Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Функциональные механизмы антиэпилептической системы мозга

ЙиЫиЗ'З

РОССИЙСКАЯ АКАДЕИШ МВДЩНСКИХ НШ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ОБЩЕЙ ПАТОЛОГИИ

.....ГП^ОЙШШОГИИ

На правах рукописи

ГОДЛЕВСКИЙ Леонид Семенович

ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ МЕХАШЗШ АНШЭШЛЕШИ ЧЕСКОЙ СИСТЕМЫ МОЗГА

14.00.16 - патологическая физиология

Автореферат •

диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Москва - 1992

'О

' У

Работа Бипслнзна ка кафедре нормальной физиологии, на кафедре патологической физиологии Одесского медицинского института им. Н.И.Оирогова и в лаборатории общей патологии нервной системы Научно-исследовательского института общей патологии и патофизиологии Российской АМН.

Научные консультанты - доктор медицинских наук, профессор, академик РАМН Г.Н.КРШАНСВСКИЙ

- доктор медицинских наук, профессор А.А.ШАВДРА

— г

Официальные оппоненты • доктор медицинских наук, профессор, академик РАМН О.С.АДРИАНОВ

- доктор медицинских наук, профессор, член-корреспондент РАМН И.В.ГАНШгаЮША

- доктор шдищшских наук В.К.РЕШЕТНЯК .. . Ведущее учреждение -Российский медицинский университет

----Защита диссертации состоится " -£0 Г992 года

в У ¿Г _часов на заседании Специализированного совета Д 001.03.01 при Научно-исследовательском институте общей патологии и патофизиологии Российской АМН (125315, Москва, ул. Балтийская,

Автореферат разослан " " 0^ 1992 года. С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ' Института.

Ученый секретарь Специализированного ,

совета кандидат медицинских наук

Л.Н.Скуратовская

""■..л,. ..б" /

Данный эффекг!йепгмда.наблюдался в различных условиях эпилеп-тизациа мозга - на стрихнин- и пенициллин-нндуцированных очагах, формируемых в коре головного мозга, а танже многоочаговых формах ЭпА, острых генерализованных судорогах, индуцированных различными конвульсанташ (пикротоксин, коразол, бикукуллин), а также хронической ЭпА - коразол-индуцированном киндлинге у разных нивотных. Установлена зависимость противоэпилептическо-го действия ДОШ от дозы црепаратаи тяжести острых судорожных реакций- Показано усиление противоэпилептического действия цро-тивосудорожньсс препаратов- фенобарбитала, диазепама, а также нккоткначвда в условиях генерализованной и очаговой форд эпи-лептогенеза. Впервые показана роль ретикулярной части черной субстанции в осуществлении противосудорожного действия ДСЖ1 -установлено подавление острой генерализованной ЭпА, вызываемой системным применением пикротоксина и коразола при внутриниг-ральном введении ДСИП, усиление данного эффекта под влиянием галоперядола и иохиыбина, его блокирование налоксоном, а такте билатеральной деструкцией верхних бугорков четверохолмия.

Впервые показано, что под влиянием киндлинговых раздражений (повторные введения коразола, пикротоксина, а также ЭС миндалины) в мозге животных накапливаются пептидные опиоидные вещества, оказывающие эффект активации различных форм ЭпА -очаговой стрихдан-индуцированной и генерализованной, вызываемой коразолом и пикротоксином, у животных разных видов. Установлено, что данные соединения накапливаются в образованиях вентральных отделов среднего мозга. Большие количества пептид-содержащих экстрактов киндлинговых животных индуцируют ЭпА при апликации на хору головного мозга ношек, а таете при внут-рижелудочковом применении у крыс.

Впервые показано, что в структурах мозга киндлинговых киво-»-ных (образования вентральных отделов среднего мозга, гип-покамп) происходит снижение содержания бета-зндорфина, мет-энкефалина и ДОИЛ. .

Теоретическая и практическая значимость работы. В экспериментальных условиях обоснована роль пептидных факторов в ка-гестве гуморальных эффекторов структур АЭС. Вскрыты принципи-шьные закономерности компенсации судорожной активности на ос-

нове функционального взаимодействия образований" АЭС и реализации генераторных механизмов в структурах хвостатых ядер, верх- . низе бугорков четверохолмия и мозжечка, Показан универсальный характер реализации гуморальных противоэпилептических эффектов АЭС у животных разных видов, свидетельствующий об общебиологическом характере установленного механизма подавления ЭпА. Гу-

• моральный механизм деятельности образований" АЭС, дополняющий ранее известный транссиналтический путь реализации эффектов структур АЭС, а при достаточно высокой мощности ЭпА имеющий ведущее значение, свидетельствует о возможности использования эндогенных пептидных факторов в.качестве средств купирования эпшхептиформных проявлений.

Проведенные исследования показывают перспективность создания нового класса противрэпилептических препаратов на основе пептидной структуры, которые обладают способностью подавлять различные формы ЭпА, усиливают действие цротивосудорожных препаратов (заявка на изобретение "Противосудорожное средство" № 4120026),

Показанное принципиальное значение структур АЭС в- возникновении, развитии и подавлении эпилептического синдрома позволило идентифицировать возникавшие при модуляции активности отдельных структур АЭС нарушения поведения животных в качестве модельных эквивалентов соответствующих клинических.форм эпилепсии, защищенных авторскими свидетельствами на изобретения:;

Положения, выносимые на защиту; ' .

. I. Роль пептидных факторов ЦСй в реализации противоэпилептических эффектов антиэпилептической системы, наблюдающихся при активации её отдельных компонентов - мозжечка, верхних бугорков четверохолмия, хвостатых ядер. Нейропатофизиологичес-

• кие механизмы высвобождения пептидных соединений в ЦОК при генерализованной ЭпА.

2. Противоэпилепгическое действие ДСШ в различных условиях эпилептизации головного мозга. Значение образований АЭС в осуществлении противоэпилептического действия ДСИП.

