у больных амброзийным поллинозом (Hawriiuo е. et aL., 1985). Кроме того, известно, что ИЛ-2 является фактором, в определенных условиях ингибируяь ЩИМ синтез IgE (Romagnani S., Т990).

При обработке Т-лпмфоцитов аллергеном домапшей пыли, обнаружено, что супернатанты аллйрген-индуцированных Т-лимфоцитов как от больных, так и от здоровых детой, обладали одинаковой ь-н-супресстгрующен активностью, однако в результате I курса

Индекс супрессии»

00

60

40

20

%

Рх_4 I 0,05 Р2_5/0,05

Рз-б ¿°>0Г

123 456 789

да лечения после лечения здоровые дет;!

Рис.3. Влияние сулернатантов Т-длм'Топйтов на синтез в культуре ненрл.ыпающ11.х клеток мледа.мн.

□

КС,

ьо

60

40

20

[СИ от спонтанно культивированных к■ Т-.1Ф, ^

СК от Т-ч*., индуцированных аллегеном ¿Д.,

СИ от Т-лф, хн-дуглрованннх фГА.

р^/ 0.05 Р2_4 I °-05

1

\

Ш

I

л

ГС-.4

Г

ДО ЛЙ"ЧеН!1Я »осле 11-;-:'

Рис. 4. Влияние супеоннтзнтов .

19Е Н Культуре : к-т"

и о

. етл "т.и1 на О ■ ч IV

СИТ вновь шкЗгаэдалась ингибиция igE-супрессирующей активности Т-лимфоцитов, индуцированных специфическим аллергеном.

Возможно, что повышение уровня, сывороточного igE в результате I курса СИТ, наблюдаемое в многочисленных исследованиях (Шеварднадзе Ц.И. с соавт., 1984; Tjio А.н. et al., Г979), являются результатом перестройки igE-супрессирующей активности как антигенстимулированных, так и антигеннеспецифических Т-лим-фоцитов.

Такт! образом, супернатанты Т-лимфоцитов, как от больных, так и от здороЕых детей, демонстрировали in vitro IgE- супрес-сирующую активность. В результате СИТ у детей, больных атопи-ческой бронхиальной астмой происходила ингибиция IgE- супресси-рующей активности супернатантов спонтанно культивированных Т-лимфоцитов, а также ФГА- и аллерген-индуцированных Т-лимфоцитов. Такое угнетение igE- супрессирущей активности Т-лимфоцитов в процессе СИТ не может быть обусловлено включением класс-специфических Т-супрессоров, в этом случае произошло бы усиление igE-супрессирующей активности. Возможно, что ингибиция igE-cyn-рессирующей активности супернатантов Т-лимфоцитов обусловлено повышением активности класс-специфических Т-хелперньгх клеток.

т^к-регуляторная активность T-лимФопитов. обогащенных хел-петзно-индукторной популяцией у больных атопичеоктоли заболевани-т. Для дальнейшего изучения igS- рвгутторной активности Т-лйм-фоцитов были проведены исследования Т-клеточного пула, обогащенного хеллерно-индукторной популяцией (далее условно Т-хелперных лимфоцитов) у детей с атопической бронхиальной астмой с сенси-бшшзацией к домашней пыли. Были проведены исследования igE-pe-гуляторной активности Т-хелперных лимфоцитов, индуцированных ФГА и аллергеном домашней пыли. В результате исследований показано (Рис. 4), что все супернатанты от Г-хелперных клеток, как от больных, так и от здоровых детей, обладали igE-супрессирую-щей активностью. igE- су дрессирующая активность Т-лимфоцитов-хелперов, индуцированных специфическим аллергеном не отличалась у больных атонической бронхиальной астмой от активности у здоровых детей. Не изменялась эта активность и в процессе СИТ.

igE- супрессирующая активность супернатантов Т-хелперных клеток, индуцированных ФГЛ, у больных атонической бронхиальной астмой была достоверно ниже, чем у здоровых детей. В процессе

СИТ происходило усиление ХцЕ-супрессирующой активности ФГА-индуцированных Т-хелиерных клеток.

