Гемопоэзстимулирующая активность иммобилизированных на полиэтиленоксиде олигонуклеотидов в условиях цитостатической миелосупрессии

Попонина, Анна Михайловна

Диссертации по медицине → Фармакология, клиническая фармакология

Автореферат и диссертация по медицине (14.03.06) на тему:Гемопоэзстимулирующая активность иммобилизированных на полиэтиленоксиде олигонуклеотидов в условиях цитостатической миелосупрессии

ДИССЕРТАЦИЯ

Гемопоэзстимулирующая активность иммобилизированных на полиэтиленоксиде олигонуклеотидов в условиях цитостатической миелосупрессии - диссертация, тема по медицине

АВТОРЕФЕРАТ

Попонина, Анна Михайловна Томск 2012 г.

Ученая степень: кандидата медицинских наук

ВАК РФ: 14.03.06

Автореферат диссертации по медицине на тему Гемопоэзстимулирующая активность иммобилизированных на полиэтиленоксиде олигонуклеотидов в условиях цитостатической миелосупрессии

На правах рукописи

ПОПОНИНА АННА МИХАЙЛОВНА

ГЕМОПОЭЗСТИМУЛИРУЮЩАЯ АКТИВНОСТЬ ИММОБИЛИЗИРОВАННЫХ НА ПОЛИЭТИЛЕНОКСИДЕ ОЛИГОНУКЛЕОТИДОВ В УСЛОВИЯХ ЦИТОСТАТИЧЕСКОЙ МИЕЛОСУПРЕССИИ

14.03.06 - фармакология, клиническая фармакология 14.03.03 - патологическая физиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

-6 СЕН 2012

Томск-2012

005047074

Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении «Научно-исследовательский институт фармакологии» Сибирского отделения Российской академии медицинских наук

Научные руководители:

доктор медицинских наук, профессор, академик РАМН, заслуженный деятель науки РФ

Дыгай Александр Михайлович

доктор медицинских наук

Скурихин Евгений Германович

Официальные оппоненты:

Алиев Олег Ибрагимович, доктор медицинских наук, Федеральное государственное бюджетное учреждение «Научно-исследовательский институт фармакологии» Сибирского отделения Российской академии медицинских наук, лаборатория фармакологии кровообращения, ведущий научный сотрудник

Воронкова Ольга Владимировна, доктор медицинских наук, Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Сибирский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации, кафедра патологической физиологии, профессор

Ведущая организация: Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Алтайский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации

Защита состоится "_"_2012 г. в_часов на заседании

диссертационного совета Д 001.031.01 при Федеральном государственном бюджетном учреждении «Научно-исследовательский институт фармакологии» Сибирского отделения Российской академии медицинских наук (634028, г. Томск, пр. Ленина, 3)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Федерального государственного бюджетного учреждения «Научно-исследовательский институт фармакологии» Сибирского отделения Российской академии медицинских наук

Автореферат разослан "_"_2012 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

доктор биологических наук

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Характерным осложнением у онкологических больных, получавших полихимиотерапию, выступает стойкая депрессия кроветворения [Skillings J.R., 1993; Barrett-Lee P.J., 2000; Зак К.П., Грыцюк С.Н., 2001; Бредер В.В. и др., 2002; Littlewood Т.J., Collins G.R., 2007; Woo S. et al., 2007]. Лейкопения, анемия, тромбоцитопения и другие гематологические нарушения значительно ухудшают качество жизни пациентов, снижая при этом сопротивляемость к инфекциям, усугубляют многие негативные явления проводимого противоопухолевого лечения [Moullet I. et al., 1998; Groopman J.E., Itri J., 1999; Beutel G., Ganser A., 2007].

За последние 50 лет подходы к терапии цитостатических и лучевых миелодепрессий претерпели значительные изменения. Достаточно длительное время характер лечебных мероприятий при различных нарушениях кроветворения ограничивался антибиотикотерапией возникших инфекционных осложнений и назначением комплекса поддерживающих препаратов. К числу таких соединений относятся неспецифические протекторы гемопоэза (зимозан, спленин, витамины С, В], Вб), гормоны, соли лития и др. [Byron J.W., 1970; Greco F.A., Breton H.D., 1977; Rothstein G. et al., 1978; Алмазов В.А. и др., 1981; Гершанович М.А., 1982; Закенфельд Г.К., 1985; Patchen M.L., Mac Vittie T.J., 1985; Мороз Б.Б. и др., 1986; Гольдберг

E.Д. и др., 2000; Жданов В.В. и др., 2002; Гольдберг Е.Д. и др., 2007; Машковский М.Д., 2007]. Однако клинические наблюдения показали, что при выраженных и длительно текущих миелодепрессиях применение указанных лекарственных средств малоэффективно, более того, в ряде случаев они вызывают различные неблагоприятные побочные эффекты.

Трансфузия тромбоконцентрата и эритроцитарной массы, обычно применяемая для коррекции соответственно тромбоцитопении и анемии, позволяет быстро восполнить число циркулирующих эритроцитов [Mercuriali

F., 1997; Бредер В.В. и др., 2002]. При угрожающих жизни состояниях трансфузия незаменима. В то же время анемия при злокачественном процессе носит хронический характер, а частые гемотрансфузии существенно повышают риск возникновения побочных эффектов, таких как передача вирусных инфекций, аллергические реакции и др. [Brunson М.Е., 1990; Skillings J.R., 1993; Barrett-Lee P.J., 2000; Птушкин В.В., 2002].

2007]. Связываясь с высокоаффинными специфическими рецепторами, а при увеличении уровня цитокина в крови и тканях - и с рецепторами умеренной аффинности, факторы роста стимулируют пролиферацию и индуцируют дифференцировку соответствующих коммитированных кроветворных клеток-предшественников [Воробьев А.И., 2002; Скурихин Е.Г. и др., 2005; Гольдберг Е.Д. и др., 2007]. Преимущества таких лекарственных средст] обусловлены их исключительно высокой активностью и возможностей целенаправленного воздействия на основное звено патогенез; соответствующего гематологического расстройства [Moore M.A.S., Warrei D.I., 1987; Moore M.A., 1989; Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., Жданов B.B, Гольдберг В.Е, 2001; Glaspy J.А, 2003]. Недостатками применена препаратов рекомбинантных цитокинов являются малая эффективность npi краткосрочном применении и развивающиеся осложнения при длительно;* введении.

В настоящее время нуклеиновые кислоты и их производньк рассматриваются как средства для профилактики и лечения нарушений i системе крови на фоне цитостатической терапии [Серебрянная Н.Б, Нови] A.A., 2001; Машковский М.Д, 2007]. Кроме того, препараты нуклеиновы; кислот успешно применяют в кардиологии, пульмонологии, андрологии гастроэнтерологии, эндокринологии, онкологии, неврологии, иммунологи! [Каплина Э.Н, 2000, 2005; Караулов A.B., 2002; Машковский М.Д, 2008] Оправдано их назначение при нарушениях свертывающей системь [Карамышев В. Н, 1993; Касьяненко Ю.И, 1999] и аутоиммунны; заболеваниях [Каплина Э.Н, 2005], при диабете, боковом амиотрофическоь склерозе, артритах [Bodera Р, 2011], бронхиальной астме и хроническо! обструктивной болезни лёгких [Parry-Billings M, Ferrari N„ Seguin R„ 2010] мышечной дистрофии [Heemskerk H. et al, 2010]. Как видно, мишенью дл; нуклеиновых кислот выступают любые ткани. Однако, как и в случа( применения многих высокоактивных молекул, нерешённой проблемой терапии препаратами нуклеиновых кислот является адресная доставка i тканям, относительно низкая концентрация в клетке и быстрая деградацш нуклеазами в лизосомах.

Большие надежды в решении этих проблем связывают с модификациег биологически активных соединений с помощью присоединения к нии< молекул полиэтиленоксида (пегилирование). Так, использование технологии иммобилизации молекул на носителях низкой молекулярной массь электронно-лучевым (радиационным) синтезом [Vereschagin E.I. et al, 2001 позволяет, с одной стороны, пролонгировать активность лекарственногс средства (в силу более продолжительного нахождения в крови), с другой стороны - устраняет многие нежелательные побочные реакции (в сил) низкой иммуногенности и малой токсичности получаемых соединений^ (иммобилизированные Г-КСФ, эритропоэтин и др.) [Дыгай A.M., АртамоноЕ A.B., Верещагин Е.И, Мадонов П.Г, 2009; Дыгай A.M. и др., 2009; Андреевг Т.В. и др., 2010; Дыгай A.M. и др, 2010, 2011]. Известно, что гиалуронидазг уменьшает вязкость гиалуроновой кислоты, вызывая ее распад дг

глюкозамина и глюкуроновой кислоты, тем самым, увеличивая проницаемость тканей, в том числе, для фармакологических агентов [ВкепсошТ С.Б. е1 а1., 2011]. С нашей точки зрения, наиболее перспективным является совместное назначение модифицированного лекарственного средства с веществом, снижающим вязкость межклеточного матрикса. Так, в частности, продемонстрировано увеличение биодоступности модифицированного радиационным синтезом Г-КСФ при его совместном назначении с гиалуронидазой [Андреева Т.В. и др., 2010].

В связи с вышесказанным, является актуальным изучение гемопоэзстимулирующей активности, назначаемых изолированно и совместно, иммобилизированных на полиэтиленоксиде электронно-лучевым синтезом олигонуклеотидов и гиалуронидазы.

Цель исследования. Изучить гемопоэзстимулирующую активность иммобилизированных на полиэтиленоксиде олигонуклеотидов, назначаемых изолированно или совместно с иммобилизированной гиалуронидазой, в условиях цитостатической миелосупрессии.

Задачи исследования:

1. Оценить зависимость скорости восстановления лейкоцитов в периферической крови в условиях цитостатической миелосупрессии, вызванной циклофосфаном, от дозы иммобилизированных на полиэтиленоксиде олигонуклеотидов.

2. На модели цитостатической миелосупрессии исследовать влияние различных доз иммобилизированной на полиэтиленоксиде гиалуронидазы на скорость восстановления числа лейкоцитов периферической крови.

3. Разработать схему совместного применения пегилированных веществ, при которой иммобилизированная гиалуронидаза усиливает гемопоэзстимулирующую активность иммобилизированных олигонуклеотидов в условиях цитостатического воздействия.

4. На модели цитостатической миелосупрессии изучить влияние изолированно вводимых иммобилизированных олигонуклеотидов, а также их комбинации с иммобилизированной гиалуронидазой на костномозговое кроветворение.

5. Вскрыть механизмы гемостимулирующих эффектов пегилированных олигонуклеотидов в условиях их изолированного или сочетанного с иммобилизированной гиалуронидазой применения.

Научная новизна работы. В работе на модели цитостатической миелосупрессии, вызванной однократным введением циклофосфана в МПД, выявлена гемопоэзстимулирующая активность иммобилизированных олигонуклеотидов (имОН), вводимых мышам линии СВА/СаЬас перорально, а также механизмы их действия. Показана возможность повышения иммобилизированной гиалуронидазой фармакологической активности иммобилизированных олигонуклеотидов при цитостатической

миелосупрессии.

Результаты скрининговых исследований показали, что в условиях введения цитостатика иммобилизированные олигонуклеотиды ускоряют процессы регенерации периферического звена гранулоцитарного ростка кроветворения во всех исследуемых дозах (50, 100, 150, 200, 250 мг/кг). Наиболее выраженный стимулирующий эффект отмечается у животных, получавших имОН в дозе 200 мг/кг.

На модели миелосупрессии, вызванной циклофосфаном, выявлено, что иммобилизированная гиалуронидаза ускоряет восстановление содержания сегментоядерных нейтрофилов в периферической крови мышей в дозе 50 ЕД/кг и не влияет на их число в дозе 25 ЕД/кг.

При изучении костномозгового кроветворения животных, подвергнутых цитостатическому воздействию (циклофосфан), установлено, что наиболее чувствительным к стимулирующему действию иммобилизированных олигонуклеотидов (200 мг/кг) является гранулоцитарный росто! кроветворения. В основе эффектов иммобилизированных олигонуклеотидов лежит увеличение содержания эритроидных и гранулоцитарно-макрофагальных клеток-предшественников в костном мозге и усиление их дифференцировки в зрелые кроветворные клетки, при этом снижаются секреторная активность клеток кроветворного микроокружения и уровеш сывороточных ростовых факторов.

На модели миелосупрессии (циклофосфан) продемонстрировано, чтс кратковременное (2-кратное) назначение иммобилизированноГ

гиалуронидазы повышает эффективность коррекции иммобилизированными олигонуклеотидами нарушений со стороны костномозгового эритро- i гранулоцитопоэза, ускоряет восстановление количества лейкоцитов i периферической крови. Более длительное (3-кратное, 7-кратное) введение имГД, напротив, препятствует проявлению гемопоэзстимулирующеГ активности имОН. В основе феномена потенцирования лежит увеличение содержания гранулоцитарно-макрофагальных клеток-предшественников i кроветворной ткани.

Практическая значимость работы. Продемонстрирована высокая эффективность перорального использования нового отечественногс гемостимулятора, представляющего собой иммобилизированные с помощьк оригинальной технологии электронно-лучевого синтеза олигонуклеотиды (разработанной ООО «Саентифик фьючер менеджмент», г. Новосибирск совместно с ФГБУ «НИИ фармакологии» СО РАМН, г. Томск). Полученные результаты о потенцирующих свойствах иммобилизированной гиалуронидазы могут явиться основой для разработки новых методоЕ усиления активности гемостимуляторов при гипопластических состояниях кроветворной ткани.

