Фармакологические свойства иммобилизированного гранулоцитарного колониестимулирующего фактора

Андреева, Татьяна Викторовна

Диссертации по медицине → Фармакология, клиническая фармакология

Автореферат и диссертация по медицине (14.03.06) на тему:Фармакологические свойства иммобилизированного гранулоцитарного колониестимулирующего фактора

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Андреева, Татьяна Викторовна Томск 2010 г.

Ученая степень: кандидата медицинских наук

ВАК РФ: 14.03.06

Автореферат диссертации по медицине на тему Фармакологические свойства иммобилизированного гранулоцитарного колониестимулирующего фактора

На правах рукописи

064605588

АНДРЕЕВА ТАТЬЯНА ВИКТОРОВНА

ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ИММОБИЛИЗИРОВАННОГО ГРАНУЛОЦИТАРНОГО КОЛОНИЕСТИМУЛИРУЮЩЕГО ФАКТОРА

14.03.06 - фармакология, клиническая фармакология 14.03.03 — патологическая физиология

АВТОРЕФЕРАТ

1 О ИЮН 2010

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Томск-2010

004605588

Работа выполнена в Учреждении Российской академии медицинских нау Научно-исследовательском институте фармакологии СО РАМН

Научные руководители:

доктор медицинских наук, профессор, академик РАМН, заслуженный деятель науки РФ

ДЫГАЙ Александр Михайлович

доктор медицинских наук

ЗЮЗЬКОВ Глеб Николаевич

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор

УРАЗОВА Ольга Ивановна

доктор медицинских наук

ЧЕРНЫШЕВА Галина Анатольевна

Ведущая организация: Учреждение Российской академии медицинских на Научно-исследовательский институт онкологии СО РАМН

диссертационного совета Д 001.031.01 при Учреяздении Российской академ медицинских наук Научно-исследовательском институте фармакологии С РАМН (634028, г. Томск, пр. Ленина, 3)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Учреждения Российск академии медицинских наук Научно-исследовательском инстит фармакологии СО РАМН

Автореферат разослан "j^" мая 2010 г.

Ученый секретарь диссертационного совета,

Защита состоится

.2010 г. в_часов на заседай

доктор биологических наук

Амосова Е.Н.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Миелосупрессивные состояния, развивающиеся в большинстве случаев как осложнения цитостатических методов лечения [Гершанович МЛ. и др., 1999; Владимирская Е.Б., 2001; Bhatt V., Saleem А., 2004; Marangolo M. е.а., 2006], требуют применения гемостимулнрующих средств для поддержания качества жизни пациентов и обеспечения переносимости терапии основного заболевания [Molineux G., 2004; Переводчикова Н.И., 2005; Greil R. е.а., 2008]. Достижения экспериментальной и клинической гематологии последних десятилетий легли в основу разработки высокоэффективных гемостимуляторов - аналогов эндогенных гемопоэтинов (колониестимулирую-щие факторы, эритропоэтин, интерлейкины), что позволило значительно продвинуться в терапии лейкопений и анемий различного генеза [Metealf D., 1989; Ganser А. е.а., 1991; Hill A.D. е.а., 1995; Волкова М.А., 1998; Lee D.L. е.а., 2008; Дыгай A.M. и др., 2009].

Широкое распространение для коррекции нарушений гранулоцитопоэза получили препараты гранулоцитарного колониестимулирующего фактора (Г-КСФ) [Asano S., 1991; Demetri G.D., Griffin J.D., 1991; Zeidler С., Wright D.E. е.а., 2001; Levesque J.-P. е.а., 2003; Welte К., 2007]. На сегодняшний день существуют неконъюгированные (гликозилированный и непшкозилированный Г-КСФ) [Hoglund M., 1998; Bonig H. е.а., 2001] и пегилированная химическим путем формы данного средства [Molineux G., 2004; Frampton J.E., Keating G.M., 2005; Rajan R.S. е.а., 2006]. Практическое применение неконъюгированного Г-КСФ в значительной степени лимитировано токсичностью и достаточно высокой частотой развития нежелательных побочных эффектов. В отличие от этого пегилированный Г-КСФ представляет собой практически нетоксичное соединение и имеет высокую физическую стабильность, растворимость и период полувыведения из организма [Delgado С. е.а., 1992; Curran М.Р., Goa K.L., 2002; Zamboni W.C., 2004; Hamidi M. е.а., 2006; Piedmonte D.M., Treuheit M.J., 2008]. Однако технология его получения (химический синтез) является многостадийной, сложной с использованием высокотоксичных соединений, требующих в последующем очистки готового продукта [Hamidi M. е.а., 2006].

Вместе с тем существует технология/нанотехиология электронно-лучевого (радиационного) синтеза [Vereschagin E.I. ё.а., 2001], позволяющая получать низкоиммуногенные и малотоксичные фармакологические средства белковой природы [Дыгай А.М.и др., 2009]. Создаваемые с помощью ионизирующей радиации иммобилизированные вещества, помимо указанных выше преимуществ, оказываются в значительной степени защищенными от воздействия протеоли-тических ферментов, что делает возможным их использование per os [Дыгай A.M. и др., 2009].

е.а., 2009], представляется весьма актуальным изучение фармакологических свойств препарата, созданного на основе данного цитокина с помощью электронно-лучевого синтеза.

Цель исследования. Изучить гемостимулируюшую и мобилизующую стволовые клетки активности иммобилизированного гранулоцитарного коло-ниестимулирующего фактора и вскрыть механизмы его действия.

Задачи исследования:

1. Изучить влияние иммобилизированного (им) Г-КСФ на процессы восстановления костномозгового гемопоэза при цитостатической миелосупрессии.

2. Оценить состояние различных пулов кроветворных клеток-предшественников при введении имГ-КСФ.

3. Вскрыть механизмы гранулоцитопоэзстимулирующей активности имГ-КСФ и выявить особенности его специфического действия.

4. Исследовать мобилизующие свойства препарата в отношении кроветворных и мезенхимапьных прогениториых клеток.

5. Определить возможность и эффективность перорального использования имГ-КСФ.

Научная новизна работы. Впервые изучены гемостимулирующая и мобилизующая стволовые клетки активности иммобилизированного на полиэти-ленгликоле Г-КСФ с помощью электронно-лучевого синтеза. Показано, что в основе стимуляции подавленного циклофосфаном гранулоцитарного ростка кроветворения под влиянием имГ-КСФ при его подкожном введении лежит повышение содержания полипотентных (КОЕ-Н, КОЕ-ГЭММ) и коммутированных (КОЕ-ГМ, КОЕ-Г) гемопоэтических клеток-предшественников. Действие препарата определяется не только прямым влиянием на кроветворные прекурсоры, но и стимуляцией функциональной активности гемопоэзиндуцирующего микроокружения: увеличение количества мезенхимапьных клеток-предшественников и продукции ими гемопоэтинов, повышение фидерной способности ТЪу1,2+- клеток в отношении родоначальных элементов крови. Выявлены мобилизующие прогениторные клетки свойства имГ-КСФ. Обнаружены особенности механизмов действия иммобилизированной формы Г-КСФ (по сравнению с не модифицированным ростовым фактором), заключающиеся в более выраженной активации коммитированных предшественников на фоне менее значимой стимуляции полипотентных кроветворных предшественников. Впервые установлена принципиальная возможность эффективного перорального использования препарата, созданного на основе Г-КСФ.

Практическая значимость работы. Продемонстрирована высокая эффективность парентерального и перорального использования нового отечественного гемостимулятора, представляющего собой иммобилизированный с помощью оригинальной технологии электронно-лучевого синтеза Г-КСФ (разработанный

ООО «Саснтифик фьючер менеджмент», г. Новосибирск совместно с НИИ фармакологии СО РЛМН, г. Томск).

По материалам работы подготовлен отчет в Федеральную службу по надзору в сфере здравоохранения и социального развития о специфической активности имГ-КСФ для получения разрешения на его клинические исследования в качестве гемостимулирующего средства. Кроме того, полученные результаты о мобилизующих свойствах имГ-КСФ в отношении стволовых клеток могут явиться основой для разработки неинвазивной стратегии клеточной терапии дегенеративных заболеваний, основанной на принципе фармакологической модуляции функций эндогенных прогениторных элементов.

Апробация работы. Материалы диссертации докладывались и обсуждались на VIII Всероссийской научно-практической конференции «Отечественные противоопухолевые препараты» (Екатеринбург, 2009), IV региональной конференции молодых ученых-онкологов им. академика Н.В. Васильева «Актуальные вопросы экспериментальной и клинической онкологии» (Томск, 2009), II международном форуме по нанотсхнологиям (Москва, 2009).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 12 работ, в том числе 8 статей в ведущих рецензируемых научных журналах и изданиях, рекомендованных ВАК Минобрнауки РФ. Получен 1 патент (1Ш) на изобретение и подано 2 заявки (1Ш) на изобретения: «Способ определения эффективности гемо-стимуляторов при цитостатической миелосупрессии» (заявка № 2009125095, приоритет от 30.06.2009 г.), «Способ стимуляции стволовых кроветворных клеток при цитостатической миелосупрессии» (заявка № 2009144320, приоритет от 20.10.2009 г.).

Объем и структура работы. Диссертация изложена на 163 страницах машинописного текста и состоит из введения, 4-х глав, выводов и списка литературы. Работа иллюстрирована 8 рисунками и 23 таблицами. Библиографический указатель включает 329 источников литературы, в том числе 243 иностранных.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Эксперименты выполнены на 874 мышах-самцах линии СВА/СаЬас в возрасте 2-2,5 месяцев, массой 18-20 г. Животные 1 категории (конвенциональные линейные мыши) получены из питомника НИИ фармакологии СО РАМН (сертификат имеется).

Для моделирования цитостатической миелосупрессии использовали цик-лофосфан (Циклофосфан-Лэнс, ЗАО «Верофарм», г. Москва), который непосредственно перед применением растворяли в стерильном физиологическом растворе и вводили экспериментальным животным однократно внутрибрю-шинно в максимально переносимой дозе (МПД, 250 мг/кг). ИмГ-КСФ был получен путем конъюгации молекул негликозилированного цитокина с полиэти-ленгликолем (ПЭГ) молекулярной массы 400-1000 Да с помощью электронно-

лучевого синтеза (ООО «Саентифик фьючер менеджмент», г. Новосибирск). При определении показателей периферической крови препарат имГ-КСФ вводили в дозах 10, 30, 50, 100 и 150 мкг/кг/сут в двух режимах: перорально ежедневно с 1 по 10-е сут и подкожно - один раз в день с 1 по 5-е сут исследования. Изучение костномозгового кроветворения и механизмов регуляции гемо-поэза при цитостатической миелосупрессии осуществляли при подкожном введении препарата в дозе 100 мкг/кг. Исследование мобилизующих свойств имГ-КСФ проводили на интактных мышах при его подкожном и пероральном введении в дозе 100 мкг/кг. В качестве препарата сравнения использовали реком-бинантный человеческий (рч) Г-КСФ «Нейпоген» («Hoffman-La Roche Ltd», Швейцария), который вводили подкожно по схеме парентерального применения имГ-КСФ. Контрольным животным во всех сериях экспериментов в аналогичных условиях вводили эквивалентный объем физиологического раствора.

Показатели периферической крови и костного мозга определяли стандартными гематологическими методами [Гольдберг Е.Д. и др., 1992]. Подсчет костномозговых недифференцированных кроветворных предшественников (КОЕ-Н) и содержание мезенхимальных стволовых клеток (МСК) в костном мозге и периферической крови оценивали методом лимитирующих разведений при длительном культивировании клеточного материала в собственной модификации [Ventura GJ. е.а., 1990; In't Anker P.S. е.а., 2003; Зюзьков Г.Н. и др., 2005; Ды-гай A.M. и др., 2010]. Содержание кроветворных и стромальных клеток-предшественников (КОЕ-ГЭММ в костном мозге и КОЕ-ГМ, КОЕ-Г, КОЕ-Э, КОЕ-Ф в костном мозге и периферической крови) определяли методом клонирования In vitro в полувязкой культуральиой среде [Гольдберг Е.Д. и др., 1992]. Пролиферативную активность гемопоэтических прекурсоров определяли с помощью метода «клеточного самоубийства» путем поглощения гидроксимоче-вины в культуре ткани [Гольдберг Е.Д. и др., 1992]. Интенсивность созревания грануломоноцитарных клеток-предшественников оценивали по величине индекса созревания (отношение числа кластеров к количеству колоний, выросших в одной лунке) [Гольдберг Е.Д. и др., 1992]. Колониестимулирующую (КСА) активность кондиционных сред прилипающих и неприлипающих миелокарио-цитов, а также сыворотки крови тестировали микрометодом в 96-Луночных планшетах. При этом КСА выражали количеством выросших грануломоноцитарных колоний (на 105 миелокариоцитов) [Гольдберг Е.Д. и др., 1992]. Структурно-функциональную организацию костного мозга исследовали путем ферментативного выделения гемопоэтических островков (ГО) и последующей оценки их количественного и качественного состава [Crocker P.R., Gordon S., 1985; Гольдберг Е.Д. и др., 1992]. Изучение роли ТЬу1,2+-клеток в регуляции гемопоэза осуществляли с помощью культуральных методик, основанных на определении разницы уровней колониеобразования в культурах клеток неадге-зирующей фракции костного мозга, содержащих Thyl,2+- клетки и лишенных их с помощью моноклональных антител анти-ТЬу1,2+ ("Sigma", США) [Гольдберг Е.Д. и др., 1992]. Для изучения прямого влияния препарата на клетки-предшественники in vitro в культуру клеток костного мозга интактных животных добавляли имГ-КСФ в концентрациях 1,5 и 20 нг/мл.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

В ходе эксперимента было установлено, что однократное внутрибрюшин-ное введение циклофосфана в МПД приводило к закономерным изменениям показателей периферической крови [Гольдберг Е.Д. и др., 1999]. Падение ОКЛ в ранние сроки наблюдения (2-5 сут), сменялось нормализацией данного показателя на 7-е сут и последующим развитием лейкоцитоза на 10-е сут наблюдения. Аналогичная динамика имела место и со стороны содержания налочко- и сегментоядерных нейтрофилов: на 2-7-е и 2-5-е сут соответственно регистрировалось снижение количества указанных клеточных элементов, в дальнейшем имело место увеличение значений данных показателей относительно их фоновых величин. Динамика изменений содержания других морфологически идентифицируемых клеточных форм также соответствовала описанным ранее реакциям системы крови при введении циклофосфана [Гольдберг Е.Д. и др., 1999].

Скрининговыс эксперименты позволили показать, что подкожное пятикратное введение имГ-КСФ сопровождалось ускорением восстановления содержания палочко- и сегментоядерных иейтрофилов, при этом максимально выраженная стимуляция наблюдалась в группах 50, 100 и 150 мкг/кг/сут. В этом ряду наиболее выраженный эффект проявлялся у животных, получавших 100 мкг/кг/сут имГ-КСФ.

При пероральном введении иммобилизированного цитокина в дозах 10,30, 50, 100 и 150 мкг/кг/сут также отмечалось повышение содержания палочкоя-дерных нейтрофильных гранулоцитов в периферической крови мышей при ци-тостатическом воздействии. Наибольший стимулирующий эффект был выявлен в группе мышей, получавших 100 мкг/кг имГ-КСФ - до 1850 и 464 % от цито-статического контроля соответственно на 7-е и 10-е сут опыта.

Как видно из представленных данных имГ-КСФ независимо от пути введения проявляет гранулоцитопоэзстимулирующую активность при цитостати-ческой миелосупрессии. Наиболее выраженный и длительный эффект наблюдался при использовании имГ-КСФ в дозе 100 мкг/кг. Следует отметить, что увеличение содержания нейтрофильных гранулоцитов в периферической крови при парентеральном применении препарата превосходило таковое в случае назначения имГ-КСФ per os.

