Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Характеристика естественной супрессорной активности незрелых эритроидных клеток

РГ6 од

На правах рукописи

Сг'іарі-ш Дэк::с КЬка&гович

ХАРАКТЕГССТт ЕСТЕСТШйЮЗ СУПРЕССОРШЯ АКТИВНОСТИ НЕЗРЕЛЫХ экгггаошых КЛЕТОК

14.00.36 - Аллергология и юмуналогкя

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук .

НОВОСИБИРСК 1996

Работа выполнена в Институте клинической иммунологии Сибирского отделения Росийской академии медицинских каук.

Научный руководитель: член-корреспондент РАИН. профессор

доктор медицинских наук В. А. Козлов

Официальные оппоненты: доктор биологических наук

В. А. Лавровский кандидат медицинских наук . И.А.Лисуков

Ведущее учреждение: НИИ фармакологии ТНЦ СО РАМН

Защита состоится "_____"_____________1996г. в_______час

на заседании диссертационного совета Д. 001.01.01

Института клинической иммунологии РАМН по адресу:

630091, Новосибирск, ул. Ядринцевская 14.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ИКИ

Автореферат разослан "____"________________1996г.

Ученый секретарь диссертационного совета

кандидат биологических наук ° -т - Кудаева

" з -

ен>еэг2

^^РГДгггтазЕа'і гг^ггзй "2-"-*yrcrsm ггляотсп

регугэтг"! п’-^.’гпсгс. ;/с:іа и сзссеСсэ res,*.'і :*•». nns. Тп?г’о устгпгалсго, что ьерэду с регулятор:^-"! 7- и я- :г'?-jcrc, гс^уэ реа з о?зс кгхпжт:"^ гтргг? itrcn.u (п?.Ь.га: ,*vr.n-rrrccr colls), сЗллд'ггггз сс7естг:;~:: j псспеїг-^газх'з :~т.-

тс: (ECO псг5о:зз г.:т~"~пд а ьтстсч ггссгсгг^го rctxvn-.y::™;?.'.. (!^DCrr:'.S К32Г, СЛрГСПгйГ^З ГСЧ-ЯЗ, С^ЛСГ-? ~t3 ПС^,СТС‘Т"Г‘” - ■

гэтпас, хп.''гг^г^э c^r™j лгзотя zccscprcyrjx г.с^сгггг) ;^'»-ду!ж=з: п?с~?-?.гтоз г_г:: сйгпггз) (Ercchs-I'nlctr Ч а!. Crooks-Kaissr ot al. 1S22; Hir/eslzu ct аі. 1С53; -'иІі'Г

аі. 1С34; Izolda J. 1С?2; Holda et сі. 1Г23; НсЛіп et J': . Trckcs et al. 1G32). Огатсэтсп, что EC* пгрг:? клзч»:;s rc.~, * с.*8ргзй=кз прсцзссоз пгггяря:пкрог2!ГЮГО кготс'сюго рос-'* (:.• rr-'е:слє н спуг.олепзго) (Sujlurn ct al. 1С?0; Sclcdtr"v ~i. 1C25). ECU првлстеахтет ceOfri гетгрогэпзуэ пояу.чктт ::.т'?с::. Баэ:=г:с?го caspntrepssosannux кгэте::, c5"r~r^t ccrcctr?—•:*' супрэссорпсн astTJOEOOTsa, по rccr.? !rp:tspca ергля rc:r-r?-ї2етеух клетс:. Uat22rso, что пєстеїгїпчсскг-'І сугроссэргс1 rrr:rr?-ноежэ сблгзеэт првдпесі,2яп:пга к^фсГсгсз (Ycurc et пі. :Г"3; Pi gnat et al, 1931); Gczbzzo грплу.гтрт„’л ■п-.'^еггли (Hertel-,'jlff ct al. 1934; L'aier ct al. 1883); геїлпозтігігстсз гг'тяосгтчягг.я (Sujiura et al. 1932); сред^глгсппга T а В-лгЗкгятт (£ro-oks-Kalser ct al. 1C?2; Strcbcr et al. ІСЗЗ); r/~"0 '."zt.zi C*u ot al. 1021; Jodus et al. 1ЕЄ5). CynpecciEEind гг'^-з?:? EC's гз rrj-мунние регасю, ксс прггнло, азтпгеннесяец:г?гггеа, пе рестргзеггро-В2'і по гднзнкгу гаїтлексу г::стосое!:остіп*ссти и по сгягял о Р"~гг/-пешїсі! !2.г17і:сісс*;петг':іт:зг' галете::. Сугросссрпсз деістг^а ЕСХ іхгзт реалпгоЕігваться гак за счет непосредственного ііегзцеточюто 23.?л-іядействия, тис и за счет растЕоріоак фаіетероз (Angulo et al. 19S5; Brooks-Kaiser et al. 1993; Brooks-Kaiser et al. 1093; Lfeore et al. 1992).

Сотрудниками лаборатории регуляции іпиукопозза НКИ СО РЛІ'І (рук. член-корр. РАМН В.А.Козлов) было впервые показано, что яд-росодержазіе эритроидные клетки способны супрессировать гуморальный иммунный ответ, индуцкруеиый как тимусзависізсім, так н ткмус-независигыы антигеном (Иуравкин ИН 1979; Каллакова НВ 1937; Ксз-

:• др. 1С2І; Ciszr.53 СС 1ЄІЗ). E;:zd тгжэ устсвагггЕЭ, что срлраАЗ^э г™сїі^і (Сі) с^оггздуз? сдЗ с^укссувр&ежа-•....'. і і і;і5с:-:іЗ і;;ро visksso, ссрсз.сг-.фсц^з рззїхсїс^ого

;./;x;us."o C-wOI^a») (і^лазг АЗ 1СЕЗ; Ццргага ЕГ 1В20; Ш-. ■ >' cl cl. 1SI3). Віт» »іїо ка pc^ass зггл^; сгяого-

: :. ї c^^sc^sssro РїсїіХї сз^ігезї рзз£^.~з друге; нро-

- "., ; .^г. рссяаз, о таа tcsss £^2^?гаго. Схсдіііл егауедез,

; :хг/, c^ssv rccso e^j ceaotciasse^s: гсггсэзга взегэ кз-

:. ;::::::^::з.'і i^:cpcsy:ssis2 к елі р^хзісг-зхіл (Ксггиаза f3 1G37; ss к». 1S34; £з«г«і ІйьО; Чзтідзса u др. 1СІ2). Ога^а c-w:^«ua г?:ї2л)сгіЧї», «ко врсдесс cresoassssu реаергуг^а ;,. I'jzsxszi tacc? срсксрхя» "сод дааовгг/" ки-тЕзрсгу-аятер-

:; С..І и» сз&і сто ї£й, и» г.;.~:,^.;_: u SEa>/C35S *агуї

; '. . i^.^.’-to оЗрддш ci^tcr.ii с сар>т.эаиг: ерэт-

:і..>С-. КЭТОРСЗ К RXbES^Uy Е30гаа02СД£Э ЕгауВСрОГуДЛТОрПОй , U‘. Ео^ксрс^ізїсз т&гя assTja, yiasyses^aa ва то, что

^;?:!:рс^дс^3 расзо»; c.%322so рсагкру®? ca рззЕссСрссі^о гсгяшо-. .-i/jcuy^-^o izz-^lTiuz; (e tcj ^озо сдтшчзвЕыа) и грэтроэдгцэ регати ілгуз? cscssasbcs в рзгугд:?з Ешуввого ітрзусзза угз ез ccloti ргшшх s таи аг, его раэигга (Вдся^аеа t3 Гус^&а J3 1633; Ксзлазза с др. ШЗ). Нззтозхзз р^Зота :!£.*. о-; ел ic.x£x;:jc^a еродо^езеесу кссзаяозсаЗ слусорегухятср-i.j-: сюжета Si, врсьгдбзнк в лгЗорато.'хы регухяцза Е^увовсзга !Ш CO f;i:!. ока врззака СЕЗообоїЕЗгаі'Ь взглаазкэ рога эр;ггроцд-гісго г_;иочі:і:-о розїіеі е (лгоеозлэвхв и рэгудацг-з Е^г/ьогєЕзга.