Апробация работы. Материалы диссертации докладывались и обсуждались на Российской конференции с международным участием

«Фундаментальные вопросы гематологии. Достижения и перспективы.» (Екатеринбург, 2010), VI региональной конференции молодых ученых-онкологов им. академика РАМН Н.В. Васильева «Актуальные вопросы экспериментальной и клинической онкологии» (Томск, 2011).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 3 работы, из них 2 статьи в ведущих рецензируемых научных журналах, рекомендованных перечнем ВАК Минобрнауки РФ.

Объем и структура работы. Диссертация изложена на 163 страницах машинописного текста, иллюстрирована 13 рисунками, 30 таблицами и состоит из введения, 4 глав, выводов, списка цитируемой литературы, включающего 296 источников, из них 84 отечественных и 212 зарубежных.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Эксперименты проведены на 625 мышах-самцах линии CBA/CaLac в возрасте 7-8 недель. Животные 1 категории (конвенциональные линейные мыши) разводки ФГБУ «НИИ фармакологии» СО РАМН (сертификат имеется) содержались в соответствии с «Правилами Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и иных научных целей» (Страсбург, 1986).

Для моделирования цитостатической миелосупрессии использовали циклофосфан («Биохимик», Саранск), который непосредственно перед применением растворяли в стерильном физиологическом растворе и вводили экспериментальным животным однократно внутрибрюшинно в максимально переносимой дозе (МПД), составившей по результатам пробит-анализа 200 мг/кг. Объем введения составлял 0,1 мл.

Изучаемые в исследовании иммобилизированные олигонуклеотиды имОН) представляют собой ДНК из молок лососевых, модифицированные активированным полиэтиленоксидом молекулярной массой 1500 Да с помощью электронно-лучевого синтеза (производитель: ООО «Scientific 3uture Management», г. Новосибирск). Для получения конъюгатов элигонуклеотиды вносили в 2% раствор полиэтиленоксида (1500 Да), збработанного потоком ускоренных электронов (ионизирующее излучение), генерируемым ускорителем ИЛУ-6. Концентрация ДНК по методу Спирина вставляла 45 мг/г. Подобным образом конъюгировали с полиэтиленоксидом "иалуронидазу (имГД): для получения конъюгатов гиалуронидазу вносили в 5% раствор полиэтиленоксида (1500 Да). Иммобилизированные элигонуклеотиды и гиалуронидазу вводили перорально. Доза вводимых ïmOH составила 50, 100, 150, 200 и 250 мг/кг, доза иммобилизированной "иалуронидазы - 25 и 50 ЕД/кг. Объём введения составлял 0,2 мл. Введение зеществ осуществляли ежедневно один раз в день (в 9 ч утра). При изучении ¡ависимости скорости восстановления подавленного циклофосфаном териферического звена гранулоцитарного ростка кроветворения от дозы 'сследуемых веществ иммобилизированные олигонуклеотиды вводили в

течение последующих после цитостатического воздействия 7 суток, имГД -на 1, 3 и 5-е сутки.

В экспериментах, направленных на разработку схемы совместного применения пегилированных субстанций, при которой иммобилизированная гиалуронидаза способна потенцировать гранулоцитопоэзстимулирующую активность иммобилизированных олигонуклеотидов, вещества вводились мышам в эффективных дозах, выявленных в предыдущих скрининговых исследованиях, по схемам, представленным в таблице.

Контрольным животным во всех сериях экспериментов в аналогичных условиях вводили per os эквивалентный объем физиологического раствора. Фоновые показатели получали при использовании интактных животных.

Таблица

Схемы совместного применения иммобилизированной гиалуронидазы и иммобилизированных олигонуклеотидов__

Сроки исследования (сутки) 1 схема 2 схема 3 схема

имГД имОН имГД имОН имГД имОН

0 введение циклофосфана

1 + + + + + +

2 + + + + +

3 + + + + +

4 + + + +

5 + + + + +

6 + + + +

7 + + + +

Примечание. + введение изучаемых субстанций

Показатели периферической крови и костного мозга определяли стандартными гематологическими методами [Гольдберг Е.Д. и др., 1992]. Содержание гранулоцитарно-макрофагальных (КОЕ-ГМ) и эритроидных (КОЕ-Э) клеток-предшественников определяли методом клонирования in vitro в полувязкой культуральной среде [Ventura G.J. et al., 1990; Gerard J. et al., 1990; Гольдберг Е.Д. и др., 1992]. Интенсивность созревания гранулоцитарно-макрофагальных и эритроидных клеток-предшественников оценивали по величине индекса созревания (отношение числа кластеров к количеству колоний, выросших в одной лунке) [Гольдберг Е.Д. и др., 1992]. Колониестимулирующую (КСА) и эритропоэтическую (ЭПА) активности кондиционных сред прилипающих и неприлипающих миелокариоцитов, а также сыворотки крови тестировали микрометодом в 96-луночных планшетах. При этом КСА и ЭПА выражали количеством выросших гранулоцитарно-макрофагальных и эритроидных колоний соответственно (на 105 миелокариоцитов) [Гольдберг Е.Д. и др., 1992].

Статистическую обработку полученных результатов проводили методами вариационной статистики с использованием программного обеспечения IBM. Вычисляли среднее арифметическое (X), ошибку среднего

арифметического (m), значение вероятности (Р) [Зайцев Г.Н., 1984]. Различие двух сравниваемых величин считали достоверным в случае, если вероятность их тождества была меньше 5% (р<0,05). Используя выборочные коэффициенты асимметрии и эксцесса, оценивали степень приближения закона распределения исследуемого признака к нормальному. В случаях нормального распределения признаков для статистической оценки применяли параметрический t-критерий Стьюдента [Урбах В.Ю., 1975]. При больших отклонениях распределений признака от нормального вида для независимых выборок использовали непараметрический U-критерий Уилкоксона-Манна-Уитни [Урбах В.Ю., 1975; Гублер Е.В., 1978].

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

На первом этапе нами изучалась зависимость скорости восстановления подавленного цитостатиком периферического звена гранулоцитарного ростка кроветворения от доз иммобилизированных олигонуклеотидов (50, 100, 150, 200, 250 мг/кг) и гиалуронидазы (25 и 50 ЕД/кг).

На циклофосфановой модели миелосупрессии было показано, что вводимые в течение 7 дней иммобилизированные олигонуклеотиды препятствовали развитию нейтрофильной лейкопении в периферической крови экспериментальных животных, при этом нейтрофилёз развивался на сутки раньше с показателями мышей, получавшими только алкилирующий агент (рис. 1). Максимально выраженный эффект имОН отмечался в дозе 200 мг/кг (2, 6, 8, 10-е сутки). Примечательно, что на 10-е сутки опыта в группе с использованием пегилированных олигонуклеотидов в дозе 200 мг/кг количество лимфоцитов повышалось и достигало уровня интактного контроля.

содержание сегментоядерных нейтрофилов в периферической крови мышей линии СВА/СаЬас при назначении циклофосфана. Окрашенным символом обозначена достоверность различия от цитостатического контроля (Р<0.05)

Таким образом, по результатам скрининговых исследований установлено, что в условиях цитостатической миелосупрессии пероральный приём иммобилизированных олигонуклеотидов вызывал умеренное повышение содержания нейтрофильных лейкоцитов и лимфоцитов. Прослеживается зависимость выраженности эффекта от дозы препарата: 200 мг/кг > 150 мг/кг > 100 мг/кг > 50 мг/кг.

При изучении вопроса о возможном влиянии иммобилизированной гиалуронидазы (25 и 50 ЕД/кг) на процессы восстановления кроветворения был выявлен ряд закономерностей. Пероральное введение экспериментальным животным имГД на 1, 3 и 5-е сутки после цитостатического воздействия повышало количество палочкоядерных и сегментоядерных нейтрофильных гранулоцитов в периферической крови (10, 12-е сутки). Как и в случае с имОН, прослеживается зависимость стимулирующего эффекта от дозы назначаемой имГД: наибольший прирост нейтрофилов наблюдался в группе 50 ЕД/кг. В противоположность этому, содержание лимфоцитов в крови мышей, получавших пегилированную гиалуронидазу, уменьшалось (6, 8, 12-е сутки).

Итак, в условиях введения циклофосфана вводимая перорально иммобилизированная гиалуронидаза оказывала избирательное стимулирующее влияние на содержание нейтрофильных гранулоцитов периферической крови, при этом эффект в группе мышей, получавших препарат в дозе 50 ЕД/кг, оказался выше, чем в группе животных, которым вводили имГД в дозе 25 ЕД/кг.

Обнаруженная активность вводимых изолированно пегилированных субстанций в отношении лейкоцитов периферической крови предопределила изучение их действия на костномозговое кроветворение. Так, в условиях введения циклофосфана иммобилизированные олигонуклеотиды в дозе 200 мг/кг достоверно повышали содержание незрелых нейтрофильных гранулоцитов в костном мозге на 8-е сутки (на 47,2%), а их зрелых форм на 4-е сутки (на 15,3%), способствовали накоплению эритрокариоцитов на 2, 4-е сутки исследования (рис. 2, 3). В период с 11-х по 13-е сутки исследования отмечался прирост числа моноцитов (на 100-400% выше цитостатического контроля). В противоположность этому, содержание лимфоидных клеток у мышей снижалось (4, 5-е сутки).

На фоне введения ЦФ иммобилизированная гиалуронидаза (50 ЕД/кг) достоверно увеличивала количество костномозговых незрелых (на 18-194%) и зрелых (на 55-108%) нейтрофильных гранулоцитов на 11-15-е сутки, моноцитов — на 10-13-е сутки (на 50-400%) и эритрокариоцитов — на 5-е сутки (на 82%) по отношению к цитостатическому контролю. В то же время, на лимфоидные элементы и эозинофильные клетки имГД не оказывала существенного влияния.

Таким образом, в условиях цитостатической миелосупрессии пегилированные на полиэтиленоксиде олигонуклеотиды (200 мг/кг) и гиалуронидаза (50 ЕД/кг) увеличивали активность костномозгового эритро- и гранулоцитопоэза. При этом препараты не влияли (имГД) либо уменьшали

(имОН) (за счёт выхода в периферическую кровь) количество лимфоцитов в кроветворной ткани.

сроки исследования ----фш.р-р —й— нмОН —О— имГД —О—имГД+ОН

Рис. 2. Влияние изолированно и совместно вводимых имОН (200 мг/кг) и имГД (50 Ед/кг) на содержание эритрокариоцитов в костном мозге мышей линии CBA/CaLac при назначении циклофосфана. Окрашенным символом обозначена достоверность различия показателя от такового в цитостатическом контроле (Р<0.05), + достоверность различия с животными, получавших изолировано иммобилизированные олигонуклеотиды (Р<0.05).

В целом полученные результаты указывают на перспективность использования изолированно вводимых иммобилизированных олигонуклеотидов и гиалуронидазы при цитостатических лейкопениях и анемиях. Как было уже сказано выше, гиалуронидаза in vitro и in vivo во многом усиливает проявление эффектов целого ряда биологически активных молекул (Г-КСФ, инсулин и др.) [Дыгай A.M. и др., 2011; Morrow L. et al., 2011]. В этой связи, следующая серия экспериментов была направлена на изучение возможности усиления имГД гемопоэзстимулирующей активности имОН на модели циклофосфановой миелосупрессии.

Первый этап работы был посвящен решению вопроса, касающегося выбора схемы введения иммобилизированных субстанций (табл.). Предварительно экспериментальные животные были поделены на три группы. При этом всем особям независимо от групповой принадлежности иммобилизированные олигонуклеотиды вводились однократно на 1,2, 3, 4, 5, 6 и 7-е сутки после цитостатического воздействия. Межгрупповые различия заключались в особенностях введения имГД. Иммобилизированную гиалуронидазу мыши первой группы получали ежедневно на 1-7-е сутки опыта, животные второй группы - на 1, 3, 5-е сутки после цитостатической

атаки, мыши третьей группы - на 1 и 2-е сутки. Следует отметить, что иммобилизированные олигонуклеотиды назначали через 1 час после введения имГД._

сроки исследования ----фш.р-р —й— иыОН -О-имГД —□—имГД+ОН

Рис. 3. Влияние изолированно и совместно вводимых имОН (200 мг/кг) и имГД (50 Ед/кг) на содержание незрелых нейтрофильных гранулоцитов в костном мозге мышей линии СВА/СаЬас при назначении циклофосфана. Окрашенным символом обозначена достоверность различия показателя от такового в цитостатическом контроле (Р<0.05), + достоверность различия с животными, получавших изолировано иммобилизированные олигонуклеотиды (Р<0.05).

Анализ полученных данных показал, что схема введения иммобилизированной гиалуронидазы существенно влияла на проявление гранулоцитопоэзстимулирующей активности имОН. Так, назначение имГД в течение 7-и дней не оказывало потенцирующего влияния на инициированное имОН усиление выхода в кровь клеток гранулоцитарного ростка кроветворения. Напротив, в 1 группе наблюдалось падение числа сегментоядерных нейтрофилов в периферической крови на 6-е сутки (на 33,6%, Р<0,05) по сравнению с показателями мышей, получавших только имОН.

