Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Характер изменения функциональной активности регуляторных лимфоцитов и синтеза иммуноглобулина Е у больных атопической формой бронхиальной астмы

министерство здравоохранения и медицинской промышленности россии

российский государственный медицински« _университет_

48 ОД

/ 3 зд ш' на правах рукописн

УДК 616.248 : 616.155.32

БУСАРОВА Екатерина Анатольевна

ХАРАКТЕР ИЗМЕНЕНИЯ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ РЕГУЛЯТОРНЫХ ЛИМФОЦИТОВ И СИНТЕЗА ИММУНОГЛОБУЛИНА Е У БОЛЬНЫХ АТОПИЧЕСКОЙ ФОРМОЙ БРОНХИАЛЬНОЙ АСТМЫ

14.00.36 — Аллергология и иммупологня

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Москва 1994

Работа выполнена на кафедре патологической физиологии Российского государственного медицинского университета.

Научный руководитель доктор медицинских наук, профессор Г. В. Порядин.

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор И. В. Петрова; доктор биологических наук, профессор В. Н. Федосеева.

Ведущее учреждение — НИИ вакцин и сывороток имени И. И. Мечникова.

Защита диссертации состоится « . . . »..... 1994 г.

в «... » часов на заседании специализированного совета № Д0841406 Российского государственного медицинского университета по адресу: 117437, г. Москва, ул. Островитянова, 1.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке РГМУ.

Автореферат разослан « . . . »....... 1994 г.

Ученый секретарь специализированного совета,

Доцент Т. Е. Кузнецова

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ. Бронхиальная астма является одним из наиболее распространенных заболеваний, поражающих в отдельных" странах и регионах ».ира до 10Х всего населения (Ивашкин В. Т. с соавт., 1990; Пс^опригора Г.И., 1987; Федосеев Г.Б. с соавт., 1988; Чучалин Д.Г., 1989).

3 результате многочисленных клинических и экспериментальных исследований на сегодняшний день накоплен значительный фактический и теоретический материал, касающийся вопросов этиологии и патогенеза бронхиатьной астмы и ее наиболее распространенной атопической формы (АБА). Однако, приводимые разными автора;.™ данные пока не псе волявт составить целостного представления о механизмах зтого заболевания и, в особенности об изменениях з иммунном статусе а процессе его развития (Федосеев Г.Б., 1287; Gurka et al, 1988; Kay et al, 1985). Все еще далеки от совериенс-гва и существующие методы терапии АБА.

В связи с этим представляотся весьма актуальным комплексное изучение вакнейших функциональных'показателей клеточного и гуморального иммунитета при АБА и выявление' взаимосвязи между активностью иммунорэгуляторных клеток и процессом продукции 1вЕ В-лимфоцитами, поскольку публикуемые по этим вопросам сообщения являются достаточно противоречивыми (Яегер Л., 1990; Borlsh, 1987; ■ Ishlzaka К., 1989). То из могло отметить и в отношении объяснения влияния специфической гипосенсибилизацик на иммунную систему у больных АБА, з результате чего до настоящего времени природа ее терапевтического аффекта, так же как и причина наблюдаемых при ней осложнений остается не ясной (Ошъат П., 1983; Порошина ¡0.А. с соавт., 19В8; Пыцкий В.И. с соапт., 1991).

В последние годы в экспериментальной иммунологии Есе большее внимание уделяется изучению регулирующего влияния цитоки-

нов, в частности интерлейкина-2 и интерферонов на функциональную активность иммунокомпетентных шш'.'ок в условиях нормы и при некоторых заболеваниях, сопровождающихся иммунными нарушениями (Войгенок H.H., 1988; Кетлинский С.Д. с соавт., 1992; Соловьев В.Д. с соавт., 1981; Bascan et al¡ líigi). Однако, их эффект на клеточный и гуморальный иммунитет именно при АБА практически не изучался, в связи с.чем проведение какого исследования представляет особый интерес для решения фундаментальных вопросов о роли нарушений рецепции интерлейкина-2 и интерферонов в генезе иммунных нарушении при этом заболевании.

