Автореферат и диссертация по медицине (14.00.14) на тему:Характеристика моноклональных антител серии ИКО, пригодных для очистки костного мозга от опухолевых клеток

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ Г Б и фЛищипекой ПРОМЫШЛЕННОСТ И РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

2 ШП 10Г3

НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ОНКОЛОГИИ имени проф.Н.Н.ПЕТРОВА

На правах рукописи

ДАРСКАЯ Елена Игорепна

:\РЛКТЕРИСГНКЛ МСКОКЛОИАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ

СЕРИИ ИКО,ПРИГОДНЫХ для очистки КОСТНОГО МОЗГА ОТ ОПУХОЛЕВЫХ КЛЕТОК

(СП ЕН и АЛЬ Н ОСТЬ-14.00.14 .-ОН КОЛ ОГИЯ)

АВТОРЕФЕРАТ ^

диссертации на соискание ученой степени ^ кандидата медицинских наук

САНКТ-ПЕТЕРБУРГ

\ 995

Работа выполнен! в Научно-исследовательском институте онксшопш им.проф.Н.Н.Петрова Минздрава и ш.Ачрома РФ.

Научный руководитель: дм.н.проф. Б.Б.Афанасьев д.б.н. проф. А. Ю. Барышников

Официальные оппоненты:

д.м.н.В К. Гаркало к.м.н.В.Б.Климович

Ведущее учреждение:

Военно-медицинская академия им.С.М.Кирова

Защита диссертации состоится________1995г.

в_часов на заседании специализированного совета

по защите кандидатских диссертаций НИИ онкологии им. проф.Н.Н.Петрова Минздрава и медпрома РФ К.074.38.01 (189646,Санкт-Пегербург, Песочный-2, д.68)

Сдассертацией можно озн: мшгп.-а в библиотеке НИИ онкологии им.проф.Н.Н.Петрова Минздрава и медпрома РС.

Автореферат разослан" " 1995г.

Ученый секретарь Специализированного совета д м.н.

3 .В. Деыин

Введение

Актуальность проблемы. В настоящее время трудно представить себе лбласть биологии и медицины, которых пе нашли бы применения моноклональные антитела (МКА). Наиболее впечатляющими результатам их использования являются достижения в области идет фикацни поверхностных поверхностных антигенов клеток различных линий дифференцировки, нормальны и опухолевых, включая кроветворные стволовые клетки клетки системы мононуклеарных фагоцитов,Т-,В- и К-лимфоцитов ( Материалы международных рабочих сове щаний по дифферепцировочным антигенам лейкоцитов человека, 1993). Не менее значимыми являются иссле довання по изучению характеристики и тшшровапшо антигенов гистосовместпмости системы НЬА.(Манько В.М.) Накоплен также опыт в использовании монокло нальных антител с терапевтической целью в онколо гическпх ктагаиках ряда зарубежных стран (Takahashi Т.,1991 ;Taoraoto К., Kokunai.,1990), МКА используютс: как "средство доставки" химиотераневтаческих агентов, либо токсинов к опухолевым клеткам (Morgan A.G., Beatty S. et al. 1990; Pastan J., Wilimgham M.C.1986; Manske J.M., Buchbaum D.J., Hanna D.E.,1990).

Одпой из основных проблем химиотерапии опухолей является отсутствие селективного действия которое распространяется не .только на опухолевые клетки. но и на нормальные быстропролиферирукгаще ткани С костный мозг, эпителий кишечника и др ).

Перспективным подходом преодолевающим этот недос таток, является направленная доставка цитостатика к опу холевым клеткам-мшпеням - векторная химиотерапия. Это позволяет, с одной стороны, существенно повысить селективность и эффективность терапии, а с другой стороны, уменьшать нежелательные побочные эффекты на неопухолевые клетки и ткани ( Johnson C.S., Chang М.,1988; Baldwin R.W., Byers V.S.,1986).