Если сравнить igE-супрессируицую активность аллерген- и . ФГА-индушрованных Т-лимфоцитов-хелперов и общего пула Т-ятал-фоцитов (Рис. 3 и 4), и их изменения в процессе СИТ, видно, что эти изменения носят разнонаправленный характер. Можно видеть, что ингибиция igE-супрэссируидей активности общего пула Т-лимфоцитов, индуцированных аллергеном и ФГА, развивающаяся е процессе СИТ, не обусловлены изменениями.igE-супрессирущей активности популяции Т-лимфоцитов, обогащенными хелперно-ин- ' дукторной популяпдей.

ХкЕ- регуляторная активность не-Т-лимгвопитов v больннх атоническими заболеваниями. Известно, что В-лимфоциты являются не только клетками-мишенями, но и сами могут выступать в качестве источников регуляторных факторов, они могут вырабатывать факторы роста (сашЫег J.c. et ai., 1987) и факторы с супрессорной активностью (Nakagawa N. et al., 1985). Эти факторы, возможно, могут обладать и igE-регуляторной активностью, как и антитела, вырабатываемые В-лимфоцитами, которые в определенных условиях способны ингибироЕать антителообразование по типу обратной связи.

В результате исследований igE-регуляторной активности не-Т-лимфоцитов у детей с атопической бронхиальной астмой с сенсибилизацией к домашней пыли обнаружено, что все супериатантн как от больных, так и от здоровых детей обладали igE-стимули-рующей активностью (за исключением супернатантоЕ не-Т-лимфоцй-тое от бдльных, индуцированных митогеном лаконоса,.эти супер-натанты не влияли на синтез igE in vitro в тест-культуре). Супериатантн ст спонтанно культивированных не-Т-лимфоцитов- как от больных, так и от здоровых детей в одинаковой степени инду-цироЕали синтез igE in vitro в тест-культуре кеприлипающих клеток миндалин, не изменялась эта активность и в процессе СИГ. ГТри обработке же не-Т-лимфоцитов митогеном лаконоса обнаружено, что только супорнатанты от здоровых детей обладали igE-стиму-лирующей активностью, а супернатанты от не-Т-лимфоцитов больннх как до лечения, так и после лечения не влияли достоверно на синтез igH е тест-культуре in vitro. Такие результаты объясняются, еидимо, тем, что митоген лаконоса индуцирует е попу-

ляции не-Т-лимфоцитов факторы, угнетающие синтез igE. В проведенных нами предварительных исследованиях митоген лаконоса угнетал синтез igE in vitro ,кан В-лимфовдтами, так и мононукле-арными клетками больных агонией.

При обработке не-Т-лимфоцитов аллергеном домашней шли было обнаружено, что супернатанты как больных, так и здоровых детей обладали одинаковой igE-стимулиругщей активностью. В процессе СИТ данная igE-стимулиругацая активность супернатантоЕ ал-лерген-индуцированных не-Т-лимфоцитов достоверно угнеталась (Рис. 5).

Исходя из вышеизложенного, можно заключить, что В-лимфоциты также принимают участие в ингибиции igE-стимулирущей активности, которая развивается в процессе СИТ, как и моноциты.