Введение иммобилизированной гиалуронидазы на 1, 3, 5-е сутки опыта отменяло стимуляцию гранулоцитарного ростка кроветворения, наблюдаемую в группе с иммобилизированными олигонуклеотидами. В этой группе динамика содержания нейтрофильных гранулоцитов и лимфоцитов в периферической крови практически не отличалась от таковой у мышей, получавших только циклофосфан. Исключение составили 12-е сутки, когда количество палочкоядерных нейтрофилов достоверно уменьшалось и составило 75,5% от интактного контроля при 353% в цитостатическом контроле и 221% - у животных с имОН.

Ожидаемый потенцирующий эффект наблюдался в случае дополнительного введения иммобилизированной гиалуронидазы дважды: на

1 и 2-й день после введения алкилирующего агента. У мышей 3 группы отмечался более интенсивный прирост числа лимфоцитов, эозинофильных и нейтрофильных гранулоцитов в периферической крови, чем у животных, получавших только имОН (10, 12-е сутки).

Таким образом, в условиях цитостатической миелосупрессии кратковременное назначение (дважды) иммобилизированной гиалуронидазы повышало эффективность коррекции пегилированными олигонуклеотидами нарушений со стороны белой крови. Более длительное введение имГД, напротив, препятствовало проявлению гранулоцитопоэзстимулирующей активности имОН.

Костномозговое кроветворение мышей, одновременно получавших иммобилизированные олигонуклеотиды и гиалуронидазу (3 схема), существенно отличалось от такового в группах экспериментальных животных, которым препараты вводили изолировано. Так, совместное введение пегилированных субстанций повышало ОКК не только относительно цитостатического контроля, но и по сравнению с животными, получавшими по отдельности имОН или имГД (3-й сутки). Анализ морфологического состава костного мозга показал, что в основе выявленного эффекта лежало достоверное повышение количества незрелых нейтрофилов, эритрокариоцитов и лимфоцитов. Кроме 3-их суток опыта увеличение числа незрелых нейтрофильных гранулоцитов в опыте отмечалось на 4, 6-е сутки, а эритроидных элементов - на 4, 5-е сутки. При этом содержание указанных форм миелокариоцитов было достоверно выше в группе с изолировано вводимыми иммобилизированной гиалуронидазой и иммобилизированными олигонуклеотидами. Количество эозинофильных гранулоцитов, моноцитов, лимфоцитов и эритроидных клеток на протяжении всего исследования оставалось ниже интактного контроля.

Полученные результаты свидетельствуют о взаимопотенцирующем действии препаратов иммобилизированной гиалуронидазы и иммобилизированных олигонуклеотидов, заключающемся в ускорении процессов регенерации кроветворной ткани и восстановлении клеточности эритроидного и гранулоцитарного ростков при цитостатической миелосупрессии.

Исследование гемостимулирующих свойств потенциально активных молекул подразумевает вскрытие механизмов вызываемых ими эффектов. Знание особенностей реакций основных элементов, участвующих в кроветворении (стволовые клетки, коммитированные предшественники, клетки кроветворного микроокружения), позволяет во многом предотвратить врачебные ошибки при клиническом применении препаратов -гемостимуляторов (в том числе, развитие различных неблагоприятных для организма реакций).

В нашем исследовании были изучены сдвиги со стороны коммитированных предшественников эритро- и грануломоноцитопоэза и уровень колониестимулирующей и эритропоэтической активностей в биологических средах (кондиционные среды клеток костного мозга и

сыворотка крови).

Проведённые эксперименты позволили установить, что пероральное введение иммобилизированных олигонуклеотидов на фоне цитостатической миелосупрессии приводило к увеличению содержания гранулоцитарно-макрофагальных (2-е сутки) и эритроидных (3, 4-е сутки) колониеобразующих единиц в костном мозге (рис. 4, 5). При этом наблюдалась стимуляция дифференцировки коммитированных кроветворных предшественников (2, 3-й сутки). На 6-е сутки опыта индекс созревания гранулоцитарно-макрофагальных клеток-предшественников у животных, получавших имОН, составил 10% от исходного при 291% в цитостатическом контроле.

сроки исследования ----фт.р-р —й—имОН имГД -О-имГД+ОН

Рис. 4. Влияние изолировано и совместно вводимых имОН (200 мг/кг) и имГД (50 Ед/кг) на содержание гранулоцитарно-макрофагальных предшественников в костном мозге мышей линии СВА/СаЬас при цитостатическом воздействии. Окрашенным символом обозначена достоверность различия показателя от такового в цитостатическом контроле (Р<0.05), + достоверность различия с животными, получавших изолировано иммобилизированные олигонуклеотиды (Р<0.05).

Иммобилизированная гиалуронидаза не влияла на содержание и функциональную активность эритроидных клеток-предшественников на протяжении всего периода после введения циклофосфана (рис. 4, 5). В свою очередь количество гранулоцитарно-макрофагальных колониеобразующих единиц падало на 6-е сутки опыта.

При совместном назначении иммобилизированных олигонуклеотидов и гиалуронидазы содержание КОЕ-ГМ в костном мозге существенно увеличивалось на 3 и 4-е сутки после цитостатического воздействия (рис. 4). Величина показателя на 95% (Р<0,05) превосходила таковую в группе

животных с изолировано вводимыми имОН. В то же время, имГД снижала инициированный иммобилизированными олигонуклеотидами рост количества КОЕ-Э с 282% до 185% (4-е сутки) (рис. 5). Индекс созревания эритроидных клеток-предшественников у мышей опытной группы не отличался от показателя в группе с изолированной иммобилизированной гиалуронидазой на протяжении всего периода исследования.

сроки исследования ----фш.р-р —ó—iimOH —С— нмГД -□— имГД+ОН

Рис. 5. Влияние изолировано и совместно вводимых имОН (200 мг/кг) и имГД (50 Ед/кг) на содержание эритроидных предшественников в костном мозге мышей линии CBA/CaLac при цитостатическом воздействии. Окрашенным символом обозначена достоверность различия показателя от такового в цитостатическом контроле (Р<0.05), + достоверность различия с животными, получавших изолировано иммобилизированные олигонуклеотиды (Р<0.05).

При изучении колониестимулирующей и эритропоэтической активностей оказалось, что в условиях введения циклофосфана изолированные иммобилизированные олигонуклеотиды и гиалуронидаза, а также комбинация исследуемых препаратов отменяли высокие уровни сывороточной КСА (2-е сутки) и ЭПА (4-е сутки) и снижали продукцию факторов роста КОЕ-ГМ (5-е сутки) и КОЕ-Э (3-й сутки) клетками кроветворного микроокружения.

Итак, при цитостатической миелосупрессии иммобилизированная гиалуронидаза усиливает стимулирующий эффект иммобилизированных олигонуклеотидов в отношении гранулоцитарно-макрофагальных клеток-предшественников и снижает скорость восстановления КОЕ-Э. В противоположность этому, дополнительное введение имГД оказывало ингибирующее влияние на продукцию ростовых факторов клетками кроветворного микроокружения, снижало их уровень в сыворотке крови.

Механизм действия иммобилизированных олигонуклеотидов, по всей

видимости, не ограничивается их стимулирующим влиянием на коммитированные кроветворные клетки-предшественники. По некоторым данным олигонуклеотиды in vitro способны стимулировать образование колоний из колониеобразующих единиц гранулоцито-эритроидно-макрофагально-мегакариоцитарного типа (КОЕ-ГЭММ) [Patinkin D. et al., 2003]. Учитывая сведения литературы и результаты собственных исследований о возможности управления функциями клеточных элементов путём модификации свойств гликокаликса и межклеточного матрикса с помощью гиалуронидазы [Noble P.W., 2002; Stern R., 2003; Дыгай A.M. и др., 2009], весьма обоснованным выглядит предположение о зависимости ускорения процессов регенерации кроветворной ткани и восстановления клеточности периферической крови от изменения способности кроветворных клеток-предшественников под влиянием иммобилизированной гиалуронидазы отвечать на регуляторные стимулы, определяемые введением имОН. Мы не исключаем также возможность стимуляции гемопоэза продуктами деградации гиалуроновой кислоты. Так, усиление грануломоноцитопоэза может быть связано со стимуляцией глюкуроновой кислотой процессов пролиферации гранулоцитарно-макрофагальных клеток-предшественников и образования гемопоэтических островков гранулоцитарного типа [Гольдберг Е.Д. и др., 2007].

ВЫВОДЫ

1. Введение иммобилизированных олигонуклеотидов на фоне моделирования цитостатической миелосупрессии (циклофосфан в МПД) сопровождается ускорением восстановления содержания нейтрофильных гранулоцитов в периферической крови, при этом наиболее выраженный гемостимулирующий эффект наблюдается при использовании иммобилизированных олигонуклеотидов в дозе 200 мг/кг.

2. Иммобилизированная гиалуронидаза в дозе 50 ЕД/кг обладает умеренными гемостимулирующими свойствами, проявляющимися в увеличении количества нейтрофильных гранулоцитов в периферической крови в условиях введения циклофосфана.

3. Введение иммобилизированной гиалуронидазы (на 1 и 2-е сутки после цитостатического воздействия, но не более длительными курсами), существенно повышает эффективность коррекции иммобилизированными олигонуклеотидами нарушений в периферическом звене гранулоцитарного ростка кроветворения при назначении циклофосфана.

4. При цитостатическом воздействии иммобилизированные олигонуклеотиды в большей степени стимулируют костномозговой гранулоцитопоэз, а иммобилизированная гиалуронидаза способствует возрастанию в костномозговой ткани числа эритроидных и нейтрофильных клеток. Совместное применение иммобилизированной гиалуронидазы и иммобилизированных олигонуклеотидов сопровождается потенцированием их гемостимулирующих эффектов, заключающемся в ускорении процессов регенерации кроветворной ткани и восстановления количества лейкоцитов в

периферической крови.

5. В основе гемопоэзстимулирующей активности пегилированных олгинуклеотидов, а также усиления их действия иммобилизированной гиалуронидазой лежит увеличение содержания коммитированных кроветворных клеток-предшественников в костном мозге на фоне снижения продукции колониестимулирующих активностей клеточными элементами гемопоэзиндуцирующего микроокружения.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Дыгай A.M., Скурихин Е.Г., Першина О.В., Жданов В.В., Хмелевская Е.С., Андреева Т.В., Попонина A.M., Зюзьков Г.Н., Удут Е.В., Хричкова Т.Ю., Симанина Е.В., Мирошниченко Л.А., Ставрова Л.А., Чайковский A.C., Маркова Т.С., Гурто Р.В., Брюшинина О.С., Слепичев В.А.. Гемопоэзстимулирующая активность препаратов иммобилизированных олигонуклеотидов и гиалуронидазы в условиях цитостатической миелосупрессии // Бюл. эксперим. биол. и медицины. - 2010. - Т. 150, №11. - С. 545-549.

2. Дыгай A.M., Скурихин Е.Г., Першина О.В., Минакова М.Ю., Хмелевская Е.С., Андреева Т.В., Попонина A.M. Моноаминергическая регуляция кроветворения при экстремальных воздействиях // Вестник Уральской медицинской академической науки. - 2010. - Т. 32, № 4. - С. 6468.

3. Попонина A.M., Андреева Т.В., Хмелевская Е.С. Эффекты и механизмы гемопоэзстимулирующего действия иммобилизированных олигонуклеотидов при цитостатической миелосупрессии // Сибирский онкологический журнал. - 2011. - Приложение 1. - С. 95.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота имГД - иммобилизированная гиалуронидаза имОН - иммобилизированные олигонуклеотиды КОЕ-ГМ - гранулоцито-макрофагальная колониеобразующая единица КОЕ-ГЭММ - гранулоцито-эритро-макрофагально-мегакариоцитарная колониеобразующая единица КОЕ-Э - эритроидная колониеобразующая единица КСА - колониестимулирующая активность МПД - максимально переносимая доза ЭПА - эритропоэтическая активность

Отпечатано в Издательстве ТПУ в полном соответствии с качеством предоставленного оригинал-макета

Подписано к печати 20.08.2012. Формат 60x84/16. Бумага «Снегурочка». Печать XEROX. Усл.печ.л. 0,98. Уч.-изд.л. 0,9.

_Заказ 959-12. Тираж 100 экз._

Национальный исследовательский Томский политехнический университет Система менеджмента качества Томского политехнического университета сертифицирована NATIONAL QUALITY ASSURANCE по стандарту ISO 9001:2008 питЕислЛ'т. 634050, г. Томск, пр. Ленина, 30 Тел./факс: 8(3822) 56-35-35, www.tpu.ru

Î Î8

Оглавление диссертации Попонина, Анна Михайловна :: 2012 :: Томск

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. ОСНОВНЫЕ ПОДХОДЫ К КОРРЕКЦИИ 14 НАРУШЕНИЙ В СИСТЕМЕ КРОВИ ПРИ ГИПОПЛАСТИЧЕСКИХ СОСТОЯНИЯХ

1.1.1. Неспецифические стимуляторы кроветворения

1.1.2. Гемотрансфузия

1.1.3. Гемопоэтические ростовые факторы

1.2. ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИЕ ЭФФЕКТЫ

ОЛИГОНУКЛЕОТИДОВ, ГИАЛУРОНОВОЙ

КИСЛОТЫ И ГИАЛУРОНИДАЗЫ

1.2.1. Олигонуклеотиды

1.2.2. Гиалуроновая кислота и гиалуронидаза

1.3. МОДИФИКАЦИЯ ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИ 46 АКТИВНЫХ МОЛЕКУЛ ПЕГИЛИРОВАНИЕМ -СТРАТЕГИЯ СОЗДАНИЯ НОВОГО КЛАССА ЛЕКАРСТВЕННЫХ ПРЕПАРАТОВ

Введение диссертации по теме "Фармакология, клиническая фармакология", Попонина, Анна Михайловна, автореферат

Актуальность. Характерным осложнением у онкологических больных, получавших полихимиотерапию, выступает стойкая депрессия кроветворения [Skillings J.R., 1993; Barrett-Lee P.J., 2000; Зак К.П., Грыцюк С.Н., 2001; Бредер В.В. и др., 2002; Littlewood Т.J., Collins G.R., 2007; Woo S. et al., 2007]. Лейкопения, анемия, тромбоцитопения и другие гематологические нарушения значительно ухудшают качество жизни пациентов, снижая при этом сопротивляемость к инфекциям, усугубляют многие негативные явления проводимого противоопухолевого лечения [Moullet I. et al., 1998; Groopman J.E., Itri J., 1999; Beutel G., Ganser A., 2007].