При анализе изменений показателей периферической крови при введении иммобилизированного и стандартного препаратов Г-КСФ подкожно существенных различий не наблюдалось.

Дальнейшим этапом работы явилось исследование влияния имГ-КСФ в дозе 100 мкг/кг на морфологическую картину костного мозга.

На первом этапе нами оценивалась глубина поражения гемопоэтической ткани в условиях введения алкилирующего агента. Было обнаружено, что цито-статик снижал общее количество миелокариоцитов (ОКК) на протяжении практически всего периода наблюдения (с минимальным значением данного показателя до 13,6 % от фона на 3-е сут опыта). В основе выявленных сдвигов со стороны ОКК лежало уменьшение содержания всех морфологически распознавае-

мых нуклеаров: гранулоцитов, лимфоцитов, эритрокариоцитов. Необходимо отметить, что скорость восстановления гранулоцитарного ростка опережала темпы регенерации эритро- и лимфопоэза, о чем свидетельствовало увеличение нейтрофильных гранулоцитов на 6-8-е сут опыта до уровня интактного контроля, при сохранении депрессии эритроидного и лимфоидного ростка до конца исследования.

Введение препарата имГ-КСФ на фоне моделирования цитостатической миелосупрессии сопровождалось более ранним и значительным возрастанием количества нейтрофильных гранулоцитов, чем в цитостатическом контроле. Так, повышение числа незрелых гранулоцитов отмечалось на 4, 5-е сут, а их зрелых форм - на 4, 5, 6, 7, 8-е сут наблюдения относительно группы мышей, получавших только циклофосфан. Менее выраженная стимуляция гранулоци-топоэза отмечалась при использовании имГ-КСФ per os. При данном способе введения статистически достоверный прирост незрелых форм гранулоцитов регистрировался на 4, 5-е сут, а зрелых нейтрофильных гранулоцитов - на 5, 12-е сут эксперимента.

Таким образом, имГ-КСФ на фоне моделирования цитостатической миелосупрессии оказывает стимулирующее действие на костномозговой гранулоци-топоэз, в большей степени выраженное при его подкожном введении.

Сравнительный анализ гранулоцитопоэзстимулирующих свойств иммоби-лизированного и неконъюгированного препаратов Г-КСФ, не выявил существенных различий в их активности. Дополнительным, но не менее важным свойством пегилированного Г-КСФ, выступает его способность повышать количество эритрокариоцитов в костном мозге. Стандартный аналог, напротив, усиливал депрессию эритрона [De Haan G. е.а., 1992; Negrin R.S. е.а., 1993; Карпова Г.В. и др., 2001].

Эффективное использование гемостимуляторов в клинической практике не возможно без понимания механизма их действия. В связи с этим были проведены исследования по изучению действия имГ-КСФ (при его подкожном введении) на различные пулы кроветворных клеток-предшественников.

Введение ЦФ приводило к повышению содержания в гемопоэтической ткани не только коммитированных предшественников (КОЕ-ГМ на 2-7-е сут), но и наиболее ранних родоначальных элементов КОЕ-Н (2,4-е сут) и КОЕ-ГЭММ (6-е сут) [Ventura G.J. е.а., 1990; Гольдберг Е.Д. и др., 1992; Дыгай А.М.и др., 2010] (рис. 1). Данное обстоятельство представляло собой естественную реакцию на воздействие чрезвычайного раздражителя (введение цито-статика), и явилось, очевидно, следствием активации стресс-реализующих систем организма [Гольдберг Е.Д. и др., 1997, 1999].

Курсовое введение имГ-КСФ сопровождалось увеличением функциональной активности кроветворных клеток-предшественников всех классов (рис. 1). Наиболее выраженная реакция отмечалась со стороны коммитированных прекурсоров грануломоноцитопоэза. Имело место возрастание числа КОЕ-ГМ на 2-е и 3-й сут эксперимента (до 176 и 138 % от контроля соответственно), и

х1(Г

ПЕЗ

хЮ

ЕЙ®

Рис.1. Динамика содержания КОЕ-Н (А), КОЕ-ГЭММ (Б), КОЕ-ГМ (В) и КОЕ-Г (Г) в костном мозге мышей линии СВА/СаЬас в условиях введения циклофосфана (1) в максимально переносимой дозе и применения стандартного (2) и иммобилизированного (3) препаратов Г-КСФ в дозах 100 мкг/кг/сут подкожно на фоне цитостатической миелосупрессии. По оси абсцисс - сроки исследования (сутки), по оси ординат -щ5 --------------------КОЕ-ГЭММ (на 106 миелокариоцитов), КОЕ-ГМ (на 105

содержание КОЕ-Н (на 10 миелокариоцитов)

миелокариоцитов), КОЕ-Г (на 10е миелокариоцитов). Межпунктирное пространство доверительного интервала значений показателя у интактных животных при Р<0,05.

область

КОЕ-Г - практически на протяжении всего периода наблюдения, с максимальным значением показателя на 5-е сут (до 2000 % от контроля). На примере гра-нуломоноцитарных прекурсоров было показано увеличение темпа деления (3-е сут) и скорости их созревания (5-е сут) по сравнению с аналогичными параметрами у мышей, получавших только циклофосфан.

Повышение функциональной активности полипотентных кроветворных клеток при назначении имГ-КСФ было менее выраженным. Так, со стороны КОЕ-Н данные изменения регистрировались лишь на 7-е сут (до 952 % от контроля), а - КОЕ-ГЭММ на 3, 4, 5-е сут (с максимумом до 195 % на 3-й сут опыта). Выявленные феномены, в сравнении с действием неконъюгированого Г-КСФ, представляли собой важную отличительную особенность эффектов имГ-КСФ, так как введение неконъюгированного цитокина приводило к активации не только наиболее «мобильного» компартмента популяции родоначальных клеток (КОЕ-ГМ, КОЕ-Г), но и к стимуляции недифференцированных мульти-потентных кроветворных элементов. Более того, влияние стандартного Г-КСФ в отношении коммитированных прекурсоров, особенно, унипотентного типа, было менее выражено, чем таковое иммобилизированной формы фактора роста (рис. 1). По всей видимости, стимуляция процессов кроветворения под влиянием имГ-КСФ осуществляется преимущественно за счет активации наиболее «срочных» механизмов компенсации в результате воздействия на «буферный отдел» регенераторного потенциала гемопоэтической ткани - коммитирован-ные предшественники. С нашей точки зрения, низкая вовлеченность элементов, определяющих «глубокий резерв» регенерации костного мозга - полипотент-ные кроветворные клетки, максимально снижает риск истощения данных элементов и вероятный «срыв» процессов адаптации в случае их недостаточности.

Согласно сведениям литературы, Г-КСФ оказывает гранулоцитопоэзсти-мулирующее действие, в большей мере при взаимодействии со специфическими высокоаффинными рецепторами, расположенными непосредственно на кроветворных клетках-предшественниках [Avalos B.R. е.а., 1990; Demetri G.D., Griffin J.D., 1991; Владимирская Е.Б., 2001]. Результаты исследований, проведенных в условиях in vitro, косвенно указывают на то, что имГ-КСФ обладает теми же свойствами.

Так, добавление стандартного препарата Г-КСФ в культуру ткани интакт-ного костного мозга в концентрациях 1, 5 и 20 нг/мл приводило к значительному увеличению выхода гранулоцитарных колоний, что возможно при росте ми-тотической активности кроветворных клеток:предшественников. В случае использования иммобилизированной формы цитокина в указанных концентрациях интенсивность колониеобразования была менее выражена. Однако имГ-КСФ значительно ускорял созревания коммитированных прекурсоров, по сравнению со стандартным препаратом Г-КСФ.

Таким образом, при цитостатической миелосупрессии влияние имГ-КСФ на гранулоцитарный росток заключается преимущественно в ускорении процессов созревания коммитированных предшественников, а не их деления.

Согласно современным представлениям, состояние пула клоногенных клеток, в том числе, пролиферативная активность и интенсивность диффсренци-ровки коммитированных предшественников, ограничение реакций стволовых кроветворных клеток на дальноранговые стимулы, определяется локальной контролирующей системой, представленной комплексом клеточных факторов, называемых «гемопоэзиндуцирующим микроокружением» (ГИМ) [Дыгай A.M., Клименко H.A., 1992; Натан Д.Г., Зифф К.А., 1994; Гольдберг Е.Д. и др., 1999].

Исследование влияния имГ-КСФ на состояние пула мезенхимальных предшественников, являющихся родоначальными клетками стромальных элементов ГИМ [Owen М., Friedenstein A.J., 1988; Bianco P. с.а., 2001; In't Anker P.S. e.a., 2003; Гольдберг Е.Д. и др., 2006; Чертков И.Л. и др., 2006], выявило повышение количества КОЕ-Ф в костном мозге (3-е сут), что свидетельствовало о высокой активности регенераторных процессов микроокружения кроветворной ткани при воздействии алкилирующего агента [Гольдберг Е.Д. и др., 1999]. Применение имГ-КСФ сопровождалось более выраженным увеличением содержания КОЕ-Ф в костном мозге на 2-е и 3-й сут, достигающим максимума в 246 % от контрольных значений на 2-е сут опыта (рис. 2). Действие препарата иммобилизированной формы цитокина на данный показатель существенно превосходило по своей активности таковое неконъюгированного аналога.

Рис. 2. Динамика содержания КОЕ-Ф (А) и уровней КСА (Б) кондиционных сред прилипающих клеток костного мозга мышей линии CBA/CaLac в условиях введения циклофосфана (1) и подкожного применения стандартного (2) и иммобилизированного (3) препарата Г-КСФ в дозе 100 мкг/кг/сут на фоне моделирования миелосупрессии. По оси абсцисс - сроки исследования (сутки), по оси ординат - А (2,5х105 миелокариоцитов), Б (на 105 мислокариоцитов). Затемненным символом обозначена достоверность различия показателя у интактных животных при Р <0,05; + - достоверность различия показателя от щпостатического контроля при Р<0,05.

Важная регуляторная роль принадлежит продуцируемым клетками ГИМ гуморальным гемопоэтичсским факторам - цитокинам [Gordon M.Y., 1988; Гольдберг Е.Д. и др., 1999]. Последние участвуют в управлении процессами

пролиферации и дифференцировки родоначальных элементов и являются наиболее мощными, среди гормоноподобных веществ, регуляторами гемопоэза [Натан Д.Г., Зифф К.А., 1994; Lau A.S. е.а., 1996; Гольдберг Е.Д. и др., 2000], суммарный эффект которых регистрируется в качестве колониестимулирующей активности (КСА) [Гольдберг Е.Д. и др., 1992]. Известно, что специфические фармакологические эффекты Г-КСФ, во многом, реализуются именно за счет изменения секреции гуморальных регуляторов стромальными клетками костного мозга [Воробьев А.И., 2002; Куртова A.B. и др., 2007].

В ходе эксперимента было выявлено значительное влияние имГ-КСФ на секреторную функцию адгезирующих элементов ГИМ: возрастание уровня КСА достигало 2159 % от контрольных значений на 2-е сут опыта (рис. 2).

По мнению ряда авторов, незрелые гемопоэтические клетки-предшественники расположены в ретикулярной строме, которая обеспечивает их пролиферацию и дифференцировку [Воробьев А.И., 2002; Куртова A.B. и др., 2007]. По мере созревания кроветворных предшественников меняется их позиция в строме и чувствительность к гуморальным факторам. С другой точки зрения, дифференциация СКК происходит в так называемых гемопоэтических островках (ГО), в состав которых входит стромальная клетка [Crocker P.R., Gordon S„ 1985; Gordon M.Y., 1988; Гольдберг Е.Д. и др., 1992; Науменко О.И., 1992; Blazsek I. е.а., 1995]. В связи с этим, было изучено влияние имГ-КСФ на структурно-функциональную организацию костного мозга (ГО) при введении циклофосфана. В цитостатическом контроле после нарушения процессов формирования ГО регистрировалось закономерное увеличение числа гранулоци-тарных клеточных ассоциаций (5, 7, 8-е сут). Применение препарата имГ-КСФ на фоне цитостатической миелосупрессии способствовало ускорению восстановления структурно-функциональной организации костного мозга, на что указывало повышение содержания гранулоцитарных ГО (4-е и 6-е сут опыта до 321 и 239 % по сравнению с группой цитостатического контроля соответственно). Действие пегилированного ростового фактора было сопоставимо по степени и срокам проявления эффектов стандартного препарата Г-КСФ.

Важная роль в регуляции гемопоэза принадлежит Т-лимфоцитам, представляющим собой мобильный компонент ГИМ. Их популяция легко изменяет свой качественный и количественный состав в гемопоэтической ткани и совместно с другими элементами микроокружения контролирует функциональную активность кроветворных прекурсоров [Маньков В.М., Петров Р.В., 2006]. Миграция Т-клеток в костный мозг, экспрессирующих на своей мембране антигены Thy 1,2, зачастую является пусковым механизмом стимуляции процессов кроветворения, в том числе при миелоингибирующих воздействиях [Гольдберг Е.Д. и др., 1983; Дыгай A.M., Шахов В.П., 1989]. Принимая во внимание указанное обстоятельство, было проведено исследование влияния препарата имГ-КСФ на способность неадгезирующих миелокариоцитов, несущих Thyl,2 антиген, стимулировать полипотентные и коммитированные кроветворные предшественники.

Цитостатик избирательно повышал способность ТЬу1,2+-клеток увеличивать выход КОЕ-ГЭММ в метилцеллюлозной среде (3, 6-е сут). Введение мышам имГ-КСФ сопровождалось более значительной стимуляцией полипотент-ных гемопоэтических клеток, на что указывает возрастание уровня образования КОЕ-ГЭММ в культуре неадгезирующих миелокариоцитов с Thyl,2+- клетками (3, 6-е сут). В этих условиях Thyl,2+- клетки повышали выход колоний грану-лоцитарного типа (6-е сут). Следует отметить, что выраженность эффектов Т-клеток в отношении кроветворных предшественников у имГ-КСФ была несколько ниже, чем у не модифицированного цитокина.

Согласно соврёменным представлениям важное значите в регуляции кроветворения, особенно при экстремальных, в том числе цитостатических, воздействиях играют гуморальные факторы сыворотки крови: гормоны, опиоид-ные пептиды, эйкозаноиды и другие эндогенные биологически активные вещества [Дыгай A.M., Шахов В.П., 1989; Lau A.S. е.а., 1996; Гольдберг Е.Д. и др., 1997]. Введение имГ-КСФ и стандартного препарата Г-КСФ на фоне развития цитостатической миелосупрессии не изменяло уровень КСА в сыворотке крови.

Таким образом, помимо прямого воздействия на кроветворные клетки-предшественники различных классов, механизмами реализации гемостимули-рующих эффектов имГ-КСФ является стимуляция процессов восстановления локальной системы регуляции гемопоэза в постцитостатическом периоде: увеличение содержания стромапьных клеток и продукция ими ростовых факторов, формирование ГО, повышение гемопоэтической активности Thyl,2+- клеток. Следует отметить, что активность данного препарата в отношении стромальных элементов микроокружения значительно превышает аналогичную у не модифицированного препарата Г-КСФ.