Не менее актуальным является изучение возможного эффекта широко используемых при терапии бронхиальной астмы антиспастических (вг-адреномиметических и М-холииодктичеасих) препаратов на функции гуморального и клеточного иммунитета для уточнения взаимосвязи между сопутствующим эффектом, оказываемым этим!-: средствами на иммунный статус, и динамикой течения АБА. Оценке злияния иммуномодуляторов (мшздроната) на функциональную активность иммунокомпетентных клеток больныхч АБА является валшьи, составным эвеном активно проводимых в настоящэе время исследований на кафедре патофизиологии РГМУ, направленных на разработку методов коррекции иммунных нарушений при бронхиальной астме,

ЦЕЛЬ РАБОТЫ. Целью настоящей работы являлось изучение активности иммунорегуляторных клеток и продукции IgE In vitro i культуре лимфоцитов больных атопическоч формой бронхиально] астмы в периодах обострения и ремиссии заболевания, а так» исследование влияния на эти показатели специфической гппосенси билизации, некоторых цитокинов (интерлеикина-2 и рекомбинантно го а-интерферона), антиспастических препаратов (сальбуташла тровентола) и иммуномодулятороЕ (милдронат*).

ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ. Реализация поставленной цели предусматривала решение следую щи:; конкретных задач:

1. Исследовать общую1 £1ктивн0сть Т-лимфоцитов, характер баланса хелперно/супресссрной активности иммунорегуляторных клеток и продукцию 1еЕ в кулътуре лимфоцитов больных атопической формой бронхиальной астмы в периодах ремиссии и обострения заболевания.

2. Изучить влияние специфической гипосенсибилиэации на функциональную активность нммунорегуляторных клеток и продукцию 1гЕ в культуре лимфоцитов больных АБА в раннем (сразу по завершен!« курса специфической терапии) и отдаленном (спустя 10 месяцев) периодах после ее проведения.

3. Исследовать влиянг.е интерлейкина-2 и с£-интерферона (ре-аферона) на баланс хелперно/супрессорной активности иммунорегуляторных клеток у больных атопической формой бронхиальной астмы в стадиях ремиссии и обострения и эффект воздействия тех же ци-токинов на продукцию 1&Е В-лимфоцитами в период обострения заболевания.

4. Изучить возможность фармакологической коррекции активности регуляторных лтафоцитов у больных атопической формой бронхиальной астмы в стадиях ремиссии и обострения и продукции 1цЕ В-лимфоцитами в период обострения заболевания новыми оте-чественнышГпрепаратами (сальбутамол, тровентол, милдронат).

НАУЧНАЯ НОВИЗНА ИССЛЕДОВАНИЙ. В результате проведенных исследований получила дополнительное экспериментальное обосно-Еание гипотеза, объясняющая гиперпродукцию при атопической форме бронхиальной астмы ослаблением супрессорной функции иммунорегуляторных клеток.

Впервые установлен разнонаправленный эффект успешно осу-

ществленной (по клиническим критериям) специфической гипосекси-билизации на функциональные показате;ш клеточного и гуморального иммунитета в раннем и отдаленном йериодах после ее проведения, что позволило существенно уточнить механизм ее влияния на иммунный статус Сольного.

Впервые установлено усиление суг.рессорпэд активности имму-норегуляторных клеток при обострен! л втопической бронхиальной астмы под влиянием интерлейкгот-2 и о,-интерферона, что позволило получить дополнительную информаиш о роли этих цитокинов в патогенезе данного заболевания и рассматривать гиперпродукцию 1вЕ при нем как следствие ослабления стимулирукцэго эффекта изучавшихся медиаторов на Т-супрессоры.

Впервые изучены иммунотропные эс}фек.ты отечественных препаратов - сальбутамола, тровентола и ¡аищроьгта - на экспериментальных моделях, служивших для оценки соотношение хелперно/суп-рессорной активности иммунорегуляторных клеток и продукции ¡¿Е В-лимфоцитами. ■

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ. Срзцзнительно-э исследование показателей, характеризующих функциональную активность иммуно-регуляторных клеток и продукцию В-лимфоцитами здоровых лиц и больных атопической формой бронхиальной астмы в разные периоды заболевания позволили установить характерные изменения в иммунном статусе больных, что-имеет значение для совершенствования как диагностики, так и лечения АБА.