За последние 50 лет подходы к терапии цитостатических и лучевых миелодепрессий претерпели значительные изменения. Достаточно длительное время характер лечебных мероприятий при различных нарушениях кроветворения ограничивался антибиотикотерапией возникших инфекционных осложнений и назначением комплекса поддерживающих препаратов. К числу таких соединений относятся неспецифические протекторы гемопоэза (зимозан, спленин, витамины С, В], В6), гормоны, соли лития и др. [Byron J.W., 1970; Greco F.A., Breton H.D., 1977; Rothstein G. et al., 1978; Алмазов В.А. и др., 1981; Гершанович М.А., 1982; Закенфельд Г.К., 1985; Patchen M.L., Mac Vittie T.J., 1985; Мороз Б.Б. и др., 1986; Гольдберг

F., 1997; Бредер В.В. и др., 2002]. При угрожающих жизни состояниях трансфузия незаменима. В то же время анемия при злокачественном процессе 7 носит хронический характер, а частые гемотрансфузии существенно повышают риск возникновения побочных эффектов, таких как передача вирусных инфекций, аллергические реакции и др. [Brunson М.Е., 1990; Skillings J.R., 1993; Barrett-Lee P.J., 2000; Птушкин В.В., 2002].

Настоящим прорывом в борьбе с нейтропениями, анемиями, тромбоцитопениями и другими нарушениями системы крови после интенсивной цитостатической терапии можно считать цитокинотерапию. С патогенетических позиций клиническое применение препаратов, созданных на основе рекомбинантных форм цитокинов (миелоидные колониестимулирующие факторы - ГМ-КСФ, Г-КСФ, интерлейкины, эритропоэтин, тромбопоэтин), весьма перспективно [Geissler К., 2000; Demetri G.D., 2001; Basser R., 2002; Abdelrazik N. et al., 2003; Птушкин B.B., 2004; Переводчикова Н.И., 2005; Stasi R. et al., 2005; Giannini E.G., 2006; Beutel G., Ganser A., 2007; Jelkmann W., 2007; Littlewood T.J., Collins G.R., 2007]. Связываясь с высокоаффинными специфическими рецепторами, а при увеличении уровня цитокина в крови и тканях - и с рецепторами умеренной аффинности, факторы роста стимулируют пролиферацию и индуцируют дифференцировку соответствующих коммитированных кроветворных клеток-предшественников [Воробьев А.И., 2002; Скурихин Е.Г. и др., 2005; Гольдберг Е.Д. и др., 2007]. Преимущества таких лекарственных средств обусловлены их исключительно высокой активностью и возможностью целенаправленного воздействия на основное звено патогенеза соответствующего гематологического расстройства [Moore M.A.S., Warren D.I., 1987; Moore M.A., 1989; Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., Жданов В.В., Гольдберг В.Е., 2001; Glaspy J.A., 2003]. Недостатками применения препаратов рекомбинантных цитокинов являются малая эффективность при краткосрочном применении и развивающиеся осложнения при длительном введении.

В настоящее время нуклеиновые кислоты и их производные рассматриваются как средства для профилактики и лечения нарушений в 8 системе крови на фоне цитостатической терапии [Серебрянная Н.Б., Новик A.A., 2001; Машковский М.Д., 2007]. Кроме того, препараты нуклеиновых кислот успешно применяют в кардиологии, пульмонологии, андрологии, гастроэнтерологии, эндокринологии, онкологии, неврологии, иммунологии [Каплина Э.Н., 2000, 2005; Караулов A.B., 2002; Машковский М.Д., 2008]. Оправдано их назначение при нарушениях свертывающей системы [Карамышев В. Н., 1993; Касьяненко Ю.И., 1999] и аутоиммунных заболеваниях [Каплина Э.Н., 2005], при диабете, боковом амиотрофическом склерозе, артритах [Bodera Р., 2011], бронхиальной астме и хронической обструктивной болезни лёгких [Parry-Billings M., Ferrari N., Seguin R., 2010], мышечной дистрофии [Heemskerk H. et al., 2010]. Как видно, мишенью для нуклеиновых кислот выступают любые ткани. Однако, как и в случае применения многих высокоактивных молекул, нерешённой проблемой терапии препаратами нуклеиновых кислот является адресная доставка к тканям, относительно низкая концентрация в клетке и быстрая деградация нуклеазами в лизосомах.

Большие надежды в решении этих проблем связывают с модификацией биологически активных соединений с помощью присоединения к ним молекул полиэтиленоксида (пегилирование). Так, использование технологии иммобилизации молекул на носителях низкой молекулярной массы электронно-лучевым (радиационным) синтезом [Vereschagin E.I. et al., 2001] позволяет, с одной стороны, пролонгировать активность лекарственного средства (в силу более продолжительного нахождения в крови), с другой стороны - устраняет многие нежелательные побочные реакции (в силу низкой иммуногенности и малой токсичности получаемых соединений) иммобилизированные Г-КСФ, эритропоэтин и др.) [Дыгай A.M., Артамонов

A.B., Верещагин Е.И., Мадонов П.Г., 2009; Дыгай A.M. и др., 2009; Андреева

Т.В. и др., 2010; Дыгай A.M. и др., 2010, 2011]. Известно, что гиалуронидаза уменьшает вязкость гиалуроновой кислоты, вызывая ее распад до глюкозамина и глюкуроновой кислоты, тем самым, увеличивая 9 проницаемость тканей, в том числе, для фармакологических агентов [ВЬепсош! С.8. е1 а1., 2011]. С нашей точки зрения, наиболее перспективным является совместное назначение модифицированного лекарственного средства с веществом, снижающим вязкость межклеточного матрикса. Так, в частности, продемонстрировано увеличение биодоступности модифицированного радиационным синтезом Г-КСФ при его совместном назначении с гиалуронидазой [Андреева Т.В. и др., 2010].

В связи с вышесказанным, является актуальным изучение гемопоэзстимулирующей активности назначаемых изолированно и совместно иммобилизированных на полиэтиленоксиде электронно-лучевым синтезом олигонуклеотидов и гиалуронидазы.

Цель исследования

Изучить гемопоэзстимулирующую активность иммобилизированных на полиэтиленоксиде олигонуклеотидов, назначаемых изолированно или совместно с иммобилизированной гиалуронидазой, в условиях цитостатической миелосупрессии.

Задачи исследования

Научная новизна работы

В работе на модели цитостатической миелосупрессии, вызванной однократным введением циклофосфана в МПД, выявлена гемопоэзстимулирующая активность иммобилизированных олигонуклеотидов (имОН), вводимых мышам линии CBA/CaLac перорально, а также механизмы их действия. Показана возможность повышения иммобилизированной гиалуронидазой фармакологической активности иммобилизированных олигонуклеотидов при цитостатической миелосупрессии.

При изучении костномозгового кроветворения животных, подвергнутых цитостатическому воздействию (циклофосфан), установлено, что наиболее чувствительным к стимулирующему действию иммобилизированных олигонуклеотидов (200 мг/кг) является гранулоцитарный росток кроветворения. В основе эффектов иммобилизированных олигонуклеотидов лежит увеличение содержания эритроидных и гранулоцитарно-макрофагальных клеток-предшественников в костном мозге и усиление их дифференцировки в зрелые кроветворные клетки, при этом снижаются секреторная активность клеток кроветворного микроокружения и уровень сывороточных ростовых факторов.

На модели миелосупрессии (циклофосфан) продемонстрировано, что кратковременное (2-кратное) назначение иммобилизированной гиалуронидазы повышает эффективность коррекции иммобилизированными олигонуклеотидами нарушений со стороны костномозгового эритро- и гранулоцитопоэза, ускоряет восстановление количества лейкоцитов в периферической крови. Более длительное (3-кратное, 7-кратное) введение имГД, напротив, препятствует проявлению гемопоэзстимулирующей активности имОН. В основе феномена потенцирования лежит увеличение содержания гранулоцитарно-макрофагальных клеток-предшественников в кроветворной ткани.

Практическое значение работы

Продемонстрирована высокая эффективность перорального использования нового отечественного гемостимулятора, представляющего собой иммобилизированные с помощью оригинальной технологии электронно-лучевого синтеза олигонуклеотиды (разработанной ООО «Саентифик фьючер менеджмент», г. Новосибирск совместно с ФГБУ «НИИ фармакологии» СО РАМН, г. Томск). Полученные результаты о потенцирующих свойствах иммобилизированной гиалуронидазы могут явиться основой для разработки новых методов усиления активности гемостимуляторов при гипопластических состояниях кроветворной ткани.

Апробация работы

Материалы диссертации докладывались и обсуждались на Российской конференции с международным участием «Фундаментальные вопросы гематологии. Достижения и перспективы.» (Екатеринбург, 2010), VI региональной конференции молодых ученых-онкологов им. академика РАМН Н.В. Васильева «Актуальные вопросы экспериментальной и клинической онкологии» (Томск, 2011).

Публикации

По теме диссертации опубликовано 3 работы, из них 2 статьи в ведущих рецензируемых научных журналах, рекомендованных перечнем ВАК Минобрнауки РФ.

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 163 страницах машинописного текста, иллюстрирована 13 рисунками, 30 таблицами и состоит из введения, 4 глав, выводов, списка цитируемой литературы, включающего 296 источников, из них 84 отечественных и 212 зарубежных.

Заключение диссертационного исследования на тему "Гемопоэзстимулирующая активность иммобилизированных на полиэтиленоксиде олигонуклеотидов в условиях цитостатической миелосупрессии"

выводы

5. В основе гемопоэзстимулирующей активности пегилированных олгинуклеотидов, а также усиления их действия иммобилизированной гиалуронидазой лежит увеличение содержания коммитированных кроветворных клеток-предшественников в костном мозге на фоне снижения продукции колоииестимулирующих активностей клеточными элементами гемопоэзиндуцирующего микроокружения.

1.4. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В целом, результаты представленных исследований свидетельствуют о том, что основными подходами предупреждения и коррекции нарушений, возникающих в системе крови при цитостатических миелосупрессиях, являются гемотрансфузия и назначение неспецифических и специфических гемостимуляторов. Использование специфических гемостимуляторов (препаратов на основе рекомбинантных форм цитокинов и гормонов, фармакологических средств, модулирующих активность СНС, а также производных гликозаминогликанов и др.) позволяет непосредственно влиять на основное звено патогенеза: гемопоэтические клетки либо клеточные элементы системы локальной регуляции кроветворения, что существенно снижает опасность возникновения осложнений.

Перспективным лекарственным средством, оказывающим стимулирующее влияние на различные ростки кроветворения при отсутствии токсического воздействия, является препарат олигонуклеотидов. Препарат нуклеиновых кислот принимает участие в клеточном метаболизме и накапливается в активно пролиферирующих тканях (костный мозг, лимфоузлы, селезенка). Эти свойства позволяют назначать препарат не только при лейко- и тромбоцитопениях, но и при подготовке и проведении трансплантационных мероприятий, а также при язвах и ожогах кожных покровов, инфекционных заболеваниях и т.д. "Мягкая" стимуляция без овершута выступает преимуществом нуклеиновых кислот над миелостимулирующими факторами. Вместе с тем, низкая доставка олигонуклеотидов в клетку, быстрая деградация нуклеазами в лизосомах во многом ограничивают их клиническое применение. Возможным решением данной проблемы является использование транспортных систем, способствующих проникновению нуклеотидного материала через гистогематические барьеры и клеточные мембраны.

Активно развивающееся направление фармакологии - ПЭГ-модификация пептидных препаратов наметила большие перспективы

56 лечения таких заболеваний, как ферментативные дефициты, лейкемия, хронические воспалительные заболевания, опухоли, хронические вирусные инфекции, кардиоваскулярная патология, миелосупрессия и др. Пегилированные лекарственных препараты пептидной структуры имеют ряд весомых и несомненных преимуществ, которые ранее были просто невозможны при использовании нативных аналогов: усиление биологической активности, удлинение периода "эффективной" полужизни, замедление выведения, отсутствие пиков плазменной/тканевой концентрации, понижение токсичности и иммуногенности.

Для улучшения проникновения фармакологических агентов к клеткам-мишеням используются соединения, уменьшающие вязкость межклеточного вещества. В частности, гиалуронидаза за счёт распада гиалуроновой кислоты до глюкозамина и глюкуроновой кислоты ускоряет проникновение лекарственных препаратов (таких, как Г-КСФ, инсулин).

