Автореферат и диссертация по медицине (14.00.14) на тему:Генетические и иммунологические параллели у больных раком легкого и бронхиальной астмой

Актуальность р»6йты

Рак легкого I Pj'I ) занимает лидирующие позиции по смертности среди онкологических заболеваний, ее уровень не уступает суммарным нокам гелям с мер I ноет от таких злокачественных новообразований, как рак кншечника. рак молочной железы и рак простаты. Им явление РЛ на ранних стадиях позволяет существенно повысить эффективность лечения: показатели Элегией выжинаемое гп при постановке диагноза на станин с 15% возрастают до 70% при дютюстнке заболевания на I стадии.

Согласно л онолым большому ряду литературных данных, отражающих эпидемиологические и экспериментальные наблюдения. аллергические заболеяання. н частности. бронхиальная астм® (БД)сникают риск злокачественных новообразований, » частности, рака легкого (II. А, Адо. Н И. E1jcilh.ch, Л. А. Горяч кш и. 1982; Н. М- Нережная. С И- Ядкут, 1983; Н. В- Васильев и др. 1994; Н. М. Бережная, В. Ф. Чехун, Р. И. Сепиашиили. 2005; К. Е. Osann, 1991: Р- Mills el al. 1992; К. Mcllstnmd el al, 1997; E. Negri et d, 1999, MJM. Henderson el d. 2003. A, Talbot-Smith ct d. 2003; C, Bosctti et at., 2004; N LighifaN ct al, 2004; J. L. Wicmcls ct al., 2004). Однако немало и противоположных сведений о положительной взаимосвязи зтих заболеваний. Вопрос о взаимоотношении аллергических и злокачественных патологий был поставлен еще и первой половине 20 века А А Богомольцем, когда были сформированы представлении о различных наследственно конституционных гипах, один из которых был определен кик аллергический. В настоящее время на основании накопленных экспериментальных данных гг результатов клншко-тгнотеииалогнчеемл кд&полениЛ сформулирлммы 2 опиозигные теории взаимоотношения аллергии и рака, однако ни одна hi гшх не объясняет, почему в одних случаях аллергия препятствует развитию рака, а в других - способствует- Между тем, данные, полученные в процессе исследований в рамках '«той проблемы, мечут способствовать разработке подходов по пллркчноЛ профилактике злокачественных новообразований и новых методов иммунотерапии рака.

Для повышения эффективности нсслелошвй в плане прояснения вопроса о векторе тшиыоотошештй аллергии п рака, представляется целесообразным исследование различий или сходства иатогексгнчсскнх признаком бронхиальной астмы и рака легкого как мболепиий, ршаюиюшнхси из основе обшей ткани-мишени. Рак легкого и бронхиальная астма являются заболеваниями мультнфакгориальной природы, риск формирования которых у того нлн иного индивидуума обусловлен взаимодействием большого количества генов с этиологически значимыми ередовымн факторами Общим атрибутом и пусковым моментом канне роге нем, независимо от локализации злокачественного процесса. нарушение peiy,niuni клеточного цикла. Эффектниный контроль клеточного инкла прнволнт к репарации поврежденной ЛПК перед процессом репликации н предотвращает накопление генетических нарушений

My тин я гена опухолевого еунрессора р53 - одно из наиболее часго встречающихся генетических изменений в клетках различных опухолей, в частности. при раке легкого они отмечаются в 50-90%. случаев (N. /Нао el a) J 999; W N. Rom el al, 2000. J. Yofcota, T. Kohno. 2004). Инактивация генов н результате соматических мутаций в свою очередь может зависеть or регу.чигирного влияния гак внешних факторов, гак и генетических механизмов, определяющих отпет на ханцеротенные воздействия (I. Yofcoto, Т. Kohno, 2004) Нормальней бронхиальный зшггелнй подвергается риску повреждения вдыхаемыми ilih эндогенными окислительными метаболитами, а индивидуальная чувствительность к повреждению существенно зависит от различий в экспрессии ферментов бнотранеформаштн кееиобиошков (ФБЮ 2 фазы, а именно глугттгион-К-трансфераз. катализирующих реакцию инактивации высокоакшаных генотоксическнх areirroB путем их коныогашш е глутвтноиом (Е Crawford, 2000), Показано, что Нулевой генотип GSTМI и liS'ITI ассоциируется е повышенной чувствитсльностыо к генотокснческому действию продуктов табачното дыма, что выражается в пониптенин частоты хромосомных аберраций и хроматндиых обменов в клетках эпителия. а также частоты мутаций гена р53 в сим со снижением дсгоксикашкишого потенциала (II Norppa. 2004; К. Alexandrov el al., 2002).

QntcenQWl нногочнсаншж данные, с в ид с гел ьсгяу н>ш не о лажном значении хронического воспаления в патогенезе рака. в качестве подтверждения могут служить результаты когортаых исследований iw длительному применению нестеронлных противовоспалительных агентов, которое приводило к значимому снижению риска рака легкого, кишечника, желудка и пишеволл (J. Л. Baron, R, S. Sandler, 2000; L. A. Garcia-Rodriguez. С Huerta-Alvarez. 2001; M. M«tins-Green et aJ, 1994; R1J Ness. С. СоОпяш. J 999) Механизмы прплнферлннн, злойчествемной ■рлнеформацин тканей и хроническое воспаление тесно сопряжены е дисбалансом иммунитет» и реализуются через нарушения кооперации ичмунокомпегентных клеток и межклеточных взаимодействий на лругих уровнях (М Л, Пальцев. А. А. Иванов, 2003; П. М, Шварцбурд, 2006; М. Makarthur et aL 2004),

Анализ экспрессии ониомаркеров при различных днерегенерггорных изменениях легочного эгнггслия на фоне хронических воспалительных заболеваний легких позволяет говорить об нх предполагаемом злокачественном потенциале, Следует отмстить, что практически при всех вариантах днерегенераторных и прелраковых изменении обнаруживаются мутации р53 (I: А. Коган. 2001, 2003; W.N. Rom с( al. 2QOO). К предопу холевнм изменениям бропхяаяьносоэпнтешм, повышающего риск ыалнппшинн. относят плоскоклсточную метаплазию, л не плаз ию и гинер1Ьтазню эпителия. tnt сосгояння могут счигагьси прелраком легкого (Г. А. Франк, 2000. Е. А. Коган. 2003 Часто рак легкого возникает на фоне \ро1ИР1сской обегру ктнвиой болезни легких (ХОБЛ), для которой характерны днснластичсские изменения и метаплазия бронхиального эпителия.

ХОБЛ характеризуется наличием хронического нос паления в бронхолегочном тракте с преимущественным вовлечением CD8+ лимфоцитов. неГпрофилов и макрофагов (Ы. Sofer el aJ, (949: G. С Donaldson et aL 2004) Принципиальным различием патогенеза ЬЛ и XOBJI является эпизодические и реверсируемые нарушения функции бронхолеточною тракта к первом случае и прогрессирующая Легочная обструкция во втором на фоне рсмодслирования дыхательных путей, при котором наряду с метаплазией отмечается тинернаазня гладком ышечных волокон бронхов, базальноклет очная гиперплазия, фиброз, уменьшение числа альвеол в листальных отделах воздухоносных нулей, гипертрофии желез внешней секрешш слизистой оболочки и ангиотснез (Р. К,

Jeflery. 2001: F Cappcllo ci aL 2006), При исследовании биоггпатов бронхиального эпителия у больных ХОБЛ в 71,5% случаев были обнаружены различные изменения клеточной архитектоники: гиперплазия базольных клеил к, шюскоклегочная метаплазия и. в 22,8% случаев, днеллаэня бронхиального зпителня (F. Cappcllo el at., 2006). В настоящее время в литературе имеются лнвдь отдельные указания, позволяющие сделать вывод об ассоциации ХОБЛ с повышенным риском раки легкого. Так, многолетнее наблюдение когорты больных ХОБЛ исследователями Лексннгтонского университета (Северна» Америка) выявило повышенную частоту заболеваемости раком легкого у обследованных но сравнению с ггоиу.тяционныч контролем, причем показатели заболеваемости раком возрастали с усугублением стадии ХОБЛ (D. М. Mannino et at. 2004), Также показано, что ХОБЛ ассоциирована е формированием плоекоклеточного рака легких у курящих (Л. Pap el al. 2004) Кроме того, ряд исследований у казываст на высокий риск заболевания раком легких у пациентов, страдающих эмфиземой легких, которая является закономерным и необратимым компонентом патологических изменений легочной ткани при ХОБЛ {S, Т, Mayne el al,. 1999: К, Kishi el а!. 2002),

Таким образом, ХОБЛ является хроническим восналютльным заболеванием легких, которое протекает с участием иммунологических механизмов без формирования гинерчу вствнтельносгн немедленною тина и сопровождается днснласгическнми изменениями бронхоальвеолярнош иштслия. ассоциированными с повышенным онкогенным потенциалом.