Другим аспектом применения МКА в клиничес кой практике является использование МКА в качестве нммунодепрессантов при трансплантации органов ( Чими шкяп К.А., Барышников А.Ю.1993; Ross R.E.,Jeter Е.К., Stuart R.K.,1990), а также использование МКА для экстракорпоральной очистки костного мозга от злокачест венных клеток при аутотрансплантациях костного мозга у больных как ыиело-и лимфопролифератиными заболева пиями,так п солидными опухолями ( Favrot М., Philip Т., 1985; Ramsey J.,Kiss J.E.,Sacher R.A. 1992).

В настоящее время в лечении как гематологи ческих, так и онкологических больных значительную роль играет трансплантация костного мозга. Учитывая трудности в подборе HLA- идентичных доноров костного мозга и проблемы, вызываемые реакцией " трансплантант против хозяина" ( РТПХ), естественным является интерес исследователей к. возможностям трансплантации ауголо гпчного костного мозга. Одной из проблем, возникающих при ауготрансплантации костного мозга, является необхо димость развития эффективных методов очистки костно го мозга от резидуальных злокачественных клеток. Предложено большое количество различных способов " очистки" костного мозга: физических, химических, фармакологических, иммуно логических. В зарубежных

клиниках среди иммупологпчес^шх методов "сшсткн" костного мозга от злокачественных клеток, наиболее часто используется реакция комплемент-зависимого лизиса опухолевых клеток. Комплемент-связывающие МКА являются необходимым реагентом для осущес твления этой реакции. Основным недостатком этого метода является то, что его можно исполг ковать только с комплемепт-связывающпми МКА, а также то, что необходимо присутствие "хорошего" комплемента.

В последние годы в нашей стране открылось несколько отделений, где осуществляется трансплантация костного мозга как метод лечения гематологических и онкологаческих больных. Однако, очистка костного мозга от злокачественных клеток еще ь.с вошл i в прак тику этих отделений. Это объясняется невозможностью использовать методики очистки костного мозга и реаген ты, применяемое за рубежом, по экономическим сообра ниям.

В отечественной специальной лптератупе мы не ptvтретили данпых о подобном прямепешш МКА создан ш ö нашей страде. В сияли с этим возникает несбхо дпмость комплексного исследования отечественных МКЛ. имеющих, с одной стороны рецептор к компде ¡лепту ,с другой стороны .связывающихся с рецепторами, ьредетавлениыми на поверхности опухолевых клеток п, следовательно. способных осуществлять комилем^нт-заии;.'имый лизис, опухолевых клеток,т.е. "очистку" кост

1ioio f ¡o'il ;i,

! U-ли к задачи неследования. Делыо настоящей pafnvii.i чс.ичил-» гиннроваиие коынлемент-зависпмых МКА ••:•{>£)« ИКС) и сбог.иоваппе возможно ".та нх пеполь ?оя-«мг'1 д.,-/ '.ушс-.кп кос""яоге мезга от злокачественных

клеток, а также оценка степени деконтамияацин кост нош мозга от Т-бластаых клеток при использовании "коктейля" исследуемых MICA. В соответствии с постав ленной целью нами решались следующие задачи:

1. изучение экспрессии поверхностных антигенов к МКА ИКО -46, ИКО-59, ИКО-бО, ИКО-90 на фракци як клеток периферической крови и костного мозга здоровых лиц, а также па клетках лшшн Yurket.

2. изучение экспрессии поверхностных антигенов к МКА ИКО-46, ИКО-59, НКО-бО , ИКО-90, ИКО-1 и ИКО-10 на клетках-иредшественниках 1рануломоно цитоноэза в норме.

3. изучение влияния исследуемых МКА на функ циональную активность лимфоцитов, в частности,па способность лимфоцитов к бласттрансформащш на фитогемашпотинин.

4. изучение способности исследуемых МКА в "коктейле" к деконтаминацпи костного мозга от клеток острого лимфоблаетного лейкоза путем комплемевт-завпсимого лизиса властных клеток.