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материал исследования

Эксперименты проведены на 625 мышах-самцах линии СВА/СаЬас в возрасте 7-8 недель, массой 18-20 г. Животные 1 категории (конвенциональные линейные мыши) разводки института фармакологии Сибирского отделения Российской академии медицинских наук (сертификат имеется) содержались в соответствии с «Правилами Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и иных научных целей» (Страсбург, 1986).

До начала исследования экспериментальных животных выдерживали в течение недели на обычном пищевом режиме по 10-15 особей в пластиковых клетках. Мышей умерщвляли передозировкой СОг-наркоза. С целью исключения сезонных колебаний изучаемых показателей все эксперименты были проведены в осенне-зимний период.

Распределение животных по сериям экспериментов в соответствии с поставленными задачами, сроки забора материала для исследований в каждой серии отображено в таблице 1.

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2012 года, Попонина, Анна Михайловна

1. Абрамова Е.В. Влияние экстракта шлемника байкальского на процессы регенерации кроветворения в условиях химиотерапии: автореф. дисс. . канд. мед. наук. Томск, 1992. - 21 с.

2. Агафонов В.И. О влиянии шлемника байкальского на регенерацию гемопоэза, подавленного действием цитостатика // Актуальные проблемы фармакологии и поиска новых лекарственных препаратов. Томск, 1993. -Т. 6.-С. 3-6.

3. Агафонов В.И., Дыгай A.M., Болдышев Д.А. и др. О стимулирующем влиянии сиаловой кислоты на процессы постлучевой регенерации гемопоэза // Экспериментальная и клиническая фармакология. 1995. - № 4.-С. 41-44.

4. Алмазов В.А., Афанасьев Б.В., Зарицкий А.Ю., Шишков А.Л. Лейкопении. Л.: Медицина, 1981. - 240 с.

5. Балабаньян В.Ю., Солев И.Н., Елизарова О.С. и др. Нейропротекторный эффект рекомбинантного эритропоэтина человека, сорбированного на полимерных наночастицах, на модели интрацеребральной посттравматической гематомы (модель геморрагического инсульта) //

6. Экспериментальная и клиническая фармакология. 2011. - Т. 74. -№ 10. -С. 17-22.

7. Безуглов В.В., Грецкая Н.М., Клинов Д.В., и др. Нанокомплексы рекомбинантных белков с полисиаловой кислотой. Получение, свойства и биологическая активность // Биоорганическая химия. 2009. - Т. 35. - № З.-С. 305-356.

8. Белоус А. М., Годин В. П., Панков Е. Я. Экзогенные нуклеиновые кислоты и восстановительные процессы. М.: Медицина, 1974. - 200 с.

9. Ю.Биченков Е. Е., Будкер В. Г., Зарытова В. Ф., Иванова Е. М., Лохов С. Г., Савченко Е. В., Теплова Н. М. // Биологические мембраны. 1988. - № 5.-С. 735-741.

10. П.Блохин H.H., Переводчикова Н.И. Химиотерапия опухолевых заболеваний. М.: Медицина, 1984. - 384 с.

11. Бредер В.В., Горбунова В.А., Бесова Н.С. Анемия при злокачественных опухолях // Современная онкология. 2002. - Том 4, № 3. - С. 12-18.

12. Булкина З.П. Противоопухолевые препараты. Киев: Наукова думка, 1991.-304 с.

13. Владимирская Е.Б. Механизмы действия ростовых факторов // Лабораторная медицина. 2002. - № 5. - С. 14-19.

14. Волкова М.А. Гранулоцитарный колониестимулирующий фактор граноцит и его клиническое применение // Терапевтический архив. -1998.-№4.-С. 80-84.

15. Возианов А.Ф., Бутенко А.К., Зак К.П. Цитокины. Биологические и противоопухолевые свойства. Киев: Наукова думка, 1998. - 314 с.

16. Воробьев А.И. Руководство по гематологии: в 3 т. Т. 1. Под ред. А.И. Воробьева. 3-е изд., перераб. и допол. М.: Ньюдиамед, 2002. - 280 с.

17. Вышковский Г. Л. Регистр лекарственных средств России РЛС Энциклопедия лекарств,- 15-й вып./Гл. ред. Г.Л. Вышковский. М.: «РЛС-2007», 2006.-С. 1488.

18. Гаврилов O.K., Файнштейн Ф.Э., Турбина Н.С. Депрессии кроветворения.- М.: Медицина, 1987. 256 с.

19. Гарин A.M., Хлебнов A.B. Справочник практической химиотерапии опухолей. М., 1995.-304 с.

20. Гаузе Г.Ф., Дудник Ю.В. Справочник практической химиотерапии опухолей. М., 1995. - 304 с.

21. Гершанович M.JI. Осложнения при химио- и гормонотерапии злокачественных опухолей. М: Медицина. - 1982. - 224 с.

22. Гершанович M.JL, Филов В.А., Акимов М.А., Акимов A.A. Введение в фармакотерапию злокачественных опухолей. СПб.: СОТИС, 1999. - 143 с.

23. Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., Жданов В.В. и др. Фармакологическая регуляция системы крови при экспериментальных невротических воздействиях. Томск: Изд-во ТГУ, 2007. - 155 с.

24. Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., Жданов В.В. Динамическая теория регуляции кроветворения и роль цитокинов в регуляции гемопоэза // Медицинская иммунология. 2001. - Т. 3. - № 4. - С. 487^198.

25. Горбачева Л.Б., Горьков В.А., Чернов В.А., Шнятая O.K. Химиотерапия злокачественных новообразований // Итоги науки и техники. ВИНИТИ. Сер. Онкология. 1982. - Т. 12. - 320 с.

26. Гублер E.B. Вычислительные методы анализа и распознавания патологических процессов. Л.: Медицина, 1978. - 193 с.

27. Давыдов М.И., Барышников А.Ю. Экспериментальная онкология на рубеже веков. Москва, 2003. - 552 с.

28. Дыгай A.M., Артамонов A.B., Верещагин Е.И., Мадонов П.Г. Создание нового класса лекарственных препаратов на основе нанотехнологий //Сборник тезисов докладов участников Второго Международного форума по нанотехнологиям. Москва, 2009. - С. 607-609.

29. Дыгай A.M., Артамонов A.B., Бекарев A.A. и др. Гемостимулирующие эффекты иммобилизированной гиалуронидазы и механизмы их развития при цитостатической миелосупрессии // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2010. - № 5. - С. 528-531.

30. Дыгай A.M., Жданов В.В. Гранулоцитарный колониестимулирующий фактор. Фармакологические аспекты. М.: Изд-во РАМН, 2010. - 138 с.

31. Дыгай A.M., Зюзьков Г.Н., Жданов В.В. и др. Гемостимулирующие свойства иммобилизированного с помощью нанотехнологии электроннолучевого синтеза эритропоэтина // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2011. - № 2. - С. 207-210.

32. Дыгай A.M., Зюзьков Г.Н., Жданов B.B. и др. Иммобилизированный гранулоцитарный колониестимулирующий фактор. Томск: Изд-во ООО «Печатная мануфактура» , 2011. - 149 с.

33. Дыгай A.M., Клименко H.A. Воспаление и гемопоэз. Томск: Изд-во ТГУ, 1992.-276 с.

34. Дыгай A.M., Шахов В.П. Роль межклеточных взаимодействий в регуляции гемопоэза. Томск: Изд-во ТГУ, 1989. - 224 с.

35. Ершов Ф.И. Система интерферона в норме и при патологии. М.: Медицина, 1996.-239 с.

36. Жданов В.В., Гольдберг В.Е., Хричкова Т.Ю. и др. Гемостимулирующие свойства кропанола при цитостатической миелосупрессии // Экспериментальная и клиническая фармакология. 2002. - Т. 65. - № 6. -С. 37-40.

37. Жданов В.В., Любавина П.А., Кириенкова Е.В. и др. О механизмах гемостимулирующего эффекта глицирама // Бюллетеньэкспериментальной биологии и медицины. 1997. - Т. 123. - № 5. - С. 555559.

38. Зайцев Г.Н. Математическая статистика в экспериментальной ботанике. -Л.: Наука, 1984.-425 с.50.3емсков В.М., Земсков A.M. Принципы дифференцированной иммунокоррекции // Иммунология. 1996. - № 3. - С. 4-6.

39. Каплина Э.Н. Некоторые итоги клинического применения препарата Деринат с 1976 по 2000 г. // Материалы 1-й Всероссийской конференции: «Использование препарата Деринат в различных областях медицины». -М, 2000. С. 3-6.

40. Каплина Э.Н., Вайнберг Ю.П. Деринат природный иммуномодулятор для детей и взрослых. - М.: Научная книга. - 2005. - 216 с.

41. Карамышев В. Н., Власов В. В., Зон Д. и др. Распределение производных олигонуклеотидов и их стабильность в тканях мышей // Биохимия. 1993. - №8. - С. 590-598.

42. Касьяненко Ю.И., Эпштейн Л.М. Гажа А.К. и др. Биологически активная пищевая добавка дезоксирибонуклеиновая кислота (ДНК) из молок лососевых // Изв. ТИНРО-центра. 1999. - Т. 125. - С. 37-43.

43. Клиническая иммунология и аллергология: учебное пособие /под ред. A.B. Караулова. М.: Мед. информационное агентство, 2002. - 651 с.

44. Константинова М.М. Новые поддерживающие средства (противорвотные, бисфосфонаты, колониестимулирующие факторы) // Практическая онкология. 2002. -Т.З. - № 4. - С. 310-319.

45. Лактионов П.П., Брыксин A.B., Рыкова Е.Ю. и др. Исследование фармакокинетики и стабильности в крови in vivo фосфодиэфирных и модифицированных производных олигонуклеотидов // Вопросы медицинской химии. 1999. - Том 45. - №3. - С. 10-15.

46. Малайцев В.В., Богданова И.М., Сухих Г.Т. Современные представления о биологии стволовой клетки // Архив патологии. 2002. - Т. 64. - № 4. - С. 7-11.

47. Машковский М.Д. Лекарственные средства. 15-е изд., перераб., испр. и доп. - М.: РИА «Новая волна», 2007. - 544 с.

48. Мороз Б.Б., Дешевой Ю.Б., Цыбанев O.A. Влияние карбоната лития на пострадиационное восстановление системы крови в эксперименте // Гематология и трансфузиология. 1986. - № 10. - С. 25-29.

49. Натан Д.Г., Зифф К.А. Регуляция кроветворения // Гематология и трансфузиология. 1994. - Т. 39. - № 2. - С. 3-10.

50. Нифонтова И.Н., Бигильдеев А.И., Сац Н.В. и др. Влияние длительного воздействия гранулоцитарного колониестимулирующего фактора на кроветворение // Гематология и трансфузиология. 2008. - № 5. - С.50-55.

51. Пашук Л. К., Апрышко Г. Н., Трещалина Е. М. Препараты ДНК как потенциальные терапевтические средства // Химико-фармакологический журнал. — 1995. — № 6. — С. 61-64.

52. Переводчикова Н.И. Противоопухолевая химиотерапия. М.: Медицина, 1993.-223 с.

53. Переводчикова Н.И. Место химиотерапии в системе лечения онкологических больных и выбор терапевтической тактики // Современная онкология. 2001. - Т. 3. - № 2. - С. 23-26.

54. Переводчикова Н.И. Руководство по химиотерапии опухолевых заболеваний, 2-е изд., доп. и перераб. М:Практическая медицина, 2005. -704 с.

55. Подольцева Э.И. Колониестимулирующие факторы в онкологии // Практическая онкология. Т. 1. - № 5. - 2001. - С. 21-23.

56. Позмогова Г.Е., Кнорре Д.Г. Белковые и пептидные конструкции для доставки в клетку олигонуклеотидов и ДНК // Вопросы медицинской химии. 1998. - Т.44. - № 4. - С. 331-347.

57. Птушкин В.В. Гемопоэтические факторы роста: биологические основы функционирования и клиническое применение // Материалы Второй ежегодной Российской онкологической конференции. М., 1998. - С. 324-330.

58. Птушкин В.В. Совершенствование методов поддерживающей терапии при проведении цитостатической терапии // Современная онкология. 2002. -Т. 4. - № 2. - С. 28-30.

59. Рыкова Е. Ю., Лактионов П. П., Власов В. В. Активирующее влияние ДНК на иммунную систему // Успехи современной биологии. — 2001. — № 121. —С. 160-171.

60. Серебряная Н.Б., Новик A.A. ДНК как иммуностимулятор // Медицинская иммунология. 2001. - Т.З. - № 1. - С. 27-34.

61. Серов В.В., Шехтер А.Б. Соединительная ткань. М.: Медицина, 1981. -312 с.

62. Сейфулла Р.Д., Тимофеев А.Б., Орджоникидзе З.Г. и др. Проблемы использования нанотехнологии в фармакологии // Экспериментальная и клиническая фармакология 2008. - Т. 71. - № 1. - С. 60-69.

63. Симанина E.B. D-глюкуроновая кислота стимулятор грануломоноцитопоэза при цитостатических гемодепрессиях: Автореф. дис. канд. мед.наук. - Томск, 1990. - 17 с.

64. Скурихин Е.Г., Першина О.В., Суслов Н.И. и др. Роль Thy 1,2+-клеток в регуляции кроветворения при экспериментальных неврозах // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2005. - Т. 139. - № 6. - С. 608-612.

65. Тупицин H.H. Роль рецептора цитокинов gp 130 в гемопоэзе // Современная онкология. 2001. - Т. 3 - № 1. - С. 7-12.