Препараты рекомбинантного Г-КСФ достаточно часто, в том числе и в практической медицине, используют для получения СК для дальнейшей ауто-логичной либо аллогенной трансплантации [Craig J.I.O. е.а., 1992; Filshie R.J., 2002; Znang Z., Li X., 2008; Дыгай A.M. и др., 2009]. Несомненными преимуществами такого подхода являются отсутствие процедуры хирургического забора костного мозга и возможность получения трансплантата в амбулаторных условиях. Кроме того, возможность многократного проведения процедуры с получением достаточно большого количества клеточного материала из периферической крови позволяет проводить с ним дополнительные манипуляции ex vivo (Т - клеточная деплеция, экспансия, активация эффекторных клеток), способствующие повышению эффективности трансплантации и снижению частоты осложнений (преодолению РТПХ, рецидивов и отторжения при аллогенной трансплантации) [Бекиш О.-Я.Л. и др., 1996; Ларин М.Ю. и др., 2005; Kumar L., 2007; Rasku М. е.а., 2008].

Реализация описанного пути использования Г-КСФ определяется способностью данного цитокина вызывать мобилизацию прогениторных элементов в периферическую кровь в результате активации нейтрофилов in situ и высвобождения матриксной металлопротеиназы- 4, 9, лактоферрина, эластазы, катепси-

на G и протеиназы [Семина О.В. и др., 2007; Furze R.C., Rankin S.M., 2008]. При этом в пределах костномозгового микроокружения происходит деградация SDF-1, основного фактора миграции и хоминга CK [Chakrabarti S., Patel K.D., 2005; Nervi В. e.a., 2006; Jin F. e.a., 2008], а также адгезивных молекул [Carion А. е.а., 2002; Papayaruiopoulou Т., 2004], и, как следствие, уменьшение связывающей родоначальные клетки способности кроветворной ткани.

В настоящее время активно разрабатывается подход проведения клеточной терапии, основанный на принципе фармакологической стимуляции эндогенных стволовых клеток путем подражания деятельности естественных регуляторных систем [Гольдберг Е.Д. и др., 2005, 2007; Дыгай A.M., Зюзьков Г.Н., 2009]. В эксперименте на различных моделях патологических состояний показана высокая эффективность Г-КСФ, обусловленная его способностью вызывать выход CK в кровь, дальнейший хоминг и реализацию ростового потенциала в органах-мишенях [Adachi Y. e.a., 2004; Arai M. e.a., 2006; Timper К. 2006; Minnerup J. e.a., 2008; Kirsch E. e.a., 2008; Gol'dberg E.D. e.a., 2008; Гольдберг Е.Д. и др., 2005, 2007,2008].

В связи с вышеизложенным, на интактных мышах было проведено сравнительное исследование мобилизующих стволовые клетки свойств иммобилизи-рованного Г-КСФ в сравнении со стандартным препаратом Г-КСФ. При этом изучалось не только содержание КОЕ-ГМ, КОЕ-Э, КОЕ-Ф и МСК в периферической крови, но и их количество в костном мозге, как основной «ткани-депо», а эффективность имГ-ГСФ оценивалась при его парентеральном и пероральном введении.

В ходе эксперимента было установлено, что у контрольных животных (физиологический раствор) отмечалось незначительное увеличение количества КОЕ-ГМ (10-е сут), КОЕ-Э (7, 10-е) и КОЕ-Ф (7-е сут) в костном мозге и в периферической крови.

Введение препаратов Г-КСФ сопровождалось закономерным увеличением содержания грануломоноцитарных прекурсоров в гемопоэтической ткани. Так, при использовании неконъюгированного Г-КСФ и при внутрижелудочном применении имГ-КСФ отмечалось возрастание количества КОЕ-ГМ на 3, 5, 7-е сут исследования. Введение конъюгированного Г-КСФ подкожно приводило к более длительному (3, 7, 10-е сут) и максимально выраженному увеличению числа кроветворных клеток в костном мозге до 372 % на 3-е сут опыта от аналогичного параметра у контрольных мышей.

Во всех опытных группах имело место развитие феномена мобилизации КОЕ-ГМ, на что указывало увеличение числа предшественников в периферической крови. При парентеральном способе введения развитие феномена наблюдалось уже на 2-е сут опыта, и сохранялась на 4, 5-е сут при использовании стандартного Г-КСФ и на 4, 5, 10-е сут после применения конъюгированной формы Г-КСФ. При применении препарата имГ-КСФ внутрижелудочно мобилизация КОЕ-ГМ развивалась на 5-е сут (рис. 3).

Несколько иные эффекты Г-КСФ наблюдались в отношении эритроидных

Рис.3. Динамика содержания КОЕ-ГМ (А), КОЕ-Э (Б), МСК (В) и КОЕ-Ф (Г) в периферической крови мышей линии СВА/СаЬас в условиях введения физиологического раствора (1), стандартного препарата Г-КСФ подкожно в дозе 100 мкг/кг/сут (2), иммобилизированного препарата Г-КСФ подкожно (3) и перораяьно (4) в дозе 100 мхг/кг/сут. По оси абсцисс - сроки исследования (сутки), по оси ординат -содержание КОЕ-ГМ (на 105 мононуклеаров), КОЕ-Э (на 106 мононуклеаров), МСК (на 105 мононуклеаров), КОЕ-Ф (на 106 мононуклеаров). Межпунктирное пространство - область доверительного интервала значений показателя у интактных животных при Р<0,05.

прекурсоров. Во всех опытных группах отмечалось снижение их количества в костном мозге относительно контрольных значений. В то же время регистрировалась значительная стимуляция инфлюкса КОЕ-Э в кровь. Наибольшее количество циркулирующих КОЕ-Э было выявлено при использовании стандартного Г-КСФ на 2, 3, 4-е сут эксперимента. При парентеральном введении имГ-КСФ накопление эритроидных предшественников в крови имело место на 5-е сут опыта (рис. 3).

Во многом схожие изменения характерны для стромальных клеток, содержащих в своем составе, как коммитированные элементы - КОЕ-Ф, так и мезен-химальные CK (МСК) [Owen М., Friedenstein A.J., 1988; Bianco P. е.а., 2001; Сухих Г.Т. и др., 2002; Гольдберг Е.Д. и др., 2006; Кругляков П.В. и др., 2006]. Введение неконъюгированного и иммобилизированного препаратов Г-КСФ (в обоих режимах) животным приводило к увеличению числа КОЕ-Ф в гемопо-этической ткани на 3, 4, 7-е и 4, 7-е сут опыта соответственно. При приеме пе-гилированного ростового фактора внутрь эффект был менее выраженный (7-е сут) по сравнению с парентеральным назначением стандартного Г-КСФ. Указанные изменения содержания КОЕ-Ф в костном мозге сопровождались усилением их выхода в периферическую кровь. Наиболее существенная реакция отмечалась в группе животных, получавших имГ-КСФ подкожно, менее значимая - у мышей при внутрижелудочном применении иммобилизированной формы цитокина (рис. 3).

Изучение содержания истинных родоначапьных элементов - МСК в гемо-поэтической ткани, подтвердило сведения об их низкой способности реагировать на воздействия гуморальных факторов [Гольдберг Е.Д. и др., 1997, 2006], так как назначение исследуемых препаратов не влияло на количество костномозговых МСК. Вместе с тем парентеральное введение различных форм Г-КСФ сопровождалось увеличением количества МСК в периферической крови, которая была более выраженной (как и во всех предыдущих случаях) при введении цитокина, связанного с молекулой низкомолекулярного полимера, и реализо-вывалась, по всей видимости, опосредованно через активацию элементов микроокружения [Гольдберг Е.Д. и др., 2007] (рис. 3).

Таким образом, в условиях оптимальной жизнедеятельности мобилизующие свойства имГ-КСФ проявлялись в отношении прогениторных клеток (МСК, КОЕ-Ф, КОЕ-ГМ, КОЕ-Э) в большей степени, чем у стандартного препарата Г-КСФ.

В целом, полученные результаты свидетельствуют о выраженной грануло-цитопоэзстимулирующей и мобилизующей стволовые клетки активности имГ-КСФ, в ряде случаев превосходящей таковые у одного из наиболее эффективных на сегодняшний день гемостимуляторов и средств, вызывающих выход CK в кровь, - рчГ-КСФ (рис. 4). Механизмами реализации гранулоцитопоэзстиму-лирующих эффектов являются активация не только гемопоэтических прекурсоров различных классов, но и ускорение репарации ГИМ: пролиферативная активность стромальных клеток и продукция ими ростовых факторов, формиро-

Нейро - эндокринная система (система КСА)

Костный

мозг

Иммобил

Станд

артныи КСФ „

Периферическая т< кровь

@ •

зированный КСФ

Рис. 4. Механизмы гранулоцитопоэзстимулирующего действия иммобилизированного Г-КСФ.

КСА - колониестимулирующая активность, ПСКК - полипотентная стволовая кроветворная клетка, КОЕ-Г, КОЕ-ГМ - колониеобразующая единица гранулоцитарная, грануломоноци-тарная.

Стрелками указано стимулирующее действие препаратов на отдельные элементы системы крови. Пунктирной линией отражено ослабление, а толстыми линиями - усиление специфического влияния Г-КСФ после его иммобилизации.

вание ГО, влияние Thyl,2+- клеток на КОЕ-ГЭММ и КОЕ-Г. Значение опосредованного (через элементы ГИМ) влияния имГ-КСФ на процесс восстановления клеточности костного мозга более существенно, чем у не модифицированного аналога, а непосредственное действие на кроветворные клетки проявляется в большей степени в ускорении созревания коммитированных предшественников, что предотвращает возможность истощения «глубокого резерва» регенерации - полипотентных стволовых клеток [Дыгай A.M., Шахов В.П., 1989; Гольдберг Е.Д. и др., 2006].

В совокупности, выявленные фармакологические (гемопоэзстимулирую-щие, мобилизующие) свойства имГ-КСФ позволяют рассматривать данный препарат как высокоэффективный и перспективный. Кроме того, важной в плане минимизации рисков развития осложнений и побочных эффектов препаратов на основе рчГ-КСФ [Vial Т., Descotes J., 1995; de Wit R. e.a., 1996; Glaspy J.A., 2003; Белогурова М.Б., 2003], выглядит возможность альтернативного -перорального пути введения препарата, особенно, при применении данного агента в регенеративной медицине, когда предполагается длительное многократно повторяющееся его введение с целью мобилизации прогениторных элементов из «гканей-депо» в кровь [Гольдберг Е.Д. и др., 2005,2007; Дыгай A.M., Зюзьков Г.Н., 2009; Lei Y. e.a., 2009].

ВЫВОДЫ

1. Введение иммобилизированного с помощью нанотехнологии электронно-лучевого синтеза Г-КСФ на фоне моделирования цитостатической мие-лосупрессии приводит к стимуляции процессов гранулоцитопоэза, проявляющейся в увеличении количества незрелых и зрелых нейтрофильных гранулоци-тов в костном мозге и палочко- и сегментоядерных нейтрофилов в периферической крови.

2. Ускорение регенерации кроветворной ткани под влиянием иммобилизированного Г-КСФ обусловлено увеличением количества ранних (КОЕ-Н, КОЕ-ГЭММ) и повышением функциональной активности (интенсивности процессов пролиферации и дифференцировки) коммитированных (КОЕ-ГМ, КОЕ-Г) гемопоэтических клеток-предшественников.

3. Механизмами, лежащими в основе восстановления процессов кроветворения под влиянием имГ-КСФ при цитостатической миелосупрессии, являются прямое действие препарата на гемопоэтические прекурсоры, стимуляция мезенхимальных клеток-предшественников ГИМ, усиление продукции коло-ниестимулирующей активности адгезирующими миелокариоцитами и повышение фидерной способности Thy 1,2+-клеток в отношении родоначальных элементов крови.

тивации недифференцированных кроветворных клеток, определяемая фидерными свойствами стромальных элементов ГИМ и усилением прямого детерминирующего созревание прекурсоров влияния препарата.

5. Введение имГ-КСФ интактным животным сопровождается выходом прогениторных клеток различных классов (МСК, КОЕ-Ф, КОЕ-ГМ, КОЕ-Э) в периферическую кровь на фоне повышения содержания грануломоноцитарных и мезенхимальных клеток-предшественников в костном мозге. При этом мобилизующие свойства данного препарата превосходят по выраженности и продолжительности эффектов аналогичную активность не модифицированного Г-КСФ.

6. Иммобилизированный электронно-лучевым воздействием на поли-этиленгликоле Г-КСФ обладает выраженной специфической гранулоцитопоэз-стимулирующей и мобилизующей прогениторные элементы активностями при пероральном пути введения.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Теория регуляции кроветворения и создание на ее основе новых препаратов для терапии патологии системы крови / Гольдберг Н.Д., Дыгай A.M., Жданов В.В., Зюзьков Г.Н., Гурьянцева Л.А., Першина О.В., Симанина Е.В., Скурихин Е.Г., Ставрова J1.A., Удут Е.В., Минакова М.Ю., Хричкова Т.Ю., Фирсова Т.В. // Бюл. эксперим. биол. и мед. - 2008. - Приложение 2. - С. 6-13.

2. Влияние иммобилизированного гранулоцитарного колониестимули-рующего фактора на грануломоиоцитопоэз в условиях экспериментальной мие-лосупрессии / Жданов В.В., Ермакова H.H., Симанина Е.В., Ставрова Л.А., Фирсова Т.В., Хмелевская Е.С., Верещагин Е.И., Мадонов П.Г., Кинигг Д.Н. // Росс, биотерапевт, журнал. - 2009. - № 2. - С. 8-9.

3. Влияние трансплантации мононуклеаров периферической крови, полученных с использованием гранулоцитарного колониестимулирующего фактора и гиалуронидазы, на регенерацию кроветворной ткани при миелосупрессии / Дыгай A.M., Зюзьков Г.Н., Жданов В.В.. Симанина Е.В., Ставрова Л.А., Удут Е.В., Хричкова Т.Ю., Минакова М.Ю., Ермакова H.H., Фирсова Т В. // Клет. технол. в биол. имед.-2009.-№ З.-С. 136-141.

4. Гемостимулирующая активность препарата иммобилизированного гранулоцитарного колониестимулирующего фактора / Андреева Т.В., Зюзьков Г.Н. //Сибирский онкол. журнал. - 2009. - Приложение № 1.-С. 15-16.

5. Действие гранулоцитарного колониестимулирующего фактора на подавленный цитостатиком гранулоцитопоэз в условиях истощения депо катехо-ламинов / Дыгай A.M., Скурихин Е.Г., Першина О.В., Симанина Е.В., Минакова М.Ю., Ермакова H.H., Фирсова Т.В., Хмелевская Е.С. // Бюл. эксперим. биол. и мед. - 2009. - № 5. - С. 540-544.

6. Действие гранулоцитарного колониестимулирующего фактора, иммобилизированного на полиэтиленгликоле с помощью нанотехнологии электронно-лучевого синтеза на кроветворные предшественники различных классов /

Андреева Т.В., Хмелевская Е.С. // Сборник тезисов докладов участников Второго международного конкурса научных работ молодых ученых в области на-нотехнологий. -2009. - С. 843-844.

7. Механизмы гранулоцитопоэзстимулирующей активности иммобилизи-рованного гранулоцитарного колониестимулирующего фактора при цитостати-ческой миелосупресси / Дыгай A.M., Верещагин Е.И., Жданов В.В., Зюзьков Г.Н., Ермакова H.H., Мадонов П.Г., Миронншченко Л.А., Минакова М.Ю., Си-манииа Е.В., Сгаврова Л.А., Удут Е.В., Фирсова Т.В., Хричкова Т.Ю. // Бюл. эксперим. биол. и мед. - 2009. - № 7. - С. 60-64.