Исследование перечисленных.показателей у больных атопической формой бронхиальной астмы после проведения специфической гипосенсибилизации в раннем и отдаленном периодах после ее окончания позволило существенно уточнить иммунологические кри-

герии данного метода лечения.

Обнаруженная у тровектода и сальбутамола способность ни? малиэовывать нарушенный бшанс хелперно/супрессорной активности и уменьшать гиперпродукцио IpE В-лимфоцитами у больных атонической формой бронхиальном астш способствует расшифровке механизма их положительного терапевтического эффекта. То же можно отметить в отношении милдрзната, под влиянием которого впервые было зарегистрировано уменьшение образования IgE в культуре лимфоцитов, больных АБА.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. Материалы диссертации доложены на конференции "Актуальные вопрос аллергологии и иммунологии в аридной гоне" (г. Ашхабад, 1991), на 1 республиканском съезде аллергологов и иммунологов Узбекистана (г. Ташкент, 1991), на 2-м Всероссийском конгрессе по болезням органов дыхания (г. Челябинск, 1S91), на Первом Российском национальном конгрессе " Человек и лекарство" (г. Москва, 1992), на 1 съезде иммунологов России (г. Новосибирск, 1992), на 3 и 4 Российских конгрессах по болезням органов дыхания (г. С.-Петербург, 1992, Москва, 199-1).

ПУБЛЛКАЩШ. По результатам выполненных исследований опубликовано 11 печатных работ.

СТРУКТУРА И ОБЪЕМ .ДИССЕРТАЦИИ. Материалы диссертации изложены на ill страницах машинописного текста. ■ Работа состоит из введения, обзора литературы, раздела "Материалы-и методы", 5 глав собственных исследований, заключения л выводов,' иллюстрирована 5 рисунками и 10 таблицами. Указатель литературы включает 178 названий (отечественных - 113, зарубежных -65).

СОДЕРИАНИБ РАБОТЫ:

МАТЕРИАЛУ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ. Объектом исследования служили лимфоциты периферической крови 42 практически здоровых

доноров и 68 больных атонической формой бронхиальной астмы.. В момент обследования у 41 больного регистрировалось обострение заболевания и'у 27 - ремиссия.

Диагноз атопической 'бронхиальной астмы устанавливался , на • основании данных анамнеза, объективного и лабораторного обследований, при выявлении соответствуют^ симптоматики, характерной для этого заболевания, а такие пслодштельных кожных проб со специфическими■аллергенами., Подбор пациентов осуществлялся на базе поликлинического отделения и стационара Института Иммунологии Минздрава России и аллергологического кабинета и. стационара Института Пульмонологт Уинздрана России.

Мононуклеарные клетки ваделяли из периферической крови обследованных лиц методом цеятрифугировакия а градиенте плотности фиколл/верографин ,077 г/см3) по методу Воуил) (1958г).

Спонтанную и инду^рованную с&итогемзгглютинином (ЙГА) (1 мкг/мл) реакцию, бластной трансформации лимфоцитов (РБТЛ) учитывали по включении мечеьного тритием тшэдина (0,01 мкКк/на

пробу). Пролиферагивную активность лимфоцитов под действием ЙГА вырадали в виде индекса стимуляции (КС) (фримель Г., 1987): количество имп/мин в культуре с 5ГЛ

ИС---------------------------------------

количество имп/мш в культуре без ФГА Активность иммунорегуляторных лимфоцитов исследовали, индуцируя иммунорегулягорные клетки Конкакавалино.м А (Кон А) в супероптимальной концентрации -'60 мкг/мл по методу 51юи е! а1 (1976). При этом реакцию ставили в 4-х рядах лунок в микропланшетах с использованием в качестве тест-клеток лимфоцитов здоровых лиц в концентрации 1;10бкл/мл.

Пролиферацию тест-клеток определяли через 72 часа по вкшо-чению Нэ-тимидина. Индекс индуцированной Конканавалином А имму-норегуляции расчитыЕали по формуле: И - Р

НИР -------х 1007.