і.’г. •■ у готл-.:: іаг«?*о,уу:,д. Цоа работы - ахерзхтеризовзхь кге-тогсиЗ іжхежз, яійеїіЗ в ooso^-э кзлунссуврессорзой гигпввостм Е\ !: о»ерї*ігі> їіссто в Еог^аскув рать ьтнх кхета: с евтигєн-йєспо-ії^глссгй Еег£зкз202 рзгухг;ц:Е! t^r/Eorcnosa.

Д:;і zcotsztjiz! ука&ьііЕОІІ ціаа Osis- постазіеїш сіодуес;;о зада-

с::

1) П^озшГіі срсааїїїегькій аявл::з apziza &;фїетсв ЗК и rnt рсст-eo?~zjx вродуктоз Ea празк^сратіїЕнуіо и функциональнуо акпт-ВОСГЬ Т Е В*Л12^0ЦГ.Т03.

2) Охсра:<терцсозать кдеточкш! «эханмга супрессорного влияния Si ва Б-клоїочній Сластогонеа.

3) СллЕыТЬ сходстга и разіїїчкя в херактерїістііках ыедду а< и

другие рЕпээ схсрзгегср2гсг.глтав*а тншаа естостееззгс супрессорных клэток.

4) Охаректеркгозать роса ТР&-б©тз в опосреяу«г4 г*. суиресс:21 В-^сточного бластогвгзга.

Новкзяа ребога. Епергкз псггхги функцвсзагышэ и фзпоткст:гс:с:э раасгчгз гслду супрзсссрзгэ К< я другая тишал сстестЕепгя супроссорнкх клеток, а текгэ дзтагыю схерахтерзгозсз теточпкЗ иехспкгу, лслгз*а в осгогэ [эдгЕосупрессорпсЗ актпгвоста ЭК.

Научная и практически гпзггтаость работы. ПрздставлеяЕьгэ рззугъ-таты ЕПООЛТ СУ^СТЕеППЫД Е!И2Д В ПС™=£ЕП!8 П?ЛЗУЕСРЭГУГЯТ0Р2СЗ РО-2Н а<!1 значимости ЗРПТРОЗДЕД РССМ^ГЭ В процессах 1?£1УИОЗДСЛТО-цеа оргапзгема. ПодучсЕпыэ даягкэ прззЕсли способствовать рсгрэ-ботке прзшцшшахъЕО есеых подходов к к^гуЕокоррэкця!, осаоггзап па модуляцяи эритропозва и регуспси ггаауносупресссрзоЗ £КГСВПОС-тн Ж.

Основные положения. Еыкоскмыа на зегзту:

1) ЭК способны оказывать прозой супрессорный эффзкт на В-кгэ-точную пролнферзцет. Раствср^ыэ продукты, преактквлроваякых Т- а В-лимфоцитов, а такго актизирсзгзпг: макрофагов, по отиоплзт правого супрессорного влияния ЭХ на В-клеточпыэ пролг^ератпвные реакции.

2) Кммуносупрессорные ЭХ резистентны к действия вгаосокотроп-ного агента - лейцил-ыетилового к^гра. Их супрессорная активность не зависит от клеточного деления и резистентна к действию пндсме-тацина.

3) ЭК опосредуют свой икмувосупрессорный эффект, по крайней мере частично, через продукта) растворимых факторов. Эти факторы способен супрессировать В-клеточные, но не Т-клеточные проляфераг тивные реакции.

4) ТРФ-бета является одним из факторов, опосредующих супрессорный эффект ЭК на В-клеточную пролиферация.

Апробация работы и публикации. Материалы диссертации были доложены и обсуидались на ыежлабораторных семинарах Института клинической иммунологии СО РАМН, Новосибирск, 1906. По материалам диссертации опубликовано 4 работы и 2 находятся в печати.

Е^эсерхсд^з га СО стрсладз*-: ипззаспксного тєі-кгга, со-

CC?s^3 3£ ргзугзет ц 1 кДвацу. Д^ссаргада состолт из введзшсл, с2‘сг- слсразуру, изздс&:зз а иггодм, результатов раДоти u ;lx G&rjEZZZZi, Спдзок лмтерагури вкгсчает 110

СІІТЇУ/СПЗ ІЗЯС^СГІІЗ.

їлтерлдеі к гзтсеа

ISZZZ>ZZZZ^3 в рсЗого ід£2і (CQAxC57EL/6)Fl (СВР 1. H-^VH-S*5), G-0 г^сзтазто всгрсзта йіга получек ка пстсмз^ха лаЗораторіїїк ггхохгиг. СО Р/^і. Ііла ISA (H-2d) З-б иэсачкого воареста бьші лл-Gc^za ц;^ссїсз£32] рукогозкагеи гсЗорыгсркл зкспергазнташшх z^zar^zi То-таого п:.у\шого цс-этра к.и.в. C.ii.KycyapueEirj.

lliami usaroqsrtsu F815 (H-2d), £5^a.2j L1210 (H-2d) н шієлшу І Зі (I3*£d) casyqcnj кз Оакаготвческэго научного центра РАЛІ

(г.{.',:сїї^і) . Items пйрэдаагаа іикєі fSixBalb/C бшн дхОезно пре-£ЗВ?Е25£йУ СЇЦХ22І U&fbZHl сотрудшаяхі 120! СО РАІ31 С. В. Ккселовш.

Нгэтга кугьгазгрсгаяг (есхз сг сговорено особо) в среде RRil iCdOt cnr^pzrrftfl 7.Б5 STC, ЗОх’і HEPES, 2rt! L-rraTSSSSia u етййо-уііізз (есэ кзгрсдаэаги сазузеа сз ІіПО "Вектор" пос. Кольцово, Но-ЕОО^Згхз oSi.), во мяетой атмосфере с КС СОг при 37°С.

Дгз кд«ук5=з ср^їро^згга в солзггакг Сенндгвдразіш (СГ, "Sie-£Л") с^сашмагыю EUbeuKpoEasi іісаа внутркбрипинно в доге 1,2 Ц27/1 НИЛ^ГЇ. Чзрзз 12 Е 20 Ч£С03 после первой КНЬеКЦШІ ИКОУ ДСС££^£?С£ЬЕО ЕЬОДІІЕЗ £Г ПО О.С ШГ/«=Ь Б объело 1 ил. через £3 ч^зоз у ЕЕСграш сааезбш^і п кспагьвоЕаля кх в качестве

EOTCSESL’a E't. С^ІПі tdZZZZirrp СуСПСпЗІШ СОЛОЗбЕОЧііКХ КЛЄТ0К

(2Ш105), nosysssEia от iisofi, обргйотапкых фзнглгкдразинои, на-езсгаз па ргсггор пзраогш ("Phannscla" плотность 1,076) и цент-рсйтарадяст при 400г в течошо 30 іс:лут. После центріф/гировашш ksots, оосташэдзо кдтерфазз&г кааїр, отсасывали и тризды от-сддга в Д-SSP. 0г«£лыз кветкн (10-15xl0°/us) кнкубироазли в при-cyscTBsa c^ra-Thyl,2 ыозоклогазьпых аитител (ыАТ, клон 5а-8, 1$2Ь, разЕОДзнйэ суперпатшта 1:40, (Їїіриа "Cedarlane”, Онтарио, К--ігц-~рЛ, в бессазсроточной среде RFUI 1640, содеряацен 20глМ HERS, пра 4°С, в точеяаэ 50 юшут. После инкубации клетки отбывали к пслоетісі ш огазтиазуа ча=ку Петр;! СЧіедпсшиер", Санкт-Петербург) двг&сдтрга ВО izi, ка коюруп..предварительно были адсорбиро-яяді сіФіппіз-еіідзізіппіо кролгаи ттгтеза к кшуноглобулину мши

