Автореферат и диссертация по медицине (14.00.17) на тему:IgE-антителообразование у мышей при адаптации к экстремальным эритропоэзмодулирующим факторам

министерство здравоохранения рсфср кубанский государственный медицинский

институт им. красной армии

На правах рукописи УДК 616-056.3-097-001/3

КОЛЕСНИКОВА НАТАЛЬЯ ВЛАДИСЛАВОВНА

1КЕ-АНТИТЕЛООБРАЗОВАНИЕ У МЫШЕЙ ПРИ АДАПТАЦИИ К ЭКСТРЕМАЛЬНЫМ ЭРИТРОПОЭЗМОДУЛИРУЮЩИМ ФАКТОРАМ

Специальность: 14.00.17 — нормальная физиология

14.00.3(>— аллергология, иммунология

Авторе ф е р а г диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Краснодар — 1990

Работа выполнена в Кубанском государственном медицинском институте им. Красной Армии.

Научные руководители — доктор медицинских наук, профессор В. М. Покровский, кандидат медицинских наук, старший научный сотрудник Р. А. Ханферян.

Официальные оппоненты:

1. Доктор медицинских наук, профессор Р. Б. Цынкалов-ский.

2. Доктор медицинских наук, профессор А. И. Поляк.

Ведущее учреждение — Институт иммунологии МЗ СССР (г. Москва).

Защита состоится « и. » /ЬСЛ-Сну 1990 года в _I— час.

на заседании специализированного Совета К 084.06.01 в Кубанском государственном медицинском институте им. Красной Армии (350690, г. Краснодар, ул. Седина, 4).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института.

Автореферат разослан « »_- 1990 года.

Ученый секретарь специализированного совета доцент

Ю. Р. Шейх-Заде

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актульность темы. Поскольку аллергические заболевания получили широкое распространение как «болезни цивилизации», особую актуальность приобрело решение вопросов, связанных с управлением синтезом реагинов. Перспективным подходом к решению задачи, связанной с направленным изменением продукции иммуноглобулина Е(^Е), опосредующего патогенез многих аллергических заболевании, может стать изучение 1стЕ-ответа на аллерген при воздействии экстремальных факторов, модулирующих эритропоэз в организме. Это обусловлено тем, что в настоящее время уже считается доказанным конкурентный характер отношений между эрпт-ропоэзом и иммуногенезом на уровне полппотептной стволовой кроветворной клетки (Журавкин И. Н., 1979; Козлов В. А. и соавт., 1982), являющейся общим предшественником всех зрелых клеток крови (Чертков И. Л., Фрпдепштейн А. Я., 1977). Конкуренция между эритропоэзом и иммуногенезом определена для ^М- и ^О-ответа лабораторных животных, тогда как 1дЕ-ответ в условиях воздействия экстремальных факторов, стимулирующих или угнетающих эритропоэз, не изучен. Его изучение может представлять интерес в плане поиска новых возможных путей управления синтезом гомоцн-тотропных 1§Е-антител и реагинов.

Известно также, что благодаря взаимодействию с экстремальными факторами и развитию состояния адаптированно-сти, организм часто повышает свои функциональные возможности за счет механизмов, обеспечивающих как «срочную»,

так и долговременную адаптацию к экстремальным факторам (Гаркави Л. X. и соавт., 1977; Миррахимов M. М. и соавт., 1985). Изменения в гуморальном IgM-антителообразовании, наблюдаемые при «срочной» и долговременной адаптации к экстремальным воздействиям, модулирующим эритропоэз, могут, в свою очередь, приводить к различным иммунопатоло-гиям и к аллергии, в частности. В связи с этим изучение IgE-ответа на аллерген, в сравнении с IgM-антителообразо-ванием на фоне подавленного или стимулированного эритро-поэза представляет интерес, обусловленный как неизученностью проблемы, так и наличием некоторых данных о различиях в регуляции IgE- и IgM-ответа (Fevrier M., 1985; Та-niguthi M., Tada M., 1971).

Цель настоящего исследования состояла в изучении особенностей IgE-ответа на аллерген амброзии у нпбредных линий мышей в сравнении с их гуморальным lgM-ответом па антиген (эритроциты барана) в условиях «срочной» и долговременной адаптации к экстремальным эритропоэзмодули-рующим воздействиям: острой и хронической гипоксии, фе-нилгидразиновой анемии, острой кровопотере, гипертрансфузии сингенных эритроцитов.

Основные задачи исследования:

1. Провести сравнительное изучение IgE- н IgM-ответа мышей разных линий при анемии, индуцированной кровопоте-рей и фенилгидразиновой анемий), стимулирующих эритропоэз, и при гипертрансфузии сингенных эритроцитов, подавляющей эритроидный росток кроветворения.