8. Мобилизация прогениторных клеток в кровь с помощью иммобилизи-рованного гранулоцитарного колониестимулирующего фактора / Дыгай A.M., Верещагин Е.И., Зюзьков Г.Н., Жданов В.В., Мадонов П.Г., Симанина Е.В., Ставрова Л.А., Удут Е.В., Хричкова Т.Ю., Мирошниченко Л.А., Минакова М.Ю., Ермакова H.H., Фирсова Т.В. // Клет. технол. в биол. и мед. - 2009. - № 2.-С. 63-66.

9. Регуляция функций прогениторных клеток с помощью гиалуронидазы / Дыгай А.М., Зюзьков Г.Н., Жданов В.В., Верещагин Е.И., Удут Е.В., Хричкова Т.Ю., Симанина Е.В., Сгаврова Л.А., Андреева Т.В., Минакова М.Ю., Мадонов П.Г., Киншт Д.Н. // Вестник РАМН. - 2009. - № 11. - С. 6-9.

10. Действие иммобилизированного гранулоцитарного колониестимулирующего фактора на кроветворные предшественники разных классов при цито-статической миелосупрессии / Дыгай A.M., Скурихин Е.Г., Андреева Т.В., Мадонов П.Г., Верещагин Е.И., Киншт Д.Н., Першина О.В., Хмелевская Е.С. // Бюл. эксперим. биол. и мед. -2010. -№ 3. - С. 255-261.

11. Нейропротекторные эффекты иммобилизированного гранулоцитарного колониестимулирующего фактора и гиалуронидазы / Андреева Т.В., Верещагин Е.И., Ермакова H.H., Мадонов П.Г., Першина О.В., Скурихин Е.Г., Зюзьков Г.Н., Минакова М.Ю., Хмелевская Е.С., Дыгай A.M. // Бюл. эксперим. биол. и мед. - 2010-№ 4. - С. 405-405.

12. Роль кроветворных предшественников ранних классов в механизмах действия гранулоцитарного колониестимулирующего фактора на кроветворение при цитостатичсской миелосупрессии / Дыгай A.M., Скурихин Е.Г., Першина О.В., Андреева Т.В., Хмелевская Е.С., Минакова М.Ю. // Бюл. эксперим. биол. и мед. - 2010 - № 4. - С. 400-405.

ПАТЕНТЫ

1. Патент (RU) № 2364398 от 20.08.2009 г. «Способ лечения депрессии эритроидного ростка кроветворения при цитостатической миелосупрессии» / Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., Першина О.В., Скурихин Е.Г., Ермакова H.H., Минакова М.Ю., Фирсова Т.В.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ГИМ - гемопоэзиндуцирующее микроокружение Г-КСФ - гранулоцитарный колониестимулирующий фактор ГО — гемопоэтический островок

имГ-КСФ - иммобилизированный гранулоцитарный колониестимулирующий фактор

КОЕ-Г, -ГМ, -ГЭММ, -М, -Н, -Ф - колониеобразующая единица гранулоцитар-

ная, грануломоноцитарная, гранулоцито-эритроидно-макрофагально-

мегакариоцитарная, макрофагальная, недифференцированная, фибробластов

КСА - колониестимулирующая активность

ОКК - общее количество кариоцитов

ПЭГ - полиэтиленгликоль

РТПХ - реакция трансплантат против хозяина

рчГ-КСФ — рекомбинантный человеческий гранулоцитарный колониестимулирующий фактор

СК (ПСКК, МСК) - стволовые клетки (полипотентные, мезенхимальные) ЦФ - циклофосфан

Отпечатано в ООО «НИП» ул. Советская, 47, «Штемпельная Мастерская» тел.: (3822) 53-14-70,52-83-10 Заказ № 633-83, Тираж 100 экз.

Оглавление диссертации Андреева, Татьяна Викторовна :: 2010 :: Томск

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. РОЛЬ ГЕМОПОЭЗИНДУЦИРУЮЩЕГО МИКРООКРУЖЕНИЯ В РЕГУЛЯЦИИ КРОВЕТВОРЕНИЯ

1.2. ГРАНУЛОЦИТАРНЫЙ КОЛОНИЕСТИМУЛИРУЮ-ЩИЙ ФАКТОР: СТРУКТУРА, БИОЛОГИЧЕСКАЯ РОЛЬ И ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА

1.3. ПЕРСПЕКТИВЫ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ НАНОТЕХНО-ЛОГИЙ В ФАРМАКОЛОГИИ

1.4. ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ, КОНЪЮГИРОВАННЫХ С ПОЛИМЕРНЫМИ НОСИТЕЛЯМИ

Введение диссертации по теме "Фармакология, клиническая фармакология", Андреева, Татьяна Викторовна, автореферат

Актуальность проблемы. Миелосупрессивные состояния, развивающиеся в большинстве случаев как осложнения цитостатических методов лечения [Гершанович M.JL, Филов В.А., Акимов М.А. и др., 1999; Владимирская Е.Б., 2001; Bhatt V., Saleem А., 2004; Marangolo М., Bengala С., Conte P.F. e.a., 2006], требуют применения гемостимулирующих средств для поддержания качества жизни пациентов и обеспечения переносимости терапии основного заболевания [Molineux G., 2004; Переводчикова Н.И., 2005; Greil R., Psenak О., Roila F., 2008]. Достижения экспериментальной и клинической гематологии последних десятилетий легли в основу разработки высокоэффективных гемостимуляторов - аналогов эндогенных гемопоэтинов (колоние-стимулирующие факторы, эритропоэтин, интерлейкины), что позволило значительно продвинуться в терапии лейкопений и анемий различного генеза [Metcalf D., 1989; Ganser A., Seipelt G., Hoelzer D., 1991; Hill A.D., Naama H.A., Calvano S.E. e.a., 1995; Волкова M.A., 1998; Lee D.L., Sharif I., Hodihali S. e.a., 2008].

Широкое распространение для коррекции нарушений гранулоцитопоэза получили препараты гранулоцитарного колониестимулирующего фактора (Г-КСФ) [Asano S., 1991; Demetri G.D., Griffin J.D., 1991; Zeidler С., Wright D.E., Cheshier S.H., Wagers A.J. e.a., 2001; Levesque J.-P., Hendy J., Takamatsy Y. e.a., 2003]. На сегодняшний день существуют неконъюгированные (гликози-лированный и негликозилированный Г-КСФ) [Hoglund М., 1998; Bonig Н., Silberman S., Weller S. e.a., 2001] и пегилированная химическим путем формы данного средства [Molineux G., 2004; Frampton J.E., Keating G.M., 2005; Rajan R.S., Li Т., Aras M. e.a., 2006]. Практическое применение неконъюгированно-го Г-КСФ в значительной степени лимитировано токсичностью и достаточно высокой частотой развития нежелательных побочных эффектов [Vial Т., Descotes J., 1995; de Wit R., Verweij J., Bontenbal M. e.a., 1996; Glaspy J.A., 2003; Белогурова М.Б., 2003]. В отличие от этого пегилированный Г-КСФ представляет собой практически нетоксичное соединение и имеет высокую физическую стабильность, растворимость и период полувыведения из организма [Delgado С., Francis G.E., Fisher D., 1992; Curran M.P., Goa K.L., 2002;

Zamboni W.C., 2004; Hamidi M., Azadi A., Rafiei P., 2006; Piedmonte D.M.,

Treuheit M.J., 2008]. Однако технология его получения (химический синтез) является многостадийной, сложной с использованием высокотоксичных соединений, требующих в последующем очистки готового продукта [Hamidi М., Azadi A., Rafiei Р., 2006].

Вместе с тем существует технология/нанотехнология электроннолучевого (радиационного) синтеза [Vereschagin E.I., Khan D.H., Troitsky A.W. e.a., 2001], позволяющая получать низкоиммуногенные и малотоксичные фармакологические средства белковой природы [Дыгай A.M., Артамонов А.В., Верещагин Е.И., Мадонов П.Г., 2009]. Создаваемые с помощью ионизирующей радиации иммобилизированные вещества, помимо указанных выше преимуществ, оказываются в значительной степени защищенными от воздействия протеолитических ферментов, что делает возможным их использование per os [Дыгай A.M., Верещагин Е.И., Жданов В.В., 2009; Дыгай A.M., Зюзьков Г.Н., 2009].

В связи с вышеизложенным, а также с учетом сведений о высокой эффективности и перспективности использования Г-КСФ в качестве средства для регенеративной медицины, определяемых его способностью вызывать миграцию костномозговых мультипотентных стволовых клеток (СК) в пораженные органы [Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., Жданов В.В., 2005, 2007; Дыгай A.M., Зюзьков Г.Н., 2009; Lei Y., Liu Z., Han Q. e.a., 2009], представляется весьма актуальным изучение фармакологических свойств препарата, созданного на основе данного цитокина с помощью электронно-лучевого синтеза.

Цель исследования. Изучить гемостимулирующую и мобилизующую стволовые клетки активности иммобилизированного гранулоцитарного ко-лониестимулирующего фактора и вскрыть механизмы его действия.

Задачи исследования:

1. Изучить влияние иммобилизированного (им) Г-КСФ на процессы восстановления костномозгового гемопоэза при цитостатической миелосупрес-сии.

2. Оценить состояние различных пулов кроветворных клеток-предшественников при введении имГ-КСФ.

4. Исследовать мобилизующие свойства препарата в отношении кроветворных и мезенхимальных прогениторных клеток.

5. Определить возможность и эффективность перорального использования имГ-КСФ.

Научная новизна работы. Впервые изучены гемостимулирующая и мобилизующая стволовые клетки активности иммобилизированного на поли-этиленгликоле Г-КСФ с помощью электронно-лучевого синтеза. Показано, что в основе стимуляции подавленного циклофосфаном гранулоцитарного ростка кроветворения под влиянием имГ-КСФ при его подкожном введении лежит повышение содержания полипотентных (КОЕ-Н, КОЕ-ГЭММ) и ком-митированных (КОЕ-ГМ, КОЕ-Г) гемопоэтических клеток-предшественников. Действие препарата определяется не только прямым влиянием на кроветворные прекурсоры, но и стимуляцией функциональной активности гемопоэзиндуцирующего микроокружения: увеличение количества мезенхимальных клеток-предшественников и продукции ими гемопо-этинов, повышение фидерной способности Thyl,2+- клеток в отношении ро-доначальных элементов крови. Выявлены мобилизующие прогениторные клетки свойства имГ-КСФ. Обнаружены особенности механизмов действия иммобилизированной формы Г-КСФ (по сравнению с не модифицированным ростовым фактором), заключающиеся в более выраженной активации коммитированных предшественников на фоне менее значимой стимуляции полипо-тентных кроветворных предшественников. Впервые установлена принципиальная возможность эффективного перорального использования препарата, созданного на основе Г-КСФ.

По материалам работы подготовлен отчет в Федеральную службу по надзору в сфере здравоохранения и социального развития о специфической активности имГ-КСФ для получения разрешения на его клинические исследования в качестве гемостимул ирующего средства. Кроме того, полученные результаты о мобилизующих свойствах имГ-КСФ в отношении стволовых клеток могут явиться основой для разработки неинвазивной стратегии клеточной терапии дегенеративных заболеваний, основанной на принципе фармакологической модуляции функций эндогенных прогениторных элементов.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 12 работ, в том числе 8 статей в ведущих рецензируемых научных журналах и изданиях, рекомендованных ВАК Минобрнауки РФ. Получен 1 патент (RU) на изобретение и подано 2 заявки (RU) на изобретения: «Способ определения эффективности гемостимуляторов при цитостатической миелосупрессии» (заявка № 2009125095, приоритет от 30.06.2009 г.), «Способ стимуляции стволовых кроветворных клеток при цитостатической миелосупрессии» (заявка № 2009144320, приоритет от 20.10.2009 г.).

Заключение диссертационного исследования на тему "Фармакологические свойства иммобилизированного гранулоцитарного колониестимулирующего фактора"

выводы

1. Введение иммобилизированного с помощью нанотехнологии электронно-лучевого синтеза Г-КСФ на фоне моделирования цитостатической миелосупрессии приводит к стимуляции процессов гранулоцитопоэза, проявляющейся в увеличении количества незрелых и зрелых нейтрофильных грануло-цитов в костном мозге и палочко- и сегментоядерных нейтрофилов в периферической крови.

3. Механизмами, лежащими в основе восстановления процессов кроветворения под влиянием имГ-КСФ при цитостатической миелосупрессии, являются прямое действие препарата на гемопоэтические прекурсоры, стимуляция мезенхимальных клеток-предшественников ГИМ, усиление продукции колониестимулирующей активности адгезирующими миелокариоцитами и повышение фидерной способности Thyl,2+- клеток в отношении родоначаль-ных элементов крови.

4. Гранулоцитопоэзстимулирующая активность иммобилизированной формы Г-КСФ сопоставима с таковой у ее неконъюгированного аналога. При этом особенностью механизмов действия имГ-КСФ является более выраженная стимуляция коммитированных предшественников на фоне менее значимой активации недифференцированных кроветворных клеток, определяемая фидерными свойствами стромальных элементов ГИМ и усилением прямого детерминирующего созревание прекурсоров влияния препарата.

5. Введение имГ-КСФ интактным животным сопровождается выходом прогениторных клеток различных классов (МСК, КОЕ-Ф, КОЕ-ГМ, КОЕ-Э) в периферическую кровь на фоне повышения содержания грануломоноцитар-ных и мезенхимальных клеток-предшественников в костном мозге. При этом мобилизующие свойства данного препарата превосходят по выраженности и продолжительности эффектов аналогичную активность не модифицированного Г-КСФ.

6. Иммобилизированный электронно-лучевым воздействием на полиэти-ленгликоле Г-КСФ обладает выраженной специфической гранулоцитопоэз-стимулирующей и мобилизующей прогениторные элементы активностями при пероральном пути введения.

1.5. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Заболевания системы крови, проявляющиеся миелосупрессией, а также угнетение гемопоэза при проведении лучевой и цитостатической терапии представляют собой актуальную проблему современной гематологии и онкологии.

При этом известно, что управление процессами кроветворения осуществляется тесным взаимодействием дистантных и локальных конторолирую-щих механизмов. Причем, важная роль в регуляции гемопоэза принадлежит гуморальным ростовым факторам сыворотки крови и цитокинам, продуцируемым клеточными элементами ГИМ.

Указанные теоретические данные легли в основу разработки ряда фармакологических средств - аналогов эндогенных регуляторов гемопоэза. Одними из наиболее изученных и часто используемых в клинике для коррекции нарушений гранулоцитопоэза, а также для получения трансплантационного материала из периферической крови, обогащенного стволовыми клетками, являются препараты рекомбинантного человеческого гранулоцитарного ко-лониестимулирующего фактора (Г-КСФ). На сегодняшний день существуют неконъюгированные (гликозилированный и негликозилированный Г-КСФ) и пегилированная химическим путем формы данного средства. При этом практическое применение неконъюгированного Г-КСФ в значительной степени лимитировано его токсичностью и достаточно высокой частотой развития побочных эффектов и осложнений. Процесс пегилирования Г-КСФ сопровождается снижением иммуногенности данного белка, повышением его стабильности и увеличением периода полувыведения из организма. Однако технология химического синтеза ПЭГ-Г-КСФ, с помощью которой производят пегфилграстим, является многостадийным и сложным процессом с использованием высокотоксичных соединений, требующих применения различных методов очистки.

В то же время существует нанотехнология электронно-лучевого (радиационного) синтеза, которая также как и технология химического синтеза, позволяет получать максимально безопасные низкоиммуногенные и практически нетоксичные фармакологические средства, представляющие собой соединения белковой природы, конъюгированные с низкомолекулярными носителями. Кроме того, полученные с помощью ионизирующей радиации вещества оказываются в значительной степени защищенными от воздействия протеолитических ферментов, что делает возможным их использование per os. Вместе с тем известно, что процесс манипуляции разнородными субстанциями на молекулярном уровне с использованием физических факторов, обладающих высокой энергией, может сопровождаться существенными изменениями стереохимической структуры исходных веществ и зачастую приводить к непредсказуемой модификации их свойств.