Решено было ответить на вопрос - опосредовано ли угнетение igE-стимулирующей активности аллерген-индуцированных не-Т-лимфоцитов, индуцированных аллергеном, развивающееся в процессе СИТ, В-Т-клеточннм взаимодействием (так как в тест-культуре имелись и Т-лимфоциты), или оно результат действия факторов аутокринной саморегуляции В-лимфоцитов. Для выяснения данного вопроса супернатанты от не-Т-лимфоцитов, индуцированные аллергеном, тестировали в тест культуре чистой популяции В-лимфоци-тов от больного с атонической патологией. Обнаружено (Рис. 6), что супернатанты от не-Т-лимфоцитов, индуцированные аллергеном, тестированные в чистой популяции В-лимфоцитов, также обладали igE-стимулируицей активностью. В процессе СИТ igE-сти-мулирутацая активность этих супернатантов достоверно не изменялась, что позволило сделать вывод о том, что угнетение igE* стимулирующей активности аллерген-индуцированных не-Т-лимфоцитов в процессе. СИТ опосредовано В-Т-клеточннм взаимодействием, но не факторами аутокринной саморегуляции В-лимфоцитов.

ДОГ-4-подобная активность супернатантов долгосрочно культивированных Т-лимФопитов. обсгашенннх хелперно-инлукторной популяцией у больных поллинозами. В результате проведенных исследований, было обнаружено, что в отличие от краткосрочно культивированных Т-хелперных лимфоцитов, супернатанты долгосрочно культивированных Т-лимфоцитов, обогащенных хелперно-индукторной популяцией обладали igE-стимулиругацей активностью. Причем как супернатанты от донорских Т-хелперных лимфоцитов, так и от лим-

11Г/МЛ 5000

4000 -

3000 20С0

1000

к-

Р2_5 I 0,05

Рз_е /0,05

I

до

2 3 леченчя

4 5 6 после лечения

7 '8 9 здоровне дети

Р/с, ¡3.

Здлянле супернатантов не-Т-ламйоиитов на синтез 1дВ в куяьтуре кепря^ыааадих клеток миндалан. ^

□

ОН от спонтанно

¡культивированных не-Т-тТ-,

К-уровень МБ

^ СИ от не-1-л£„ индуцированных аллергеном ¿Д,

ОН от не-Т-лу, индуцированных митогеном дако-носа.

спонтанно синтезируемого в культуре непри-липающях клеток мивдатан.

Ж

¡1

Р1-2 ^ 0.05

до чечрнлк посие лечения .:с. 6. Злияняе супр^нигантов ке-Т-ч*1*Я оцатон на слнтез

н хулмуре 15-,;.:.'.;:.с)1тлта» ае^и;е^лческо^ К1-ови от Золь-нлу а соц.-.б! ,

фоцитов больных атонией демонстрировали in vitro одинаковую igE-стимулирувдую активность. Однако в сулернатантах Т-хелпер-ных клеток, активированных в смешанной культуре лимфоцитов и истощенных от ИЛ-2, не исключалось присутствие №1-5, обладающего костимулирующей активностью с ИЛ-4 по отношению к синтезу IgE in vitro (Репе J", et al., 1988), ПОЭТОМУ судить об ЮГ-4-подобной активности супернатантов по nxigE- стимулирующей активности было бы неточно. Ш-4-подобную активность решено было определять по костимулирующей активности данных супернатантов с анти— хgtt-моноклональными антителами в тест-культуре покоящихся В-лимфоцитов, по включению %-гимидина.

В результате исследований показано, что Ш1-4-подобная активность супернатантов долгосрочно культивированных Т-хелпер-ных клеток не отличалась у больных поллинозами от таковой у здоровых доноров (Рис. 7).

Отвечаемость мононуклеарных клеток и В-лимФоцигое от больных поллинозами на тзекомбинантный ЮГ-4 синтезом igE; in vitro. Исследование любого ЮГ в клинической практике предполагает 2 основных момента: I) секреция его клетками-продуцентами и 2) отвечаемость клеток-мишеней функциональной активностью на него. Поэтому дальнейшие исследования были направлены на изучение отвечаемости клеток-мишеней от здоровых субъектов и больных атонией на рекомбинантный ШГ-4. Была изучена отЕечаомость мононуклеарных клеток и В-лтафоцитов на рекомбинантный ИЛ-4 синтезом IgE in vitro.