2. Изучить особенности IgE-ответа в условиях острой гипоксии разной продолжительности и при адаптации к хронической гипоксии (естественной и искусственной), а также в период реадаптации.

3. Выяснить механизмы продукции гомоцитотропных IgE-антител в условиях стимулированного и подавленного эритропоэза.

Научная новизна: В работе впервые изучено состояние IgE-ответа на аллерген у мышей разных линий в условиях адаптации к экстремальным факторам, модулирующим эритропоэз, в сравнении с первичным IgM-ответом на эритроциты барана (ЭБ). Выявлен противоположный характер IgE- и IgM-ответа на фоне подавленного и стимулированного эритропоэза, а также при адоптивном переносе популяции

иммунорегуляторных клеток-предшественников эрнтроидного ряда (Эр-супрессоров). Изучена продукция гомоцитотропных антител нри «срочной» и долговременной адаптации к гипоксии, а также в период реадаптации.

Научно-практическая значимость работы. Результаты исследований позволяют по-новому подойти к проблеме регуляции продукции иммуноглобулина Е, используя полученные сведения об обратной зависимости ^Е-ответа от ¡^М-антите-лообразоваиня и о связи 1«'Е-аптителообразоваш1я с состоянием эритропоэтической функции организма. Полученные сведения о состоянии 1^Е-отвега при воздействии экстремальных эрнтропоэзмодулнрующнх факторов дают возможность создавать в исследовательских целях экспериментальные модели гипер- и гипопродукцни гомоцитотропных 1§Е-антител у иибредных линий мышей. Показано, что гипоксия является мощным фактором, угнетающим 1дЕ-антителообразование, что может являться одной из причин улучшения клинической картины 1дЕ-опосредованных аллергических заболеваний в условиях средне- и высокогорья, а также отсутствия у аборигенов указанных регионов аллергических 1р;Е-опосредован-ных заболеваний.

Данные, полученные в экспериментах, могут быть использованы в педагогической практике в качестве дополнительных сведений об индукции и регуляции 1^Е-антптел, о связи 1^'Е-ответа с состоянием эрнтропоэза и 1^Д\-антшелообразо-ьапнем.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены и обсуждены на Всесоюзном симпозиуме «Стресс и иммунитет» (г. Ростов-на-Дону, 1989 г), на семинарском занятии в лаборатории регуляции иммунопоэза ИКИ СО АМН СССР (г. Новосибирск, 1988 г.), на заседании Краснодарского краевого общества иммунологов н аллергологов (г.Краснодар, 1988г.), на конференции молодых ученых (г. Краснодар, 1987 г.).

Внедрение результатов в практику. Результаты настоящей работы в форме доклада об уровне гомоцитотропных 1дЕ-ан-чнтел у мышей в условиях стимулированного и подавленного эрнтропоэза внедрены в лаборатории регуляции иммунопоэза ИКИ СО АМН СССР (г. Новосибирск), в результате чего оформлен соответствующий акт внедрения. По материалам исследований опубликовано 9 печатных работ, оформлено 1 рационализаторское предложение о способе учета реакции

пассивной кожной анафилаксии для оценки ^Е-ответа у мышей.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 135 страницах, включая библиографию и приложения. Состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов и обсуждений, выводов, списка использованной литературы и приложений. Библиография— 180 источников, в том числе 50 — иностранных авторов.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

В экспериментах использованы мыши инбредных линий: СВА (291), ВАЬВ/с (391), С57ВЬ (60), гибриды Р,(СВАХ ХС57ВЬ) (924) и белые беспородные мыши (490), полученные из питомников АМН СССР «Рапполово» (г. Ленинград), «Светлые горы» и «Столбовая» (г. Москва) — всего 2156 мышей. Опытные и контрольные животные находилась на стандартной сбалансированной диете. В качестве воздействий, стимулирующих эритропоэз, применяли кровопотерю, острую гипоксию и фенилгидразиновую анемию. Кровопотерю вызывали взятием крови в объеме 0,5 мл из ретро-орбитЪдьного синуса пастеровской пипеткой. Острую гипоксию создавали экспозицией мышей в барокамере (58317 Па) в течение 1 часа и 18 часов. Для индукции гемолитической анемии мышам вводили фенилгидразин в дозе 47 мг/кг в Дни: —3, —2, и —0 до иммунизации или однократно в дозе 120 мг/кг массы. Гипертрансфузию сингенных эритроцитов осуществляли инъекцией трижды отмытых сингенных эритроцитов в объеме 1 мл (половину вводили внутривенно, по,ловину — внутрибрюшин-но). Хроническая гипоксия продолжалась 21 сутки в условиях высокогорья (перевал Анзоб, Таджикской СССР, 3375 м над уровнем моря) и 45 дней (по 6 часов в сутки) в барокамере с внутренним давлением 78427 Па. Период реадаптации составлял 30 дней.

