Химический состав растений Сибири и разработка ноотропных средств на их основе

Шилова, Инесса Владимировна

Диссертации по медицине → Фармацевтическая химия, фармакогнозия

Автореферат и диссертация по медицине (14.04.02) на тему:Химический состав растений Сибири и разработка ноотропных средств на их основе

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Шилова, Инесса Владимировна Пятигорск 2011 г.

Ученая степень: доктора фармацевтических наук

ВАК РФ: 14.04.02

Автореферат диссертации по медицине на тему Химический состав растений Сибири и разработка ноотропных средств на их основе

На правах рукописи

ШИЛОВА ИНЕССА ВЛАДИМИРОВНА

ХИМИЧЕСКИЙ СОСТАВ РАСТЕНИЙ СИБИРИ И РАЗРАБОТКА НООТРОПНЫХ СРЕДСТВ НА ИХ ОСНОВЕ

14.04.02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия 14.03.06 - фармакология, клиническая фармакология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора фармацевтических наук

1 7 ОЕВ 2911

Пятигорск-2011

4854278

Работа выполнена в Учреждении Российской академии медицинских наук Научно-исследовательском институте фармакологии СО РАМН и Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Сибирский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию РФ»

чл.-корр. РАМН, доктор фармацевтических наук, профессор

Самылина Ирина Александровна

доктор медицинских наук, профессор Суслов Николай Иннокентьевич

доктор фармацевтических наук, профессор Попова Ольга Ивановна

доктор медицинских наук, профессор Бейер Эдуард Владимирович

доктор фармацевтических наук, профессор Молчанов Геннадий Иванович

ГОУ ВПО «Самарский государственный медицинский университет Росздрава»

марта 2011 г. в 900 часов на заседании диссертационного совета Д 208.069.01 в ГОУ ВПО «Пятигорская ГФА Росздрава» (357532, Ставропольский край, г. Пятигорск, пр. Калинина, 11).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО «Пятигорская ГФА Росздрава» (357532, Ставропольский край, г. Пятигорск, пр. Калинина, 11).

Автореферат разослан «// »января 2011 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

Научные консультанты:

Официальные оппоненты:

Ведущая организация:

Защита состоится «15»

Е. В. Компанцева

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы. В современном мире прогрессирующий рост числа

заболеваний, сопровождающихся нарушениями в когнитивной и мнестической

сфере, делает актуальной проблему изучения и фармакотерапии нервно-

психической патологии, определяя её медицинской задачей с высокой социальной

значимостью (Арушанян, 2005; Воронина, Середенин, 2007). В настоящее время

одним из приоритетных направлений отечественного здравоохранения выступает

расширение ассортимента используемых лекарственных средств за счет внедрения

в медицинскую практику новых препаратов, в частности ноотропного действия.

Ноотропные лекарственные средства незаменимы для коррекции нарушений

высшей нервной деятельности при широком круге заболеваний, связанных с

повреждениями центральной нервной системы: инсульты, ишемические

повреждения мозга, атеросклероз, черепно-мозговые и психические травмы,

последствия клещевого энцефалита, менингита, гриппа, перенесенных

хирургических вмешательств с применением наркоза, химические, лучевые и

другие воздействия (Венгеровский и др., 2000; Воронина, Середенин, 2007).

Фармакоэкономическая оценка затрат в условиях неврологического стационара

выявила, что 40-50 % финансовых расходов приходится на препараты ноотропного

действия (Шилова и др., 2005). Широкое распространение невротических

расстройств среди взрослого населения (ими по данным разных авторов страдает от

50 до 70 % населения) и других заболеваний нервной системы (Windisch, 1996;

Малин, 2000; Sumner, 2004; Батышева и др., 2007), одновременно ограниченный

ассортимент синтетических ноотропных средств, недостаточная их эффективность

и широта терапевтического действия, вызываемые ими побочные явления и

недоступность отечественному потребителю вследствие дороговизны наиболее

эффективных импортных средств диктует необходимость поиска активных и

безопасных отечественных препаратов для лечения когнитивных расстройств.

Перспективными являются фитопрепараты ноотропного действия, однако,

представленные на отечественном рынке «Гинсана» (Pharmaton, Швейцария) и

«Танакан» (Beaufour Ipsen, Франция) значительно дороже синтетических, что

указывает на актуальность поиска и разработки отечественных ноотропных средств

растительного происхождения, отвечающих требованиям фармакоэкономики с точки зрения эффективности, безопасности и себестоимости курса лечения (Шилова и др., 2005). В этом аспекте значительный интерес представляют виды флоры Сибири - княжик сибирский, лабазник вязолистный и л. обыкновенный, альфредия поникшая и а. снежная, черника обыкновенная, бадан толстолистный. Растения имеют достаточную сырьевую базу или введены в культуру, находят широкое применение в народной медицине в качестве тонизирующих и общеукрепляющих средств, при нервных заболеваниях и показали перспективность в предварительных экспериментальных исследованиях на ноотропную активность. Сведения о химическом составе выбранных видов носят фрагментарный характер, большая часть данных имеет предварительное значение, а для некоторых растений информация отсутствует. Наиболее изучен фенольный комплекс видов рода лабазник, произрастающих в европейской части России и Германии, и бадана толстолистного.

Цель работы. Разработка рациональных научно-методических подходов к поиску источников и созданию эффективных ноотропных средств растительного происхождения на основе изучения химического состава и фармакологической активности растений флоры Сибири.

Для достижения поставленной цели предусматривалось решение следующих задач:

- осуществить отбор видов флоры Сибири, как перспективных источников ноотропных средств, на основе анализа данных литературы, результатов исследования химического состава и фармакологического скрининга;

- исследовать основные группы биологически активных веществ и элементный состав, антиоксидантную и ноотропную активность экстрактов из надземной части княжика сибирского, лабазника вязолистного и л. обыкновенного, альфредии поникшей и а. снежной, побегов черники обыкновенной, листьев бадана толстолистного;

- разработать рациональные способы получения экстрактов из надземной части княжика сибирского, лабазника вязолистного и альфредии поникшей, как наиболее

перспективных источников ноотропных средств, разделить их на фракции, оценить ноотропные и антиоксидантные свойства;

- разработать методические приемы выделения индивидуальных соединений из экстрактов и фракций надземной части княжика сибирского, лабазника вязолистного и альфредии поникшей, обладающих выраженным ноотропным эффектом, и установить их структуру с помощью современных физико-химических методов анализа;

- установить зависимость химическая структура - антиоксидантная, ноотропная активность для выделенных фенольных и тритерпеновых соединений;

- выявить иммунотропный, гепатопротекторный и диуретический эффекты наиболее перспективных источников получения фитопрепаратов ноотропного действия;

- разработать нормативную документацию на лекарственное сырье наиболее перспективных растений и рациональные лекарственные препараты на их основе.

Научная значимость и новизна результатов. Впервые выделены и изучено строение веществ, обуславливающих ноотропную активность княжика сибирского, лабазника вязолистного и альфредии поникшей, - фенолоспирты, гликозиды кверцетина, тритерпеновые спирты, бутиролигнаны, и разработаны лекарственные средства ноотропного действия на их основе. На основании изучения химического состава и фармакологической активности княжика сибирского, лабазника вязолистного и л. обыкновенного, альфредии поникшей и а. снежной, черники обыкновенной, бадана толстолистного предложены рациональные научно-методические подходы к поиску источников и созданию ноотропных средств растительного происхождения, включающие схему выбора рациональных экстрагентов, способы выявления перспективных видов и оценки их ноотропных свойств.

тритерпеновые соединения. Впервые изучен элементный состав вышеуказанных растений, собранных в различных районах Сибири, результаты которого свидетельствуют о возможности использования сырья изученных видов в качестве источников макро- и микроэлементов, включая эссенциальные.

В результате исследований установлено, что экстракты изучаемых растений проявляют антиоксидантную активность, причем наиболее выраженные свойства присущи экстрактам на 70 % и 95 % спирте этиловом, которые по эффекту сравнимы или превосходят дигидрокверцетин и кислоту аскорбиновую.

Впервые установлено, что экстракты исследуемых растений проявляют ноотропные свойства; наиболее выраженная активность присуща экстрактам княжика сибирского на 25 % спирте этиловом, лабазника вязолистного на 70 % спирте этиловом и альфредии поникшей на 95 % спирте этиловом, сопоставимая, а на некоторых моделях превосходящая пирацетам и препарат «Гинсана», и впервые предложены рациональные способы их получения. Выявлено, что наиболее выраженный ноотропный и антиоксидантный эффекты проявляет бутанольная фракция экстракта княжика сибирского. При разделении экстрактов альфредии поникшей и лабазника вязолистного на фракции показано распределение ноотропного эффекта на составляющие, что указывает на специфическое действие суммы БАВ.

В результате изучения химического состава бутанольной фракции княжика сибирского, проявляющей ноотропный эффект, впервые выделены 3,4-дигидроксифенилэтанол-2, 2-(3,4-дигидроксифенил)-этил-0-Р-0-глюкопиранозид, хлорогеновая кислота, сумма гликозидов дигидроксибутановой кислоты, З-О-Р-Б-глюкопиранозид олеаноловой кислоты, изучен состав аминокислот и неорганических компонентов.

Из фармакологически активных фракций лабазника вязолистного впервые получены: флавоноиды (изокверцитрин, 4'-0-Р-Б-галактопиранозид кверцетина), ароматические кислоты и их эфиры (коричная, феруловая, анисовая, этилгаллат). Структура 4'-0-р-0-галактопиранозида кверцетина не описана ранее в литературе. Из активного экстракта альфредии впервые выделены: лигнан (арктиин), флавоноиды (кверцетин, изокверцитрин, рутин), ароматические кислоты (коричная,

ванилиновая и хлорогеновая) и тритерпеновые спирты (а- и р-амирины, моретенол, лупеол).

Экспериментально установлено, что наибольшей антиоксидантной активностью обладают производные фенилэтанола-2, гликозиды кверцетина, бутиролигнан (арктиин) и сумма тритерпеновых спиртов, выделенные из исследуемых растений. Впервые обнаружено, что тритерпеновым спиртам и бутиролигнанам, свойственен выраженный ноотропный эффект, а гликозиды кверцетина различаются по активности в зависимости от структуры.

Показано, что экстракты княжика сибирского, лабазника вязолистного и альфредии поникшей проявляют иммунотропное действие. Впервые выявлена выраженная гепатопротекторная активность экстракта лабазника вязолистного, по ряду показателей превышающая эффективность карсила. Обнаружено, что экстракты альфредии поникшей и княжика сибирского обладают диуретической и салуретической активностью.

Данные химического и фармакологического исследования послужили обоснованием для разработки унифицированных методик качественного обнаружения и количественного определения фенолоспиртов в побегах княжика сибирского, флавоноидов в траве лабазника вязолистного и альфредии поникшей, а также лекарственных формах на их основе. Впервые предложена методика спектрофотометрического определения фенолоспиртов на основе реакции окисления с о-фенантролином и железа (III) хлоридом.

Практическая значимость работы:

На основании изучения химического состава и фармакологического действия экстрактов ряда растений подтверждены рациональные научно-методические подходы к поиску источников и созданию ноотропных средств растительного происхождения.

Установлено, что княжик сибирский, лабазник вязолистный и альфредия поникшая являются перспективными источниками для получения ноотропных фитопрепаратов.

На основании данных фитохимического, фармакологического, морфолого-анатомического и товароведческого анализа разработаны проекты фармакопейных

статей на лекарственное растительное сырье «Княжика сибирского побеги», «Лабазника вязолистного трава», «Альфредии поникшей трава».

На основе сложившихся рациональных научно-методических подходов к поиску источников и созданию ноотропных препаратов растительного происхождения, разработаны эффективные фитопрепараты ноотропного действия, обладающие также иммунотропными, гепатопротекторными и диуретическими свойствами: «Княжика экстракт жидкий», «Княжика экстракт густой» и «Княжика таблетки», «Лабазника экстракт жидкий», «Лабазника экстракт сухой» и «Лабазника таблетки», «Альфредии экстракт жидкий».

■ контроль качества сырья и лекарственных препаратов на основе княжика сибирского предложено проводить по основной группе, обусловливающей активность - фенолоспиртам, методом хроматографии в тонком слое силикагеля с подтверждением характерным УФ-спектром и спектрофотометрическим методом по реакции окисления с о-фенантролином и железа (III) хлоридом соответственно;

■ для травы лабазника вязолистного, альфредии поникшей и лекарственных препаратов на их основе разработаны методики идентификации и количественного определения: хроматография в тонком слое силикагеля с подтверждающим УФ-спектром и метод дифференциальной спектрофотометрии по реакции комплексообразования с алюминия хлоридом в кислой среде флавоноидов (гликозиды кверцетина), проявляющих ноотропные свойства.

Материалы внедрения:

Проекты ФС на лекарственное растительное сырье «Княжика сибирского побеги» и лекарственный препарат «Княжика сибирского экстракт жидкий»

приняты к рассмотрению в ФГБУ «НЦЭСМП» Минздравсоцразвития России (письмо № 297-ЦСЛС от 09.12.2009 г., № 569-ЦСЛС от 14.09.2010 г.) для включения в Государственную фармакопею России XII издания.

Составлены и подготовлены к рассмотрению следующие проекты ФС: на лекарственное растительное сырье «Альфредии поникшей трава», «Лабазника вязолистного трава» и лекарственные средства «Княжика экстракт густой», «Княжика таблетки», «Альфредии экстракт жидкий», «Лабазника экстракт жидкий», «Лабазника экстракт сухой», «Лабазника таблетки».

В рамках требований Фармакологического государственного комитета Минздравсоцразвития РФ подготовлены материалы, характеризующие специфическую ноотропную активность экстрактов княжика сибирского густого, лабазника вязолистного сухого и альфредии поникшей густого, на которые получены заключения о перспективности данных экстрактов, рекомендации для проведения клинических испытаний и внедрения в медицинскую практику от Ученых Советов ГОУ ВПО СибГМУ Рсоздрава (от 30.08.2010 г.) и НИИ фармакологии СО РАМН (от 30.09.2010 г.).

Получены акты апробации технологии экстрактов княжика сибирского жидкого, густого (от 12.01.2009 г., 19.01.2009 г.) и экстракта лабазника вязолистного жидкого, сухого (от 02.02.2009 г., 09.02.2009 г.) на базе ООО «Томская фармацевтическая фабрика».

Результаты диссертационной работы включены в монографию И. В. Шиловой, Н. И. Суслова, И. А. Самылиной «Химический состав и ноотропная активность растений Сибири» и использованы при реализации проектов ФЦП «Интеграция» (№ Е 0144 «Биологические механизмы устойчивости природных популяций интенсивно эксплуатируемых лекарственных растений. Оценка ресурсов лекарственного сырья»), научных разработок Томской области (№ 202 «Разработка нового высокоэффективного ноотропного средства на основе клеточной культуры княжика сибирского»), ФЦП «Исследования и разработка по приоритетным направлениям развития научно-технического комплекса России на 2007-2012 г.» (ГК № 02.512.11.2220 «Создание высокопродуктивной суспензионной культуры

Atragene .чресюза \Veinm. (княжика сибирского) с целью получения веществ ноотропного действия»).

Разработанные методики качественного и количественного анализа действующих веществ в лекарственных препаратах на основе побегов княжика сибирского, травы лабазника вязолистного и альфредии поникшей (экстракты жидкие, сухой и таблетки), включенные в проекты ФС, апробированы на кафедре биологической химии с курсами медицинской, фармацевтической и токсикологической химии Красноярского государственного медицинского университета им. проф. В. Ф. Войно-Ясенецкого и фармацевтической химии Новосибирского государственного медицинского университета.

Приоритет разработанных средств защищен патентами РФ на изобретение: № 2276992, № 2292214, № 2310467, № 2311193, № 2314115, № 2325179, №2347580, №2354397.

Публикации. По результатам исследований опубликовано 109 научных работ, отражающих основное содержание диссертации, из них 1 монография, 8 патентов РФ на изобретение, 29 статей в журналах, рекомендуемых ВАК.

Апробация работы. Результаты проведенных исследований доложены и обсуждены на конференции, посвященной 15-летию НИИ фармакологии «Актуальные проблемы фармакологии и поиска новых лекарственных препаратов» (Томск, 1999), Международной научно-практической конференции «Здоровье и образование в XXI веке» (Москва, 2002, 2003, 2007, 2009), научной конференции, посвященной 50-летию Алтайского государственного медицинского университета «Лекарственные растения в фармакологии и фармации» (Барнаул, 2004), Всероссийской научной конференции «Химия и технология растительных веществ» (Сыктывкар, 2006, Уфа, 2008), Всероссийской научно-практической конференции, посвященной 100-летию со дня рождения профессора Л.Н. Березнеговской «Новые достижения в создании лекарственных средств растительного происхождения» (Томск, 2006), VI Всероссийском научном семинаре с молодежной научной школой «Химия и медицина» (Уфа, 2007), Международном Конгрессе молодых ученых «Науки о человеке» (Томск, 2008),

XV Российском Национальном Конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2008), I и II Российском фитотерапевтическом съезде (Москва, 2008, 2010).

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Работа выполнена в соответствии с планом научных исследований Учреждения РАМН НИИ фармакологии СО РАМН и кафедры фармакологии Сибирского государственного медицинского университета, комплексной целевой программой СО РАМН «Здоровье человека в Сибири» (№ Гос. регистрации 01.9.2002479) и в рамках программы фундаментальных научных исследований государственных академий наук на 2008-2012 гг. «Поиск, создание и изучение механизмов действия фитопрепаратов из растений Сибири и Дальнего Востока и биологических тканей (в т.ч. морепродуктов), обладающих противоязвенной, противоопухолевой, противовоспалительной, антигипоксической, иммунотропной и психотропной активностью» (№ Гос. регистрации 0120.0 601994).

Положения, выносимые на защиту:

Теоретическое и экспериментальное обоснование рациональных подходов к поиску источников ноотропных средств растительного происхождения на основании изучения химического состава и фармакологической активности растений флоры Сибири.

Результаты фитохимического, фармакологического и морфолого-анатомического исследования надземной части княжика сибирского, лабазника вязолистного и альфредии поникшей.

Обоснование возможности использования княжика сибирского, лабазника вязолистного и альфредии поникшей в качестве источников ноотропных средств и разработка фармакопейных статей на новые виды лекарственного растительного сырья «Княжика сибирского побеги», «Лабазника вязолистного трава», «Альфредии поникшей трава» с учетом химического состава и современных принципов стандартизации.

Принципы методических приемов выделения индивидуальных соединений из экстрактов и фракций растений, обладающих выраженным ноотропным эффектом.

Результаты изучения зависимости химическая структура - антиоксидантная, ноотропная активность для фенольных и тритерпеновых соединений, выделенных

из растений, обладающих выраженной ноотропной активностью, как основа создания эффективных ноотропных средств.

Данные по разработке рациональных способов получения наиболее активных экстрактов княжика сибирского, лабазника вязолистного и альфредии поникшей как перспективных ноотропных средств и стандартизации с позиций унификации методик качественного и количественного анализа лекарственных средств «Княжика экстракт жидкий», «Княжика экстракт густой» и «Княжика таблетки», «Лабазника экстракт жидкий», «Лабазника экстракт сухой» и «Лабазника таблетки», «Альфредии экстракт жидкий».

Результаты разработки нормативной документации на растительное сырье и лекарственные средства, содержащие фенолоспирты и флавоноиды.

На основе сложившихся рациональных научно-методических подходов к поиску источников и созданию ноотропных средств растительного происхождения, разработаны эффективные фитопрепараты, обладающие также иммунотропными, гепатопротекторными и диуретическими свойствами.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 322 страницах машинописного текста, иллюстрирована 29 рисунками, 58 таблицами, состоит из введения, 9 глав, выводов и приложения. Список цитируемой литературы включает 320 наименований, из которых 141 на иностранных языках.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Объектами исследования явились: надземная часть княжика сибирского

(Atragene speciosa Weinm.), лабазника вязолистного (Filipéndula ulmaria (L.) Maxim.), л. обыкновенного (Filipéndula vulgaris Moench), альфредии поникшей СAlfredia cernua (L.) Cass.), а. снежной {Alfredia nivea Kar. et Kir.), побеги черники обыкновенной (Vaccinium myrtillus L.), зеленые и черные листья бадана толстолистного (Bergenia crassifolia (L.) Fritsch.), собранные в 1996-2007 гг. в Томской и Кемеровской областях, Алтайском и Красноярском краях, Республиках Горный Алтай, Хакасия и Тыва в разные периоды вегетации; экстракт княжика жидкий и густой, полученные на 25 % этаноле, и таблетки, полученные в лабораторных и заводских условиях, на основе экстракта густого; экстракт

лабазника вязолистного жидкий и сухой, полученные на 70 % этаноле, и таблетки, полученные в лабораторных условиях, на основе экстракта сухого; экстракт альфредии жидкий, полученный на 95 % этаноле.

Качественный и количественный анализ природных соединений исследовали с помощью общепринятых приемов и методов фитохимического анализа. В основу аналитических исследований элементов положен эмиссионный спектральный и нейтронно-активационный анализ, плазменная масс-спектрометрия. Для выделения индивидуальных соединений использовали методы избирательной жидкостной экстракции, адсорбционной колоночной и флэш-хроматографии на полиамиде и силикагеле, хроматографии на бумаге и в тонком слое, хромато-масс-спектрометрии (ГХ/МС), противоточного распределения и дробной кристаллизации. Вещества идентифицировали по температуре плавления, оптическому вращению, методами УФ-спектроскопии с использованием ионизирующих и комплексообразующих реагентов, ИК-, ЯМР 'Н, 13С спектроскопии с применением программ фирмы «Вгикег» для регистрации двумерных спектров HSQC, НМВС, COSY, ROESY и NOESY, масс-спектрометрии.

Фармакологические испытания проведены на 450 беспородных мышах (самцах и самках), 342 мышах (самцах и самках) линии CBA/CaLac, 120 мышах-самцах С57В1/6, в возрасте 2-2,5 месяцев, массой тела 20-22 г; 150 беспородных крысах (самцах и самках) и 178 крысах (самцах и самках) линии Wistar массой тела 180-250 г. Животные 1 категории, конвенциональные линейные мыши и крысы, получены из коллекционного фонда лаборатории экспериментального биологического моделирования Учреждения РАМН НИИ фармакологии СО РАМН (сертификат имеется). Фармакологические испытания выполняли в соответствии с рекомендациями Фармакологического государственного комитета Минздравсоцразвития РФ и включали исследования по оценке безопасности (острая токсичность) и изучению специфической ноотропной активности. Для оценки функционального состояния ЦНС изучали ориентировочно-исследовательское поведение на модели «открытое поле» и эмоциональную реакцию животных; устойчивость к гипоксическому воздействию - в условиях гипоксии гермообъема; влияние на обучение и память - при выработке и

воспроизведении условного рефлекса пассивного избегания (УРПИ); на физическую работоспособность и адаптацию к физическим нагрузкам - в условиях принудительного плавания с утяжеляющим грузом, 10% от массы тела; антистрессорные свойства - на модели «иммобилизационный стресс», аксиолитические и противоневротические - в условиях «конфликтной ситуации», функциональное состояние интегративных механизмов - при выработке и воспроизведении условного питьевого рефлекса в сложном Т-образном лабиринте; экспериментальную ишемию вызывали путем полной перевязки левой сонной артерии и ограничения кровотока в правой на 50 %; тканевую гипоксию -введением нитропруссида натрия. Иммунотропную активность исследовали, определяя показатели гуморального (количество антителообразующих клеток в селезенке - методом локального гемолиза, уровень гемагглготининов в сыворотке крови - в реакции гемагглютинации) и клеточного (реакция гиперчувствительности замедленного типа) иммунного ответа, фагоцитарную активность нейтрофилов периферической крови и перитонеальных макрофагов (в тестах с частицами коллоидной туши и частицами латекса), пролиферативную активность лимфоидных клеток (с солью тетразолия ХТТ) и уровень интерлейкина-2. Гепатопротекторную и антиоксидантную активность изучали на модели токсического гепатита, вызванного четыреххлористым углеродом. Терапевтическую эффективность оценивали по активности маркерных ферментов повреждения печени (аланинаминотрансферазы, аспартатаминотрансферазы) в сыворотке крови, гистологическим показателям печени, содержанию метаболитов ПОЛ (диеновые коньюгаты, гидроперекиси липидов и ТБК-реактивных продуктов) и активности ферментов антиоксидантной защиты (супероксиддисмутазы и каталазы) в ткани печени; функциональное состояние печени - в условиях модели «гексобарбиталовый сон». Влияние на диурез и салурез исследовали путем измерения объема выделенной мочи после предварительной водной нагрузки и определения содержания ионов натрия и калия методом пламенной фотометрии. Антиоксидантную активность изучали методом катодной вольтамперометрии и кинетическим методом на модельной цепной реакции инициированного окисления изопропилбензола. Экспериментальные данные обрабатывали статистически с

использованием I критерия Стьюдента, непараметрического критерия Вилкоксона-Манна-Уитни и метода Фишера для сравнения долей.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Подходы к поиску источников и созданию растительных ноотропных средств

представлены на основании химико-фармакологического исследования экстрактов растений Сибири. В основу скринингового отбора видов положены: анализ данных литературы, результаты исследования химического состава и биологической активности растений.

