Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Структура атопических аллергенов и иммунорегуляции IgЕ антителообразования

и л* 94'

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РСФСР

КУБАНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ ИНСТИТУТ ИМЕНИ КРАСНОЙ АРМИИ

На правах рукописи УДК 612.017.1—06:582.998.2+616-056.43—022.854:582.998.2 ХАНФЕРЯН Роман Авакович

СТРУКТУРА АТОПИЧЕСКИХ АЛЛЕРГЕНОВ И ИММУНОРЕГУЛЯЦИИ 1?Е-АНТИТЕЛ ООБ РАЗОВ АН ИЯ

Специальность: 14.00.36 — Аллергология и иммунология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Москва — 1991

Работа выполнена в Кубанском государственном медицинском институте имени Красной Армии.

Научны» консультант — доктор медицинских наук, профессор Козлов Владимир Александрович.

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор И. С. Гущин;

доктор медицинских наук, профессор Ю. И. Зимин;

доктор медицинских наук, профессор А. И. Поляк.

Ведущее учреждение — Институт клинической иммунологии СО АМН СССР.

Защита состоится «............» ...................................................... 1991 г.

в ........................ часов на заседании специализированного Совета Д 074.09.01 института иммунологии МЗ СССР.

Адрес: 115478, г. Москва, Каширское шоссе, 24, к. 2.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института иммунологии МЗ СССР.

Ученый секретарь специализированного Совета

доктор биологических наук А. В. Колобов

f ;j; -Кпиам

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

""^Шуальность темы. Значительный рост числа аллергических заболеваний,отмеченный за последние годы во многих странах мира,обусловил бурное развитие различных направлений аллергологии. Особую актуальность представляют такие аспекты экспериментальной и клинической аллергологии,как изучение структуры аллергенов,создание принципиально новых и модификация существующих форм аллергенов,применяемых для специфической иммунотерапии,исследование механизмов регуляции синтеза JgE-антител,участия лимфоидных и нелимфоидных клеточных популяций в иммунорегуляции аллергических реакций.

Указанные проблемы тесно взаимосвязаны с проблемой стандартизации аллергенов,регуляции IgE-опосредованных ато-пических заболеваний.

В последнее время было показано,что модификация структуры неинфекционных аллергенов путем формалинизации (Рай-кпс Б.Н.»Воронкин Н.И.,I987;Marsh с соавт.,1972)воздействия мочевины (Ishizaka с соавт.,1975),фотоокисления (Malley с соавт.,1979,1981),конъюгации с неиммуногеиными носителями (Петров Р.В. с соавт.,1985;Гущин И.С. с соавт.,1990; Sehon, Lee,1979; Moran с соавт.,1986),полимеризации глютаральдеги-дом (Patterson с соавт.,1973-1987) позволяет получить низкоаллергенные препараты,часть из которых уже используется для иммунотерапии. Получены новые данные об участии различных лимфоидных и нелимфоидных клеточных популяций,выделяемых ими растворимых факторов в регуляции IgE-антителообразования (Ishizaka, 1982-1989).

Однако,несмотря на значительное число исследований, посвященных изучению указанных проблем,многие аспекты требуют углубленного анализа,что обусловлено рядом причин. В частности: ЛНе существует удовлетворительной концепции, позволяющей охарактеризовать антигенные компоненты аллергенов как особый класс веществ,имеющих характерные общие структурные особенности,определяющие развитие 1дЕ-опосре-дованных аллергических реакций; 2)Используемые в настоящее время для специфической иммунотерапии традиционные формы аллергенов обладают рядом отрицательных свойств, среди которых наиболее существенными являются высокая степень аллергенности,необходимость частого и длительного парентерального введения водно-солевых экстрактов аллергенов. В то же время,модифицированные низкоаллергенные формы ато-пенов (формалинизированные и полимеризированные глютараль-дегидом) недостаточно экспериментально и клинически охарактеризованы, практически отсутствуют данные об участии различных клеточных популяций в регуляции синтеза 1дЕ-антител,индуцированных модифицированными формами аллергенов и др. Все это обусловило выполнение настоящего исследования.

Цель исследования состояла в изучении участия различных лимфоидных и нелимфоидных клеточных популяций в механизмах 1дЕ-антителообразования на нативные и модифицированные полимеризацией формы аллергенов.

Основные задачи исследования

I. Исследовать структуру и свойства некоторых атопи-

ческих аллергенов,индуцирующих 1дЕ-эависимые реакции.

2. Провести сравнительный анализ свойств и структуры нативных и полимеризовашшх форм аллергенов.

3. Изучить участие различных лимфоидных и нелим-фоидных клеточных популяций в регуляции 1дЕ-антителооб-разования,индуцированных введением нативных и полимери-зованных аллергенов.

4. Исследовать механизмы изменения 1дЕ-антителооб-разования при воздействии факторов,модулирующих 1дМ-от-вет.

Новизна исследования

1. В работе исследованы новые механизмы регуляции синтеза 1дЕ-антител,в частности,впервые обнаружена регу-ляторная роль клеток эритроидного ряда (Эр-супрессоры).

2. Установлена различная чувствительность к иммуно-модулирующим воздействиям и противоположные взаимоотношения 1дМ-ответа на тимусзависимый антиген ОБ) и ответа к аллергену 1дЕ~типа.

3. Вскрыты различия в функциональной активности полимеризовашшх и нативных форм аллергенов. Получил объяснение механизм сохранения иммуногенности у модифицированных глютаральдегидом аллергенов,который заключается в том, что высокомолекулярные формы активно презентируются макрофагами простагландинзависимым механизмом.

Установлено,что полимерные молекулы,в отличие от нативных, не вызывают стимуляции эндогенного колониеоразова-ния.

4. Впервые из пыльцы амброзии выделен фактор,не об -ладающий аллергенной активностью,но вызывающий ряд иммуно-модулирунщих эффектов по отношению к макрофагам,нейтрофи-лам,изменяющий IдМ- и 1дЕ-ответ и др. На основании этих данных сформулирована гипотеза о механизме запуска аллергических реакций комбинированным воздействием на предшественники В-лимфоцитов неаллергенных и аллергенных компонентов атопенов.

5. Впервые обнаружены иммуносупрессивные свойства у новых химических соединений КП-45 и КП-40.

Теоретическое значение полученных результатов заключается в углублении представлений о структуре аллергенов, участии различных лимфоидных и нелимфоидных клеточных популяций в 1дЕ-антителообразовании,роли структуры аллергеноЕ в процессе формирования иммунного ответа 1дЕ-типа,взаимосвя зи между 1дМ- и 1дЕ-ответом организма.

Практическая значимость работы обусловлена совершенствованием аллергенов для специфической диагностики и иммунотерапии 1дЕ-опосредованных аллергических реакций,что получило применение в ряде аллергологических учреждений страь Обнаружение иммунодепрессивной активности у новых химических соединений может быть использовано при разработке на и> основе новых лекарственных препаратов.