Р

где: Л - число имп/мш в пробах с регуляторными клетками, преинкубированньэ/и без Кон А;

Р - число имп/ыич в пробах с регуляторными клетками, преинкубнрованныш с Кон А.

Для определения прод}:<ции IgE In vitro часть ввделенных лимфоцитов р культуральнси среде в концентрации 2x10® кл/мл сразу эаморзнлвали и использовали для последующей оценки содержания сформированного IgE. Другую часть после 7-суточной инкубации при 37°С разрушали 5-кратным замораживанием-размораживанием. Концентрацию IgE определяли с помощью набора реагентов для определения IgE с использованием авидин-биотиновой системы НПО "Биотехнология".Определение проводили в соответствии с рекомендациями азторов, возглавляемых Р.Г.Василовым, фотоколсри-мотрическим способом. Разница меиду количеством определяемого IgE з 7-суточпой культуре лимфоцитов и преформированнсго IgE характеризовала уровень продукции IgE.

Для из)-чоння влияния препаратов на функциональную активность лимфоцитов здоровых лиц и пациентов с АБА In vitro лимфоциты преинкубирсвали с испытуемыми веществами в следующих концентрациях:

Интерленкин-2 (ИЛ-2) - 50 и 500 ЕД/мл (оптимальная и супероптимальная митогенная концентрация);

Реаферон (РФ) - 500 и 5000 МЕ/мл (оптимальная и суперопти-

мзльная концентрация, «обладающая противовирусным эффектом);

Сальбутамол - 2,0 мкг/мл (соотгетствует концентрации в плазме крови при назначении средней терапевтической дозы);

Тровентол - 0,1 мкг/мл (соответствует концентрации в плазме крови при назначении средней терапевтической дозы);

Милдронат — 5 и 50 мкг/мл (соотвётству;г концентрациям в плазме крови при назначении средней и максимальной терапевтических доз).

Разница значений ИИР и продукция IgE In vitro, определяемых без и при предварительной инкубации тестируемых лимфоцитов с испытуемыми веществами характеризовала их влияние на, соответственно, иммунорегуляторные плетки и В-димфоциты-продуцэнть: IgE. При изучении иммунотропных эффектов милдроната оценивали только его влияние на продукцию IgE, поскольку исследование воздействия данного препарата на активность нммунорегуляторных лимфоцитов, индуцируемых Кон А, было проведено в наией лаборатории ранее (Салмаси Ж.М., Порядин Г.В., 1989).

Статистическую обработку результатов проводили на персональном компьютере типа "IBM AT" с -применением пакета прикладных программ "Statgraphycs", используя параметрический критери; t Стьюдента и непараметрическнй критерий Вилкоксона-Манна-Уит-ни. Для каждого показателя рассчитывали среднее значение случайной величины и ошибку средней (М±ш).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И Ж ОБСУЖДЕНИЕ.

1. Характеристика функциональной активности млмуморегуля торных лимфоцитов и продукции IgE у Сольны;: атопической GpoHioi алькой астмой. Проведенными исследованиями установлено, чт атопическая бронхиальная.астма сопровождается взаимосвязанным

изменениями со стороны нммунорегуляторных клеток и продукции 1£Е. Как следует из рис. в период обострения заболевания регистрируется выраженное усиление продукции цитофильных антител до 325,62159,67 пг/мл при уровне 27,37+2,15 пг/мл у здоровых лиц и параллельно отмечается значительное нарушение хелпер-но-супрессорного баланса иимунорегуляторных клеток, индуцированных Кон А, з сторону ослабления супрессорной функции (ИКР составил -55,42±7,1). В период ремиссии выраженность этих изменений, хотя й в меньшей степени, но также характеризуется возрастанием продукции и нарушением активности индуцированных супрессоров. Все описываемые изменения являются достоверными (р<0,05).