3. Снижение выраженности антиэпилептических механизмов -уменьшение содержания ДСИП в вентромедиальных отделах среднего мозга и реципрокная активация эпилептической системы, как

нейропатофизиологический механизм хронической эпилептизации мозга при фармакологическом кинддинге.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены на совместной заседании Одесского отделения научных обществ патофизиологов и физиологов (Одесса, 1989), I симпозиуме "Системно-антисистемная регуляция в норме и патологии" (Киев, 1983), П Международном симпозиуме "Нейрофизиологические механизмы эпилепсии" (Тбилиси, 1982), симпозиуме "Стресс, адаптация и функциональные нарушения" (Кишинев, 1984), Международном симпозиуме "Нейробиология цикла бодрствование-сон" (Тбилиси, 1985), конференции, посвященной 100-летшо со дня рожд шя академика И.С.Бериташвили (Тбилиси, 1985), межлабораторной конференции НИИ общей патологии и патофизиологии РАМН ( Москва, 1985, . 1988), I конкурсе работ молодых ученых патофизиологов, посвященном 40 -летип Победа в Великой Отечественной войне 19411945 г.г. (Москва, 1985), П Международном симпозиуме по функциональной нейрохирургии (Тбилиси, 1985), ХУ съезде физиологического общества (Кишинев, 1987), У съезде геронтологов и гериатров (Тбилиси, 1988), П конференции по нейронаукан (Киев, 1988), Международном симпозиуме, посвященном 90-летию со дня рождения академика П.К.Анохина (Ялта, 1986), 1У симпозиуме "Стриарная система в норме и патологии" (Симферополь, 1988), 1У съезде патофизиологов (Кишинев, 1989), 18-м Международном конгрессе по эпилепсии (Ныо Дели, Индия, 19а9), Ш конференции • по нейронаукам (Киев, 1990), I Учредительном конгрессе международного патофизиологического общества (йосква, 1991), I Конгрессе по эпилептологии Польского отделения международной антиэпилептической лиги (Варшава, 1991).

Внедрение. Результаты работы внедрены в практику экспериментальных исследований лаборатории ооиэй патологии нервной системы НШ общей патологии и патофизиологии РАМН, лаборатории химии пептидов НИИ биоорганической химии им.М.Ы.Шемякина РАН, кафедр патологической и нормальной физиологии Одесского медицинского института им.Н.И.Пирогова, лаборатории биохимии НПО "Колос" (Одесса), в клиническую практику на кафедрах нейрохирургии и неврологии. Отдельные положения работы использованы в лекционных курсах на кафедрах патологической и нормальной

физиологии, а также психиатрии.

Объем и структура диссертадаи. Работа состоит из введения, обзора литературы, описания методик исследования, 3 глав собственных исследований, заключения, выводов. Общий объем диссертации составляет 3 ^страниц машинописи, фактические данные иллюстрированы 54 рисунками, указатель литературы включает •558 источников литературы, из них иностранных - 389.

СОДЕРШМЕ РАБОТЫ-.

ттешл и методу исследования

Исследования выполнены в условиях острого и полухронячес-кого экспериментов на 250 кошках обоего пола массой 2,5-3,5 кг, 1500 белых крысах-самцах линии Вистар массой 150-350 г, 800 мышах линии ВА1С/с массой 18-26 г.

Активация структур АЭС осуществлялась двумя методами. В первом случае исходили из представлений о том, что естественное развитие эпилептиформных реакций приводит к индуктивно«<у повышению активности АЭС, а прекращение иктальной ЭпА и развитие постсудорожной рефрактерности к эпилептогенным раздражителям сопряжено с периодом максимума активации АЭС, вовлечением в формирование компенсационного ответа наибольшего числа её . составных частей. Моделирование генерализованного судорожного приступа осуществлялось с помощью электрошокового раздражения (ЭШР). Важной методической особенностью'воспроизведения ЭШР- • судорог была локализация раздражающих электродов, которые рас-, полагались в лобных отделах кора головного мозга. Этим преследовалась цель обеспечения последовательного.охвата эпилептической активностью кейрональных структур в ростро-каудальном направлении, что создавало возможность изучения закономерностей «пилептогенеза с помощью метода локальных'деструкций нейрональ-ных структур и перерезок проводниковых путей. Другим методом активации образований АЭС была направленная ЭС нейрональных структур - составных частей АЗС, осущзствлявшаяся с помощью стереотаксически ставленных биполярных электродов.

Исследование эффектов~~активации АЭС, изучение действия ДСИД и экстрактов мозга эпилептизированных животных осуществ-

лялось на трех основных группах экспериментальных моделей. Первая группа моделей представляла собой моноочаговые формы ЭпА, а также многоочаговые эпилептические комплексы, формируемые в коре головного мозга животных. Вторая группа моделей воспроизводила особенности генерализованных судорожных проявлений и вызывалась внутрибрюшинным применением различных кон-вульсантов - пикротоксина, коразола, бикукуллина, стрихнина, а также в отдельных сериях исследований - тиосемикарбазида. Хроническая.ЭпА, осуществляемая методом повторных введений конвульсантов - пикротоксина и коразола в подпорогозой дозе (фармакологический киндлинг), представляла собой третью группу моделей' ЭпА.

Генерализованные судорожные припадки воспроизводили с помощью электрошокового раздражения (50 мА, 50 Гц, в течение 0,5 с), системного применения пикротоксина (2,0 мг/кг), коразола (4Q-IOO мг/кг), бикукуллина (3,5-4,0 (/г/кг), тиосемикарбазида (15-25 от/кг) и азотнокислого стрихнина (1,5-2,0 мг/ кг). Коразол, стрихнин, пикротоксин и тиосемикарбазид растворяли в физиологическом растворе, бикукуллин - в дистиллированной воде при рН-3,0 и перзд применением оттитровывали с помощью едкого натра до рН=7,0. Все растворы готовились непосредственно перед введением. Конвульсанты применяли внутри-бршинно в объеме 0,1 мл.

Одиночные эпилептические очаги создавали в различные отделах коры головного мозга кошек или крас с помощью аппликации на неокортекс кусочков фильтровальной бумаги (2x2 мм), смоченных в 0,1-3,0$ растворе азотнокислого стрихнина или и растворе натриевой соли бензилпенициллина, содерхащепо от 20 ООО до 40 ООО ME/мл раствора. Более мощные о~яночные очаги создавали с помощью аппликации 3% раствора стрихнина и концентрированного раствора пенициллина (40 000-50 000 МЕ/мд). Фокально-генерализованная ЭпА воспроизводилась путем аппликации раствора пенициллина концентрацией 70 000-80 000 МЕ/ыл, а также дополнительной провокацией с помощью искусственной гипервентиляции. Определяли латентный период появления эпилептических разрядов в очагах, продолжительность существования

очагов, амплитудно-частотные характеристики спайковой активности.