Апробация работы

Материалы диссертации доложены на X Европейском конгрессе по аллергологии и клинической иммунологии (Прага,1971 Ш симпозиуме аллергологических и иммунологических обществ

социалистических стран (Сухуми,1979), Всесоюзных съездах фармакологов (Ташкент,1988) и иммунологов (Дагомыс,1989), Всесоюзных симпозиумах и конференциях по молекулярной жидкостной хроматографии (Черноголовка,1982),иммунологии и аллергологии (Цхалтубо,1988;Ростов-на-Дону,1989),заседаниях Краснодарского краевого общества иммунологов (1988,1989) фармакологов (1982),семинарах по клинической и экспериментальной иммунологии СО АМН СССР (г.Новосибирск,IS85,1988).

Структура работы

Диссертация изложена на страницах,состоит из введения, 7 глав собственных исследований с описанием методов, результатов исследований и литературных данных,заключения, выводов,библиографии и приложения. Работа иллюстрирована таблицей и рисунками.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Иммунологические и аллергологические исследования выполнены на кроликах,мышах линий СВА,BALB/c и гибридах F,j(CBAxC57BL).

Иммунизацию осуществляли эритроцитами барана (ЗБ), аллергенами пыльцы амброзии,злаковых трав(райграсса,ежи, тимофеевки,овсяницы,костера),домашней пыли. Полимеризацию аллергенов проводили глютаральдегидом (Patterson с соавт.,1973). Функционирование,определение молекулярной массы и изоэлектрических точек аллергенов,а также их полимерных форм проводили методами гельфильтрацип па сефадек-сах и сефарозе 4В (Детерман Г.,1970),препаративного изо-

электрофокусирования.

Уровень гомоцитотропных Ig Е- и IgGp антител (ГЦТА) определяли методом пассивной кожной анафилаксии на мышах (Levine, Vaz,1970). Количество IgM-антителообраэующих клеток (IgM-АОЮ в селезенках мышей - методом локального гемолиза в жидком монослое ЭБ (Cunningham, Szenberg,1968). Влияние аллергенов и неаллергенного фактора пыльцы амброзии (ФПА) на функциональную активность полипотентной стволовой клетки (ПСШ исследовали методом эндогенных колоний и определением пролиферативной активности методом "тимидиново-го самоубийства" (Becker,1965). Преципитирушщие IgG-анти-тела у кроликов определялись преципитацией в агаре по Ouchterlony (1951). Влияние ФПА на функциональную активность макрофагов мышей и нейтрофилов человека исследовали по индукции интерлейкина-I (Phillips,Rabson,1983) и высвобождению простагландина Eg.

Аллергенную активность атопических аллергенов,их поли-меризованных форм и ФПА определяли по индукции ПКА у иммунизированных мышей и скарификационными пробами на больных ато-пическими заболеваниями.

Иммуномодуляцию у мышей осуществляли фармакологическими агентами(циклофосфамид,соединения КП-40 и КП-45,левамизол, димефосфон),облучением на аппарате РУМ-17,острой барокамерной и хронической высокогорной гипоксией (перевал "Анзоб" Таджикской ССР, высота 3375 м), фенилгидразиновой анемией,кровопо-терей,гипертрансфузией сингенных эритроцитов.

Эритроидные клетки (Эр-супрессоры) выделяли из селезенок мышей, подвергнутых воздействию гипоксии и фенилгидра-

зиновой анемии.

Концентрацию белка в аллергенах определяли методами (Lowry,1951) с использованием фенольного реактива и белкового красителя Coomassie G-250{Bradford,I976).

УФ-спектры аллергенов анализировались путем их регистрации на УФ-спектрофотометре (Specord).

Статистическую обработку данных проводили методом вариационной статистики с использованием критерия Стыо-дента и непараметрическими методами статистики,применяя критерий Т-Уайта.

Число животных в каждой исследуемой группе составляло от 8 до 15,все исследования повторялись не менее • двух раз,за исключением исследования влияния высокогорной гипоксии и облучения на синтез ГЦТА.

■ РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

I. Структура и свойства нативных аллергенов

Методами гель-фильтрации на сефадексе Г-ЮО и изо-электрического фокусирования атопических аллергенов -пыльцы злаковых трав (тимофеевки,ржи,ежи,мятлика,косте-ра,овсяницы и др.),сорных растений (полыни,лебеды,амброзии, подсолнечника), домашней пыли и клещей рода Dermato-phagoides pteronissimus,грибов Aspergillus fumigatus выделены и охарактеризованы важнейшие аллергенные компоненты. Установлена множественность антигенов в указанных аллергенах.

Аллергеноактивные компоненты составляют менее 10% всех белковых компонентов аллергенов. Атопические аллер-

гены независимо от их природы обладают рядом общих черт, среди которых наиболее существенными являются:

-наличие основной группы антигенных компонентов с молекулярной массой в пределах 10-40 КД и изоэлектрическими точками (ИЭТ) от 4 до 6

-присутствие "минорных" компонентов с молекулярной массой менее 10 и более 150 КД и ИЭТ в кислой и щелочной зонах j

-отсутствие аллергенной активности у пигментированных компонентов,сорбирующихся на декстрановых гелях

-наличие в аллергенах значительного кбличества компонентов, не обладающих аллергенностью,но вызывающих выраженные иммуномодулирующие эффекты.

Было показано,что высоко- и низкомолекулярные неаллерен-ные компоненты модулируют у мышей синтез IgG ^ — и IgE-Ат к аллергенным фракциям. Так,высокомолекулярные компоненты,вводимые с аллергенами,способствуют дополнительному синтезу IgG.j-^ Низкомолекулярные компоненты такж$ обладают биологическс активностью. Их введение приводит к стабилизации высоких уроЕ ней IgG^- и IgE-Ат к аллергенам.

В последующих исследованиях из пыльцы амброзии был выделен неаллергенный иммуномодулирующий фактор ФПА,проявлявший различную антигеннеспецифическую активность.

Установлено,что в/б введение ФПА мышам-гибридам F^ в дог 50 мкг/мышь (2 мг/кг массы) в различные сроки иммунизации аллергенной фракцией пыльцы по-разному влияет на синтез IgE-Ат. В частности,одновременное введение ФПА и аллергена стимулирует синтез IgE-Ат к аллергену амброзии. Введение же ФПА за cyi ки до иммунизации приводит к угнетению синтеза антиамброзий-

ных 1дЕ-Ат.

ФПА обладает,очевидно,антигеннеспецифическим влиянием на антителообразование. Установлено,что предварительное введение ФПА стимулирует 1дМ-антителообразование к ЭБ.