66. Удут Е.В., Жданов В.В., Гурьянцева J1.A. и др. Механизмы эритропоэзстимулирующего действия экстракта шлемника байкальского // Экспериментальная и клиническая фармакология. 2005. - Т. 68. - № 4. -С. 43^5.

67. Удут Е.В., Скурихин Е.Г., Жданов В.В. и др. Механизмы действия стимуляторов эритропоэза в условиях миелосупрессии, вызванной введением 5-фторурацила // Российский биотерапевтический журнал. -2008.-Т. 7.-№ 1 С. 53.

68. Урбах. В.Ю. Статистический анализ биологических медицинских исследований. М.: Медицина, 1975. - 295 с.

69. Федянина JI.H., Беседнова H.H., Эпштейн JIM. и др. Лекарственные препараты и биологически активные добавки к пище на основе нуклеиновых кислот различного происхождения // Тихоокеанский медицинский журнал. № 4. - С. 9-12.

70. Чертков И.Л., Гуревич O.A. Стволовая кроветворная клетка и ее микроокружение. М.: Медицина, 1984. - 238 с.

71. Чертков И.Л., Дризе Н.И. Как обеспечивается поддержание кроветворной системы // Гематология и трансфузиология- 1998.- Т. 43.- №4.- С. 3-8.

72. Abels R.I. Recombinanat human erythropoietin in the treatment of the anaemia of cancer // Act. Haematol. 1992. - № 87. - Suppl. 1. - P. 4-11.

73. Agrawal S., Temsamani J., Tang J. Y. Pharmacokinetics, biodistribution, and stability of oligodeoxynucleotide phosphorothioates in mice // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1991. - Vol. 88. - P. 7595-7599.

74. Aguila H.L. Regulation of hematopoietic niches by sympathetic innervation // Bioessays. 2006. - Vol. 28 (10). - P. 1064.

75. Armstrong N.A., Bolton E.J., Morris D.L. Study on the reduction of chemotherapy induced neutropenia in mice using glucosaminylmuramyl dipeptide // Arzneimittelforschung. 1999. - Vol. 49. - № 8. - P. 716-720.

76. Asano S. Human granulocyte colony-stimulating factor: its basic aspects and clinical applications // Am. J. Pediatric Hematol/Oncol. 1991. - Vol. 13. - P. 400-413.

77. Avalos B.R., Gasson J.C., Hedvat C. et al. Human granulocyte colony-stimulating factor: biologic activities and receptor characterization on hematopoietic cells and small cell lung cancer cell lines // Blood. 1990. - Vol. 75.-P. 851- 857.

78. Avigdor A., Goichberg P., Shivtil S. et al. CD44 and hyaluronic acid cooperate with SDF-1 in the trafficking of human CD34+ stem/progenitor cells to bone marrow // Blood. 2004.- Vol. 8. - №15. - P.2981-2989.

79. Bagby G.C.Jr. Interleukin-1 and hematopoiesis // Blood. 1989. - № 3. - P. 152-161.

80. Barrett-Lee P.J., Bailey N.P., O'Brien M.E., Wager E. Large-scale UK audit of blood transfusion requirements and anemia in patients receiving cytotoxic chemotherapy // Br. J. Cancer. 2000. - Vol. 82. - № 1. - P. 93-97.

81. Basser R. The impact of thrombopoietin on clinical practice // Curr. Pharm. Des. 2002. - Vol. 8. - № 5. - P. 369-377.

82. Baumgartner G., Neumann H. Hyaluronidase in cytostatic therapy of ENT tumors // Laryngol Rhinol Otol (Stuttg). 1987. - Vol. 66 (4). - P. 195-199.

83. Belda-Injesta C., Perona R., Carpeno J.D. et al. Human Recombinant Erythropoietin Does Not Promote Cancer Growth in Presence of Functional Receptors Expressed in Cancer Cells // Cancer Biol. Ther. 2007. - Vol. 6. -№. 10. -P. 1802-1810.

84. Bennet C.L., Smith T.J., Weeks J.C. et al. Use of hematopoietic colony-stimulating factors: the American society of clinical oncology survey // J.Clin.Oncol. 1996. - Vol. 14. - P. 2511-2520.

85. Bertrand P., Girard N., Duval C. et al. Increased hyaluronidase levels in breast tumor metastases // Int. J. Cancer. 1997. - Vol.3. - №4. - P.327-331.

86. Beutel G., Ganser A. Risks and benefits of erythropoiesis-stimulating agents in cancer management // Semin. Hematol. 2007. - Vol. 44. - № 3. - P. 157— 165.

87. Bitencourt C.S., Pereira P. A.T., Ramos S.G. et al. Hyaluronidase recruits mesenchymal-like cells to the lung and ameliorates fibrosis // Fibrogenesis & Tissue Repair. 2011. - Vol. 4. - № 3. - P. 14040-903.

88. Bodera P. Immunostimulatory oligonucleotides // Recent Pat. Inflamm. Allergy Drug Discov. 2011. - №5. - P. 87-93.

89. Brandt J.E., Bhalla K., Hoffman R. Effects of interleukin-3 and c-kit ligand on the survival of various classes of human hemopoietic progenitor cells // Blood.-1994.-Vol. 83.-№6.-P. 1507-1514.

90. Brunson M.E., Alexander J.W. Mechanisms of transfusion-induced immunosuppression // Transfusion. 1990. - Vol. 30. - № 7. - P. 651-658.

91. Byron J.W. Cell mechanism influencing the transition of hemopoietic stem cells from Go into S //Cell cycle controls / Ed. By G.M. Padilles, I.L. Cameron, A. Zimmerman, N.Y. 1974. - P. 97-99.

92. Byron J.W. Effect of steroids on the cycling of haemopoietic stem cell // Nature. 1970. - Vol. 228. - P. 1204.

93. Cairo M.S. Dose reductions and delays: limitations of myelosuppressive chemotherapy // Oncology. 2000. - Vol. 14. - №. 9. Suppl. 8. - P. 21-31.

94. Campbell A.D., Long M.W., Wicha M.S. Haemonectin, a bone marrow adhesion protein specific for cells of granulocyte lineage // Nature. 1987. -Vol. 329. - № 6141. - P. 744-746.

95. Carde P. Inhibitors of hematopoiesis: from physiology to therapy // Bull. Acad. Natl. Med. 1994. - Vol. 178. - № 5. - P. 793-803.

96. Cerami A., Warren K.S. CNS effect of epoetin alfa // 11th Intern Congr AntiCancer treat. Abstr., Paris. - 2001. - P. 165.

97. Choi E.W., Nayak L.V., Bates P.J. Cancer-selective antiproliferative activity is a general property of some G-rich oligodeoxynucleotides // Nucleic Acids Res. 2011.-№5.-P. 1623-1635.

98. Cross M.A., Enver T. The lineage commitment of haemopoietic progenitor cells // Curr. Opin. Genet. Development-1997-Vol.7.-P. 609-613.

99. Curiel D. T., Agarwal S., Wagner E., Cotten M. Adenovirus enhancement of transferrin-polylysine-mediated gene delivery // Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 1991. - Vol. 88. - P. 8850-8854.

100. Curran M.P., Goa K.L. Pegfilgrastim // Drugs. 2002. - Vol. 62. - P. 12071213.

101. Csoka A.B., Frost G.I., Stern R. The six hyaluronidase-like genes in the human and mouse genomes // Matrix Biol. 2001. - №8. - P. 499-508.

102. Delgado C., Francis G.E., Fisher D. The uses and properties of PEG-linked proteins // Crit. Rev. Ther. Drug. Carr. Syst. 1992. - Vol. 9. - P. 294-304.

103. Delpech B., Girard N., Bertrand P. et al. Hyaluronan: fundamental principles and applications in cancer // J. Intern. Med. 1997. - №242. - P. 41-48.

104. Demetri G.D. Targeted approaches for the treatment of thrombocytopenia // Oncologist. 2001. - № 6. - P. 15-23.

105. De Sa V.K., Olivieri E., Parra E.R. et al. Hyaluronidase splice variants are associated with histology and outcome in adenocarcinoma and squamous cell carcinoma of the lung // Human Pathology. 2011. - P. 1-9.

106. De Wit R., Verweij J., Bontenbal M. et al. Adverse effect on bone marrow protection of prechemotherapy granulocyte colony-stimulating factor support // J. Natl. Cancer Inst. 1996. - Vol. 88. - № 19. - P. 1393-1398.

107. Dexter T.M., Heyworth C.M. Growth factors and the molecular control of haematopoiesis // Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. 1994. - Vol. 3 - Suppl. 2.-P. 3-8.

108. Dias N., Stein C.A. et al. Antisense Oligonucleotides: Basic Concepts and Mechanisms // Mol. Cancer 2002. - V. 1. - P. 347-357.

109. Dorshkind K. Regulation on hemopoiesis by bone marrow stromal cells and their products // Annu. Rev. Immunol. 1990. - № 8. - P. 111-137.

110. Edvards C.K. PEGylated recombinant human soluble tumor necrosis factor receptor type I (r HU - sTNF - RI): novel high affinity TNF receptor designed for chronic inflammatory diseases // Ann. Rheum. Dis. - 1999. -Vol.58. - Suppl. I.-P. 173-181.

111. Ehmer B., Roshan J.Y., Mocks J., Franke W. Rh Erytropoietin in cancer Supportive Treatment. New York, 1996. - P. 159-174.

112. Ehrenreich H., Weissenborn K., Prange H. et al. Recombinant human erythropoietin in the treatment of acute ischemic stroke // Stroke. 2009. - Vol. 40(12).-P. 647-656.

113. Eldridge L., Moldobaeva A., Wagner E.M. Increased hyaluronan fragmentation during pulmonary ischemia // Am. J. Physiol. Lung Cell. Mol. Physiol. 2011. - №5. p. 782-788.

114. Erslev AJ. Erythropoietin // Leukemia Research. 1990. - Vol. 14. - № 8. -P. 683-688.

115. Faucher C., le Corroler A.G., Blaise D. et al. Comparison of G-CSF primed peripheral blood progenitor cells and bone marrow auto transplantation: clinical assessment and cost effectiveness // Bone Marrow Transplant. 1994. - Vol. 14.-P. 895-901.

116. Filshie RJ. Cytokines in haemopoietic progenitor mobilization for peripheral blood stem cell transplantation // Curr. Pharm. Des. 2002. - Vol. 8. -P. 379-394.

117. Findeis M. A., Wu G. Y., Wu C.H. Ligand-based carrier systems for delivery of DNA to hepatocytes // Methods Enzymol. 1994. - Vol.247. - P. 341-351.

118. Fisher K.J., Wilson J.M. Biochemical and functional analysis of an adenovirus-based ligand complex for gene transfer // Biochem. J. 1994. - Vol. 299.-P. 49-58.

119. Fominaya J., Wels W. Target cell-specific DNA transfer mediated by a chimeric multidomain protein. Novel non-viral gene delivery system // J. Biol. Chem. 1996. - Vol. 271. - P. 10560-10568.

120. Frampton J.E., Keating G.M. Spotlight on pegfilgrastim in chemotherapyinduced neutropenia // BioDrugs. 2005. - Vol. 19. - P. 405407.

121. Gabrivole J. Overview: erythropoiesis, anemia and the impact of erythropoietin // Semin. Hematol. 2000. - Vol. 37. - № 4. - Suppl. 6. - P. 13.

122. Gallagher J.T., Spooncer E., Dexter T.M. Role of the cellular matrix in haematopoiesis. I. Synthesis of glycosaminoglycans by mouse bone marrow cell cultures // J. Cell Sci. 1983. -№ 63. - P. 155-171.

123. Gallo M., Montserrat J.M., Iribarren A.M. Design and applications of modified oligonucleotides // Braz. J. Med. Biol. Res. 2003. - Vol.2. - P. 143151.

124. Ganser A., Heil G. Use of hematopoietic growth factors in the treatment of acute myelogenous leukemia // Curr Opin Hematol. 1997. - Vol. 4(3). - P. 191-195.

125. Gardner R.V., Begue R., McKinnon E. The effect of granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF) on primitive hematopoietic stem cell (PHSC) function and numbers after chemotherapy // Exp. Hematol.2001.-Vol. 29.-№9.-P. 1053-1059.

126. Gérard J.P., Romestaing P., Zhou Y.F., Salles G. Breast cancer: the end of big arms, sequelae, and mutilations // Pathol Biol (Paris). 1990. -Vol. 38(8). -P. 848-9.

127. Geissler K. Therapeutic potential of thrombopoietin // Wien. Kli. Wochenschr. 2000. - Vol. 112. - № 19. - P. 829-834.

128. Giannini E.G. Review article: thrombocytopenia in chronic liver disease and pharmacologic treatment options // Aliment Pharmacol. Ther. 2006. - Vol. 23.-№8.-P. 1055-1065.

129. Glorioso J. C., DeLuca N. A., Fink D. Development and application of herpes simplex virus vectors for human gene therapy //J. Annu. Rev. Microbiol.- 1995. V. 49.-P. 675-710.

130. Glue P., Fang J., Sabo R. et al. Peg interferon - alfa2b: pharmacokinetics, pharmacodynamics, safety and preliminary efficacy data // Hepatology. - 1999.- Suppl.30. P. 189.

131. Glue P., Rouizer Panis R., Raffanel C. et al. A dose ranging study of pegylated interferon - alfa2b and ribavirin in chronic hepatitis C. The Hepatitis C Intervention Therapy Group // Hepatology. - 2000. - Vol. 32. - P. 674-653.