Многоочаговый эпилептический комплекс формировали путем создания вначале мощного детерминантного очага аппликацией фильтровальной бумаги (2x2 мм), смоченной в относительно концентрированном растворе стрихнина (3 %), в одном из участков орбитальной или сигмовидной извилин. После появления эпилептических разрядов в очаге определяли зоны неокоргекса, в которых регистрировались наиболее выраженные наведенные потенциалы, и формировали в этих участках зависимые спилептические очаги аппликацией менее концентрированного раствора стрихнина (0,1 %). Учитывали амплитудно-частотные характеристики очагов, а также общую продолжительность существования комплекса.

Фармакологический киндпинг воспроизводили у мышей и крыс с помощью внутрибрюшинного повторного введения конвульсантов в первоначально подпороговой дозе. О этой целью использовали введение пикротоксина в дозах 1,0-1,2.мг/кг, а также коразо-ла в дозе 30 ыг/кг. Конвульсанты вводили в объеме 0,1 мл ежедневно в одних и тех же условиях. После введений конвульсантов животных помещали в стеклянную камеру и наблюдали в•течение 30-60 мин. Определяли латентный период первых судорожных проявлений, тяжеса-ь судорог, число животных с клоническими или клонико-тоническими судорожными реакциями.

Элентростимуляционный.киндлинг осуществляли у крыс и кошек с помощью повторных ЭС структур миндалины, в которую предварительно под нембутдловым наркозом (40 мг/кг) вкивдяли изо- • лированные, хроме кончика биполярные нихромовые электроды диаметром 0,15 ш и межэлектродным расстоянием 0,25-0,5 мм по координатам стереогаксического атласа. Для ЭС использовали прямоугольные импульсы продолжительностью 0,25. мс и частотой 60 Гц, подаваемые через радиочастотный выход от электростимулятора.Интенсивность, раздражения подбирали индивидуально до тех "пор, пока в зоне ЭС начинал регистрироваться послеоазряд. Всего осуществлялось от 20 до 25 однократных ежедневных раздражений. Животным контрольной группы в аналогичных услбвиях вживляли биполярные .электроду, которые соединяли с электроети-мулятороы в отсутствие воздействия электрическим током.

Повреждение нейрональных структур образований АЭС достигалось микроиньекцией раствора каиновой кислоты в дозе 0,51,0 мнг, которую вводили в объеме 1-Е мкл с помощью микроииъ-ектора ("¡.'ор", Индия) со скоростью 0,5 мкл/мин. Инъекционную иглу извлекали через 5,0 мин после прекращения введения. Животных дспользовали в опыте через 3 недели после введения кислоты.

Внутримозговые введения препаратов крысам осуществляли по стереогаксичесюш координатам с помощью микрошприца в объеме 1-2 мкл. Препараты вводили в следущих дозах: ДСИП -5,020,0 мкг, субстанция П - 5-10 мнг, иет-, лей-энкефалин, тпт,к - по 10 мкг, экстракты мозга - 15-20 мкг, фракции ЦСШ - 530 нг, налоксон - 10 мкг1.

ЦСЖ у животных получали с помощью субокципитальной пунк- -ции тупоконечной иглой. В части, наблюдений к ЦСЙ добавляли контрикал из расчета I мг/мл и гордокс (I ООО ЕД/мл).

Отделение пептидов от нейротрансмиттеровх осуществляли • путем нанесения лиофилизированных проб ЦСЕ на патроны s&P Cjg по методике Castillo et alí1930) и начальной элюцией аминокислот I % раствором трифтеруксусной кислоты. Сорбированные пептиды элюирозали I % раствором той se кислоты в.смеси метанол-вода (80:20). Собирали фракции по I мл, водные растворы лиофилизировали. В физиологических опытах использовали сухие формы экстрактов, которые растворяли перед введением и применяли из расчета.5-30 нг/крысу. Дня подтверждения пептидной природа.активного компонента ликвор обрабатывали протеоли-тическими ферментами (Hui, lajtha, *i983).

С целью приготовления пелтид-содержащих экстрактов ткани мозга замороженные образцы ткани помещали в гомогенизатор: выдерживали в течение 5 мин в кипящей бане, а затем диспергировали ткань с помощью стеклянного пестика в течение 10 мин. Суспензию охлаждали и центрифугировалл при 10 ООО. об/мин (К-24, ГДР), йадосадочную жидкость отбирали и доводили до рН= 7,0 концентрированным' раствором ашиака. Осадок отделяли фильт

роьанием, полученный раствор лиофилизировали. В опытах исполь--^............qi

хданная часть исследований выполнена совместно со старшим научным сотрудником НШ общей патологии- и патофизиологии РАМН М.Й.Каргановым.

зовали сухую форму экстрактов, которые растворяли непосредственно перед введением в физиологическом растворе.

Хроматографическое разделение ЦЯ- методом БЭК осуществляли на высокоэффективном хроматографе " йИзоа" (Франция) путем нанесения белки-содержащих компонентов, полученных после гель-фильтрации на сефадексе о -50, на колонку ЫсЬезогЪ ЕР-8, ," Епауег " (Германия). Использовали ступенчатый градиент аце-тонитрила в 0,1 % С Р^СООН (время изменения градиента - 1,5 ч) скорость элюции - 3 мл/ыин. Для определения молекулярной массы пептидов ЦСЕ использовали калибровочные данные выхода маркерных соединений с' известной молекулярной массой.

Исследование содержания пептидов осуществляли в мозге животных, подвергнутых киндлингу введениями пикротоксина и перенесших не менее четырех генерализованных судорожных приступа. Подготовка образцов к определению содержания пептидов - ДСИП, метэнкефалина и бета-эндорфина заключалась в лиофилизации образцов ткани'мозга с последующей экстракцией пептидной фракций кипящей 1М уксусной кислотой в.соотношении 1:10 в. течение 20 мин. После охлаждения экстракта его центрифугировали при 3 ООО об/мин в течение 30 мин при температуре 4°С. Полученный супер-нат&чт замораживали и лиофильно высушивали с последующим использованием, для определения эндогенных пептидов..Определение проводили с помощью конкурентного твердофазного иммунофермент-ного метода на 96-луночных полистироловых планшетах. В работб использовали кроличьи моноспецифические'поликлональные антитела с титрами 1:2000, 1:10000 и.1:50000 к мет-энкефалвду, бе-та-эндорфину й ДСИП соответственно. Дня количественного опреде ления пептидов использовали соответствующие калибровочные графики, которые получали применительно к индивидуальным планшетам. '..'..*._•._.;-

Ддя регистрации биоэлектрической активности структур мозга использовали нихромовую или константановую проволоку в лаковой изоляции с диаметром кончика 100 ыкм. Отведение потенциа лов' от коры больших полушарий осуществляли также с помощью шариковых электродов, контактирующих с корой через хлопчатобумажные нити, смоченные физиологическим раствором. Применяли мо но— и биполярное ртведение. Запись биопотенциалов осуществляли на электроэнцефалографах 4-ЭЗГ-З и 16-канальном электроэнцефа-

лографе "Медикор" (Венгрия). X мозговых структур проводили с помощью генератора прямоугольных импульсов ЭСУ-1 с радиочастотным выходом..По завершении экспериментов производили морфологическую верификацию положения кончиков стимулирукщих и регистрирующих электродов, а у животных с разрушениями структур мозга определяли объём повреждения мозга.