(ДО 'Тгок'л", !кзгос:.-0пра:). Чггггу о ггсс!тглп кгэгкгл (гэ Скг> 4^г10°) ипкуЗ.’грсгэп з сродо П?Ш 1310, с 2С^! 12РЕЗ я 02 ОТС, п гочозпэ 2ч прз 4°С. 3 ссрздппэ ГТ.ГЯГ"‘~'^'ГГО П"~~^ геГЛГГ.'ГЭ

сг/сгсзггэ подеергазз псргасдвагз а *зтег» 20-Я) ст. В рэдэ-тагэ ппеспксеппсЗ прсцздура, !с;!1В^га.эт гглзт^з (?"<). З-лп-Сасгта, к£суг7:я па сга'З поззрхпоста ^'г/пог’сСулггсг.';:) рсг*~?о-р*!, и т-.-гг^сггггу, по:гр;т:з сзггл-7Ьу1,2 гггнтггг^з, сггг^агя» гр:г'репл5::п-п к пгестзг-ягоЗ яогс-рхпсотп. Поагэ ггг?/5~”"п п~гр*г:-ротсггпгся к дазстису кготга со5'гр2?п, от^агл а С2^:з гг^уЗгрэ-ккз их в концеэтрггрп 1х107/кз е 16 й гзйет-1!япггзс?о "1~:з (Г:Э, "Пика") з СссагсротсплсЗ сродэ ПГ’П 1040 о ТГГТПЗ з чтгу-ш!э 20 ггшут срз 22°С. Песгэ гскубстз гсяяя тргг^и сагяагз поаоЗ кугътурал^сЯ сртдсй и загса кадззргап га 1^кмгпг::с:з1?/ и :г.-г/::!^гзоресцг. ит^с*Т] гззхпзу. Кгзтспуз ег2зсспссо6п20?ь сг^-пнеогл кэтодса !:с;сг7-?эп:ш тргзс::огаго с:“-зго. Анасз :т”отстк шгкоз, окрсгсзпых по методу 1!о.ч?2-!.'":гггс:;з етгяггззсггжи'л, что щцезеаягэ кгеточпгл пояугяся состсггла, гсг? сргзгго, по *:э-воз чей на 971 из (з подазкгсра своаа Совгизотго 6ззс£еежп) 3<.

ИСПОХЬСС2ГЛГПг"! В Н^уЕОг^ТГСРССЦ^ЯТЛ!^ "ос.тодсзз.’пгзх гзспьгтгро-езлиый с СИТЦ агггг17:тг’,'п зсродгт гг.'.гтсг! Сил .гс5ег::э грег,сстгз-лоп стгр=:п пау-п?.~1 сотрудятзгз ’ПС! СЯ Р”*1 С.В.К:;сагЗг!'1. Кепь-»гирсЕг.чкш1 с СГЩ КопА Сил получен от ("Пика”, Г:-;Л.’Д-

р:п). Анти-ТЬу1,2 АТ (хлоя 5а-8, 1с<32Ь), а тс;та изчз^з СГЩ еа-титеда к плусоггсбувшу !Г_"П бша приобретены у £гтг*1 "Сс(5пг1а-пе” (Онтарио, Канада), {.(АТ 1ЕБВ5 и 1С1 Сиги лзсбегзо предозтззлега доктором Д.В.Хосгая (университет Дагьхоузэ, Гагг'.-'я, Канада).

Для получения преактивлровашщх В-люфзцитоз кгеяа сагогешст (5х10б/ил) КуЛЬТ1Ш1ф0Еа1И В ПрисуТОТЕШ! ГППОПОЛ1:С2Х£р2Да (1Р5 Е.СоП В5:055, "51в1т;а") в пластиковом флаконе (250а2, "ЫпЬго",

Великобритания) в объеме 10ш в течение 24ч. После культнвпрова-ния отмытые клетки (не более 40x106) НаНОС!!ЛИ па чегку Петри и инкубировали в культуральной среде в течение 2ч при 4°С. В середине инкубационного периода клеточную суспензга подвергали перемешиванию в течение 20сек. После инкубации иеприкрепившиеся клетки отпивали, затем вносили их в ча^ку Петри, на которул предварительно были адсорбированы антиимыуноглобулиноЕые антитела, и инкубировали их там в среде ОТЛ! 1640, содераецуи 20пМ НЕРЕЗ н

Б23ТС, о тсчешгэ Ш-ССьсн. Ргздагсако шгтш ка чсгке проводили, Ти1,К2К опвсаш ранее (Шго о1 а1. 1977). Посго 1лэсубацз1 непрлк-рсшяавася к шаотяковай погзркЕОоти кгэтиа удаляли посредством оад,тана» кх средой, а остагаасса в чсг» В-клетка суспендировали о ш&хмоваавеи споцаальвого подюсцеза (“Саз1£г"), отшвалн н дахза шкшвоавга в тестах. Как Саго устсвоалено иммунофаоорес-црнткай шофосхошюй с вспольеозалзш ыечонкщ С21ТЦ кроличьих ан-тдтел ("0е<1&г1епэн) к ешуЕОПЮбулзшу ива, сракпчеаш 1002 вы-дехепных позитивным паникпгга клетш ямжгего> В-линфодатами.

Дла получения преастивированад Т-га^оцптов клетки селезенки (Бх10°/ш) культивировали в прзсутстыш ковкаяавалина А ("РЬапза-с1о") в пласткхюоа фвгкоае («асы2, "ЫггЬто") в оОъ&ыэ 10ыл в те-ченаэ 24 часов. После культивирования опалые клетки (не более 4Ш10°) вааоаяла ва чшку Петри (еОьм, "иедполгшр"), на которую презварвтельно были адсорбированы антиамуноглобулпновые антитела, и Енкубщхшаая вх в культуральной среде при 4°С в течение 2ч. В середине итгубащаэнвсго периода клеточную суспензио подвергали пзргмеииваадо в точение 20-Э0сек. После внкубации неприкрепивЕие-сг к пластиковой поверхности клетки перевосяли в пробирку, отш-вахя к загса кинубировали их в присутствии аатн-ТЬу1,2 мАТ ("Са-скзг1£по", разведенка 1:40), в бессывороточной среде ИЛИ 1640, содержав^ 20вЫ НЕРЕБ, при 4°С, в течение 50 маа. После инкубации клетки отыыаали в вааосилн их на пластиковую часку Петри (90мы, "Ыэдпапиер"), ва которую предварительно были адсорбированы анти-Ешуваглобулижшые антитела. Часку с Бнасбашаи клетками (ке бо-£@9 4х107) инкубировали в среде 15РЫ1 1640, содержащей 20^1 НЕРЕ5, в 52 ЭТС, в течение 2ч при 4°С. В середине инкубационного периода клеточную суспензию подвергали перемеяиванио в течение 20-30сек. После ввкубацаи вепрккрепивхиеся клетки удаляли посредством откы-вазяя вх средой, а прикрепиввиеся Т-лимфоциты суспендировали с пшсцьо специального полисмена ("СоЛаг"), отшвали и далее использовали в тестах. Как было определено в цитотоксическсм тесте с использованием анти-ТЬу1,2 мАТ и кроличьего комплемента ("Се-йа^апе"), выделенная вшеописанным способом клеточная популяция состояла практически на 1002 из Т-клеток.

иф получали методом прилипания из перитонеальных клеток ыыаей, стимулированных внутрибршшшыы введением тиогликолевого бульона ("31вта") в дозе 2 мл на мывь за 3 дня до получения клеточной

суспензии (Селедцов и яр. 1687).