132. Gordon M.Y. Extracellular matrix of the marrow microenvironment // Br. J. Haemat. 1988. - № 70. - P. 1^1.

133. Gordon M.Y., Ford A.M., Greaves M.F. Interactions of hematopoietic progenitor cells with extracellular matrix / The Hematopoietic Microenvironment. Johns Hopkins Univ. Press, Baltimore, 1993. - P. 152174.

134. Greco F.A., Breton H.D. Effect of lithium carbonate on the neutropenia caused by chemotherapy: a preliminary clinical trial // Oncology. 1977. - Vol. 34.-P. 153-155.

135. Groopman J.E., Itri L.M. Chemotherapy-induced anemia in adults: incidence and treatment // J. Natl. Cancer Inst. 1999. - Vol. 91. - №. 19. - P. 16161634.

136. Greenberger J.S. The hematopoietic microenvironment // Crit. Rev. Oncol. Hemat. 1991. - № 11. - P. 65-84.

137. Hanna G.G., Edgar D., Clarke J.E.M. A case of prolonged type 1 hypersensitivity reaction to pegfilgrastim // Clin, oncology. 2008. - Vol. 20. -P. 315-316.

138. Hamidi M., Azadi A., Rafiei P. Pharmacokinetic consequences of pegylation // Drug Delivery. 2006. - Vol. 13. - P. 399-409.

139. Heemskerk H., de Winter C., van Kuik P. et al. Preclinical PK and PD Studies on 2'-0-Methyl-phosphorothioate RNA Antisense Oligonucleotides in the mdx Mouse Model // Mol. Ther. 2010. - Vol. 18. - P. 1210-1217.

140. Heil G., Hoelzer D., Sanz M.A. et al. Long-term survival data from a phase 3 study of Filgastrim as an adjunct to chemotherapy in adults with de novo acute myeloid leukemia // Leukemia. 2006. - Vol. 6. - № 3. - P. 404-409.

141. Herrlich P., Morrison H., Sleeman J. et al. CD44 acts both as a growth and invasiveness-promoting molecule and as a tumor-suppressing cofactor // Ann NY Acad Sci. 2000. - Vol. 910. - P. 106-118.

142. Hershfield M.S., Buckley R.H., Greenberg M.L. et al. Treatment of adenosine deaminase deficiency with polyethylene glycol modified adenosine deaminase //N. Engl. J. Med. - 1987. - Vol. 316. - P. 589-596.

143. Hiltunen E.L., Anttila M., Kultti A. et al. Elevated hyaluronan concentration without hyaluronidase activation in malignant epithelial ovarian tumors // Cancer Res. 2002. - Vol. 62. - P. 6410-6413.

144. Hobarth K., Maier U., Marberger M. Topical chemoprophylaxis of superficial bladder cancer with mitomycin C and adjuvant hyaluronidase // Eur. Urol. 1992. - Vol. 21. - P. 206-210.

145. Hoglund M. Glycosylated and non-glycosylated rhG-CSF what is the difference? // Med. Oncol. - 1998. - Vol. 15. - P. 229-233.

146. Ikebuchi K., Wong G.G., Clark S.C. et al. Interleukin 6 enhancement of interleukin 3-dependent proliferation of multipotential hemopoietic progenitors // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1987. - Vol. 84. - № 24. - P. 9035-9039.

147. Invernizzi R., Grasso D., Travaglino E. et al. Biological effect of pegfilgrastim on circulating neutrophils in breast cancer patients undergoing dose-densse chemotherapy // Oncology. 2008. - Vol. 75. - P. 237-244.

148. Isaacs C., Lawrence B. Concomitant ipsilateral intertrochanteric and subcapital fracture of the hip. // J. Orthop. Trauma. 1993. - Vol. 7(2). - P. 146-148.

149. Jacobson A., Rahmanian M., Rubin K., Heldin P. Expression of hyaluronan synthase 2 or hyaluronidase 1 differentially affect the growth rate of transplantable colon carcinoma cell tumors // Int. J. Cancer. 2002. - Vol. 102. -P. 212-219.

150. Jadin L., Wu X., Ding H. et al. Skeletal and hematological anomalies in HYAL2-deficient mice: a second type of mucopolysaccharidosis IX? // The FASEB Journal. 2008. - Vol. 22. - P. 4316-4326.

151. Jäschke A., Fürste J.P., Nordhoff E. et al. // Nucleic Acids Researh. 1994. -Vol. 22.-P. 4810-4817.

152. Jelkmann W. Erythropoietin after a century of research: younger than ever // Eur. J. Haematol. 2007. - Vol. 78. - N. 3. - P. 183-205.

153. Jensen N.M., Dalsgaard T., Jakobsen M. et al. Update on targeted gene repair in mammalian cells: methods and mechanisms // Biomed. Sei. 2011. -Vol. 18(1).-P. 10.

154. Jones D.V., Ashby M., Vadhan-Raj S. et al. Recombinant human thrombopoietin clinical // Stem Cells. 1998. - Vol. 16. - Suppl. 2. - P. 199206.

155. Kaneda Y., Morishita R., Dzau V. J. Prevention of restenosis by gene therapy // Ann. N.Y. Acad. Sei. 1997. - Vol. 811. - P. 299-308.

156. Karger A.G. Hemopoietic growth factors and mononuclear phagocytes / Ed. By R.van Furth. Copyrigth, S. Karger A.G. P.O. Box, CH-4009 Basel (Switzerland), 1993.-221 p.

157. Kabaya K., Watanabe M., Kusaka M. et al. Effect of recombinant human granulocyte colony-stimulating factor on efficacy of radiation therapy in tumor-bearing rats // Radiat. Res. 1994.- Vol. 139(1). - P. 92-96.

158. Keating A., Gordon M.Y. Hierarchical organization of hematopoietic microenvironments: role of proteoglycans // Leukemia. 1988. - Vol. 2. - № 11.-P. 766-769.

159. Kertesz Z., Vas V., Kiss. J. et al. In vitro expansion of long-term repopulating hematopoietic stem cells in the presence of immobilized Jagged-1 and early acting cytokines // Cell Biol. Int. 2006. - Vol. 30. - № 5. - P. 401405.

160. Kim H.R., Gil S., Andrieux K. et al. Low-density lipoprotein receptor-mediated endocytosis of PEGylated nanoparticles in rat brain endothelial cells // Cell Mol. Life Sei. 2007. - Vol. 64. - P. 356-364

161. Kinstler O.B., Brems D.N., Lauren S.L. et al. Characterization and stability of N-terminally PEGylated rhG-CSF // Pharm. Research. 1996. - Vol. 13. -P. 996-1004.

162. Kim D.W., Yoon E.S., Ji YH et al. Vascular complications of hyaluronic acid fillers and the role of hyaluronidase in management // J. Plast. Reconstr. Aesthet. Surg.-2011 .-Vol. 64(12).-P. 1590-1595.

163. Kolset S.O., Gallagher J.T. Proteoglycans in haemopoietic cells // Biochim. Biophys. Acta.-1990.-Vol. 1032. -№ 2-3. -P. 191-211.

164. Koury M.J., Bondurant M.C. Erythropoietin retards DNA breakdown and prevents programmed death in erythroid progenitor cells // Science. 1990. -Vol. 20. -№ 248. - P. 378-381.

165. Kovacic J.C., Macdonald P., Freund J. et al. Profound thrombocytopenia related to G-CSF // Am. J. Hematol. 2007. - Vol. 82. - P. 229-230.

166. Kremer E. J., Perricaudet M. Adenovirus and adeno-associated virus mediated gene transfer //Br. Medical Bull. 1995. - Vol.51. -P.31-44.

167. Lee D.L., Sharif I., Kodihalli S. et al. Preparation of monopegylated human granulocyte-macrophage colony-stimulating factor // J. Interfron Cytokine Res. -2008.-Vol. 28.-P. 101-112.

168. Littlewood T.J., Collins G.P. Granulocyte and erythropoietic stimulating proteins after high-dose chemotherapy for myeloma // Bone marrow transplant. -2007.-Vol. 40.-N. 12.-P. 1147-1155.

169. Li X., Zhuang J., Rayford H. et al. Attenuation of bleomycin-induced pulmonary fibrosis by intratracheal administration of antisense oligonucleotides against angiotensinogen mRNA // Curr. Pharm. Des. 2007. - Vol. 13(12). - P. 1257-1268.

170. Lohrman N.P., Schreml W. Cytotoxic drugs and granulopoietic sistem // Berlin: Springer-Verlag, 1982. 224 p.

171. Lokeshwar V.B., Obek C., Soloway M.S. et al. Tumor associated hyaluronic acid: a new sensitive and specific urine marker for bladder cancer // Cancer Res. 1998.-Vol. 58.-P.31-41.

172. Lokeshwar V.B., Rubinowicz D., Schroeder G.L. et al. Stromal and epithelial expression of tumor markers hyaluronidase in prostate cancer // J. Biol. Chem . 1998. - Vol. 276. - P. 11922-11932.

173. Madan A.K., Pang Y., Wilkiemeyer M.B. et al. Increased hyaluronidase expression in more aggressive prostate adenocarcinoma // Oncol. Rep. 1999. -Vol. 6.-P. 1431-1433.

174. Madan A.K., Yu K., Dhurandhar N. et al. Association of hyaluronidase and breast adenocarcinoma invasiveness // Oncol. Rep. 1999. - Vol. 6. - P. 607609.

175. Maharjan A.S., Pilling D., Gomer R.H. High and Low Molecular Weight Hyaluronic Acid Differentially Regulate Human Fibrocyte Differentiation // PLoS ONE. 2011. - Vol. 6(10). - P. 1371.

176. Mahato R. I., Takakura Y., Hashida M. Development of targeted delivery systems for nucleic acid drugs // J. Drug Targeting. 1997. - V. 4. - P. 337357.

177. Maier U., Baumgartner G. Metaphylactic effect of mitomycin C with and without hyaluronidase after transurethral resection of bladder cancer: randomized trial // J. Urol. 1989. - Vol. 141 (3). - P. 529-530.

178. Makita K., Ohta K., Mugitani A. et al. Acute myelogenous leukemia in a donor after granulocyte colony-stimulating factor-primed peripheral blood stem cell harvest // Bone Marrow Transplant. 2004. - Vol. 33. - P. 661-665.

179. Matulonis U. Efficacy of epoetin alfa on hematologic and quality of lifethmeasures in brast cancer patients //11 Intern Congr Anti-Cancer treat. Abstr. -Paris, 2001.-P. 129-130.

180. Mercuriali F. The role of human recombinant erythropoietin in oncologic surgery // Tumori. 1997. - Vol. 83. - № 4. - Suppl. 2. - P. 16-19.

181. Metcalf D. Hematopoietic growth factors // The Lancet. 1989. - Vol. 15. -P. 825-827.

182. Meyer K. Hyaluronidases // The Enzimes, NY: Academic Press. 1971. -Vol. 5. -P.307-320.

183. Mittelman M., Lessin L.S. Clinical application of recombinant erytropoietin in myelodisplasia // Hematol. Oncol. Clin. North. Am. 1994. - Vol. 8. - № 5. -P. 993-1009.

184. Molineux G. Pegfilgrastim: using pegylation technology to improve neutropenia support in cancer patients // Anticancer Drugs. 2003. - Vol. 14. -P. 259-264.

185. Molineux G. The design and development of pegfilgrastim // Curr. Pharm. Des. 2004. - Vol. 10.-P. 1235-1244.

186. Morishita E., Masuda S., Nagao M., et al: Erythropoietin receptor is expressed in rat hippocampal and cerebral cortical neurons, and erythropoietin prevents in vitro glutamate-induced neuronal death // Neuroscience. 1997. -Vol. 76.-P. 105-116.

187. Moore M.A.S. Role of interleukin-1 in heamatopoiesis // Immunol. Res. -1989. Vol. 8 - № 3. - P. 165-175.

188. Moullet I., Salles G., Ketterer N. et al. Frequency and significance of anemia in non-Hodgkin's lymphoma patients // Ann. Oncol. 1998. - Vol. 9(10). - P. 1109-1115.

189. Muchmore D.B., Vaughno D.E. Review of the mechanism of action and clinical efficacy of recombinant human hyaluronidase coadministration with current prandial insulin formulations // J. Diabetes Sci. Technol. 2010. - Vol. 1.-P. 419-428.

190. Muta K., Krants S.B., Boundurant M.C., Wickrema A. Distrinct roles of erythropoietin, insulin like growth factor I, and stem cell factor in the development of erythroid progenitor cells // Clin. Inves. - 1994. - Vol. 94. - № l.-P. 34-43.

191. Nathan C.F. Secretory products of macrophages // J. Clin. Invest. 1987. -№79.-P. 319-325.

192. Necas E., Sefc L., Znojil V. On control of the hematopoietic cell proliferation // Stem Cells. 1993. - Vol. 11. - № 4. - P. 319-325.

193. Parry-Billings M, Ferrari N, Seguin R. Oligonucleotides: New therapeutic approaches for asthma and chronic obstructive pulmonary disease // Curr. Opin. Investig. Drugs. 2010.-Vol. 11(11).-P. 1276-1285.

194. Patchen M.L., MacVittie T.J. Stimulated hemopoiesis and enhaced survival following glucan treatment in sublethaly and lethaly irradiated mice // Inst. J. Immunopharm. 1985. - Vol. 7. - P. 923-932.

195. Patinkin D., Hidmi A., Weiss L. et al. The effect of antisense acetylcholinesterase on hematopoiesis // Oligonucleotides. 2003. - V. 13. - № 4.-P. 207-216.