ИССЛЕДОВАНИЕ ОСНОВНЫХ ГРУПП БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ (БАВ) И ЭЛЕМЕНТНОГО СОСТАВА РАСТЕНИЙ

В ходе исследования выявлены основные группы БАВ отобранных растений,

изучен их состав и определено количественное содержание. Полученные результаты (табл. 1-3) свидетельствуют о наличии во всех объектах представителей простых фенолов, флавоноидов, фенолкарбоновых кислот и тритерпеновых соединений.

Таблица 1 - БАВ надземной части княжика сибирского

Группы БАВ Состав Количественное содержание, %

Фенолоспирты 3,4-дигидроксифенилэтанол-2, 2-(3,4-дигидроксифенил)-этил-0-(3-0-глюкопиранозид 3,24±0,21

Флавоноиды Кемпферол, кверцетин, изокверцитрин 0,26±0,03

Кумарины Скополетин, эскулетин, эскулин, умбеллиферон, скиммин 0,В5±0,10

Органические кислоты Кофейная, хлорогеновая, хинная 3,10±0,33

Дубильные вещества Гидролизуемые и конденсированные 0,56±0,06

Тритерпеновые сапонины Олеаноловая кислота, хедерагенин, витальбозидА 1,00+0,01

Стерииы (3-ситостерин, глюкозид (3-ситостерина #

Алкалоиды Аконитин, дельфинин След. количества

Полисахариды водорастворимые Б-глюкоза, Б-галактоза, Ь-арабиноза, Ь-рамноза, О-ксилоза, О-галактуроновая кислота 0,63+0,05

Каротиноиды + #

Аминокислоты + 2,82+0,01

Примечание: (+) - обнаружение группы БАВ, (#) - определение не проводилось.

Фитохимическое исследование надземной части лабазника обыкновенного

показало присутствие простых фенолов (салигенин, салицин), флавоноидов

(1,72±0,09 %; кверцетин, кемпферол, апигенин, лютеолин, таксифолин,

изокверцитрин, авикулярин, спиреозид, рутин), кумаринов (0,54±0,10 %; кумарин,

умбеллиферон, эскулетин, фраксетин), фенолкарбоновых кислот (4,90±0,47 %;

гентизиновая, ванилиновая, галловая, п-кумаровая, кофейная, хлорогеновая, феруловая), дубильных веществ (3,23±0,36 %; гидролизуемые), тритерпеновых кислот (урсоловая, олеаноловая) и сапонинов, стеринов, водорастворимых полисахаридов (1,47±0,02 %, состоящих из Б-глюкозы, Б-галактозы, глюкуроновой кислоты), каротиноидов и аминокислот (лизин, треонин).

Таблица 2 - БАВ надземной части лабазника вязолистного

Группы БАВ Состав Количественное содержание, %

Простые фенолы Рододендрол, салигенин, салицин #

Флавоноиды Кверцетин, кемпферол, апигенин, лютеолин, таксифолин, изокверштгрин, авикулярин, гиперозид, спиреозид, 4'-0-р-0-галактопиранозид кверцетина, рутин 4,30+0,34

Органические кислоты Бензойная, салициловая, м-гидроксибензойная, анисовая, ванилиновая, галловая и ее этиловый эфир, гентизиновая, коричная, п-кумаровая, кофейная, хлорогеновая, феруловая, хинная 5,66+0,49

Кумарины Эскулетин 2,26*0,11

Дубильные вещества Гидролизуемые, в т. ч. эллаговая кислота 3,98±0,43

Тритерпеновые соединения Урсоловая, олеаноловая кислоты 0,77±0,08

Стерины + #

Полисахариды водорастворимые О-глюкоза, Р-галакгоза, Ь-арабиноза 1,91±0,15

Эфирное масло + #

Каротиноиды + #

Аминокислоты Валин, глутаминовая кислота, гистидин #

Примечание: (+) - обнаружение группы БАВ, (#) - определение не проводилось.

Исследование химического состава побегов черники обыкновенной выявило:

простые фенолы (1,4710,34 %; гидрохинон, рододендрол, рододендрин, арбутин), флавоноиды (0,88±0Д2 %; кверцетин, кемпферол, таксифолин, изокверцитрин, авикулярин, гиперозид, рутин; антоцианы), фенолкарбоновые кислоты (2,14±0,23 %; галловая, ванилиновая, гентизиновая, кофейная, феруловая, хлорогеновая), кумарины (0,44+0,08 %; умбеллиферон, эскулетин, скополетин, фраксетин), дубильные вещества (7,60+0,99 %; гидролизуемые), тритерпеновые соединения (а-амирин, олеаноловая, урсоловая кислоты), стерины (Р-ситостерин), водорастворимые полисахариды (2,34+0,21 %; состоящие из Б-глюкозы, ГУ-галактозы, Ь-рамнозы), каротиноиды, аминокислоты (валин, треонин).

Качественный состав и количественное содержание БАВ надземной части дикорастущей альфредии поникшей (табл. 3) аналогичны таковому

культивируемого (в условиях юга Томской области) растения. Так, количество флавоноидов в культуре составляет 0,83 ±0,09 %, фенолкарбоновых кислот -2,57±0,25 %. Растение, выращенное в условиях открытого участка, накапливает

больше фенолокислот - 5,00±0,84 %, в полутени их содержание снижается до 1,58 ±0,27 %.

_Таблица 3 - БАВ надземной части альфредии поникшей и а. снежной_

Группы БАВ Состав и количественное содержание, %

Апьфредия поникшая Альфредия снежная

Простые фенолы + +

Лигнаны Арктиин +

Флавоноиды Кверцетин, кемпферол, таксифолин, апигенин, лютеолин, изокверцитрин, лютеолин-7-глюкозид, рутин 0,81 ±0,08 Кверцетин, кемпферол, таксифолин, апигенин, изокверцитрин,рутин 0, 8б±0,08

Органические кислоты Бензойная, салициловая, ванилиновая, коричная, кофейная, хлорогеновая, хинная 3,33±0,49 Бензойная, салициловая, ванилиновая, коричная, кофейная, хлорогеновая, хинная 3,37±0,47

Кумарины Эскулетин +

Дубильные вещества След. количества След. количества

Тритерпеновые соединения а- и р-амирин 1,05+0,17 а- и (5-амирин

Стерины (}-ситостерин 3-ситостерин

Полисахариды водорастворимые Б-глюкоза, О-галактоза, Ь-арабиноза, О-глюкуроновая кислота 2,27±0,33 И-глюкоза, Ь-арабиноза, Р-глюкуроновая кислота 2,24±0,28

Каротиноиды + +

Азотсодержащие соединения 13,8±2,5 +

Аминокислоты Аспарагиновая и глутаминовая кислоты, серин, пролин, глицин, аланин, цисгеин, изолейцин, лейцин, тирозин, фенилаланин, валин, гистидин, метионин, лизин, треонин, триптофан 2,97±0,13 Валин, гистидин, метионин, лизин, треонин, триптофан

Примечание: (+) - обнаружение группы БАВ.

Проведенные нами исследования групп БАВ зеленых листьев бадана

толстолистного указывают на присутствие простых фенолов (17,01±0,44 %; гидрохинон, арбутин), флавоноидов (1,75±0,14 %; кверцетин, кемпферол, апигенин, лютеолин, таксифолин, изокверцитрин, рутин), фенолкарбоновых кислот (2,74±0,12 %; галловая, гентизиновая, кофейная, феруловая, хлорогеновая), кумаринов (0,64±0,24 %; бергенин, эскулетин), дубильных веществ (19,35±0,55 %;

смешанной природы), водорастворимых полисахаридов (2,18±0,13 %; состоящих из D-глюкозы, D-галактозы, L-арабинозы), каротиноидов, аминокислот.

С использованием эмиссионного спектрального и нейтронно-активационного методов анализа впервые изучен элементный состав сырья исследуемых видов, собранных в различных районах Сибири (Томской и Кемеровской областях, Алтайском и Красноярском краях, Республиках Горный Алтай, Хакасия и Тыва), результаты которого свидетельствуют о возможности использования растений в качестве источников разнообразных макро- и микроэлементов (калий, кальций, кремний, фосфор, натрий, магний, железо, барий, стронций, цинк, рубидий, бром, марганец, медь, хром, кобальт, литий, лантан, тантал, торий и др.), включая эссенциальные, а также представить видовую специфичность растений по составу элементов, определить территории для сбора, с учетом геохимической обстановки.

АНТИОКСИДАНТНАЯ И НООТРОПНАЯ АКТИВНОСТЬ ЭКСТРАКТОВ РАСТЕНИЙ

Согласно мембранно-синаптической гипотезе памяти, механизм ее

формирования определяется структурно-функциональными изменениями в мембране (Воронина, Середенин, 2007). Вызываемые свободными радикалами поражения в мембране играют важную роль в ряде патологических состояний, на которые ориентировано действие ноотропов. Результаты исследования in vitro показали наиболее выраженные антиоксидантные свойства экстракта зеленых листьев бадана толстолистного (4,649±0,052 мкмоль/л-мин), побегов черники обыкновенной (4,351±0,080 мкмоль/л-мин), надземной части княжика сибирского (1,296+0,045 мкмоль/л-мин) на 70 % этаноле и лабазника вязолистного на 95 % этаноле (1,170±0,051 мкмоль/л-мин), превосходящие по активности дигидрокверцетин (0,650±0,040 мкмоль/л-мин), кислоту аскорбиновую (1,150±0,053 мкмоль/л-мин), за счет полноты экстракции фенольных и тритерпеновых веществ.

Учитывая сущность ноотропного эффекта, для скринингового выявления источников получения фитопрепаратов ноотропного действия нами выбраны модели: гипоксия гермообъема, «открытое поле», выработка и воспроизведение УРПИ после гипоксического воздействия, принудительное плавание с грузом. Скрининговое изучение предложено проводить, начиная исследование действия с

экстрактов на 40 % этаноле в диапазоне доз от 2 до 1000 мг/кг, что определяется извлечением из сырья суммы содержащихся БАВ гидрофильного и липофильного характера. Сравнительную активность водного и водно-эганольных (40 %, 70 %, 95 %) экстрактов растений изучали по вышевыбранным методикам. Экстракты получали методом с использованием нагревания, обеспечивающим наиболее полное истощение растительного сырья при сохранении нативности БАВ. Для выявления групп БАВ, обусловливающих действие, наиболее активные экстракты растений фракционировали рядом растворителей с увеличивающейся полярностью (хлороформом, этилацетатом, бутанолом-1).

Ноотропные, антигипоксические и адаптогенные свойства присущи водному экстракту лабазника обыкновенного в дозе 50 мг/кг, фракционирование которого указывает на эффективность суммы его БАВ фенольной (простые фенолы, флавоноиды, гидроксикумарины, фенолкарбоновые кислоты, дубильные вещества), тритерпеновой (кислоты и сапонины) и углеводной (в т.ч. водорастворимые полисахариды) природы, аминокислот и биоэлементов.

Ноотропные и адаптогенные эффекты характерны для экстракта черники обыкновенной на 70 % этаноле в дозе 200 мг/кг, при разделении которого получена хлороформная фракция, обладающая выраженной антиамнестической и адаптогенной активностью. ГХ/МС анализ фракции показал наличие а-амирина, пальмитиновой кислоты и ее этилового эфира, этилового эфира стеариновой и олеиновой кислот, а-токоферола, хинокиола, скополетина, предельных спиртов, диэтилфталата и моно(2-этилгексил)фталата. Во фракции также обнаружены гидрохинон, рододендрол, феруловая и ванилиновая кислоты, стерины.

Экстракт зеленых листьев бадана толстолистного на 70 % этаноле в дозе 50 мг/кг обладает ноотропной, антигипоксической и адаптогенной активностью, при фракционировании которого установлено, что полная сумма фенольных соединений обусловливает его эффект. Высокой антиоксидантной активностью, сравнимой с таковой [3-ионола, обладают фенольные (гидрохинон, кверцетин, таксифолин, рутин, галловая кислота, эскулетин) компоненты бадана,.

Наиболее выраженной ноотропной активностью характеризуются экстракты княжика сибирского на 25 % этаноле в дозе 100 мг/кг, лабазника вязолистного на

70 % этаноле в дозе 50 мг/кг и альфредии поникшей на 95 % этаноле в дозе 100 мг/кг, превышающей препарат «Гинсана» и соответствующей пирацетаму. Для разработки рациональных способов получения экстрактов применяли методы: с использованием нагревания и противоточной экстракции. Фармакологические исследования показали, что эффекты, вызываемые экстрактами, полученными разными способами, практически равноценны (табл. 4). Однако, выходы экстрактов и временной фактор процесса (напр., для лабазника 19,6±0,3 % и 7,2±0,3 %, 2-3 ч и 10 суток соответственно) существенно отличаются в пользу первого способа. Таким образом, наиболее предпочтительным является способ получения экстракта княжика на 25 % этаноле при соотношении 1:10-1:12, температуре 80 °С, степени измельчения сырья - 2-3 мм в течение 120 мин. Экстракцию сырья лабазника следует осуществлять 70 % этанолом в соотношении 1:18-1:20 при температуре 90 °С и степени измельчения сырья - 1-2 мм в течение 60-90 мин. Сырье альфредии наиболее рационально экстрагировать 95 % этанолом в соотношении 1:20-1:25 при температуре 80-90 "С и степени измельчения сырья - 2 мм в течение 90-120 мин. При оптимизации процесса получения экстрактов решающим является температурный фактор и соотношение сырье:экстрагент.

Таблица 4 - Влияние экстрактов лабазника вязолистного на 70 % этаноле, на сохранность УРПИ после гипоксической травмы, физическую работоспособность

и адаптацию к ( Физически нагрузкам (X ±т п= 10)

Группа наблюдения, доза Доля животных с наличием рефлекса при проверке на 14 сутки после гипоксии, % Продолжительность плавания, с

2 день 4 день

Интактный контроль 90 93,5±8,9 111,3+9,2

Гипоксический контроль 10* - -

Экстракт, полученный методом противоточной экстракции, 50 мг/кг 80" 117,9+9,3* 157,4+14,7*

Экстракт, полученный методом с использованием нагревания, 50 мг/кг 80* 128,0+10,2* 165,5±15,2*

Примечание: * - различия достоверны в отношении интактного контроля (р<0,05); - различия достоверны в отношении гипоксического контроля (р<0,05).

Экстракт княжика оказывает незначительное влияние на поведение нормальных животных только в больших дозах, улучшает ориентировочно-исследовательское поведение и условно-рефлекторную деятельность при их нарушении, увеличивает работоспособность в первые дни адаптации к физическим нагрузкам. При экспериментальной ишемии мозга экстракт улучшает выработку условного рефлекса и снижает количество рефлекторных реакций (табл. 5).

В условиях конфликтной ситуации экстракт проявляет анксиолитическое действие, незначительно уступая по активности феназепаму и превосходя пирацетам, при отсутствии депримирующего и психостимулирующего эффектов. При фракционировании экстракта получена бутанольная фракция, обладающая выраженным ноотропным и антиоксидантным эффектом.

Таблица 5 - Влияние экстракта княжика сибирского на выработку условного питьевого рефлекса у крыс с экспериментальной ишемией мозга (X ± т _ п=8)

Группа наблюдения, доза Время достижения поилки, с Количество вертикальных стоек Число ошибок Груминг Невротические реакции

Интактный контроль 52±12 1,4±0,5 2,0±0,6 1,7±0,6 0,08±0,03

Контроль-ишемия 369+45* р<0,01 3,5+1,4 3,5±0,7 4,8±1,1* р<0,05 0,55±0,8* р<0,001

Экстракт, 100 мг/кг 48+6* р<0,05 1,5+0,6 0,5+0,3" р<0,05 1,3+0,4* р<0,05 0,05+0,01" р<0,001

Пирацетам, 400 мг/кг 69±9** р<0,05 1,3+0,5 0,5+0,3" р<0,05 1,5±0,6* р<0,05 0,12±0,04* р<0,01

Примечания: * - различия достоверны в отношении интактного контроля, - различия достоверны в отношении ишемического контроля.

Экстракт лабазника вязолистного улучшает ориентировочно-исследовательское поведение, условно-рефлекторную деятельность животных после гипоксического воздействия и в условиях экспериментальной кофеиновой интоксикации, обладает выраженными антистрессорными и противоневротическими свойствами, увеличивает работоспособность животных в процессе адаптации к физическим нагрузкам, начиная с первых дней наблюдения (табл. 4). Экстракту растения присущи умеренные транквилизирующие свойства, уступающие по силе эффекта феназепаму и пирацетаму. В то же время экстракт лабазника улучшает интегративные показатели мозговой деятельности нормальных животных. При разделении экстракта выявили выраженную антиамнестическую активность этилацетатной фракции; адаптогенные, антигипоксические и антиоксидантные свойства в максимальной степени присущи хлороформной фракции.

Экстракт альфредии поникшей улучшает показатели условно-рефлекторной деятельности и эксплоративного поведения животных после перенесенного гипоксического воздействия и конфликтной ситуации; обладает выраженным анксиолитичексим действием (табл. 6), превосходящим пирацетам, но уступающим

феназепаму, наряду с отсутствием побочных эффектов указанных препаратов, а также проявляет выраженные антисгрессорные и противоневротические свойства. При этом экстракт альфредии не оказывает существенного влияния на поведение нормальных животных, способствует увеличению физической работоспособности. При фракционировании экстракта обнаружили рассредоточение ноотропного эффекта на составные части: хлороформная фракция проявляет выраженную антигипоксическую, антиоксидантную и анксиолитическую активность, а антиамнестические свойства в наибольшей степени присущи водному остатку и бутанольной фракции.

Таблица 6 - Влияние экстракта альфредии поникшей на поведение крыс в условиях конфликтной ситуации (Х±т п=10)

Группа наблюдения, доза Суммарная двигательная активность Время замирания, с Число подходов к поилке Число наказуемых взятий воды

Контроль 80,7±7,9 3,2±0,9 7,8+1,7 8,2+0,9

Экстракт, 100 мг/кг 133,5+9,1* р<0,001 11 «чг 19,0+2,3* р<0,001 15,1+2,0* р<0,02

Пирацетам, 400 мг/кг 140,6±10,2* р<0,001 1,7+0,9 14,2+2,7* р<0,05 12,5±1,9* р<0,05

Феназепам, 1 мг/кг 59,8+12,6 7,2±0,8* р<0,05 22,5+3,5* р<0,01 19,2±3,1* р<0,01

Примечания: * - различия достоверны по отношению к контролю.

Экстракты надземной части культивируемой альфредии поникшей, альфредии снежной на 95 % этаноле проявляют равноценную ноотропную активность, с незначительным преимуществом экстракта дикорастущего растения по влиянию на сохранность рефлекса.

ДРУГИЕ ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИЕ ЭФФЕКТЫ НАИБОЛЕЕ ПЕРСПЕКТИВНЫХ ИСТОЧНИКОВ ПОЛУЧЕНИЯ ФИТОПРЕПАРАТОВ НООТРОПНОГО ДЕЙСТВИЯ

В одном лекарственном средстве растительного происхождения может быть

реализовано несколько основных направлений этиопатогенетической и симптоматической терапии за счет комплексного фармакологического воздействия, поэтому нами исследованы иммунотропный, гепатопротекторный и диуретический эффекты наиболее перспективных экстрактов растений.

Экстракт княжика сибирского на 25 % этаноле в дозе 100 мг/кг проявляет иммунотропное действие, обусловленное стимуляцией макрофагального звена, активацией процессов пролиферации лимфоидных клеток и

противовоспалительными свойствами. Экстракт альфредии поникшей на 95 % этаноле в дозе 100 мг/кг оказывает влияние на гуморальный иммунный ответ путем стимуляции образования антителопродуцирующих клеток в селезенке. Наиболее выраженное действие обнаруживает экстракт лабазника вязолистного на 70 % этаноле в дозе 50 мг/кг, влияя на специфический гуморальный ответ и неспецифическую резистентность организма, превосходя по активности настойку эхинацеи пурпурной. Экстракт обладает выраженной противовоспалительной активностью, снижая синтез интерлейкина-2 спленоцитами и угнетая продукцию провоспалительных цитокинов в реакции гиперчувствительности замедленного типа; в дозах 10, 50, 150 и 500 мг/кг стимулирует индуктивную и продуктивную фазы гуморального иммунного ответа у мышей СВА/СаЬас и С57В1/6, не проявляя иммунотоксического действия.

На модели токсического ССЦ-гепатита выявлена выраженная гепатопротекторная активность экстракта лабазника вязолистного на 70 % этаноле в дозе 100 мг/кг, его этилацетатной и хлороформной фракций, превышающая по ряду показателей эффективность карсила, что обусловлено активацией внутриклеточных регенераторных процессов и нормализацией гистологических, метаболических показателей печени, антиоксидантными и мембраностабилизирующими свойствами.

Экстракт княжика сибирского на 25 % этаноле в дозе 100 мг/кг оказывает стимулирующее действие на экскреторную функцию почек, особенно выраженное в отношении ионов натрия. Выявлено отсутствие статистически достоверного влияния на диурез и салурез экстракта лабазника вязолистного на 70 % этаноле в дозе 50 мг/кг. Экстракт альфредии поникшей на 95 % этаноле в дозе 100 мг/кг проявляет выраженную диуретическую и салуретическую активность.

ИЗУЧЕНИЕ ЗАВИСИМОСТИ ХИМИЧЕСКАЯ СТРУКТУРА - АНТИОКСИДАНТНАЯ И НООТРОПНАЯ АКТИВНОСТЬ ДЛЯ ФЕНОЛЬНЫХ И ТРИТЕРПЕНОВЫХ ВЕЩЕСТВ

Наибольшей антиоксидантной активностью обладает 3,4-

дигидроксифенилэтанол-2 и флавоноиды (изокверцитрин, 4'-глюкозид и 4'-галактозид кверцетина, рутин) в гидрофильных и липофильных средах (табл. 7). Результаты исследования показывают высокую активность гликозидов флавонолов

в сравнении с образцом агликона в гидрофильных средах. Замещение глюкозой по 4-положению снижает активность по сравнению с таковым по С-3 агликона, также как и образование биозида по 3-положению. На активность, судя по экспериментальным данным, оказывают влияние свойства углеводного заместителя. В порядке уменьшения активности далее следует бутиролигнан (арктиин) и фенолкарбоновые кислоты, уступающие по эффективности флавоноидам и гидроксикумарину. Среди фенолокислот наибольшей активностью обладают производные коричной кислоты (простые фенилпропаноиды). Тритерпеновые соединения проявляют менее выраженную антиоксидантную активность, однако, сравнимую с таковой анализируемых фенолокислот. Так, антиоксидантный эффект тритерпеновых кислот составляет 49-50 % от такового Р-ионола, а сумма тритерпеновых спиртов альфредии превосходит по эффективности Р-ионол в 1,7 раза.