ЕЯ

CZ3 «*АОЯГ?Ч>»€

а)

СЗ

Рисунок 1. Фунгацюиалыш активность Кон Д - индуцированных

¡шмунорегу.^яторных лимфоцитов (A) si продукция IgE In vitro (2) у Сольных АБА. При сравнительной оценке уровней спонтанной, ФГА-индуциро-ванной пролиферативной активности и ИС мевду контрольной (здо-•

ровые лица) и обеими «опытными группами (больные АБА в периодах ремиссии и обострения заболевания), е. такие между самими опытными группами-достоверных отличий выявлено не было (р>0,05).

Полученные данные свидетельствую! о том, что при АБА, независимо от периода клинической выраженности заболевания, практически не .изменяется способность лш^юцитое к спонтанной пролиферации и их ответ на Т-клеточные поликпональные митогены. В то же время отмечается прямая взаимосвязь между степенью отклонения показателей ИИР и продукцией IgE и периодом АБА, т.е. их значительно большие изменения в сравнении с контрольной группой при обострении заболевания, чем при его .ремиссии. Тот факт, что изменения активности кммунсрегуляторных клеток, стимулируемых Кон А, и продукция IgE i.o всех случаях сказывались взаимосвязанными наглядно демонстрирует, что продукция IgE В-лимфоцитами контролируется активностью супрессорной фракции иммунорегуляторных ¡теток и подтверждает результаты исследований, проведенных как в нашей лаборатории под руководством профессора Порядила Г.В., так и другими авторами на иных экспериментальных моделях и также установивших, что повреждение иммунитета при АБА обусловлено ослаблением его супрессорного звена (Gaspan et al, 1991; Gupta et al, 1988).

2. ^¡зыэнекке клеточного н гуморального иммунитета у больных атонической бронхиальной астмой под влиянием специфической гнпосенсибилизкрующей терапии. Несмотря на то, что специфическая гипосенсибилпзация (СГ) как метод лечения различных видоь атопии, в тем числе и АЕА, используется в клинике достаточно давно (Noon, 1911), тем не менее до настоящего времени не выработано единой общепринятой концепции, объясняющей механизм et терапевтического действия. Одним из страданий этого являет«

противоречивость данных, характеризующих влияние СГ на активность клеточного и гуморального иммунитета, приводимых разными исследователями (Хаитов Р.!'. с соазт., 1993).

Согласно нашим данным представленным на рис. 2, успешно проведенная по клиническим критериям СГ (т.е. с хорошими и удовлетворительными результатами) сопровождается возрастанием ЛИР с -14,34±5,787. (до начала курса терапии) до -7,84±6,602 сразу после его завершения и до +16,18±12,557. - спустя еще 10 месяцев. Это свидетельствует о тенденции к восстановлению баланса хелперно/супресссрнсй активности кммунорегуляторных клеток под влиянием СГ, причем выра*енность этого процесса в наибольшей степени проявляется не сразу, а спустя определенное время после окончания лечения.

А

СИ £ОСГ ЕЗ ПГ* <Т <»-»■—>

ES2 «с* сг с»

£3 jo сг £Z2 лес* сг (i-э «4>

С1 ГОС.1 Cf (10 w)

Рисунок 2. Влияние специфической гипссонскбилнгации на функциональную активность Кон А - индуцированные имму-норегуляторные лимфоциты (А) и продукцию igE in vitro (Б) у больных АБА.•

■ - 14 -

Продукция IgE 1» vitro в культуре лимфоцитов сразу' после окончания курса СГ возрастала со 185 иг/мл (до лечения) до ЗОЕ пг/мл (р<0,05), что совпадает с увелшэнием уровня цитофилышх антител в плазме крови после проведения специфической терапии, отмеченным многими исследователями, ровиков Д.К., с соавт., 1991; Порощина Ю.А. с соавт., 1988)I Однако, определение продукции IgE In vitro в культуре лимфоцитов у этих же больных через 10 месяцев после окончания курса СГ показало значительное снижение продукции IgE - дй 39 пг/мл (р<0,05).

Полученные результаты, по видимому, можно объяснить тем, что в момент проведения специфической гипосексибилигации по; влиянием специфического аллергена происходит активация В-кл&тоь памяти, чему, возможно, способствует и сохраняющееся хелпернос влияние регуляторных лимфоцитов. Активация же T-cynpeccopoi происходит несколько позднее, что сопровождается существенны») подавлением IgE-ответа (по нашим данным - через 10 месяцев).