Научная новизна. Впервые комплексно изучены общелеакоцитаряые МКА серии ИКО (ИКО-46,ИКО-59,ИКО-бО),а также МКА IIKQ-90,направленные протш антигена CD3. Измена экспрессия поверхностных антиг нов к характеризуемым МКА на клетках крови н костпо го мозга здоровых доноров, а также на клетках линии Yurket в цктотоксической комплемент-зависимой реак цгго. Изучена экспрессия антигенов к данным МКА па клетках-предшественниках грануломононоэза здоровых доноров, показано отсутствие антигенов к этим МКА на клетках КОЕ-ГМ.Изучено влияние этих МКА как изолп розанпо,так и в сочетании с комплементом, па реакцию

бласттрансформации лимфоцитов на фитогемаг ппоттпш (©l'A), показана способность ИКО-90 в сочетания с ком плементом частично тормозить реакцию бласттраис формации лимфоцитов на ФГА. Изучена возможность "коктейля" данных МКА ж. когаыемент-зазЕскмому лизису Т-бластов, показана неспособности» "коктейля" данных МКА к полной и падежной декоптаминации костного мозга от лейкозных Т-клеток лшшп Yuikct. Однако,доказана принципиальная возможность пснользо палия данных МКА в "коктейлях" для очистки костного мозга от злокачественных клеток.

Практическое значение. Охарактеризованные МКА нашла свое применение для ш.шзтюфеиотяпн рованпя лкмфопролнфератазных заболеваний, обще лейкоцитарные МКА. применяются для диффереициа льноп дкагасстнЕИ лимфопролифератаЕНЬк заболеваядй н эпителналышх опухолей. Показано отсутстазе экспрес сии антигенов, выявляемых тестируемыми МКА, на поверхности стволовой клетки,а ,следовательно,при годность данных МКА для очистки костного мозга от зло качественных клеток. Также показана недостаточность "коктейля" данных МКА для очистки костного мозга от Т-бластоз я необходимость дальнейших исследований в этом направлении.

На защиту выносятся следующие положения:

1. МКА ÏÏKO-46, ИКО-59. ИКО-бО гапаляют общелейкоцитариый ;штиг;н,который представлеи па лейкоцитах периферической крови (гранулоцятах, моноцитах,лимфоцитах) и,отч^ста,на клетках костного мозга. На клетадх-предшестзепниках аитзгеп,выявляемый МКА 11КО-46,ИКО-59,ИКО-бО, не экспрессирован.

2. МКА ИКО-90 выявляют поверхностный анти ген на лимфоцитах периферической крови и на части клеток костного мозга. На клетках-предшестознниках 1ра1туломоноцптопоэза не экспрессируется антиген к МКА ИКО-90.

3. МКА ИКО-^б,ИКО-59Д1КО-бО в сочетании с комплементом не влияют на реакцию бласттрансфор мации лимфоцитов па фитогемагтлютинин. МКА ИКО-90 и комплемент частично тормозят реакцию бластгранс формации лимфоцитов на ФГА. МКА ИКО-90 без добавления комплемента не вызывают торможения РБТЛ на ФГА.

4. Коктейль МКА 11КО-46Д1КО-59.НКО-60 и ИКО-90 с последующим добавлением комплемента не способен полностью очищать костный мозг от Т-бластов в 100% случаев,однако, принципиально эти МКА пригод пы для очистки аугологичного костного мозга от злока чественрчх клеток.

Структура диссертации. Диссертация изложена

на.....страницах машинописного текста и состоит из

введения,обзора, 4 глав собственных исследований, обсуждения и выводов. Текст иллюстрирован 18 графиками и 6 таблицами. Указатель литераторы

содержит......работ отечественных авторов и.........

зарубежных авторов.

Апробация работы состоялась на совместном заседании отделения трансплантации костного мог з и 1ематолотии.отделения детской онкологии, лаборатории экспериментальной и клинической онконмыунолонш н отделения трансплантации костною мола Клинического центра медицинских технологий 1 ; февраля 199.^ юца.

Материалы и методы

В работе использованы МКА серии ИКО: ИКО-46, ИКО-59,ИКО-60?ИКО-90,ИКС)-1,ИКО-10.