Наряду с указанным эффектом,ФПА стимулирует более чем в 1,5 раза и фагоцитарную активность пернтоне^льных макрофагов мышеи-гибридов.

Как известно,иммунологическая активность макрофагов реализуется посредством высвобождения регуляторных моно-кинов,в частности ИЛ-1,ПГЕ?. В связи с этим нами исследовано влияние ФПА на продукцию ИЛ—I перитонеальными и селезеночными макрофагами мышей (СВАхС57В!_)Р,| ,а также нейтро-филами больных поллинозом и доноров.

Показано,что 20-часовая инкубация перитонеальиых макрофагов с ФПА в конечной концентрации 25 мкг/мл индуцирует синтез ПЛ-1 оцениваемого в митоген —(СопА) - индуцированной культуре тимоцитов. Не влияя на спонтанную пролиферацию клеток тимуса ФПА в дозе 10 мкг/мл не индуцирует синтеза ИЛ-1. Возможно,отсутствие индукции ИЛ--.1 уцениваемое по индексу влияния (ИВ),макрофагами под влиянием ФПА в дозе 10 мкг/мл,связано с низким уровнем ответа п'.мо-цитов в контроле (ИВ=0,25+0,05). ФПА в указанных дозах не вызывал достоверных изменений в продукции Ш!-.[ селезеночными макрофагами.

Среди механизмов стимулирующего влияния ФПА па фагоцитарную активность макрофагов существенное значение может иметь и его влияние на высвобождение простагландинов,

и частности ГО^.В серии исследований было установлено, >:то ФПА в конечной концентрации 10 мкг/мл в 2,5 раза нижает (р<0,05) уровень ПГЕ2:2880+436рд /мл - в контроле и 1113+108 рд /мл - при добавлении ФПА.

В последующих исследованиях было показано,что ФПА оказывает влияние и на индукцию нейтрофилокинов клетками доноров и больных поллинозом. Анализируя данные влияния ОДА на продукцию ИЛ-1 нейтрофилами,была показана недостоверная тенденция к угнетению функциональной активности пайтрофилов. Индекс влияния в исследованиях на клетках 16 доноров составил 4,42+1,04 (в контроле - 7,48+ 2,07), ас нейтрофилами 16 больных поллинозом '- 5,07+0,86 (в контроле - 5,97+0,97).

Отсутствие достоверных различий обусловлено индивидуальными различиями в чувствительности нейтрофилов к ФПА. У большинства доноров (66,7%) и больных поллинозом (70%) ! аблюдается угнетающее влияние на продукцию нейтрофилоки-■ ов,в то время как у примерно 1/3 лиц наблюдается стиму-. ирующее влияние.

Анализ влияния ФПА на функциональную активность ПСКК показал,что фактор в дозах 10 и 25 мкг/мышь самостоятельно не стимулирует число КОЕд, но оказывает адъювантное влияние на эффект стимуляции ПСКК,обусловленный введением нативного аллергена пыльцы амброзии.

Все эти данные позволяют нам предположить кооперативное влияние на организм аллергенных и неаллергенных компонентов атопических аллергенов как один из важнейших моментов в запуске 1дЕ-антителообразования.Это взаимодейст-

и.

вие может происходить по следующей схеме:

Синтез 1дЕ-Ат под влиянием пыльцы происходит в 3 фазы,как и синтез других классов иммуноглобулинов. В I фазе митогенные неаллергенные факторы пыльны вызывают аналогично тимуснезависимым антигенам деполяризацию мембраны незрелых В-лимфоцитов и индуцируют переход из 6д -фазы в -фазу клеточного цикла.В эту же фазу антигенные компоненты пыльцы после процессинга макрофагами презентируются антигенспецифическим Т-лимфоиитам,выделяющим в дальнейшем аллергенспецифические факторы,подготавливающие зрелые Б .^-лимфоциты к антигенспепифичес-кому пролиферативному сигналу (например,ИЛ-2). ЯЛ-2 стимулирует пролиферацию 6^В-лимфоцитов и превращение их в зрелые антителопродупенты (фаза П),которые в последующем и продуцируют 1дЕ-Ат(Ш фаза).

2.Структура и свойства полимеризованных аллергенов Методом гель-фильтрации на сефарозе 4В установлено, что молекулярная масса полимеризованных аллергенов пыльцы амброзии,злаковых трав и домашней пыли находится в пределах от 2 до 20 млн.дальтон. Высокомолекулярные аллергены отличаются от мономерных и по функциональной активности.

Показано,что полимеризация резко угнетает аллергенную активность,что установлено методом ПКА на мышах и скарификационными пробами на больных поллинозом(табл.1).

Полимеризация не оказывает влияния на иммуногенные свойства полимерных молекул аллергена.Причем последнее касается не только индукции преципитиругоших 1д6-Ат\ но

и реагиновых 1дЕ-Ат,хотя уровень последних стимулируется полимеризованным аллергеном в меньшей степени,чем натив-ным. Так,при иммунизации мышей ВА1.В/С уровень ГЦТА к по-лим1-ризованному аллергену амброзии ниже,чем к нативному (тас'л.2).

Однако индукция ГЦТА,обусловленная иммунизацией полимеризованным аллергеном,имеет свои особенности.Уровень ГЦТА у мышей под влиянием полимеризованного аллергена нарастает медленнее,чем при введении нативного(рисЛ).

Титры ГЦТА

Обозначение:

1. а, в - сроки иммунизации

160

80

40

20

-О

6 8 10 Недели исследования

а

в

Рис.1. Иммуногенная 12Е-активность полимеризованного(ПА) и нативного (НА) аллергенов

13. Таблица I

Результаты скарификационных проб с нативными(НА) и полимеризованными(ПА) аллергенами

№ Исслелован-ный аллеоген

Число положительных реакций по;; конечных концентрациях* аллергенов _

0,00005 | 0.0005 0,005!0.05;

1. НА(фракция"А" V пыльцы амброзии)

2. ПА(фракция"А" пыльцы амброзии)

3. НА^г.иьшьцы

"амброзии

4. ПА-625 пыльцы

амброзии

5. НА домашней пыли

6. ПА домашней пыли

7. НА пыльцы злаков

8. ПА пыльцы злаков

3

1 6 6

2 9

О

3 I

2

I 7

■ Примечания: * -конечное разведение указано и-, ''..'держанию в аллергенах белка (в ыкг< мл)

** -число больных.дакшее положнтил-яые скарификационные пробы(волдырь не менее 5мм в диаметре)на соответствующие разведения аллергенов.