Полученные' данные позволяют утверждать, что специфшеская гипосенсибилизация в случае ее клинического успеха вызывает положительные изменения в ¡щеточном, и гуморальном иммунитете, т.е. активирует ослабленную супрессорную функцию и подавляем гиперпродукцию IgE. Однако следует подчеркнуть, что описанные изменения наступают не в процессе ее проведения, а требуют определенного времени (в нашем случае около 10 месяцев).

3. Изменение функциональной активности иммунорегуляторнш Т-лимфоцитов и IgE-продукции В-лимфоцждмк больных атонически бронхиальной астмой под влиянием медяаторсв иммунной систем! (а-иктерферона и интерлейкина-2). Среди возможных причин развития наблюдаемого при АБА дисбаланса активности пммунорегулятор-ных клеток и нарушений контроля продукции IgE существенное мес-

то отводится нарушениям эффектов медиаторов иммунной системы, и в частности, ИЛ-2 и интерферонам. Для проверки этого положения нами изучено влияние ИЛ-2 и а-ИФ на активность иммунорегулятор-ных лимфоцитов, стимулируемых Кон А, и продуюцт IgE In vitro в культуре клеток.

ДОНОПи "Г1«:СП<Я ОБОСТРЕН^

J

ИЛ-2 ■ 1Л/ЫЯ '

1-2 SOO

ДОНОРЫ РС1#ССИЯ OTiOCTPEWt

ЕЭ KwA КЗ КИЫМ SCO СЗ KwUPf Moo

"Ifwi РТ • ьс/м*

Рисунок 3. . Влияние ИЛ-2 (А) и РФ (Б) на функциональную активность Кон А - индуцировании:: регуляторных лимфоцитов больных АБА.

По нашим данньв1, представленным на рис. 3, ИЛ-2 и а-ИФ (РФ) в испытанны:: концентрациях не оказывают непосредственного воздействия на активность иммуноре гуля торных меток больных АБА и здоровых лиц, однако при их использовании в комбинации с супероптимальной доэой Кон А отмечается ослабление вызванной этим митогеном стимуляции хелперной активности в культуре лимфоцитов, что проявляется резким достоверным снижением отрицательных значений ИКР, вплоть до появления положительных значений, что свидетельствует о восстановлении супрессорного эффекта иммуно-

регуляторных клеток под влиянием испытанных цитокинов.

В наибольшей1степени Кон А-индуцируемая активность Т-суп-рессоров у пациентов с АБА как в обострении, так и в ремиссии восстанавливается при инкубации лимфоцитов с РФ, причем более выраженный эффект оказывала его концентрация 500 МЕ/мл. Добавление в культуру клеток ИЛ-2 в обеих концентрациях также усиливало активность супрессорных лимфоцитов больных, однако в абсолютном выражении эффект интерлейкина-2 значительно уступал аналогичному действию реаферона (р<0,05).

Исследование влияния тех цитокинов на продукцию Ig-E In vitro в культуре лимфоцитов (рис.4) показало, что ИЛ-2 и РФ ослабляют IgE-сингез у больных АБА в период обострения примерно в 2 раза (р<0,05). Относительно большей активностью в сравнении с интерлейкином-2 обладал РФ, причем более эффективней оказалась его концентрация 5000 МЕ/мл.

£52 к. <прои :оо i-J ил?ст< иуь w/t*

СИ ил- г w сл/w ^ г м /t»'

Рисунок 4. Влияние 11Л-2 и РФ на продукцию IgE In vitro в культуре лимфоцитов больных АЕА.

Сопоставляя данные, представленные на рисунках 3 и 4, можно предцоложить, что одним из вероятных механизмов усиления продукции IgE при атопической бронхиальной астме является ослабление иммуномодулирующих эффектов «-интерферона и интерлей-кина-2, что может быть одной из причин, обусловливающих дисбаланс хелперно-супресссрной активности регуляторных клеток. Учитывая, что под влиянием РФ и ИЛ-2 ослабление продукции IgE наб-" людается на фоне относительного возрастания активности Т-суп-рессороз,. модно также предположить, что обусловливаемое*обоими цитокинами уменьшение гиперпродукции IgE достигается за счет восстановления нарушенного баланса хелперно-супрессорной активности.