Для характеристики и оценки пригодности этих МКА к очистке костного мозга от опухолевых клеток нами пртмепялпсь следующие методики:

1.Комплемент-зависимые цитотоксическпе тесты.В качестве комплемента использовали пул нормаль ттх кроличьих сывороток. Активность и токсичность комплемента определялась в двухступенчатой цитоток сической реакпии. Использовали комплемент в разведе нии * Реакцию учитывали в камере Горяева, определяя число мертвых клеток па 100 просмотренных. Для оценки теста использовали цптотоксическпп индекс, определяемый по формуле:

кол-во живых клеток кол-во жквыхклеток

в контроле — в опыте

-----------------------------------------------------------х юо%

кол-во живых клеток в контроле

В качестве контроля в лунки вместо комнжемепта добавляли 199 сред}',реакцию считали положите ль ной.если ЦТИ был выше 20%.

2.Клонирование костного мозга проводили в ггультуральной системе "агаровая капля-жидкая с^еда" (Афанасьев Б.В.,1933).Колонпеобразуюшую способность (КОС) определяли по числу колоний, сформировавших ся в агаровой капле. В качестве контрольного источника колонпестпмулиругощей активности использовали лейкоциты периферической крови гематологически

здоровых лип (лейкоцитарный фидер) в концентрации 1x10 клеток па 1 мл питательной среды без предварите льпой инкубации с МКА и комплементом.

3.Влияние предварительной инкубации лимфоци тов с МКА и комплементом на реакцию бластгрансфор мацин лейкоцитов на ФГА.

4.Для оценки степени очистки клеток костного мозга от опухолевых клеток приготавливалась смешанная культура костного мозга гематологически здоровых лиц с добавлением 10% клеток линии Уигкег. Контроль за степенью деконтаминащш производился путем рассева обработанной коктейлем исследуемых МКА и комплемен том смешанной культуры на полную среду,пригодную для культивирования линии Ушкег. Степень пролифорапип Т-бластов учитывалась через 2 дня инкубации в пластико вом матрасе. Параллельно степень деконтаминатщи смешанной культуры контролировалась исследованием ее пролнферативной активности но включению НЗТ. Контролем служила культура костною нозга гематоло гически здоровых лиц и необработанная смешанная культура костного мозга и клеток л»;нт Уигкеп.

В работе использовались клетки крови 132 здоро вых доноров.клетки костного мозга 63 гематологически здоровых лиц.

Статистическая обработка материала проведена по методам Стыодеитэ-Фишера .

СОБСТВЕННЫЕ ИСОI [•ЛОВАШ1Я

1. Экспрессия поверхностных антигенов, выявляемых МКА серии ПКО (ИКО--6.-5!л о1г.-'".)).на

различных гемоноэтических клетках здоровых допоров и клеточных линиях.

В комплемент-зависимой цитотокснческой реак нии была исследована экспрессия антигенов,выявляемых МКА ЛКО-4б.ИКО-59,ИКО-бО и ИКО-90,на мопоци тах.лимфоцптах.гранулоцитах периферической кроен здоровых доноров, клетках костного мозга гематоло гнчески здоровых лиц и клетках Т- острого лнмфоблас тного лейкоза ( линии УигкаО. Результаты представлены в таблицах 1.2.3,4.

табл 1.

цитотоксическая реакция МКА ИКО-46 с клетками ■здоровых доноров и клеточной лапш УигкгЛ

теегнр. число гюл. дгело обо частота Чо антиген

материал Случаев ЛИЦ экспрес. +клеток

моноциты О 9 100 65,7+15,6

гран}лоц 10 10 100 71,2+10,4

лимфоциты 10 10 100 73,5+12,1

КОСТНЫЙ мозг 9 9 100 23+6,0

линия Уигка'. 8 8 100 52,7+5,0

табл 2.

цитотоксическая реакция МКА ИКО-59 с клетками здоровых доноров и клеточной линии Уигка!