Для получения культуралыам супорпатантоз, игвлш (3.0 -5.0хЮб/ил) культивировали в 24-лукочвом пхаггето ("Llnbro"), з течение 24ч. По с:“;гчанки культ1Шфовая!!я, супорпстеят отдоила от клеток центрифугированием, фгиатровали через иеьйразу о диаметром пор 0.22 мкы и хранили до испольвозая'п в опытсх пря -20°С.

Для определения супрессорной активности И< и кх растворив продуктов преактивировачкые л'^фэциты (2-3 х 105/лушса) icyzb?Kis:j-ровали с митогеноы В присутствии Ж ИЛИ полученного ОТ S{ IT/ZbTJ-рального супернатанта в круглодоннсм 8б-луночпсн пгезпэтв ("BD3L", Великобритгнкя) В течение 48ч (последние 5ч С С3Н]Т7ГЛ!-дином). В контроле преактивированнке лимфоциты культкЕ!!рс2агя о китогеном в отсутствии ЗК или их супернатантов. Процент cynpeccis! вычисляли по формуле:

кмп. в опыте

Хсупрессии* (1- -------------------- ) х 100.

имп. в контроле

Каидый экспериментальный вариант был представлен 3-4 параллельными культурами.

В смепанной культуре лимфоцитов (СКЛ) клетки сслеойя"! мышей CBF1 культивировали с облученными в дозе 2000 рад селезй-ночными клетками мыл ей DBA в соотнесении 1:2 в течение 120ч, кис описано ранее (Селедцов и др. 1987).

Активность алло^п^цифичных ЦТЛ определяли в цитотоксическо*! тесте по остатку радиоизотопа в предварительно мечети С3Н]-тиья-дином клетках мастоцитомы Р815, как описано ранее (Селедцов и др. 1987).

Уровень активности ИЛ-2 в культуральных супернатантах определяли ранее описанным методом (Гольдберг и др. 1992; Moore et al. 1992) с использованием ИЛ-2-зависимых 3-5 суточных культур Ко-нА-бластов.

Противоопухолевую активность Мф оценивали по их способности ли-зировать предварительно меченные (3Н1-тимидином клетки мастоцито-мы №15, как описано ранее (Селедцов и др. 1987).

Синтез олигонуклеотидов, использованных в настоящей работе,был проведен в Институте биоорганической химии СО РАН. Антисмысловой

1.. г: г.л;:; ТК-ботл г-сгл ьсезссс^зльпокь (5*-3*) -

^учгсго 1ф££;хг.'лз:£л а кзд, акгс-

1:уг-..:с.1.;;и с^:„ г.сд1.4.;ц.:ро1:сл^ хсхсхи^яхи С слхро*? к&элйсо-. ..• . о&1Гоаукл..этт,ду с р^*,с^;е1 п:^гд:£:лгльг:озгьэ кз £0 ву:~э--•-• ..<з. Ло ж'.о&ь&хлом! £ 8гхи«р;г^;л7£й с£^гоиу»исо5«и «риа;,-. . г.;,и <^°С.

и^/л'р.зл;;зугс.ао С^сссгвч^хгу- с;;х;п;:;эсг2» ТР&-Сз?а Сола . г:-;>•! у '"'Оспгу.'.у’ (С^Д) с пр;з -1СЗ°С.

':.<■*••••: ч-куэ оС’рсйогку рооу^ггсз кролс"^:: с гж^а ь . .• :•. .' -■ ,й/;й. Р.лгл^-га сч^гаи дасгогср;^:.::: п?:; р^О.ОЗ.

:..... . .-• ^кгосках спк£г*ал£ (гг) по угл^глллсь, есл:;

" . •.... : .-а*;.- 114. соотасютгу.:-;;я сос^^ср::'^э1:г;г.с;^ аппе-

•■• .ли ахства-ях ш^овдкдл и кх сззйззпе

. . с;яь-обпо"т;; £■’, о~-.п'.:.г??г?; г"/г г-Л суеуосоп:'?^ "-У~

ту--ц;г» Ь-дг^-п;;.:тоа. К к-"ллу 21^гй р^йзти, по-су. „ с д крупл.! ьопрсо врп^о 11^1 сгосрэдзггг-.о Е'. суп-

:•••;:• е-го^-гу рг-гкц:::!. Егр^срсс: са пута полскз отвогд ка ;.;. гоарсс стсл оЗ^-руг&Ес*' вса-а к друплла

: •-.. и^оЬз Ш, БсЬлЗа Р1) 1031; 1&кккс1 и, Спсгг! Р

олг.оой р-;а;г1ьх;:осг:з иа врсг^гр&ткаклЗ схигул (Я1С)

. > . ;:агаилоЛ селеэеша; истода,: шо;:лшеого "тж.~^га" ,' . ..з^лсл. Зтот фаюг, по-ьвд1^ой7, сбгясгпатсы кесОходк^оотьг

, . •г;„.:;/атсльки клеш: для шшцгэдз! кроцгсса В-клгхогаой

> ;г 11.-,зтйиу пгргозачагыпл"; »таа сгтасгэдл В-кгетсч ютоге-■ . •.. иСг.аи^ог.:агаой нгщ гксаср;л:гагаа,иой «одела прл.од;;лся с

Ь'., .-чу.лл&шюй популящш сплекоцахоз, содер^д-й гс&глгэ В-дкьЗоцл-: лкхлогательвыо клепя, необходимо для ышцлгцни процесса В точной прал1£зргции. Ецделешше в воследугл;еа кетодса поак-с • ::ошши а" прегившярованкыа В-леи$оцнш шгли гаяшию р^агарлнать на ыитоген (ЛВС) в отсутствия вспоцогахельшх клеток. У^унпо от клетки использовались нааи б качестве респоэдеров для прямого супрессорного хшшнкя на них ЭК и их растЕорза&и продуктов.

Данные, представленные на рисунке 1, свидетельствовали, что .1^ оолэдэли способностью пряио, без посредников, выроЛъено и дозо-

- и -

г?.г::с.'~:о утгтЕТЬ ккззпгуз ЛаЗ срогг^грзцгэ пр«2’ст.'-’.;:го'■■ ■•'•’.г 3-.::":'!'с".гг;сз. Тоса СС?."С}, гатл?<гг»у? »?л;го ”г.г“-г^г.’-г.'гл' рггсо г.дасутсэ сролпогсг;гп::о (Ксздасс^а (3 1РС?; ’-ч<' *сз и др. 1СС‘; !.'.тгЕГСЗ ДЗ 1ЕОО; СС2!ГГГ‘СЗ л др. 1033; :п

И !С21) о ;:зг:г^1 у П оиоссСгоогн йО-гсг?дстг.гя:::-.’'* с5?~.-сч ''уп-

р:сс/рсс'5^-ь В-«?агзчп» пра“^'ср.';?гтг::э р;ггг?п.

что ;-.’гг^г*£2 й супргсст 3-бггстсгг:о?:»,:м е$?г;?~~! с"ссс5-::гсгю углг-т^^ грат::5:г-^г-3 Т-л-г'сгт:™'? з :;лгсг€г::;Л СКЛ (СГР

■гг::: ЕСД) (р::з 1). С-;:; ’:с~ъ па с:;гу”с.~л суг,гэтт:~гг.:ого

гсггг~""3 - С17 г’г^ггггГ'птсгсту ДТЛ, с?с?!?*-п5-г^ гетстч-' •*?•> со ххягху ггсдй.т^ггз.'^го [•’Н3-1:г:г.~.н:сч -с-:

.••1сгсц:.’7с,.г_; Г315. Тс:г.гг сС?“?г<. пэгуют:*!? ясгг р.'су.зт-. гяэзго с слуй.г.';хгг^;":.-:.': р^гю л^г:-^з (С'г;:;^:с~ I! ”п. 1^37; С.,,.>-\гл:с,:: л др. 1Г23; Ц1.71’о?а и др. 1Г23), »::-спгсз?гг:,?,о с"ггдог".V - .суп?, что ссуестеспгсз сузрясеергая ксггпссть ЕС, незгл-'стнс.* кз подлз*?'::;э В-шето’-шсго б.'гзстагепгзэ, гакг'М&рзяткз )г> ст-ст: -н:2о ;; гдгоглп£гся-!ЗЛУ1ГТС.*?22.та Т-кзегс'-гзп рззесзд.