Таблица 7 - Антиоксидантная активность фенольиых и тритерпеновых соединений _по отношению к процессу электровосстановления кислорода _

№ п/п Образец К, мкмоль/ л-мин № п/п Образец К, мкмоль/ лмин

1. 3,4-Дигидроксифенил-этанол-2 2,579+0,007 13. Этилгаллат 0,169+0,002

2. Кверцетин 0,140±0,002 14. Салициловая кислота 0,136±0,002

3. Изокверцитрин 2,287+0,005 15. Коричная кислота 1,862±0,003

4. Изокверцитрин* 9,739+0,005 16. Феруловая кислота 0,831+0,005

5. 4'-глюкозид кверцетина 2,222+0,004 17. Эскулегтин 1,648 ±0,003

6. Рутин 1,889±0,004 18. Сумма тритерпеновых спиртов* 5,925+0,008

7. Рутин* 9,051+0,007 19. ОВ-2* 1,749+0,005

8. Сумма изокверцитрин: 4'-галактозид кверцетина (5:7) 1,393+0,004 20. Олеаноловая кислота* 1,702+0,003

9. Авикулярин 0,655+0,004 21. Урсоловая кислота* 1,656+0,004

10. Арктиин 1,340+0,009 22. Дигидрокверцетин 0,540±0,006

11. Арктиин* 6,696+0,009 23. Аскорбиновая кислота 1,025±0,003

12. Галловая кислота 0,149+0,002 24. Р-Ионол* 3,405±0,003

Примечание: * - исследование выполнено в среде ДМФА. К - кинетический критерий антиоксидантной активности.

Фенольные соединения (изокверцитрин, рутин, арктиин) не проявляют

существенного воздействия на эксплоративное поведение. Влияние же на указанные показатели тритерпеновых соединений является неодинаковым и, вероятно, зависит от их структуры: сумма тритерпеновых спиртов (а-амирин, Р-амирин, моретенол, лупеол) не оказывает влияния на изучаемое поведение, а ОВ-2

достоверно снижает двигательную активность нормальных животных. Наиболее выраженным положительным влиянием на память обладает ОВ-2, высокая активность характерна для тритерпеновых спиртов, арктиина и изокверцитрина. Наименьшим антиамнестическим действием характеризуется рутин (табл. 8). Таблица 8 - Влияние фенольных и тритерпеновых соединений на двигательную активность

в «открытом поле», выработку и сохранность УРПИ у мышей после гипоксии (X ± т п=10)

Группа наблюдения, доза Суммарная двигательная активность через 30 мин Латентное время захода в темный отсек при выработке рефлекса, с Доля животных с сохранившимся рефлексом при проверке, %

48 ч 1 7 сут 1 14 сут | 21 сут после выработки

Интактный контроль 87,0+5,9* р<0,001 38,9+6,4* р<0,01 90* р<0,05 90* р<0,05 80* р<0,05 80* р<0,05

Гипоксический контроль 46,7±8,1 12,7±3,0 30 20 20 10

Сумма тритерпеновых спиртов, 7,0 мг/кг 33,0±10,7 28,7±5,2* р<0,05 100* р<0,05 90* р<0,05 80* р<0,05 70* р<0,05

ОВ-2,0,3 мг/кг 34,6±15,7 23,0+6,3 90* р<0,05 90* р<0,05 80* р<0,05 90* р<0,05

Изокверцитрин, 1,0 мг/кг 40,1+14,0 17,9+1,9 90* р<0,05 90* р<0,05 70* р<0,05 70* р<0,05

Рутин, 1,0 мг/кг 31,9±7,8 15,6±3,7 90* р<0,05 60 40 40

Арктиин, 1,0 мг/кг 34,3±12,8 24,8±5,1* р<0,05 90* р<0,05 90* р<0,05 80* р<0,05 70* р<0,05

Примечание: * - различия достоверны в отношении гипоксического контроля.

Таким образом, тритерпеновым соединениям и лигнанам (в меньшей степени), свойственен выраженный ноотропный эффект, флавоноиды различаются по активности в зависимости от структуры.

РАЗДЕЛЕНИЕ ЭКСТРАКТОВ И ФРАКЦИЙ РАСТЕНИЙ, ОБЛАДАЮЩИХ ВЫРАЖЕННЫМ НООТРОПНЫМ ЭФФЕКТОМ. ВЫДЕЛЕНИЕ ИНДИВИДУАЛЬНЫХ СОЕДИНЕНИЙ И УСТАНОВЛЕНИЕ ИХ СТРУКТУРЫ Княжик сибирский

В фармакологически активной бутанольной фракции княжика сибирского выявили наличие фенольных соединений: фенолоспирты и их гликозиды, флавоноиды (кверцетин, кемпферол, изокверцитрин), фенолокислоты (кофейная, хлорогеновая), кумарины (скополетпн, эскулетин, эскулин, умбеллиферон, скиммин) и дубильные вещества смешанной природы; а также тритерпеновые сапонины, аминокислоты и неорганические компоненты с преобладанием магния, железа и меди. В состав фракции входят семь свободных аминокислот (0,33 %), включая незаменимые (треонин, валин, изолейцин, гистидин) и доминирующие

(пролин и изолейцин). Для очистки от неорганических компонентов (2,4 %) бутанольную фракцию обрабатывали ацетоном. Выпавший осадок отделяли, а из сконцентрированного раствора проводили выделение фенольных соединений методом колоночной хроматографии на полиамиде, получив при элюировании смесью хлороформ-метанол 98:2,95:5 и 93:7 вещества 1-3 соответственно.

Вещество 1 - стекловидная масса желтоватого цвета (30 мг). УФ-спектр (СНзОН), К ах, им; 220, 280. Вещество 2 — стекловидная масса, желтоватого цвета (20 мг), [а ]" - 30,50° (с 2,55, метанол). УФ-спектр (СН3ОН), нм: 225,282. При кислотном гидролизе расщепляется на вещество 1 и D-глюкозу. ИК-спектры (КВг, Vmaw см"1): 1530, 1610 (С6Н6), 3400 (ОН). Данные ЯМР *Н спектров подтверждаются характеристикой ЯМР 13С соединений 1 и 2 (табл. 9). В ЯМР 'Н спектре вещества 2 дополнительно обнаружен дублет Н-1' glc с J=7,9 Гц при 4,30 м.д. и мультиплет Н-2', 3', 4', 5', 6'а, 6'в, 8в при 3,20-3,90 м.д., что характерно для D-глюкозы, образующей гликозидную связь по CHi-CHi-OH боковой цепи. Соединение 1 идентифицировали как 3,4-дигидроксифенилэтанол-2, 2 - 2-(3,4-дигидроксифенил)-этил-0^-0-глюкопиранозид.

Таблица 9 - ЯМР 'Н (сЦ-СНзОН, 500,13 МГц, 5, м.д.) и ЯМР |3С (с^-СНзОН, 125,76 МГц, 8, м.д.) __характеристика вещества 1 и 2 княжика сибирского_

Атом Химические сдвиги (м.д.); КССВ (Гц)

С [ 'Н С | 'Н

Вещество 1 Вещество 2

1 130,6 - 131,6 -

2 130,9 6,69 д. (2,0) 116,4 6,70 д. (2,0)

3 116,2 - 146,1 -

4 156,7 - 144,7 -

5 116,2 6,68 д. (8,0) 117,2 6,68 д. (8,1)

6 130,9 6,55 д.д. (8,1; 2,0) 121,3 6,54 д.д. (8,1; 2,0)

7 36,5 2,78 м. 36,6 2,77 м.

8 72,1 4,05 м. 72,1 4,02 м.

Вещество 3 - белые кристаллы (10 мг), т. пл. 203-205 °С (вода). УФ-спектр (С2Н5ОН), Хтах, нм: 243, (300), 330. ИК-спектр (КВг), утах, см"1: 1523, 1605 (СбН6), 1690 (С=0 сл. эф.), 1706 (СООН), 3443, 3481 (ОН). В продуктах щелочного гидролиза - кофейная и О-хинная кислоты. Химические сдвиги атомов 'Н совпадают с таковыми для З-кофеил-О-хинной кислоты (хлорогеновой).

Выделение неорганических компонентов осуществляли хроматографией на колонке с силанизированным силикагелем и элюировании водой, получили сумму

доминирующих элементов: Na>Fe>Ba>Ct>Br>Sb>Rb>La>Co>Ce>Th>Hf>Au,Sc. Во фракцию, в большем количестве относительно надземной части растения, экстрагируется натрия, сурьмы, хрома и брома.

Для исследования фракции хлороформ-метанол-вода 70:23:1, полученной при разделении ацетоновой фракции, применяли колоночную хроматографию на силикагеле. В результате выделили 20 мг бесцветной стекловидной массы, содержащей, по данным хроматографии в тонком слое силикагеля, два близких по структуре вещества 4 и 5, относящихся к одной группе соединений, с Rf 0,18 и 0,27 (хлороформ-метанол-вода 63:23:3), 0,21 и 0,30 (бутанол-1-этанол-вода 10:2:4). На основании данных хроматографического анализа, результатов кислотного и щелочного гидролиза, ИК-, ЯМР 'Н спектральных характеристик вещества 4 и 5 охарактеризованы как гликозиды дигидроксибугановой кислоты.

Гидролиз суммы тритерпеновых гликозидов ацетоновой фракции, полученной перколяцией водой на колонке с дезактивированным алюминия оксидом, привел к получению олеаноловой кислоты и хедерагенина, что свидетельствует о принадлежности гликозидов княжика к олеанановому ряду. Для выделения индивидуальных гликозидов из их суммы использовали колоночную хроматографию на силикагеле. При элюировании системой растворителей хлороформ-метанол 97:3 получили вещество 6 - бесцветные кристаллы (10 мг), т. пл. 255-256 °С (метанол), [а]™ + 54° (с 2,23, метанол). На основании физических констант, хроматографического поведения, результатов кислотного и щелочного гидролиза, ИК-спектра сапогенина вещество 6 идентифицировали как 3-0-J3-D-глюкопиранозид олеаноловой кислоты (витальбозид А, андросептозид А).

Лабазник вязолистный

Исследование хлороформной фракции экстракта на 70 % этаноле выявило наличие стеринов, тритерпеновых соединений, простых фенолов (рододендрола, салицина), ароматических кислот (м-гидроксибензойной, ванилиновой), флавоноидов (кверцетина, кемпферола, апигенина, лютеолина, таксифолина) и неорганических компонентов. ГХ/МС анализ фракции дополнительно показал наличие о-ксилола (0,73 %), бензойной кислоты (0,51 %), салигенина (0,52 %), салициловой кислоты (2,39 %), анисового спирта (0,74 %), анисовой кислоты

(6,28 %), 1-(4-гидроксифенил)-2-метил-1-пропанона (0,12 %), кониферилового спирта (0,81 %), феруловой кислоты (0,1 %), 3-оксо-а-ионола (4-(3-гидрокси-1-бутенил)-3,5,5-триметил-2-циклогексен-1-он, 0,24 %), дигидроактинидиолида (4,4,7а-триметил-5,6,7,7а-тетрагидро-2(4Н)-бензофуранон, 0,28 %), пальмитиновой кислоты (2,49 %) и её этилового эфира (1,12 %), линолевой (0,69 %) и а-линоленовой кислот (1,07 %), Р-амирина (0,19 %), диэтилфталата (69,88 %), диизооктилфталата (0,4 %), фитола и его изомеров (1,36 %,), алканов - сумму генеикозана и трикозана (0,45 %), а также пентакозана (0,31 %).

При разделении фракции методом флэш-хроматографии на силикагеле и элюировании смесью гексан-хлороформ 6:4 получили вещество 1 - игольчатые кристаллы белого цвета (20 мг), СвНвОз, т. пл. 150-152 "С (возг.) (этанол-гексан 1:3). УФ-спектр (СН3ОН), Х,тх, нм: 218, 252. ИК-спектр (КВг), V«,, см"1: 1539, 1603 (СбНв), 1650 (аромат. С=0), 1689 (С=0 кислоты), 2848 (ОСН3 аром.), 2916, 2965 (СН3, СН), 3443 (ОН). Масс-спектр, т/г, ЭУ, 70 еУ: 152 (М+), 135,119, 107,92. ЯМР 'Н спектр фМБО-си 5, м.д.: 8,05 (е.; Н-2, Н-6), 6,94 (е.; Н-3, Н-5), 3,86 (е.; ЗН). Вещество идентифицировали как 4-метоксибензойная кислота (анисовая).

Рехроматографией на колонке с силикагелем из фракции, полученной системой гексан-хлороформ 6:4—>2:8, выделили вещества 2 (белый мелкокристаллический порошок (17 мг), т. пл. 302-304 °С (метанол); ЯМР 'Н спектр (ОМБО-сУ, 5, м.д.; 1, Гц: 3,24 (дд„ 12,4 Гц, 1Н, Н-3), 5,42 (т., 1Н, Н-12), 3,20 (уш. дд., 14,4 Гц, 1Н, Н-18), 1,26 (е., 6Н, Н-23), 1,09 (е., 6Н, Н-24), 0,88 (е., ЗН, Н-25), 1,09 (е., ЗН, Н-26), 1,26 (е., ЗН, Н-27), 0,91 (е., ЗН, Н-29), 0,90 (е., ЗН, Н-30); Зр-гидроксиолеан-12-ен-28-овая кислота, олеаноловая) и 3 (белый мелкокристаллический порошок (10 мг), т. пл. 284-285 °С (этанол); ИК-спектр (КВг), угаах, см"1: 670, 1270 (г/ис-тризамещенная С=С), 1182, 1109, 1138 (ОН), 1270, 1310, 1321, 1342, 1403 (СН3, СН2, СН), 1637 (С=С, цис), 1690 (С=0 кислоты), 2871, 2930, 2965 (СН3, СН2, СН), 3446 (ОН); ЯМР 'Н спектр совпадает с таковым для Зр-гидроксиурс-12-ен-28-овой кислоты, урсоловой).

В этилацетатной фракции экстракта лабазника обнаружены: простые фенолы (рододендрол, салигенин, салицин), флавоноиды (кверцетин, кемпферол, апигенин, таксифолин, гиперозид), ароматические кислоты (бензойная, ванилиновая,

гентизиновая, галловая, эллаговая, п-кумаровая, кофейная, феруловая, хлорогеновая), кумарины, дубильные вещества (преимущественно, гидролизуемой группы), тритерпеновые соединения (олеаноловая кислота) и неорганические компоненты.

Разделение фракции осуществляли с помощью флэш-хроматографии на полиамиде. Сумму фенолкарбоновых кислот и гидроксикумаринов, элюированных смесью хлороформ-метанол 8:2, рехроматографировали на силикагеле и выделили вещество 4 (белые игольчатые кристаллы (20 мг), т. пл. 154-156 °С (бензол); УФ-спектр (СН3ОН), Кэх, нм: 231, 300; масс-спектр, m/z, ЭУ, 70 eV: 138 (М+); салициловая кислота) и 5 (белые кристаллы (8 мг), т. пл. 169-170 °С (этанол-вода 1:5); УФ-спектр (С2Н5ОН), А™,, нм: 239, (298), 322; масс-спектр, m/z, ЭУ, 70 eV: 194 (М+); З-метокси-4-гидроксикоричная кислота, феруловая кислота), 6 (белый мелкокристаллический порошок (30 мг), С9Н10О5, т. пл. 159-160 °С (хлороформ); УФ-спектр (СНзОН), Х^, нм: 222, 275; масс-спектр, m/z, ЭУ, 70 eV: 198 (М+), 183 (М-15), 170 (М-28), 153 (М-45, ОС2Н5), 125 (М-73, СООС2Н5), 107 (125-18, Н20); этилгаллат) и 7 (бесцветные игольчатые кристаллы (8 мг), т. пл. 270-271 °С (этанол-вода 1:4); УФ-спектр (С2Н5ОН), нм: 265, (306), 355; (+CH3COONa): 270; ИК-спектр (KBr), vmal, см"1: 1592, 1625 (СвН6), 1716 (С=0 а-пирона), 3446 (ОН); 6,7-дигидроксикумарин, эскулетин) соответственно.

Фенольные соединения фракции, вьщеленные смесью хлороформ-метанол 6:4, разделяли методом колоночной хроматографии на силикагеле и получили вещества 8 (лимонно-желтые кристаллы (60 мг), т. пл. 312-313 °С (этанол-хлороформ 1:20); УФ-спектр (С2Н3ОН), нм: 255, (295), (317), 372; кверцетин) и 9 (белые игольчатые кристаллы (120 мг), т. пл. 238-240 °С (возг.) (метанол-хлороформ 1:20); УФ-спектр (СН3ОН), нм: 218, 271; ИК-спектр (KBr), vm„, см"1: 1543, 1615 (CeHe), 1650 (аромат. С=0), 1680 (СООН), 3277, 3500 (ОН); масс-спектр, m/z, ЭУ, 70 eV: 170 (М+); галловая кислота), 10 (желтые кристаллы (30 мг), т. пл. 208-210 °С (метанол-хлороформ-гексан 1:1:1,5); УФ-спектр (СН3ОН), Xm«, нм: 257, 356; в продуктах кислотного гидролиза - кверцетин и L-арабиноза; ИК- и ЯМР 'н спектры характерны для З-О-а-арабофуранозида кверцетинаа, авикулярина) и 1,92 г кристаллической смеси соединений 11, 12 соотношении 7:5. Разделение

веществ осуществлено применением метода противоточного распределения в системе растворителей хлороформ-метанол-бутанол-1-вода (10:10:1:6). Из верхней фазы системы нами получено вещество 11 - желтый мелкокристаллический порошок, т. пл. 217-218 °С (этанол), [а] о - 56,60 ° (с 0,53, этанол). УФ-спектр (С2Н5ОН), нм: 254, (264), 364. ИК-спектр (КВг), ут1Х, см"1: 1009, 1040, 1088 (пиранозное кольцо), 1261 (С-О-С), 1513, 1558, 1610 (СбВД, 1659 (аромат. С=0 у-пиронового цикла), 3382 (ОН). ЯМР 'Н спектр (ОМБО-с16), 5, м.д.; I, Гц: 6,20 (д., 2,0 Гц, 1Н, Н-6), 6,45 (д., 2,0 Гц, 1Н, Н-8), 7,70 (д., 2,0 Гц, 1Н, Н-2'), 7,26 (д., 9,0 Гц, 1Н, Н-5'), 7,62 (дд„ 9,0 Гц, 2,0 Гц, 1Н, Н-6'), 5,70 (д.; 8,0 Гц, 1Н, Н-1"). ЯМР 13С спектр (0М80-с16), 5, м.д.: 146,8 с (С-2), 136,5 с (С-3), 170,1 с (С-4), 103,2 с (С-4а), 160,7 с (С-5), 98,3 д (С-6), 164,1 с (С-7), 93,6 д (С-8), 156,3 с (С-8а), 125,1 с (С-1), 116,0 д (С-2), 146,0 с (С-3'), 146,4 с (С-4), 115,2 д (С-5'), 119,6 д (С-6), 101,8 (С-1"), 75,88 (С-2"), 73,2 (С-3"), 71,2 (С-4"), 68,0 (С-5"), 60,7 (С-6"). Таким образом, на основании физических, спектральных и хроматографических данных вещество 11 - 4'-0-Р-0-галактопиранозид кверцетина, информация о нахождении которого в растениях в литературе нами не найдена.

Вещество 12 - ярко-желтый мелкокристаллический порошок, т. пл. 238-239 °С (этанол-ацетон 1:20). УФ-спектр (С2Н5ОН), А^х, нм: 257, (303), 363. ИК-спектр (КВг), утах, см4: 1019, 1059, 1080, 1088 (пиранозное кольцо), 1267 (С-О-С), 1503, 1566, 1606 (СбНб), 1657 (аромат. С=0 у-пиронового цикла), 3346 (ОН). В продуктах кислотного гидролиза обнаружили кверцетин и Э-глюкозу. В спектре НМВС сигнал атома С-3 (133,4 м. д.) имеет кросс-пик с аномерным протоном молекулы глюкозы (5,46 м. д.). Вещество идентифицировали с З-О-Р-Б-глюкопиранозидом кверцетина (изокверцитрином).

В бутанольной фракции экстракта лабазника выявлено наличие флавоноидов, фенолкарбоновых кислот (гентизиновая, п-кумаровая, кофейная, хлорогеновая), кумаринов (след. количества), дубильных веществ гидролизуемой группы, аминокислот (в т. ч. валина, гистидина), углеводов (О-глюкоза, Р-галактоза, Ь-арабиноза) и неорганических компонентов. Разделение фракции проводили методом флэш-хроматографии на полиамиде с последующей рехроматографией на силикагеле. В результате получили 0,21 г галловой кислоты,

50 мг изокверцитрина, вещества 13 и 14 (светло-желтый мелкокристаллический порошок (31 мг), т. пл. 198-200 °С (вода); УФ-спектр (С2Н5ОН), нм:257, (300), 361; кислотный гидролиз - кверцетин, D-глюкоза и L-рамноза; химические сдвиги углеродных атомов 13С совпадают с таковыми для рутина), 15 (бесцветные игольчатые кристаллы со специфическим запахом (3 мг), т. пл. 120-122 °С (ацетон-гексан 1:20); УФ-спектр (С2Н5ОН), А™*, нм: 222, 293; масс-спектр, m/z, ЭУ, 70 eV: 148 (М+); коричная кислота), 16 (желтые кристаллы (6 мг), т. пл. 278-279 °С (метанол); УФ-спектр (С2Н5ОН), нм: (254), 267, (296), (320), 365;

(+CH3COONa): 269, 380; (+А1С13): 270, 420; (+C2H5ONa): 278, 414; кемпферол) и 20 мг кверцетина.

Вещество 13 - светло-желтый мелкокристаллический порошок (20 мг), т. пл. 228-230 °С (хлороформ-метанол-бутанол-1-вода (10:10:1:6) из верхней фазы). УФ-спектр (С2Н5ОН), а™,, нм: 256, (266), 366. ИК-спектр (КВг), vmal, см"1: 1011, 1022, 1047, 1090, 1138 (пиранозное кольцо), 1234, 1253 (С-О-С), 1507, 1517, 1558, 1599, 1618 (СбН«), 1656 (аромат. С=0 у-пироиового цикла), 3354, 3523 (ОН). Кислотный гидролиз показал наличие кверцетина и D-глюкозы. В спектре НМВС сигнал аномерного протона молекулы глюкозы (4,85 м. д.) имеет кросс-пик с углеродным атомом С-4' (146,8 м. д.). Вещество - 4'-0-р-0-глюкопиранозид кверцетина (спиреозид).

R Ri

8 Н Н

10 Н a-L-Araf

11 ß-D-Galp Н

12 Н ß-D-Glup

13 ß-D-Glup Н

14 ß-D-Glup-a-L-Rhap Н

ОН

В фармакологически активный экстракт лабазника, преимущественно, извлекается бром, кобальт, сурьма, хром и гафний. В хлороформную фракцию переходит железо, кальций, хром, гафний и самарий, а в этилацетатную - кальций, хром, железо, самарий, цинк, лантан, церий, гафний, натрий, торий и скандий.

Альфредия поникшая

В хлороформной фракции экстракта обнаружены стерины (р-ситостерин), тритерпеновые соединения, гидроксикумарины (эскулетин), ароматические

кислоты (ванилиновая). ГХ/МС анализ дополнительно выявил присутствие сильвестрена (1-метил-5-(1-метилэтенил)-циклогексен, 0,02 %), фенилэтилена (0,62%,), бензилового (0,05 %) и кониферилового (1,11 %) спиртов, ванилина (0,19 %), сиреневого альдегида (0,15 %), бензойной (0,07 %), салициловой (0,46 %) и галловой (0,41 %) кислот, этилсалицилата (0,1 %), диэтилфталата (9,59 %), моно(2-этилгексил)фталата (3,56 %), дигидроактинидиолида (0,06 %), пентакозана (0,37 %), фитола и его изомеров (4,96 %), пальмитиновой (3,59 %), линолевоЙ (1,04 %), а-линоленовой (0,94 %) кислот, ß-амирина (10,9 %) и его ацетата (5,5 %).