Таблица 2 Индукиия гомонитотропных IдЕ -антител полимеризовашшм аллергеном амброзии

№ Иммунизирующий Алл Уровень П.1ТА

ВАЬВ/с

1. 2. Нативный Алл Полимеризованный Алл 16,50+1,32 9,89+~0,12

I

Максимум синтеза 1дЕ-Ат к аллергену амброзии наступает лишь через три,, .недели после повторной иммунизации полиме-ризованным аллергеном.Однако их уровень длительнее сохраняется на высоком уровне,чем уровень ГЦТА к нативному аллергену. Вероятно, для полимеризованных аллергенов характерен пролонгированный эффект на антителообразование,что наряду с их низкой аллергенностыо,может иметь важное значение при иммунотерапии.

Сохранение выраженной антигенности у полимеризованных аллергенов объясняется тем,что последние сохраняют необходимые для иммунного ответа антигенные детерминанты. Учитывая, что важным этапом в иммунном ответе является процессинг и презентация макрофагами антигенов,нами была исследована способность антигенпредставляющих клеток к презентации высокомолекулярного аллергена. Для этого перитонвальные макрофаги мышей-гибридов инкубировали с 10 мкг (по белку) на-тивного и полимеризованного аллергенов амброзии. После 4-часовой инкубации клетки переносили внутрибрюшинно интакт-ным сингенным мышам. В результате было установлено,что перенос преинкубированных с полимеризованным аллергеном макрофагов индуцирует синтез IдЕ-ГЦТА,причем их уровень на 60,8 выше,чем при переносе клеток,инкубированных с нативным аллер геном,т.е.презентация макрофагами высокомолекулярных форм аллергена осуществляется даже более активно,чем низкомолекулярных.

Отличительной особенностью в презентации двух форм аллергенов является то,что этот процесс для полимеризованного аллергена,в отличие от мономерного,простагландинзависим.

Так,преинкубация макрофагов с блокатором простагландин-синтетазы - индометацином,до их инкубации с аллергенами, приводит к стимуляции полимеризованным аллергеном синтеза ГЦТА,в то время как макрофаги,инкубированные с индоме-тацином и мономерной формой аллергена,презентируют его в той же степени,что и макрофаги,не "обработанные" индоме-тацином.

Среди различных эффектов иммунотерапии атопических заболеваний важное значение имеет снижение уровня 1дЕ-Ат к специфическому аллергену. В одной из серий наших исследований было показано,что полимеризованные аллергены пыльцы способствуют снижению у мышей уровня ГЦТА к нативному аллергену амброзии (Рис.2).

Титры ГЦТА Обозначения:

1. ФР - физраст-

160

вор

2. а,в,с -сроки

иммунизации

80

3. ш -сроки

введения ал-

40

лергенов

20

10

НА ■о ПА

1

1а 20

40 50 60 Дни

а в с

Рис.2. Влияние полимеризовэнного (ПА) и нативного (НА) аллергенов пыльцы амброзии на уровень ГЦТА

Причем полимерная форма аллергена вызывает более заметное снижение титра ГЦТА,чем мономерчая: уже через две недели после повторной иммунизации их титр к нативному аллергену снижается до 1:10,в то время как при"обработке"мышей натив-ным аллергеном он достигает уровня 1:40.

Полимеризованные аллергены,в отличие от нативных,не оказывают влияния на активность ПСКК: полимеризация аллергена пыльцы амброзии приводит к угнетению чувствительности стволовой клетки к воздействию модифицированной формы аллергена, что выразилось в отсутствии увеличения числа КОЕд в селезенках мышей.

3. Иммунорегуляция синтеза ГЦТА,индуцированных различными молекулярными формами аллергенов

Анализируя участие в регуляции 1дЕ-антителообразования различных лимфоидных и нелимфоидных клеток методом адоптивного переноса было установлено,что естественные супрессор-ные субпопуляции,содержащиеся в прилипающей и неприлипающей фракциях клеток селезенки оказывают угнетающее влияние на синтез ГЦТА,индуцированных обеими формами аллергенов.Вероятно, супрессирующее влияние прилипающей фракции обусловлено макрофагами.В серии исследований было показано,в частности, что адоптивный перенос перитонеальных макрофагов угнетает синтез ГЦТА.

Исследованиями показано,что существует противоположная направленность изменений в 1дМ-ответе на тимусзависимый ан-тиген-ЭБ и 1дЕ-антителообразование на аллерген.

Последнее было установлено в различных экспериментальных моделях. Так,стимуляция числа 1дМ-А0К,вызванная введе-

нием иммуномодулятора левамизола на фоне циклофосфамидной иммунодепрессии,одночасовая барокамерная гипоксия,гипертрансфузия сингенных эритроцитов,кровопотеря,высокогорная хроническая гипоксия приводят к угнетению синтеза ГЦТ; Оппозитная направленность IgM- и IgE- ответа была подтве{ ждена в исследованиях с использованием иммунодепрессивных воздействий: введение иммунодепрессантов(циклофосфамида, нового соединения КП-45),анемия,вызванная гемолитическим ядом - фенилгидразином,облучение низкими дозами стимулируют синтез IgE-Ат.

3.1. Одночасовая гипоксия приводит к стимуляции накопления IgM АОК (табл.3).Их число увеличивается в 1,7 раза при иммунизации через 3 часа после гипоксии и в 2 раза при иммунизации,проведенной за 3 часа до гипоксии.

Таблица 3

Влияние острой одночасовой барокамерной гипоксии

на число IgM-AOK к ЭБ у мышей-гибридов(CBAxC57BL)F^

р

№ [_Воздействие_| Число IgM-AOK/IO клеток(М+ш)

1. Гипоксия + иммунизация 306,5+49,2 р<0,01

2. Иммунизация+гипоксия 426,7+73,5 р<0,01

3. Контроль 215,0+55,8

Кратковременная острая барокамерная гипоксия оказывает противоположное влияние на синтез ГЦ'ГА.Их синтез под влиянием гипоксии снижается в 2-3 раза.Причем,более выраженное действие наблюдается в случае,когда гипоксия предшествует иммунизации аллергеном.

3.2. Сходные эффекты оказывает и высокогорная рипокоия. Показано,что 3-недельное пребывание мышей BALB/c в условиях высокогорной гипоксии приводит к значительной стимуляции IgM-ответа к ЭБ. Число IgM-AOK возрастает по сравнению с равнинными данными в 15-20 раз.

Хроническая высокогорная гипоксия выявила противоположную направленностьIgM-ответа к ЭБ и IgE-ответа к аллергену. Установлено,что при иммунизации мышей BALB/c .аллергеном пыль цы амброзии на фоне 3-недельного пребывания на высоте 3375м значительно снижается и первичный,и вторичный IgE -ответ. Уровень ГЦТА в условиях гипоксии снижается почти в 3 раза.

В последующих исследованиях было показано,что высокогорная гипоксия в значительной степени "извращает" иммунный ответ к ЭБ у мышей BALB/cпредварительно иммунизированных аллергеном. Иммунизация ЭБ на 7-9 сутки после примирования мышей аллергеном приводит в условиях гипоксии к снижению IgM-ответа. В то время как в условиях равнины наблюдается значительная стимуляция IgM-ответа.