Р. .лее пс-атспэ, что сстос?зспся супрссссп*гя ггггзпог-гь ?гг ;г-ксмазгггш кгегос игсгэ? аосаггрсзагься с угнсггппсгг лроду;::.-'' -

утгииэ&зш Т-.Е2ЙС15ГО»га 113-2 (Егсскз ЛС, 1!озк1п ПЧ 1931; е1 а].. 1952; !.5осге еЬ а1. 1302). ДаяпЗ ЦГГС5Ш Яйгле’.сл к.г':: у:

росгогкч фвюорзи дгз процессов врагзг^ерацяя в дп£5сргг.':~ у 1^!"сз я его дс'’"":? з сярутту?Я ср-'.-.З »ЯЯ9? РЗЗЯТЬС? • тг бь'.ч эдодогссм з изхалкснэ сдеряогягя рпсгпггя ;г"/к?л;х ”. • : ссб. шкучвит.» вгзд рззудасахи сгпдогаасгзовала, что ?" как к их кугьтурагькчЯ супернатант, на обладали слосо?..:>; с^'пр'гссироЕать,яц!У«:*?сзсяауя КопЛ, продукта спленга?п?гг.: •!7! " Отсутствие супргсссрпсго с^гота бкго тачга ошсчепэ пря иссз-;? ваняи влияния ЗК и их суперяатаятоз па !1Л-2-завис:?*ую прат-'-рз ци» 1Сс!!А-йгастоз. Отсвда, 1ШО сделать вывод, что 12а1уиосупр‘.-.'-с-г.рнов действие Ж, по садг-юау, не связало с угяатетгеч крсду -ну,у, и утилизащя 11Л-2 Т-кгота^Я!. 1И-2-незавкс"яй мехачтч ян :.::;рог>г])ерат1т!!ого действта К<, &гслсватсгы:о, «звт йв^пгьсп чертой, отличаацей их от целого ряда других т:-:поз ЕСК.

Ранее было показано, что костномоэгозые ЕСК способны угие-тать прэл!ф?рацию клеток некоторых опухолевых линий (Р815, Ы210, К2)

В*/о«спома*ои

р::а 1 - Сук^зсзсугаЭ еїїскт СЛ из кшгге^^уцжа^г^уу» крагг^э-

С-г^£г5Егсз к огвутохс^э Е2£ч^аго гдаота ЕЛ ка с~о-х^’Сір^^г Т-£^г“.Д?ггсд в кух&уурэ сгфарт;а (СЗД.

ЕХ культопрозгаа п уквоеядш соотновенкях с преактивировагшьаа! В-аафхрясгд! (1) в присутствии ЛПС, шш спленоцитами (2) в СКЛ (СО? еети-СОА), в точение 43 часов. Процент супрессии определяли СО ОТЕСЕЭЯЗЗ К Пра^П^СраШЕНОиу ОТЕЭТУ ЛКУ$ОЦИТОВ в культурах, не сздсргащк 5Х. Представлены данное одного из 4 опытов.

рко Е - Вшсоэм> £Н па вравфзрзгрхэ ихэтоя опухотавкз хзяяЛ.

ЗК (2,6х10°/лунку) культивировались с клетками (1х1Сг/лунка) опухолевых ЛИВИЙ Р815; 1.1210; ЫБ1; ЫБ^ВАЬВ/С . В качестве конт-

роля еспольвовались клетки опухолевых линий, культивируемые в тех же условиях, но без добавления ЭК. Представлены данные одного из трёх опытов.

(Suslura et al. 1G90; Seledtsov ot el. 1BS5). В crsna о srai, представлялось вязеыу оцэшзть способность 3< супрессзфозпт» про-г!^р^ц:=5 спухогевых кяэток. Дазпыэ, продстсагепЕУЭ па рпсупкэ 2, свидетельствовали, что £< на окагыгали cynpsccopnoro ееежїя па рост кзетск опухолевых лкаий F016; L1210; flSi. Смгстэ о тел, озя

обладали зсгэтпой способность!) cynpeccrposara рост В-клзтсчпоЛ пйр’/дпоД johna tSixBALB/C. Получению дс:пп_’э, по-сздсікгу, свидетельствуют, что геяепггзсхнЗ стерши норкзльизго В-лкм5оцзта, внесенный в опухолезую клетку в результате клзтсчпого слняппз, ійпєт сделать оту кзетку чувствительней к супрзсссрпсму действия ЗХ.

Ранее установлено, что сугрсссср^оэ влиянпэ кгэтск "срэтропоэ-тическоЗ" солэБбшя ыстэт пе вав:'с:гть от прпсутста:и т-лі'-,’'сц:гтс-з (Сенников СВ 1ВЗЗ). Однако, вопрос о ыехгзигхэ іггіупосупрессорпо-го действия Зр-супресссроз и о рола в пса разных тапоз кммупкжм-петентных клеток оставался открытый. Itot псйїаглзо нз р;:сункэ 3, присутствие в сродэ фуНК1510ЯаЛЫ!0-а!!Т!ЗШХ (что было предварительно подтверждено соответствуй:^:! фупкщгапальпіі!:і тестами) В-клеточных, Т-клеточнш, игл изкрофзгальпых цлтокяпоз пэ отаэня-ло супрессорный эффект SK на В-клэточпьй бл^стсгспез. Отсгзда нотно сделать ватмыЛ вывод о тси, что прякой супресссрпійі ЗХ

на пролиферативнуп и функциональную активность В-Л2ї5оцятов остгот Сыть независим от функциональной активности другій тетоз ішиупо-кскпетеятных клеток. Следует, однако, заметить, что полученные нгыи данные не искпэчсот восксгность злияиїя с!< пз В-!’лего";г.:Л Сластогенез опосредованно, через иодулящээ функциональной аккп-ности клеток, не являгсзися в-лсгїоцятгїя. Более того, в СЗШО последнее время наші было установлено (данные готовятся к опубликовала) , что ЗК иогут сеіфетировать ЕЗН-гага и, текли образом, прімирозать (.Ці к секрецій окислов азота, которые, іїзк известно (Angulo et al. 1995; Hoffman et al. 1993), способны,эффективно ингибировать прол:іфератіпз:-іне лиифсядшге реакции. В пастсзцзе вре-їія значимость опосредуемого lib пути влияния SK на иммуногенез исследуется в назей лаборатории.

Ранее опубликованные данные давали основание предполагать, что ЭК могут опосредовать свой иьмунссупрессоряый эффект, по крайней мере частично, через продукция растворимого фактора (Ми-тагов АВ 1990; Цырлова ИГ 1891; Mltasov et al. 1991). Как показа-

* •„* —... С( *.*Ск **.~Л 1,0 I*~л £>^ ..^СС1,1Гл/“

сЗОК ь соотносил; 1:1 с прогал^шпоо!

Е-£;.-^сц;:т£,-^; (С.БхЮ^/л-гг^) г присутстЕка Л10 с до-С;::.'с:,^:„’ ж&кэ ергда (3), лкЗо 5&Х суЕ:р;;стсг;тп поаучгг>кэго сг про^:»1х:г?о^злг; Б-аг^-ошггов (2), Т-л:^.'.;,оц;;гсз (3), 1Ш1 ^лро-

С-1о; (*'.). Про;;с~аагс!щ одного иг трс>;; с™:зг.