В качестве источников эрнтроидных клеток-супрессоров (ЭР-супрессоров) использовали селезенки сингенных мышей, находившихся в течение 18 часов на «высоте» 7000 м (58317 Па), подвергавшихся инъекциям фенилгидразина, а также селезенки сингенных новорожденных мышей. Цельную суспензию сплепоцитов вводили в количестве 50 млн/мышь в объеме 0,5 мл, а разделенную на прилипающую (ПКС) и неприлипающую (НКС) к пластику — в количестве 20 млн/мышь в том же объеме.

Простагландин Е2(ПГЕ2) вводили двукратно по 50 мг/кг подкожно в объеме 0,5 мл. Индометацин в дозе 4 мг/кг вводили внутрибрюшинно дважды — за 2 часа и за 24 часа до иммунизации.

IgE-ответ оценивали по реакции пассивной кожной анафилаксии по Levine В., Vaz Г\'. (1970) в сыворотке мышей, иммунизированных внутрибрюшинно 4 мг/кг хрочатографи-ческн очищенным аллергеном амброзии по описанному ранее способу (Ханферян Р. Л., ¡975). Учет реакции пассивной кожной анафилаксии осуществляли планиметрически весовым способом, а также предложенным нами методом оценки реакции пассивной кожной анафилаксии с помощью видеокомплекса «Pericolor» (рационализаторское предложение № 915).

IgM-ответ при иммунизации эритроцитами барана (ЭБ) в дозе 2ХЮ8 кл/мл в объеме 0,5 мл определяли по количеству IgM-антителообразующих клеток (IgM—АОК) в селезенках опытных и контрольных мышей по методу Cunningham А. (1969). Для оценки состояния эритропоэза у опытных и контрольных животных определяли уровень гемоглобина, количество эритроцитов, ретикулоцнтов, величину гематокрита, цветового показателя и индекс насыщения эритроцитов гемоглобином (Козловская. Л. В., Мартынова Л\. А., 1975).

Полученные данные обработаны статистически с использованием Т-крнтсрия Стыодента.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Острая гипоксия. Сравнение результатов исследования IgE- и IgM-отвега в условиях одночасовой и восемнадцатичасовой острой гипоксии показало, что как 1-часовое пребывание живошых в барокамере, так и !8-часовое (58317 Г1а) приводит к достоверному угнетению продукции гомоцито-тропных IgE-антител, в то время как IgM-иммунотропный эффект острого гнпоксического воздействия зависел от его продолжительности (таблица 1). Так, помещение животных я барокамеру на 1 час приводило к достоверному угнетению [¡гЕ-отзста на аллерген амброзии и стимуляции количества igM-AOK при иммунизации эритроцитами барана, осуществляемой как до, так и после гипоксии. Острая гипоксия продолжительностью 18 часов вызывала достоверное угнетение как IgE-, так и IgM-ответа вне зависимости от временных соотношений между иммунизацией и помещением в барокамеру.

о

Таблица 1

Влияние острой гипоксии (58317 Па), продолжительностью 1 час и 18 часов на ^Е- и ^М-ответ линейных мышей (Х±м, р)

Группа АОК абсолютн. 1еМ—АОК относит. ^Е-антитела 1

(СВАХС57ВЬ)Г!1 1-часовая острая гипоксия (иммунизация+ ОГ)

Контроль 7224,00+1323,00 215,00±55,80 6,95±0,37 —

Опыт 9803,00± 1499,00 366,50+49,20 3,70+0,23***

(СВАХС57ВЬ)Рл 1-часовая острая гипоксия (ОГ+иммунизация)

Контроль 7224,00+1323,00 215,00+55,80 6,95±0,37 —

Опыт

(СВАХС57ВЬ)Е1 Контроль Опыт ВАЬВ /с Контроль Опыт

Примечания: * — р < 0,01 ** — р<0,05 ***—р<0,001

14241,00+2341,00**

46577,00±3892,00 23973,00+1754,50*

36844,00± 1392,00 4375,00±2515,00*

427,70+73,50** 2,00+0,13* —

18-часовая острая гипоксия (ОГ+иммунизация)

309,00±36,60 4,08+0,17 638,00+23,0

168,00±25,30* 2,39±0,22*** 415,00±29,7*

18-часовая острая гипоксия (иммунизация+ ОГ)

175,00±47,30 3,12+0,15 —

21,80± 6,80* 1,87±0,14* —

1—оценка Г1КА планиметрически весовым способом, (мг);

2— оценка ПКА с помощью видеокомплекса «Репсо1ог?, (пикоскел); ОГ — острая гипоксия.