■£. Влияние сальйутамола и трпвентола на иммунорегуляторлке лимйоцнты и активность IgE-синтеаа у больных атопической бронхиальной астмоД. В последние годы все больше внимания уделяется исследованию иммунотропных эффектов препаратов, традиционно используемых для купирования приступов бронхиальной астмы. Изучение влияния, новых отечественных антиспастических препаратов -сальбутамола и тровентола - на активность иммунорегуляторных клеток позволило установить следующее (рис. Б А):

Сальбутамол и тровентол.в испытанных дозах не оказывают непосредственного воздействия на активность иммунорегуляторных лимфоцитов, однако эти же препараты ■ обусловливают достоверное (р<0,05) значительное усиление индуцированной Кон А супрессор-ной активности иммунорегуляторных клеток больных АБА как в период ремиссии заболевания, так и (в меньшей степени) при его обострении.

Данные о тем, что в условиях In vitro тровентсл и сальбутамол способны е определенной мере восстанавливать нарушенный

баланс хелперно-супрессорной активности у больных АБА позволяет предположить, что и в условиях ln vivo прием этих же средств при АБА также способен нормализовывать иммунорегуляторные функции Т-лимфоцитов.

А Б

CS ЮНА /и*

CU KMA-tlPOID.IlMVMft

КЯ C^WIANOA 1 meitAO» ut МГ/WI

Г~) »«ДП»*> »де/МА СИ

Рисунок'5. Влияние сальбутаыола и тровентола на Кен А - индуцированные лимфоциты больных АБА (А); Влияние сальбутамола, троьентола и мнлдроната на продукцию IgE In vlti'-o лимфоцитами больных АБА (Б).

При исследовании влияния тровентола и сальбутамола на продукцию IgE в культуре лимфоцитов больных АБА в период обострения (рис. 5 Б) было установлено, что испытанные препараты оказывают достоверный (р<-0,*05) выраженный- эффект, обусловливая почти двухкратное подавление образования цитофильных антител. Сопоставление этих данных с результатами аффекта тровентола и сальбутамола на стимулированные Кон А регуляторные лимфоциты,

т.е. результаты, представленные на рисунках 5А и ББ, показывают, что . наблюдаемые под влиянием испытанных средств подавление продугащи IgE может объясняться их' способностью стимулировать активность Т-супрессоров, ингибируюцих процесс продукции цито-филъннх антител В-лимфоцитами.

Таким образсм, выявленный в работе иммунокорригирующий эффект сапьбутамола и тровентола позволяет существенно уточнить' механизм лечебного действия этих препаратов. Помимо антиспастического аффекта исследованные препараты обладают и иммунотроп-кым действием, что необходимо учитывать при их практическом использовании.

О. Блиякне отечественного нммуномодулятора милдроната на продуицш: IgH In vitro лимфоцитом" больных АБА. В предварительных исследованиях, проведенных в нашей лаборатории на модели Кон А-индуцируемых регуляторних лимфоцитов больных АБА был доказан выратенный иммунокорригирующий эффект нового отечественного иммуномодулятора милдроната (Салмаси K.M., Порядин Г.В., Журавлева Н.Е., 1992). Клиническое применение милдроната показало его высокую эффективность в больном проценте случаев при лечении больных с атопией (Апульцина И.Д.,. Порядин Г.В., Салмаси Ж. И.; 19Е9). Однако непосредственного изучения влияния этого препарата на продукцию IgE In vitro лимфоцитами больных ABA не проводилось.

Нами установлено (рис. 5 Б),' что милдронат в обеих испытанных концентрациях обусловливает подавление продукции IgE В-лимфоцитами больных АБА в период обострения заболевания практически в 2 раза (р<0,05). Это позволяет утверждать, что механизм терапевтического действия милдроната при лечении больных АБА реализуется через подавление продукции IgE.