р~о 4 - С.;—гг-!-' кугатуу^^»кзто оуз»раэж!тв от СП (и с^асп.*.эрагри Ерсаяа^гуд^г:пк1з В- н Т-хгаСсгпта.

ПрэЕкпадроаадацэ В- и Т-.саЗацнти (2х10и/лунка) кугътишфОЕалл о ЛЮ в КсшА, ооотгэгстеокео, в присутствии укезаяшх концектра-цгй супарг^тслтл от Н1. Представлены донные пяти опытов.

::о яз р-:су~:з -3, icyrvr*тг^гмг/Л cyzz^r/rzr: с? CIt, r.v~z€~o СГ'-'Ч

?r?c~r.:^s? 3-”".г,'Г;'7^сз. 3 го г? :>г:м, гсс? г.э cyrr",-*::'-:? ?гэ с::*“т..*-з u^voct-rrroro гп ггт,.,г"?.-7.ч "пЛ г.7С~ц~.^':ггз

:а:;г:;гг::т--.''.""г'.я Т-.г-'!с:гптз. Гр?"этг-~~-~гэ г*гл*Э7~;у, пп-гт-yc:"i3c-r? г/i vo, что -:з ~С г^-У-2:;:."-':э !.:зто-

:гул.! cn~cci:rj :::"сср';:ст.’:о::”о cynpccctrpc:':» В-кгстгггг'! ?Г"г:с-

гсгез, ::э пс-сг-гпя np:i зтеч р"2?::?;:э Т-^тсгстгя рсчтг'Л. Gr?.~'C? са'.'зтгть, ';ro гсгА'гзг/э г,:'.::; ;;г”!г:’э о :-~с”гсс?':гс:гл с::^?сг.”г/з* !*г*. СЧ Л:2Всроз суяросс,т?с:?г.т?> бггсгсгпг.л, гхуятг

з r~3"-~cr.r-:-:i с р:~.сз г.глг:т"~гг:г сгг^етэггсггг.гг-п'П,

что ::yrb7yp?iv:::'! суп"р::^?гл?, по^г.'““”:Л с? гкэгс:: **ср*ггг-ггт';т^-nsc:s;V* се^сг-?н.сч супрсссгпзогр.? грап'^?ргг.2П£;1 сгзо? спттгхг.'ггг') ::з !'с:'А. Рассгатр’ггл sri ”Г_т.-:з, сл-с/о?, с;;::г*о, yrrers, тгз •-.oc.scv/s’-a.i parzr-з r-tcTctirjn ncoyirrm ссдзртагз в сгсг:: сгз?:гэ пс,.:г:..,о лг-^й-зсту :t бо.сьп:п грг:лу*_”р™.’з г:":!’:г*~" сг.ссс1:”:з t:--r»o .-трсдупсгз супр?ссср:~.з: ;’-~ггсроз толпл-тть гг;: В-, т~:? :? Т-!"с?с'"г.’о прагч зр-^г-ггз р?г:з."г: (‘r^ulo r.t al. ICCjj i'ertel-l'ulff et al. 1CB1; J’cffrcn et al. 1C?3). Xcie.-cos C-i гг~э сСргггя> 2!::~'гг.:з, что ears ртгсз в !::;:сс'ггэ рссгс:тл^рсп :'сгсгъ-аогаг: нс-рагдг*е:г-уэ nc.T/.mrn ;trcTC:s сплз".?":;:, то з гг-гл псргггзкгах роспс:;д:р.:"": nzzr.zr.cb Р’^згс;”^ пс?тг:г:1п'5 "пгггтт:-rc'i" пр;а:е:п::.тсзс::шг Т-лт^сщггл. ^зссгоппсз ''.:гз дгс? ”3-ю при слз,:ггз попосргг.стгеетй ('ушсуяпагьзг'г > р.пгл-г-сгпсгзгг’) сК с Т-л;г^зи’!тс:'л, оп:;раться а Сольной стгаэпп вз спса рсзугь?-^ Til, г. не на ”стП7.;9, полу^т-»тт:—п р^с-з лруг:за г^тср^-г!.

Лззестно, что с:л':'гг';.:’л !:> играет к.™1епуя рать з нзхг.г~у?п разв:1ткя гсиуткхгсгичесчси рас:а.п;й,:! фуикц::спзя>п£?я агскгзпость !'3 нгпрл:г/э сзлзана со Есе:.п процессами в :a гг^фсо^угепп! (1!о™хгз

3. И. 19SG). Отсп^а понлтея штерес к вопросу о етга растссрл-ных продудев ЗХ фуквд'онагьн^'тэ гкпгЕкссть V') (Bretcn^crius et al. 1991; Hcnspal et al. 1994; ltehandas et al. 1991; f.terrls et

al. 1991; Wans et al. 1994). Согласно получен:?!."! яг-:!

культуральный супернатант, полученный от SK, ие обладал способностью супресскровать ту»^ор:!Ц!!дагьнуя акт!гвность Отсзода испзо сделать вывод, что секретируеьгые SK продукты иогут не оказывать супрессорного влияния на процесс макрофагальной активатш, который, как известно, имеет ключевое значение в приобретении №} im-

иунорагудшторшх СЕО&ЭТЗ.

В согокушости, продотазленшэ eiso результаты подчеркивает ППйЧКііОСТЬ ЕЭПОСрОДОТВОЕНОГО ЫШй ЗС ва В-К2ЭТ0ЧЕУХ) пролкфера-Ц£Э В К£СЇОЧ!ІС£і иЗХСлШ^Э ОЕОСреДУС-Ой 3\ ІЕиуПОрЗГуЛЯЦЇЗІ. В ЭТОЙ сваей представляет интерес получонныэ ролов дгишна о способности В-лкуфоцетов етшуедхеать вритропозз (Felcfesn et al. 1993; torra et al. 1B34). В частности,Ouzo установлено, что агитированные В-дафоциаи шгут sкспрессирозагъ на своай иог.'браиэ так нагываз-шй ернтроэднш ксесаше-скагудафус^й фаілор, а таїеаз секретнро-Е—ть б ореду фз;отра, поддерг^пз^гг^ш рост 35л (Dainlak et al. 1931; Guha et al. 19ЭЗ). В подтверждение этих наблюдений ш ка^-ди, что прсактнвкровятмэ ЛЮ В-лиифоцэты обладали способностью сиогулщшать щ>ое£грац::и Si в отсутствии дополнительных ростовых feucropoB. Такш сбрааоы, тгж$:еса данные, по-видкшау, ука-E1ES3т на наличие правее регуляторных взаимоотношений иегду зрит-ропоззеа и В-лк^йопоэесы и выдвигают на главную роль в регуляції проі;с:;одЕг;іх в костной козго ках/нологических процессов.

Сеноттпжческие особенности ВК. Согласно литературные данный, наиболее универсальный;! особенностями ранее охграстеризовашых йшов ЕСК является их чувствительность к токсическому ДЄЙСТЕИЗ лизосолэтропного агента - JSJ3 (Angulo et al. 1995; Ualer et al. 1986; Itoore et al. 1992), н наличие на их поверхности рецепторов к C0eS060E0ijy агглютинину (СЕЛ) и к агглэткнкку эаредьпза пзенкцл (ДЗП) (Angulo et al. 1995; Brooks-Kaiser et al. 1992; Hoskln et al. 1992). Вместе с тем, популящм ЕСК весьма гетерогенна по ряду признаков (Hertel-Wulff et al. 1984; Hoskin et al. 1992; Moore et al. 1992; Strober et al. 1989; Sugiura et al. 1990) и, в частности, по своей чувствительности к действии агентов, Ологафуюцих клеточное деление (Brooks-Kaiser et al. 1992; Brooks-Kaiser et al. 1993).