I теотир. число по- число обе. частота %антиген+

материал лож случ. лиц экспрес . клеток

моноциты 9 - 9 , 100 39,4+4,4

гранулоц 10 10 100 36,5+6

ЛШКрОЦИТЬ! 10 10 . 100 28,2+10

костный и 8 8 100 21,9+4,7

линии Тшка1 8 о 100 53,4+3,5

I и

таэл 3.

цототоксическая реакция МКА ИКО-бО с клетками здоровых доноров и клеточной линии Уигка1

тестируем, число пол. число частота % антиген+

материал случаев обе .лиц экспрес. клеток

моноциты 10 10 100 36,4+6,6

гранунэциты 10 10 100 57,6+15,5

лимфоциты 10 10 100 36,2+6

костн.мозг 10 10 100 23,8+0,1

линия УигкаС 8 8 100 19,9+3,1

табл.4.

цитотоксическая реакция МКА ИКО-90 с клетками здоровых доноров и линии Уигкг1

тестир. число поп. матер. случаев число обе. лиц • частота експрес %антиген+ . клеток

моноциты 0 ю 0 5,3+1,9

гранулоц 0 10 0 3,2+1,4

Ьи Ьошпы 10 10 100 78,2+11,1

костный мозг 9 9 100 25+4,5

лиши Уигка1 8 8 1 100 73,2+4,5

Наибольший процент аитигенположительыых клеток определялся при разведении МКА 1:100 и 1:200.

В качестве отрицательного контроля в работе использовались культур альные среды пепродуциругощей миеломы. Во всех опытах,как с выделенными клетками периферической крови н костного мозга,так и линии цитотоксическга комплемент-зависимая реакция был-1 отрицательной,т.е. цнтотоксическш* индекс ниже 10%.

Результаты исследования были статистически достоверными.

Таким образом,нами было показало,что в комплг меит-зависимой цптотокспческон реакции выявляется достаточно большое количество антиген положительных клеток к исследуемым МКА как среди клеток периферической крови и костного мозга здоровых доноров,так и среди злокачественных клеток линии Ушка! (Т-ОЛЛ).

2. Экспрессия антигенов против МКА ИКО-4б,-59,-60,-90,-1,-10 па клетках -предшественниках трапуломоноцптзррого ряда.

С целью выявления наличия антигенов к иссле дуемым МКА на поверхности клетек-предшес твенников 1рануломоноцитарного ряда проводилось клонирование клеток костного мозга в культуральпой среде "агаровая капля-жидкая среда". Наличие антигена к исследуемым МКА на поверхности КОЕ-ГМ определяли по блокаде образования колоний.

По данным наших исследований МКА ИКО-46,-

59,-60,-90 не выявляли антигена на клетках-предшес

твешшках грануломопоцитопаэза. В качестве контроля

использовалось клонирование клеток костного мозга без

презнкубацин с МКА и комплементом, а также

преипкубпрсвэнных только с МКА.

■ т ' $0.

зэ-ю-60г> 4030-¿0 ■«Н

I т 7

фИЛЕР

<0О I 4ЫООО I <:ЮООО

рис 1..

влияние ИКО-46 на КОС костного мозга здоровых лиц

рис 2. влияние ИКО-59 на КОС костного мозга здоровых лиц

О - число колоний после инкубации с МКА О -число колоний после 1шкубацки с МКА и комплементом

юо

I •»

14

60 АУ-

ЧГ*1"" фий£Р

.-V ео

50

7 /00 I <носо\ 1:<СРОР

'¡■■ЮР I /.уСОО /,/р 'Г

рис 3 .

влияние ИКО-60 на КОС костного мозга здоровых, лиц

ьш такие ИК.О-90 на КОС костного мозга ■здоровых лиц

рис 4"

О число колонии после инкубации с МКА ф число коношш после тителбации сМКА и комплемент ом Инкубация клеток костного мозга здоровых доно ров с МКА ИКО-1 и комплементом выбывала подав ление колониеобразования в спстеме"агэровая капля-жидкая среда",из чего следует,что на поверхности клеток КОЕ-1М имеется антиген к ИЫО-1.