В результате наших исследований показано (Рис. 8), что спонтанный•синтез IgE как мононуклеарными клетками больных атоническими заболеваниями, так и не-Т-клеткамп от них быг достоверно выше, чем у мононуклеаров и не-Т-клеточной фракции лимфоцитов от доноров. Добавление рекомбинантного ИЛ-4, с которым клетки культивировались в течение 7 суток, усиливало синтезу и в системе донорских мононуклеарных клеток, и в культуре мононуклеаров агопиков. Однако, степень усиления синтеза IgE у атопиков при культивировании мононуклеаров с ИЛ-4 былп. гораздо выше, чем при культивировании мононуклеарных клеток доноров. При культивировании не-Т-клеток от больных атопией с Ш-4 обнаружено, что синтез igE также занчителыго стшултгао-вался, но в гораздо кеньаей степени, чем в г^пыу-рь пег:.™'?*«?-

ИВ

10 Б

6 4

2

>ис. 7.

7мл 0G0' ООО

ООО' ООО-

ООО

ООО'

ООО'

ООО'

/.с.

Р2-3 7 0,05 А

ИВ

10

8 6

' 4

2

Рз_з 7 0,05 В

1

I 2 3 I • 2 3

МЛ-4-подобная активность сулернатантов долгосрочно культивированных Т-лим|.01итов-хелперов:. / I - тест-кудътура, 2 -- больные поллинозами,- 3 - -здоровые доноры; А-конечная концентрация антл-IgM- в культуре 2 мкг/мл, B-IQ мкг/мл /.

Pj_2 7 0,05 Pj_3 7 0,05 F2_4 Z 0,01 P3-4 L °»01

Ж

IQB ПГ/МЛ

7000

6000 5000

4000

3000 2000

1000

В

Pr_2 L °'05

pI-3 ^ 0,05 P2-4 L 0r05 ?3_4 Z0»05

о

■

за ы ' - од ш • бя за ' hi

-Д.Т-4. —>1Л—4 +ИЛ-4 '*ЯЛ-4 .. ' : Ч1Л-4 -ЙЛ-4 +ИЛ-4"^ИЛ-4 Отвечаеиость на рекомбиНайтнш'! 'ИЛ-4 в культуре синтезом" IgE

А - .'¿ононуклеарных клеток, 3 - не-'Г-ламфоцитов. '•> 3jiзлоровне'донор!),'ьЛ Jo'i'KHiie tio?.fHHö3asti. '■

2

4

арных клеток. По-видимому, это связано с тем, что для активации 'частой В-Клеточной популяции недостаточно одного только Й2-4 (iiaggie Б. et al.,I989; Vercelli Б. et al., 1989), необходим непосредственный контакт между Т- и В-лимфоцитами и присутствие моноцитов. Именно присутствием незначительного количества Т-лимфоцитов и моноцитов, в отличие от Ьзвеси мононук-леарных клеток можно объяснить Гораздо меньшую индукцию синте-ia igE m vitro в культуре не-Г-лимфоцитов больных. Повышенная по сравнению 'с донорскими клетками отвечаёмость как мононукле-вра клеток, так й не-Т-клеток "больных на Ш-4 синтезом igE мойвт объясняться и повышенной экспрессией на В-литл$оцитах атопиков нгзкоа$Ешсшх рецепторов для ige (рсе-р2, cd-23), описанных как рецепторы для И1-4 на клетках-мишенях (Deiespe-ase G. et al., T988;3Cishia!oto Т. , 1987). Видимо, при атопиче-скиХ заболеваниях происходит Накопление активированных В-лимфоцитов, способных отвечать на КЯ-4. Одной из возможных причин 'активации &^клеток '•мож'е'г -быть "их взаимодействие с причинно-вначтЙ» iairoepreHOM.