Выделение фенольных и тритерпеновых соединений проводили методом колоночной хроматографии на силикагеле. При элюировании хлороформом получили, по данным ГХ/МС (рис. 1), сумму четырех близких по структуре веществ тритерпеновой структуры (98,54 %, tr 53,58-66,96 мин) с (М+) 426 (m/z, ЭУ, 70 eV), одним из которых является ß-амирин (30,07 %, tr 53,58 мин), а также о-ксилол (0,02 %, t, 5,87 мин), капроновую кислоту (0,03 %, tr 6,58 мин), 3-карен (0,01 %, tr 7,31 мин), диметилсукцинат (0,03 %, tr 7,41 мин), м-крезол (0,01 %, tr 7,7 мин), диметиловый эфир азелаиновой кислоты (0,11 %, tr 12,55 мин), диэтилфталат (1,1 %, t,- 13,11 мин). При рехроматографии суммы на силикагеле и промывании колонки смесью гексан-ацетон 98:2 выделили 1,6 г белого мелкокристаллического порошка, т. пл. 160-161 °С (этанол), представляющего собой однородную по хроматографии в тонком слое смесь веществ 1-4, идентифицированных ГХ/МС как ß-амирин (олеан-12-ен-З-ол, 27,48 %), а-амирин (ypc-12-ен-З-ол, 27,52 %), моретенол (гоп-22(29)-еп-Зр-ол, 25,52 %) и лупеол (лyп-22(29)-eн-Зß-oл, 19,48 %).

Огн. интенсивность, %

Рисунок 1 - ГЖ-хроматограмма фракции, содержащей сумму тритерпеновых соединений, полученной из хлороформной фракции экстракта альфредии поникшей

Время, мин

Фракцию, полученную смесью хлороформ-этанол 93:7-90:10, рехроматографировали на силикагеле с последующим противоточным распределением в системе хлороформ-метанол-вода (5:6:4) из нижней фазы, выделили вещество 5 - белый мелкокристаллический порошок (100 мг), С27Н34О11; т. пл., °С (хлороформ-гексан 1:2): 86 (газ. выдел.), 250 (разл.). УФ-спектр (С2Н5ОН), Inn, нм: 224, 255, (274), (298). ИК-спектр (в пл. СНС13), vmax, см"1: 1026, 1074, 1140, 1157 (пиранозное кольцо), 1194, 1235, 1264 (С-О-С), 1332, 1349, 1383, 1421, 1453, 1464 (СН3, СН2, СН), 1515, 1592, 1606 (аром.), 1766 (у-лак-тонный цикл, лактонный карбонил), 2855 (ОСН3 аром.), 2839, 2921 (СН3, СН2), 3419 (ОН). ЯМР характеристика представлена в таблице 10. Вещество 5 (рис. 2) - 3-(3-метокси-4- ß -В-глюкопиранозилоксибензил)-4-(3,4-диметоксибензил)-бутиролактон (арктиин).

Таблица 10 - Химические сдвиги и корреляции в молекуле вещества 5

Атом Хим. сдвиги (м.д.); КССВ (Гц) COSY HSQC нмвс

С 'Н

2 178,7 - - - Н5

3 46,52 2,43, м. Н6 2,43\46,52 С4

4 41,19 2,52, м. Н7 2,52\41,19 СЗ

5 71,27 4,09, дд.; 9,2; 7,7. 3,8, м. Н4 4,09; 3,8\71,27 СЗ; С7

6 34,48 2,83, м. НЗ 2,83\34,48 СЗ; С4

7 38,10 2,63, дд.; 13,75; 6,3. 2,50, м. Н4 2,50; 2,63\38,10 С2"; С6"

Г 133,24 - - - Н2'; Н5'

2' 113,34 6,61, д.; 1,66 Н6' 6,614113,34 С1';С4'

3' 149,53 - - - Н5'; ß

4' 145,15 - - - НЗ'; Н5'; НГ"

5' 117,85 6,88, д.; 8,2 Н6' 6,88\117,85 С2'; С4'

6' 121,92 6,53, дд.; 8,2; 1,84 Н2'; Н5' 6,53\121,92 С Г; СЗ'; С4'

1" 130,05 - - - Н2": Н5"

2" 112,05 6,47, д.; 1,84 Н6" 6,47\112,05 Cl"; С4"; СЗ"

3" 149,13 - - - Н2"; Н5"; Н6"; а

4" 148,00 - - - Н2"; Н5"; Н6"; у

5" 111,54 6,73, д.; 8,2 Нб"; у 6,73\111,54 Cl"; С2"; СЗ"; С4"; С5"; у

6" 120,74 6,55, да.; 8,2; 1,75 Н2"; Н5" 6,55\120,74 СЗ"; С4"

Г 102,10 4,78, д.; 7,40 Н2"' 4,78\102,10 145,15

2'" 73,31 - - - -

3'" 76,24* - - - -

4"' 69,49 - - - -

5"' 76,98* - - - -

6"' 61,64 - - - -

а 56,01 3,67, с. Н2' 3,67\56,01' СЗ'

ß 56,07 3,77, с. Н2" 3,77\56,07 СЗ"

Y 56,07 3,80, с. Н5" 3,80\56,07 С4"

Примечание: * - значения взаимозаменяемы. ЯМР 'Н (DMSO-d6,400 МГц, 5, м.д.) и ЯМР j JC (DMSO-ds, 125,76 МГц, 6, м.д.).

Рисунок 2 - Формула вещества 5 (1) и кросс-пики, вызванные ядерным эффектом Оверхаузера (2)

В этилацетатной фракции экстракта альфредии обнаружили простые

фенолы, флавоноиды (кверцетин, кемпферол, таксифолин, апигенин, лютеолин, изокверцитрин, лютеолин-7-глюкозид), ароматические кислоты (ванилиновая, коричная, кофейная, хлорогеновая), лигнаны (арктиин), кумарины, тритерпеновые соединения, стерины (ß-ситостерин) и неорганические компоненты. Разделение фракции осуществляли методом колоночной хроматографии на силикагеле. При элюировании смесью хлороформ-этанол 98:2 в индивидуальном состоянии получили 32 мг вещества 6 (кверцетин) и 7 (белый мелкокристаллический порошок (16 мг), т. пл. 282-283 °С (хлороформ-этанол 6:4); ИК-спектр (KBr), vmax, см'1:1023, 1074, 1105, 1166 (ОН), 1197, 1255, 1304, 1333, 1367, 1379, 1443, 1464 (СН3, СН2, СН), 1644, 1669 (С=С), 2851, 2869, 2934, 2959 (СН3, СН2), 3396 (ОН); на пластинке «Silufol UV-254» проявляется в виде темно-красного пятна при обработке ванилин-фосфорным реактивом с Rf 0,25 (хлороформ-метанол 25:3) и 0,30 (хлороформ-этанол 8:1); отнесено к тритерпеновым соединениям, ОВ-2), хлороформ-этанол 88:12 - 37 мг вещества 8 (желтый мелкокристаллический порошок, т. пл. 238240 °С (ацетон); УФ-спектр (С2Н5ОН), нм: 258, (300), 360; (+А1С13+НС1): 268, 410; изокверцитрин).

Фракцию, элюированную хлороформом, разделяли рехроматографией на силикагеле и при промывании колонки смесью гексан-ацетон 92:8 получили 3 мг вещества 9 (коричная кислота), гексан-ацетон 80:20 - вещество 10 (белый мелкокристаллический порошок (10 мг), т. пл. 210-212 °С (этанол-хлороформ 1:20); УФ-спектр (С2Н5ОН), А^, нм: 220,260,290; масс-спектр, m/z, ЭУ, 70 eV: 168 (М+), 153, 151, 125, 97; ЯМР *Н спектр (¿-ацетон),S, мл.; J, Гц: 7,62 (дд„ 9,0 и 2,0 Гц, Н-6), 7,56 (д., 2,0 Гц, Н-2), 6,92 (д., 9,0 Гц, Н-5), 3,90 (е., СН30); ванилиновая кислота).

В бутанольной фракции экстракта альфредии обнаружены простые фенолы, флавоноиды (лютеолин-7-глюкозид), ароматические кислоты (ванилиновая, коричная, кофейная), тритерпеновые соединения (след. количества), аминокислоты (в т.ч. валин, треонин, триптофан, метионин) и неорганические компоненты. При разделении фракции методом флэш-хроматографии на силикагеле и элюировании смесью хлороформ-метанол 2:8 получили 15 мг вещества 11 (белый кристаллический порошок, т. пл. 203-204 °С (этанол-вода 3:2); УФ-спектр (С2Н5ОН), нм: 243, (299), 326; хлорогеновая кислота). Из фракции,

элюированной смесью хлороформ-метанол 6:4, рехроматографией на полиамиде получили 100 мг вещества 12 (рутин) и 8 (изокверцитрин).

В водном остатке содержится 10,63 % азотсодержащих соединений, 1,99 % аминокислот (с доминированием глутаминовой и аспарагиновой кислот, валина, пролина, аланина и гистидина), 32 % углеводов (Е>-глюкоза, Б-галактоза, Ь-арабиноза, Б-глюкуроновая кислота), следовые количества флавоноидов, неорганические компоненты.

В элементном составе активного экстракта альфредии преобладают: кальций, натрий, железо, цинк, стронций, барий, бром, кобальт, хром, гафний, торий, лютеций, лантан и самарий; в составе водного остатка - калий, магний, цинк, рубидий, фосфор, кальций и марганец.

СТАНДАРТИЗАЦИЯ ЛЕКАРСТВЕННОГО РАСТИТЕЛЬНОГО СЫРЬЯ И ЛЕКАРСТВЕННЫХ ФОРМ НА ЕГО ОСНОВЕ

Параметры качества лекарственного сырья и лекарственных препаратов на его

основе, включенные в проекты ФС, разрабатывали и оформляли в соответствии с ОСТ 91500.05.001.-00.

В качестве сырья рекомендованы олиственные побеги княжика сибирского, собранные в фазы цветения и начала плодоношения. К диагностически значимым признакам листа и цветка отнесены длинные одноклеточные волоски и мелкие пузырчатые трихомы; эпидермис стебля представлен клетками с прямыми стенками и немногочисленными устьицами аномоцитного типа, окруженными восемью околоустьичными клетками; для строения плода характерно наличие мезокарпия, образованного слоем изодиаметрических клеток, утолщающегося в

клиновидных выростах, основная часть семени представлена эндоспермом с включениями жирного масла, семянка в нижней части опушена редкими простыми одноклеточными волосками.

Стандартизацию лекарственного сырья предложено осуществлять по фенолоспиртам (производным фенилэтанола-2), обусловливающих активность (табл. 11). Обнаружение фенолоспиртов проводят в тонком слое силикагеля, в экспериментально подобранной системе растворителей хлороформ-метанол-вода (70:12:1), применяя в качестве детектора ванилин-фосфорный реактив. Кроме того, в УФ-области обнаруживается характерная для фенолоспиртов полоса поглощения (280±2 нм). В основу методики количественного определения фенолоспиртов в побегах княжика положен спектрофотометрический метод и реакция образования окрашенных, устойчивых во времени комплексов с о-фенантролином в присутствии железа (III) хлорида, поглощающих излучение при длине волны 509±2 нм. Условия проведения реакции отрабатаны на 3,4-дигидроксифенилэтаноле-2, т. к. спектры поглощения продуктов реакции с о-фенантролином в присутствии железа (III) хлорида этого соединения и фенолоспиртов княжика сибирского совпадают (A^ 509 нм). Учитывая неустойчивость 3,4-дигидроксифенилэтанола-2 в процессе хранения, расчет содержания фенолоспиртов предложено проводить по экспериментально установленному удельному показателю поглощения (156,8). Относительная ошибка методики составляет 5,4 %. Методика валидирована, согласно рекомендациям ICH, по показателям: линейность (у=0,1426х+0,0031, R2=0,9999), прецизионность (RSD=0,96 %) и точность (RSD=0,43 %). Наибольшее количество фенолоспиртов содержится в цветках и листьях, а также в сырье, собранном в фазы цветения и начала плодоношения. Срок годности сырья составляет три года. Учитывая принцип унификации методик в ряду: сырье -субстанция - лекарственная форма, определение наличия и содержания действующих веществ (фенолоспиртов) в экстракте княжика сибирского жидком, густом и таблетках осуществляют хроматографически в тонком слое силикагеля, получением характерного УФ-спектра и спектрофотометрическим методом на основе реакции окисления с о-фенантролином в присутствии железа (III) хлорида соответственно (табл. 12, 13).

Таблица 11 - Нормы качества побегов княжика сибирского, травы лабазника вязолистного _и альфредии поникшей (цельных и измельченных) по числовым показателям_

Показатель Норма по проекту ФС, %

«Княжика сибирского побеги» «Лабазника вязолистного трава» «Альфредии поникшей трава»

Действующих веществ не менее 1,5 фенолоспиртов (в пересчете на 3,4-дигидроксифенилэтанол-2) не менее 1,5 флавоноидов (в пересчете на кверцетин) не менее 0,5 флавоноидов (в пересчете на изокверцитрин)

Экстрактивных веществ, извлекаемых не менее 18 25 % спиртом не менее 18 70 % спиртом не менее 14 95 % спиртом

Влажность не более 14 не более 12 не более 13

Золы общей не более 9 не более 9 не более 13

Золы, нерастворимой в хлористоводородной кислоте не более 1 не более 1,5 не более 1

Стеблей не более 10 диаметром более 4 мм не более 50 отделенных при анализе не более 10 диаметром более 20 мм

Частиц, не проходящих сквозь сито с диаметром отверстий 7 мм не более10 не более 10 не более 10

Частиц, проходящих сквозь сито с диаметром отверстий 0,5 мм не более 10 не более 10 не более 10

Потемневших частей растения не более 3 не более 10 -

Органической примеси не более 3 не более 1,5 не более 1,5

Минеральной примеси не более 1 не более 1 не более 1

Таблица 12 - Нормы подлинности и качества экстрактов княжика сибирского

Показатель Нормы по проектам ФС

Экстракт жидкий Экстракт густой

Описание Жидкость темно-коричневого цвета с красноватым оттенком со специфическим запахом кисло-горького вкуса Густая вязкая масса темно-коричневого цвета со специфическим запахом кисло-горького вкуса

Хроматография На хроматограмме должны обнаруживаться пятна розового и красного цвета с 1?г около 0,49 после обработки ванилин-фосфорным реактивом и диазореактивом соответственно

Спектр поглощения УФ-спектр испытуемого раствора должен иметь максимум при длине волны 280±2 нм

Содержание действующих веществ (фенолоспиртов), % не менее 1,5 не менее 1,5

Содержание спирта, % не менее 17 -

Сухой остаток, % не менее 16 -

Содержание тяжелых металлов, % не более 0,01 не более 0,01

Влага, % - не более 25

М икробиологическая чистота ОФС 42-0067-07, Категория 4Б

Срок годности 3 года

Таблица 13 - Нормы качества таблеток княжика сибирского и лабазника вязолисгного

Параметр Норма по проекту ФС

«Княжика сибирского таблетки» «Лабазника вязолисгного таблетки»

Описание Геометрические параметры: й, мм Ь, мм Плоскоцилиндрические таблетки с риской кремового цвета с темными вкраплениями со специфическим запахом и вкусом 9,00±0,30 3,44+0,40 Плоскоцилиндрические таблетки с риской бежевого цвета с темными вкраплениями со специфическим запахом и вкусом 10,(ХЬЮ,30 3,35+0,40

Средняя масса, г 0,325+0,016, отклонение от средней массы таблеток должно быть не более ±5 % 0,340+0,017, отклонение от средней массы таблеток должно быть не более ±5 %

Прочность на истирание, % не менее 97 не менее 97

Распадаемосгь, мин не более 15 не более 15

Содержание аэросила, % не более 5 -

Содержание действующих веществ, г на 1 таблетку 0,00956±0,00143 (фенолоспиртов) 0,0072±0,00108 (флавоноидов)

Растворение, % не менее 75 не менее 75

Микробиологическая чистота ОФС 42-0067-07, Категория 4Б ОФС 42-0067-07, Категория 4Б

Срок годности 3 года 3 года

Трава лабазника вязолисгного, собранная в фазу цветения, рекомендована

нами как лекарственное растительное сырье. Характерным диагностическим признаком сырья является наличие волосков различных типов: простых одноклеточных толстостенных - на эпидермисе стебля, верхнем эпидермисе листа и по краю листа, железистых - на верхнем эпидемисе листа, простых кнутовидных - на нижнем эпидемисе листа и булавовидных железистых - на эпидермисе лепестка венчика.

Стандартизацию травы предложено осуществлять по флавоноидам (кверцетину и его гликозидам), проявляющим выраженную активность (табл. 11). Определение наличия действующих веществ (изокверцитрин, спиреозид, авикулярин) осуществяляют методом хроматографии в тонком слое силикагеля в системе растворителей хлороформ-этанол (8:2), детектируя 5 % раствором алюминия хлорида на 95 % этаноле и УФ-светом (360 нм). В УФ-области (365±2 нм) имеется, характерная для гликозидов кверцетина, полоса поглощения. Количественное определение флавоноидов проводят методом дифференциальной спектрофотометрии, используя реакцию комплексообразования с раствором алюминия хлорида в кислой среде. Учитывая, что сумма гликозидов кверцетина проявляет выраженную активность, осуществляли кислотный гидролиз экстракта

лабазника. Условия проведения реакции отрабатывали на ГСО кверцетина (ФС 421290-79), т.к. спектры поглощения продуктов реакции с раствором алюминия хлорида этого соединения и флавоноидов лабазника вязолистного после гидролиза совпадают (ЛтИ 425 нм). Относительная ошибка методики составляет 1,42 %. Методика валидирована, согласно рекомендациям ICH, по показателям: линейность (у=0,1416х+0,0043, R2=0,9999), прецизионность (RSD=0,99 %) и точность (RSD=0,46 %). Наибольшее количество флавоноидов обнаружено в сырье, собранном в фазу цветения, а максимальное содержание - в цветках и листьях растения. Срок годности сырья - три года. Разработанные методики положены в основу стандартизации экстрактов жидкого, сухого и таблеток лабазника вязолистного (табл. 13 ,14).

Таблица 14 - Нормы подлинности и качества экстрактов лабазника вязолистного

Показатель Нормы по проектам ФС

Экстракт жидкий Экстракт сухой

Описание Жидкость темно-коричневого цвета с зеленоватым оттенком со специфическим запахом горько-вяжущего вкуса Аморфный порошок коричневого цвета со специфическим запахом вяжущего вкуса

Хроматография На хроматограмме должны обнаруживаться пятна лимонно-желтого цвета с Кг около 0,55 (авикулярин), 0,25 (изокверцитрин) и 0,20 (спиреозид) после обработки 5 % раствором алюминия хлорида в 95 % спирте этиловом в видимом и УФ-свете при длине волны 360 нм

Спектр поглощения УФ-спектр испытуемого раствора должен иметь максимум при длине волны 365±2 нм

Содержание действующих веществ (флавоноидов), % не менее 1,5 не менее 1,5

Содержание спирта, % не менее 57 -

Сухой остаток, % не менее 7 -

Содержание тяжелых металлов, % не более 0,01 не более 0,01

Влага, % - не более 5

Микробиологическая чистота ОФС 42-0067-07, Категория 4Б

Срок годности 3 года

В качестве сырья нами рекомендована трава альфредии поникшей, собранная в фазу цветения. Микроскопическим диагностическим признаком сырья является наличие различных типов волосков: на эпидермисе листа - простые многоклеточные тонкостенные и толстостенные волоски с продольной складчатостью, простые тонкостенные волоски с многоклеточным основанием; цветка - простые многоклеточные тонкостенные и звездчато-лучистые

многоклеточные волоски с многоклеточным основанием; стебля - простые многоклеточные волоски с неравномерными утолщениями и простые многоклеточные двухрядные волоски.

Стандартизацию сырья предложено осуществлять по флавоноидам (изокверцитрину), обладающим выраженным ноотропным эффектом (табл. 11). Обнаружение проводят на пластинках «Сорбфил ПТСХ-П-А» в системе растворителей этилацетат-муравьиная кислота-вода (8:1:1), проявляя в УФ-свете (360 нм) и 5 % раствором алюминия хлорида на 95 % этаноле. В связи с отсутствием выраженного максимума поглощения в УФ-спектре и для увеличения избирательности методики, определяли оптическую плотность окрашенных, устойчивых во времени продуктов реакции флавоноидов альфредии с алюминия хлоридом в кислой среде (рН экстракта), используя метод дифференциальной спектрофотометрии. Спектры поглощения продуктов реакции изокверцитрина с алюминия хлоридом и флавоноидов альфредии совпадают (Хщах 410±2 нм). Расчет содержания флавоноидов осуществляют в пересчете на изокверцитрин по экспериментально установленному удельному показателю поглощения (295,0). Относительная ошибка методики составляет 5,57 %. Методика валидирована, согласно рекомендациям 1СН, по показателям: линейность (у=0,6313х+0,0065, 1^=0,9998), прецизионность (1180=0,96 %) и точность (1*80=0,46 %). Содержание флавоноидов достигает максимума в период цветения - 0,73 %, а наибольшее количество их накапливается в цветках альфредии - 1,4 %. Срок годности травы альфредии поникшей составляет три года.

Таблица 15 - Нормы подлинности и качества экстракта альфредии поникшей жидкого

Показатель Норма по проекту ФС

Описание Жидкость темно-коричневого цвета с зеленоватым оттенком со специфическим запахом горько-кислого вкуса

Хроматография На хроматограмме должно обнаруживаться пятно желтого цвета с около 0,50 после обработки 5 % раствором алюминия хлорида в 95 % спирте этиловом в видимом и УФ-свете при длине волны 360 нм

Содержание действующих веществ (флавоноидов), % не менее 0,5

Содержание спирта, % не менее 82

Сухой остаток, % не менее 6

Содержание тяжелых металлов, % не более 0,01

Микробиологическая чистота ОФС 42-0067-07, Категория 4Б

Срок годности 3 года

Разработку методик качественного обнаружения и количественного определения действующих веществ в жидком экстракте альфредии поникшей проводили в соответствии с принципом унификации методик в ряду: сырье-лекарственная форма (табл. 15).

Таким образом, на основании изучения химического состава и фармакологической активности ряда растений Сибири предложены рациональные научно-методические подходы к поиску источников и созданию эффективных ноотропных средств растительного происхождения (рис. 3), включающие схему выбора рациональных экстрагентов, способы выявления перспективных видов и оценки их ноотропных свойств.

[ " ~~~ ' Блок I- Выявлений перспективных видов растений |

1.1. Анализ данных литературы и ресурсной базы видов 1.2. Исследование фупп БАВ и элементного состава растений

Рисунок 3 - Рациональные научно-методические подходы к поиску источников и созданию ноотрогшых средств растительного происхождения

ВЫВОДЫ

1. Теоретически и экспериментально обоснована перспективность исследования и

. Исследование антиоксидактных свойств водных и водно-этанольных экстрактов растений In

1.4. Скрининговое изучение ноотропной активности (гипоксия гермообъема, "отхрытое поле", выработка и воспроизведение условного рефлекса пассивного избегания, принудительное плавание с утяжеляющим грузом) _и химического состава водных и водно-этанольных экстрактов растений_

|Блок II. Химико-фармакопогическоа изучение экстрактов перспективных видов|

использования надземной части княжика сибирского, лабазника вязолистного и л.

обыкновенного, альфредии поникшей и а. снежной, побегов черники обыкновенной, зеленых листьев бадана толстолистного как источников ноотропных фитопрепаратов.

2. Изучены основные группы биологически активных веществ в исследуемых видах, что выявило доминирование фенольных (представители простых фенолов, флавоноидов, фенолкарбоновых кислот, лигнанов) и тритерпеновых соединений. Впервые изучен элементный состав вышеуказанных растений, собранных в различных районах Сибири, и показана возможность их использования в качестве источников макро- и микроэлементов, включая эссенциальные.