- 20 -

Впервые выявленный и описанный нами ингибирующий аффект милдроната на процесс продукции IgE in vitro.В-лимфоцитами при АБА укрепляет патогенетическое обоснование целесообразности его более широкого использования при заболеваниях, сопровождающихся гиперпродукцией цитофилъных антител.

ВЫВОДЫ

1. У больных атопической бронхиальной астмой имеет место выраженное усиление продукции IgE лимфоцитами In vitro, которое сопровождается снижением активности индуцированных супрессорных Т-лимфоцитов. Выявленные нарушения в иммунном статусе более выражены при обострении заболевания. ,

2. Под влиянием успешно проведенной специфической гипосен-сибилизации у больных сразу после окончания курса лечения регистрируется возрастание продукции.IgE In vitro. Активность индуцированных супрессорных Т-лимфоцитов практически не меняется. В более отдаленные сроки (через 10 месяцев после завершения специфической терапии) наблюдается достоверное усиление супрес-сорной активности Т-лимфоцитов и снижение продукции IgE по сравнении с исходными показателями.

3. Рекомбинантный «-интерферон (реаферон) в концентрациях 500 и 5000 ЫЕ/мл в условиях In vitro снижает продукцию- IgE В-лимфоцитами и усиливает супрессорную активность 7-лпмфоцитов больных атопической бронхиальной астмой.

4. Рекомбинантный интерлейкин-2 в концентрациях 50 и 500 ед/мл* в условиях In vitro, усиливая супрессорную активность Т-лимфоцитов больных атопической бронхиальной астмой, приводит к снижент продукции IgE Е-лимфоцитами,

5. Тровентол (селективный М-холинолитик) в концентрации

),1 мкг/цл и сальбутамол (высокоселективный Аг-адреномиметик) в :онцентрации 2 мкг/мл в условиях In vitro подавляют продукцию !gE В-лимфоцитами и повышают активность супрессорных 'Г-лимфоци-•ов больных атопическои бронхиальной астмой.

6. Милдронат в концентрациях 5 и 50 мкг/мл в условиях In rltro вызывает снижение продукции IgE В-лимфоцитами больных топической бронхиальной астмой.

- 22 -

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ:

1. Садмаси Ж.'Ы., Порядин Г.В., ЕусароваЕ.А. // Влияние милдроната на иммунорегуляюрные лимфоциты больных атоппческой формой бронхиальной астмы /В кн.: Актуальные вопросы клинической иммунологии и региональной иммунологии. Ташкент, 1991, с.227-228.

о

2. Салмаси а.М., Бусарова Е.А., Журавлева Н.Е., Порядин Г.В. И Механизм развития иммунологических нарушений при атопи-ческой бронхиальной астме и возможные пути их коррекции / В кн., Сборник резюме 2 Всесоюзного конгресса по болезням органов дыхания. Челябинск, 1991, N S3, с.54-55.

3. Салмаси Ж. М., ЕусароваЕ.А., Порядин Г.В. // Иммуномо-дулирующее влияние растворимого сальбутамола на лимфоциты больных атопической бронхиальной астмой / тезисы докладов Первогс Российского национального конгресса "Человек и лекарство", Москва, 1992, N 105.

4. Салмаси Ж.Ы., Порядин Г.В., Бусарова Е.А. // Роль нарушений циклических нуклеотидов в иммунопатогенеэе атопическо! формы бронхиальной астмы / В сб.: Актуальные вопросы аллергологии и иммунологии в аридной зоне. Ашхабад, 1991, с.119-120.

5. Порядин Г.В., Салмаси К.М., Журавлева Н.Е., Бусарсв; É.A. // Особенности влияния интерлепкпна 2 и «-ицтерферона к; поверхностные антигены лимфоцитов больных атопической форма: бронхиальной астмы // Тезисы докладов 1 съезда иммунологов Fcc сии, Новосибирск, 1932, с.375.

6. Порядин Г.В., Салмаси Ж.1,!., Бусарова Е.А. // Нарушен;; обмена интерлейкина 2 у больных атошпесксй формой бронхпально астмы / Аллергия и иммунопатология в клинике и эксперименте Сборник научных трудов. (2 выпуск), 1992, С.35-101.