Ссавстп'влЬная клиник Ог-ишунологическая -Опёнка 'эДгбективно-сти:димвФоо$ша-и СИТ-пта -лечении -детей-с :а^брозийкнм поллино-аом. В результате лечочия детей "с 'амброзййным поллдаозот? дт.?е-фосфоном "отличные результаты (5 "баллов) не ггслучены ни--'у одного борного, хорошие результаты получопк -у Т2 детей (42,85?), урв^&сцМетшЪ /рёзультаты --у 14 Детей '(50$), 'мщдовкетва-'itoejttHke-результаты получены у 2-х -детей (1,2%). ty детей,тс-■чвшшх только СИТ, бит получены "следующие результаты - отлич-

•-¿е^уль^йы ''ле^ейик псйгучёны -у 2 ^етей (ТО, Ъ%), -у 14 ^детей , 'получены^хорошие"результаты1 (73,75$), у 2 'детей /лолучёны-удов-■ леФворитвльные результаты (10,5*) и лишь-у' одного -ребенка 'бил по^те^%*0у^ойлетворительшй результат "(5,<255?) • -У-Детей, иото-■■0/'^овёйбйги 'сбчвтанное применение дасфосфстта t|..C0T, 'были ' получаны ¿яедуетще результаты - 'отличные результаты получены С-у ^^де'тёй СГе.б^), -хорошие результаты получены у 12 детей

одного. ребенка .получен неудовлетворительный результат (6,2$).'В группе, .нелеченрнх ;в обострение, у 8 детей повторилась та же симптоматика, что и годом ранее (88',$%) и'гжяъ •уодного ребенка с риноконъюнктгаалыгим синдромом прогтзсшяо прогреСсирование симптоматики -присоединился синдром йроттхн-

г\

альной астмы, то есть произошло ухудшение состояния (11,1$). Все результаты эффективности лечения были сгруппированы и представлены в графическом виде на рисунке 9.

Как видно из рисунка 9, эффективность применения димефос-фсна была достоверно ниже, чем эффективность в группах детей, которые получали СИТ (р г 0,05). Сочетанное применение диме- . фосфона и СИТ не увеличивало достоверно эффективности лечения по сравнению с группой детей, получавших только СИТ (р > 0,05), однако такая тенденция очевидна. Таким образом, димефоофон в лечении детей с амброзийным поллинозом не является средств cat, альтернативным СИТ, однако его применение у- детей, которые цо каким-либо причинам не прошли курса СИТ, можно рекомендовать в, качестве превентивного лечения. '

Неспецифические иммуномодуляторы, которые в дальнейшем могут использоваться при лечении атогётческой патологии(должны отвечать, в первую очередь; двум требованиям (Vaiourone u., Tassi G.с., 1985) : I) угнетать синтез igE' in vitro и 2) ингибировать высвобождение медиаторов аллергических реакций из клеток-ыише-ней аллергии. Что касается второго пункта,' известно, что диме-фосфон усиливает торможение прямой дегрануляции базофилов и торможение высвобождения лейкотриенов под-действием .антигена (Святкина О.Б. с соавт., 1988); что же касается'первого пункта - димефосфон ранее не исследовался на выявление .его влияния .на синтез igE in vitro, хотя известно, что: лечение, им приводило к снижению уровня сывороточного igÈ у детей с агопичвской бронхиальной астмой (СЕяткана О.Б.' с соавт., 1988). Исследование влияния димефосфона на синтез igE in vitro, проводилось :в 7-суточ-нпй культуре мононуклеаров- донора-атопика с повышенным уровнем сывороточного ; igE. Дшёфосф'он'тестировался е дотольно широком ранжире доз (от 0,0015 до 15 мкг/мл). Как видно из рисунка 10, ни при одной из конечных концентраций-димефосфон .достоверно, не влиял на.синтез igE in vitro -в тест^культуре. и •

. У 20 нелеченых детей с 'амброзийным поллинозом, фло ревено провести исследование igE-регуляторной активности аллергев-ин-дуцированннх моноцитов при' лечении их различными методами, поо-ле лечения. Из-20 детей не получили 'лечения 4 детей, 9 детей,' лечились димефосфоном и 5 детей получили I курс СИТ", а 2 детев не обследовались. Был проведей:Коррелящонный.анализ мезгау..эф-