Результаты исследований были статистически достоверны.

3.Влияние исследуемых МКА на реакцию бласттрансформации лимфоцитов на фитогемагглютин (РБТЛ)

Участие антигенов к исследуемым МКА в иммунных процессах исследовалось но блокаде функциональных тестов.

Реакцию блаеттпанеформации лимфоцитов с ФГА (РБТЛ1) ставили ио стандартной методике.В качестве контроля использовали лимфоциты. ^предварительно инкубированные в полной ростовой среде без добавления МКА и ко1.1плгиента.2)лш.н}х>цит1.М1реинк5'6ирогапные с культуралыюй средой пеиродуцир}тощеп миелоыы и

комплементом, а такжеэ)лпмфоцпты, инкуоированные только в присутствии МКА.

Нами показано,что МКА ИКО-4б,-59,-бО, не вьпывают торможения РБТЛ на ФГА.

Преинкубация лимфоцитов периферической крови здоровых доноров с ИКО-90 и комплиментом выывлла торможение РБТЛ на ФГА. Наибольшее тормо жение РБТЛ на ФГА наблюдаюсь при инкубации лимфо цитов с ИКО-90 в разведении 1:10 и комплементом. Эффект был дозозависимым: при увеличении разведения МКА степень угнетения РБТЛ снижалась. Отмечено также, что преинкубация лимфоцитов только с ИКО-90 (без комплемента) также несколько снижала степень пролиферации лимфоцитов на ФГА.

4

ш.

д

рис. 1 З.ЕЛИЯНИа ИКС-О0 НА РБТЛ НА ФГА

ко оси аолцисс.варианты оЗраоотк.!! лимфоцитов

1 -Ъгъ обработки

2 кулмурачьнои средой непродмц-хрчощсй миеломы .> МКА е ртзЕеденнп 1:103

1.1 I и комплементом . 3 3 н к о: шлеме гт он 3'3'Г' II комплементом

■ ни', А ь р.эте' -?1пп 1--ЫК.А в разведении 11

.' МКА 1; {мэрел^нпи

I

6

4.ДЕКОНТАМИНАЦИЯ КОСТНОГО МОЗГА

Целью данного исследования являлось изучение возможности очистки костного мозга от опухолевых Т-бластов.

Для изучения степени очистки костного мозга использовалась предварительная контаминация костного мозга гематологически здоровых лиц клетками линии Уигка1 (Т-ОЛЛ).При контаминации клетки линии Уиг^М составляли 10% по отношению к клеткам костного мозга. Изучаемые МКА смешивали в коктейль в равных разведениях и объемах.

После обработки смешанной культуры(костный мозг гематологически здоровых лиц+10%клеток линии Уигкаг ) коктейлем МКА и комплементом контроль за степенью очистки осуществлялся двойным методом:

1.путем рассева клеток обработанной смешанной культуры на ростовую среду, пригодную для культивиро вания клеточной линии 1'игка1 с последующим определе нием пролиферирующих клет1(через 72 часа)

2.контроль за пролиферацией клеток обработай ной культуры с НЗТ,тритий добавлялся сразу после обработки МКА и комплементом. В качестве отрицательно:л контроля определялась ^ гепепь пролиферации клеток по НЗТ до обработки,отдельно костного мозга е смешанной культуры.

На рисунке 11 показано влияние обработки смеша ьнои культуры (костный мозг+109Ь клеток линии Ушка! ) коктейлем МКА и комплементом на уровень проли<|зера

тивной активности клеток по включению НЗТ.