Механизмы патогенеза БА включают в себя взаимодействие иммунологической н воспалительной компонент, особсшюсги которых определяют реакцию на ксеногенные раздражители и выход в патологическое состояние, Механизм воспаления при классической атонической БА вовлекает Т челн еры 2 шпа и эозннофнлы как основные зффекзорные клегкн. В патогенезе инфекционно-адлергической формы бронхиальной астмы наряду с IgE-опосредуемым механизмом играют клегочно-опосрелусмые реакции но тину реакций гипер чувствительности замедленного типа к аллергенам микробного происхождения {Р. М. Хииюв. 2002), Хроническое воспаление в рееннраюрном факте у больных астмой ассоциировано с ремадвлнрованнеч дыхательных ну «ей. основными проявлениями которою являются >рочин дыхательного иипелня. пшерилазня м гипертрофия слизистых желез. гиперплазия клеток дыхательного эпителия и глалкомынзечмых волокон, еуб-нппелнальный фиброз н шгаокнез fJ. R. Reader el al-, 2003: L. Wang el al 2003; T. R, Bai et al., 2005). Однако, в отлнчие от ХОБЛ. при анализе литературы, посвященной опенке морфологически* изменений в тканях бронхиального дерева, нами не выявлено ни одного упоминания об обнаружении лиеплазии бро1зхналъного зпнтелия нрн атонической астме. HiTTcpeceH тот факт, что несмотря на полярные рахзнчия нмму нопатогенеза ЬА и ХОБЛ. около 1QK больных манифестируют признаки обоих заболеваний, что. скорее всего, следует рассматривать как НХ сочетание (P. J. Barnes, 2003).

Таким обратом, ряк легкого, ХОБЛ н астма ассоциированы е хронн'нхким воспалением, в формировании и поддержании которого вовлекаются участники воспалительного каскада, вкзючая цитокины. чемокнны, ростовые факторы, ферменты, рснепторы н адгезионные молекулы.

Прииичая во внимание, чго PJI, ХОБЛ н НА имеют общие гкани мишени, представляется целесообразным исследование различий или сходства гатненетичееккх признаков m заболеваний для выявления предпосылок, свидетельствующих о повышении нлн стсженнн риска рака легкого у больных бронхиальной астмой.

При этом следует особо отмстить, чю выявление объективных клинических и Лабораторных признаков аллергических состояний у больных со злокачественными новообразованиями не может рассматривания как непреложное доказательство связи аллергии и рака, так как в данном случае может сказываиля влияние роста опухоли либо противоопухолевого лечения U Schvsnrt/baum et al, 2005} Литературные сведения также не принимают во внимание широкий клинический полиморфизм бронхиальной астмы, который предполагает высокую генетическую гетерогенность, а. следовательно. и различия механизмов патогенета

При зп^'ючно^югнчеектк нсследакшмж влияния астмы ггл риск ршнктня рака легкою необходимо проводил, стандартизацию ipynn больных но фактору курения, что также представляет определенные сложности, поскольку 85-40% больных раком легкою являются курильщиками, а больные аегмой курят значитслызо реже в связи с гиперреактнвноезмо бронхов. Перечисленные обстоятельства свидетельствуют о необходимости поиска новых падто! к оценке влияния бронхиальной астмы на риск развития рака легкого.

Дня получения более объективных лонных о взаимосвязи ЬА и РЛ мы ссшн целесообразным изучение генетических полиморфизмов. для которых есть сведения о значимая ассоциации с РЛ. у больных ХОБЛ и Б А, Сравнение частоты встречаема>н отдельных аллелей, генотипов н их сочетаний у больных ЬА с соответствующими показателями у больных РЛ лаег возможность составить представление о сходстве или различии изучаемых генетических особенностей при этих заболеваниях. В качестве промежуточной группы сравнения между РЛ и ЬА была выбрана группа больных ХОБЛ ■ хроническим воспалительным заболеванием легких, которое протекает с участием иммунологических механизме» без формирования гнпсрчувствителыюстн немедленного типа и сопровождается метаплазией и дне пластическими изменениями бронхоальиеолярною 'лнттелня. предрасполагающими к ишшюашш.

Выбор полиморфизмов Осуществляли на остове литературных данных об их ассоциации со злокачественными новообразованиями, в частности, с РЛ. не менее, чем в 2 разных популяциях, а также вовлечении функционирования ТПТХ генов и патогенез аллер!нческнх заболеваний или физиологию бронхиального тракта (J. Schwartzbaum ci al, 2005) В литературе представлены данные о связи РЛ с полиморфизмом генов ФБК 2 фазы GSTTI и GSTM1 (J. Spit/ el al, 2000; р, Yang ет а!. 2004: A. WcnztafTct al. 2005; I. Snicker et aL 2002. E, V. Hclogubova ct al. 2004). гена он косу п рессора p53 в различных популяциях (В. В. Ляховнч и др., 1947; II. Р. Papadakis el а). 2002: D, Р, Miller et al, 2004; X, Wu d al. 2002), 'Ую свидетельствует, что указанные полиморфна тепы являются маркерами предрасположенности к онкопатолопш легкого. Изучение святи 1ена рецептора хемокиношло рецептора ССЯ5 с онкологическими заболеваниями началось недавно, в литературе есть сведения о его способности регулировать транскрипционную активности р53 н об ассоциации делстшонного адделя CCR5dd32. колирующего функционально неактивный бслок-рсцстир, с прогрессией рака молочной железы (S. Manes el al. 2003), В НИИ онкологии ■'.Томска были получены данные об ассоциации полиморфизма гена CCRS с прогрессией РЛ ДО. В, Севостьянона, -004)

Наряд}' с генетическим полны орфизмом мы уценивали состояние иммунологических факторов, включая клеточный состав н уровень шггпкинов в мокроте больных, стридмощнх ХОБЛ или БД » ершятелипм аспекте с РЛ,

Также был проведен анализ влияния различных генотипов изучаемых iснов на количественные признаки. патогенетически важные для act мы и ХОБЛ и характеризующие состояние факторов местного и системного иммунитет. Исследование связи различных генотипов изучаемых генов с патогенетически важными для астмы и ХОЬЛ качес(пеннымн и количественными признаками, характеризующими состояние факторов местного и системного иммунитета, позволит выявить их роль в развитии предрасположенности к РЛ и может быть полезным при формировании групп повышенного онкологического риска.

Для уменьшения гетераrailЮСТ н выборок, на наш взгляд, целесообразна было бы огдельио рассматривать разные формы астмы. Для понижения эффективности выявления ассоциаций полиморфизмов изучаемых генов с раком легкого. ХОБЛ и Б А необходима также стрпяфнкжщк контрольных выборок в соответствии с группами больных по поду, возрасту, географическому региону.