В связи с вышеизложенным весьма интересным и важным представляется изучение гемостимулирующей и мобилизующей прогениторные клетки активностей препарата Г-КСФ, иммобилизированного с помощью нанотех-нологии электрон но-лучевого синтеза на низкомолекулярном полиэтиленг-ликоле. При этом исследование мобилизующих свойств данного соединения может послужить основой дальнейшего развития стратегии клеточной терапии дегенеративных заболеваний, основанной на принципе фармакологической стимуляции эндогенных стволовых клеток путем подражания деятельности естественных регуляторных систем, и разработки новых средств для регенеративной медицины.

ГЛАВА 2

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Эксперименты проведены на 874 мышах-самцах линии CBA/CaLac в возрасте 2-2,5 месяцев, массой 18-20 г. Животные 1 категории (конвенциональные линейные мыши) получены из коллекционного фонда лаборатории экспериментального биологического моделирования института фармакологии СО РАМН (сертификат имеется).

С целью исключения сезонных колебаний изучаемых показателей все эксперименты были проведены в осенне-зимний период. До начала исследования экспериментальных животных выдерживали в течение недели на обычном пищевом режиме по 15-20 особей в пластиковых клетках. Мышей умерщвляли методом дислокации шейных позвонков под эфирным наркозом.

Распределение животных по сериям экспериментов в соответствии с поставленными задачами, сроки забора материала для исследований в каждой серии отображено в таблице 1.

Исследование гемопоэзстимулирующих эффектов препарата иммобили-зированного гранулоцитарного колониестимулирующего фактора (имГ-КСФ) (ООО «Саентифик фьючер менеджмент», г. Новосибирск) и механизмов их развития проводили на модели цитостатической миелосупрессии, а мобилизующие стволовые клетки свойства препарата изучали на интактных живот» ных.

Цитостатическую миелосупрессию моделировали однократным внутри-брюшинным введением циклофосфана (Циклофосфан-Лэнс, ЗАО «Веро-фарм», г. Москва) в максимально переносимой дозе, составившей по результатам пробит-анализа 250 мг/кг. Препарат непосредственно перед использованием растворяли в стерильном физиологическом растворе.

Препарат иммобилизированного гранулоцитарного колониестимулирующего фактора является негликозилированным Г-КСФ, молекулы которого конъюгированы с полиэтиленгликолем (ПЭГ) молекулярной массы

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2010 года, Андреева, Татьяна Викторовна

1. Андреев С.М., Бабахин А.А. Анализ иммунологической активности фул-лерена // Сборник тезисов докладов научно-технологических секций. Москва, 2008. - С. 88-89.

2. Балицкий К.П., Шмалько Ю.П. Стресс и метастазирование злокачественных опухолей. Киев, 1987. - 248 с.

3. Бекиш О.-Я.Л., Хулуп Г.Я., Генералов И.И., Виленский Г.М. Современные тенденции профилактики реакции «трансплантат против хозяина» // Мед. Новости. 1996. - № 6. - С. 14-18.

4. Белогурова М.Б. Клиническое использование гемопоэтических ростовых факторов // Практическая онкология. 2003. - Т. 4, № 3. - С. 183-190.

5. Верещагин Е.И., Плотников М.Б., Любарский М.С. и др. Тромбовазим в терапии сердечно-сосудистых заболеваний. Новосибирск, 2007. - 110 с.

6. Владимирская Е.Б. Биологические основы противоопухолевой терапии. -М.: Агат-Мед., 2001. 110 с.

7. Волкова М.А. Гранулоцитарный колониестимулирующий фактор грано-цит и его клиническое применение // Тер. архив. 1998. - № 4. - С. 80-84.

8. Гершанович М.Л. Осложнения при химио- и гормонотерапии злокачественных опухолей. М: Медицина, 1982. - 224 с.

9. Гланц С. Медико-биологическая статистика. Пер. с англ. М.: Практика, 1998.-459 с.

10. Гмурман В.Е. Теория вероятностей и математическая статистика: чеб. Пособие для вузов. М: Высш. шк., 2002. - 479 с.

11. Гольдберг В.Е., Жданов В.В., Хричкова Т.Ю., Матяш М.Г. Влияние кро-панола на гранулоцитопоэз у больных раком молочной железы в условиях химиотерапии // Росс, биотерапевт, журнал. 2007. - № 1. - С. 40-42.

12. Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., Жданов В.В. Динамическая теория регуляции кроветворения и роль цитокинов в регуляции гемопоэза // Медицинская иммунология. 2001. - Т. 3. - № 4. - С. 487-498.

13. Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., Жданов В.В. и др. Влияние гранулоцитарного колониестимулирующего фактора на восстановление миокарда в постинфарктном периоде // Бюлл. эксперим. биологии и медицины. 2005. - Т. 139, №3.-С. 297-301.

14. Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., Жданов В.В. и др. Механизмы терапевтических эффектов гранулоцитарного колониестимулирующего фактора при экспериментальном сахарном диабете // Клет. техн. в биологии и медицине. -2008.-№4.-С. 230-233.

15. Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., Жданов В.В. и др. Фармакологическая регуляция системы крови при экспериментальных невротических воздействиях. Томск, Изд-во ТГУ, 2007. - 155 с.

16. Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., Жданов В.В. Роль гемопоэзиндуцирующего микроокружения в регуляции кроветворения при цитостатической миелосу-прессии. Томск: STT, 1999. - 128 .

17. Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., Зюзьков Г.Н. Гипоксия и система крови. -Томск: Изд-во Том. ун-та, 2006. 142 с.

18. Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., Зюзьков Г.Н. и др. Механизмы мобилизации мезенхимальных клеток-предшественников гранулоцитарным колоние-стимулирующим фактором и гиалуронидазой // Бюлл. эксперим. биол. и медицины. 2007. - № 12. - С. 652-656.

19. Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., Зюзьков Г.Н. и др. Психофармакологические эффекты гранулоцитарного КСФ и их механизмы при гипоксии высокой степени тяжести // Бюлл. эксперим. биологии и медицины. 2005. - Т. 139, №4.-С. 367-371.

20. Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., Скурихин Е.Г. и др. Усиление стимулирующего действия эритропоэтина на эритропоэз антисеротониновым препаратом при цитостатической миелодепрессии // Бюлл. эксперим. биологии и медицины. 2009. - Т. 148, № 7. - С. 56-59.

21. Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., Хлусов И.А. Роль вегетативной нервной системы в регуляции гемопоэза. Томск: Изд-во ТГУ, 1997. - 218 с.

22. Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., шахов В.П. Методы культуры ткани в гематологии. Томск: Изд-во ТГУ, 1992. - 272 с.

23. Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., Шерстобоев Е.Ю. Механизмы локальной регуляции кроветворения. Томск: STT, 2000. - 148 с.

24. Гублер Е.В. Вычислительные методы анализа и распознавания патологических процессов. Л.: Медицина, 1978. - 193 с.

25. Гурьянцева Л.А., Жданов В.В., Удут Е.В. и др. Механизмы действия стимуляторов гранулоцитопоэза в условиях цитостатической миелосупрессии // Экспер. и клин, фармакол. 2006. - Т. 69, № 2. - С. 44-47.

26. Даниленко Е.Д., Белкина А.О., Кисурина М.И. и др. Современные направления создания наночастиц как средств доставки биологически активных веществ и антигенов // Достижения современной биотехнологии. Новосибирск, 2008. - С. 157-165.

27. Дурнев А.Д. Токсикология наночастиц // Бюлл. эксперим. биологии и медицины. 2008. - Т. 145, № 1. - С. 78-80.

28. Дыгай A.M., Артамонов А.В., Верещагин Е.И., Мадонов П.Г. Создание нового класса лекарственных препаратов на основе нанотехнологий // Сборник тезисов докладов участников Второго Международного форума по нано-технологииям. Москва, 2009. - С. 607-609.

29. Дыгай A.M., Верещагин Е.И., Зюзьков Г.Н. и др. Мобилизация прогени-торных клеток в кровь с помощью иммобилизированного гранулоцитарного колониестимулирующего фактора // Клет. технологии в биологии и медицине. 2009. - № 2. - С. 63-66.

30. Дыгай A.M., Жданов В.В., Гольдберг В.Е. и др. Методические указания по изучению гемостимулирующей активности фармакологических веществ // Ведомости научного центра экспертизы и государственного контроля лекарственных средств. 2002. - № 2. - С. 29-32.

31. Дыгай A.M., Жданов В.В., Удут Е.В. Фармакологическая регуляция эри-тропоэза М.: Изд-во РАМН, 2009. - 176 с.

32. Дыгай A.M., Зюзьков Г.Н. Клеточная терапия: новые подходы // Наука в России. М.: Наука, 2009. - Том. 169. -№ 1. - С. 4-8.

33. Дыгай A.M., Клименко Н.А. Воспаление и гемопоэз. Томск: Изд-во ТГУ, 1992. - 276 с.

34. Дыгай A.M., Шахов В.П. Роль межклеточного взаимодействий в регуляции гемопоэза. Томск.: Изд-во ТГУ, 1989. - 224 с.

35. Зайцев С.В., Ефанов A.M., Сазанов JI.A. Общие закономерности и возможные механизмы действия биологически активных веществ в сверхмалых дозах // Росс. хим. журнал. 1999. - Т. 43. - С.28-33.

36. Захаров Ю.М., Рассохин А.Г. Эритробластический островок. М.: Медицина, 2002. - 280 с.

37. Каркищенко Н.Н. Небезопасность: новые подходы к оценке рисков и токсичности наноматериалов // Биомедицина. 2009. - № 1. - С. 5-27.

38. Карпова Г.В., Фомина Т.Н., Тимина Е.А. и др. Влияние рекомбинантно-го гранулоцитарного колониестимулирующего фактора человека на кроветворные и лимфоидные органы мышей // Эксперим. и клинич. фармакол. -2001. Т. 64, № 4. - С. 31-33.

39. Кетлинский С.А. Роль Т-хелперов типа 1 и 2 в регуляции клеточного и гуморального иммунитета // Иммунол. 2002. - № 2. - С. 77-79.

40. Козлов В.А. Гранулоцитарный колониестимулирующий фактор: физиологическая активность, патофизиологические и терапевтические проблемы // Цитокины и воспаление. 2005. - Т. 3, № 2. - С. 3-15.

41. Кругляков П.В., Лохматова Е.А., Климович В.Б., Зарицкий А.Ю. Мезен-химные стволовые клетки и иммунопатологические состояния организма // Клет. трансплант. и тканевая инженерия. 2006. - № 3. - С. 36-41.

42. Куртова А.В. Рынок препаратов для мобилизации гемопоэтических предшественников: время перемен? // Клет. технологии в биологии и медицине. 2007. - Т. 2, № 3. - С. 75-78.

43. Куртова А.В., Эстрина М.А., Алексеев С.М. и др. Экспрессия CXCR4 и эффективность мобилизации CD34+ гемопоэтических стволовых клеток // Клет. технологии в биологии и медицине. 2007. - Т. 2, № 3. - С. 51-56.

44. Лабораторные методы исследования в клинике: Справочник / под ред. В.В. Меньшикова. М.: Медицина, 1987. - 368 с.

45. Лакин Г.Ф. Биометрия. М.:Медицина, 1990. - 352 с.

46. Ларин М.Ю., Иванов Д.К., Блохин Д.Ю. и др. Биодеградируемые имму-номагнитные сорбенты в онкологии // Росс. Биотерапевт. Журнал 2005. - № З.-С. 26-31.

47. Маньков В.М., Петров Р.В. Лимфоцитарный контроль дифференцировки кроветворных стволовых клеток // Клет. трансплант. и тканевая инженерия. -2006.-№4.-С. 63-75.

48. Масычева В.И., Даниленко Е.Д., Сысоева Г.М. и др. Физико-химические исследования наночастиц // Достижения современной биотехнологии. Новосибирск, 2008. - С. 165-174.

49. Машковский М.Д. Лекарственные средства. М.: «Новая волна», 2006. -1206 с.

50. Натан Д.Г., Зифф К.А. Регуляция кроветворения // Гематол. и трансфу-зиол. 1994. - Т. 39., № 2. - С. 3-10.

51. Науменко О.И. Роль гемопоэтического микроокружения костного мозга в норме и при лейкозе // Эксперим. онкология. 1992. - Т. 14, № 1. - С. 1120.

52. Нифонтова И.Н., Свинарева Д.А., Чертков И.Л., Дризе Н.И., Савченко В.Г. Отдаленные последствия длительного применения гранулоцитарногоколониестимулирующего фактора у мышей // Бюлл. эксперим. биологии и медицины. 2008. - Т. 145, № 5. - С. 568-573.

53. Патент (RU) на изобретение № 2332667 «Способ оценки гранулоцитопо-эзстимулирующей активности фармакологических веществ», 2008 г.

54. Плетнев Д.Н., Зиновьев В.В., Малыгин Э.Г. и др. Антивирусные частицы на основе ТЮ2 наночастиц // Сборник тезисов докладов научно-технологических секций. Москва, 2008. - С. 330-331.

55. Плотников М.Б., Дыгай A.M., Алиев О.И. и др. Антитромботический и тромболитический эффекты нового отечественного протеолитического препарата Тромбовазим // Бюлл. эксперим. биологии и медицины. 2009. - № 4. - С. 418-420.

56. Ругаль В.И., Блинова Т.С., Пономаренко В.М., Абдулкадыров К.М. Ультраструктурная организация кроветворного микроокружения костного мозга человека // Гематол. и трансфузиол. 1991. - Т. 36, № 3. - С. 11-15.

57. Руководство по гематологии: в 3 т. / Под ред. А.И. Воробьева. М.: Ньюдиамед, 2002.

58. Руководство по химиотерапии опухолевых заболеваний. / Под ред. Н.И. Переводчиковой. -М.: Практическая медицина, 2005.

59. Румянцев С.А., Осипова Е.Ю., Астрелина Т.А. и др. Влияние гранулоцитарного колониестимулирующего фактора на клеточный состав периферической крови // Вопросы гематологии, онкологии и иммунопатологии в педиатрии. 2002. - Т. 1, № 1. - С. 66-69.

60. Сейфулла Р.Д., Рожкова Е.А., Ким Е.К. Антиоксиданты // Экспер. и клин, фармакол. 2009. - Т. 72, № 3. - С. 60-64.

61. Сейфулла Р.Д., Тимофеев А.Б., Орджоникидзе З.Г. и др. Проблемы использования нанотехнологии в фармакологии // Экспер. и клин, фармакол. -2008. Т. 71, № 1. - С. 60-69.

62. Семина О.В., Семенец Т.Н., Замулаева И.А. и др. Тимодепрессин инги-бирует миграцию CD 34+-клеток из костного мозга при нормальном и стимулированном Г-КСФ кроветворении // Бюлл. эксперим. биологии и медицины. 2007. - Т. 144, № 12. - С. 367-371.

63. Система цитокинов: Теоретические и клинические аспекты. / Под ред. В.А. Козлова, С.В. Сенникова. Новосибирск: Наука, 2004. - 324 с.

64. Сотникова Н.В., Ставрова JI.A., Гурьянцева JI.A. и др. Механизмы влияния гранулоцитарного КСФ на восстановление поврежденной ткани при хроническом поражении печени СС14 // Клет. технологии в биологии и медицине. 2005. - № 4. - С. 243-247.

65. Ставрова JI.A., Фомина Т.И., Плотников М.Б. и др. Фармакологическая регуляция функциональной активности стволовых клеток при восстановлении миокарда в постинфарктном периоде // Клет. технологии в биологии и медицине. 2005. - № 4. - С. 190-194.