3. Установлено, что экстракты изучаемых растений проявляют антиоксидантную активность, причем наиболее выраженные свойства присущи экстрактам на 70 % и 95 % этаноле, сравнимые или превосходящие по эффекту дигидрокверцетин и кислоту аскорбиновую. Впервые установлено, что экстракты исследуемых растений проявляют ноотропные свойства. Наибольшей активностью характеризуются экстракты княжика сибирского на 25 % этаноле, лабазника вязолистного на 70 % этаноле и альфредии поникшей на 95 % этаноле, сопоставимой, а на некоторых моделях, превосходящей пирацетам и препарат «Гинсана»; определена зависимость их специфической активности от ряда факторов, что позволило разработать оригинальные ноотропные фитопрепараты.

4. Впервые выявлены различия по спектру ноотропных свойств: экстракт княжика сибирского обладает наиболее выраженным противоишемическим, анксиолитическим и антистрессорным, лабазника вязолистного - антиоксидантным и адаптогенным, альфредии поникшей - антистрессорным, анксиолитическим и противоневротическим действием. Из надземной части княжика сибирского получена бутанольная фракция, проявляющая выраженный ноотропный эффект. При фракционировании экстрактов альфредии поникшей и лабазника вязолистного выявлено разделение ноотропного эффекта на составляющие, что указывает на специфическое действие суммы их биологически активных веществ.

5. Впервые из фармакологически активной фракции княжика сибирского выделены фенолоспирты (3,4-дигидроксифенилэтанол-2 и его глюкозид), фенолкарбоновая кислота (хлорогеновая), сумма гликозидов дигидроксибутановой

кислоты, тритерпеновый гликозид (З-О-р-Б-глюкопиранозид олеаноловой кислоты) и установлен состав аминокислот и микроэлементов.

6. Из фармакологически активного экстракта лабазника вызолистного получены флавоноиды (кверцетин, изокверцитрин, 4'-глюкозид кверцетина, авикулярин, 4'-0-Р-Б-галактопиранозид кверцетина, рутин; кемпферол), ароматические кислоты (салициловая, анисовая, галловая и её этиловый эфир, коричная, феруловая), кумарины (эскулетин), тритерпеновые соединения (урсоловая и олеаноловая кислоты). Из растения впервые выделены изокверцитрин, 4'-0-Р-0-галактопиранозид кверцетина, коричная, феруловая, анисовая кислоты и этилгаллат. Структура 4'-0-Р-0-галактопиранозида кверцетина не описана ранее в литературе.

7. Впервые из экстракта альфредии поникшей, обладающего ноотропным действием, выделены: лигнан (арктиин), флавоноиды (кверцетин, изокверцитрин, рутин), ароматические кислоты (коричная, ванилиновая, хлорогеновая) и тритерпеновые спирты (а- и р-амирины, моретенол, лупеол).

8. Экспериментально установлено, что наибольшей антиоксидантной активностью обладают выделенные производные фенилэтанола-2, гликозиды кверцетина, арктиин и сумма тритерпеновых спиртов. Наиболее выраженной ноотропной активностью обладают тритерпеновые соединения, арктиин и изокверцитрин, наименьшим характеризуется рутин.

9. Показано, что экстракты княжика сибирского, лабазника вязолистного и альфредии поникшей проявляют иммунотропное действие. Наиболее выраженное влияние обнаруживает экстракт лабазника на 70 % этаноле, превосходящий по активности настойку эхинацеи пурпурной. Впервые выявлена выраженная гепатопротекторная активность указанного экстракта лабазника, по ряду показателей, превышающего эффективность карсила, что обусловлено активацией внутриклеточных регенераторных процессов и нормализацией гистологических, метаболических показателей печени, антиоксидантными и мембраностабилизирующими свойствами. Обнаружено, что экстракт альфредии поникшей и княжика сибирского проявляют выраженную диуретическую активность.

10. Разработаны унифицированные методики качественного и количественного анализа: фенолоспиртов, обусловливающих активность, в побегах, экстрактах и таблетках княжика сибирского; флавоноидов, проявляющих ноотропные свойства, для травы лабазника вязолистного, альфредии поникшей и их лекарственных форм. Составлены проекты фармакопейных статей на лекарственное растительное сырье и лекарственные формы на его основе «Княжика экстракт жидкий», «Княжика экстракт густой» и «Княжика таблетки», «Лабазника экстракт жидкий», «Лабазника экстракт сухой» и «Лабазника таблетки», «Альфредии экстракт жидкий».

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Монография:

1. Шилова, И. В. Химический состав и ноотропная активность растений Сибири / И. В. Шилова, Н. И. Суслов, И. А. Самылина. - Томск : Изд-во Томского ун-та, 2010.-236 с.

2. Патенты:

2. Пат. 2276992 Российская Федерация, МКИ А61 К36/71, К9/20. Фармацевтический состав, обладающий ноотропной активностью / Е. А. Краснов [и др.] (РФ). -№ 2004121294/15; заявл. 12.07.04; опубл. 27.05.06, Бюл. №15.-7 с.

3. Пат. 2292214 Российская Федерация, МКИ А61 К36/28, Р17/18. Средство, обладающее антиоксидантной активностью / И. В. Шилова [и др.] (РФ). - № 2005123760/15; заявл. 26.07.05; опубл. 27.01.07, Бюл. №3.-4 с.

4. Пат. 2310467 Российская Федерация, МКИ А61 К36/73, Р1/16, Р39/06. Гепатопротекторное средство, обладающее антиоксидантной активностью, и способ его получения / Е. А. Краснов [и др.] (РФ). - № 2005126107/15; заявл. 17.08.05; опубл. 20.11.07, Бюл. № 32. - 10 с.

5. Пат. 2311193 Российская Федерация, МКИ А61 К36/73, Р25/28. Средство, обладающее ноотропной и адаптогенной активностью / Н. И. Суслов [и др.] (РФ). - № 2006114551/15; заявл. 02.05.06; опубл. 27.11.07, Бюл. № 33. - 6 с.

6. Пат. 2314115 Российская Федерация, МКИ А61 К36/73, Р25/28. Ноотропное средство, обладающее антигипоксической активностью / И. В. Шилова [и др.] (РФ). - № 2006114550/15; заявл. 27.04.06; опубл. 10.01.08, Бюл. №1.-6 с.

7. Пат. 2325179 Российская Федерация, МКИ А61 К36/73, К39/06. Средство, обладающее антиоксидантным действием / Е. А. Краснов [и др.] (РФ). -№ 2006141871/15; заявл. 28.11.06; опубл. 27.05.08, Бюл. № 15. - 5 с.

8. Пат. 2347580 Российская Федерация, МКИ А61 К36/28, Р25/28. Средство, обладающее ноотропным действием / И. В. Шилова [и др.] (РФ). -№ 2007137877/15; заявл. 12.10.07; опубл. 27.02.09, Бюл. №6.-7 с.

9. Пат. 2354397 Российская Федерация, МКИ А61 К36/28, Р25/10. Средство, обладающее анксиолитическим действием / И. В. Шилова [и ДР-I (РФ)- -№ 2007141023/15; заявл. 06.11.07; опубл. 10.05.09, Бюл. № 13. - 7 с.

3. Статьи:

Ю.Шилова, И. В. Адаптогенные и ноотропные свойства густого экстракта из надземной части Atragene speciosa Weinm. / И. В. Шилова, Н. И. Суслов, Е. А. Краснов/У Раст. ресурсы. - 2001. - Т. 37, вып. 3. - С. 78-88. П.Шилова, И. В. Химико-фармакологическое изучение активной фракции Atragene speciosa Weinm. / И. В. Шилова, Е. А. Краснов, Н. И. Суслов // Бюл. СО РАМН. - 2001. - Т. 101, № 3. - С. 44-49. 12.Шилова, И. В. Исследование биологически активных веществ Atragene speciosa

Weinm. / И. В. Шилова // Бюл. Сиб. медицины. - 2002. - № 2. - С. 35-39. 13.Элементный состав надземной части Atragene speciosa Weinm. / И. В. Шилова [и др.] // Раст. ресурсы. - 2002. - Т. 38, вып. 4. - С. 69-74.

14.Аминокислотный и минеральный состав надземной части Atragene speciosa Weinm. / И. В. Шилова [и др.] // Хим.-фармац. журн. - 2002. - Т. 36, № 11. -С. 26-28.

15.Состояние и перспективы развития рынка лекарственных средств ноотропного действия / И. В. Шилова [и др.] // Фармация. - 2005. - № 3. - С. 15-17.

16.Фенольные соединения Filipéndula ulmaria / Е. А. Краснов [и др.] // Химия природ, соединений. - 2006. -№2. - С. 122-124.

17.Гепатопротекторные и антиоксидантные свойства экстрактов лабазника вязолистного при экспериментальном токсическом гепатите / И. В. Шилова [и др.] // Бюл. эксперим. биологии и медицины. - 2006. - Т. 142, № 8. - С. 181-184.

18.Антиоксидантные свойства экстрактов листьев бадана толстолистного / И. В. Шилова [и др.] // Хим.-фармац. журн. - 2006. - Т. 40, № 11. - С. 39-42.

19.Антиоксидантная активность экстрактов надземной части лабазника вязолистного / И. В. Шилова [и др.] // Хим.-фармац. журн. - 2006. - Т. 40, №.12.

- С. 22-24.

20.Анатомическое строение надземной части альфредии поникшей / Н. В. Кувачева [и др.] // Фармация - 2006. - № 6. - С. 10-12.

21.Изучение травы княжика сибирского / И. В. Шилова [и др.] // Фармация. - 2007.

- № 2. - С. 14-16.

22.Шилова, И. В. Рациональные подходы к поиску и созданию ноотропных средств растительного происхождения / И. В. Шилова // Вестн. РУДН. Сер. Медицина. - 2007. - № 6. - С. 236-240.

23.Антиоксидантные свойства биологически активных веществ Alfredia cernua и Alfredia nivea (Asteraceae) / И. В. Шилова [и др.] // Раст. ресурсы. - 2008. -Т. 44, вып. 1.-С. 114-121.

24.Шилова, И. В. Растения рода княжик - перспективные источники лекарственных средств /И. В. Шилова// Фармация. -2008. -№ 1. - С. 53-55.

25.Анатомическая характеристика травы лабазника вязолистного / Е. Ю. Авдеева [и др.] // Фармация. - 2008. -№ 2. - С. 21-23.

26.Состояние и перспективы развития фармацевтического рынка лекарств ноотропного действия / И. В. Шилова [и др.] // Сиб. вести, психиатрии и наркологии. - 2008. - № 2. - С. 128-130.

27.Аминокислотный и элементный состав активной фракции княжика сибирского / И. В. Шилова [и др.] // Вопр. биол., мед. и фармац. хим. - 2008. - № 3. -С. 34-37.

28.Авдеева, Е. Ю. Компонентный состав фракции Filipéndula ulmaria (L.) Maxim, с высокой антиоксидантной активностью / Е. Ю. Авдеева, Е. А. Краснов, И. В. Шилова // Химия раст. сырья. - 2008. - № 3. - С. 115-118.

29.Ноотропная активность экстрактов надземной части лабазника вязолистного / И. В. Шилова [и др.] // Вопр. биол., мед. и фармац. хим. - 2008. - № 4. -С. 24-26.

30.Гепатозащитные свойства фракций экстракта лабазника вязолистного при экспериментальном токсическом гепатите / И. В. Шилова [и др.] // Бюл. эксперим. биологии и медицины. - 2008. - Т. 144, № 7. - С. 54-57.

31.Влияние экстракта Filipéndula ulmaria на иммунную систему мышей CBA/CaLac и C57BL/6 / А. А. Чурин [и др.] // Эксперим. и клинич. фармакология. - 2008. - Т. 71, № 5. - С. 32-36.

32.Влияние экстракта лабазника вязолистного и его фракций на память и работоспособность в эксперименте / Н. И. Суслов [и др.] // Вопр. биол., мед. и фармац. хим. - 2008. - № 6. - С. 81-84.

33.Авдеева, Е. Ю. Динамика содержания флавоноидов и фенолокислот в надземной части Filipéndula ulmaria L. / Е. Ю. Авдеева, Е. А. Краснов, И. В. Шилова // Раст. ресурсы. - 2009. - Т. 45, вып. 1. - С. 107-112.

34.Амельченко, В. П. Особенности развития и компонентный состав Alfredia сетиа (Asteraceae) в условиях интродукции (г. Томск) / В. П. Амельченко, И. В. Шилова, Н. В. Кувачева // Раст. ресурсы. - 2009. - Т. 45, вып. 2. -С. 23-31.

35.Химический состав и биологическая активность фракции экстракта лабазника вязолистного / И. В. Шилова [и др.] // Хим.-фармац. журн. - 2009. - Т. 43, № 4. -С. 7-11.

36.Влияние экстрактов альфредии поникшей на поведение, память и работоспособность в эксперименте / Р. Н. Мустафин [и др.] // Эксперим. и клинич. фармакология. - 2010. - Т. 73, № 1. - С. 16-18.

37.Гепатопротекторные свойства экстракта лабазника вязолистного / И. В. Шилова [и др.] // Вопр. биол., мед. и фармац. хим. - 2010. - № 2. -С. 28-32.

38.Ноотропная активность экстрактов из дикорастущей и культивируемой альфредии поникшей / Р. Н. Мустафин [и др.] // Бюл. эксперим. биологии и медицины. - 2010. - Т. 150, № 9. - С. 302-304.

4. Публикации:

39.Некоторые аспекты механизма действия адаптогенных препаратов / Н. И. Суслов [и др.] // Актуальные проблемы фармакологии и поиска новых лекарственных препаратов : матер, конф., посвящ. 15-лет. НИИ фармакологии. - Томск, 1999. - Т.10. - С.94-103.

40.Шилова, И. В. Исследования по созданию эффективного ноотропного фитопрепарата / И. В. Шилова, Е. А. Краснов, Н. И. Суслов // Здоровье и образование в XXI веке : матер. Третьей Мевдунар. науч.-практич. конф. -Москва, 2002. - С. 437.

41.Анализ сырья и лекарственных форм А/лз^еле яресЫа \Veinm. / И. В. Шилова [и др.] // Здоровье и образование в XXI веке : матер. Четвертой Междунар. науч.-практич. конф. - Москва, 2003. - С. 687.

42.Химическое исследование надземной части лабазника вязолистного / И. В. Шилова [и др.] // Лекарственные растения в фармакологии и фармации : тез. докл. науч. конф., посвящ. 50-лет. Алтайск. гос. мед. ун-та. - Барнаул, 2004. -С. 306-307.

43 .Химический состав и антиоксидантные свойства растений рода лабазник и альфредия / И. В. Шилова [и др.] // Химия и технология растительных веществ : тез. докл. IV Всерос. науч. конф. - Сыктывкар, 2006. - С. 217.

44.Изучение диуретической и салуретической активности экстрактов альфредии поникшей / О. Л. Кулагин [и др.] // Новые достижения в создании лекарственных средств растительного происхождения : матер. Всерос. науч.-практич. конф., посвящ. 100-лет. со дня рожд. проф. Л. Н. Березнеговской. -Томск, 2006. - С. 202-204.

45.Шилова, И. В. Разработка рационального способа получения экстракта лабазника вязолистного / И. В. Шилова // Здоровье и образование в XXI веке; Концепции болезней цивилизации : матер. VIII Междунар. конгр. - Москва, 2007. - С. 707-708.

46.Шилова, И. В. Изучение влияния экстракта черники обыкновенной на условно-рефлекторную и эксплоративную деятельность / И. В. Шилова, Н. И. Суслов // Здоровье и образование в XXI веке; Концепции болезней цивилизации : матер. VIII Междунар. конгр. - Москва, 2007. - С. 708-709.

47.К вопросу стандартизации травы альфредии поникшей как перспективного источника фитопрепарата / Н. В. Кувачева [и др.] // Химия и медицина : тез. докл. VI Всерос. науч. семинар с молодежи, науч. шк. - Уфа, 2007. - С. 178.

48.Шилова, И. В. Химическое исследование активной фракции черники обыкновенной / И. В. Шилова // Современные проблемы и пути их решения в науке, транспорте, производстве и образовании'2007 : матер. Междунар. науч.-практич. конф. - Одесса, 2007. - Т. 18. - С. 44-45.

49.Шилова, И. В. Поиск растений, обладающих ноотропной активностью / И. В. Шилова // Разработка, исследование и маркетинг новой

фармацевтической продукции : сб. науч. тр. - Вып. 63. - Пятигорск, 2008. - С. 518-519.

50.Шилова, И. В. Ноотропные свойства экстрактов лабазника вязолистного / И. В. Шилова // I Российский фитотерапевтический съезд : сб. науч. тр. -Москва, 2008.-С. 224.

51.Исследование антиоксидантных и ноотропных свойств растений рода альфредия / И. В. Шилова [и др.] // Человек и лекарство : сб. матер. XV Росс. Национал. Конгр. (тез. докл.). - Москва, 2008. - С. 732.

52.Шилова, И. В. Химико-фармакологическое исследование листьев бадана толстолистного / И. В. Шилова // Науки о человеке : матер. IX конгр. молодых ученых и специал. - Томск, 2008. - С. 117-118.

53.Шилова, И. В. Антиоксидантные свойства и биологически активные вещества экстракта лабазника обыкновенного / И. В. Шилова, Е. И. Короткова, А. Н. Вторушина // Химия и технология растительных веществ : тез. докл. V Всерос. конф. - Уфа, 2008. - С. 329.

54.Шилова, И. В. Химическое исследование экстракта альфредии поникшей, обладающего ноотропными свойствами / И. В. Шилова, Н. В. Кувачева // Медицина в Кузбассе. Спецвыпуск: Проблемы медицины и биологии. - 2009. -№3.-С. 188.

55.Шилова, И. В. Исследования по разработке ноотропных средств на основе растений Сибири / И. В. Шилова, Н. И. Суслов // Здоровье и образование в XXI веке. Инновационные технологии в биологии и медицине : науч. тр. X Междунар. конгр. - Москва, 2009. - С 475-477.

56.Шилова, И. В. Химический состав и ноотропные свойства экстрактов черники обыкновенной / И. В. Шилова // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции : сб. науч. тр. - Вып. 65. - Пятигорск, 2010. - С. 523-524.

57.Шилова, И. В. Биологически активные вещества фракции лабазника вязолистного / И. В. Шилова, Н. И. Суслов // Современные проблемы фитотерапии и этнического травничества : матер. 2-го Междунар. съезда фитотер. и травников. - Москва, 2010. - С. 339-341.

Автор выражает искреннюю признательность и благодарность д-ру фарм. наук, профессору Первого Московского государственного медицинского университета им. И.М. Сеченова, чл.-корр. РАМН И.А. Самылиной, д-ру мед. наук, профессору НИИ фармакологии СО РАМН Н.И. Суслову, д-ру хим. наук, профессору Иркутского технического университета А.А. Семенову, д-ру геол.-мин. наук, профессору Национального исследовательского Томского политехнического университета Л.П. Рихванову за помощь в организации аналитических исследований и обсуждении полученных результатов.

Тираж 150 экз. Заказ 04. Томский государственный университет систем управления и радиоэлектроники. 634050, г. Томск, пр. Ленина, 40. Тел. (3822) 533018.

Введение диссертации по теме "Фармацевтическая химия, фармакогнозия", Шилова, Инесса Владимировна, автореферат

Актуальность темы. В современном мире прогрессирующий рост числа заболеваний, сопровождающихся нарушениями в когнитивной и мнестической сфере, делает актуальной проблему изучения и фармакотерапии нервно-психической патологии, определяя её медицинской задачей с высокой социальной значимостью [18, 39]. В настоящее время одним из приоритетных направлений отечественного здравоохранения выступает расширение ассортимента используемых лекарственных средств за счет внедрения в медицинскую практику новых препаратов, в частности ноотропного действия.

Ноотропные лекарственные средства незаменимы для коррекции нарушений высшей нервной деятельности при широком круге заболеваний, связанных с повреждениями центральной нервной системы: инсульты, ишемические повреждения мозга, атеросклероз, черепно-мозговые и психические травмы, последствия клещевого энцефалита, менингита, гриппа, перенесенных хирургических вмешательств с применением наркоза, химические, лучевые и другие воздействия [39, 154]. Фармакоэкономическая оценка затрат в условиях неврологического стационара выявила, что 40-50 % финансовых расходов приходится на препараты ноотропного действия [137]. Широкое распространение невротических расстройств среди взрослого населения (ими по данным разных авторов страдает от 50 до 70 % населения) и других заболеваний нервной системы [82, 92, 303, 315], одновременно ограниченный ассортимент синтетических ноотропных средств, недостаточная их эффективность и широта терапевтического действия, вызываемые ими побочные явления и недоступность отечественному потребителю вследствие дороговизны наиболее эффективных импортных средств диктует необходимость поиска активных и безопасных отечественных препаратов для лечения когнитивных расстройств.

Перспективными являются фитопрепараты ноотропного действия, однако, представленные на отечественном рынке «Гинсана» (РИаппаШп,

Швейцария) и «Танакан» (Веаийшг Трэеп, Франция) значительно дороже синтетических, что указывает на актуальность поиска и разработки отечественных ноотропных средств растительного происхождения, отвечающих требованиям фармакоэкономики с точки зрения эффективности, безопасности и себестоимости курса лечения [137]. В этом аспекте значительный интерес представляют виды флоры Сибири — княжик сибирский, лабазник вязолистный и л. обыкновенный, альфредия поникшая и а. снежная, черника обыкновенная, бадан толстолистный. Растения имеют достаточную сырьевую базу или введены в культуру, находят широкое применение в народной медицине в качестве тонизирующих и общеукрепляющих средств, при нервных заболеваниях и показали перспективность в предварительных экспериментальных исследованиях на ноотропную активность. Сведения о химическом составе выбранных видов носят фрагментарный характер, большая часть данных имеет предварительное значение, а для некоторых растений информация отсутствует. Наиболее изучен фенольный комплекс видов рода лабазник, произрастающих в европейской части России и Германии, и бадана толстолистного.

Для достижения поставленной цели предусматривалось решение следующих задач;

- разработать рациональные способы получения экстрактов из надземной части княжика сибирского, лабазника вязолистного и альфредии поникшей, как наиболее перспективных источников ноотропных средств, разделить их на фракции, оценить ноотропные и антиоксидантные свойства;

Научная значимость и новизна результатов. Впервые выделены и изучено строение веществ, обуславливающих ноотропную активность княжика сибирского, лабазника вязолистного и альфредии поникшей, -фенолоспирты, гликозиды кверцетина, тритерпеновые спирты, бутиролигнаны, и разработаны лекарственные средства ноотропного действия на основе растений флоры Сибири. На основании изучения химического состава и фармакологической активности княжика сибирского, лабазника вязолистного и л. обыкновенного, альфредии поникшей и а. снежной, черники обыкновенной, бадана толстолистного предложены рациональные научно-методические подходы к поиску источников и созданию ноотропных средств растительного происхождения, включающие схему выбора рациональных экстрагентов, способы выявления перспективных видов и оценки их ноотропных свойств.

Изучены основные группы биологически активных веществ надземной части княжика сибирского, лабазника вязолистного и л. обыкновенного, альфредии поникшей и а. снежной, побегов черники обыкновенной, зеленых листьев бадана толстолистного, доминирующими в которых явились фенольные (представители простых фенолов, флавоноидов, лигнанов, фенолкарбоновых кислот) и тритерпеновые соединения. Впервые изучен элементный состав вышеуказанных растений, собранных в различных районах Сибири, результаты которого свидетельствуют о возможности использования сырья изученных видов в качестве источников макро- и микроэлементов, включая эссенциальные.

В результате изучения химического состава бутанольной фракции княжика сибирского, проявляющей ноотропный эффект, впервые выделены 3,4-дигидроксифенилэтанол-2, 2-(3,4-дигидроксифенил)-этил-0-Р-Б-: глюкопиранозид, хлорогеновая кислота, сумма гликозидов дигидроксибутановой кислоты, З-О-р-Б-глюкопиранозид олеаноловой кислоты, изучен состав, аминокислот и неорганических компонентов.

Из фармакологически активных фракций лабазника, вязолистного,

I * ' ' ' впервые получены: флавоноиды. (изокверцитрин; 4'-0-Р-0-галактопираыозид кверцетина); ароматические кислоты ш их эфиры (коричная, ферул овая; анисовая, этилгаллат): Структура 4'-0-р-0-галактолиранозида кверцетина не описана ранее в литературе. Из активного экстракта альфредии впервые выделены: лигнан (арктиин); флавоноиды- (кверцетин, изокверцитрин, рутин), ароматические кислоты (коричная, ванилиновая и хлорогеновая) и тритерпеновые спирты;(а-: и (3-амирины, моретенол, лупеол).