Цель исследования

Оценить в сравнительном аспекте частоту распре деления Генотипов патогенетически значимых для рака легкого генов (ферментов бнотрансформацни ксенобиотиков 2 фазы, аноптоза и рецептора хемокнков) и особенности местного иммунитета бронхиального тнгелии у больных хронической обструктивной болезнью легких, бронхиальной астмой и раком легкого,

Задачи исследования Провести сравнительную оценку распределения функциональных и «нулевых)» генотипов генов ферменгов бнотрансформацни ксенобиотиков второй фазы GSTTI и CSTMI у больных раком легкого. ХОБЛ н бронхиальной астмой 2. Сравним, распределение генотипов и час rot взлелей (BstUl- полинорфюм 72 колона 4 экюна) гена р53 у больных раком легкого. ХОБЛ и бронхиальной астмой.

3. Исследовать распределение генотипов н аллелей гена хсмокиноеого рецептора CCR5 (CCR5del32 полиморфизм) у больных бронхиальной астмой и ХОБЛ в сравнении с контрольной гру ппой и больными раком легкого.

4. Оценить особенности воспаления и цнгокннового профиля п слизистой бронхиального дерева у Сольных раком легкого, ХОБЛ и бодмшх бронхиальной астмой.

5. Исследовать иммунологические показатели на системном и местном у ренте у бакнш раком легкою, XObJI и бронхиальной лет мой в зависимости от полиморфизма изучаемых i сноп.

Научная новизна

Полуюта новые данные о повышенной частоте «нулевого» генотипа reira GSTM1, сравнимой с таковой у больных РЛ, у курящих бальных ХОБЛ по сравнению с иопуляшюнным контролем для л ни европеоидного происхождения Западно-Сибирского региона.

Показано, что частота «нулевых» генотипов генов ферментов бнотранеформаштн ксенобиотиков второй фазы GSTT1 н GSTMI и их сочетаний у больных БА смешанного геиеза существенно превышает уровень нопулацноиното контроля и сравнима с таковой у больных РЛ У больных е астмой атонического генеза не отмечено повышения частоты генотипа USTMI«0/Oh no сравнению с контролем,

Получены новые данные о повышенной частоте Arg аллеля tciia р53 (BslU]-нолиморфнзм 72 кодона 4 жюиа) у больных ХОБЛ. которая не отличалась от таковой у больных РЛ. Напротив, частота генотипа Pro/Pro у больных ХОБЛ. как и у больных РЛ. была более низкой по сравнению е ионул и инонным контролем, Одинаковое распределение генотипов гена р53 у больных ХОБЛ и РЛ можно рассматривать с одной стороны, как свидетельство сходства механизмов вовлечения р53 в патогенез ХОБЛ н РЛ. а е дру гой - как указание на повышенный риск формирования РЛ у больных ХОБЛ.

Выявлена связь Pro аллея* гена р53 е повышенным уровнем лимфоцитов в индуцированной мокроте у больных ХОБЛ и БА

Мол учет J приоритетные лип мыс о более низкой чип ore встречаемости делецнонного аллеля ran хемокнновою рецептара CC/tJ у больных ЬЛ iki сравнению с популяционным контролем в Западно-Сибирском pel ионе

Впервые в пределах одной популяции проведен сравнительный анализ полиморфизма патогенетически значимых язя формирования РЛ генов у больных К А различного генеэа, результаты которою свидетельствуют о различной степени предрасположенности к формированию РЛ у больных астмой с атоническим и смешанным генезом 'заболевания.

У 50% обследованных больных РЛ выявлены признаки вторичной иммунной недостаточности, которые предшествовали развитию злокачественного процесса, сходные со структурой инфекционного синдрома вторичною иммунодефицита у бальных ХОБЛ и БД

Теоретическая н практическая значимость

В работе выявлены сущее таенные различи* и распределении генотипов и частоте встречаемости вариантных аллелей между группами больных с дтопической астмой и больных старше 40 лет, в которой превалиру ют больные с астмой смешанного тенета. Во^нервых. >то свндетельсгвует о различной роли изучаемых генов в патогенезе разных форм НА. во-вторых, указывает на неоднородность группы БА и азане возможной предрасположенности к РЛ. '>то позволяет объяснил, хотя бы частично неоднозначность результатов проводившихся ранее клиннко-зпидемнологичсских исследований о взаимосвязи БА н РЛ.

В результате анализа полиморфизма гена онкосупрессорного белка р53 у больных БА полутены данные об асеоцнащш Pro аллеля и Pro Pro генотипа гена р53. а также сочетании тенотнпов CCR5CCR5-ProlPru с тяжелым течением ЬА смешанного геиеза, что свидетельствует о целесообразности исследования роли полиморфизма гена в формировании рсзистетиостн к кортмкостерондкой терапии

Сведения о наличии «нулевых» генотипов ФЬК 2 фазы и Arg аллеля гена р$3 (BstlJl-полиморфизм) у больных ХОБЛ могут быть использованы в качестве дополнительных критериев при формировании групп повышенного риска ею РЛ,

Полученные данные об ассоциации CCR5dd32 с низким риском формирования ЕЛ лшкешио п»юи указывают т шуишеп дальнейшего исследования евши полиморфизма CCRS с нредраегтоложениоеттио к ЬЛ у лиц с отягощенным семейным анамнезом

Основные положения, выносимые на защиту;

1, Одинаковое распределение генотипов генов ферментов бногрлнеформатшн ксенобиотиков 2 фаты, апогпоза и ренегттора хемокнноп у больных ХОЬ.Ч и PJ1 свидетельствует о сходстве механизмов вовлечении исследуемых генов и патогенез згих заболеваний и указывает на новы шейный риск формирования РЛ у больных ХОБЛ,

2, Результаты сравнительного анализа характера распределения алдсльных вариантов генов, патогенетически значимых для формирования РЛ (ферментов метаболизма кееиобнотикои GSTMI и GSTTI. оикосунрессора р53 и гена хемокнновоти рецептора CCR5) у (нижних бронхиальной астмой различною генеэа свидетельствуют о менее выраженной предрасположенности лиц с атонической астмой к развитию рака легкого по сравнению с больными астмой смешанного генета

3, Изменения системного и локального иммунитета, ассоциированные с формированием вторичной иммунной недостаточности, и клегочно-молскудяриые особенности бронхиального зпителия. сопряженные с выеокой вероятностью появления дне пластических изменений, наряду с выявлением взаимосвязи патогенетически значимых признаков с аллсльным полиморфизмом изучаемых генов, свидетельствуют о наличии молекулярно-генетнчеснЕХ предпосылок для реализации злогачесгвенной трансформации з(нг№1ня у больных ХОБЛ и бронхиальной астмой смененного icucua

Л проб л пня работы

Основные положения и результаты научных исследований были доложены на объединенном иммунологическом форуме с международным участием, г, Екатеринбург (2(К>4>; IX Всероссийском научном Форуме с межлународным участием имени академика В,И Иоффе «Лии иммунологии в Санкт-11етербурге», г.

Санкт-Петербург (2005), Всероссийской научно-практической конференции, посол шейной ! 5-легнему юбилею Красноярского Краевого Центра по профилактике и борьбе со Ct1ИД и инфекционными шГнмшшиин. «Дни иммунологии в Сибири», г. Красноярск (2005): научно-праггической конференции НИИ онкологии ТНЦ СО РАМН «Иммунология на рубеже веков к 75-лстню со дня рождения академика РАМН Н.В. Васильева». г. Томск (2005); 15 ежегодном конгрессе Европейского респираторного общество, г. Копенгаген (2005); 111 ежегодном национальном конгрессе молодых исследователей в области сердечнососудистых и респираторных заболеваний, г, Внннинсг (2006); VII конгрессе молодых ученых и специалистов «Науки о человеке», г Томск (2006); VI съезде аллергологов и иммунологов СНГ, Российском национальном конгрессе аллерголога» и иммунологов. Ill Российской конференции по иммунотерапии, г. Москва (2006); 16 ежегодном конгрессе Европейскою реснираторного общество, г-Мюнхеи (2006).