Эффективность леченая /баллы/

3 4

2 "

I "

РГ-3,4,5 ^ °"05 Р3_4 7 0.05

Рас. 9. Сравнительная клиническая эффективность применения диме-фосфона при леченяя детей с амброзлйным поляшозом. I - дети не лечилась, 2 - дети лечились дамефосфоном, 3 - дет* получаля СИТ, 3 - дямефосфок применялся с СИТ.

2000

К 1000

'1дЕ, пг/мл

конечная конпе т'радля прелар'а в. культуре¿мг/

.■' V 15 1,5 0,15 0,015 0.0015'-

Рас. 10. ..Вллянае- разданных доз дамефосфона на синтез Гр в культуре мононуклеарных клеток от больного атоплей. К - уровень Г^Е, спонтанно сянтезлруемого в культуре.

фсктивностыо лечения в различных группах и уровнем ]^Е-ре17ля-торн ой активности аллерген-индуцировалных моноцитов после проведения лечения. Как видно из рисунка II, усиление эффективности лечения сопровождается снижением з^е- регуляторной активности (1ЕЕ-стимулируищей активности) аллергеи-индуцированннх моноцитов. При статистической обработке полученных данных опре- • делился довольно высокий уровень обратной корреляции (г= -0,78). Что касается клинического применения димефосфона, он может использоваться в качестве превентивного лекарственного средства до периода экспозиции аллергена.

Тест на выявление з^Е-$егуляторной активности АГ-Е-инду-цированных моноцитов до и после лечения можно использовать для мониторинга эффективности иммунореабилитации при амброзийном поллинозе у детей.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В результате проведенных исследований по изучению л^е-регуляторной активности иммунокомпетентных клеток у больных атоническими заболеваниями выявлены нарушения этой активности у отдельных популяций клеток и изменения ее в процессе иммунореабилитации. Понятие иммунореабилитации включает 2 аспекта: I) выздоровление больного или улучшение его состояния при иммунопатологии и 2) достижение 1-го с помощью иммуноактивной терапии. К иммуноактивной терапии относятся все те медикаментозные и немедикаментозные методы лечения, эффективность которых опосредована иммунологическими механизмами. Именно иммунологическими механизмами опосредована эффективность основного вида лечения атонических заболеваний - СИТ.

Выявлено, что у детей, больных атоническими заболеваниями хеЕ-регуляторная активность иммунокомпетентных клеток отличается от таковой у практически здоровых детей. В процессе иммунореабилитации происходит изменение ^Е-^зегуляторной активности отдельных популяций иммунокомпетентных клеток - ингибирует-ся 1£Е-стимулирующая активность аллерген-индуцироваяных моноцитов и В-лимфоцитов, а также 1вЕ-супрессируюцая активность ФГА- и аллерген-тодуцированных Т-лимфоцитов, что позволило предположить о развитии генерализованной ингибиции ХйЕ-регуля-торной активности в процессе СИТ, развиваемом в иммунной систе-

28

2 3

ГоЕ-регуляторная активность ДВ/

4

I

' 4

Э нктлв-кость лечения , За «та.

Рис. II. Взаимосвязь ак;ектлзностл раз яичных методов чччения

с 1дЕ-регулято1мок активностью АГ-1£-ац5уц.*ровая«!х ¡ю-ноцлтов у детей с ал'|роз.йным поиинозам. I — дет* не лечл чяоь, 2 - дет-; пр-члплсь .);«.^осТолоы, 3 - дети получает С:!Т, 4 - ядо^оане детл. л -О'Мект-шность печена у здоровых детку ус юпно пг;«н<-йэлш за максимальную.

ме.