66. Сухих Г.Т., Малайцев В.В., Богданова И.М., Дубровина И.М. Мезенхи-мальные стволовые клетки // Бюлл. эксперим. биологии и медицины. 2002. -Т. 133, №2.-С. 124-131.

67. Тодрия Т.В., Капланская И.Б. Побочный эффект гранулоцитарного ко-лониестимулирующего фактора на структуру и функцию печени мышей // Тер. архив. 2006. - Т. 78, № 11. - С 56-59.

68. Трактуев Д.О., Парфенова Е.В., Ткачук В.А., Марч K.JI. Стромальные клетки жировой ткани пластический тип клеток, обладающих высоким терапевтическим потенциалом // Цитология. — 2006. — Том 48, № 2. — С. 8394.

69. Урбах В.Ю. Статистический анализ биологических медицинских исследований. М.: Медицина, 1979. 295 с.

70. Хлусов И.А., Дыгай A.M., Гольдберг Е.Д. Адренергическая зависимость пролиферации гемопоэтических прекурсоров при цитостатическом воздействии // Бюлл. эксперим. биол. и мед. 1997. - № 6. - С. 638-641.

71. Хлусов И.А., Дыгай A.M., Гольдберг Е.Д. Адренергическая зависимость пролиферации гемопоэтических прекурсоров при цитостатическом воздействии // Бюл. эксперим. биол. и мед. 1997. - № 6. - С. 638-641.

72. Черезов А.Е. Общая терапия рака: тканевый продход. М.: Изд-во МГУ, 1997.- 252 с.

73. Чертков И.Д., Дризе Н.И., Воробьев А.И. Схема кроветворения: 2005 // Терапевт, архив. 2006. - № 7. - С. 5-12.

74. Шляхто Е.В. Нанотехнологйи в биологии и медицине // Сборник тезисов докладов научно-технологических секций. Москва, 2008. - С. 306-308.

75. Эпштейн О.И., Зюзьков Г.Н., Сотникова Н.В. и др. Механизмы гепато-протекторного эффекта препарата сверхмалых доз антител к гранулоцитар-ному колониестимулирующему фактору // Клет. технологии в биологии и медицине. 2005. - № 4. - С. 195-200.

76. Юшков Б.Г., Климин В.Г., Кузьмин А.И. Сосуды костного мозга и регуляция кроветворения. Екатеринбург: УрО РАН, 2004. - 150 с.

77. Ястребов А.П., Юшков Б.Г., Большаков В.Н. Регуляция гемопоэза при воздействии на организм экстремальных факторов. Свердловск, 1988. - 152 с.

78. Arai F., Hirao A., Suda T. Regulation of hematopoiesis and its interaction with stem cell niches // Int. J. Hematol. 2005. - Vol. 82. - P. 371-376.

79. Arai M., Misao Yu, Nagai H. et al. Granulocyte colony-stimulating factor a noninvasive regeneration therapy for treating atherosclerotic peripheral artery disease // Circ. J. 2006. - Vol. 70. - P. 1093-1098.

80. Asano S. Human granulocyte colony-stimulating factor: its basic aspects and clinical applications // Am. J. Pediatric Hematol/Oncol. 1991. - Vol. 13. - P. 400-413.

81. Avalos B.R., Gasson J.C., Hedvat C. et al. Human granulocyte colony-stimulating factor: biologic activities and receptor characterization on hematopoietic cells and small cell lung cancer cell lines // Blood. 1990. - Vol. 75. - P. 851857.

82. Avigdor A., Goichberg P., Shivtiel S. et al. CD44 and hyaluronic acid cooperate with SDF-1 in the trafficking of human CD34+ stem/progenitor cells to bone marrow // Blood. 2004. - Vol. 103. - P. 2981-2989.

83. Barcew K, Kacinska E, Marchlewicz M, Wiszniewska B, Machalinski B. Bone marrow morphology during haematopoeitic stem cell mobilization with G-CSF in mice // Folia Morphol. 2004. - Vol. 63. - P. 87-89.

84. Bazan J.F. Haemopoietic receptors and helical cytokines // Immunol. Today.- 1990. Vol. 11. - P. 350-354.

85. Begley C.G., Lopez A.V., Nicola N.A. et al. Purified colony-stimulating factors enhance the survival of human neutrophils and eosinophils in vitro: a rapid and sensitive microassay for colony-stimulating factors // Blood. 1986. - Vol. 68. -P. 162-166.

86. Berdel W.E., Danhauser R.S., Steinhauser G., Winton W.F. Various human hematopoietic growth factors (interleukin-3, GM-CSF, G-CSF) stimulate clonal growth of nonhematopoietic tumor cells // Blood. 1989. - Vol. 73. - P. 80-83.

87. Bhana N. Granulocyte colony-stimulating factors in the management of chemotherapy-induced neutropenia: evidence based review // Curr. Opin. Oncol. -2007. Vol. 19. - P. 328-335.

88. Bhatt V., Saleem A. Review: drug-induced neutropenia-pathophysiology, clinical features, and management // Ann. Clin. Lab. Sci. 2004. - Vol. 34. - P. 131-139.

89. Bianco P., Riminucci M., Gronthos S., Gehron Robey P. Bone marrow stromal stem cells: nature, biology, and potential applications // Stem cells. 2001. -Vol. 19.-P. 180-192.

90. Biesma В., van Kralingen K.W., van Leen R.W. et al. Recombinant human interleukin-3 administered concomitantly with chemotherapy in patients with relapsed small cell lung cancer // J. Exp. Ther. Oncol. 2002. - Vol. 2. - P. 47-52.

91. Blinder V.S., Roboz GJ. Hematopoietic growth factors in myelodysplastic syndromes // Curr. Hematol. Rep. 2003. - Vol. 2. - P. 453-458.

92. Bonig H., Silbermann S., Weller S. et al. Glycosylated vs non-glycosylated granulocyte colony-stimulating factor (G-CSF)- results of a prospective randomised monocentre study // Bone Marrow Transplantation. 2001. - Vol. 28. - P. 259-264.

93. Bowman K., Leong K.B. Chitosan nanoparticles for oral drug and gene delivery // Int. J. Nanomedicine. 2006. - Vol. 1. - P. 117-128.

94. Brems D.N. The kinetics of G-CSF folding // Protein Sci. 2006. - Vol. 15. -P. 1063-1075.

95. Bruce A. Clinical considerations in pegylated protein therapy // From Research to Practice. 2001. - Vol. 3. - P. 3-9.

96. Bruner S., Zaruba M.M., Huber B. et al. Parathyroid hormone effectively induces mobilization of progenitor cells without depletion of bone marrow // Exp. Hematol. 2008. - Vol. 36. - P. 1157-1166.

97. Bussolino F., Bocchietto E., Silvagno F. et al. Actions of molecules which regulate hemopoiesis on endothelial cells: memoirs of common ancestors // Pathol. Res. Pract. 1994. - Vol. 190. - P. 834-839.

98. Bussolino F., Ziche M., Wang J.M. et al. In vitro and in vivo activation of endothelial cells by colony-stimulating factors // J. Clin. Invest. 1991. - Vol. 87. -P. 986-995.

99. Calvi L.M., Adams G.B., Weibrecht K.W. et al. Osteoblastic cells regulate the hematopoietic stem cell niche // Nature. 2003. - Vol. 425. - P. 841-846.

100. Cases A. Darbepoetin alfa: a novel erythropoiesis-stimulating protein // Drugs Today. 2003. - Vol. 37. - P. 477-495.

101. Cerami A., Warren K.S. CNS effect of epoetin alfa // 11th Intern. Congr. Anti-Cancer Treat. 2001. - Vol. 4 - P. 6-9.

102. Chakrabarti S., Patel K.D. Regulation of matrix metalloproteinase-9 release from IL-8-stimulated human neutrophils // J. Leukocyte Biol. 2005. - Vol. 78. -P. 279-288.

103. Chanchal D., Swarnlata S. Novel approaches in herbal cosmetics // J. Cos-met. Dermatol. 2008. - Vol. 7. - P. 89-95.

104. Colgan S.P., Gasper P.W., Thrall M.A. et al. Neutrophil function in normal and Chediak-Higashi syndrome cats following administration of recombinant canine G-CSF // Exp. Hematol. 1992. - Vol. 20. - P. 1229-1234.

105. Collins D., Cha Y. Interaction of recombinant granulocyte colony stimulating factor with lipid membranes: enhanced stability of a water-soluble protein after membrane insertion // Biochemistry. 1994. - Vol. 33. - P.4521-4526.

106. Conrad C., Gottgens В., Kinston S. et al. GATA transcription in a small rho-damine 123(low)CD34(+) subpopulation of a peripheral blood-derived CD34(-) CD105(+) mesenchymal cell line // Exp. Hematol. 2002. - Vol. 30. - № 8. - P. 887-895.

107. Craig J.I.O., Turner M.L., Parker A.C. Peripheral blood stem cell transplantation // Blood Rev. 1992. - Vol. 2. - P. 59-67.

108. Crawford J. Neutrophil growth factors // Curr. Hematol. Rep. 2002. - Vol. l.-P. 95-102.

109. Crawford J., Ozer H., Stoller R. et al. Reduction by granulocyte colony-stimulating factor of fever and neutropenia induced by chemotherapy in patients with small-cell lung cancer // N. Engl. J. 1991. - Vol. 325. - P. 164-170.

110. Crocker P.R., Gordon S. Isolation and characterisation of resident macrophages and hemopoietic cell cluster from mouse bone marrow // J. Exp. Med. -1985. Vol. 162. - P. 993-1014.

111. Curran M.P., Goa K.L. Pegfilgrastim // Drugs. 2002. - Vol. 62. - P. 12071213.

112. Dalakas E., Newsome P.N., Harrison D.J., Plevris J.N. Hematopoietic stem cell trafficking in liver injury // FASEB J. 2005. - Vol. 19. - P. 1225-1231.

113. De Haan G., Loeffler M„ Nijhof W. Effects of G-CSF on erythropoiesis // Ann. N. Y. Acad. Sci. 1994. - Vol. 62. - P. 312-325.

114. De Jong W.H., Borm P.J.A. Drug delivery and nanoparticles: Applications and hazards // Int. J. Nanomedicine. 2008. - Vol. 3. - P. 133-149.

115. Delgado C., Francis G.E., Fisher D. The uses and properties of PEG-linked proteins // Crit. Rev. Ther. Drug Carr. Syst. 1992. - Vol. 9. - P. 294-304.

116. Delgado M.B., Clark-Lewis I., Loetscher P. et al. Rapid inactivation of stromal cell-derived factor-1 by cathepsin G associated with lymphocytes // Eur. J. Immunol. 2001. - Vol. 31. - P. 699-703.

117. Demetri G.D., Griffin J.D. Granulocyte colony-stimulating factor and its receptor // Blood. 1991. - Vol. 78. - P. 2791-2808.

118. Dombret H., Chastang C., Fenaux P. et al. A controlled study of recombinant human granulocyte colony-stimulating factor in elderly patients after treatment for acute myelogenous leukemia // N. Engl. J. Med. 1995. - Vol. 332. - P. 1678-1683.

119. Elisason J.F., Thorena В., Kindler V. et al. The roles of granulocyte-macrophage colony stimulating factors and IL-3 in stromal cell mediated heina-topoiesis in vivo // Exp. Hematol. - 1988. - Vol. 16. - P. 307-312.

120. Erslev A.J. Erythropoietin // Leukemia Research. 1990. - Vol. 14. - P. 683-688.

121. Fearon D.T., Locksley R.M. The instructive role of innate immunity in the acquired immune response // Science. 1996. - Vol. 272. - P. 50-53.

122. Filshie R.J. Cytokines in haemopoietic progenitor mobilization for peripheral blood stem cell transplantation // Curr. Pharm. Des. 2002. - Vol. 8. - P. 379394.

123. Flomenberg N., Devine S.M., Dipersio J.F. et al. The use of AMD3100 plus G-CSF for autologous hematopoietic progenitor cell mobilization is superior to G-CSF alone // Blood. 2005. - Vol. 106. - P. 1867-1874.

124. Frampton J.E., Keating G.M. Spotlight on pegfilgrastim in chemotherapy-induced neutropenia // BioDrugs. 2005. - Vol. 19. - P. 405-407.

125. Furze R.C., Rankin S.M. Neutrophil mobilization and clearance in the bone marrow // Immunol. 2008. - Vol. 125. - P. 281-288.

126. Ganser A., Seipelt G., Hoelzer D. The role of GM-CSF, G-CSF, interleukin-3, and erythropoietin in myelodysplastic syndromes // Am. J. Clin. Oncol. 1991. - Vol. 14. - P. 34-39.

127. Geissler R.G., Schulte P., Ganser A. Clinical use of hematopoietic growth factors in patients with myelodysplastic syndromes // Int. J. Hematol. 1997. -Vol. 65. - P. 339-354.

128. Gieryng A., Bogunia-Kubik K. The role of the SDF-1-CXCR4 axis in hema-topoiesis and the mobilization of hematopoietic stem cells to peripheral blood // Postery Hig. Med. Dosw. 2007. - Vol. 61. - P. 369-383.

129. Gill I.J., Fisher A.N., Farraj N. et al. Intranasal absorption of granulocyte-colony stimulating factor (G-CSF) from powder formulations, in sheep // Eur. J. Pharm. Sci. 1998. - Vol. 6. - P. 1-10.

130. Gimble J.M., Zvonic S., Floyd Z.E. et al. Playing with bone and fat // J. Cell. Biochem. 2006. - Vol. 98. - P. 251-266.

131. Glaspy J.A. Hematopoietic management in oncology practice. Part 1 // Myeloid growth factors Oncology (Hunting). 2003. - Vol. 17. - P. 1593-1603.

132. Gol'dberg E.D., Dygai A.M., Zyuz'kov G.N., Zhdanov V.V. Pharmacological regulation of functional activity of progenitor cells // International Congress «EUROMEDICA-HANNOVER-2008» Hannover, 2008. - P. 99-100.

133. Gorgen I., Hartung Т., Leist M. et al. Granulocyte colony-stimulating factor treatment protects rodents against lipopolysaccharide-induced toxicity via suppression of systemic tumor necrosis factor-alpha // J. Immunol. 1992. - Vol. 149. -P. 918-924.

134. Gough A., Clapperton M., Rolando N. et al. Randomised placebo-controlled trial of granulocyte-colony stimulating factor in diabetic foot infection // Lancet. -1997.-Vol. 9.-P. 350-355.

135. Greenwald R.B. PEG drugs: an overview // J. Control Release. 2001. -Vol. 74.-P. 159-171.

136. Gregoretti M.G., Gottardi D., Ghia P. et al. Characterization of bone marrow stromal cells from multiple myeloma // Leuk. Res. 1994. - Vol. 18. - P. 675-682.

137. Greil R., Psenak O., Roila F. Hematopoietic growth factors: ESMO recommendations for the applications // Ann. of oncology. 2008. - Vol. 19. - P. 116118.

138. Grohmann U., Snick J., Campanile F. et al. IL-9 protects mice from Gram-negative bacterial shock: suppression of TNF-a, IL-12 and IFN-y and induction of IL-10 // J. Immunol. 2000. - Vol. 164. - P. 4197-4203.

139. Guglielmini G. Nanostructured novel carrier for topical application // Clin. Dermatol. 2008. - Vol. 26. - P. 341-346.

140. Gulyaev A.E., Gelperina S.E., Skidan I.N. et al. Significant transport of doxorubicin into the brain with polysorbate 80-coated nanoparticles. // Pharm. Res. 1999. - Vol. 10. - P. 1564-1569.