Все полученные результаты обрабатывали с помощью общепринятых в медико-биологических исследованиях непараметрических и вариационных методов статистического анализа (Д.Сепетлиев, 1969; Е.В.Гублер, А.А.Генкин, 1973; А.И.Венчиков, 1973; ИЛЬ Ашмарин и др., 1975).

РЕЗУЛЬТАТЫ еКОШШЛЕНТАЛЬШ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБОВДШЕ' . .

I. Исследование влияния ЦОК, полученной в разных условиях активации антизпилептической системы на ЭпА

Х.1. Эффекты ЦСй животных с ЭС иезкечка, а такие животных с генерализованными судорогами на ЭпА у интактных крыс-реципиентов

Применение коразола (60 мг/кг) у животных контрольной группы, которым внутрижелудочново вводили ЦСЖ ложноопрериро-ванных кошек, сопровождалось развитием клонических судорог мышц туловища, а также' клонико-тонических судорожных приступов. Аналогичное введение ЦСЖ кошек после курса ежедневных однократных ЭС коры червя иозжечка (всего-20 ЭС) предотвращало развитие коразол-индуцированных судорог у 3 из 9 животных. У остальных крыс наблюдались единичные клонические судороги мышц туловища и конечностей. Средняя тяжесть судорог была достоверно меньше (Р<0,,02) по сравнению с таковой у животных контрольной группы. ;

В условиях внутрижелудочкового применения ЦСй кошек, перенесших электрошок (ЭШР-ксшзк), а'тахяв ЦСН, полученной у кошек после однократной ЭС корьт червя мозжечка, коразол-индуци-рованныа реакции у интактных крыс-реципиентов характеризовал- ■ лись вздрагиваниями, клонусами-ыкшц конечностей и туловища, а

также клонико-тоническими судорожными приступами у отдельных животных. Выраженность судорог также была меньшей, чем у крыс контрольной группы (Р <0,05),

Задачей отдельной серии экспериментов было изучение' влияния обработки проназой ЦСЖ кошек с однократной ВС мозжечка, а также ЦСЕ ЭШР-кошек на выраженность прот ибо судорожных эффектов ликвора. Судорожные реакции, вызываемые у интактных крыс-реципиентов системным введением коразола (60 мг/кг), после внут-рижелудочкового введения ЦСЖ как ложнооперированных кошек, так и кошек после электрических раздражений,характеризовались кло-ническими судорожными проявлениями мышц туловища и конечностей, а также генерализованными клонико-тоническими приступами у 30-50 % животных. Таким образом, противосудорожное действие ЦСИ устранялось обработкой ЦСй проназой. Сходное блокирование противосудорожного действия ЦК кошек как с ЭС коры мозжечка, так и ЭШР-кошек наблюдалось при системном применении налоксо-на в относительно большой дозе (10 мг/кг). В этих условиях . введение коразола (60 мг/кг) приводило во всех экспериментальных группах к формированию выраженных клонических судорожных реакций, а также генерализованных клонико-тонических .судорог.

' Задачей следующей серии исследований явилось изучение эффектов внутрижелудочкового- применения пелгид-содержадей фракции, выделенной из ЦСЖ кошек контрольной, группы (ложноопериро-ванные животные) и опытных'СЭС— и Э1ИР-) групп,' а -также фракций ЦСЖ, содержащих соли- и нейротрансмиттеры на генерализованные судороги, ■ провоцируемые у крыс системным введением коразола (60 мг/кг). ,В условиях инъекции пептид-содержащей фракции ЦСМ кошек контрольной группы, вызванные коразодом." судороги характеризовались клонико-тоническими судорожными приступами, носив шими у 5 из 9 крыс повторный характер. Аналогичное введение пептид-содержащей фракции ЦСЖ кошек, ^которых провоТуШсьГ ■ ЭС мозжечка, а также ЭШР-кощек, предотвращало развитие генерализованных судорожных цриступов, индуцированных введением коразола. У животных отмечались клонические сокращения мыщц, а средняя тяжесть судорог была достоверно меньше по сравнению с таковой у животных контрольной группы, которым введение кон-вульсанта осуществляли после.внутрижелудоодовой инъекции пеп-

тид-содерзшцей фракции ЦСК ложнодперированных кошек (Р <0,01). Тестирующее применение коразола (60 мг/кг) в условиях применения пептид-содержащих фракций ЦСК животных обеих опытных групп, обработанной проназой, сопровождалось возникновением у всех животных выраженных клонусов, охватывающих передние конечности. Системная инъекция коразола (60 мг/кг) после внутрижелудочково-го введения соли- и нейротрансмигтеры-содержащей фракции животных контрольной группы сопровождалась возникновением интенсивных клошческих судорог мышц всего туловища и передних конечностей. Подобный характер судорожные проявления носили в группах животных, где применение коразола осуществлялось после внутрижелудоч-кового введения соли- и нейротрансмиттеры-содержащих фракций ЦСН кошек с ЭС коры червя мозжечка, а также ЦСЖ ЭШР-животных.

Таким образом, полученные данные показали, что противосу-дорожное действие ЦСЖ кошек с ЭС коры червя мозжечка, а также ЦОК ЭШР-кошек опосредуется факторами пептид-содержащей фракции ЦСН. Пептидная природа действующих факторов ЦСЖ подтверждается блокированием противоэпилептичерких эффектов ЦСН после её обработки проназой. Фракция ЦСЖ, содержащая соли- и нейротрадсмитте-ры, ке изменяла ЭпА, провоцируемую системным введением коразола у животных-реципиентов.