Стимуляцию количества 1дЛ\-АОК при 1-часовой острой гипоксии можно связать с данными научной литературы о повышении клеточного и гуморального иммунного ответа, иногда отмечающегося при острых кратковременных стрессах (Гюллипг Э. В. и соавт., 1989; Коляда Т. И. и соавт., 1986), обусловленного снижением активности антигенспецифических клеток-супрессоров, чувствительных к гормональным стресс-индуцпрованным сдвигам (Шхииек Э. К., Фомичева Е. Е., 1989). Угнетение же 1^Е-ответа при этом свидетельствует о различиях в 1дМ- и 1^Е-антителообразовании в условиях острого гипоксического стресса. Расценивать указанное воздействие как стрессорное позволяют полученные нами данные об адаптационном перераспределении лимфоцитов (Рис. 1), характерном для стрессов по данным Карась А. Ф., Кра-сюк А. Н. (1989).

Рис. 1. Количество ядросодержащих клеток лимфоидных органов мышей, подвергавшихся острой гипоксии (1 час. 54317 Па): I — СПЛСНОИИТЫ (иммунизация до гипоксии) II — спленоциты (иммунизация поело гипоксии) Ш — тпмоипты (иммунизация до гипоксии) IV — тимоциты (иммунизация после гипоксии) V — клетки лимфоузлов (иммунизация до гипоксии) VI — клетки лимфоузлов (иммунизация после гипоксии) * — р<0,01

4.

У1

1дМ- и ^Ё-депрессия, индуцированная 18-ти часовой экспозицией в барокамере (58317 Па) может быть обусловлена как усиленной дифференцировкой в эритропоэз, в ущерб лимфопоэзу (таблица 2), так и иммунодепрессивным действием ПГЕ2, уровень которого при острой гипоксии указанной силы и продолжительности значительно возрастает (Макеев О. Г. и соавт., 1986). Эксперименты показали, что введение простагланднна Е3 мышам, иммунизированным аллергеном амброзии и эритроцитами барана значительно подавляет как 1дЕ-, так и ^М-антителообразование (рис. 2).

г<

р

140120-ЮС-ЕС-6040-

I

I

контроль

X

0

Рис. 2. Влияние простагланднна Е2 на 1дЕ- и ^М-ответ мышей Р[ (СВАХС57ВЬ).

1 — ^М-АОК абс.,

2 _ 1ЕЛ1-АОК от.,

3 — 1дЕ-ответ.

* — р С 0,01

Исходя из того, что подавление ^М-ответа при острой 18-часовой гипоксии связано с действием эритроидных клеток-супрессоров (Эр-супрессоров), накапливающихся в селезенках мышей в результате эритропоэзстимулирующего влияния острой гипоксии (Козлов В. А. и соавт., 1984), было изучено влияние адоптивного переноса суспензии постгипоксичных спленоцитов, содержащей указанную популяцию клеток, син-генным реципиентам, иммунизированным аллергеном амброзии и эритроцитами барана для оценки'у них ^Е- и 1дМ-от-вета*. Результаты эксперимента показали, что эритроидные * — эксперименты выполнены на базе лаборатории регуляции иммуно-поэза ИКИ СО АМН СССР (г. Новосибирск), 8

Показатели состояния эритропоэза линейных мышей п условиях острой и >.ронкческой мерной гипоксии (58317 Па и 78427 Па) (Х±м, р)

Таблица 2' бзрока-

Группа Гемоглобин (Ммол:,/л) Гематокрт (1'Д.) Эрнтротп и (Т/л) Рстнкулоциты (1"/л) Цкеювой показатель ;е,ч.) Абсолютное насыщение эритроцитов, Ив (е;\)

Р, (СВАХСо7ВЬ)

Контроль 14,40+0,35

Опыт СВА

Контроль Опыт

Контроль Опыт

Контроль Опыт

18,70+0,75*

14,90+0,10 15.50+0,21

! 4,90 + 0,21 15,90+0,16*

14,90+0,08 16,30+0,30*

Острая гииокси-и (18 час.)

0,38±0,02 5,90 + 0,27 0,008±0,001 0,74+0,02

0,53±0,04* 8,85+0,59' 0,012+0,0005* 0,64 + 0,04*

Хроническап гипоксия (!5 дней)

0.12+0,06 1,52+0,07 — 0,99+0,02

0,15+0,134,88+0,06 — 0,96+0,01

Хроническая гипоксия (30 дней)

0,12+0,0(5 4,62+0,11 — 0,98:'! 0,04

0,-18+0,1 Г 5.31+0,23" — 0,90+0,02*

Хроническая гипоксия (45 дней)

0,42+0,08 4,61+0,11 — 0,97 + 0,01

0,54 + 0,08:' 5,83+0,24' — 0,84+0,01***

38.00 + 2,10 35,60 + 3/10

;:б.:0;-0,30 34,00 — 0,21

35,90- 0,20 33,50+0.90"