При исследовании роли ИЛ-4 в развитии атонической патологии полученные результаты позволили предположить, что Т-хел-пернне клетки у больных атоническими заболеваниями не имеют нарушения синтеза и продукции ШГ-4, и гиперпродукция IgE при данной патологии обусловлена скорее всего дефицитом продукции оппозитных цитокинов интерферона^ и ИЛ-2, супрессируицее влияние которого на синтез IgE in vitro блокировалось его ио-тощением в культуральной среде.

Возможно, что в организме больных с атопической патологией имеется гиперпродукция Ш1-4, однако она обусловлена не Т-хелперными клетками, а другими клетками, известными как продуценты ШГ-4 (тучные клетки, базофилы) ( Helm в. et ai.,I988; Jokota т. et'ai., 1988). Существует и вероятность того, что наша система для исследования Ш1-4-подобяой активности несовершенна и окончательно поставить точку в вопросе о роли ШГ-4 при атонии позволят дальнейшие исследования на новом уровне. Изучение отвечаемосги В-лимфоцитов на рекомбинантный ШГ-4 позволило предположить, что изменения у атопиков обусловлены не столько нарушение продукции ШГ-4, сколько дефектом отвечаемоо-ти клеток-мишеней (в частности, В-лимфоцитов) функциональной активностью на этот Ш.

В ходе работы по изучению igE-регуляторной активности им-мунокомпетентвых клеток при атонических, заболеваниях было выявлено, что эффективность лечения больных коррелирует.с селективными изменениями этой активйости в каждой из популяций им-мунокомпетентных клеток, что позволило, нам:выдвинуть гипотезу о селективной модуляции IgE-регуляторной активности иммуноком-петентных клеток, как одного из ключевых"механизмов иммунореа-билитации больных с атопической патологией. Правомерность гипотезы демонстрируется в исследованиях igE-регуляторной*активности аллерген-индуцированных моноцитов у детей, больных амбро- . зийным поллинозом.

Таким образом,-результаты клинических и иммунологических исследований пациентов с атопической патологией и изучение патогенетической роли нарушений IgE-регуляторной активности от- -дельных популяций иммунокомпетентных клеток, а также роля ШГ-4 при данной патологии, и изменения этих показателей в процессе иммунореабтотации, позволят в дальнейшем найти иммуноактивные

средства, селективно корригирующие данные показатели, что поз- 41 волит разработать новые формы и методы лечения.

ВЫВОДЫ

1. Супернатанты краткосрочно культивированных монощитов и В-лимфоцитов как здоровых детей, так и детей больных атоническими заболеваниями в тест-культуре аллогенных лимфоцитов, спонтанно продуцирующих igE in vitro, проявляют IgE—стимулирующую активность, в отличие от супернатантов краткосрочно культивированных Т-лимфоцитов, демонстрирующих igE-супрессирующую активность в аналогичных условиях.

2. У детей, больных атопическими заболеваниями, имеются нарушения igE-регуляторной активности иммунокомпетентных клеток, выражающиеся в повышении igE-супрессирующей активности ФГА-индуцированных Т-хелперных клеток, усилении igE-стимулирующей активности В-лимфоцитов, индуцированных митогеном лаконо- . са, а также увеличении igE-стимулирукщей активности аллерген-индуцированннх В-лимфоцитов и моноцитов.

3. Б результате специфической иммунотерапия у детей с атопическими заболеваниями в иммунной системе-развивается генерализованная ингибиция igE-регуляторной активности иммунокомпетентных клеток, заключающаяся в снижении igE-стимулирующей активности моноцитов и В-лимфоцитов и в уменьшении igE-супрессирупцей активности Т-лимфоцитов. Ингибиция ibe- стимулирующей активности В-лимфоцитов в процессе специфической иммунотерапии обусловлена В-Т-клеточным взаимодействием, но не факторами аутокринной саморегуляции В-лимфоцитов.