1.2. Эффекты ЦСЖ, полученной после ЭС мозжечка, • а также ЭШР-судорог на ЭпА, индуцируемую у интантных животных-реципиентов применением пикротоксина, бикукуллина и- стрихнина

Пикротоксин-вызвэнные (2,0 мг/кг) судорожные реакции у крыс, которым вводили в желудочки мозга ЦСЖ кошек с ЭС коры червя мозжечка, характеризовались достоверно большим латентным периодом (нэ 70 %) возникновения первых судорожных реакций по сравнению с соответствующим показателем у животных контрольной группы (Р <0,05). У животных наблюдались единичные судорожные вздрагивания и отдельные клонические судор'оги мышц туловища, интенсивность судорог была достоверно меньше (на 65 %) по сравнению с контрольными наблюдениями (Р <0,001). Внутрибргаинное введение пикротоксина (2,0 мг/кг) крысам, которым до этого в желудочки

мозга осуществляли инъекцию ЦОК ЭШР-кошек, сопровождалось возникновением первых судорожных реакций, латентный период которых на 60 % превышал таковой у животных контрольной группы (Р < 0,05). У крыс отмечались судорожные сокращения отдельных мышц, а также кдонические судороги всего туловища, у 4 из 9 животных судороги отсутствовали. Средняя интенсивность судорог была достоверно меньшей (на 71 %), чем в контрольной группе животных (Р <0,001). В условиях' провокации у крыс-реципиентов судорог с помощью бикукуллина (3,5 мг/кг) после внутрижелудочкового применения ЦСЕ кошек с X мозжечка латентный период первых судорог был достоверно большим (на 92 %), чем в контроле (Р <0,01). У 5 из II крыс судороги отсутствовали, а у остальных животных наблюдались судорожные вздрагивания - интенсивность судорожных реакций была достоверно меньше таковой у животных контрольной группы (Р <0,001). Также достоверное увеличение латентного периода (на 46 %) бикукуллин-вызаанных судорог наблюдалось у животных, которым внутрижелудочково. вводили ЦСЖ ЭШР-кошек (Р < 0,05). Интенсивность судорог у животных была на 60 % меньшей, чем в контроле - при этом у крыс регистрировались клонические • судорожные сокращения отдельных груш мышц, а также судорожные вздрагивания (Р <0,01). В условиях внутрибршинного применения стрихнина (1,5 мг/кг), производимого после введения в желудочки ЦСК полученной у кошек как после ЭС мозжечка, так и после элект-'рошока у крыс- реципиентов всех групп регистрировались клонические судороги, переходящие в тоническую судорожную реакцию; изучаемые показатели судорожных реакций не отличались от таковых у • животных контрольной группы.

Таким образом, полученные данные показали, что ЦСЙ кошек, полученная после ЭС мозжечка, а также ЦЩ ЭШР-кошек оказывает .противосудорожное действие на генерализованную ЭпА, индуцируемую у интакгных крыс-реципиентов внутрибркшинным применением пикротоксина и бикукуллина. ЦСУ кошек не изменяла стрихнин-ин-дуцированнуп ЭпА.

1.3. Эффекты ЦСЖ ЭШР-кошек и кошек с ЭС мозжечка , на ЭпА у интактных кошек-реципиентов

Задачей первой серии экспериментов явилось исследование влияния внутрижелудочкового введения ЦСЙ ЭШР-кошек на актив-

ность одиночного эпилептическогооочага, создаваемого в коре головного мозга аппликацией 0,1 % раствора стрихнина. Через 2-4 мин с момента нанесения конвульсанта на заднюю сигмовидную кзвилщу в зоне аппликации появлялись спайковые разряды амплитудой 400-800 мнВ, которые в последующие 5-8 мин достигали ве- • личины 1,7-2,3 мВ; частота генерирования разрядов при этом составляла от 20 до 50 в мин. Подобная устойчивая активность регистрировалась на протяжении 12-17 мин, после чего еще в течение 10-25 мин происходило снижете частоты и амплитуды разрядов в очагах и их шлное исчезновение.

Через 6-8 мин после внутрижелудочковой инъекции ЦСМ ЭШР-кошек отмечалось снижение амплитуды и частоты эпилептических потенциалов соответственно до 0,7-1,2 мВ и 15-25 в мин. В течение последующих 5-12 мин отмечалось дальнейшее уменьшее частоты (до 5-15 в мин) и амплитуды (до 0,3-0,8 мВ) разрядов очага. Eine через 1-2 мин ЭпА в зоне очага отсутствовала. Данный результат наблюдался в 6.из II экспериментов. В этот же период времени у 5 из б животных, которым применяли ЦОК кошек контроль ной группы, регистрировались спайковые разряды, амплитуда которых составляла от 0,6 до 1,5 мВ, частота генерирования - от 15 до 35 в мин.

Таким образом, результаты данных исследований показали противоэпилептическую эффективность ЦСЖ ЭШР-кошек на модели очаговой стрихнин-индуцированной ЭпА.

Нанесение фильтровальной бумажки, смоченной ЦСЖ ЭШР-кошек на зону очага ЭпА в период генерирования в нем устойчивых по амплитуде и частоте спайковых разрядов приводило через 1-2 мин от начала аппликации к выраженному снижению активности очагов, амплитуда которых в этот период составила от ОгЗ до 1,0 мВ, а частота - 10-20 в мин. В течение последующих 2-3 мин происходило дальнейшее снижение активности очагов вплоть до их полного подавления. Прекрещение аппликации ЦСЖ з 5 из ö наблюдений сопровождалось восстановлением спайковых разрядов. Аппликация ЦСЖ ЭШР-кошек после её обработки проназой не приводила к подавлению генерирования эпилептических разрядов.в очагах. В условиях аналогичной аппликации на зону стрихнин-индуцированного очага ЦСН кошек с ЭС мозжечка также' наблюдалось подавление генерирования судорожных потенциалов. Данный противосудоронный

эффект устранялся обработкой ЦСЖ проназой.

Таким образом, результаты данной части исследований показали, что ЦШ ЭШР-кошек, а также ЦОМ кошек о ЭС мозжечна оказывает тормозный противоэпилептический эффект на активность страх нин-индуцированшх очагов ЭпА; данное действие опосредовано пептидными факторами ЦСЖ, так как подавление ЭпА устранялось ■при обработке ЦСЖ проназой.