35,30 + 0.80 30,50+0.20'' '"

* — р<0,01 *** _ р<0,001

клетки-супрёссоры (Эр-супрессоры) при введении их в продуктивную фазу иммунного ответа достоверно стимулируют уровень гомоцитотропных ^Е-антител и угнетают как абсолютное, так и относительное количество 1дМ-АОК при адоптивном переносе их в индуктивную и продуктивную фазы иммунного ответа (Табл. 3). Если 1§М-депрессию, вызванную острой восемнадцатичасовой гипоксией, можно объяснить им-муносупрессивным действием популяции Эр-супрессоров, то, как следует из результатов эксперимента, подавление продукции иммуноглобулина Е при этом не связано с действием указанной популяции клеток. Вероятно подавление ^Е-отве-та при «срочной» адаптации к острой 18-часовой гипоксии обусловлено активацией простагландинового механизма.

Хроническая гипоксия. Эксперименты в высокогорье, а также результаты исследования ^Е-ответа при адаптации к хронической барокамерной гипоксии показали, что также как и острая гипоксия, хроническая гипоксия является мощным фактором, угнетающим продукцию гомоцитотропных 1дЕ-антител. Адаптация к трехнедельной высокогорной гипоксии приводила к значительному угнетению 1дЕ-ответа на аллерген, в то время как количество ^М-АОК, в селезенках опытной группы мышей достоверно превышало контрольные показатели на равнине (рис. 3).

Рис. 3. и 1§М-ответ мышей ВА[.В/с при адаптации к высоко-

горью:

I _ ^М — АОК абс. II ~ 1еМ — АОК отн. III — 1§Е — ответ * — р < 0,001

Таблица 3-

Влияние адоптивного переноса постгипоксичных спленоцитов на и 1дМ-ответ мышей ВЛЬВ/с

(Х±м, р)

Адоптивный перенос постппшксичпых спленоцитов сингениым реципиентам

в индуктивную фазу иммунного ответа в продуктивную фазу иммунного ответа

Группы 1йМ-ЛОК абсолютное 1дМ-ЛОК относительное ¡^Е-ответ 1<;М-АОК абсолютное ^М-АОК относительное 1£Е-огвет

1 2 1 2

Контроль 28950,00± 103,50+ 3,33 + 158,00 ± — — — —

955(5,30 25,70 0,22 10,30

Опыт (>750,00гЬ! 17,16_ь 3.63 + 20,00+ 17375,00+ 30,59+ 4,62+ 208,00+'

1796,30 4,30 0,44 11,00 4517,00 6,62 0,14 19,50

11С 0,01 рС 0,01 р < 0,01 1X0,01 р<0,02-

Примечания: 1 -- опенка ПКА планиметрически весовым способом (мг);

2 — оценка ПКА с помощью видеокомплекса « ЧчлаЛог» (ннкосксл).

Для выяснения роли непосредственного гипоксйческого фактора в иммуномодулирующем влиянии высокогорья было проведено исследование ^Е- и ^М-ответа в условиях долговременной адаптации к барокамерной гипоксии. Ежедневная 6-ти часовая экспозиция мышей в барокамере (78427 Па) в течение 45 дней вызывала достоверное угнетение продукции гомоцитотропных 1дЕ-антител и стимуляцию количества 1§М-антителообразующих клеток пропорционально времени эксперимента (Рис. 4).>

Рис. 4. ^Е- и ^М-ответ мышей р1 (СВАХС57ВЬ). в условиях адаптации к хронической барокамерной гипоксии и в период реадаптации:

I — исходный уровень; II — 15 дней адаптации; III — 30 дней адаптации; IV — 45 дней адаптации; V — 15 дней реадаптации; VI — 30 дней реадаптации. * — р<0,01

В постгипоксический реадаптационный период отмечалось возвращение уровней исследуемых показателей к исходному, однако следовая реакция на хроническую гипоксию у IgE-ответа носила более длительный характер, в сравнении с таковой у IgM-антнтелообразовапия, поскольку к концу реадаптационного периода все eme отмечались достоверные отличия IgE-ответа у подопытных животных от продукции IgE-аптитсл .мышей контрольной группы.

Сравнение результатов, полученных в высокогорье с дан ными, полученными в условиях длительной барокамернон гипоксии на IgE-ответ, позволяют считать гипоксичеекнй фактор ведущим в комплексе иммунотропных факторов высокогорья (ультрафиолетовое излучение, озон и т. п.). Выявленная разнонаправлеиность в IgE- и IgM-антптелообра-зовании при адаптации к хронической гипоксии, а также при острой 1-часовой гипоксии и адоптивном переносе эрит-роидной популяции клеток-супрессоров IgM-ответа позволили предположить наличие конкурентных, отношений между IgE-п IgM-ответом и зависимое i¡> l^E-ятг.ота ог состояния эрит-ропоэза. Это предположение было подтверждено нами в экспериментах с использованием других моделей стимулированного (фенилгидразпновая анемия, острая кровопотеря) и подавленного (гипертрапсфузня еннгенных эритроцитов; эритропоэза.