Исследуеше наші ЭК были резистентны к токсическому действии ЛМЭ (сн. Материалы и Методы). Согласно полученным нами результатам, супрессорная активность Ж также не претерпевала существенных изыенений после их обработки блокатором клеточного деле-ния-ыитомицином С. .

Данные, представленные в таблице 1, свидетельствовали, что большинство ЭК (65-70%), выделенных из селезенки анемичных шшей, ' несли на своей поверхности рецепторы к АЗП. Обращал также на себя

внкмвяЕв тот фзкт, что практически все ЭХ обладали способностью свяаїзать КозА, меченный СІТЦ. Кроме этого, на части іпотек «эгодоу нэпрямой гааіуЕофгюсресцояцаи быта паявдена экспрессия цгргероз, распознаваемая ыАТ 1Е5.05 и ІС1. Ранее было показово, что эти цАТ в прясутстгги іхмпломанта обладает селективной способностью ргэрувать ЕСК, накатившееся в солевЭнке беременных иьаеЯ (Нозкіп еЪ а1. 1992).

Таблица 1.

1 иаркйр | распознаваемые мАТ I 11 — I рецепторы - 1 рецепторы|

і і 1E5.ES (MS—1) IC1 | к КонА к АЗП |

1 похатятельт&І К2ЄТКН в Z | і 30 25 | 100 1 . _ 1 1 50-80 | і

Гетерогенность популяции ЕСК подразумевает существование различных шмувосупрессорных механизмов. Так, установлено, что ЕСК могут супрессировать пролиферативные лимфоидные реакции черев продукция окисленных производных азота (Angulo et al. 1995; Hoffman et al. 1993), ПГЕ2 (Brooks et al. 1994; Brooks-Kalser et al. 1992; Brooks-Kalser et al. 1993; Choi et al. 1988), ТРФ-бета (Hoskln et al. 1992; Young et al. 1992; Uoore et al. 1992) н других пока веохарактеризованных молекул (Brooks-Kalser et al. 1993) Проведенные нами исследования установили, что ЭК не способны секретировать в среду функционально значюаге количества ОТ. Эти данные позволили нам исключить роль N0 в опосредуемой ЭК супрессии В-клеточного бластогенеза. ПГЕ2 также, по-видимому, не играл значимой роли в а тем процессе, поскольку, согласно нашим данным, индоыетацкн (блокатор синтеза ПГЕ), добавленный в культуральную среду, не отменял супрессорную активность ЭК.

Суммируя выпеизлаженные данные, «одно заключить, что ЭК обладают набором морфофункциональных признаков, отличающим их от всех других ранее охарактеризованных типов ЕСК.

Родь трансформирующего ростового фактора-бета (ТРФ-бета) в опосредуемой Ж супрессии В-клеточного бластогенеза. Цитокины,

как известна, играют ключевую роль в становлении и регуляции юг*

/

цуЕСГопсЕа. Ке: поїїлЕНО кгзі, сокрот;:рус^',‘ К'. продукти іюгут игрок* ссглуз, єслц по ояродеас^а, радь е опосродусіай КС корсгухпі^. Рслсе бч:о устепомг^р (Гусіїгша £3 1935; Зелпікоу сі сі. 1ССЗ), VIо Е;’ изгут кірсЗвтшахь нРНК, кздпрупїд) Юі-і-£иа£з, НЛ-І-бота, М-£, ІІЛ-6, ГУ-КОЗ, ТКЬбэта, ИЗН-тзіа. В то ЕЭ Ерсіп, ЕХ еэ £:етпзссаз^аї гоеіі, кодиру=;:э КЛ-2, ИЯ-3, МЕ-Б.

В С20Ї0 Е^лзгс с3 І^ІУПОСУПРЗСООРЕІК свойствах ТгО-Сйїй (Иоо-рсг И 1031) п о сзйрзіра зтсго £а:ггора ііоат);о:,азгойн;^: ЕСХ (Усигс сі оі. 1932; исогс сі аі. 1922), представляло кнтерс-с де-гаако ссзхздоЕать Еог^сг~їуз роль тге-бета в опссрсдуєузіі сЛ суп-ргсхта В-клоточ£ого бгйзтогє^ава. Дгл втого, шгл; Сш есполізовз." Бзотсрг^'сгтагькгЗ есдеод, 002022ЛКЫЙ на спецкфлческш связызаьк! сзіхх^аго^ісі акгонуклео-твд^і і?НК, кодпрук^й ТР>бета. Д^л-елэ, гг:;~стгп?.оішко ка рссугзсэ Б, свіздетельствозали, что культи-е:^ї"::л;о Е1’> б бсоскюроточшой срзде в щягтутсхвїш антксшслових,

ЕО ЕЭ І2ПТР05ЬЕІВ{ (раНДС&ШЫЯ) , ОСЗІГОЛукгеОТиДОБ, ПрИЗОДКЛО К 3.12-чгга&Еску сігпзпз сущюссорпоЗ гиягкввости полученного ОТ К\ »г/льгур.'.гіЕого супернатанта. Полученные результати, такт образец, да^ыя. осиоааша пойїагеть, что секреция ТК>~бета ихігег играть вазякиуа роль в опосредуемой 5К іаг.'уносупрессаі. Дополни-тсгькии подтііср^дсеі:с-іі отого явились дашшэ, представленные на рі:оуик» С, которш свидетельствовали, что внесение в культури ыДТ, сд2ц^цчзшх к ТР>бет£, значительно ослабляло супресскв В-іізоточного бластогенеаа, вызываемую культуральные супернатантоы от ах.

Суклфуя данниэ рксупков 5 и 6, иогно сделать вывод о том, что ТРС-бзта їіо^от играть значительную роль в опосредуемой Э>4 ншуно-оуврссга. Из основание полученных результатов гдэгшо такке заключить, что Бл способны секретировать параду с ТРО-бета другие пока неохарастерзгозаншэ супрессорные ігалекудн.

В цзлш, представленные результаты свидетельствуют, что ЭК предстезлоот собой особую популяцию ЕСК, специализирующуюся на рэгуллцаи пролиферативной и функциональной активности В-лимфоцитов. Зто, по-влдтзыу, обусловлено как пространственным совмещенной орятропозза и В-лкфшоэза в пределах костного мозга, так и $ушасэтаалышми особенностями Ж. Для Ж характерен ряд признаков

Р КЗ ет, ?г-~Г=7гЗ ЗГ>С2ГЯ‘'Ьз ІЛ ГЗОГТ^З-'

<>у>^ у _■! Ц.1І * I >^Г-. ^

ЗК (5х10б/ил) !{у.тьт:япфсв,іл! в тгчэплэ 2-І ч "ссе.ссротсчпсй срэ-до з призутстгпи гсснтролышя (1) игл слтпс: і^іогік по оті:с’'з:'із її ТРО-бета олигонукяс-отидсз (2). Далее определяли ггстшисстъ культуральных супврпатезтов 5К „,гэ кх споссСпостп супргсс::рс~-ть В-клэточннй пролззфзрацет з Отлэт-на ЛПС. На ргсуппэ прздстсзлс^ы даннь-э одного пз 3 опытов.

€КГ*~Т?Э-о<т<т**з (ьвт/ж)

рис 6 - 2^г~п сггпї-ТГЗ-бзта сягям г:а сугрооссулуп______________

ку.^туг'лппд с-/"ср::ггг-тап от Е-гтгр-т;;-—• ягтгслГ" ПрезхтиЕированкые В-лим$оциты культивировали с культуралыаи оу-™™натантом 91 в присутстЕни_ЛПС и с доСазлениом ксйтралнзуэ- •

щюс моноклональных антител к ТРФ-бета. В качество контроля со-

польэовались "■ --------------------------------

довавления трех опытов.