3.3. Как и при гипоксии,при которой наблюдаются против положные эффекты на IдМ— и Iд Е-антителообразование,фенилгид разиновая анемия значительно стимулирует синтез ГЦТА. Последнее обусловлено,вероятно,накоплением и воздействием ' эритроидных клеток (Эр-супрессоры).

Это предположение получило подтверждение в серии исследований с адоптивным переносом спленоцитов мышей,содержащих бластные клетки эритроидного ряда. Перенос неприли-пающей фракции "фенилгидразиновых" спленоцитов сингенным реципиентам СБА,BALB/c и CCBAxC57BL)F.j через сутки после иммунизации аллергеном,т.е.после примирования макрофагов,

стимулирует синтез ГЦТА. Прилипающая фракция стимулирующим действием не обладала.

Стимуляция синтеза ГЦТА наиболее выражена у мышей линии СБА,у которых процент стимуляции, по сравнению с контролем составил 232%. Уровень ГЦТА у мышей ВА1.В/С и (СВАхС57В1_)Р| после введения Эр-супрессоров возрастает на 141 и 134 % соответственно. Существенно,что стимуляция более выражена у мышей линии СБА,дающей слабый 1дЕ-ответ (пе, Уаг, 1970; Свиридов В.А.,1978) при иммунизации аллергеном пыльцы амброзии и овальбумином и слабее выражена у "высокоотвечагащих" на аллерген мышей (ВА1.В/С и гибриды (СВЛхС57ВЬ)Р1.)

Учитывая,что Эр-супрессоры были ранее обнаружены и при ,типоксии (Козлов В.А.с соавт.,1984), в частности в неприлипающей фракции клеток селезенки (Цырлова И.Г., 1987), нами было исследовано влияние и" постгипоксичных Эр-супрессоров на иммунный ответ. Постгипоксичные спле-ноциты были получены у мышей,подвергнутых воздействию 16-часовой гипоксии.

Исследованиями показано,что перенос клеток,содержащихся в неприлипающей фракции (источник Эр-супрессоров) приводит к подавлению у сингенных мышей числа 1дМ-А0К в селезенке. Причем угнетающее влияние наблюдается при их переносе и в индуктивную (более чем в 5 раз), и в продуктивную (в 3 раза) фазы иммуногенеза. Постгипоксичные спленоциты неприлипающей фракции стимулируют синтез ГЦТА только при переносе их в продуктивную фазу. Отсутствие стимулирующего влиянии при переносе в индуктивную фазу обусловлено,вероятно,не-

достаточной степенью индукции эритробластов при 16-часовой гипоксии,а также подавляющего действия Р6Е2»уровень которого возрастает при гипоксии (Макеев О.Г.с соавт., 1986).

3.4. Оппозитные взаимоотношения между 1дМ-и 1дЕ-ответом были подтверждены в исследованиях с кровопоте-рей и гипертрансфузией сингенных эритроцитов.

В предварительных исследованиях было подтверждено стимулирующее влияние гипертрансфузии сингенных эритроцитов и кровопотери на число 1дМ-А0К в селезенке мышей, иммунизированных НА.

Иммунизация мышей аллергеном через 24 часа после гипертрансфузии сингенных эритроцитов и кровопотери приводила к подавлению синтеза ГЦТА по сравнению с контролем. Их синтез снижался при гипертрансфузии на 20%, а при кро-вопотере - более,чем на 50%.

3.5. В исследованиях по влиянию различных видов фармакологической иммуностимуляции на синтез ГЦТА у мышей, иммунизированных аллергеном пыльцы амброзии,показано,что 5-кратное ежедневное введение интактным мышам левамизола в дозе 2,5 мг/кг до иммунизации практически не влияет на синтез ГЦТА. Синтез ГЦТАпод влиянием левамизола изменяется лишь у мышей,предварительно подвергнутых иммунодепрес-сии,вызванной однократным в/б введением циклофосфамида в дозе 80 мг/кг. Последовательное введение циклофосфамида и левамизола вызывает снижение синтеза ГЦТА во все сроки исследования.

В отличие от левамизола,оказывающего выраженное влия-

ние на гуморальный иммунный ответ,отечественный иммуно-модулирующий препарат димефосфон проявляет свою иммуно-модулирующую активность,главным образом путем стимуляции клкточного иммунитета.В серии исследований было показано, что и при однократном (50 мг/кг) и 8-кратном (по 50 мг/кг ежедневно) в/б введении димефосфона до иммунизации не наблюдается стимуляции числа IдМ—АОК в селезенках мышей С57ВЦ слабоотвечающих на иммунизацию ЗБ.Предварительно одно- и восьмикратное введение в дозе 50мг/кг димефосфона не оказывает влияния и на синтез ГЦТА, что .г еще раз подтверждает наличие проивоположных отношений между IдМ- и1дЕ-антителообразованием.

3.6. Исследованиями установлено,что однократное в/б введение циклофосфамида,соединений КП-40 и КП-45 за сутки до иммунизации ЭБ приводит во всех случаях, за исключением введения циклофосфамида в дозе 5 мг/кг, к выраженному подавлению числа 1дК~А0К в селезенках мышей. Их число снижается в 4-5 раз. Наиболее выраженной активностью обладают соединения КП-45, и особенно КП-40,введение которого в дозе 50 мг/кг полностью ингибирует 1дМ~ответ к ЭБ. (табл.4).

Исследование влияния циклофосфамида на синтез ГЦТА показало,что препарат в дозах 50 и 80 мг/кг массы вызывает стимуляцию синтеза ГЦТА. Их уровень при иммунизации аллергеном пыльцы амброзии возрастает на 140 и 146% соответственно. Различий в степени стимуляции в зависимости от исследованных доз не выявлено.

Таблица 4

Влияцие циклофосфамида,соединений КП-40 и КП-45 на число 1дМ-А0К к ЭБ у мышей-гибридов (СВАхС57ВЬ)Р1

да Исследуемое Доза '" п Число 1дМ-А0К/Ю клеток

соединение (мг/кг) (М+гп)

I. Циклофосфамид 5 86,7 + 15,1

50 19,7 + 4,6**

80 20,1 + 6,8**

2. Контроль 103,0 + 23,6

3. КП-40 5 25,0 + 10,7**

50 -

4. Контроль 2 103,0 + 23,6

5. КП-45 5 8,4:+ 3,8**

50 11,7 + 2,8**

6. Контроль 3-

45,1 + 9,0

В следующей серии исследований было показано,что в дозе 5 мг/кг, не вызывающей угнетения числа 1дМ-А0К,цик-лофосфамид не влияет и на синтез ГЦТА.