Фенилгидразпновая анемия. В условиях стимулированного фепплгидразином эритропоэза (Таблица 4) продукция гомоцнтотропных IgE-аптител у мышей ннбредиых .линий была достоверно выше контроля, в то время как IgM-отвег на эритроциты барана был достоверно угнетен у Mbinieil опытных групп (Таблица 5). Адоптивный перепое суспензии Эр-супрессоров, входящей в состав непрнлипающей к пластику (НКС) популяции спленоцитов мышей-реципиентов фенилгидразина, приводил к значительной стимуляции IgE-ответа на аллерген амброзии и к подавлению IgM-AOK в селезенках мышеи, иммунизированных эритроцитами бара-па (Рис. 5). Это может свидетельствовать об участии ука занной популяции клеток в пммупотропном эффекте фенил-гидр а знновоп анемии.

Острая кровопотеря. Известно, что острая кровопотеря является воздействием, стимулирующим не только эритро-поэз, но и иммуногенез (Федоров Н. А., Кахетлндзе М. Г., 1973; Журавкин И. Н., 1979). В результате проведенных

Таблица 4-

Показатели состояния эритропоэза линейных мышей при воздействии экстремальных факторов,

модулирующих эритропоэз (Х±м, р)

Гемоглобин Эритроциты Ретикулоциггы Гематокрит Цветовой показатель (ед.)

(Ммоль/л) (Т/л) (ед.) (ед.)

Группы

Абсолютное насыщение эритроцн тов, Нв (ед.)

ВАЬВ/с

Контроль 13,90+0,40 Опыт 10,60+0,75*

Р,(СВАХ;С57ВЬ) Контроль 13,30+0,40 Опыт 10,30+0,65**

Р1(СВАХ!С57ВЬ) Контроль 14,70±0,90

Опыт ВАЬВ/с

Контроль Опыт

* рСОдГ ** р<0,02 *** р<0,001

Фенилгидразиновая анемия

5,74+0,21 0,013+0,003 0,56+0,03 3,63±0,24* 0,040±0,004* 0,29+0,01*

0,73+0,02 0,97±0,01*

13,90+0,22

13,30±1,00 19,10±0,47***

5,12±0,01 0,008±0,002 0,42±0,02 0,78+0,02

4,26+0,16** 0,013±0,07* 0,34+0,02** 0,73±0,04

Острая кровопотеря

5,30±0,75 0,011±0,001 0,37+0,02 0,84±0,03

8,30±0,99* 0,010±0,001 0,51+0,02* 0,51±0,02*

Гипертрансфузия сингенных эритроцитов

7,12±0,41 0,008+0,001 0,64±0,02 0,69+0,01

7,92±0,17 0,009±0,001 0,82+0,03*** 0,73±0,03

25,00+1,30 40,50+2,80*

31,90±4,50-30,60±2,70

40,00±2,80 27,00+3,90*

25,70±0,80 23,40±0,90.

Таблица 5

IgM- и IgE-ответ у мышей, подвергавшихся экстремальным эритропоэзмодулирующим воздействиям (Х+м, р)

Группа BALB/c~

IgM-AOK абсолютное

IgAVAOK относительное

1

IgE-отвст

2

Фенилгидразиновая анемия

Контроль 17913,00+ 61,60+ 2,40 + 216,90+

1355,00 6,10 0,24 18,70

Опыт 10125,00± 49,80+ 4.10+1 375,40+

1293,00* 6.20 •• 0,21* 2 t,S0"

F,(CBAX/C57BL)

Контроль 24707,00+ 139,60+1 1,60+ 189,50+

2076,00 5,63 0,03 20,30

Опыт 5604,00+ 15,10+ 3,10+ 371,20+

1377,00*** 4,30*** 0,04* 29,80**:

Fi (CBAXC57BL) Острая кровопотеря

Контроль 19083,00± 93,40± 3,12+' —,

2954,00 12,30 0,04 —

Опыт 53317,00+ 283,00+ 2.40± —

7775,00* 40,40* 0,02k

BALB/c

Контроль 17913,00+ 61,60 + 2,90+ —

1355,00 6,10 0.10

Опыт 45938,00+ 217,50 + 1,20+ —

5734,00 27,30 у 0,12'