пользовались В-клетки, культивируемые 3 тэх КЭ УСЛ02ИЯХ, но боа добавления^ анти-ТР>бета-антител. Представлены денныэ одного пз

(неспособность супресскровать Т-клеточные реакции, резистентность к действию лизосонотрошюго агента ЛМЭ, независимость супрессорной агаизности от клеточного деления), отличаэдй их от других типов ЕСК, иыекднх так называемый "нулевой" фенотип. Однако, подобно некоторым другим типам клеток (костномозговые стромальные клетки, лизфокин-активированные киллера, тучные клетки), обладающих естественной супрессорной активностью (Brooks et al. 1994; Brooks-Kalser et al. 1992; Hertel-Wulff et al. 1984; Holda JH 1992; Hu et al. 1994; Jadus MR Parkman R 1986; Maler et al. 1986), ЭК способны секретировать ТРФ-бета - цитокин, вовлеченный в регуляции пролиферации и дифференцнровки не только лк4оидных, но и других кроветворных клеток (Hooper WG 1991). Известно, что гемопоэз-возмуцающие воздействия, включая антигенные, усиливают ассоциированную с эритропозвом иымуносупрессорную клеточную активность (Васильев НВ 1975; Журавкин ИН 1979; Цырлова ИГ 1987; Brooks-Kalser et al. 1992; Brooks-Kalser et al. 1993; Hertel-Wulff et al. 1984; Medina et al. 1993). В свете имеющихся данных, есть основание предполагать, что усиление эритропозза, наблюдаемое в кроветворной ткани в течении антиген-индуцированно-го иммуногенеза, может бать, по крайней мере частично, обусловлено повышением эритропозз-стимулирующей активности В-лимфоцитов. Таким образом, интимные взаимоотношения между эритропоэзом и В-лимфопоззом могут, по-видимому, играть важную роль в клеточном кммуноадаптационном механизме и их дальнейшее изучение может открыть принципиально новые подходы к коррекции иммунологических нарушений. .

ВЫВОДЫ

1) Ядерные ЭК способны оказывать прямой супрессорный эффект на В-клеточные пролиферативные реакции. Вместе с тем, ЭК не способны супрессировать Т-клеточную пролиферацию и генерацию ци-тотоксических Т-лимфоцитов в аллогенной смешанной культуре лимфоцитов, а также ингибировать процесс противоопухолевой активации макрофагов. Таким образом, ЭК являются иммунорегуля-торными клетками, чья супрессорная активность направлена на угнетение В-клеточных иммунных реакций.

' 2) Супрессорная активность ЭК не ассоциируется с подавлением секреции и потребления лимфоцитами ИЛ-2 и не отменяется под дейс-

тз;-:?'з 1с;го!~::?та, грсду ст*/г;^г:-з:'рг!гг>л!"'-'и ч’.<чу»:е;«:;н*-тснт-птя гект:с?*а (?-, п~чро$лг.}. ?п' дляки» поп-

гогл?з7 следит* г/год, что с7гя.‘=гзс.‘?г’’*'* п> «л .тро»г-.1-::р.ч-

тст.туя г::т!п;1:сстъ В-сг/’рчгясз, гэ-г”дп.-с?г/ «с сОусяогаег* содгтл::с-н 2 ср?,”э Л'^^гя гг'гс^оэ, 0 "тсгрнлтстпуг:;^?; Ь-г.”';хо*,":с;.7 рссг-у.

3) Баяыгжстго (50-€0%) ГХ, п*г.С“^*ог^?чя П"> см&рвнок ин?(сгп!нз< >'и-

пей нгсот ка сзсзЛ пэтсрхлсзг:! рецепторы к ДЗП, часть ЭХ

(20-205) огатреапгруг? ля г:ег:5р?лэ ;:®с.ч?рн ех т^ствеинкх суп-

рессергаа ккяок. рсопоакг^г^*.^ *:ЛТ 1ЕЕВ5 и К'1. Рмгсп- с

тем, ех не чувстз::??д>п! к сгргбстк? л5!Ъг?л-?^К1"ЯТ-,ч г!':'рс\<,

ЧТО СТЛИЧ8?Т !К ОТ ДРУГКХ РГПСЭ {Л£рРда»р!ГО!>-ЗН!!Ш К50ТСК С

“сг^стЕеигей супргсссриой есксзостьо.

4) .1хт!!й;фо?а,ш.,г В-.г.В1фоц}пи ?;эгуг стимулировать пралк$ерацст

?К, сп'х'сйгнх, я сеся очгргдь, ограчтг-шват1. >г_зетсчкь-Л рост. Таким образом, кепссрбдстзеияое в?ег:*одсйс тз ЗК с В-лкх-^сца-таии В Процесса !~С.!У!ЮГе!!033 !.КГГеТ ПГСТТЪСЯ вата!^ уелоПИРЧ

Формирования сбаяаяскрсэетшсго геиугшого отв:та.

5) ^пресссрнын эффгкг на В-кгетсшш ргсгя^гл 54 опосредуют через продукцию ргстюримчх Сяетсров. Пос>го,ч?:у оСрсСоткз клеток ан-тис!,‘!с.’:ог-!,"г,1 ол^гснуклсот:’л2'.'л, спе'г~;"Г’пж''1 к г?НК ТК^б<г?а, а тйкяе добавление б.чокируг.’гях сятя-ТР>Сэт -ачтнте.1' пр'.гаодкго к снияенкэ супрессорной атгявности кухьтурзльного сугернатгята •-■К, одним из тагшх факторов является 1Р>бе^з.

Сш:зог, ргЗэт, оду&г."гд~.г,";rj; по ?с.:о дкзсертЕцки.

1. SoledtSGV VI, Avdosv В', Sclcdlsova GY, S^,~rin с», Prolio-pcnko IV, Koziov VA. Ben о LUUTGrf calls cs cyloit&tic effcctors responsible foi suppressing lcukcnic. crorth In vitro.// Biased. £■ Phsrcucothor. -1935. -V. 49, - P.2C3-EC9.

2. Ssnniko.- SV, Guskova LV, Sc..xrln CJ, Koslov VA. Expression of cytokines genes in crythroid calls. /ДШ tooting of tlw international society of !;~rjjtol&^'. Instcnbul, Turklyo. - 19S5. -pp. 201.

3. Седедцоьа Г.В., Селодцэз Б.И., Се^зраа Д.И., Коолов В. А. Hcnoabsojuasis i 1шэ3гр;:чег::а2 гхзюкол длг сг^ла гс*.*э:аа^ассоэз£. о: кихжческого воздействия Х1^аятврызвв1кчсс1зк препаратов. //Тез. докл. 3 Российского Е£1^:энааьпого конгресса "Человек и лг-1ырство" - {.:саизг,1С£3. - С. £02

4. Сй£.’дцоьг Г.В., Свгздоз В.К., СБаараи Д.Н., Козлов В. А. a-tfsercr "трт.кгяцялтпт против aefiKcicsj" в условхак сиеганвого хи-).;грного крэвахвореши. //Тез. додл. 3 Российского пац:;эиагыюго гонгрссса "Человек и лекарство" - К£ааза,19£3. - С. 202

5. Сь^арин Д.U., Селгдцзва Г.В., Селадцоз В.II., Торайаа В.Я., Козл;э В.Л. Супрессорпьы 8$*«кг веарглдо эретрокдои клетез: на В-клсточлув пролкфзрафз). // Баллэтенъ вютср^едтагыюй биологии и кедищкы. - (в печати).

6. Селедцрва Г. В., Селедцов В.И., Авдеев И.В., Cai^paa Д.М., Козлов В.А. аффект "трансплантат против лейкоз;" в условиях химерного кроветворения. // Баллетень зкепера^гнталыюй биологии н медицины. - (в печати).

Зак. 52. Тир. 100. Пен. л. ^

ш 1Г1«<уия СОВМИН, Новосибирск, ул. Академика Тимокова. 9, 1996.