Экспериментально^ установлено; что наибольшей антиоксидантной активностью обладают производные фенилэтанола-2, гликозиды кверцетина; бутиролигнан (арктиин) и сумма тритерпеновых спиртов, выделенные из\ . исследуемых растений. Впервые обнаружено; что тритерпеновым спиртам и бутиролигнанам, свойственен:выраженный ноотропный^^эффект, агликозиды:. кверцетина различаются по активности в зависимости от структуры.

Показано,, что экстракты княжика сибирского, лабазника, вязолистного и альфредии поникшей проявляют иммунотропное действие. Впервые выявлена выраженная гепатопротекторная активность экстракта лабазника вязолистного, по ряду показателей превышающая эффективность карсила. Обнаружено, что экстракты альфредии поникшей и княжика сибирского обладают диуретической и салуретической активностью.

Данные химического и фармакологического исследования послужили обоснованием для; разработки унифицированных. методик качественного обнаружения и количественного определения фенолоспиртов в побегах княжика сибирского, флавоноидов в траве лабазника вязолистного и альфредии поникшей, а также лекарственных формах на их основе. Впервые предложена методика спектрофотометрического определения фенолоспиртов на основе реакции окисления с о-фенантролином и железа (III) хлоридом.

Практическая значимость работы:

На основании данных фотохимического, фармакологического, морфолого-анатомического и товароведческого анализа разработаны проекты фармакопейных статей на лекарственное растительное сырье «Княжика сибирского побеги», «Лабазника вязолистного трава», «Альфредии поникшей трава».

Результаты фитохимических исследований и, в частности, изучение физико-химических свойств индивидуальных соединений позволили обосновать, в соответствии с современными требованиями, аналитические подходы в решении проблемы стандартизации изучаемых новых видов лекарственного растительного сырья и лекарственных препаратов на их основе. Разработаны валидированные и унифицированные методики качественного и количественного анализа с применением хроматографии в тонком слое, спектроскопии в УФ- и видимой областях спектра: контроль качества сырья и лекарственных препаратов на основе княжика сибирского предложено проводить по основной группе, обусловливающей активность - фенолоспиртам, методом хроматографии в тонком слое силикагеля с подтверждением характерным УФ-спектром и спектрофотометрическим методом по реакции окисления с о-фенантролином и железа (III) хлоридом соответственно; для травы лабазника вязолистного, альфредии поникшей и лекарственных препаратов на их основе разработаны методики идентификации и количественного определения: хроматография в тонком слое силикагеля с подтверждающим УФ-спектром (в случае лабазника вязолистного) и метод дифференциальной спектрофотометрии по реакции комплексообразования с алюминия хлоридом в кислой среде флавоноидов (гликозиды кверцетина), проявляющих ноотропные свойства.

Материалы внедрения:

Проекты ФС на лекарственное растительное сырье «Княжика сибирского побеги» и лекарственный препарат «Княжика сибирского экстракт жидкий» приняты к рассмотрению в ФГБУ «НЦЭСМП» Минздравсоцразвития России (письмо № 297-ЦСЛС от 09.12.2009 г., № 569-ЦСЛС от 14.09.2010 г.) для включения в Государственную фармакопею России XII издания.

Ясенецкого и фармацевтической химии Новосибирского государственного медицинского университета.

2007, 2009), научной конференции, посвященной 50-летию Алтайского государственного медицинского университета «Лекарственные растения в фармакологии и фармации» (Барнаул, 2004), Всероссийской научной конференции «Химия и технология растительных веществ» (Сыктывкар, 2006, Уфа, 2008), Всероссийской научно-практической конференции, посвященной 100-летию со дня рождения профессора Л.Н. Березнеговской «Новые достижения в создании лекарственных средств растительного происхождения» (Томск, 2006), VI Всероссийском научном семинаре с молодежной научной школой «Химия и медицина» (Уфа, 2007), Международном Конгрессе молодых ученых «Науки о человеке» (Томск, 2008), XV Российском Национальном Конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2008), I и II Российском фитотерапевтическом съезде (Москва,

2008, 2010).

Положения, выносимые на защиту;

Результаты изучения зависимости химическая структура — антиоксидантная, ноотропная активность для фенольных и тритерпеновых соединений, выделенных из растений, обладающих выраженной ноотропной активностью, как основа создания эффективных ноотропных средств.

На основе сложившихся рациональных научно—методических подходов к поиску источников и созданию ноотропных средств растительного происхождения, разработаны эффективные фитопрепараты, обладающие также иммунотропными, гепатопротекторными и диуретическими свойствами.

Заключение диссертационного исследования на тему "Химический состав растений Сибири и разработка ноотропных средств на их основе"

выводы

1. Теоретически и экспериментально обоснована перспективность исследования и использования надземной части княжика сибирского, лабазника вязолистного и л. обыкновенного, альфредии поникшей и а. снежной, побегов черники обыкновенной, зеленых листьев бадана толстолистного как источников ноотропных фитопрепаратов.

4. Впервые выявлены различия по спектру ноотропных свойств: экстракт княжика сибирского обладает наиболее выраженным противоишемическим, анксиолитическим и антистрессорным, лабазника вязолистного — антиоксидантным и адаптогенным, альфредии поникшей - антистрессорным, анксиолитическим и противоневротическим действием. Из надземной части княжика сибирского получена бутанольная фракция, проявляющая выраженный ноотропный эффект. При фракционировании экстрактов альфредии поникшей и- лабазника вязолистного выявлено разделение ноотропного эффекта • на составляющие, что указывает на специфическое действие суммы их биологически активных веществ.

5. Впервые из фармакологически активной* фракции княжика сибирского выделены фенолоспирты (3,4-дигидроксифенилэтанол-2 и его глюкозид), фенолкарбоновая кислота (хлорогеновая), сумма гликозидов дигидроксибутановой кислоты, тритерпеновый гликозид (З-О-Р-Б-глюкопиранозид олеаноловой кислоты) и установлен состав аминокислот и микроэлементов.

6. Из фармакологически активного экстракта лабазника вызолистного получены флавоноиды (кверцетин, изокверцитрин, 4'-глюкозид кверцетина, авикулярин, 4'-0-Р-0-галактопиранозид кверцетина, рутин; кемпферол), ароматические кислоты (салициловая, анисовая, галловая и её этиловый эфир, коричная, феруловая), кумарины (эскулетин), тритерпеновые соединения (урсоловая и олеаноловая кислоты). Из растения впервые выделены изокверцитрин, 4'-0-Р-В-галактопиранозид кверцетина, коричная, феруловая, анисовая кислоты и этилгаллат. Структура 4'-0-р-0-галактопиранозида кверцетина не описана ранее в литературе.

7. Впервые из экстракта альфредии поникшей, обладающего ноотропным действием, выделены: лигнан (арктиин), флавоноиды (кверцетин, изокверцитрин, рутин), ароматические кислоты (коричная, ванилиновая, хлорогеновая) и тритерпеновые спирты (а- и Р-амирины, моретенол, лупеол).

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2011 года, Шилова, Инесса Владимировна

1. Абрамова, О. П. Дикий хмель Алтая как источник биологическиактивных соединений / О. П. Абрамова, Н. П. Николаева // Актуальные вопросы изучения и использования лекарственной флоры Алтая. Барнаул, 1988.-С. 34-36.

2. Авдеева, Е. Ю. Компонентный состав фракции Filipéndula ulmaria (L.) Maxim, с высокой антиоксидантной активностью / Е. Ю. Авдеева, Е. А. Краснов, И. В. Шилова // Хим. раст. сырья. 2008. - № 3. - С. 115-118.

3. Азарашвили, А. А. Исследование механизмов памяти с помощью физиологически активных соединений / А. А. Азарашвили. — М. : Наука, 1981.- 198 с.

4. Амельченко, В. П. Особенности развития и компонентный состав Alfredia сетиа {Asterасеаё) в условиях интродукции (г. Томск) / В. П. Амельченко, И. В. Шилова, Н. В. Кувачева // Раст. ресурсы. 2009. - Т. 45, вып. 2. - С. 2432.

5. Аминокислотный и минеральный состав надземной части Atragene speciosa Weinm. / И. В. Шилова и др. // Хим.-фармац. журн. 2002. - Т. 36, №11. -С. 26-28.

6. Аминокислотный и элементный состав активной фракции княжика сибирского / И. В. Шилова и др. // Вопр. биол., мед. и фармац. хим. 2008. -№ 3. — С. 34-37.

7. Анатомическая характеристика травы лабазника вязолистного / Е. Ю. Авдеева и др. // Фармация. 2008. - № 2. - С. 21-23.

8. Анатомическое строение надземной части альфредии поникшей / Н. В. Кувачева и др. // Фармация 2006. - № 6. - С. 10-12.

9. Антикоагулянт из таволги вязолистной, его антитромботический и тромболитический эффекты / Б. А. Кудряшов и др. // Вестн. Моск. ун-та. -1994. -№3.- С. 15-17.

10. Антиоксидантная активность экстрактов надземной части лабазника вязолистного / И. В. Шилова и др. // Хим.-фармац. журн. 2006. - Т. 40, № 12.-С. 22-24.

11. Н.Антиоксидантные свойства биологически активных веществ Álfredia cernua и Alfredia nivea (Asteraceae) / И. В. Шилова и др. // Раст. ресурсы. -2008.-Т. 44, вып. 1.-С. 114-121.

12. Антиоксидантные свойства экстрактов листьев бадана толстолистного / И. В. Шилова и др. // Хим.-фармац. журн. 2006. - Т. 40, № 11. - С. 39-42.

13. Арутюнян, А. В. Методы оценки свободнорадикального окисления и антиоксидантной системы организма : метод, рекомендации / А. В. Арутюнян, Е. В. Дубинина, H. Н. Зыбина. СПб. : Фолиант, 2000. - 104 с.

14. Арушанян, Э. Б. Гиппокамп как возможная мишень для действия ноотропных средств / Э. Б. Арушанян, Э. В. Бейер // Эксперим. и клинич. фармакология. 2007. - Т. 70, № 4. - С. 59-65.

15. Арушанян, Э. Б. Нетрадиционный подход к оценке механизма специфического действия ноотропных средств / Э. Б. Арушанян // Эксперим. и клинич. фармакология. 2005. - Т. 68, № 2. - С. 59-67.

16. Арушанян, Э. Б. Ноотропные свойства препаратов гинкго билоба / Э. Б. Арушанян, Э. В. Бейер // Эксперим. и клинич. фармакология. — 2008. — Т. 71, №4.-С. 57-63.

17. Арушанян, Э. Б. Особенности временной организации поведенческого ответа крыс на кофеин / Э. Б. Арушанян, А. В. Попов // Эксперим. и клинич. фармакология. 2005. - Т. 68, № 1. - С. 10-12.

18. Арушанян, Э. Б. Препараты корня женьшеня и других растительных адаптогенов как ноотропные средства / Э. Б. Арушанян // Эксперим. и клинич. фармакология. 2008. - Т. 71, № 6. - С. 58-66.

19. Ахапкина, В. И. Спектр фармакологических эффектов фенотропила / В. И. Ахапкина, Т. А. Воронина // Фарматека. 2005. - Т. 108, № 13. - С. 19-25.

20. Бандюкова, В. А. Распространение флавоноидов в некоторых семействах высших растений. Сообщ. 3. Сем. Rosaceae / В. А. Бандюкова // Раст. ресурсы. 1969. - Т. 5, вып. 4. - С. 590-600.

21. Бандюкова, В. А. Фенолокислоты растений, их эфиры и гликозиды / В. А. Бандюкова // Химия природ, соединений 1983. - № 3. - С. 263-273.

22. Барыкина, Р. П. Морфолого-анатомическое изучение княжика и его систематическое положение / Р. П. Барыкина, Н. В. Чубатова // Бюл. Моск. об-ва испытателей природы. Отд. биологии. 1983. - Т. 88, вып. 6. - С. 6273.

23. Бельник, А. П. Дипептидный препарат ноопент устраняет вызванный скополамином дефицит пространственной памяти у мышей BALB/c / А. П. Бельник, Р. У. Островская, И. И. Пролетаева // Бюл. эксперим. биологии и медицины. 2007 - Т. 143, № 4. - С. 407-410.

24. Беляков, К. В. Количественное определение полисахаридов в листьях мать-и-мачехи / К. В. Беляков, Д. М. Попов// Фармация. 1999. — № 1. — С.23-24.

25. Бимурзаев, А. А. Тритерпены Zizifora bungeana / А. А. Бимурзаев, Г. К. Никонов // Химия природ, соединений. — 1984. — № 4. — С. 530-531.

26. Бобков, Ю. Г. Фармакологическая коррекция утомления / Ю. Г. Бобков, В. М. Виноградов, В. Ф. Катков. -М. : Медицина, 1984. 207 с.

27. Буданцев, A. JL Оценка сырьевой продуктивности Filipéndula ulmaria (Rosaceae) в Ленинградской и Псковской областях и возможность ее эмпирического прогноза / А. Л. Буданцев, К. С. Покровская // Раст. ресурсы. 2005. - Т. 41, вып. 2. - С. 85-96.

28. Буреш, Я. Методики и основные эксперименты по изучению мозга и поведения / Я. Буреш, О. Бурешова, Дж. П. Хьюстон. М. : Высш. шк., 1991. -398 с.

29. Влияние природных препаратов с ноотропными и адаптогенными свойствами на биоэлектрическую активность коры мозга крыс / Н. И. Суслов и др. // Эксперим. и клинич. фармакология. 2002. - Т. 65, № 1. - С. 7-10.

30. Влияние экстракта Filipéndula ulmaria на иммунную систему мышей CBA/CaLac и C57BL/6 / А. А. Чурин и др. // Эксперим. и клинич. фармакология. 2008. - Т. 71, № 5. - С. 32-36.

31. Влияние экстракта лабазника вязолистного и его фракций на память и работоспособность в эксперименте / Н. И. Суслов и др. // Вопр. биол., мед. и фармац. химии. 2008. - № 6. - С. 81-84.

32. Воронина, Т. А. Гипоксия и память. Особенности эффектов и применения ноотропных препаратов / Т. А. Воронина // Вестн. РАМН. 2000. - № 9. - С. 27-34.

33. Воронина, Т. А. Ноотропные и нейропротекторные средства / Т. А. Воронина, С. Б. Середенин // Эксперим. и клинич. фармакология. 2007. - Т. 70, № 4. - С. 44-58.

34. Воронина, Т. А. Ноотропные препараты, достижения и новые проблемы / Т. А. Воронина, С. Б. Середенин // Эксперим. и клинич. фармакология. -1998.-Т. 61, №4.-С. 3-9.

35. Воронина, Т. А. Роль синаптической передачи в процессах памяти, нейродегенерации и механизме действия нейротропных препаратов / Т. А. Воронина // Эксперим. и клинич. фармакология. 2003. - Т. 66, № 2. - С. 1014.

36. Выделение и анализ природных биологически активных веществ / под ред. Е. Е. Сироткиной. Томск : Изд-во Томского ун-та, 1987. - 184 с.

37. Гепатопротекторные и антиоксидантные свойства экстрактов лабазника вязолистного при экспериментальном токсическом гепатите / И. В. Шилова и др. // Бюл. эксперим. биологии и медицины. 2006. - Т. 142. № 8. - С. 181-184.

38. Гепатопротекторные и иммунотропные лекарственные средства: состояние и перспективы фармацевтического рынка / В. А. Егоров и др.. -Самара, 2000. 109 с.

39. Гланц, С. Медико-биологическая статистика / С. Гланц. — М. : Практика, 1998.-459 с.

40. Горбачева, А. В. Лабазник вязолистный в фитотерапии воспалительных процессов / А. В. Горбачева, С. Г. Аксиненко, В. Г. Пашинский. Томск : Изд-во Томского гос. пед. ун-та, 2005. - 304 с.

41. Гордиенко, А. Д. Гепатопротекторный механизм действия флавоноидов / А. Д. Гордиенко // Фармация. 1990. - Т. 39, № 3. - С. 75-78.

42. Государственная фармакопея СССР : Вып. 1. Общие методы анализа // МЗ СССР. 11-е изд., доп. - М. : Медицина, 1987. - 336 с.

43. Государственная фармакопея СССР : Вып. 2. Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье / МЗ СССР. — 11-е изд., доп. М. : Медицина, 1990. - 400 с.

44. Губина, М. Д. Биохимическая характеристика плодов некоторых видов дикорастущих ягодных кустарничков Западной Сибири / М. Д. Губина, Б. А.

45. Скуковский, Т. К. Федотова // Раст. ресурсы. 1976. - Т. 13, вып. 4. — С. 679685.

46. Дамулин, И. В. Применение инстенона в неврологической практике / И. В. Дамулин // Рус. мед. журн. 2004. - Т. 12, № 10. - С. 591-594.

47. Емельянов, С. А. Психотропные свойства экстракта листа бадана толстолистного : дис. . канд. биол. наук: 14.00.25 / С. А. Емельянов. -Томск, 1993.- 114 с.

48. Жирова, О. С. Alfredia cernua (L.) Cass. — альфредия / О. С. Жирова // Флора Сибири. Новосибирск, 1997. - Т. 13. - С. 213.

49. Зайцев, В. Г. Связь между химическим строением и мишенью действия как основа классификации антиоксидантов прямого действия / В. Г. Зайцев, О. В. Островский, В. И. Закревский // Эксперим. и клинич. фармакология. -2003. Т. 66, № 4. - С. 66 -70.

50. Захаров, В. В. Нарушения памяти / В. В. Захаров, H. Н. Яхно. — М. : Гэотар-Мед, 2003. 158 с.

51. Изучение травы княжика сибирского / И. В. Шилова и др. // Фармация. — 2007.- №2. -С. 14-16.

52. Изучение эффектов феназепама, сорбированного на наночастицах / В. А. Разживина и др. // Фармация. 2008. - № 3. - С. 44-46.

53. Ильин, M. М. Род Alfredia Cass. / M. M. Ильин, Г. JI. Семидел // Флора СССР М.: Изд-во АН СССР, 1963. - Т. 28. - С.39-43.

54. Иммунная система и иммунокорректоры / В. А. Куркин и др.. Самара : СамГМУ, 2003. - 176 с.

55. Иммунологические методы / под ред. Г. Фримеля. — М. : Медицина, 1987. -С. 211-218.

56. Кабата-Пендиас, А. Микроэлементы в почвах и растениях / А. Кабата-Пендиас, X. Пендиас. М. : Мир, 1989. - 373 с.

57. Клинико-физиологические особенности нейротропного действия водного экстракта трутового гриба чаги / Е. В. Переверзева и др. // Вестн. Смоленской гос. мед. акад. Мед.-биол. вып. 2005. — № 3. - С. 55-59.

58. Клышев, JI. К. Флавоноиды растений (распространение, физико-химические свойства, методы исследования) / JI. К. Клышев, В. А. Бандюкова, JI. С. Анокина. Алма-Ата : Наука, 1978. - 114 с.

59. Ковалев, Г. В. Ноотропные средства / Г. В. Ковалев. Волгоград : Ниж.-Волж. кн. изд-во, 1990. - 368 с.

60. Компонентный состав спиртового извлечения из надземной части Filipéndula ulmaria (Rosaceae) / С. С. Кравцова и др. // Раст. ресурсы. — 2005. Т. 45, вып. 3. - С. 95-99.

61. Крапивкина, Э. Д. Особенности систематического состава флоры Кузедеевского липового острова в Горной Шории / Э. Д. Крапивкина // Вест. Томского гос. ун-та. 2006. - Вып. 87. - С. 18-26.

62. Краснов, Е. А. Химическое изучение и возможности использования в медицине ряда растений семейства толстянковых флоры СССР : автореф. дис. . д-ра фарм. наук: 15.00.02 / Е. А. Краснов. Томск, 1990. - 46 с.

63. Краснов, Е. А. Алкалоиды Airagene sibirica L. / Е. А. Краснов, В. С. Бокова // Химия природ, соединений. 1981. - № 6. - С.806.

64. Крылов, Г. В. Зеленая аптека / Г. В. Крылов, Н. Ф. Казакова, Э. В. Степанов. Кемерово : Современ. отеч. кн., 1993. — 334 с.

65. Кудрин, А. В. Микроэлементы в неврологии / А. В. Кудрин, О. А. Громова. -М.: ГЭОТАР-Медиа, 2006. 304 с.

66. Кузнецова, Г. А. Природные кумарины и фурокумарины / Г. А. Кузнецова. Л.: Наука Л.О., 1967. - 248 с.

67. Кулагин, О. Л. Изучение диуретической активности клофелина / О. Л. Кулагин, Н. С. Додонов // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции : сб. науч. тр.- Пятигорск, 2005. — Вып. 60. — С. 363-364.

68. Куркин, В. А. Ноотропные свойства некоторых фитопрепаратов, содержащих фенилпропаноиды / В. А. Куркин, А. В. Дувцев, А. В. Титова // Раст. ресурсы 2003. - Т. 39, вып. 3. - С. 115-122.

69. Л1карськ1 рослини : Енциклопедичний довщник / вщп ред. А. М. Гродзшський. Киев : Голов, ред. УРЕ, 1989. - 544 с.

70. Лагода, О. В. Лечение нарушений памяти у больных с сосудистыми заболеваниями головного мозга / О. В. Лагода // Рус. мед. журн. 2004. - Т. 12, №22.-С. 1259-1262.

71. Линг, Н. Р. Гемагглютинация и реакции антителозависимого гемолиза. Антитела. Методы / Н. Р. Линг, Д. Кэтти. М. : Мир, 1991. - Кн. 1. - С. 238243.

72. Лубсандоржиева, П. Б. Фитохимическая характеристика листьев бадана толстолистного и получение адаптогенного средства : автореф. дис. . канд. фарм. наук: 15.00.02 / П. Б. Лубсандоржиева. Улан-Удэ, 1997. - 18 с.

73. Лукьянова, Л. Д. Энерготропное, антигипоксическое и антиоксидантное действие флавоноидов / Л. Д. Лукьянова, Э. Л. Германова, А. И. Лыско // Вестн. РАМН. -2007. -№ 2. С. 55-61.

74. Максимова, О. В. Иммуномодулирующая и регенерационная активность лабазника шестилепестного : автореф. дис. . канд. мед. наук: 14.00.36 / О. В. Максимова. Курск, 1999. —21 с.

75. Малин, Д. И. Побочное действие психотропных средств / Д. И. Малин. -М.: Вуз. кн., 2000. 208 с.

76. Машковский, М. Д. Лекарственные средства: в 2 т. / М. Д. Машковский. -М. : Новая Волна, 2002. Т. 1. - 540 с.

77. Метаболические эффекты мексидола в комплексной терапии хронической ишемии мозга / Е. Ю. Демченко и др. // Эксперим. и клинич. фармакология.-2008.-Т. 71, №6. -С. 13-15.

78. Методы биохимического исследования растений / под ред. А. И. Ермакова. Л. : Агропромиздат, 1987. - С. 109-110.

79. Микроэлементозы человека: этиология, классификация, органопатология / А. П. Авцын и др. . М. : Мир, 1991. - 478 с.

80. Минаева, В. Г. Лекарственные растения Сибири / В. Г. Минаева. -Новосибирск : Наука, 1991. 428 с.

81. Морева, Т. А. Некоторые морфологические и биологические особенности видов лабазника, выращиваемых на севере / Т. А. Морева // Труды БИН АН СССР. Растительное сырье. Сер V,- М.; Л. : Изд-во АН СССР, 1961. Вып. 7. -С. 182-219.

82. Морозов, П. В. Новый отечественный препарат «Нооклерин» / П. В. Морозов // Психиатрия и психофармакотерапия. — 2003. Т. 5, № 6. - С. 262267.

83. Муратова, Н. В. Пантокальцин : области клинического применения / Н. В. Муратова // Рус. мед. журн. 2007. - Т. 15, № 10. - С. 868-872.