СВА

Контроль 26975+: 90,10 + 3,30 + —

4598,00 6,80 0.20

Опыт 66000,00+ 211.00+' 2,00 + —

7975,00* 27,80* 0,1 *

C57BL

Контроль • 2422,00± (22,30+ 4,17+' —

743.00 1,40 0,28

Опыт 2375,00 + С), 8+ 2,28 + —

335,00 0.7** f 0.J2-

BALB/c Гипертрансфузия сингенных эритроцитов

Контроль 22375,00±> 39,50+ 2,86+1 185,00+

2366,50 5,97 0,11 11,70

Эпыт 35250,00+ 148,40+* 1,21 + 98,30+

366-1,00* 18,90* 0,09" 12,90*

F,(CBA> C57BL)

контроль 19083,00 + 9'J.lOi 3,12+ 642.80 +

2951,00 12.30 0.3 1 22.70

Опыт 50702,00 + 223,00 + 1.62л- 238, • М' +

1078,004" ■ 1,90''*" 0,18^ **11,90

1 — р<0,01, ** — р<0,02, ***р<0,001

— оценка ПКА планиметрически-весовым способом, (мг);

— оценка ПКА с помощью видеокомплекса «Pericolor», (пикоскел);

25000-10&

гост еа isooo- 60-

IOOOQ' 40 5000. 2Q

a <5 в г д а й в г д

7 ¡1

а й в г д

¡1;

•5

А

II

0

Рис. 5. Влияние адоптивного переноса разделенной суспензии спле-ноцитов мышей, получавших инъекции фенилгидразина, на IgE- и IgM-ответ сингенных реципиентов Ei (CBAXC57BL). НКС ■— неприлипающие к пластику спленоциты, ПКС — прилипающие к пластику спленоциты.

I — IgM-AOK абс., II — IgM-AOK отн., III — IgE-ответ (иг); а — контроль, б — ПКС интактные, в — НКС интактные, г — ПКС опытные, д ■— НКС опытные (Эр-супрессоры). * — р < 0,01

экспериментов выявлено повышение величины гематокрита, количества ретпкулоцитов, эритроцитов и лейкоцитов (см. табл. 4), что свидетельствует о стимуляции эритропоэза, а отмеченное нами увеличение количества IgM-AOK (см. табл. 5) подтверждает данные литературы об иммуностимулирующем действии острой кровопотери. Между тем уровень го-моцитотропных IgE-антител в условиях геморрагической анемии был достоверно подавлен (см. табл. 5). При анализе полученных результатов возникло предположение об участии в наблюдаемо?.! иммуномодулиругощем эффекте острой кровопотери ПГЕ2, доказанное в эксперименте с нспользо-ванием экзогенного индометацпна, отменяющего IgM-сти-муляцшо, индуцированную кровопотерей (Громьшша Н. Ю„

1982) (Рис. 6) 16

TU-. t 'Л

I

Рис. 6. Влияние иидо.метацнпа на имкукочолу.шруюшиб эффсет кро-воиотери у мышеи F¡ (CBAXC57BL):

I — Ig.M — АОК абс.; II IgM — АОК ми.; III — IgE-огвет (мг), а — контроль; б — кропопотсря; в — инл^мотаипн-, кропопотсря; i — пнлометацин. ' — р С 0,01

Б исследовании было показано, что двукратное введение индометацина — известного блокатора синтеза простаглан-дина Е2 (Levo I. c-t al., 1985; Goodwin I., Webb D„ 1980) отменяло эффект 1^Е-депресс1Ш и IgM-c гимуляцин, индуцированных кровоаотерей, что позволяет связать иммуномоду-лирующее действие острой кровопотери с активацией про-стагландинового механизма.

Гипертрансфузия сиигенных эритроцитов. Отмеченное 1амп подавление эритропоэза, вызванное гинертрапсфузпеи ;ингенных эритроцитов (см. таблицу 4) сопровождалось .тнетением продукции IgE-антнтел и стимуляцией IgA\-an-'ителообразования при иммунизации соответствующими ан игенами (см. таблицу 5). Угнетение продукции гомоцито-•ропных IgE-антител на фоне гнпертрансфузионной поли-цгтемии может быть обусловлено активизацией макрофа-

гального звена, поскольку данные научной литературы (Levo I., Harbeck R., 1985), а также результаты наших исследований свидетельствуют об иммунодепрессивном влиянии макрофагов на IgE-антителообразование. Было показано (см. рис. 5), что адоптивный перенос прилипающей к пластику популяции спленоцитов, представленных преимущест венно макрофагами, достоверно снижает продукцию гомо-цитотропных IgE-антител.

Таким образом, анализ результатов проведенных исследований! позволяет сделать следующие выводы.