1.4. Эффекты ЦСЖ животных, полученной после активации других структур-компонентов АЭС на генерализованную ЭпА у интактных крыс-реципиентов

Внутрижелудочковое введение крысам-реципиентам ЦСЖ кошек после ЭС хвостатых ядер вызывало достоверное увеличение латентного периода первых судорожных реакций, индуцируемых введением пикротоксина (2,0 мг/кг) - на 150 % по сравнению с таковым: у животных контрольной группы. При этом у животных-реципиентов отмечалось предотвращение судорожных реакций, а также полное предупреждение генерализованных клонико-тоничес-ких судорожных реакций. Интенсивность судорожных реакций достоверно снижалась (на 73 %)(.Р <0,001) по сравнению с таковой у животных контрольной группы. Противосудорожный эффект ЦСЖ устранялся обработкой ЦСЕ проназой: у животных в этих условиях аналогичное применение пикротоксина вызывало интенсивные клони-ческие и клонико-тонические судорожные реакции.

При внутрижелудочковой инъекции крысам-реципиентам ЦСЖ кошек, которым осуществляли ЗС верхних бугорков четверохолмия, латентный период первых пикротоксин-ивдуцированных (2,0 мг/кг) судорог не отличался от соответствующего показателя у животных контрольной группы (Р> 0,-05). У животных в этих условиях; развивались отдельные вздрагивания, клонические сокращения мышц туловища, а также передних конечностей. Средняя тяжесть судорог была достоверно меньше (на 25 %) таковой у животных контрольной группы (Р<0,05). В условиях внутрижелудочкового применения ЦС5 кошек с ЭС ВБЧ обработанной проназой изучаемые показатели судорожных реакций не отличались от соответствующих показателей у животных контрольной группы (Р> 0,05).

Задачей отдельной серии экспериментов явилось изучение эффектов ЦСЖ ЭШР-кошек, полученной после билатеральной деструк-

ции ВБЧ, на генерализованную пик^отоксин-вызванную (2,0 мг/кг) ЭпА у интактньк крыс-реципиентов. Введение ЦСЖ ЭШР животных с повреждениями ВБЧ не изменяло длительности латентного периода первых судорог у- животных по сравнению с таковым в группе, которой применяли введение -ЦСЕ кошек контрольной группы- •■. У ■тавотных с введением ЦС! после разрушения ВБЧ и ЭШР под влиянием пикрогонсина возникали интенсивные клонические судороги мышц туловища и передних конечностей, а также генерализованные клонико-гонические приступы. В то же время, ЦСЖ, полученная у кошек с повреждениями ВБЧ после ЭС коры червя мозжечка,приводила к достоверному увеличению длительности латентного периода первых пикротоксин-вызванных судорог (Р <0,05), а также снижению интенсивности судорожных проявлений (на 65 %) (Р <0,01) по сравнению с соответствующими показателями у крыс контрольной группы, которым в желудочки применяли ЦСЖ "ложнооперирозан-ных кошек •. Данный противоэпилептический эффект ЦС® блокировался при обработке ЦСЖ проназой. ^

Таким образом, результаты данной серии исследований показали, что противосудорожное действие ЦСЖ ЭШР-кошек блокировалось под влиянием билатерального механического повреждения ВБЧ. Бри этом сохранялось противосудорожное действие ЦСЖ после ЭС мозкечка, "эффектьГ которой устранялись обработкой проназой.

1.5. К идентификации активных факторов ЦС& кошек с X мозжечка

Задачей отдельной части исследований .явилось определение свойств факторов пептидной природы, появлявшиеся в ЦСЖ при активации АЭС и, в частности, структур мозжечка.

Хроматографическое разделение пептидных соединений ЦСЖ контрольных (ложнооперироваяных) животных и кошек с ЭС коры червя мозжечка с помощью метода ВЭШХ показало, что под влиянием ЭС образований мозжечка появляются дополнительные пики на хроматограмме и происходит значительное возрастание представленности пептидной фракции в области выхода маркерных соеди нений, имеющих молекулярную массу менее 14 ООО. На модели генерализованных пикротоксин-индуцировенных (2,0 мг/кг) судорог

у крыс было определено,.что данные вещества при их внутрижелу-дочковом применении предотвращают развитие генерализованных судорожных реакций, снижают интенсивность судорог.

Представляло, интерес изучить механизмы реализации проти-восудорожного действия противоэпилептических факторов ЦСй.- Поскольку было показано блокирование противоэпилептического действия под влиянием большой дозы налоксона (10,0 мг/кг), можно было полагать, что в данном случае задействованы рецепторы дельта и/или каппа типа. Поэтому в отдельной серии экспериментов было изучено противоэпилептическое действие пептидов ЦСЙ в условиях предварительного внутрижелудочкового применения DAD1E . взаимодействующего с дельта опиоидными рецепторами. В условиях введения DADLE (10 мкг)и пептидных"факторов ЦСЛГв желудочки мозга пикротоксин-вызванные судороги характеризовались выраженными клоническими сокращениями мышц туловища и передних конечностей, их интенсивность была достоверно больше таковой в группе крыс с одним введением пептидных факторов ЦСК (Р К 0,01). Одним из подходов к идентификации противоэпилептических факторов было изучение эффектов ЦСЕ на вызванную пикротоксином (2,0 мг/кг) ЭпА после добавления к ней специфических антисывороток к бета-эндорфину, динорфину AI-I3, а также мет-энкефали-ну. Ни в одном из указанных экспериментов не наблюдалось блокирования противоэпилептического действия ЦСЙ.

Таким образом, проведенные исследования показали, что под влиянием ЗС мозжечка в ЦСй кошек наблюдается появление пика, молекулярная масса веществ которого составляет около 14' ООО и • которые оказывают противоэпилептическое действие на модели генерализованных судорог, вызываемых системным применением пикро-токсина у крыс. Эффект подавления ЭпА реализуется с участием' дельта-опиоидных рецепторов и не связан с действием известных пептидов- бета-эндорфина, динорфина AI-I3- и мет-энкефалина.