196. Pawlowski A., Haberman H.F., Menon I.A. The effects of hyaluronidase upon tumor formation in BALB/C mice painted with 7,12-dimethylbenz-(a)anthracene // Int. J. Cancer. 1979. - Vol. 23. - P. 105-109.

197. Piedmonte D.M., Treuheit M.J. Formulation of Neulasta (pegfilgrastim) // Advanced Drug Delivery Reviews. 2008. - Vol. 60. - P. 50-58.

198. Pilarski L.M., Pruski E., Wizniak J. et al. Potential role for hyaluronan and the hyaluronan receptor RHAMM in mobilization and trafficking of hematopoietic progenitor cells // Blood. 1999. - Vol. 93(9). - P. 2918-2927.

199. Pirinen R., Tammi R., Tammi M. et al. Prognostic value of hyaluronan expression in non-small cell lung cancer: increased stromal expression indicates unfavorable outcome in patients with adenocarcinoma // Int J Cancer. 2001. -Vol. 95.-P. 12-17.

200. Posey T., Soloway M.S., Ekici S. et al. Evaluation of the prognostic potential of hyaluronic acid and hyaluronidase (HYAL1) for prostate cancer // Cancer Res. 2003. - Vol. 63. - P. 2638-2644.

201. Prow D., Vadhan-Raj S. Trombopoietin: biology and potential clinical applications // Oncology. 1998. - Vol. 12. - № 11. - P. 1597-1604.

202. Rajan R.S., Li T., Aras M. et al. Modulation of protein aggregation by polyethylene glycol conjugation: G-CSF as a case study // Protein Sci. 2006. -Vol. 45.-P. 1063-1075.

203. Reddy K.R. Controlled-release, pegylation, liposomal formulations: new mechanisms in the delivery of injectable drugs // Ann Pharmacother. 2000. -Vol. 34(7-8).-P. 915-923.

204. Reiffers J., Faberes C., Marit G. G-CSF and peripheral blood progenitor cells//Lancet. 1992.-Vol. 339.-№ 8806.-P. 1410-1411.

205. Rein D.T., Roehrig K., Schondorf T. et al. Expression of the hyaluronan receptor RHAMM in endometrial carcinomas suggests a role in tumor progression and metastasis // Cancer Res. Clin. Oncol. 2003. - Vol. 129. - P. 161-164.

206. Reynolds C.H. Clinical efficacy of rhIL-11 // Oncology. 2000. - Vol. 14. -№ 9. - Suppl. 8. - P. 32-40.

207. Rizzo J.D., Seidenfeld J., Piper M. et al. Erythropoietin: a paradigm for the development of practice guidelines // Hematology Am. Soc. Hematol. Educ. Program. 2001. - P. 10-30.

208. Rodel J.E., Link D.C. Suppression of apoptosis during cytokine deprivation of 32 D cells is not sufficient to induce complete granulocytic differentiation // Blood. 1996. - Vol. 87. - № 3. - P. 858-864.

209. Rohde D., Wickenhauser C., Denecke S. et al. Cytokine release by human bone marrow cells, analysis at the single cell level // Virchose Arch. 1994. -Vol. 424. - № 4. - P. 389-395.

210. Roodman G.D., Spivak J.L., Zanjani E.D. Stimulation of erytroid colony formation in vitro by erythropoietin immobilized on agarose-bound lections // J. Lab. Clin. Med. 1981. - Vol. 98. - P. 684.

211. Ropponen K., Tammi M., Parkkinen J. et al. Tumor cell-associated hyaluronan as an unfavorable prognostic factor in colorectal cancer // Cancer Res. 1998. - Vol. 58. - P. 342-347.

212. Rothstein G., Clarcson D.R., Larsen W. Effect of lithium on neutrophil mass and production // New Engl. J. Med. 1978. - Vol. 298. - P. 178-189.

213. Ruef C., Coleman D.L. GM-CSF and G-CSF: cytokines in clinical application // Schweiz. Med. Wochenschr. 1991. - Vol. 12. - № 12. - P. 397412.

214. Saito T., Kawana H., Azuma K., Toyoda A., Fujita H., Kitagawa M., Harigaya K. Fragmented hyaluronan is an autocrine chemokinetic motility factor supported by the HAS2-Hyal2/CD44 system on the plasma membrane // Int. J. Oncol. 2011.-Vol. 10.-P.

215. Sakanaka M., Wen T.C., Matsuda S. et al. In vivo evidence that erythropoietin protects neurons from ischemic damage // Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. 1998. - Vol. 95. - P. 4635-4640.

216. Scott M.D., Bradley A.J., Murad K.L. Camouflaged blood cells: low -technology bioengineering for transfusion medicine? // Transfus. Med. Rev. -2000.-Vol. 14(1).-P. 53-63.

217. Sieff C.A. Hematopoietic growth factors // J. Clin. Invest. 1987. - Vol. 79. - № 6. - P. 1549-1557.

218. Simmons P. Cellular interactions in vitro haemopoiesis // Thesis of Doctor of Phylosophy. Manchester, 1984. - P. 230.

219. Singer J.W., Keating A., Wight T.N. The human hematopoietic microenvironment. In: Recent Advances in Heamatology / Ed. A.V. Hofman. Churchill-livingstone, Inc., New York. 1985. - P. 1-24.

220. Skillings J.R., Sridhar F.G., Wong C., Paddock L. The frequency of red cell transfusion for anemia in patients receiving chemotherapy. A retrospective cohort study // Am. J. Clin. Oncol. 1993. - Vol. 16. - № 1. - P. 22-25.

221. Spooncer E., Gallagher J., Krizsa F., Dexter T. Regulation of haemopoiesis in long-term bone marrow cultures. IV. Glycosaminoglycann synthesis and the stimulation of haemopoiesis by beta-D-xylosides // J. Cell. Biol. 1983. - Vol. 96.-P. 510-514.

222. Stasi R., Amadori S., Littlewood TJ. et al. Management of cancer-related anemia with erythropoietic agents: doubts, certainties, and concerns // Oncologist. 2005. - Vol. 10. - № 7. - P. 539-554.

223. Stern R. Devising a pathway for hyaluronan catabolism: are we there yet? // Glycobiology. 2003.-Vol. 12.-P. 105-115.

224. Steward W.P., Scarfe J.N., Austin R. et al. Recombinant human GM-CSF given as daily short infusion // Brit. J. Cancer. 1989. - Vol. 59. - P. 142-145.

225. Szumilas P., Barcew K., Baskiewicz-Masiuk M. et al. Effect of stem cell mobilization with cyclophosphamide plus granulocyte colony-stimulating factor on morphology of haematopoietic organs in mice // Cell Prolif. 2005. - Vol. 38.-P. 47-61.

226. Tan J.X., Wang X.Y., Su X.L. et al. Upregulation of HYAL1 Expression in Breast Cancer Promoted Tumor Cell Proliferation, Migration, Invasion and Angiogenesis // PLoS One. 2011. - Vol. 6(7). - P. 22836.

227. Tanaka R., Koike K., Imai T. et al. Stem cell factor enhances proliferation, but not maturation, of murine megakaryocyte progenitors in serum-free culture // Blood. 1992. - Vol. 80. - № 7. - P. 1743-1749.

228. Toole B.P. Hyaluronan promotes the malignant phenotype // Glycobiology. -2002.-Vol. 12.-P. 37R-42R.

229. Toole B.P., Hascall V.C. Hyaluronan and tumor growth // Am. J. Pathol. -2002. Vol. 161. - P. 745-747.

230. Trillet-Lenoir V., Arpin D., Brune S. Optimal delivery of dose in cancer chemotherapy with the support of haemopoietic growth factors // Eur. J. Cancer- 1993. Vol. 29A. - Suppl. 5. - P. 14-16.

231. Turley E.A., Noble P.W., Bourguignon L.Y.W. Signaling properties of hyaluronan receptors // J. Biol. Chem. 2002. - Vol. 277. - P. 4589-4592.

232. Vadhan-Raj S. Recombinant human thrombopoietin; clinical experience and in vivo biology // Semin. Hematol. 1998. - Vol. 35. - № 3. - P. 261-268.

233. Vaidya A., Agarwal A., Jain A. et al. Bioconjugation of Polymers: A Novel Platform for Targeted Drug Deliver // Curr. Pharm. Des. 2011. - Vol. 17(11). -P. 1108-1125.

234. Vereschagin E.I., Khan Do-Hung et al. Radiation Technology in the Preparation of Polyethylene Oxide Hydrophilic Gels and Immobilization of Proteases for Use in Medical Practice // Arch. Pharm. Res. 2001. - Vol. 24. -№ 3. - P. 229-233.

235. Veronese F.M., Pasut G. PEGylation, successful approach to drug delivery // Drug Discovery Today. 2005. - Vol. 10.-P. 1451-1458.

236. Vial T., Descotes J. Clinical toxicity of cytokines used as haemopoietic growth factors // Drug Saf. 1995. - Vol. 13. - № 6. - P. 371^106.

237. Vile R. G., Rüssel S. J. Retroviruses as vectors //Br. Medical Bull. 1995. -Vol. 51.-P. 12-30.

238. Wang S.Y., Hsu M.L., Su C.Y. et al. In vivo stimulation of myelopoiesis in cyclophosphamide treated mice by purified human GM-CSF // Chung Hua I Hsueh Tsa Chin. - 1991. - Vol. 43. - № 3. - P. 171-176.

239. Wang Y.S., Youngster S., Bausch J. et al. Identification of the major position isomer of pegylated interferon alfa2b // Biochemistry. - 2000. - Vol. 39.-P. 10634-10640.

240. Wernicke M., Pineiro L.C., Caramutti D. et al. Breast cancer stromal myxoid changes are associated with tumor invasion and metastasis: a central role for hyaluronan // Mod. Pathol. 2003. - Vol. 16. - P. 99-107.

241. Williams G., Smith C.A., Spooncer E. et al. Haemopoietic colony stimulating factors promote cell survival by suppressing apoptosis // Nature. -1990.-Vol. 343.-P. 76-79.

242. Winearls C.G. Recombinant human erythropoietin: 10 years of clinical experience // Nephrol. Dial. Transplant. 1998. - Vol. 13. - Suppl. 2. - P. 3-8.

243. Woo S., Krzyzanski W., Jusko W.J. Pharmacodynamic model for chemotherapyinduced anemia in rats // Cancer Chemother. Pharmacol. 2008. -Vol 62. -№ 1.- P. 123-133.

244. Wu G. Y., Wu C.H. Receptor-mediated gene delivery and expression in vivo // J. Biol. Chem. -1988. Vol.263. - P. 14621-14624.

245. Xu Y.J., Chen F.P., Li X.L. et al. Effect of recombinant human interleukin 11 on the platelet after hematopoietic stem cell transplantation in patients with leukemia // Zhong Nan Da Xue Xue Bao Yi Xue Ban. 2007. - Vol. 32. - № 3. -P. 433-436.

246. Yakubov L. A., Deeva E. A., Zarytova V. F., Ivanova E.M., Ryte A. S., Yurchenko L. V., Vlassov V. V. Mechanism of oligonucleotide uptake by cells: involvement of specific receptors? // Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 1989. - Vol. 86.-P. 6454-6458.

247. Yang B.B., Kido A., Shibata A. Serum pegfilgrastim concentrations during recovery of absolute neutrophil count in patient with cancer receiving pegfilgrastim after chemotherapy // Pharmacotherapy. 2007. - Vol. 27. - P. 1387-1393.

248. Yatuv R., Carmel-Goren L., Dayan I. et al. Binding of proteins to PEGylated liposomes and improvement of G-CSF efficacy in mobilization of hematopoietic stem cells // J. Control. Release. 2009. - Vol. 135. - P. 44-50.

249. Yeh P., Perricaudet M. Advances in adenoviral vectors: from genetic engineering to their biology // FASEB J. 1997. - Vol.11. - P. 615-623.

250. Zahalka M.A., Okon E., Gosslar U. et al. Lymph node (but not spleen) invasion by murine lymphoma is both CD44- and hyaluronatedependent // J. Immunol. 1995. - Vol. 154. - P. 5345-5355.

251. Zamboni W.C. Pharmacokinetics of pegfilgrastim // Pharmacotherapy. -2003.-Vol. 23.-P. 9-14

252. Zendegui J. G., Vasquez K. M., Tinsley J. H. et al. In vivo stability and kinetics of absorption and disposition of 3' phosphopropyl amine oligonucleotides // Nucl. Acids. Res. 1992. - Vol. 20. - P. 307-314.

253. Zeuzem S., Feinman S.V., Rasenack J. et al. Peginterferon alfa 2a in patients with chronic hepatitis C // N. Engl. J. Med. - 2000. - Vol. 343 (23). -P. 1666-1672.

254. Zinzani P.L., Storti S., Zaccaria A. et al. Elderly aggressive-histology non-Hodgkin's lymphoma: first-line VNCOP-B regimen experience on 350 patients // Blood. 1999. - Vol. 94. - № 1. - P. 33-38.

255. Zipori D., Tamir M. Stromal cells of hemopoietic origin // Int. J. Cell Cloning. 1989. - Vol. 7. - № 5. - P. 281-291.

Оглавление диссертации Попонина, Анна Михайловна :: 2012 :: Томск

Введение диссертации по теме "Фармакология, клиническая фармакология", Попонина, Анна Михайловна, автореферат

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2012 года, Попонина, Анна Михайловна

Похожие научные работы

Каталог диссертаций