Аналогичное стимулирующее влияние оказывает на синтез ГЦТА и введение мышам соединения КП-45 в дозе 50 мг/кг. Уровень ГЦТА возрастает на 157%. В то же время соединение КП-40,угнетающее 1дМ-ответ к ЭБ, не влияет в исследованных дозах на уровень ГЦТА.Возможно,что последнее связано с различиями в механизмах действия КП-40 и КП-45. Можно предположить, что соединение вызывает нарушение Т-клеточной регу-

ляции синтеза ГЦТА. Косвенным доказательством этого может быть обнаруженное нами угнетение гиперчувствительности замедленного типа более,чем в 2 раза (на 56%) при введении КГ1-40 за сутки до иммунизации ЭБ, в то время как соединение КП-45, стимулирующее 1дЕ-ответ,не влияет на гиперчувствительность замедленного типа.

3.7. В проведенных нами исследованиях анализировалось влияние различных доз рентгеновского облучения (от 0,1 до 5 гр) на синтез антиамброзийных ГЦТА при иммунизации мышей-гибридов (CBAxC57BL)F^ аллергеном пыльцы амброзии.

В начальной серии исследований было показано,что ГЦТА обнаруживаются после однократной иммунизации лишь у облученных в дозах 0,5: 1,5 и 2,5 Гр мышей.Титр антител на 2 неделе после иммунизации у мышей,облученных в дозе 2,5 Гр,равнялся 1:10,в дозе 0,5 и 1,5 Гр - 1:5. Повторная иммунизация приводит к дальнейшей стимуляции антителообразования. ГЦТА обнаруживаются на протяжении 10 недель исследования и их уровень не определяется на 14 неделе после начала эксперимента. Практически во все сроки исследования наблюдалась стимуляция синтеза ГЦТА под влиянием облучения. Иммунизация мышей через б месяцев после облучения приводила к одинаковой стимуляции (до титра 1:40) синтеза ГЦТА во всех группах, в том числе и контрольной,что,вероятно,связано с постепенным восстановлением функции иммунной системы в поздние сроки облучения.

Исследование дозозависимости синтеза ГЦТА при иммунизации нативным аллергеном показало,что низкие дозы

облучения (от 0,1 до 2,5 Гр) оказывают стимулирующее влияние на их синтез. Причем наиболее выраженная стимуляция наблюдается в дозах 1,0 и 2,5Гр. (рис.3).

160

80-

с

ь

я С-, 40-

л а

£-К 20-

Н 10-

5 Дозы облучения (Гр)

Рис.3. Влияние различных доз облучения на уровень ГИТА у мышей,иммунизированных нативным (а—/¡)и поли-меризованным аллергенами (•■--0).

Сравнительное исследование влияния различных доз облучения на синтез ГЦТА у мышей,иммунизированных высокое молекулярным аллергеном, показало некоторое отличие от изменений, наблюдаемых при иммунизации нативным аллергеном. Как и при введении последнего наблюдается стимуляция анти-телообразования,однако не при дозах облучения I и 2,5 Гр, а при дозах - 0,1 и 1,5 Гр.Полное угнетение синтеза ГЦТА наблюдается уже в дозе 2,5 Гр."Смещение" пиков стимуляции вряд ли обусловлено "включением" различных антигеннеспеци-фических субпопуляций в регуляцию синтеза ГЦТА,индуцированных двумя видами аллергенов,а является очевидно результатом

различной чувствительности антителопродуцентов к антигенной стимуляции мономерной и полимерной формами аллергенов.

Сравнительные исследования показали сходство в имму-норегуляции IдЕ-Ат,индуцированных нативными и полимерными аллергенами. Следует отметить,что подобные взаимоотношения между 1дМ- и 1дЕ-антителообразованием не зависят от молекулярной массы аллергена. Различия носят,главным образом, количественный характер (рис.4).

Обозначения:

1 .Однсчасовая гипоксия до иммунизации

2 .Одночасовая гипоксия после иммунизации

З.Кровопотеря

4 .Гнлертрансфуз!« синген-

ных эритроцитов

5,Фенилгидразшювап анемия

6,Введение циклофосфамида (доза 50 мг/кг)

7.Введение ииклофосфамвда (доза 80 мг/кг)

8.Введение соединения КП-^ (50 мг/кг)

Рис.4. Синтез Г ЦТ А у мышей,иммунизированных полимеризованнь аллергеном в условиях воздействия факторов, стимулируюш и подавляющих I ^М-антителообразование

Исследования дают.кроме того,основание полагать наличие тесной связи между состоянием эритропоэза и 1дЕ~ антителообразованием,носящей в отличие-от 1дМ-антителоге-неза,в основном прямо пропорциональный характер. Однако подобная закономерность прослеживается не всегда.

%

60^ 20. 2а 6 0 100 140]

и

4 5

I 6

1

В заключение следует отметить,что в гиперпродукции 1дЕ-Ат при атопии существенное значение могут иметь с одной стороны,особенности структуры и свойств аллергенных и иммуномодулирующих компонентов атопенов,а с другой - состояние иммунорегуляторных механизмов,регулируемых кооперативным взаимодействием различных лимфоидных и нелимфоидных популяций клеток.

ВЫВОДЫ

1. Основные компоненты пыльцы различных растений,грибковых аллергенов,домашней пыли,обладающие аллергенной активностью, являются гликопротеинами с молекулярной массой от 20 до 40 кД и изоэлектрическими точками в пределах рН от 3,5 дс 5,0. В атопических аллергенах незначительной аллергенностью обладают минорные компоненты,имеющие молукулярную массу менее 10 кД и более 100 кД и фокусирующиеся преимущественно

в кислой и щелочной зонах рН.

2. Низко- и высокомолекулярные компоненты пыльцы амброзии не обладают способностью индуцировать синтез у мышей гомоцитотрогаых антител,однако при их сочетанном введении

с аллергенноактивной фракцией наблюдаются либо адъювантное, либо пролонгирующее влияние на уровень антител к аллергенам.

3. В аллергенах пыльцы растений,наряду с аллергенноак-тивными,обнаружены аллергеннонеактивные компоненты,которые обладают выраженной иммуномодулирующей активностью.В частности, из пыльцы амброзии выделен неаллергенный фактор,при введении которого стимулируется число 1дМ-антителообразую-щих клеток в селезенках мышей,фагоцитарная активность ма-

крофагов,индуцируется синтез и секреция макрофагами интерлейкина-1,снижается секреция макрофагами лроста-гландина Е£, модулируется 1дЕ-ответ на аллергенные компоненты пыльцы,а также индукция и синтез нейтрофи-локинов.