4. У детей, больных амброзийным поллинозом, в отличие от здоровых детей igE-стимулирующая активность моноцитов периферической крови не зависит от синтеза простагландина Eg. В результате специфической иммунотерапии отмечается появление простагландин^-зависимого механизма ипдукцш igE-стимулирую-щей активности моноцитов.

5. ШГ-4-подобная активность супернатантов долгосрочно культивированных Т-хелперных клеток у больных поллинозами не отличается от таковой у здоровых доноров. Отвечаемость же мо-

нонуклеарянх клеток и не-Т-лимфоцитов на рекомбинантный ШГ-4 синтезом XgE in vitro,у больных поолинозами значительно выше, чем у здоровых доноров.

6. Димефосфон в лечении детей с амброзийннм поллинозом не является средством, альтернативным специфической иммунотерапии, так как эффективность его применения достоверно ниже эффективности применения специфического лечения. Однако, в отсутствие последней его следует назначать как превентивное лекарственное средство до периода экспозиции аллергена.

7. Патогенез атонических заболеваний характеризуется разнонаправленными изменениями igE-регуляторной активности отдельных популяций иммунокомпетентных клеток и процесс имыунореаби-литации должен быть направлен на комплексную коррекцию найденных нарушений.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Якобашвили М.А., Назаретян В.Г. Иммунный статус и иммунокор-рекция у детей, больных амброзийным поллинозом // Тезисы докладов УШ Северо-Кавказской конференции по иммунологии, аллергологии и молекулярной биологии. - Пятигорск, 1987. -С. 94-95.

2.• Якобишвили М.А., Дорофеева Е.М., Хаиферян Р.А. Комбинированная фармако-имыунокоррекция поллинозов у детей // Тезисы докладов I Всесоюзного симпозиума по реабилитации иммунной систеыы. - Цхалтубо, 1988. - П. 132-133.

3. Якобишвили М.А., Овсянникова И.Г., Гервазиева В.Б., Черных Е.Р. Определение количества иммуноглобулина Е, синтезиемо-го ин витро // Тезиси секционных и стендовых сообщений первого всеоюзкого иммунологического съезда. - Москва, 1989. -Т. 2. - С. 378.

4. Якобишвили М.А. Модуляция функции моноцитов у детей больных псмипшозаыи в процессе специфической иммунотерапии // Тезисы докладов I международного симпозиума по реабилитации иммунной системы. - Сочи, 1990. - С. 112.

5. iakobishvili М.А., Sepiashvili R.I., JiozLov V.A., Chichlad-ze M.V. IgE-regulatory activity of monocytes in children with pollinosis // Abstracts of the International Symposium of Allergy and Clinical Immunology "Regulation and Clinical Significance of IgE. - Moscow, 1990.

6.'Sepiashvili R.I., Tceidze G., Kutateladze A., Kapanadze G., Djugeli G., iakobishvili M. Methods of immunorehabilitation of patients with rheumatoid arthritis // Abstracs of European of Immunology society meeting X, Edinburg, 1990.

7. Якобишвили М.А., Сепиашвили P.И., Козлов В.А. Дифференцированная оценка igE-регуляторной активности лимфоцитов у детей с.сенсибилизацией к домашней пыли // Тезисы докладов Всесоюзной конференции "Актуальные проблемы аллергологии в детском возрасте"., - Махачкала, 1991.

8. Sepiashvili E.I., Xakobishvili М.А. IgE-regulatory activity of monocytes in dynamics of immunorehabilitation in children with pollinosis // Annual Meeting of European Academy of Allergology and Clinical Immunology. - Zurich, 1991.

9. Якобишвили M.A., Сепиашвили P.If., ОвсянникоЕа И.Г., Герразл-ева В.Б., Козлов В.А. Влияние специфической иммунотерапии на IgE-рсгуляторную активпоегь моноцитов датой, больных амбро-зийнш поллинозом // Ж. Иммунология. - в печати.

_ ___- т л ж— пг\ auu огу.р