Обьгч н структура диссертации

ВЫВОДЫ

1, У больных БЛ с дебютом заболевания после 40 лет (с прсвалнрованнем пациентов с астмой смешанною генеза) частота генотипа гена (1S1M1 кО/Он сравнима с иконой при РЛ н значительно нише, чем ь контрольной выборке и » группе больных БЛ с манифестацией заболевания в молодом возрасте (атоническая БЛ), У носителей генотипа (iS'I'M UO.'O» выявлено модифицирующее алшше курения на риск формирования ХОБЛ и РЛ, но не БА.

2, У больных ХОБЛ. как и у больных РЛ. выявлено повышение частоты Arc, аллсля (76.7%) гена р$J (Arg/PTO Нол иыорфизм 72 колона 4 ткзона) при снижении частоты Pro аллсля (23.2%) и Pro/Pro генотипа (1,7%) но сравнению с нопулянноннын контролем (65.9%. 34%. 12,7% соответствен но). Ассоциации БЛ с полиморфизмом р53 не выявлено,

3, У больных Б А смешанного генеза выявлена ассоциация полиморфизма р5$ с тяжестью течения заболевания: частота Pro аллеля составила 57,)% по сравнению с 29,8% в понуляцнонном контроле (р-0.0278). а доля |-oM03inot по Pro • 42.8% но сравнении» с 7.8% в популяционном контроле (р=0,0101) и 4,8% у лиц со средней степенью тяжести заболевания (р=0.007),

4, У бОЛЫШХ БА частота делецногнюго аллсля CCRSdei-32 существенна ниже, чем в популяционном коигрозс (6,4% пропев 10.9%, р-0,0364), и минимальна при астме атонического генеза. У больных ХОБЛ не выявлено изменений распределения генотипов гена хемокннового рецептора CCR5 по сравнению с иопуляцнонным контролем н РЛ.

5, Структура инфекционного синдрома вторичного иммунодефицита у больных ХОБЛ н БА сходна с особенностями ггреморбндного фонд у больных РЛ, Уровень общего IgE в крови превышал |раинцы нормы у шн тентов при всех патологических состояниях, значимых межгрупповых различий не выявлено

6, В индуцированной мокро iv больных ХОБЛ и Б А выявлен высокий уровень основного хсмотакснчсского фактора неГпрофндов ЦЛ-* и повышенное содержание нейтрофичов, более выраженное при ХОБЛ, У больных БЛ отмечено преобладание функциональной активности Th2 лимфоцитов, О котором судили по соотношению уровни шпокинов ИЛ-4 III [ф у н мокроте, но сравнению с бальными ХОБЛ и бальными РЛ.

Pro аллель га« р53 ассоциирован с повышенный уровнем лимфоцитов в индуцированной мокроте пациентов с ХОБЛ и БА. У больных БА и РЛ носителей «нулевого» генотипа GSTMI выявлено значимое повышение содержания эотннофнлов по сравнению с больными с нормальным генотипом Делецконный аллель гена OCRS не влияет на клеточный состав мокроты.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Постоянный прирост забо.1t с ва с мости раком легкого и смертности от него во всем мире делает чрезвычайно актуальным исследования по изучению факторов, аизеобегнуюшнх либо, напротив, препятствующих формированию этого заболевания. Эпидемиологические и фундаментальные молекулярно-тзетическнс исследования четко показали этнологическую роль целого ряда канцерогенных факторов среды, ведущее значение среди которых имеют связанные с курением метаболиты, а также вовлечение генетических факторов, в первую очередь ответственных за взанмолейеттше с экзогенными и эндогенными агентами, способствующими злокачественной трансформации, в патогенез рака легкого. Однако существует сше один аспект, на который мало обращается внимания, а именно, возможность снижения риска рака легкого при определенных патаэогнческих состояниях, в частности, при аллергических заболеваниях Свидетельством такой возможности являются довольно многочисленные сведения в литературе на протяжении нескольких десятилетий, указывающие на опп слитные взаимоотношения аллергических и раковых заболеваний (М. Sanchez-EJorgcs ег al. 191»; К, Е Osann, 1991; Р Mills ct at,, 1992; Е, Negri ct al,, 1999; A, Talbot-Smith el al. 2003: C. Bosctti el al. 2004; N. Lightfoot ct al. 204)4; J, L Wiemets et q]. 2004) Исследования взаимосвязи аллергии и злокачественных новообразований развивались в нескольких направлениях I) эпидемиологическое изучение связи между частотой развития злокачественных и аллергических заболеваний; 2) изучение на экспериментальных моделях взаимовлияния анафилаксии н опухоли; 3) исследование возможного ан шканнеротшого эффекта клеток и молекул, участвующих в аллергических реакциях немедленного тина. На основании проведенных исследований не было получено однозначных результатов, доказывающих защитную роль аллергических состояний в плане формирования злокачественных опухолей (В. Romanski сГ в!. 1999; Н McHuftic. 2001. А А, Santillan ct al„ 2003; A. Talbot^Smilh el al., 2003). Противоречивость результатов кдиннко-зпидсмиилогичсскнх исследований может быть обусловлена трудностями стандартизации групп обследуемых больных по пазу, возрасту, анамнезу курения и другим факторам, ВЛИЯЮЩИМ mi этнологию и патогенез аллергических и опухолевых заболеваний, а также некорректностью подхода по опенке частоты

ВЛЛСрТНЧССКНХ peUKHIlfl и OllflMimC у 011К0Л01 ИЧССКИХ бОЛЫТЫХ В СВЯЗИ С ВОЗМОЖНЫМ влиянием онкологического процесса или терапевтических воздействия (J. Schwartzbaum cl al. 2005). Ножным также является унификация гго ткани-мишени, которая задействована при аллергических и онкологических заболеваниях. и в этом плане очевидное преимущество имеет изучение взаимоотношений бронхиальной астмы и рака легкого, топографической и морфологической основой для развития которых является бронходег очный зннтелий.

Перечисленные обстоятельства свидетельствуют о необходимости поиска новых подходов к оценке влияния бронхиальной астмы на риск развкгтня рока легкого, что может способствовать обнаружению возможных антиканцерогенных факторов, ассоциированных с бронхиальной астмой МулмнфакториальныА характер аллергических 'заболеваний и злокачественных новообразований предполагает определенную генетическую дегермн н иро ва ш гость функционирования патогенетически важных звеньев, связанных с обссисченнем взаимодействия с ксенобиотиками, поддержания целостности генома н функционирования иммунной системы.

В качестве промежуточной группы сравнения между раком легкого и бронхиальной астмой была выбрана группа больных ХОБЛ, для которой выявлены существенные различия механизмов патогенеза по сравнению с астмой. Тем не менее, шдипшя литературы около 10% больных имеют сочетанмые клинические признаки ХОБЛ и Б А (P. J. Barnes, 2Q03). ХОБЛ является хроническим вослалнгсльным заболеванием легких, которое протекает с участием иммунологических механизмов без формирования гиперчувствителмюеш немедленного типа и сопровождается метаплазией и дне пластически ми изменениями бронхоальвеолярного эпителия. ассоциированными с повышенным онкогениым потенциалом, что указы влет на предрасположенность к малипшзащш

Для получения более объективных данных а взаимосвязи астмы и рака легкого мы изучали генетические полиморфизмы, для которых сеть сведения о значимой ассоциации с раком легкого, у больных ХОБЛ н астмой. В литерагурс представлены данные о связи рака легкого с полиморфизмом генов ферментов метаболизма ксенобиотиков 2 фазы GSTT1 и GSTMI (К. Spitz cl al. 2000; Р Yang et al. 2004; A. WcnvlaflTet al., 2005; I. Stuckcr ct al 2002, E. Belognbova et al, 2004>. гена онкосупресеора р53 а различных популяциях {В, В. Ляхович н лр-. 1997. Е. D. Papadakis et ul- 2002: 1>. Р. МШсг et al. 2004: X. Wu d al 2002). Это свидетельствует, что указанные полиморфные гены являются маркерами предрасположенное! н к онкопатодогии легкого. Сведения о связи гена чемокннового рецептора CCR5 с онкологнческнмн заболеваниями в литературе немногочисленны, однако есть информация о его влиянии на транскрипционную активность белка р53 и о связи CCR5(lel32 полиморфизма с прогрессией рака молочной железы <S. Manes с< al. 2003). В НИН онкологии г Томска были получены данные об ассоциации полиморфизма гена CCRS с раком легкого и его прогрессией (Н В. Севастьянова. 2005).