4. Модификация структуры нативных аллергенов путем полимеризации приводит к резкому возрастанию молекулярной массы аллергенных компонентов до -2-20 млн.дельтон, что изменяет функциональную активность аллергенов. 3 частности,полимеризоваиные аллергены обладают пролонгированным эффектом на 1дЕ-антителообразование.резко сниженной аллергенностыо,при полном сохранениииммуноген-ности,более выраженной способностью к презентации макрофагами, которая носит простагландинзависимый характер.

5. Аллергены пыльцы,наряду с классическими антигенами , обладают способностью стимулировать пролнфера-тивную активность полипотентной стволовой кроветворной метки: после их введения возрастает число стволовых клеток, находящихся в Б-фазе клеточного цикла и увеличивается эндогенное колониеобразование. Полимеризоваиные аллергены не обладают свойством стимулировать проли-феративную активность стволовых кроветворных клеток и при их введении число эндогенных селезеночных колоний гемопоэтических клеток не меняется.

6. Регуляция 1дЕ-отвота па нативные и полимеризоваиные аллергены осуществляется различными иммунокомпе-тентными клетками-эффекторами лимфоидного и нелнмфоид-ного происхождения,в том числе макрофагами и предшест-

венниками эритробластов (Эр-супрессорами), которые в отличие от лимфоцитов и макрофагов оказывают не супрессирующее. а стимулирующее влияние на синтез гомоцитотропных 1дЕ-ан-тител.

7. Имеется принципиальное различие в действии одного и того же пммунорегулирующего клеточного фактора эритроид-ного происхождения на синтез гомоцитотропных 1дЕ-антитело-образукщих клеток. Так,клетки эритроидного ряда ингибируют 1дМ-ответ на эритроциты барана и стимулируют синтез гомоцитотропных 1дЕ-антител.

8. Иммуномодулирущие воздействия противоположнь!м образом влияют на процесс формирования клона 1дМ- и 1дЕ-син-тезир.ующих клеток. Так,воздействия,стимулирующие 1дМ-ответ (введение лооамизола на фоне циклофосфамидной иммунодепрс-сии,одночасовая барокамерная гипоксия,гипертрансфузия син-генных эритроцитов,кровопотеря,высокогорная хроническая гипоксия) приводят к угнетению синтеза гомоцитотропных 1дЕ-антител.индуцированных нативными и полимеризованными аллергенами. В то же время угнетение IдМ-антителообразования, вызванное фармакологическими препаратами(циклофосфамид, соединение КП-45),фенилгидразиновая анемия, облучение низкими дозами вызывает стимуляцию синтеза 1дЕ-антител.

СПИСОК РАБОТ,ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ * ДИССЕРТАЦИИ

1. Ханферян Р.А. Антигенная общность пыльны амброзии полыинолистной и подсолнечника // Поллинозы (этиология, патогенез,клиника,распространенность): Тез.докл.Всесоюзн. научн.совещ. - Краснодар,1973. - С.75-76.

2. Ханферян Р.А. Изучение химической природы некоторых пылевых аллергенов // Вопросы аллергии: Тез.докл.4-й Респ.конф. - Каунас,1976. - C.2G2-263.

3. Ostroumov A.I., Khanferyan R.A., Edigarova T.L. Chromatographic and elektrophoretic analysis of sorrie pollen allergens // A1lergologica et immunopathologia:

X Turopean Congress of allergology and clin.immunol. -Praha,1977. - P.330.

4. Ханферян P.А., Чеканова O.A., Золоташко А.В., Эдигарова Т.Л. Изучение некоторых свойств пыльцевых аллергенов // 3-й Симпоз.аллергол.и иммунол.об-в социа-листич.стран: Тезисы. - Сухуми,1979. - С.194-195.

5. Остроумов А.И., Ханферян Р.А., Эдигарова Т.Л. Изучение природы аллергенной активности некоторых видов растительной пыльны // Бюлл.экспер.биол. и мед. - 1979.-f®. - С.332-333.-

6. Ханферян Р.А., Казарии Б.В. Применение хроматоло-гических методов для исследования экзоаллергенов // Новые методы исследования в экспериментальной и клинической медицине. - Куйбышев,I9S0. - С.88-90.

7. Ханферян Р.А. Применение метода изоэлектрофокус-пирования в градиенте рН для анализа аллергенов //Научн.

конф.Кубанского мед.ин-та по результатам научн.-исслед. работ 1980 года:Тезисы докладов. -Краснодар,1981. -С.190-191.

8. Ханферян P.A. Хроматографическое фракционирование аллергенов пыльцы луговых злаков // Иммунитет и аллергия

в инфекционной патологии: Тез.докл. 3-й конф. - Фрунзе,1980 - С.84-85.

9. Ханферян P.A., Сысоев В.М. Анализ белковых компо.г-нентов аллергенов методами гель-фильтрации,ионообменной :: хроматографии и изоэлектрического фокусирования // Жидкостная хроматография:Тез.докл.2-го Всесоюзн.симпоз. - Черноголовка, 1982. -С.71.

10. Черепнина Н.П., Ханферян P.A. Электрофорез ликвора в полиакриламидном геле // Лабор.дело. - 1982. - №5.-

С.312-313.

11. Золоташко A.B., Ханферян P.A. Клиническая эффективность полимеризованной фракции пыльцы злаковых трав// УП Сев.-Кав.конф.по иммунол.,аллергол. и молекул.биол.: I Тез.докл. - Краснодар,1983. - С.184-185.

12. Ханферян H.A., Михайлова Н.Я. Усиление IgE-ответа при облучении низкими дозами радиации // УП Сев.-Кав.конф. по иммунол.аллерпол. и молекул.биол.: Тез.докл. - Краснодар, 1983. - С.207-208.

13. Галенко-Ярошевский П.А., Шадурский К.С.,йльюченок] Пасечников Ф.Г., Ханферян P.A., Сергань В.Я., Сазонов С.Р, Противоаллергические свойства димебона,фенкарола и кетоти-фена при сенсибилизации пыльцой амброзии полынолистной // Фармакол.и токсикол. - 1984. - №3. -С.75-78.

14. Ханферян P.A., Золоташко A.B., Демина Н.Н.Аллер-генность и имиуногенность полимеризованной фракции "А" пыльцы амброзии// Функция иммунной системы в инфекционном и неинфекционном процессе. Молекулярная биология бактерий. - Краснодар,1984. - С.102-104.

15. Колесникова Н.В., Ханферян P.A. Стимуляция IgE— ответа иммунорегуляторными клетками нелимфоидной природы// Сб.трудов Львовского госуд.мед.ин-та. - Львов,I9S6. - ГО.

- С.4-5.

16. Колесникова Н.В., Драгунова Е.В., Ханферян P.A. Влияние гипертрансфузионной полицитемии на IgE-ответ лабораторных животных // Деп.ВИНИТИ № 4448-В87. - С.1-4.