ВЫВОДЫ

1. При «срочной» адаптации к экстремальным эритропо-эзмодулирующим факторам выявлена разнонаправленность ígE- и IgM-ответа у инбредных линий мышей: острая кро-вопотеря, острая одночасовая гипоксия и гипертрансфузия сингенных эритроцитов приводят к угнетению IgE-ответа на аллерген амброзии и стимуляции IgM-ответа на эритроциты барана, тогда как фенилгидразиновая анемия достоверно стимулирует продукцию гомоцитотропных IgE-анти-тел и угнетает количество IgM-антителообразующих клеток.

2. Иммунотропный эффект, острой гипоксии зависит от продолжительности гипоксического воздействия: одночасовая острая гипоксия сопровождается угнетением IgE-ответа и стимуляцией количества IgM-антителообразующих клеток, в то время как восемнадцатичасовая острая гипоксия приводит к угнетению обоих типов иммунного ответа. Последнее обусловлено активацией простагландинового механизма.

3. Фенилгидразиновая анемия и гипертрансфузия сингенных эритроцитов оказывают однонаправленное действие на состояние эритропоэза и IgE-антителообразование: стимулирующее — при анемии, индуцированной фенилгидрази-ном, и супрессирующее — при гипертрансфузионной поли-цитемии.

4. Не выявлено однонаправленных изменений в эритро-поэзе и IgE-ответе при острой кровопотере и острой восемнадцатичасовой гипоксии: угнетении продукции гомоцитотропных IgE-антител в условиях стимулированного эритропоэза при этом обусловлено активацией простагландинового механизма.

5. Выявленный иммуномодулирующий эффект «срочной» адаптации к экстремальным эритропоэзмодулнруклцим фак-

горам обусловлен участием как клеток макрофагалыюго и лимфоидного звена иммунной системы, так и нммунорегу-ляторных клеток-—предшественников эрнтрондного ряда (Эр-супрессоров), стимулирующих IgE-атвет у мышей ин-бредных линий.

б. При долговременней'! адаптации мышей к хроническому воздействию естественной (высокогорной) и искусствен ной (барокамериой) гипоксии, а также в период реадапта цнп, выявлена разнонаправленное!":, igE- и IgM-ответа, заключающаяся в угнетении IgE-ответа на аллерген и стимуляции IgM-антителообразования в период адаптации, п в более длительной следовой реакции IgE-ответа па хроническую гипоксию в постгипоксический реадаптационный период.

список

работ, опубликованных по теме диссертации

1. Н. В. Колесникова, Р. А. Ханферян. Стимуляция IgE-огвета иммуно-регуляторными клетками нелимфоидной природы // Сб. трудов Львовского медицинского, института. — Львов, 1986, — № 8. — С 4—5,

2. Р. А. Ханферян, Н. В. Колесникова, В. А. Козлов. Подавление синтеза иммуноглобулина Е, вызванное гипоксией. // Тез. докл. V Межреспубликанской конференции аллергологов-иммунологов Ср. Азии. —1 Алма-Ата, 1986. — С. 111.

3. Н. В, Колесникова, Е. В. Драгунова, Р. А. Ханферян. Влияние ги-пертрансфузионной полицитемни на IgE- и IgM-ответ лабораторных

животных. // Деп. ВИНИТИ № 4448-В87. —, 1987. — С. 1—4.

4. Н. В. Колесникова, Р. А. Ханферян. Влияние острой гипоксии на IgM- и IgE-антителогенез лабораторных животных. // Сб. трудов Львовского медицинского института. — Львов, 1987 — № 9. — С. 10—11.

5. Н. В. Колесникова, Р. А. Ханферян, В. М. Покровский, — IgM- и IgE-антителообразование в условиях стимулированного и подавленного эритропоэза. // Деб, Бюлл. эксп. биол. и медицины. — 1988.

— № 12, — С. 767—768,

6. Kozlov V. A., Tsyrlova I. G., Kolesnikova N. V., Khariferyan R. A. Stimulation of homocytotropic IgE-antibody synthesis by cells ot

Erythroid Nature. // Fourth international congress of ceil biology abstract form. — Canada, Montreal. — 1988. — p. 237.

7. H. В. Колесникова. Влияние! острой барокамернон гипоксии и адаптации к гипоксии высокогорья на IgM- и IgE-антителогенез лабораторных животных. // Тез. докл. областной научно-практической

конференции молодых ученых. —г Ростов-на-Дону, 1988. — С. 52.

8. Н. В. Колесникова, Р. А. Ханферян. Иммунологические аспекты адаптации лабораторных животных к условиям высотной гипоксии. // Тез. докл. Всесоюзн. конференции «Стресс и иммунитет». — Ленинград—Ростоз-на-Дону, 1989. — С. 25—26.

9. Н. В. Колесникова. Иммунный ответ IgM- и IgE-типа у мышей разных линий в условиях стимулированного и подавленного эритропоэза. // Тез. докл. Первого Всесоюзного иммунологического сгезда,

— Сочи, 1989. — Т. I. — С. 54,