Мы проведи исследование распределений генотипов вышеу казанных генов у больных ХОЬЛ и бронхиальной астмой и сравнили их с популяционнмм контролем для получения информации об ассоциации изучаемых полиморфизмов с л ими заболеваниями. 11а основании сравнения частоты встречаемое!н отдельных аллелей, генотипов и нх сочетаний у больных ХОБЛ и астмой с соответствующими показателями у бальных раком легкого можно составить представление о сходстве нли ратлнчни изучаемых генетических особенностей. Сходство распределений генотипов или одинаковый характер изменения частоты встречаемости генотипов и аллелей у больных ХОЬЛ или бронхиальной астмой с таковым у больных раком легкого позволяет сулить о сходстве механизмов патогенеза и указывает на наличие генетических предпосылок для формирования рака легкого у таких индивидуумов.

Всею обследовано 420 больных с патологией легких, из них 1R0 первичных больных раком легкого. 158 больных атонической бронхиальной астмой и 83 больных ХОЬЛ. Работа проводилась с соблюдением принципов добровольности и конфиденциальности в соответствии с «Основами законодательства РФ об охране здоровья граждан* (указ Прсиглснга РФ or 24,12.1993 № 2288). Контролем послужили данные о полиморфизме генов GSTTI. GSTMI, р53 н CCRS среди здоровых лиц соответствующей популяции, при пом трупггы контроля были сформированы с учетом максимального соответствия составу иссдслуемых групп по полу и возрасту

Материалом ли исследования полиморфизма ггноц и показателей системного иммунитета служили венозная кровь, для исследования факторов локального иммунитета - индуцированная мокрота.

Возникновение изменений в структуре Д1Ж, приводящих нрн определенных условиях к злокачественной трансформации зннтелня. напрямую зависит от интенсивности воздействия мутагенов внешней среды и генотоксичсскнх агентов эндогенного происхождения, что, а свою очередь, определяется эффелп шностью функционирования систем контроля стабильности генома и ферментативной детокенкапнн, детерминированными генетическими особенностями индивидуума (D Palli ci al. 2004; i Yokow, T Kohi», 2004)

V больных ХОБЛ мы не выявили значимых огличнй в распределении генотипов генов (JSTTI и сочетаний GSTTI и GSTMI от контрольной выборки, нрн этом частота нулеяого генотипа GSJTJ была существенно ниже, чем у больных раком легкого. Частота нефункционального генотипа GSTM1"0''0" гак в обшей группе, так и среди курящих пациагтов с ХОБЛ была значимо повышена но сравнению с контролем и не отличалась от таковой в группе больных раком леткою, Дналит литературы и результаты собственного исследования позволяют предположить, что, по-видимому, нулевой генотип GSTTI не является важным фактором риска заболевания ХОБЛ. нри этом литературные сведения также свидетельствуют об отсутствии ассоциации нулевого генотипа GSTTI с раком легкого в большинстве популяций (Д. Г Янбаева и еоавт,. 2005. J-J, Yim el aL 2000). Влияние полиморфизма гена GSTMI ita предрасположенность к ХОБЛ было показано ДЛЯ европеоидов Великобритании и Франции (Н Baranova el a)., 1997. I) J. Harrison et al. 1997) и в Тайваньской популяции IS. L. Cheng ct ah. 2004)

Нами получены данные, не исключающие роли нарушения функши 6Щ1 и формировании ХОБЛ. что свидетельствует о необходимости дальнейших исследований с учетом повышения репрезентативности выборки. Показанная нами ассоциация генотипа GSTMI«0/0» с ХОБЛ и раком легкого свидетельствует об общих патогенетических механизмах формирования этих заболеваний и о наличии определенной генетической предрасположенности пациентов с ХОБЛ к формированию рака легкого

Оценка распределения генотипов гена GSTTI и сочетания генотипов GSTTI н GSTMI н общей труппе больных астмой показала существенное повышение частоты встречаемости нулевых генотипов ею сравнению с ионуляннонным контролем, стратифицированным но полу н возрасту'- Известно, что для истинно атонической астмы характерно раннее начало заболевания (до 40 лег), а в группе больных бронхиальной астмой с дебютом после 40 дет преобладает смешанный механизм формирования заболевания. Также есть литературные данные о различиях распределения вариантных аллелей iCHoB ферментов бнотрансформашш ксенобиотиков н хсмокиноного рецептора CCR5 у больных бронхиальной астмой разных возрастных групп (С. И Макарова и соавт,, 2002: Р Srivastava et al. 2003). В зтой связи мы сочли целесообразным оценить полиморфизм генов GSTT1 и GSTMt раздельно в вышеозначенных группах больных бронхиальной астмой. Оказалось, что у больных бронхиальной астмой в группе с превалированием пашчентов с астмой смешанною генез» частота генотипа GSTMJ wO/Ow сравнима с таковой, обнаруженной а группе больных раком легкою н значительно выше, чем у больных бронхиальной астмой с манифестацией заболевания в молодом возрасте (топическая астма), у которых пот показатель не отличается от контрольного уровня Согласно литературным данным, нулевой генотип tena GSTM! более строго, чем GSTTI«0'(K ассоциирован с риском немелквкдеточного рака легкого, особенно у некурящих н молодых индивидуумов (Е. V. Belogubova et aL 2004).

Принимая во внимание сведения о том, чго курение является ведущим этнологическим фактором развития рака леткою, а гакже модифицирует риск заболевания раком легкого и бронхиальной астмой у носителей нулевых генотипов ферментов бнотрансформашш ксенобиотиков, мы провел и анализ частот генотипов GSJTf и GSTMt у куряшнх больных бронхиальной an мой и ХОБЛ, в сравнении с группой больных раком легкого,

Для больных астмой мы не пыявили различий в частоте носитедьстиа генотипа GSTMlnO-Oiit в зависимости от статуса курения, тогда как ассоциация гсшшпш GSTM i bOi'O» с повышенным риском заболевания ХОБЛ показана только для ку рящих лиц. Это свидетельствует о модифицирующем аз нянин курения у (метелей нулевых генотипов GSTM I «0/0» на предрасположенность к ХОБЛ, а также указывает ш более высокий риск заболевания раком .теткою Поскольку н у курящих, и некурящих больных астмой различия частоты нулевого генотипа GSTMI«0/0» с контрольной группой одинаковы, можно говорить о незначимой роли курения как модифицирующею фактора повышения риска формирования рака легкого у таких больных

Полученные данные о повышении частоты нулевых генотипов генов глутатнон-$-трансфервз GSTTI и GSTMI у больных бронхиальной астмой не противоречат лизерагурным данным. В ЭТНОЛОГИИ бронхиальной астмы значимая роль также придается загрязнению окружающей среды ксенобиотиками и токсическими веществами, которые снижают барьерную функцию кожи и слизистых; при этом многие ксенобиотики сами являются аллер!снами или гаптенвми или приобретают свойство аллергенов после ферме»»гативной бнотрансформацнн in vivo (Л. Ф. Казначссва и др. 2002) Кроме тою. курение матери во время беременности и пассивное курение является фактором риска формирования бронхиальной астмы у детей {F. [>- Gillilind с( al., 2002; М. Kabesch et al. 2004). Исследования рази активного курения в формировании бронхиальной астмы у взрослых показан и, что курение не влияет на риск развития заболевания, однако способствует более тяжелому течению астмы (V. Sfroux ci al., 2ООО)

Согласно нашим данным, рисковая значимость GSTMI«№0h для формирования бронхиальной астмы повышается с возрастом, это согласуется с результатами других авторов (С. И, Макаром и др . 2002). Вероятно, здесь шрают роль временной фактор экспозиции ксенобиотиков у носителей GSTMI «ОЛЬ» а также щмсненис метаболизма эндогенных биологически активных веществ вследствие нарузиення фу нкции GSTMI. в том числе продуктов перекис но» о окисления и метаболитов арахидоноиой кислоты, которые участвуют в патогенезе хронического инфекционно! о воспаления у лиц со смешанным генезом бронхиальной астмы.