2. Изучение противоэпилептических эффектов дельта-сон-индуцирующего пептида

2.1. 'Влияние ДСИП на очаги ЭпА, созданные в коре головного мозга кошки аппликацией раствора стрихнина

Через 5-12 мин после нанесения конвульсанта на переднюю сигмовидную извилину в последней регистрировались судорожные

разряда амплитудой 1,5-2,3 ыВ и частотой 20-50 в мин. Одновременно регистрировались наведенные разряды в зоне коры мозга не подвергавшейся действию хонвульсанта амплитудой 200-400 икВ. Как показали контрольные наблюдения, общая продолжительность существования ЭпА в очагах составляла 30-45 мин. В 10 из 12 наблюдений через 7-17 мин после внутривенного введения раствора ДСИП (100 мкг/кг), произведенного через 13-20 мин после начала аппликации стрихнина, в очаге отмечалось снижение амплитуды разрядов до 1,2-1,6 мВ и частоты их генерирования до 14-20 в мин. Одновременно в этот период отмечалось практически полное подавлений наведенных потенциалов. Еще через 5-8 мин амплитуда разрядов в очаге составляла 0,6-1,2 мВ, а частота генерирования - 6-10 в мин. Через 15-30 мин с момента введения ДСИП отмечалось полное угнетение активности эпилептического очага. Продолжительность существования очагов составляла 20-35 мин, что было достоверно меньше, чем в контроле (Р <0,01).

В следующей серии экспериментов исследовали влияние ДСИП на активность многоочагового эпилептического комплекса. Последний создавали путем аппликации относительно слабого раствора стрихнина (0,1 %) на различные участки сигмовидной извилины и концентрированного раствора (3,0 %) на орбитальную или коронарную извилину. При этом амплитуда дегерыинантного очага составляла 2,0-2,5 мВ, зависимых очагов - от 1,0 до 2,0 мВ, а частота генерирования разрядов - 25-40 в мин. Как показали контрольные наблюдения (7 животных), созданный таким образом эпилептический комплекс генерировал устойчивую по амплитуде и частоте ЭпА' в течение 30-35 мин, после чего происходило снижение амплитуда и частоты разрядов в очагах и наблюдался распад комплекса.

В 7 из 10 опытов через 15-20 мин после внутривенного введений ДСИП (100 мкг/кг), произведенного через 20-30 мин после начала аппликации растворов стрихнина, отмечалось снижение частоты генерирования разрядов во всех очагах до 20-30 в мин. При этом амплитуда потенциалов в зависимых очагах снижалась до 0,71,5 мВ. Одновременно отмечалась, рассинхронизация генерирования разрядов в очагах. Еще через 5-10 мин происходило уменьшение амплитуды эпилептических потенциалов в детерминантном очаге до 0,8-1,5 мВ, а также частоты их генерирования до 10-15 в мин.

В этот период наблвдалось танке подавление ЭпА в наиболее отдаленной от детерминантного очага зависимом очаге комплекса. В последующие 3-в мин происходило снижение и полное угнетение ЭпА в зависимых очагах. 3 участке бывшего детеп,динантного очага регистрировались отдельные спайковые потенциалы амплитудой 0,7-1,2 мВ и частотой 6-15 в мин, которые в последующем исчезали. Продолжительность существования комплекса в условиях введения ДСИП составляла 30-45 шн, что было достоверно меньше, чем в контроле - 50-70 мин (Р <0,05).

Таким образом, проведенные исследования показали, что внут ривенное введение ДСИП приводит к угнетению ЭпА очагов, созданных в коре головного мозга кошки аппликацией раствора стрихнина. Противоэпилептическое действие ДСИП отмечалось также в условиях создания многоочагового эпилептического комплекса - модели простейшей эпилептической системы. "

2.2. Влияние ДСШ на судорожную активность при коразодовом киндлинге. Особенности дроти- . восудорожного действия ДСШ • .

Задачей отдельной серчи экспериментов было изучение действия ДСИП на динамику тяжести судорожных проявлений в процессе введений подпороговых доз коразола (30 ыг/кг), а также характер судорожных реакций после перерыва во введениях конвульсан-та.

После первых 5 инъекций коразола тяжесть судорог у животных опытной группы (введение ДСИП в дозе 100 ыкг/кг за 30 мин до применения коразола) не отличалась от таковой у животных контрольной группы (Р>'0,05). Тяжесть судорожных проявлений после 10-й инъекции коразола у животных опытной группы была дос товерно меньшей, чем у 1фыс контрольной группы (соответственно 0,5-0,25 и 1,5±0,4 балла)(Р<0,05). Интенсивность судорог после 16-го введения коразола у крыс опытной группы составляла 0,9^0,3 балла и была достоверно меньшей, чем. у животных контрольной группы (2,9±0,4 балла)(Р <0,01). Введение коразола (30 мг/кг) животным через 2 месяца после последней (16-й) инъекции эпилептогена. приводило к развитию судорог у животных опыт ной и контрольной групп тяжестью соответственно 3,2^0,5 балла

к 2,3±0,6 балла (Р> 0,05). При этом тяжесть судорог у животных опытной группы была достоверно более высокой по сравнению с интенсивность'® судорожных проявлений у крыс этой группы после 16-го введения коразола (Р <0,05).

Таким образом, приведенные данные свидетельствуют о том, что под влиянием введений ДСИП существенно задерживалось развитие генерализованной ЭпА, при этом ДСИП не устраняет повышения судорожной готовности у животных.

• В следующей серии экспериментов было изучено влияние ДСИП на интенсивность судорожных реакций а условиях развившегося коразолового киндлинга. Дополнительной задачей было исследование влияния налоксона на выраженность антиэпилептических эффектов ДСИП. Под влиянием ДСШ (200 мкг/кг), введенного за 30 мин до инъекции коразола (30 мг/кг), отмечалось достоверное уменьшение тяжести судорожных проявлений (Р <0,01) и числа животных с генерализованныш олоническими судорогами передних конечностей (Р <0,025). Судорожные реакции у животных характеризовались вздрагиваниями и отдельными клонусами мышц туловища. В условиях предварительного внутрибрюиинного введения налоксона в дозах 1,0 мг/кг и 10,0 иг/кг тяжесть судорожных реакций, провоцируемых коразолом, составляла соответственно 3,3^ 0,3 и 4,0£0,2 балла.- Судороги, провоцируемые коразолом после внутрибршинной инъекции налоксона (1,0 мг/кг) и ДСШ (100 ыкг/ кг), характеризовались развитием у животных клонических судорожных реакций мышц .туловища'и передних-конечностей, а также отдельными судорожными вздрагиваниями. Средняя тяжесть судорог была достоверно меньшей (Р <0,05), чем в группе животных, которым коразол применяли после введения налоксона (1,0 мг/кг). Внугрибрюшинное применение коразола (30 мг/кг) животным, которым вводили налоксон в дозе 10,0 мг/кг и ДСИП (100 мкг/кг), вызывало интенсивные клошческие и клонико-тонические судорожные реакции, тяжесть которых не отличалась от таковой в группе животных, которым аналогичное введение коразола осуществляли после применения одного налоксона в дозе 10 мг/кг (Р>0,05).