141. Hamidi M., Azadi A., Rafiei P. Pharmacokinetic consequences of pegylation // Drug Delivery. 2006. - Vol. 13. - P. 399-409.

142. Hanna G.G., Edgar D., Clarke J.E.M. A case of prolonged type 1 hypersensitivity reaction to pegfilgrastim// Clin, oncology. 2008. - Vol. 20. - P. 315-316.

143. Hareng L., Hartung T. Induction and regulation of endogenous granulocyte colony-stimulating factor formation // Biol. Chem. 2002. - Vol. 383. - P. 15011517.

144. Harris J.M., Chess R. B. Effect of pegylation on pharmaceuticals // Nat. Rev. Drug Discov. 2003. - Vol. 2. - P. 214-221.

145. Haylock D.N., Nilsson S.K. Osteopontin: a bridge between bone and blood // Br. J. Haematol. 2006. - Vol. 134. - P. 467-474.

146. Heil G., Hoelzer D., Sanz M.A. et al. Long-term survival data from a phase 3 study of Filgastrim as an adjunct to chemotherapy in adults with de novo acute myeloid leukemia // Leukemia. 2006. - P. 404-409.

147. Hill C.P., Osslund T.D., Eisenberg D. The structure of granulocyte-colony-stimulating factor and its relationship to other growth factors // Proc. Natl. Acad. Sci.U.S.A. 1993. - Vol. 90. - P.5167-5171.

148. Hirayma F., Lyman S.D., Clark S.C., Ogawa M. The flt3 ligand supports proliferation of lymphohematopoietic progenitors and early B-lymphoid progenitors // Blood. 1995. - Vol. 85. - P. 1762-1768.

149. Hoglund M. Glycosylated and non-glycosylated rhG-CSF what is the difference? // Med. Oncol. - 1998. - Vol. 15. - P. 229-233.

150. Ido M., Harada M., Furuichi H. et al. Interleukin 1 induced sequential mye-lorestoration: dynamic relation between granulopoiesis and progenitor cell recovery in myelosuppressed mice // Exp. Hematol. - 1992. - Vol. 20. - P. 161-166.

151. Invernizzi R., Grasso D., Travaglino E. et al. Biological effect of pegfilgras-tim on circulating neutrophils in breast cancer patients undergoing dose-densse chemotherapy // Oncology. 2008. - Vol. 75. - P. 237-244.

152. Jahr H., Bretzel R.G. Insulin-positive cells in vitro generated from rat bone marrow stromal cells // Transpant. Proc. 2003. - Vol. 35. - P. 2140-2143.

153. Jakob A., Hirsch F.W., Engelhardt M. Successful treatment of patient with with myelodysplastic syndrome (RAEB) with Darbepoetin-alfa in combination with Pegfilgrastim // Ann. Hematol. 2005. - Vol. 84. - P. 694-695.

154. Jin F., Zhai Q., Qiu L. et al. Degradation of BM SDF-1 by MMP-9: the role in G-CSF-induced hematopoietic stem/progenitor cell mobilization // Bone Marrow Transplant. 2008. - Vol. 42. - P. 581-588.

155. Johnston E., Craword J., Blackwell S. et al. Randomized, dose-escalation study of SD/01 compared with daily filgrastim in patients receiving chemotherapy // J. Clin. Oncol. 2000. - Vol. 18. - P. 2522-2528.

156. Kawada H., Sasao Т., Yonekura S., Hotta T. Clinical significance of granulocyte colony-stimulating factor (G-CSF) receptor expression in acute myeloid leukemia // Leuk.Res. 1998. - Vol. 22. - P. 31-37.

157. Kazuto Y., Terence D. Ultrastructural morphometric study of efferent nerve terminal on murine bone marrow stromal cells, and the recognition of a novel anatomical unit: the "Neuro-Reticular Complex" // Amer. J. of Anat. 1990. - Vol.187.-P. 261-277.

158. Kinik S.T., Ozbek N., Yucel M. et al. Correlations among serum leptin levels, complete blood count parameters and peripheral CD34(+) cell count in prepubertal obese children // Ann. Hematol. 2005. - Vol. 84. - P. 605-608.

159. Kinstler O.B., Brems D.N., Lauren S.L. et al. Characterization and stability of N-terminally PEGylated rhG-CSF // Pharm. Research. 1996. - Vol. 13. - P. 996-1004.

160. Kirsch E., Kriiger C., Schneider A. The receptor for granulocyte-colony stimulating factor (G-CSF) is expressed in radial glia during development of the nervous system // BMC Dev. Biol. 2008. - Vol. 8. - P. 32-38.

161. Knauf M.J., Bell D.P., Hirtzer P. et al. Relationship of effective molecular size to systemic clearance in rats of recombinant interleukin-2 chemically modified with water-soluble polymers // J. Biol. Chem. 1988. - Vol. 263. - P. 1506415070.

162. Kolvenbach C.G., Narhi L.O., Philo J.S. et al. Granulocyte-colony stimulating factor maintains a thermally stable, compact, partially folded structure at pH2 // J. Pept. Res. 1997. - Vol. 50. - P.310-318.

163. Komatsu Y., Matsumoto Т., Kuga T. et al. Cloning of granulocyte colony-stimulating factor cDNA from human macrophages and its expression in Escherichia coli // Jpn. Cancer Res. 1987. - Vol. 78. - P. 1179-1181.

164. Koury M.J. rhErythropoietine in cancer supportive treatment // New York. 1996.-P. 1-12.

165. Kozutsumi H. Special education // Oncologist. 1996. - Vol. 1. - P. 116118.

166. Kreuter J., Shamenkov D., Petrov V. et al. Apolipoprotein-mediated transport of nanoparticle-bound drugs across the blood-brain barrier // J. Drug Target. -2002. Vol. 10. - P. 317-325.

167. Kubota N., Orita Т., Hattori K. et al. Structural characterization of natural and recombinant human granulocyte colony-stimulating factors // J. Biochem. -1990. Vol. 107. - P. 486-492.

168. Kumar L. Haematopoietic stem cell transplantation: current status // Natl. Med. J. India 2007. - Vol. 3. - P. 128-137.

169. Kuraishi Y., Ushikubi F. Pain, fever and prostanoids // Nippon Yakurigaku Zasshi. 2001. - Vol. 117. - P. 248-254.

170. Kuwabara Т., Kobayashi S., Sugiyama Y. Pharmacokinetics and pharmacodynamics of recombinant human granulocyte colony-stimulating factor // Drug Metab. Rev. 1996. - Vol. 28. - P. 625-658.

171. Lapidot Т., Petit I. Current understanding of stem cell mobilization: the roles of chemokines, proteolytic enzymes, adhesion molecules, cytokines, and stromal cells // Exp. Hematol. 2002. - Vol. 30. - P. 973-981.

172. Lau A.S., Lehman D., Geertsma F.R. Yeung M.C. Biology and therapeutic uses of myeloid hematopoietic growth factors and interferons // Pediatr. Infect. Dis. J. 1996. - Vol. 7. - P. 563-575.

173. Leary A.G., Ikebuchi K., Hirai Y. et al. Synergism between IL-6 and IL-3 in supporting proliferation of human hematopoietic stem cell: comparison with IL-1 // Blood. 1988.-Vol. 71.-P. 1759-1763.

174. Lee D.L., Sharif I., Kodihalli S., Stewart D.I., Tsvetnitsky V. Preparation of monopegylated human granulocyte-macrophage colony-stimulating factor // J. In-terfron Cytokine Res. 2008. - Vol. 28. - P. 101-112.

175. Lei Y., Liu Z., Han Q. et al. G-CSF enhanced SDF-1 gradient between bone marrow and liver associated with mobilization of peripheral blood CD34+ cells in rats with acute liver failure // Dig. Dis. Sci. 2009. - Vol. 71. - P. 1759-1763.

176. Lenhoff S., Rosberg В., Olofsson T. Granulocyte interactions with GM-CSF and G-CSF secretion by endothelial cells and monocytes // Eur. Cytokine Netw. -1999.-Vol. 10.-P. 525-532.

177. Levesque J.-P., Hendy J., Takamatsu Y., Simmons P.J., Bendall L.J. Disruption of the CXCR4/CXCL12 chemotactic interaction during hematopoietic stem cell mobilization induced by G-CSF or cyclophosphamide. // J Clin Invest. 2003. -Vol. 111.-P. 187-196.

178. Levesque J.-P., Hendy J., Takamatsy Y. et al. Mobilization by either cyclophosphamide or colony-stimulating factor transforms the bone marrow into highly proteolitic environment // Exp. Hematol. 2002. - Vol. 30. - P.440-449.

179. Li W.M., Huang W.Q., Huang Y.H. et al. Positive and negative hematopoietic cytokines produced by bone marrow endothelial cells // Cytokine. 2000. -Vol. 12.-P. 1017-1023.

180. Lokich J. Same-day pegfilgrastim and chemotherapy // Cancer Invest. -2005. Vol. 23. - P. 573-576.

181. Lord B.I., Bronchud M.N., Owens S. The kinetics of human granylopoiesis following treatment with G-CSF in vivo // Proceedings of the National Academy of Sciences of the USA. 1989. - Vol. 86. - P. 9499-9503.

182. Lord B.I., Woolford L.B., Molineux G. Kinetics of neutrophil production in normal and neutropenic animals during the response to filgrastim (r-metHu G

183. CSF) or filgrastim SD/01 (PEG-r-metHu G-CSF) // Clin. Cancer Res. 2001. Vol. 7. - P. 2085-2090.

184. Lovejoy В., Cascio D., Eisenberg D. Crystal structure of canine and bovine granulocyte-colony stimulating factor (G-CSF) // J. Mol. Biol. 1993. - V.234. -P. 640-653.

185. Lu H.S., Boone T.C., Souza L.M., Lai P.-H. Disulfide and secondary structures of recombinant human granulocyte colony stimulating factor // Arch. Bio-chem. Biophys. 1989. - Vol. 268. - P. 81-92.

186. Luftner D., Possinger K. Pegfilgrastim rational drug desingn for the management of chemotherapy-induced neutropenia // Onkologie. - 2005. - Vol. 28. -P. 595-602.

187. Machida M., Sano K., Arakawa M., Hayashi M., Awazu S. Absorption of recombinant human granulocyte colony stimulating factor (rhG-CSF) from rat nasal mucosa// Pharm. Res. 1993. - Vol. 10. - P. 1372-1377.

188. Marangolo M., Bengala C., Conte P.F. et al. Dose and outcome: the hurdle of neutropenia (review) // Oncology reports. 2006. - Vol. 16. - P. 233-248.

189. Masazumi A., Misao Yu, Hiroshi N. et al. Granulocyte colony-stimulating factor a noninvasive regeneration therapy for treating atherosclerotic peripheral artery disease // Circ. J. 2006. - Vol.70. - P. 1093-1098.

190. McQuibban G.A., Butker G.S., Gong J.H. et al. Matrix metalloproteinase activity inactivates the CXC chemokine stromal cell-derived factor-1 // J. Biol. Chem. 2001. - Vol. 276. - P. 43503-43509.

191. Medina C., Santos-Martinez M.J., Radomski A., Corrigan O.I., Radomskki M.W. Nanoparticles: pharmacological and toxicological significance // Br. J. Pharmacol. 2007. - Vol. 150. - P. 552-558.

192. Merchav S., tatarsky I., Hochberg Z. Enhancement of human granulopoiesis in vitro by biosynthetic insulin-like growth factor I/somatomedin С and human growth hormone // J. Clin. Invest. 1988. - Vol. 81. - P. 791-797.

193. Metcalf D. Clonal extinction of myelomonocytic leukemic cells by serum from mice injected with endotoxin // Int. J.Cancer. 1980. - Vol. 25. - P. 225-233.

194. Metcalf D. Control of granulocytes and macrophages: molecular, cellular, and clinical aspects // Science. 1991. - Vol. 254. - P. 529-533.

195. Metcalf D. Haemopoietic colonies. Berlin, 1977. - 227 p.

196. Metcalf D. Hematopoietic growth factors. 1. // Lancet. 1989. - Vol. 15. -P. 825-827.

197. Minnerup J, Heidrich J, Wellmann J. Meta-analysis of the efficacy of granu-locyte-colony stimulating factor in animal models of focal cerebral ischemia // Stroke. 2008. - Vol. 39. - P. 1855-1861.

198. Molineux G. Pegfilgrastim: using pegylation technology to improve neutropenia support in cancer patients // Anticancer Drugs. 2003. - Vol. 14. - P. 259264.

199. Molineux G. Pegylation: engineering improved pharmaceuticals for enhanced therapy // Cancer Treat. Rev. 2002. Suppl. A. - P. 13-16.

200. Molineux G. The design and development of pegfilgrastim // Curr. Pharm. Des. 2004. - Vol. 10. - P. 1235-1244.

201. Moore M.A. Cytokine and chemokine networks influencing stem cell proliferation, differentiation, and marrow homing // J. Cell Biochem. 2002. - Vol. 38. - P. 29-38.

202. Morikawa K., Morikawa S., Nakamura M., Miyawaki T. Characterization of granulocyte colony-stimulating factor receptor expressed on human lymphocytes // Br. J. Haematol. 2002. - Vol. 118. - P. 296-304.

203. Morishita M., Leonard R.C. Pegfilgrastim: a neutrophil mediated granulocyte colony stimulating factor-expanding uses in cancer chemotherapy // Exp. Opin. Biol. Ther. 2008. - Vol. 8. - P. 993-1001.

204. Mosmann T.R., Sad S. The expanding universe of T-cell subsets: Thl, Th2 and more // Immunol. Today. 1996. - Vol. 17. - P. 138-146.

205. Musto P., Scalzulli P.R., Terruzzi E. et al. Pegfilgrastim versus filgrastim after autologous stem cell transplantation: case-controll study in patient with multiple myeloma and review of literature // Leuk. Res. 2007. - Vol. 31. - P. 14871493.

206. Muta K., Krants S.B., Boundurant M.C., Wickrema A. Distrinct roles of erythropoietin, insulin like growth factor I, and stem cell factor in the development of erythroid progenitor cells // Clin Inves. - 1994. - Vol. 94. - P. 34-43.

207. Nagata S., Tsuchiya M., Asano S. et al. Molecular cloning and expression of cDNA for human granulocyte colony-stimulating factor // Nature. 1986. - Vol. 319.-P. 415-418.

208. Nagata S., Tsuchiya M., Asano S. et al. The chromosomal gene structure and two mRNAs for human granulocyte colony-stimulating factor // EMBO J. 1986. -Vol. 5.-P. 575-581.

209. Nagler A., Korenstein-Ilan A., Amiel A., Avivi L. Granulocyte colony-stimulating factor generates epigenetic and genetic alterations in lymphocytes of normal volunteer donors of stem cells // Exp. Hematol. 2004. - Vol. 32. - P. 122130.

210. Naito M. Macrophage heterogeneity in development and differentiation // Arch. Histol. Cytol. 1993. - Vol. 56, № 4. - P. 331-351.

211. Narhi L.O., Kenney W.C., Arakawa T. Conformational changes of recombinant human granulocyte-colony stimulating factor induced by pH and guanidine hydrochloride // J. Protein Chem. 1991. - Vol. 10. - P.359-367.

212. Negrin R.S., Stein R., Vardiman J. et al. Treatment of the anemia of myelo-dysplastic syndromes using recombinant human granulocyte colony-stimulating factor in combination with erythropoietin // Blood. 1993. - Vol. 82. - P. 737743.

213. Neipp M., Zorina Т., Domenick M.A. et al. Effect of flt-3 ligand and granulocyte colony-stumulating factor on expansion and mobilization of facilitating cells in mice: kinetics and repopulating potential // Blood. 1998. - Vol. 92. - P. 31773188.