Для форчнрооан»гч рака легкого важное значение имеют нарушения фу нкции одного из ключевых генов, осуществляющих охрану целостности генома ■ он косу пресс ора р53. Его инактивация в клетках щи гелия в результате мутации -одно нз наиболее часто встречающихся событий, ассоциированных со злокачественной трансформацией (С. Витке el в1., 2005; W N. Rom el al. 2000; J Yokota, I Kohno, 2004), при этом важно, что такие нарушения р53 фиксируются же на стадии днсллзстичсскнх измененнй бронхиального эпителия. и частота их нарастает по мере Прогресс иромазшя сгеисми лненлазии (W. N. Rom el а!. 2000). Чувствительность р53 к генотокснческим повреждениям существенно зависит от функциональной активности генов детокснкацни. в число которых входят глутатион^-транферези Исследованиями последних лет у больших раком легкого показана прямая связь частоты мутаций р53 с наличием нсфункшюнальных rerroriHKiB GSTMJ "0/0" (AJcxandruv et al-. 2002), Важное значение в плане подверженное!и р53 повреждению генозокснческнмн агентами может имен» Arg/Pro полиморфном 72 иодоиаД зкзона, оказывающий модифицирующий эффект на чувствительность р53 к инактиваций путем мутаций (М, Bonal'e el al, 2003. М. Tada et al. 2001).

У больных ХОБЛ нами выявлено повышение частоты Arg аллсля гена р53 при снижении частоты Pro аллсля н Pro/Pro генотипа по сравнению с поиуляннонным контролем Различий и распределении геноззнюв н частоты аллелей в группе ХОБЛ с больными раком легкого не выявлено- Больные раком легкого демонстрнрутот повышение час юты Arg аллеля по сравнению с иопудяинонным контролем и тенденцию к снижению частоты Рго'Рго генотипа. В то же время отмечена относительно высокая частота генотипа Pro/Pro у неку рящих больных раком легкого: 20,0% по сравнению с [2,7% в контроле и 9.8% у курящих лиц. зто согласуется с литературными сведениями о повышенном риске зтого заболевания у носителей функционально неблагоприятного аллеля Pro (К. Kuwapn el al. 1993: G, Liu el al, 2001). Полиморфизм p53 у бальных ХОБЛ практически не изучен, В одной работе получены данные, свидетельствующие об ассоциации аллсля Pro с риском заболевания ХОБЛ у курящих лиц в популяции монголоидной расы (Y-Г, Wang ct aL 2005).

В результате проведенного в настоящем исследовании анализа нами не выявлено различий распределения генотипов и аллелей гена р53 в зависимости от фактора курения, вероятно я связи с небольшим числом наблюдений в выделенных подгруппах Памп наблюдалась тенденция к повышению доли лиц, гомозиготных >ю Arg, среди курящих,

Таким обратом, нами обнаружено сходство распределения генотипов гена р53 (Arg/Pro полиморфизм 72 кодона 4 зкзоца) у больших раком легкого н ХОБЛ: при обоих заболеваниях выявлено повышение частоты Arg аллеля и снижение частоты Рго/Рго генотипа ин сравнению с понуляпионным контролем Наши результаты находятся в согласии с пред ста впеннымн ранее В. ВЛяховнчем с соавторами данным и .'Ui« Западносибирской понулянни о повышении частоты Arg аллеля в группах бальных раком желудка и раком легкого (В.В Ляхович. и лр. 19971. а также ряда зарубежных авторов (F. D. Papadafcis ei al, 2002, t. Wang et al. 1999). Следует отметить, что литературные данные об ассоциации Агц/Рго полиморфизм 72 колона 4 экзона гена р$$ с раком легкого достаточно противоречивы, и это не является только следствием популяцнонныч различий. Показано, что в опухолях происходит селекция полиморфных аллелей рЗЗ с более высокой способностью к мутациям, в частности, для опухолей легкого. молочной железы, головы и шеи и ряда других было установлено селективное преимущество опухолевых клеток, несущих p53Arg. при згом отмечена ассоциация с низкими показателями выживаемости больных (М. Furihala el al,. 2002; fL Papadakis et al. 2002: A. Langerod et al,. 2002: M. ВонаГе ct al. 2003), Экспериментально было показано, что селекция в сторону Arg происходит только при наличии в гене рS3 рецессивных мутаций, необходимых для полного нарушения апонгогического пути через инактивацию гена р73, Для домина1ггнз.1х мутаций. способных самостоятельно инактнвнровать апозттотнческую активноегь дикого варнвнга р53, такой селекции не требуется (М. Tada et а!., 2001). По-видимому, но в какой-то мерс может обменить разноречивое п. данных разных авторов о связи полиморфизма рЗЗ с риском формирования рака легкого и чувствительностью р53 к генотохснческнм воздействиям (Т. Murala ct al. 19%, X, Jin el al. 1996, Y, Hu et al 2005).

Неизученные нами данные свндсгсльствузот об отсутствии ассоциации полиморфизма р53 с риском заболевания бронхиальной астмой, однако у больных бронхиальной астмой смешанного генсза выявлена ассоциация Pro аллеля с тяжестью течения заболевания. Поскольку известно, что степень тяжести бронхиальной астмы зависит от степени дефекта аполтоза лимфоцитов и юзннофилов, a Pro аллель менее эффективен в индукции молпщ, можно полазать, что юмозитотное состояние по аллелю Pro у больных бронхиальной астмой ассоциировано с нарушением нндукпни запрограммированной гибели им му нокомпстснт нмх клеток и способствует переипщуюцпу иммунному яжпалснкю в легких (В. А. Невзорова и лр. 2001; Т. В. Мамонтова. И II. Кайдашсв, 2004; К. L. Woolley cl al- 1996: Н, Kankaanranla ct al-, 200!>. Степень дефекта апогттоза при бронхиальной астчс прямо пропорциональна активности процесса и степени тяжести заболевания

При исследовании биоптатов бронхиального эпителия выявлено, что уровень экспрессии гена р53 у больных бронхиальной астмой меньше показателей здоровых лиц и наиболее низкий у больных с тяжелой степенью астмы (А. М VignoJa ei al. 200]; 1.1. Ivanchufc ci al,. 2005: A. E. Sa*onov a aJ 2005). Кроме тога в ряде исследований выявлен повышенный уровень хромосомных аберрашй в лимфоцитах, мнкроядрах в тритротггах и буккальных клетках у больных бронхиальной астмой, что косвенно свидетельствует о нарушении систем контроля стабильности генома при этом заболевании (О. К. Бугорнна и лр., 1992: А. В Семенов и др. 2003).

С другой стороны, геи pSi участвует в регуляции экспрессии рецептора глю ко кор гикостсрондо■ (G, I. Gatiguli ei al. 2002; А. С. Maiyar el al,, 2006). Базисная противовоспалительная терапия тяжелой бронхиальной астмы предполагает использование iлпжокортнкостероидныч препаратов в высоких дозах, а тяжелое течение астмы в ряде случаев ассоциировано с устойчивостью к стероидной терапии Возможно, вариантные генотипы р53 обладают различной функциональной активностью в отношении регул чини экспрессии рецептора глюкокортикостсрондов. при этом также вероятно снижение апоптотнчсскою потенциала клеток у лиц с Рто-'Рго генотипом (X, Wu el al. 2004), Su и соавторами (2003) было показано, «по в лейкоцитах носителей Pro адделя гена pSJ наблюдалось снижение экспрессии m РНК гена p2l(Wafi Cipl), одного из таргетных ;шя pSi генов, важною для осуществления апоитоза.