84. Настойки, экстракты, эликсиры и их стандартизация / под ред. В. Л. Багировой, В. А Северцева. СПб : СпецЛит, 2001. - 223 с.

85. Нейропротективная терапия в неврологической практике / Т. Т. Батышева и др. // Рус. мед. журн. 2007. - Т. 15, № 10. - С. 821-826.

86. Нейропротекторные свойства фитоадаптогенов / Е. В. Бочаров и др. // Вестн. РАМН. 2008. - № 4. - С. 47-50.

87. Нейроэндокринная регуляция иммунитета / П. Н. Учакин и др. // Вестн. РАМН. 2007. - № 9. - С. 26-37.

88. Никифоров, Ю. В. Алтайские травы целители / Ю. В. Никифоров. — Бийск : Катунь, 2002. - 190 с.

89. Ноздрюхина, Л. Р. Нарушение микроэлементного обмена и пути его коррекции / Л. Р. Ноздрюхина, Н. И. Гринкевич. М. : Наука, 1980. - 280 с.

90. Ожигова, М. Г. Количественное определение суммарного содержания флавоноидов в листьях Urtica dioica спектрофотометрическим методом / М. Г. Ожигова, М. В. Богма, JI. С. Теслов // Раст. ресурсы. 2006. - Т. 42, № 2. -С.126-130.

91. Онбыш, Т. Е. Исследование целесообразности совместного применения нейропротекторов с экстрактом гинкго билоба : автореф. дис. . канд. фарм. наук: 14.00.25 / Т. Е. Онбыш. Пятигорск, 2006. - 21 с.

92. Определение антиоксидантной активности растительного сырья методом катодной вольтамперометрии / Е. И. Короткова и др. // Хим.-фармац. журн. 2003. - Т. 37, № 9. - С. 55-56.

93. Определение содержания тяжелых металлов в лекарственном растительном сырье / И. В. Гравель и др. // Фармация. 2008. - № 7. - С. 35.

94. Пат. 2314115 Российская Федерация, МКИ А61 К36/73, Р25/28. Ноотропное средство, обладающее антигипоксической активностью / И. В. Шилова и др. (РФ). № 2006114550/15; заявл. 27.04.06; опубл. 10.01.08, Бюл. № 1. - 6 с.

95. Пат. 2322975 Российская Федерация, МКИ А61 КЗ 1/235, Р31/14. Средство для лечения инфекционных гепатитов, в том числе гепатита С / А. А. Семенов и др. (РФ). № 2006123823/15, заявл. 03.07.06; опубл. 27.04.08, Бюл. № 12.-3 с.

96. Пат. 2347580 Российская Федерация, МКИ А61 К36/28 Р25/28. Средство, обладающее ноотропным действием / И. В. Шилова и др. (РФ). -№ 2007137877/15; заявл. 12.10.07; опубл. 27.02.09, Бюл. №6.-7 с.

97. Пат. 2325179 Российская Федерация, МКИ А61 К36/73 К39/06. Средство, обладающее антиоксидантным действием / Е. А. Краснов и др. (РФ). № 2006141871/15; заявл. 28.11.06; опубл. 27.05.08, Бюл. № 15. - 5 с.

98. Пат. 98107498 Российская Федерация, G01N33/49, G01N33/48, A61N2/08. Средство Сергеева В. Н. для лечения вирусных заболеваний и способ его применения / В. Н. Сергеев (РФ). № 98107498/14; заявл. 21.04.98; опубл. 27.01.00. - 4 с.

99. Пат. 2276992 Российская Федерация, МКИ А61 К36/71 К9/20. Фармацевтический состав, обладающий ноотропной активностью / Е. А. Краснов и др. (РФ). № 20041212/94; заявл. 12.07.04; опубл. 27.05.06, Бюл. № 15.-7 с.

100. Пат. 2354397 Российская Федерация, МКИ А61 К36/28 Р25/10. Средство, обладающее анксиолитическим действием / И. В. Шилова и др. (РФ).-№2007141023/15; заявл. 06.11.07; опубл. 10.05.09, Бюл. № 13.-7 с.

101. Перспективы создания сухих экстрактов / И. А. Самылина и др. // Фармация. 2006. - № 2 . - С. 43-46.

102. Поспелова, М. JI. Антигипоксантное и антиоксидантное действие лекарственных растений как обоснование их применения при деструктивныхзаболеваниях мозга / М. Л. Поспелова, О. Д. Барнаулов // Физиология человека. 2000. - Т. 26, № 1. - С. 100-106.

103. Преч, Э. Определение строения органических соединений. Таблицы спектральных данных / Э. Преч, Ф. Бюльманн, К. Аффольтер. М. : Мир; БИНОМ. Лаборатория знаний, 2006. - 438 с.

104. Пынченков, В. И. Газометрическая установка для анализа антиоксидантов / В. И. Пынченков, С. И. Писарева // Биоантиоксидант: тез. докл. 6 Междунар. конф. М., 2002. - С. 485-486.

105. Пяк, А. И Новый вид рода Olgaea Iljin из секции Apteron Iljin / А. И. Пяк, А. С. Ревушкин // Систем, заметки гербария Томского ун-та. 2000. -Вып. 92.-С. 10-13.

106. Райцес, В. С. Нейрофизиологические основы действия микроэлементов /В. С. Райцес. Л. : Медицина Л.О., 1981. - 152 с.

107. Растительные лекарственные средства / под ред. Н. П. Максютиной. -Киев : Здоров'я, 1985. 280 с.

108. Растительные ресурсы СССР : Цветковые растения, их химический состав, использование. Семейство Asteraceae (Сотро sitae) / под ред. П. Д. Соколова. СПб. : Наука, 1993. - 352 с.

109. Растительные ресурсы СССР : Цветковые растения, их химический состав, использование. Семейства Hydrangeacea — Haloragaceae / отв. ред. А. А. Федоров. Л. : Наука, 1987. - 326 с.

110. Растительные ресурсы СССР : Цветковые растения, их химический состав, использование. Семейства Paeoniaceae — Thymelaeaceae / отв. ред. А. А. Федоров. Л. : Наука, 1985. - 336 с.

111. Растительные ресурсы СССР. Цветковые растения, их химический состав, использование. Семейства Magnoliaceae — Limoniaceae / отв. ред. А. А. Федоров. -JL : Наука, 1984. С. 54-55.

112. Руководство по стандартизации лекарственных средств / под ред. Р.У. Хабриева, В. JI. Багировой, В. Б. Герасимова. М. : Медицина, 2006. - 352 с.

113. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / под ред. Р. У. Хабриева. 2-е изд., перераб. и доп. - М.: Медицина, 2005. - 832 с.

114. Сайфуллина, Н. А. Состав эфирных масел из цветков Filipéndula ulmaria (L.) Maxim., F. denudata (Presl) Fritsch и F. stepposa Juz./ H. A. Сайфуллина, И. С. Кожина // Раст. ресурсы. 1975. - Т.11, вып. 4. - С. 542544.

115. Самылина, И. А. Пути использования лекарственного растительного сырья и его стандартизация / И. А. Самылина, И. А. Баландина // Фармация. -2004.-№2.-С. 39-41.

116. Саратиков, А. С. Экстракт солянки холмовой (лохеин) эффективная защита печени / А. С. Саратиков, А. И. Венгеровский, В. С. Чучалин. — Томск : STT, 2000.- 114 с.

117. Сафонов, В. В. Спектрофотометрический метод определения содержания суммы флавоноидов в лекарственном сырье Caragana spinosa (L.) Vahl. ex Nornen / В. В. Сафонов, E. И. Саканян, E. E. Лесиовская // Раст. ресурсы. 2000. - Т. 36, вып. 2. - С. 129-132.

118. Свиридонов, Г. М. Типологическое распространение и продуктивность полезных растений лесов Северного Алтая / Г. М. Свиридонов // Изв. СО АН СССР. Сер. биол. наук. 1973. - Вып. 1. - С.24-31.

119. Северьянова, Л. А. Современные представления о действии аминокислоты L-лизина на нервную и иммунную регуляторные системы / Л. А. Северьянова, М. Е. Долгинцев // Человек и его здоровье. 2007. — № 2. -С. 67-79.

120. Семенов, А. А. Очерк химии природных соединений / А. А. Семенов. -Новосибирск : Наука. Сиб. изд. фирма РАН, 2000. 664 с.

121. Симоненков, А. П. Современная концепция стресса и адаптации с учетом новых данных в генезе тканевой гипоксии / А. П. Симоненков, В. Д. Федоров // Вестн. РАМН. 2008. - № 5. - С. 7-15.

122. Смирнов, С. В. Что такое OLGAEA ALTAICA (.ASTERACEAE)? / С. В. Смирнов // Turczaninowia. 2001. - Vol. 4, № 4. - С. 18-22.

123. Содержание биологически активных веществ в княжике сибирском / Н. Ф. Козакова и др. // Генетика, селекция, семеноводство и интродукция лесных пород. Воронеж, 1978. - С. 106-108.

124. Состояние и перспективы развития рынка лекарственных средств ноотропного действия / И. В. Шилова и др. // Фармация. 2005. - № 3. - С. 15-17.

125. Спектрофотометрическое определение гидроксикоричной кислоты и ее производных в препаратах эхинацеи / О. А. Запорожец и др. // Хим.-фармац. журн. 2003. - Т. 37, № 12. - С. 11-14.

126. Справочник биохимика / Р. Досон и др.. М. : Мир, 1991. - 544 с.

127. Суслов, Н. И. Патогенетическое обоснование психофармакологических эффектов препаратов природного происхождения : дис. . д-ра мед. наук: 14.00.16; 14.00.25 / Н. И. Суслов. Томск, 1995. - 406 с.

128. Сырчина, А. И. Исследование химического состава Cirsium cetosum (Willd.) Bess. / А. И. Сырчина, А. А. Семенов, С. В. Зинченко// Раст. ресурсы. 1998. - Т. 34, вып. 2. - С. 47-49.

129. Тимохина, С. A. Atragene L. княжик / С.А. Тимохина // Флора Сибири. - Новосибирск : ВО. Наука, 1993. - Т. 6. - С. 155-156.

130. Титова, Н. В. Современный взгляд на ноотропную терапию / Н. В. Титова//Рус. мед. журн. 2007. - Т. 15, №24.-С. 1846-1850.

131. Ткалич, С. М. Некоторые общие закономерности содержания химических элементов в золе растений / С. М. Ткалич // Биогеохимические поиски рудных месторождений. Улан-Удэ : Изд-во СО АН СССР, 1969. - С. 83-90.

132. Тканевая гипоксия, вызванная нитропруссидом натрия, и её коррекция растительными средствами / С. Г. Аксиненко и др. // Бюл. эксперим. биологии и медицины. 2007. - Прил. 1. - С. 49-53.

133. Турищев, С. Н. Формирование вектора психического комфорта фитосредствами / С. Н. Турищев // Врач. 2008. - № 3. - С. 43-45.

134. Уланова, К. П. Сравнительные исследования флавоноидов в дальневосточных видов Clematis L. и Atragene L. / К. П. Уланова, Н. М. Зайцева // Раст. ресурсы. 1979. - Т. 15, вып. 2. - С. 277-280.

135. Фармакогнозия. Атлас / И. А. Самылина и др.. М. : ГЭОТАР-Медиа, 2009.-Т. 3.-496 с.

136. Фармакологическая активность и компонентный состав экстракта подземной части Filipéndula ulmaria (Rosaceae) / В. Г. Пашинский и др. // Раст. ресурсы. 2006. - Т. 42, вып. 1. - С. 114-119.

137. Фармакологические свойства галеновых препаратов из цветков Filipéndula ulmaria (L.) Maxim / О. Д. Барнаулов и др. // Раст. ресурсы. — 1979. Т. 15, вып. 3. - С. 399-407.

138. Фармакология ноотропов. Экспериментальное и клиническое изучение / под ред. А. В. Вальдмана, Т. А. Ворониной. М. : ВИНИТИ, 1989. - 139 с.

139. Фармакоэкономическая эффективность лекарственных средств, влияющих на центральную нервную систему / А. И. Венгеровский и др.. -Новосибирск, 2000. 156 с.

140. Федосеева, JI. М. Экспериментально-теоретическое обоснование использования бадана толстолистного флоры Сибири в качестве лекарственного сырья : автореф. дис. . д-ра фарм. наук: 15.00.02 / JI. М. Федосеева. Пермь, 2001. - 38 с.

141. Федотова, Ю. О. Влияние сухого очищенного экстракта корней солодки голой на обучение овариоэктомированных крыс / Ю. О. Федотова, В. А. Крауз, А. А. Папковская // Хим.-фармац. журн. 2005. - Т. 39, № 8. - С. 27-29.

142. Фурса, Н. С. Определение фенольных соединений мази «Ледум» / Н. С. Фурса, М. С. Коротаева // Фармация. 2006. - № 2. - С. 7-9.

143. Хамидуллина, Е. А. Низкомолекулярные фенольные компоненты из почек Pinus sibirica Du Tour / E. А. Хамидуллина, С. В. Федоров, С. А. Медведева // Раст. ресурсы. 2004. - Т. 40, № 2. - С. 73-79.

144. Химический анализ лекарственных растений / под ред. Н. И. Гринкевич, Л. Н. Сафронич. М. : Высш. шк., 1983. - 176 с.

145. Химический состав и биологическая активность фракции экстракта лабазника вязолистного / И. В. Шилова и др. // Хим.-фармац. журн. 2009. -Т. 43, № 4. - С. 7-11.

146. Химический состав и первичная оценка фармакологических свойств препаратов из цветков Filipéndula ulmaria (L.) Maxim. / О. Д. Барнаулов и др. //Раст. ресурсы. — 1977. Т. 13, вып. 4. - С. 661-669.

147. Хроматография : практическое приложение метода / под ред. Э. Хефтмана. М. : Мир, 1986. - Ч. 1, 2. - 659 с.

148. Хроматоспектрофотометрическое определение арбутина в листьях Bergenia crassifolia (L.) Fritsch. / П. Б. Лубсандоржиева и др. // Хим.-фармац. журн. 2000. - Т. 34, № 5. - С. 38-40.

149. Черепанов, С. К. Сосудистые растения России и сопредельных государств (в пределах бывшего СССР) / С. К. Черепанов. СПб : Мир и семья-95, 1995.-С. 859.

150. Чучалин, В. С. Гепатопротекторные средства растительного происхождения и новые возможности их использования : метод, рек. для врачей, провизоров и студентов мед. вузов / В. С. Чучалин. Новосибирск : ЦФИ, 2003. - 40 с.

151. Шанцер, И. А. Лабазники / И. А. Шанцер. М. : Армада-пресс, 2001. -32 с.1Ч

152. Шашков, А. С. Спектроскопия С-ЯМР в химии углеводов и родственных соединений / А. С. Шашков, О. С. Чижов // Биоорг. химия. — 1976. Т. 2, № 4. - С. 437-497.

153. Шеедер, Т. X. Оценка содержания биологически активных веществ в коре и хвое тиса ягодного методом хроматомасс-спектрометрии / Т. X. Шеедер // Эколог. Вестн. Северн. Кавказа. 2005. - № 2. - С. 112-119.

154. Шилова, И. В. Адаптогенные и ноотропные свойства густого экстракта из надземной части Atragene speciosa Weinm. / И. В. Шилова, Н. И. Суслов, Е. А. Краснов // Раст. ресурсы. 2001. - Т. 37, вып. 3. - С. 78-88.

155. Шилова, И. В. Исследование биологически активных веществ Atragene speciosa Weinm. / И. В. Шилова // Бюл. Сиб. медицины. — 2002. — № 2. — С. 35-39.

156. Шилова, И. В. Рациональные подходы к поиску и созданию ноотропных средств растительного происхождения / И. В. Шилова // Вестн. РУДН. Сер. Медицина. 2007. - № 6. - С. 236-240.

157. Шилова, И. В. Химико-фармакологическое изучение активной фракции Atragene speciosa Weinm. / И. В. Шилова, Н. И. Суслов, Е. А. Краснов // Бюл. СО РАМН. 2001. - Т. 101, № 3. - С. 44-49.

158. Шилова, И. В. Химическое исследование экстракта альфредии поникшей, обладающего ноотропными свойствами / И. В. Шилова, Н. В.

159. Кувачева // Медицина в Кузбассе. Проблемы медицины и биологии. 2009. -Спецвып.- № 3. - С. 188.

160. Шлемник байкальский. Фитохимия и фармакологические свойства / Е. Д. Гольдберг и др.. Томск : Изд-во Томского ун-та, 1994. - 222 с.

161. Шретер, А. И. Лекарственная флора Советского Дальнего Востока / А. И. Шретер. -М.: Медицина, 1975. 327 с.

162. Эколого-геохимические особенности природных сред Томского района и заболеваемость населения / Л. П. Рихванов и др.. Томск, 2006. - 215 с.

163. Элементный состав надземной части Atragene speciosa Weinrn. / И. В. Шилова и др. // Раст. ресурсы. 2002. - Т. 38, вып. 4. - С. 69-74.

164. Юзепчук, С. В. Семейство Rosaceae / С. В. Юзепчук // Флора СССР. -М.; Л. : Изд-во АН СССР, 1941. -Вып. 10. С. 279-289.

165. Amino acid and glycine betaine accumulation in cold — stressed wheat seedlings / B. P. Naidu et al. // Phytochem. 1991. - Vol. 30, № 2. - P. 407-409.

166. An HPLC screening of some Italian Ranunculaceae for the lactone protoanemoninum / A. Bonora et al. // Phytochem. 1987. - Vol. 26, № 8. - P, 2277-2279.

167. Anke, M. Mengen- und Spurenelemente / M. Anke. Jena : Schiller -Universität, 1998. - 1055 c.

168. Anthocyanin fraction from potato extracts is cytotoxic to prostate cancer cells through activation of caspase-dependent and caspase-independent pathways / L. Reddivari et al. // Carcinogen. 2007. - Vol. 28, № 10. - P. 2227-2235.

169. Antimicrobical effects of Finnish Plant extract containing flavonoids and ather phenolic compounds / I.-P. Ranha et al. // Internat. J. Food Microbiol. -2000.-Vol. 56, Iss. l.-P. 3-12.

170. Antioxidant Activity of Plants Extracts Containing Phenolic Compounds / M. P. Kahkonen et al. // J. Agric. Food Chem. 1999. - Vol. 47, №10. - P. 3954-3962.

171. Antioxidant and Antiproliferative Activities of Common Vegetables / Yi-F. Chu et al. // J. Agric. Food Chem. 2002. - Vol. 50, № 23. - P. 6910-6916.

172. Antioxidative action of flavonoids, quercetin and catechin, mediated by the activacion of glutathione peroxidase / H. Nagata et al. // Tokai J. Experim. Clin. Med.- 1999.- Vol. 24, №1.- P. 1-11.

173. Anti-stress effects of Ginkgo biloba and Panax ginseng : a comparative study / D. Rai et al. // J. Pharmacol. Sci. 2003. - Vol. 93, № 4. - P. 458-464.

174. Araliasaponins I-XI, triterpene saponins from the roots of Aralia decaisneana / T. Mivase et al. // Phytochem. 1996. - Vol. 41, № 5. - P. 14111418.

175. Arora, A. Structure-activity relationships for antioxidant activities of a series of flavonoids in a liposomal system / A. Arora, M.G. Nair, G.M. Strasburg // Free Radic. Biol. Med. 1998. - Vol. 24, № 9. - P. 1355-1363.

176. Arvensoside A and B, triterpenoid saponins from Calendula arvensis / R. Chelmi et al. //Phytochem. 1987. - Vol. 26, № 6. - P. 1785-1788.

177. Behavioural responses of western flower thips, Francliniella occidentalis (.Pergande), to volatiles from three aromatic plants / T. D. Chermenskaya et al. // Inset Sci. its Appl. 2001. - Vol. 21. № 1. - P. 67-72.

178. Bioavailably of flavonoids and potential bioactive forms in vivo / C. Rice-Evans et al. // Drug Metab. Drug. Interact. 2001. - Vol. 17. - P. 291-310.

179. Bliss, T. V. P. A synaptic model of memory: long term potentiation in the hippocampus / T. V. P. Bliss, G. L. Collingridge // Nature. - 1993. - Vol. 361, N 6407.-P. 31-39.

180. Borsini, F. Is the forced swimming test a suitable model for revealing antidepressant activity / F. Borsini, A. Meli // Psychopharmacol. 1988. - Vol. 94, №2.-P. 147-160.

181. Boullata, J. I. Safely Issues with Herbal Medicine / J. I. Boullata, A. M. Nace // Pharmacother. 2000. - Vol. 20, № 3. - P. 257-269.

182. Bowen, H. J. M. Trace elements in biochemistry / H. J. M. Bowen. — New-York; London : Academic Press, 1966. 241 p.

183. Brady, J. V. Subcortical mechanisms in emotional behavioral affective changes following septal forebrain lesions in albino rat / J. V. Brady, W. J. H. Nauta// J. comp. phisiol. psychol. 1953. - Vol. 46, № 3. -P. 339-341.

184. Breitmaier, E. Carbon-13 NMR Spectroscopy / E. Breitmaier, W. Voelter. -Weinheim : VCH, 1986. 450 p.

185. British Herbal Pharmacopoeia. Bournemouth : BHMA, 1983. - P. 131132.

186. Catapano, A. L. Antioxidant effect of flavonoids / A. L. Catapano // Angiol. 1997.-Vol. 48.-P. 39-44.

187. Cellular protection with proanthocyanidins derived from grape seeds / D. Bagchi et al. // Ann. N. Y. Acad. Sci. 2002. - Vol. 957. - P. 260-270.

188. Charney, D. S. Psychobiological Mechanisms of Resilence and Vulnerability: Implications of Successful Adaptation to Extreme Stress / D. S. Charney // Am. I. Psychiatry. 2004. - Vol.161, No. 2. - P. 195-216.

189. Chen, J. H. Antioxidant Activities of Caffeic Acid and Its Related Hydroxycinnamic Acids Compounds / J. H. Chen, C. T. Ho // J. Agric. Food Chem. 1997. - Vol. 45, № 7. - P. 2374-2378.

190. Chinna, C. Current clinical aspects of ginseng research / C. Chinna // Österreich. Apotek.-Zeit. 1992. - Bol. 19, № 46. - S. 377-381.

191. Chromatografic study of Filipendulae hexapetalae Flores polyphenols / M.-L. Popescu et al. // Farmacia (Ronania). 2003. - Vol. 51, № 4. -P. 92-98.

192. CNS acetylcholine receptor activity in European medicinal plants traditionally used to improve falling memory / G. Wake et al. // J. Ethnopharmacol. -2000. № 69. - P. 105-114.

193. Comporative methodology for isolation of flavonoid glycosides from Clusia criuva Cambess / L. M. Chedier et al. // HRC J. Hign Resolut. Chromatog. -1999. Vol. 22, № 9. - P. 527-530.

194. Contestabile, A. Antioxidant strategies for neurodegenerative diseases / A. Contestabile // Expert Opin. Ther. Pat. 2001. - Vol. 11. - P. 573-585.

195. Contrasting influences of glucuronidation and O-methylation of epicatechin on hydrogen peroxide induced cell death in neurons and fibroblast / J. P. Spencer et al. //Free Radic. Biol. Med.-2001.-Vol. 31.-P. 1139-1146.

196. Cummings, J. Dementia : Molecules, Methods and Measures / J. Cummings // J. Neuropsychiatry Clin. Neurosci. 1993. - Vol. 5. - P. 229-230.

197. Cunningham, A. J. A method of increased sensitivity for detecting single antibodyforming cells / A. J. Cunningham //Nature. 1965. - Vol. 207, № 5001. -P. 1106-1107.

198. Cuvelier, M. E. Antioxidative activity and phenolic composition of pilotplant and commercial extracts of sage and rosemary / M. E. Cuvelier, H. Richard, C. Berser//J. Amer. Oil Chem. Soc. 2002. - Vol. 162. - P. 981-987.

199. DeFeudis, F. V. Ginkgo biloba extract (EGb 761) and CNS functions: basic studies and clinical applications / F. V. DeFeudis, K. Drieu // Curr. Drug Targ. -2000. Vol. 1, № 1. - P. 25-58.