\

/

/

1

§

3 2000 %

% то %

о 1000-

500

и

1С

рис 11. Влншше обработки смешанной культуры коктейлем МКА и комплементом на пролиферативную активность У-бластов

1-ннтактный костный мозг

2--еме1Гшная культура без обработки

смешанная культура инкубированная в течении 3D мин\т с коктейлем МКА е разшг-шкхра'ЗЕеденнях и комплементом 3- 1.10. ■■■. '.)'). 5-1:1000. 6-1:10000 смешанная культура инкубированная в течении 1 часа с коктейлей МКА в рээтпччкх разведениях, и комплементом-7-1-10, 8-1:100, 9-1000, 10-10000

Эффект был доюзавпсим.Статистическп достовер ным уменьшением уроним пролиферации было только при обработке коктейлем МКА в разведении 1:10 и комплементом, Вргия инкубации коктейля МКА го смешанной культурой не играло значительной роли, т.е.нри увеличении времени инкубагип до 1 часа не наблюдалось дальнейшего нижения уровня пролпфера ■тиной активно .гч меток

Tip« bojnpoie '¡: i!.*Hi.io очистки контами.шро . ианшчо 1 блл.-т.пш логтног« м<■ u\i гематологически здоровы:» ио iif'"! п"|ор*шт ьлеток Т-ОЛЛ в культура тгттп: .- p-j!- ' быю но-гучепо дапных о возмож

.»•'-чти л', л;:; г; -.«чи.'тки г НЮс:; лп 'аев.Резулыаты щ-гаста

табш 5.

шагание на пролиферагивную активность клеток смешанной культуры костного мозга (клеточносгь 10мпн/мл) и лишщ Уигка1 обработки коктейлем МКА и комплементом.

время варианты кол-во наш гше про ^случаев

обра- обработки опытов ллферацип очистки

ботки культуры клеток ОЛЛ в культуре смешку льтуры

смеш.культ-!-

к МКА 1:10+комп. 10 6 40

* смеш. культ

МКА1:100+комп. 10 6 40

* смеш. культ. +

О МКА1:1000+ комплемент 10 8 20

смеш. культ. +

МКА1:10+КО1Ш 10 5 50

* смеш. культ. + МКА1: 100 ¡-конп. смеш.культ.+ 10 б 40

> МКА1:1000+

комплемент 10 6 40

необработанная

смешанная культура 10 10 0

смешанная культура г.

непродуц миелома+ 3 7 10

комплемент _____

полную культуральную среду пеоораоотанныч клеток смешанной культуры и клеток смешанной культуры ,

обработанных кондиционными средами пепродуцп рующей миеломы и комплементом.

Колониеобразующая способность контамппи рованпого Т-бластзми костного мозга здоровых ляг и влияние на нее инкубации с коктейлем МКА н комплементом мы издали в культуральной среде " агаровая капля-жидкая среда". Данные приведены па рисунке 12.

ч

I á

I

So

60

НО

■20

Q

1:10

1:100

1:1000 (разведение МКА)

рис! 2.Елпшдте на колониеобразующую способность контаминировлнного костного мозга обработки коктейлем МКА и комплементом \ - КОС здорового костного мозг Ц- КОС смешанной культуры костного мозга и линии \7игка1

3,4, - КОС смешанной культуры,обработанной коктейлем 0 ~ МКА б разведении 1.10.1:100,1:1000 и комплементом

Нами было показано,что обработка контамшш рованного костпош мозга (клетки кос inoro мозга гемато логически здоровых лиц }- 10 ^клеток лпппи Yurkat) коктейлем МКА ИКО-«6. -59,-60,-90 п компле ментом не ■чшжает колониеоорачуюшей епоео бности костного мои a. xi .следоватг.ц.ко. ьокгендь исследуемых МКА может бьтгь игпольляан для очистки костного мозга от

злокачественных клеток с помощью реакции комплемент-зависимого цитотоксического лизиса

ВЫВОДЫ

1.Моноклональные антитела ИКО-46 вьшвляют в комплемент-зависимом тесте антиген на поверхности 73% лимфоцитов,б5%монэцятов, 71%гранулоцитов перифери ческой крови здоровых доноров, а также на поверхности 23% клеток костного мозга гематологически здоровых лиц. Антиген.выявляемый МКА ИКО-46,экспрессирован на поверхности 52% . йкошы.ч" Т-бластных клеток линии YurkaL Антиген.выявляемый Г.1КА ИКО-46. не экнрес сирован на поверхности меток-предшественников гранул омой оцитоь ома (КОЕ -ГМ).