214. Nicola N.A., Begley C.G., Metcalf D. Identification of the human analogue of a regulator that induces differentiation in murine leukaemic cells // Nature. -1985. Vol. 314. - P. 625-628.

215. Nicola N.A., Begley C.G., Metcalf D. Identification of the human analogue of a regulator that induces differentiation in murine leukaemic cells // Nature. -1985. Vol. 314. - P. 625-628.

216. Nicola N.A., Metcalf D., Matsumoto M., Johnson G.R. Purification of a factor inducing differentiation in murine myelomonocytic leukemia cells. Identification as granulocyte colony-stimulating factor // J. Biol. Chem. 1983. - Vol. 258. -P. 9017-9023.

217. Nicola N.A., Metcalf D., Matsumoto M., Johnson G.R. Purification of a factor inducing differentiation in murine myelomonocytic leukemia cells. Identification as granulocyte colony-stimulating factor // J. Biol. Chem. 1983. - Vol. 258. -P. 9017-9023.

218. Niven R.W., Lott F.D., Cribbs J.M. Pulmonary absorption of recombinant methionyl human granulocyte colony stimulating factor (r-huG-CSF) after intratracheal instillation to the hamster // Pharm. Res. 1993. - Vol. 10. - P. 1604-1610

219. Niven R.W., Lott F.D., Ip A.Y., Cribbs J.M. Pulmonary delivery of powders and solutions containing recombinant human granulocyte colony stimulating factor (rhG-CSF) to the rabbit // Pharm. Res. 1994. - Vol. 11. - P. 1101-1109.

220. Nomura H., Inazeki I., Oheda M. et al. Purification and characterization of human granulocyte colony-stimulating factor (G-CSF) // EMBO J. 1986. - Vol. 5.-P. 871-876.

221. Ohno R., Tomonaga M., Kobayashi T. et al. Effect of granulocyte colony-stimulating factor after intensive induction therapy in relapsed or refractory acute leukemia // N. Engl. J. Med. 1990. - Vol. 323. - P. 871-877.

222. Okada S., Suda Т., Suda J. et al. Effects of interleukin 3, interleukin 6 and granulocyte colony-stimulating factor on sorted murine splenic progenitor cells // Exp. Hematol. 1991. - Vol. 19. - P. 42-46.

223. Otsuka Т., Ogo Т., Nakano T. et al. Expression of the c-kit ligand and interleukin 6 genes in mouse bone marrow stromal cell lines // Stem Cells (Dayt). -1994.-Vol. 12. P. 409-415.

224. Ottmann O.G., Ganser A., Freund M. et al. Simultaneous administration of granulocyte colony-stimulating factor (Filgrastim) and induction chemotherapy in acute lymphoblastic leukemia. A pilot study // Ann. Hematol. 1993. - Vol. 67. -P. 161-167.

225. Owen M., Friedenstein A.J. Stromal stem cells: marrow-derived osteogenic precursors // Giba Found Symp. 1988. - Vol. 136. - P.42-60.

226. Papayannopoulou T. Current mechanistic scenarios in haematopoietic stem/progenitor cell mobilization. // Blood. 2004. - Vol. 103. - P. 1580-1584.

227. Petit I., Szyper-Kravitz M., Nagler A. et al. G-CSF induces stem cell mobilization by decreasing bone marrow SDF-1 and up-regulating CXCR4 // Nat. Immunol. 2002. - Vol. 3. - P. 687-697.

228. Piedmonte D.M., Treuheit M.J. Formulation of Neulasta (pegfilgrastim) // Advanced Drug Delivery Reviews. 2008. - Vol. 60. - P. 50-58.

229. Pilarski L.M., Pruski E., Wizniak J. ct al. Potential role for hyaluronan and the hyaluronan receptor RHAMM in mobilization and trafficking of hematopoietic progenitor cells // Blood. 1999. - Vol. 93. - P. 2918-2927.

230. Pinto 1., Liu Z., Doan Q. et al. Comparison of pegfilgrastim with filgrastim on febrile neutropenia, grade IV neutropenia and bone pain: a meta-analysis of randomized controlled trials // Curr. Med. Res. Opin. 2007. - Vol. 23. - P. 22832295.

231. Pitchford S.C., Furze R.C., Jones C.P., Wengner A.M., Rankin S.M. Differential mobilization of subsets of progenitor cells from the bone marrow // Stem Cell.- 2009. Vol. 4. - P. 62-72.

232. Platzer E. Human hemopoietic growth factors // Eur. J. Haematol. 1989. -Vol. 42.-P. 1-15.

233. Pulliam A.C., Hobson M.J. Ciccone S.L. et al. AMD3100 synergizes with G-CSF to mobilize repopulating stem cells in Fanconi anemia knockout mice // Exp. Hematol. 2008. - Vol. 36. - P. 1084-1090.

234. Rajan R.S., Li Т., Aras M. et al. Modulation of protein aggregation by polyethylene glycol conjugation: G-CSF as a case study // Protein Sci. 2006. - Vol. 15.-P. 1063-1075.

235. Rasku M., Clem A., Chesney J. et al. Transient T cell depletion causes re-gressiion of melanoma metastases // J. of Translational Medicine 2008. - Vol. 5. -P. 6-12.

236. Roskos L.K., Lum P., Lockbaum P., Schwab G., Yang B.B. Pharmacokinetic/pharmacodynamic modeling of pegfilgrastim in healthy subjects // J. Clin. Pharmacol. 2006. - Vol. 46. - P. 747-757.

237. Ryan S.M., Mantovani G., Wang X., Haddleton D.M., Brayden D.J. Advances in PEGylation of important biotech molecules: delivery aspects // Expert Opin. Drug Deliv. 2008. - Vol. 5. - P. 371-378.

238. Savary Ch.A., Lotzova E. Inhibition of human bone marrow and myeloid progenitors by interleukin 2 activated lymphocytes // Exp. Hematol. - 1990. -Vol. 18.-P. 1083-1089.

239. Sawa Y., Horie Y., Yamaoka Y. et al. Production of colony-stimulating factor in human dental pulp fibroblasts // J. Dent. Res. 2003. - Vol. 82. - P. 96-100.

240. Schabitz W.R., Kollmar R., Schwaninger M. et al. Neuroprotective effect of granulocyte colony-stimulating factor after focal cerebral ischemia // Stroke. -2003. -Vol. 34. P. 745-53.

241. Scherrer R., Geissler K., Kyrle P.A. et al. Granulocyte colony-stimulating factor (G-CSF) as an adjunct to induction chemotherapy of adult acute lymphoblastic leukemia (ALL) // Ann. Hematol. 1993. - Vol. 66. - P. 283-289.

242. Shakeel F., Baboota S., Ahuja A. et al. Nanoemulsions as vehicles for transdermal delivery of aceclofenac. // AAPS PharmSciTech. 2007. - Vol. 8. - P. 104.

243. Shao К., Hou Q., Go M.L. et al. Intracellular drug delivery by sulfatide-mediated liposomes to gliomas. // J. Control. Release. 2006. - Vol. 115. - P. 150-157.

244. Shen R.N., Wu В., Lu L. et al. Recombinant human IL-1 alpha: a potent bio-immunomodifier in vivo in immunosuppressed mice induced by cyclophosphamide, retroviral infection and surgical stress // In vivo. 1994. - Vol. 8. - P. 5963.

245. Shimoda K., Okamura S., Harada N. et al. Identification of a functional receptor for granulocyte colony-stimulating factor on platelets // J. Clin. Invest. -1993. Vol. 91. - P. 1310-1313.

246. Shochat E., Rom-Kedar V. Novel strategies for Granulocyte colony-stimulating factor treatment of severe prolonged neutropenia suggested by mathematical modeling // Clin. Cancer Res. 2008. - Vol. 14. - P. 6354-6363.

247. Smith L.J., Redfield C., Boyd J. et al. Human interleukin 4. The solution structure of a four-helix bundle protein // J. Mol. Biol. 1992. - Vol. 224. - P.899-904.

248. Souza L.M., Boone T.C., Gabrilove J. et al. Recombinant human granulocyte colony-stimulating factor: effects on normal and leukemic myeloid cells // Science. 1986. - Vol. 23. - P. 61-65.

249. Souza L.M., Boone T.C., Gabrilove J. et al. Recombinant human granulocyte colony-stimulating factor: effects on normal and leukemic myeloid cells // Science. 1986. - Vol. 23. - P. 61-65.

250. Steward W.P., Scarfe J.N., Austin R. et al. Recombinant human GM-CSF given as daily short infusion // BRIT. J. Cancer. 1989. - Vol. 59. - P. 142-145.

251. Stork L.C., Peterson V.M., Rundus C.N. IL-1 enhances murine granulopoiesis in vivo // Exp. Hematol. 1988. - Vol. 16. - P. 163-167.

252. Suri S.S., Fenniri H., Singh B. Nanotechnology-based drug delivery systems // J. Occup. Med. Toxicol. 2007. - Vol. 1. - P. 2-16.

253. Szumilas P., Barcew K., Baskiewicz-Masiuk M. et al. Effect of system mobilization with cyclophosphamide plus granulocyte colony-stimulating factor on morphology of haematopoietic organs in mice // Cell Proliferation. 2005. - Vol. 38. - P.47-61.

254. Taipale J., Keski-Oja J. Growth factors in the extracellular matrix // FASEB J. 1997.-Vol. 11.-P. 51-59.

255. Timper K., Seboek O., Eberhardt M. et al. Human adipose tissue-derived mesenchymal stem cells differentiate into insulin, somatostatin, and glucagons expressing cells // Biochem. Biophys. Res. Commun. 2006. - Vol. 341. - P. 11351140.

256. Tritarelli E., Greco G., Testa U. et al. Combined IL-1 beta/ IL-6 treatment in mice synergistic myelostimulatory activity and myelorestorative effect aften cyclophosphamide induced myelosuppression // Cancer Res. - 1994. - Vol. 54. - P. 6469-6476.

257. Ventura G.J., Hester J.P., Buescher S.E., et al. Hematopoiesis in limiting dilution cultures: influence of cytokines on human hematopoietic progenitor cells // Exp. Hematol. 1990. - Vol. 18. - P. 877-883.

258. Vereschagin E.I., Khan D.H., Troitsky A.W. et al. Radiation technology in the preparation of polyethylene oxide hydrophilic gels and immobilization of proteases for use in medical practice // Arch. Pharm. Res. 2001. - Vol. 24. - P. 229233.

259. Vermeulen M., Le Pesteur F., Gagnerault M.C. et al. Role of adhesion molecules in the homing and mobilization of mirine hematopoietic stem and progenitor cells // Blood. 1998. - Vol. 92. - P. 894-900.

260. Vial Т., Descotes J. Clinical toxicity of cytokines used as haemopoietic growth factors // Drug Saf. 1995. - Vol. 13. - P. 371-406.

261. Vose J.M., Armitage J.O. Clinical applications of hematopoietic growth factors // Clin. Oncol. 1995. - Vol. 13. - P. 1023-1035.

262. Walter M.R., Windsor W.T., Nagabhushan T.L. et al. Crystal structure of a complex between interferon-gamma and its soluble high-affinity receptor // Nature. 1995. - Vol. 376. - P.230-235.

263. Watanabe Т., Suzuya H., Onishi T. et al. Effect of granulocyte colony-stimulating factor on bone metabolism during peripheral blood stem cell mobilization // Int. J. Hematol. 2003. - Vol. 77. - P.75-81.

264. Welte K., Platzer E., Lu L. et al. Purification and biochemical characterization of human pluripotent hematopoietic colony-stimulating factor // Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 1985. - Vol. 82. - P. 1526-1530.

265. Welte K., Zeidler C., Reiter A. et al. Differential effects of granulocyte-macrophage colony-stimulating factor and granulocyte colony-stimulating factor in children with severe congenital neutropenia // Blood. 1990. - Vol. 75. - P. 10561063.

266. Westphal G., Niederberger E., Blum C. et al. Erythropoietin and G-CSF receptors in human tumor cells: expression and aspects regarding functionality // Tumori. 2002. - Vol. 88. - P. 150-159.

267. Williams D.F. On the nature of biomaterials // Biomaterials. 2009. - Vol. 30.-P. 103-109.

268. Williams G., Smith C.A., Spooncer E. et al. Haemopoietic colony stimulating factors promote cell survival by suppressing apoptosis // Nature. 1990. - Vol. 343. - P. 76-79.

269. Wilson J.G. Adhesive interactions in hemopoiesis // Acta Haematol. 1997. -Vol. 97.-P. 6-12.

270. Wu H.H., Talpaz M., Champlin R.E. et al. Sequential interleukin 3 and gra-nulocyte-macrophage-colony stimulating factor therapy in patients with bone marrow failure with long-term follow-up of responses // Cancer. 2003. - Vol. 98. -P. 2410-2419.

271. Xu Y.J., Chen F.P., Li X.L. et al. Effect of recombinant human interleukin 11 on the platelet after hematopoietic stem cell transplantation in patients with leukemia// Zhong Nan Da Xue Xue Bao Yi Xue Ban. 2007. - Vol. 32. - P. 433436.

272. Yamaoka Т., Tabata Y., Ikada Y. Distribution and tissue uptake of poly (ethylene glycol) with different molecular weights after intravenous administration to mice // J. Pharm. Sci. 1994. - Vol. 83. - P. 601-606.

273. Yang B.B., Kido A., Salfi M., Swan S., Sullivan J.T. Pharmacokinetics and pharmacodynamics of pegfilgrastim in subjects with degrees of renal function // J. Clin. Pharmacol. 2008. - Vol. 48. - P. 1025-1031.

274. Yang B.B., Kido A., Shibata A. Serum pegfilgrastim concentrations during recovery of absolute neutrophil count in patient with cancer receiving pegfilgrastim after chemotherapy // Pharmacotherapy. 2007. - Vol. 27. - P. 1387-1393.

275. Yatuv R., Carmel-Goren L., Dayan I., Robinson M., Ваш M. Binding of proteins to PEGylated liposomes and improvement of G-CSF efficacy in mobilization of hematopoietic stem cells // J. Control. Release. 2009. - Vol. 135. - P. 4450.

276. Yowell S.L., Blackwell S. Novel effect with polyethylene glycol modified pharmaceuticals // Cancer Treat. Rev. 2002. - Vol. 28. - P. 3-6.

277. Yu J.M., Meng Z.Y., Dou G.F. Recent advances in research on granulocyte colony-stimulating factor review // Zhongguo Shi Yan Xue Ye Xue Za Zhi. -2008. - Vol. 16. - P. 452-456.

278. Zamboni W.C. Pharmacokinetics of pegfilgrastim // Pharmacotherapy. -2003.-Vol. 23.-P. 9-14.

279. Zeidler C., Welte K. Hematopoietic growth factors for the treatment of inherited cytopenias // Semin. Hematol. 2007. - Vol. 44. - P. 133-137.

280. Zhao Y, Sugiyama S, Miller T, Miao X. Nanoceramics for blood-bome virus removal // Exp. Rev. Med. Devices. 2008. - Vol. 5. - P. 395-405.

281. Znang Z., Li X. Progress of research on allogeneic hematopoietic stem cell transplantation with reduced-intensity conditioning regimen for treatment of myelodysplastic syndrome // Zhongguo Shi Yan Xue Ye Xue Za Zhi 2008. - Vol. 4. - P. 969-974.

282. Zucali J.R., Mored J., Bain C. Protection of cells capable of reconstituting long-term bone marrow stromal cultures from 4-hydroperoxycyclophosphamide by interleukin 1 and tumor necrosis factor // Exp. Hematol. 1992. - Vol. 20. - P. 969-973.