200. Determination of naringenin and its glucuronide conjugate in rat plasma and brain tissue by hight-performance liquid chromatography / H. W. Peng et al. // J. Chromatogr. 1998. - Vol. 714. - P. 369-374.

201. Effects of Eleven Flavonoids from the Osteoprotective Fraction of Drynaria fortunei (KUNZE) J. SM. on Osteoblastic Proliferation Using an Osteoblast-Like Cell Line / X.-L. Wang et al. // Chem. Pharm. Bull. 2008. - Vol. 56, № 1. - P. 46-51.

202. Effects of Ginkgo biloba Extract (EGb 761) on the Central Nervous System / Y. Lamour et al. ; Eds. by Y. Christen, J. Costentin, M. Lacour. Paris: Elsevier, 1992.-P. 19-25.

203. Effects of phosphatidylserine in Alzheimer's disease / T. Crook et al. // Psychopharmacol. Bull. 1992. - Vol. 28, № 1. - P. 67-70.

204. Enel, V. Distribution of heavy metals in plats and their habitats in the outcrop area of Dictyonema oil shale, Estonia / M. Enel // Oil Shale. 2003. - Vol. 20, № 4. - P. 459-476.

205. European herbs with cholinergic activities: potential in dementia therapy / N. Perry et al. // Int. J. Geriatric. Psychiatry. 1996. - № 11. - P. 1063-1069.

206. Evaluation of a soluble tetrazolium/formazan assay for cell growth and drug sensitivity in culture using human and other tumor cell lines / D. A. Scudiero et al. // Cancer Res. 1988. - Vol. 48, № 17. - P. 4827-4833.

207. Falinska, K. Gene disintegration in Filipéndula idmaria : Consequences for population dynamics and vegetation succession / K. Falinska // J. Ecot. 1995. -Vol. 83, №1. p. 9-21.

208. Flavonoid characterization and in vitro antioxidant activity of Aconitum anthora L. (Ranunculaceae) / C. Mariani et al. // Phytochem. 2008. - Vol. 69, № 5. - P.1220-1226.

209. Flavonoid derivatives as adenosine receptor antagonists: a comparison of the hypothetical receptor binding site based on a comparative field analysis model / S. Moro et al. // J. Med. Chem. 1998. - Vol. 41. - P. 46-52.

210. Flavonoids and the central nervous system: from forgotten factors to potent anxiolytic compounds / F. C. Paladini et al. // J. Pharm. Pharmacol. 1999. -Vol. 51, №5.-P. 519-526.

211. Flavonoids protect neurons from oxidized low-density lipoprotein-induced apoptosis involving JNK, c-jun, and caspase-3 / H. Schroeter et al. // Biochem. J. 2001. - Vol. 358. - P. 547-557.

212. Flight, I. Cereal grains and legumes in the prevetion of coronary heart disease and stroke : a review of the literature / I. Flight, P. Clifton // Eur. J. Clin. Nutr. 2006. - Vol. 60, № 10. - P. 1145-1159.

213. Fortschrittte der Chemie organischer naturstoffe / begründet von L. Zechmeister. Wien : Springer-Verlag, 1974. - Vol. 31. - S. 649.

214. Free Radical Scavenging Activities Measured by Electron Spin Resonance Spectroscopy and B16 Cell Antiproliferative Behaviors of Seven Plants / C.-A. Calliste et al. // J. Agric. Food Chem. 2001. - Vol. 49, № 7. - P. 3321-3327.

215. Free Radical Scavenging and Hepatoprotective Actions of the Medicinal Herb, Crassocephalum crepidioides from the Okinawa Islands / Y. Aniya et al. // Biol. Pharm. Bull. 2005. - Vol. 28, No. 1. - P. 19-23.

216. Gebhardt, R. Oxidative stress, plant-derived antioxidants and liver fibrosis / R. Gebhardt // Planta Med. 2002. - Vol. 68. - P. 289-296.

217. Giurgea, C. E. The nootropic concept and its prospective implication / C. E. Giurgea // Drug Develop. Res. 1982. - Vol. 2. - P. 441-446.

218. Haffner, E. On the phylogeny of the subtribe Carduinae (tribe Cardueae, Compositae) / E. Haffner // Englera. -2000. Vol. 21. - P. 1-209.

219. Halliwell, B. Reactive oxygen species and the central nervous system / B. Halliwell // J. Neurochem. 1992. - Vol. 59. - P. 1609-1623.

220. Harborne, J. B. The flavonoids / J. B. Harborne, T. J. Mabry, H. Mabiy. -London : Chapman and Hall, 1975. 1197 p.

221. He, Z.-D. Brandioside, a phenylpropanoid glycoside from Brandisia hangel / Z.-D. He, C.-R. Yang // Phytochem. 1991. - Vol. 30, № 2. - P. 701-702.

222. Hegnauer, R. Chemotaxonomie der Pflanzen / R. Hegnauer. Basel; Stuttgart: Birkhaser Verlag, 1973. - 728 s.

223. Henon, H. Poststroke dementia / H. Henon, F. Pasquier, D. Leys // Cerebrovasc. Dis. 2006. - Vol. 22. - C. 61 -70.

224. Hippocampal excitatory amino acid receptors in elderly, normal individuals and those with Alzheimer's disease: non—N-methyl-D-aspartate receptors / J. W. Geddes et al. //Neurosci. 1992. - Vol. 50, N 1. - P. 23-34.

225. Horhammer, L. Uber die Flavonglikoside der Gattungen Filipéndula und Spiraea ¡ L. Horhammer, R. Hansel, W. Endres // Arch. Pharmaz. — 1956. № 3. -P. 133-140.

226. Hsu, H. Y. Effect of oleanolic acid and on inhibiting tumor growth and enhancing the recovery of hematopoietic system postradiation in mice / H. Y. Hsu, J. J. Yang, C. C. Lin // Cancer Lett. 1997. - Vol. 111. - P. 7-13.

227. Huguent, A. I. Superoxide Scavenging of Flavonoids in a Non-Enzymic System / A. I. Huguent, S. Manez, M. J. Alcaraz // Z. Naturforsch. (Verlag der Zeitschrift fur Naturforschung). 1990. - 45c. - P. 19-24.

228. Immunomodulatory Activities of Flavonoids, Monoterpenoids, Triterpenoids, Iridoid Glycosides and Phenolic Compounds of Plantago Species / L.-C. Chiang et al. // Planta Med. 2003. - Vol. 69. - P. 600-604.

229. Induction of Apoptosis in Cancer Cells by Bilberry (Vaccinium myrtillus) and the Anthocyanins / N. Katsube et al. // J. Agrie. Food Chem. 2003. - Vol. 51, № 1,-P. 68-75.

230. Inhibitory effect of femlic acid on macrophage inflammatory protein-2 production in murine macrophage cell line, Raw 264.7 / S. Salcai et al. // Cytokine. 1997. - Vol 9. - P. 242-248.

231. Intake of flavonols and flavonones and the risk of coronary heart disease in male smokers / T. Hirvonen et al. // Epidemiology. 2000. - Vol. 12. - P. 62-67.

232. Interaction of human NAD(P)H : quinone oxidoreductase 1 (NQO 1) with the tumor suppressor protein p53 in cells and cell-free systems / A. Anwar et al. // J. Biol. Chem. -2003. Vol. 278. - P. 10368-10373.

233. Ishige, K. Flavonoids protect neuronal cells from oxidative stress by three distinct mechanisms / K. Ishige, D. Schubert, Y. Sagara // Free Radic. Biol. Med. -2001. Vol. 30. - P. 433-446.

234. Isolation and identification of arctiin and arctigenin in leaves of burdock {Arctium lappa L.) by polyamide column chromatography in combination with HPLC-ESIsol.MS / S. Liu [et al.] 11 Phytochem. Anal. 2005. - Vol. 16, № 2. -P. 86-89.

235. Isolation and measurement of quercetin glucosides in flower buds of Japanese butterbur {Petasites japonicus supsp. gigantean Kitam.) / H. Mitsuura et al. // Biosci. Boitechnol. Biochem. 2002. - Vol. 66. - P. 1571-1575.

236. Jang, Y. P. Neuroprotective Dibenzylbutirolactone Lignans of Torreya nucifera / Y. P. Jang, S. R. Kim, Y. C. Kim 11 Planta med. 2001. - Vol. 67. - P. 470-472.

237. Kanchanapoom, T. Phenolic glycosides from Barnettia kerrii / T. Kanchanapoom, R. Kasai, K. Yamasaki // Phytochem. 2002. - Vol. 59. - P. 565570.

238. Kazmi, S. M. A. Revision der Gattung Carduus {Compositae). Teil II / / S. M. A. Kazmi // Mitt. Bot. Munchen, 1964. S. 279-550.

239. Kelley, A. E. The Neuroscience of Natural Rewards : Relevance to Addictive Drugs / A. E. Kelley, K. C. Berridge // J. Neurosci. 2002. - Vol. 22. -P. 3306-3310.

240. Kennedy, D. S. The psychopharmacology of European herbs with cognition-enhancing properties / D. S. Kennedy, A. B. Scholey // Curr. Parm. Des. 2006. -Vol. 35, № 12. - P. 4613-4623.

241. Kern, J. R. Native American medicinal plants. Anemonin from the horse stimulant Clematis hirsutissima / J. R. Kern, J. H. Cardellina // J. Ethnopharmacol. 1983.-Vol. 8, № l.-P. 121-123.

242. Keturkiene, A. Filipéndula ulmaria (L.) Maxim, tincture toxicity studies in rats / A. Keturkiene, L. Leonaviciene, D. Vaitkine // Baltic J. Lab. Anim. Sci. — 2002.-Vol. 12.-P. 62-67.

243. Kontos, H. A. Oxygen radicals in cerebral ischemia / H. A. Kontos // Stroke. 2001. - Vol. 32. - P. 712-716.

244. Lignans isolated from valerian: identification and characterization of a new olivi derivative with partial agonistic activity at Al adenosine receptors / B. Schumacher et al. // J. Nat. Prod. 2002. - № 65. - P. - 1479-1485.

245. Lindeman, A. The aroma composition of the flower of meadowsweet (Filipéndula ulmaria (L.) Maxim.) / A. Lindeman, P. Jounela-Eriksson, M. Lounasmaa // Lebensmitt.-Wiss. + Technol. 1982. - Vol. 15, № 5. - P. 286289.

246. Liu, Y. Enteric disposition and recycling of flavonoids and ginkgo flavonoids / Y. Liu, Y. Dai // J. Altem. Complement. Med. 2003. - Vol. 9, № 5. -P. 631-640.

247. Mabry, T. J. The systematic identification of flavonoids / T. J. Mabry, K. R. Markham, M. B. Thomas. Berlin; New York : Heidelberg; Springer-Verlag, 1970.-343 p.

248. Major depressive disorder with psychotic features induced by interferon-aipha treatment for hepatitis C in a polydrung abuser / O. A. Kalyoncu et al. // J. Psychopharmacol. 2005. - Vol. 19, № 1. - P. 102-105.

249. Mondadori, C. Elevated corticosteroid levels block the memory improving effects of nootropics and cholinmimetics / C. Mondadori, T. Ducret, A. Mausler // Psychopharmacol. - 1992. - Vol. 108, N 1-2. - P. 11-15.

250. Mondadori, C. The pharmacology of the nootropics, new insights and new questions / C. Mondadori // Behav. Brain. Res. 1993. - Vol. 59, N 1-2. - P. 1-9.

251. Neuroactive flavonoids: new ligands for the benzodiazepine receptor / J. H. Medina et al. // Phytomed. 1998. - Vol. 5. - P. 235-243.

252. Neuroprotective effect of green tea extract in experimental ischemia-reperfusion brain injury / J. Hong et al. // Brain Res. Bull. 2000. - Vol. 53. - P. 743-749.

253. Nobuyoschi, N. Beneficial effects of S-113 m, a novel herbal prescription, on learning impairment model in mice / N. Nobuyoschi, W. Yuan-Liang, S. Hiroshi // Biol, and Pharm. Bull. 1995. - Vol. 18, № 11. - P. 1498-1503.

254. Novel biomarkers of the metabolism of caffeic acid derivatives in vivo / A. R. Rechner et al. // Free Radic. Biol. Med. 2001. - Vol. 30. - P. 1213-1222.

255. Okolowicz, M. Heavy metals in the organic soils and tissues of forest floor plants in alder carr sites of Kampinos National Park / M. Okolowicz // Ann. Warsaw Agric. Univer. Agric.- 2001. № 39. - P. 59-69.

256. Okuyama, S. Action of nootropic drugs on transcallosal responses in rats / S. Okuyama, H. Aihara // Neuropharmacol. 1988. - Vol. 27. - P. 67-72.

257. Overton, D. A. Histological context of state-dependent learning and discriminative drug effects / D. A. Overton // Behav. Pharmacol. 1991. - Vol. 2. -P. 253-264.

258. Pasich, B. Flores Spiraeae ulmaria. Studium farmakognostyczne / B. Pasich // Acta Polon. Pharm. 1953. - Vol. 10, № 1. - P. 67-81.

259. Petkov, V. D. Effect of standardized ginseng extract on learning, memory and physical capabilities / V. D. Petkov, A. N. Mosharrof // Amer. J. Chin. Med. -1987.-Vol. 15, N 1-2.-P. 19-29.

260. Petkov, V. D. Medical plants as cognitive enhancers / V. D. Petkov, A. N. Mosharrof// Phsychophannacol. 1988. - Vol. 96, N 1. - P. 44-47.

261. Phenilethanoid glycosides from Plantado asiatica / T. Mivase et al. // Phytochem. 1991. - Vol. 30, № 6. - P. 2015-2018.

262. Phenolic antioxidants attenuate neuronal cell death following up take of oxidized low-density lipoprotein / H. Schroeter et al. // Free Radie. Biol. Med. — 2000.-Vol. 29.-P. 1222-1233.

263. Pietruck, F. Effect of quercetin on hypoxic injury in freshly isolated rat-proximal tubules / F. Pietruck, M. K. Kuhlmann, B. Lange // J. Lab. Clin. Med. -2003.-Vol. 142, №2.-P. 106-112.

264. Planells, E. Vitamin B6 and B12 and totale status in an adult Meditterranean population / E. Planells, C. Sanchez, M. A. Montellano // Eur. J. Clin. Nutr. -2003.-Vol. 57.-P. 775-785.

265. Polyunsaturated fatty acids are potent neuroprotectors /1. Lauritzen et al. // The European Molecular Biology Organization J. 2000. - Vol. 19, № 8. - P. 1784-1793.

266. Pomeranthz, J. M. Risk Versus Benefit of Benzodiazepines / J. M. Pomeranthz // Psychiatric. Times. 2007. - Vol. 24, № 7. - P. 122-131.

267. Poukeus-Renwart, P. Densitometrie evaluation of spiraeoside after derivatization in flowers of Filipéndula ulmaria (L.) Maxim. / P. Poukeus-Renwart, M. Tits, I.-N. Wauters // J. farm. Biomed. Anal. 1992. - Vol. 10, Iss. 10-12.-P. 1085-1088.

268. Pradhan, S. C. Hepatoprotective herbal drug, silimarin from experimental pharmacology to clinical medicine / S. C. Pradhan, C. Girish // Ind. J. Med. Res. -2006. Vol. 124. - P. 491-504.

269. Pre-existing hypertension and the impact of stroke on cognitive function / J. S. Elkins et al. // Ann. Neurol. 2005. - Vol. 58. - C. 68-74.

270. Protective and rescuing abilities of IGF-1 and some putative free radical scavengers against beta-amyloid toxicity in neurons I S. Dore et al. // Ann. NY Acad. Sei. 1999. - Vol. 890. - P. 356-364.

271. Protective effect of catechin agains beta-amyloid toxicity in hippocampal neurons and PC 12 cells / K. Shinya et al. ft J. Neurochem. 1997. - Vol. 69. -P. 41-42.

272. Protective effect of green tea extract on ischemia/reperfusion-induced brain injury in Mongolian gerbils / J. Hong et al. // Brain Res. 2001. - Vol. 888. - P. 11-18.

273. Radical Scavenger Activity of Phenylethanoid Glycosides in FMLP Stimulated Human Polymorphonuclear Leucocytes : Structure-Activity Relationship / J. Heilmann et al. // Planta Med. 2000. - Vol. 66. - P. 746-748.

274. Research of Filipendulae hexapitalae Flores products / M.-L. Popescu et al. // Farmacia (Romania). 2002. - Vol. 50, № 2. -P. 34-38.

275. Seyoum, A. Structure-radical scavenging activity relationships of flavonoids / A. Seyoum, K. Asres, F. K. El-Fiky // Phytochem. 2006. - Vol. 67, № 18. - P. 2058-2070.

276. Shimomura, H. Gyanosenic and phenylpropanoid glycosides from Prunus grayana / H. Shimomura, Y. Sashida, T. Adachi // Phytochem. 1987. - Vol. 26, № 8. - P. 2363-2366.

277. Six glycosides from Rehmannaia glytinosa var. purpurea / H. Nishimura et al. // Phytochem. 1990. - Vol. 29, № 10. - P. 3303-3306.

278. Smolaze, H. D. Chromatografic analysis of phenolic acids in F. ulmaria (L.) Maxim, and F. hexapetalci Gilib. / H. D. Smolaze, A. Sokolowska-Wozniak // Chem. Environm. Res. 2003. - Vol. 12, № 1. - P. 77-82.

279. Smolaze, H. D. High-performance liquid chromatographic determination of flavonoids in Filipéndula hexapetala Gilib. / H. D. Smolaze, T. H. Dzido, A. Sokolowska-Wozniak // Act. Polon. Pharmaceut. Drug res. - 1999. - Vol. 56, № 2.-P. 169-172.

280. Staniforth, V. Caffeic acid suppresses UVB radiation-induced expression of interleukin-10 and activation of mitogen-activated protein kinases in mouse / V. Staniforth, Lu-T. Chiu, N.-S. Yang // Carcinogen. 2006. - Vol. 27, № 9. - P. 1803-1811.

281. Structure activity relationship and molecular modeling analysis of flavonoids binding to the benzodiazepine site of the rat brain GABA receptor complex / K. Dekermendjan et al. // J. Med. Chem. 1999. - Vol. 42. - P. 4343-4350.

282. Structure-activity relationships of flavonoids for vascular relaxation in porcine coronary artery / Y. C. Xu et al. // Phytochem. 2007. - Vol. 68, № 8. -P. 1179-1188.

283. Sumner, C. R. Pharmacogenetics of Psychotropic Drugs / C. R. Sumner // Psychiatr. Serv. 2004. - Vol. 55. - P. 93-96.

284. Takagi, K. Natural products for inhibiting aldose reductase / K. Takagi // Jpn. Kokai Tokkyo Koho JP. A61K 35/78. 2002. - № 255 083.-6 p.

285. The antioxidative property of green tea against iron-induced oxidative stress in rat brain / A. Lin et al. // Chin. J. Physiol. 1998. - Vol. 41. - P. 189-194.

286. The ginkgo biloba extract (Erb 761) protects hyppocampal neurons against cell death induced by beta-amyloid / S. Bastianetto et al. // Eur. J. Neurosci. — 2000.-Vol. 12.-P. 1882-1890.

287. Thieme, H. Isolierung eines neuen phenolischen Glykosids aus den Bluten von Filipéndula ulmaria (L.) Maxim. / H. Thieme // Pharmaz. 1966. — Vol. 21, № 2. - S. 123.

288. Thieme, H. Isolierung und Strukturaufklarung des Spiraeins, eines Phenolglykosids aus den Bluten von Filipéndula ulmaria (L.) Maxim. / H. Thieme //Pharmaz. 1965. - Vol. 20, № 2. - S. 113-114.

289. Tribal and Subtribal Delimitation and Phylogeny of the Cardueae (Asteraceae) : A Combined Nuclear and Chloroplast DNA Analysis / N. Garcia-Jacas et al. // Molecul. Phylogen. Evolution. 2002. -Vol. 22, № 1. - P. 51-64.

290. Tsai, T. H. Determination of unbound hesperetin in rat blood and brain by microdialysis coupled to microbore liquid chromatography / T. H. Tsai, Y. E. Chen //J. Food Drug. Anal.-2000.-Vol. 8.-P. 331-336.

291. Validation of analytical procedures: methodology Q2B / Intern, conf. on harmonization of technical requirements for registration of pharmaceuticals for human use. Geneva : ICH Secretariat, 1996. - 8p.

292. Wang, H. Structure-activity relationships of quercetin in antagonizing hydrogen peroxide-induced calcium dysregulation in PC 12 cells / H. Wang, J. A. Joseph // Free Radie. Biol. Med. 1999. - Vol. 27. - P. 683-694.

293. Wang, Y.-J. Phylogenetic Origins of the Himalayan Endemic Dolomiaea, Diplazoptilon and Xanthopappus (Asteraceae : Cardueae) Based on Three DNA Regions / Y.-J. Wang, J.-Q. Liu, G. Miehe // Ann. Bot. 2007. - Vol. 99, № 2. -P. 311-322.

294. Watanabe, H. H. Candidates for cognitive enhancer extracted from medicinal plants : Paeoniflorin and tetramethilpyrazine / H. H. Watanabe // Behav. Brain. Res. 1997.-Vol. 83, N 1-2.-P. 135-141.

295. Windisch, M. Cognition-Enhancing (Nootropic) Drugs. Brain mechanisms and psychotropic drugs. New York; London; Tokyo, 1996. - P. 239-257.

296. Wiss, R. A. Dopamine, learning and motivation / R. A. Wiss // Nature Rev. Neurosci. 2004. - № 5. - P. 483-494.

297. Yamanobe, Y. Extracts from Uncaria gambler, Psidium guajava and Filipéndula as lipase inhibitors / Y. Yamanobe, F. Hattori, K. Shimomura // Chem. Abst. 2000. - Vol. 132, № 19. - 246370e.

298. Yao, X. H. Protective effects and its mechanism of panaxatriol saponins isolated from Panax notoginseng on cerebral ischemia / X. H. Yao, X. J. Li // Zhongguo Zhong Yao Za Zhi. 2002. - Vol. 27, № 5. - P. 371-373.

299. Yuan, J. Apoptosis in the nervous system / J. Yuan, B. Yancuer // Nature. -2000. Vol. 407. - P. 802-809.

300. Zeylstra, H. Filipéndula ulmaria / H. Zeylstra // Br. J. Phytother. 1998. — №5.-P. 8-12.

301. РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ МЕДИЦИНСКИХ НАУК МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ И СОЦИАЛЬНОГО РАЗВИТИЯ1. РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

302. УЧРЕЖДЕНИЕ РОССИЙСКОЙ АКАДЕМИИ МЕДИЦИНСКИХ НАУК НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ФАРМАКОЛОГИИ

303. СИБИРСКОГО ОТДЕЛЕНИЯ РОССИЙСКОЙ АКАДЕМИИ МЕДИЦИНСКИХ НАУК ГОСУДАРСТВЕННОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ СИБИРСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ ФЕДЕРАЛЬНОГО АГЕНТСТВА ПО ЗДРАВООХРАНЕНИЮ И СОЦИАЛЬНОМУ РАЗВИТИЮ

304. ХИМИЧЕСКИЙ СОСТАВ РАСТЕНИЙ СИБИРИ И РАЗРАБОТКА НООТРОПНЫХ СРЕДСТВ НА ИХ ОСНОВЕ

305. Специальности 14.04.02 фармацевтическая химия, фармакогнозия 14.03.06 - фармакология, клиническая фармакология052011002261. На г топи си

306. Рисунок 1 — Карта-схема мест сбора надземной части княжика сибирского

Автореферат и диссертация по медицине (14.04.02) на тему:Химический состав растений Сибири и разработка ноотропных средств на их основе

Автореферат диссертации по медицине на тему Химический состав растений Сибири и разработка ноотропных средств на их основе

Введение диссертации по теме "Фармацевтическая химия, фармакогнозия", Шилова, Инесса Владимировна, автореферат

Заключение диссертационного исследования на тему "Химический состав растений Сибири и разработка ноотропных средств на их основе"

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2011 года, Шилова, Инесса Владимировна

Похожие научные работы

Каталог диссертаций