Полученные данные свидетельствуют о необходимости дальнейшего исследования роли функционального полиморфизма гена р53 в патогене тс (яжелой бронхиальной астмы.

Хсмокнновые рецепторы эксирессирутотся лейкоцитами, нейронами, миоцнтамн, фиброцитами, ииютелиоцнгамн и эпнтелноипгвмк Помимо соматических и нммунокомпетситкнх клеток, хсмокнны пролутшруютея опухолевыми jLirrxa.Mii. так же на опухолевых кдетхах обнаружены репс'?? горы для хсмокннов. Многочисленными исследованиями наказано, чго хемокнны непосредственно вовлечены в процесс нсоангногенеза, а также принимают участие в распространении метастазов в лимфатические узлы и в формировании органо* сиецифнчеекнх метастазов (R, М. Stricter el al. 2004; Г. Kakinuma et al. 2006, A. Ztotnik. 2006).

Лиганламн для CCR5 являются хемокшш RANTES, MlPl-a н p. MCP-2 и МСР-4. ССЯ5-опосредованныЛ сигнал ведет к активации нммунокомпетентных клеток и их миграции в очаг воспаления. Таким образом. CCRS и его лигакды функционально вовлечены в процессы естественного н специфического противоопухолевого иммунитета (I; Lovergne et а!,, 2004), С другой стороны, имеются свидетельства, указывающие на роль CCR5 в мстастазнрованнн злокачественных опухолей, в частности, получены данные о том, что повышенная экспрессия рецептора стромальнымн клетками ассоциирована с мсетно распространенным опухолевым процессом и способствует формированию отдаленных метастазов при раке легкого (II. W Ocvcnier el al. 2005). Важным представляются и уже упоминавшиеся выше данные о вовлечении CCR5 в регуляцию транскрипционной активности рЗЗ модифицированных клеток и связи CCR5<Scl32 полиморфизма с прогрессией рака молочной железы (S. Manes et al., 2003), а также о накоплении CCR5>'CCR5del32 генотипов у больных раком летного с метет азами в регионарные лимфоузлы (Н, В Севоегьинова и др. 2004). Вес вышесказанное послужило весомым основанием для исследования полиморфизма гена хемокннового рецептора CCR5 у больных ХОБЛ и бронхиальной астмой.

У больных ХОБЛ не выявлено изменений распределения генотипов гена CCRS по сравнению с популяционным контролем и раком легкого. Олняко отмечена более ишкая, чем в контроле, чае гота сочетаний генотипов CCR5/CCR5-Рго-'Рго, при зтом значимых различий с труппой рака легкого не выявлено. С одной стороны, это указывает на нротсктнвное значение данного сочетания киогииов в отношении формирования ХОБЛ и подтверждает данные, представленные выше, и отношении Рго-Рго генотипа и Pro аллеля. С другой стороны, это дает основания заключить об отсутствии различий в распределении генотипов CCRS (полиморфизм CCR5del32) у больных ХОБЛ н раком легкого.

У больных бронхиальной астмой частота лелешкинюго аллош CCR5dcr32 существенно ниже, чем н лопулиционном контроле, н минимальна при астме атонического генеза с легкой степенью тяжести, составляя всего 2,5% uptime I1% в популяннонном контроле, Интересно, что частота деледиоиного аллсля у больных астмой с вовлечением нескольких органое-мш&еиеП а аллергический процесс н у больных ХОБЛ с латентной сенсибилизацией была значительно снижена, а у больных эегмой бет других сопутствующих аллергических заболеваний и у больных ХОБЛ без латентной сенсибилизации не отличалась от показателя понудяционною контроля и больных раком легкого. Инверсная нллраазенноегь изменений частоты CCR5deL32 у больных раком легкого и атонической бронхиальной астмой указывает на защитное значение атонической конституции в плане предрасположениостн к развшию рака легкого.

В группе с атонической астмой частота сочетания генотипов CCR5rcCR5det32-AigMfg ниже, а комбинации генотипов CCR5'CCR5<lcl32-Pro-Pro выше, чем в контрольной группе, то есть можно говорить о ассоциации последней комбинации с повышенным риском формирования астмы агоническою гене и. Среди больных раком легкою вообще Не Найдено лиц с сонешннем CCR5/CCR5del32-PrO'lPro. при этом интересно, что для астмы и ХОБЛ выявлены ассоциации с разными сочетаниями генотипов Ото служит дополнительным указанием на различия механизмов вовлечения CCR5 в патогенез этих заболеваний и косвенно указывает на разный характер накопления генетических вменений в группах больных атопнческой бронхиальной астмой и раком легкого.

Инфильтрация тканей легких эоишофмламн у больных астмой ассоциирована с повышенной экспрессией хсмокиновСС семейства: МСР-3. МСР-4 и K.ANIliS Дефншп экспрессии CCR5 на клетках может снижать хемотакснчсский потенциал указанных хсмокннов. Установлено, что нейтрализация RANTES у мышей уменьшает гнпсрреактивность бронхов, а у мышей с нокаутом (удалением) гена CCRS. кодирующего белок-рецептор для R ANTES, ослаблена чунсгвнгельность к метахолину и понижен уровень воспалительных клеток и их медиаторов а респираторном тракге (J М, Schuh ei al, 2001). Эти данные подтверждают, «гго наличие дефектного аллсля CCR5del32 может снижать риск заболевания бронхиальной астмой и укатывают возможные механизмы такой связи.

Иол понятней «атоническая конституциям принято понимать совокупность генетических особенностей индивидуума. способствующих формировании* предрасположенности к развитию реакций гипсрчувствитсд ьностн немедленного типа. Убедительно покатано, что полиморфизм генов, регулирующих аллергснепеинфическнй иммунный ответ, а именно сцепленных с главным комплексом гнстосовместимости (HLA) и Т-щеточным рецептором, модифицирует риск развития бронхиальной астмы (I Rout ei al., 2000: А, Н. Ьоюрод и др. 2002).

Как показано выше, нами выявлены существенные различия в распределении генотипов и частоте встречаемости патогенетически значимых аллелей между группами бальных с атонической астмой и больных старше 40 лет, в которой превалируют больные с астмой смешанного 1снеза Во-первых, -по свидетельствует о различной рази изучаемых генов в патогенезе этих розных форм астмы, во-вторых, указывает на неоднородность труппы больных бронхиальной астмой в плане возможной предрасположенности к року легкого. Это позволяет объяснить хотя бы частично неоднозначность результатов проводившихся рапсе клнннкй-оцндсмиологических исследований о взаимосвязи бронхиальной астмы и рака легкого.

Согласно полученным данным, в 70% случаев при ХОБЛ и бронхиальной астме формируются вторичные иммунодефицитные состояния, проявляющиеся хроническими рецидивирующими инфекционными заболеваниями, которые также нередко отмечаются в анамнезе, предшествующем развитию опухоли у больных раком легкого. Структура клинических проявлений вторичного иммунодефицита сходна с особенностями преморбидного фонд у больных раком легкою В клинической картине иммунодефицита больных бронхиальной астмой и раком легкого с большей частотой, чем при ХОБЛ. встречаются заболевания, ассоциированные с дефектом клеточного звена иммунитета. Па основании результатов проведенного исследования можно нредгюдожнть, что вторичный иммунодефицит у бальных ХОБЛ и бронхиальной астмой может являться дополнительным фактором, способствующим развнппо рака легких.