17. Ханферян P.A., Колесникова Н.В. Модификация им-«•^уногенных и аллергенных свойств аллергена амброзии путем полимеризации // Актуальные вопросы иммунологии и иммунопатологии в медицине и курортологии: Тез.докл. - Пятигорск, 1987. -С.93.

18. Колесникова Н.В., Ханферян P.A. Влияние острой гипоксии на IgM- и IgE-антителогенез лабораторных живот-Hbu/Z Проблемы потологии а эксперименте и клинике /Митина Т.В.: Труды Львовского гос.мед.ш-та. - Львои,ГС37.-Т.9. - C.I0-II.

19. Kozlov V.A., Tzyrlova J.G., Kolesnikova N.V., Khanferyan R.A. Stimulation of homocytotropic IgE-anti-body synthesis by cells of erythro id nature // Fourth

* intern.cogress of cell biology. - Canada, Montreal,1988.

- ".239.

20. Колесникова H.B., Ханферян P.A., Покровский B.M. IgM- и IgE-антителообразование в условиях стимулирование-

го и подавленного эритропоэза// Бюлл.экспер.биол.и мед., деп.22.06.88. - 1988. - №12. - С.767-768.

21. Ханферян P.A. Роль различных компонентов пыльцы амброзии в иммунном ответе // Иммунология. - 1988. -№5.

- С.93-94.

22. Ханферян P.A. Фармакологическая регуляция синтеза иммуноглобулина Е // Всесоюзн.съезд фармакологов. - Г Ташкент,1988. - С.400-401.

23. Ханферян P.A., Колесникова Н.В., Козлов В.А. Экспериментальное обоснование возможности лечения атопи-ческих аллергических заболеваний в условиях высокогорного климата // Реабилитация иммунной системы: Тез.докл.1-го Всесоюзн.симпоз. - Цхалтубо,1988. -C.I30-I3I.

24. Якобишвили М.А., Дорофеева Е.М., Ханферян P.A. Комбинированная фармако-иммунокоррекция поллинозов у детей// Реабилитация иммунной системы: Тез.докл.1-го Всесоюзного симпоз. - Цхалтубо,1988. - С.132-133.

25. Козловская И.П., Галенко-Ярошевский ILA., Ханферян P.A., Колесникова Н.В., Драгунова Е.В. Изучение антинекротической и иммунологической активности N-фуран -Е-ами-нокапрамида // Химия и технология фурановых соединений: Сб.науч.труд. - Краснодар,1988. - С.92-98.

26. Колесникова Н.В., Ханферян P.A. Иммунологические аспекты адаптации лабораторных животных к условиям" высотной гипоксии // Стресс и иммунитет (психонейроиммунология): Тез.докл.Всесоюзн.конфер. - Ленинград-Ростов,1989. -С.25-» 26.

27. Ханферян P.A. Иммунорегуляция и синтез гомоцито-тропных IgE-Ат при иммунизации мышей высокомолекулярным

аллергеном // Тез.докл.I Всесоюзн.иммунол.съезда. -Москва,1989. - T.I. - С.125.

28. Козловская И.Н.,Бадовская Л.А.,Тюхтенева З.И, Пидэмский Е.Л. Дульбович Г.А.колесникова Н.В.,Драгу-нова Е.В.,Ханферян Р.А. ,Салихова Н.АД,1,1-Трихлор-2--фенилсульфонамидо-2 (2-фуроиламино) этан, проявляющий анальгетическую и иммунодепрессивную активность: Авторское свидетельство на изобретение № I5I2084, зарег.

I июня 1989г.

29.R.A.Khanferyan. Cellular mechanisms of homo-cytotropic IgE-Ab synthesis regulation to the native and polymerized forms of allergens // J.Immunol.Im-munopharmacol., 1989.- V. 1X.-№ 3.-p. 165

30. Козловская И.Н. Дюхтенева З.И. ,Бодовская JLA., Ханферян Р.А.,Колесникова Н.В.,Драгунова Е.В.

1,1,1-трихлор-2-фенилсульфонамидо-этан,проявляющий иммунодепрессивную активность// Положительное решение на изобретение от I3.II.89r.no заявке № 4704623/30-04.

31. Khanferyan R.A. Macrophages and induction of IgE response to different molecular forms of aller-ger.s// in "Mononuclear phaqocyte system in normal and pathological state". Novosibirsk,1990.-p.168.

32. Kolesnikova N.V., Khanferyan R.A. Prostaglandin E, role in the formation of IgM and IgE response// in "Mononuclear phagocyte system in normal and pathological state". Novosibirsk,1990.-p.169.

■ 34.

33. Khanferyan R.A., Gromykhina N.Yu..Kolesnikova N.V. Non-lymphoid cell regulation of homocytotropic IgE antibody synthesis// in "Regulation and Clinical Significance of IgE Internat. Symposium on Allergy Clin.Immunol..Moscow,1990.-p

34. Куприянова O.A.,Мордвинов В.A.,Сенников C.B., Круглеева 0.JI.,Иванова И.П. ,Громыхина НЛО.,Ханферян P.A. Снижение продукции интерлейкина-I у больных поллинозом//

В тез.докл. II междунар.симп."Реабилитация иммунной системы Дагомыс,1990.-С.314.

35. Ханферян P.A.,Дорофеева Е.М.,Громыхина Н.Ю., Дерюгин И.Л. Иммунорегуляторная активность неаллергенных компонентов пыльцы// В тез.докл. II междунар.симп. "Реабилитация иммунной системы','Дагомыс,1990и-С.324.

36. Драгунова Е.В.,Колесникова Н.В.,Козловская И.Н., Ханферян P.A. Новый класс высокоактивных иммунодепрессан-тов// В тез.докл.II междунар.симп."Реабилитация иммунной системы",Дагомыс,1990 -С.360.

37.Ханферян Р.А.Механизмы аллергизирующего влияния некоторых "производственных" аллергенов// В тез.докл. 9-й Северо-Кавказской конф. с Всесоюзн.участием "Гигиенические аспекты охраны окружающей среды",Ростов-на-Дону, 1990.-С.95-96.

38.Колесникова Н.В.,Ханферян P.A.,Покровский В.М. 1§Е-ответ линейных мышей при срочной и долговременной адаптации к гипоксии// Мат.Всесоюзн.науч.конф. "Функциональные резервы и адаптация".

39. Ханферян P.A. Иммунологическая характеристика некоторых '.'производственных" аллергенов// В тез.докл. Всесоюзн.конф. "Экологические аспекты иммунопатологических состояний" ,Москва - Алма-Ата, 1990. -С.129.

40. Колесникова Н.В.,Ханферян Р.А.,Цырлова И.Г., Козлов В.А. Стимуляция синтеза гомоцитотропных IgE-антител клетками эритроидной природы// Иммунология, 1990, -С.46-47.