2.Моиоклопал1. лые антитела ИКО-59 выявляют в комплемент-зависимом тесте экспрессию антигена па поверхности 2Ь-%лимфоцитов. 39% моноцитов. 36%" гранулоцитов периферической крови здоровых допоров, а также на поверхности 22% клеток костного мозга гемаю логически дцоровых лиц. Литигеи.вьывляемыи МКА НКО-59,экспрессироваи па 53% лепкозных Т-бластпых клеток. линии Yurliat. МКЛ ИКС ) 5У не взаимодействуют с поверхностью клеток-предшественников тшулононе щггонозза. (КОЬ-ГМ ;.

3 Моиоклоття.и.имс антитела ИКО-оО выявляют и комплемеш-зависимом гесте экспрессию «»••тшеы.ч на ни верхности 36% димфпг.1аов.57% гранудоцитов.' моноцитов.а таг.:;:- н:> клеток костного мозга гена толошческл здоровых лиц. аитага» laia;.- чк-.-нрСч сирован на иоиерхло щ ?0% глеток лшши Vurkal. .11 КО

60 не выявляют антигена на поверхности клеток-пре дшественников грануломоиопоэза (КОЕ-ГМ).

4. МКА ИКО-90 выявляют в комплемент-завп симом тесте экспрессию антигена на 78% лимфо цитов периферической крови здоровых доноров, на 25% клеток костного мозга гематологически здоровых лиц, на 73% клеток линии Уигка^ Антиген СБЗ не экспрес снрован па поверхности гранулоцитов,моноцитов н клеток КОЕ-ГМ костного мозга гематологически здоро вых лиц.

5. Моноклональные антитела ИКО-46,-59,-60 как изолированно,так и с комплементом не вызывают бло кады реакции бласттрансформации лимфоцитов (РБТЛ) на фитогемагтлютинин (ФГА). МКА ИКС-90 не блоки руют реакцию бластрапсформацип лимфоцитов (РБТЛ) на ФГА, тогда как МКА ИКО-90 и комплемент выэы вают частичную блокаду РБТЛ на ФГА.

6. Коктейль МКА ИКО-46,-59,-60,-90 может быть использован для очистки костного мозга от злокачес твепных ктеток.

список работ,опубликованных по теме диссертации

1.Афанасьев Б.В..Дарская Е.И.,Сшзкая К.О. Влияние интерлейкипа-2 на колоннеобразуюшую способность ктеток-предшественников грануломо ноцитопоэза т ^•iU'o.//Молекулярные факторы гемо-поэза п стволовая клетка: Тез.межд.конф.-М.Л.Л? 17июня .1990.

¿.Афанасьев Б.В..Барышников А.Ю..Дарская Е.И..Кравцова В.М.Экоиреопня антигенов против'

МКА ИКО-4б,-59,-60 на клетках периферической крови доноров в комплемент-зависимом цитотоксическом тесте "Modem Trends in Human Leukemis X": Тез.межд.симп.-СПб.1992.

3.Барышников А.Ю.,Афанасьев Б.В.Дарская

Е.И..Михайлова Н.Б..Экспрессия антигенов против МКА ИКО-46,-59,-60,-90 на поверхности меток-предшественников грануломоноцитопоэза.В Тезисах Республиканской конференции "Актуальные вопросы службы крови и трапсфузиолопш". СПб,май-июнь, 1995.(подписано в it> чать).

4.Афанасьев Б.В. .Барышников А.Ю..Дарская Е.И.. Михайлова Н.Б. Экспрессия поверхностных антигенов против МКА серии ИКО на клетках

КОЕ-ГМ костного мозга здоровых доноров. "Modern Trends in Human Leukemis Х.,"-Тез.межд. симп.-СПб.,июнь 1994.

5.Барышников А.Ю.,Афанасьев Б.В.,Царская Е.И. Влияние МКА ИКО-90 на реакцию бласттрансфор-мации лимфоцитов на фнтогемагглютинин. "Гематология и трансфузиолошя",М.,(в печати).

/

л