Исследование показателей иммунной системы в периферической крови и мокроте было проведено у случайно выбранных бальных изучаемых нозологнй (по 25-40 человек), при этом последующий анализ группы пациентов с астмой показал преобладание пациентов ео смешанной формой бронхиальной астмы (б7г5%).Несмотря на различии нммунопатогенеза таких хронззческнх заболеваний легких как бронхиальная астма н ХОБЛ, выраженных различий на уровне системного иммунного статуса при данных патологических процессах нами не выявлено, Показатели клеточного звена иммунитета н фагоцитарной активности нейтрофилов при раке легкого были ниже, чем при бронхиальной астме и ХОБЛ, по-видимому, зто обусловлено иммуносупресснвным влиянием опухоли У пациентов всех обследованных групп вровень общего Igl- превышал границы нормы, при пом значимых межгрупповых различий не выявлено. Вероятно, повышение уровня IgE у больных ХОБЛ и раком легкого связано с высокой частотой латентной сенсибилизации, о чем свидетельствуют данные литературы (А. В. Зурочка и др. 2005) и полученные нами результаты, а также с активизацией локального иммунного ответа вследствие нарушения проницаемости слизистой бронхиального дерева.

Мы взаявндн дефицит С СМ + лимфоцита в иериферн чес кой крови, а ток же л нмфоци гонению и зозинофилию в индуцированной мокроте у больных раком легкого по сравнению с показателями здоровых лиц У больных ХОБЛ и больных бронхиальной астмой был обнаружен более высокий уровень CD8 + н CD 16* лнмфощггоа крови и солержания лимфоцитов в индуцированной мокроте

Выяшзсзю повышение содержания лимфоцитов в индуцированной мокроте у носителей аллеля Pro при астме и ХОБЛ, Кроме того, вызывает интерес факт снижения уровня эоэннофилон в мокроте больных бронхиальной астмой с генотипом Рго'Рго Согласно литературным сведениям, уровень зозинофилои в мокроте находизся в прямой зависимости от степени тяжести заболевания Обследованные нммунологнческн двое больных бронхиальной астмой с генотипом РгоТго имели легкую и среднюю степень тяжести заболевания. Результаты проведенного нами исследования полиморфизма гена pSi у больных бронхиальной астмой демонстрируют ассоциашио генотипа Prcu'Pro е тяжелым течением заболевании "Уто не может быть объяснено ассоциацией аллеля Pro с повышенной выживаемостью зозииофилов у больных с тяжелым течением астмы. Вероятно» здесь имеют место другие механизмы усугубления тяжести клинической картины заболевания, в том числе влияние белка р53 на экспрессию рецептора г,' но ко к ортн костс ро и л о в. «по может изменять индивидуальную чувствительность к противовоспалительной терапии у дни с различными генотипами/Ш

Хсмокнновый pcueirrop CCR5 является хсмоаттрактангом для активированных лимфоцитов, дендритных клеток, макрофигов, NK-клеток ц тозннофнлов, следовательно вовлечен в процесс клегоч1к>й инфилиреднн слизистой бронхов нрн воспалении В результате генети'кского полиморфизма гена, кодирующего рецептор, изменяется уровень зкспрссснн CCR5 на мембране иммунокомпетеитных клеток, что может влиять на характер вое паления в легких у дин с различными генотипами CCRS- В связи с низкой частотой делеционного аллеля гена CCR5 в общей популяции и у обследованных нами больных не представлялось возможным исследовать ассоциацию CCR5del32 с параметрами иммунной системы у больных раком депннв и бротгхняльной астмы, ffirrb из двадцати четырех обследованных нммунолотческн больных ХОБЛ имели гетерозиготное состояние но атлелю CCR5del32, показатели клеточного состава и цнтокнноного профиля индуцированной мокроты в згой подфушю не имели значимых различий с группой постелей нормального генотипа. По-видимому, нарушение зкспрссснн CCR5 не вносит существенный вклад в хемотаксис нммун0к0мнстс1гтных клеток и компенсируется участием других хемокнновых рецепторов в этом нроиессе.

Проведенное нами исследование связи полиморфизма гена (JSTMI с особенностями иммунного воспаления в слизистой бронхиального дерева больных бронхиальной астмой и раком легкого выявило более высокие показатели содержания юзинофилов в индузщрованной мокроле у носителей генотипа GSTMI«0'1>* но сравнению с функционально полноценным генотипом. По-видимому это обусловлена изменением метаболизма производных арахидоновой кис-юты (иростагдандннов и лейкотрнснов) и повышенным образованием нммуногенных (аллергенных) соединений в слизистой бронхиального дерева

В и илу титрованной мокроте больных ХОЬЛ и бронхиальной астмой выявлен высокий уровень основного хемотаксичес кого фактора нейтрофнлов VIJ1-8 и повышенное содержание нейтрофнлов, более выраженное при ХОБЛ. результаты согласуются с полученными ранее в НИИ онкологии данными (Л, В, Гердт, 2006) о том, что уровень экспрессии ИЛ-8 существенно повышен у больных хроническим бронхитом с днсидаегнческнмн изменениям и бронхиальног о эпителия I и 2 степени тяжести, что свидетельствует о его ассоциации с предраковыми состояниями эпителия слизистой. У больных астмой выявлено преобладание функциональной активности Th2 лимфоцитов, о котором судили по соотношению нитокинов ИЛ-4/ИФН-у но сравнению с больными ХОБЛ и больными раком легкого, что можно рассматривать как свидетельство относительного дефицита клеточно-оиосрсдованного иммунного ответа,

Таким образом, в настоящем исследовании впервые применен оригинальный полход к исследованию характера взаимосвязи рака легкого и бронхиальной астмы, основанный на анализе сходства и различия патогенетических признаков этих заболепаннй. В пределах одной популяции проведен сравнительный анализ полиморфизма патогеиетн'ссски значимых для формирования рака легкого генов фсрмсигов бнотрансформацнн (JSTT1 и GSTM1. гена онкосупрессорпого белка pSS и гена хсмокннового рецептора CCRS у больных бронхиальной астмой и больных раком легкого.

Сходство распределений генотипов или одинаковый характер изменения частоты встречаемости генотипов и аллелей у больных ХОБЛ нлн астмой с таковым у больных раком легкого позволяет сулигь о сходстве механизмов патогенеза и указывает на наличие генетических предпосылок для формирования рака легкого у таких индивидуумов.

Нами получены результаты о сходстве распределения генотипов генов ФБК CSTTI и GSTMI.pSS и CCRS у больных ХОБЛ и раком легкого, что ласт основания говорить о наличии генетической предрасположенности у индивидуумов, страдающих ХОБЛ. к формированию рака легкого.

В группе пациента» с бронхиальной астмой позднего дебюта, в которой преобладали больные с астмой смешанного генсза. распределение генотипов (снов ФБК евндетсдьегаовадо об ассоциации нулевых генотипов с формированием заболевания, при ном характер распределения не отличался от такового у больных раком легкого. V больных атонической астмой не найдено ассоциации с нулевым генотипом GSTM I. важная роль которого докатана в повышении предрасположенности к раку легкого, особенно у дин молодого возраста (Е. V. Belogubova ct at., 2004). При этом важными являются данные об инверсии связи полиморфизма CCRS с астмой, особенно выраженной для больных е ранннм дебютом заболевания (атоническая астма), по сравнению с полученными данными для рака легкого,

Характер генетических изменений у больных бронхиальной астмой атонического и смешанного генеза свидетельствует, во-первых, о различной роизн изучаемых генов в патогенезе разных форм астмы, во-вторых, указывает на неоднородность группы больных бронхиальной астмой в плане возможной предрасположенности к раку легкого. С одной стороны, зго объясняег противоречивость результатов кдинико-энидемнологичеекнх исследований влияния астмы на риск формирования рака легкого, с другой стороны, позволяет говорить о существовании факторов, как способсгвуюпшх. 1ак н не предрасполагающих к развитию рака легкого у бальных бронхиальной астмой.

Выявленные особенности системного и локального иммунитета, ассоциированные с формированием вторичной иммунной недостаточности клеточного звена иммунного ответа и клеточно-молекулярные особенности бронхиального зпнтелня. ассоциированные с высокой вероятностью появления днсгдастичсскнх изменений, свидетельствуют о наличии молекулярно-генстических предпосылок для реализации злокачественной транеформинии эпителия у больных бронхиальной астмой смешанного генеза,