Таким образом, результаты данной части исследований показали, что внутрибршинное применение ДСИП сникает тяжесть кора-зол-индуцированных судорог.у крыс, подвергнутых киндяингу повторными введениями коразола в подпороговой дозе.. Противосудо-

рокное действие ДСИП устранялось применением налоксона в дозе 10 иг/кг.

Изучение зависимости вцра&ешюсги цротавозпидептического действия ДСИП С100 мкг/кг) от интенсивности ЭпА показало, что наиболее выраженное противосудорожное действие пептид оказывает на ЭпА, характеризующуюся клонкческиш и клоншсо-тонически-ыи судорожными реакциями, которые возникали у животных при введении коразола в дозе 60 мг/кг . Под влиянием Д£Ж не изменялась выраженность генерализованных судорог, икдуцируезщх большой дозой коразола (100 ыг/кг).

Исследование динамики црогивоэпилептического действия ДСИП показало, что подавление ЭлА отмечалось в различные сроки после введения пептида - от 5 мин до 24 ч. Выраженность прогиво-эпилептического действия ДСИП в течение этого периода была неодинаковой. Максимальный эффект подавления ЭпА наблвдадся через 0,5-1,0 ч , а также через 24 ч и снижался через 6-9 ч после применения ДСИП. Под влиянием ДСИП уменьшались как поведенческие, так и электрографические проявления судорожной активности, вызываемые подпороговой дозой коразола.

Изучение доза-зависимости цротивоэпилептического действия ДСИП показало, что уже в >зе 1,0 мкг/кг выявляется достоверное увеличение латентного периода первых судорожных реакций, индуцируемых у мышей коразолом в дозе 60 мг/кг. Увеличение дозы пептида до 100 ыкг/кг сопровождалось возрастанием выраженности противосудорожного действия, достоверным снижением тяжести судорог по сравнению с таковой у животных контрольной группы (Р<0,01). При дальнейшем увеличении дозы ДСИПдр 250-500 ыкг/ кг не отмечалось существенного влияния препарата на ЗпА.Введение ДСИП в дозе 1,0 мг/кг приводило к значительному увеличению латентного периода первых судорог и менее выраженному изменению их интенсивности.

Под влиянием ДСИП наблюдалось усиление противосудорожного действия прогивоэпилептических препаратов и никотинамида. Тан, в опытах на крысах реланиуы в дозе 0,1 ыг/кг существенно не влиял на ЭпА, вызываемую коразолоы (40 мг/кг), а в дозе 0,5 мг/кг значительно уменьшал интенсивность судорог, предотвращал генерализованные судорожные припадки. Сочетанное применение ре-

ланиума (0,1 мг/кг) и ДСШ (100 мг/кг) сопровождалось значительным снижением интенсивности судорог по сравнению с раздельным применением препаратов, которая соответствовала по своей выраженности таковой при введении реланиума в дозе 0,5 мг/кг. Введение ДСИП, реланиума в дозе 0,5 мг/кг полностью предотвращало развитие судорог у животных. В условиях введения фенобарбитала (7,0 мг/кг) наблюдалось достоверное увеличение латентного периода первых судорог по' сравнению с контролем. Введение фенобарбитала в сочетании с ДСИП сопровождалось выраженным удлинением периода первых судорожных проявлений, а также значительным снижением интенсивности судорог, тяжесть которых была достоверно меньшей, чем при введении одного фенобарбитала (Р < 0,01).Совместное введение ДСИП и никотинамида в дозе 250 мг/кг оказывало более выраженный прогивосудорожный эффект по сравнению с введением никотинамида в дозе 500 мг/кг или одного ДСИП. Также более выраженное противосудорожное действие отмечалось при сочетаний ДСИП и никотинамида в дозе 500 мг/кг; при этом ' полностью предотвращались генерализованные приступы.

Таким образом, приведенные данные свидетельствуют о зависимости противосудорожного действия ДСИП от его дозы, времени с момента применения пептида, тяжести судорожных проявлений; под влиянием ДСИП усиливалось противосудорожное действие реланиума и фенобарбитала, а также никотинамида.

2.3. Влияние внутримозговых введений ДСШ на генерализованную ЭпА у крыс

Внутрибрпшшное применение пикротоксина (2,0 мг/кг) крысам, которым в ретикулярную часть черной субстанции (РЧС) билатераль но вводили ДСИП (10 мкг)»вызывало первые судорожные проявления, латентный период которых был достоверно большим (на 53,5 %) по сравнению,,с аналогичным показателем в контроле (Р <0,001). У животных наблюдались судорожные вздрагивания, а также нлоничес-кие судороги мышц туловища и передних конечностей. У 3 из 8 крыс отмечались генерализованные клонико-тонические судорожные приступы. Тяжесть судорог была достоверно меньшей (на 2С$), чем у животных контрольной группы (Р <0,05). -

Внутрибршшинное применение пикротоксина (1,0 кг/кг) у шшдлнн-говых крыс после билатерального введения в РЖ ДСИП (10 мкг) приводило через 14-20 гон е наневга введения конвульсанта к возникновению судорожных вздрагиваний у о из о црыи; латентный период первых судорог был достоверно большим (на 23 %) по сравнению с таковым у животных контрольной группы (Р <0,001). Судорожные реакции характеризовались вздрагиваниями, а также клоническини сокращениями мышц туловища у 2 из 5 животных. Средняя тяжесть судорожных проявлений у крЦс ■ была достоверно меньшей (на.60 %)., чем у животных контрольной группы (Р < 0,001). Применение коразола (50 мг/кг) б аналогичных условиях введения ДСШ (10 мкг в РЧС) сопровождалось развитием судорог, латентный период которых был достоверно болышш, чем в контроле, а интенсивность судорог - достоверно меньшей (Р <0,01). У животных в этих условиях регистрировались единичные вздрагивания и клонические.сокращения мышц туловища. Внутринигральное введение ДСИП не изменяло характер клоншсо-тонических судорожных реакций, индуцируемых у крыс системным введением стрихнина (1,5 мг/кг).. В условиях внутригштокампального.применения ДСИП (10 мкг) не изменялись пикротоксин-индуцировакные (2,0 мг/кг) судороги у интакть х животных. Аналогичное применение ДСИП у животных, подвергнутых киадлингу,,вызывало достоверное удлинение латентного периода судорог (Р <0,01).

Таким образом, приведенные данные показали, что внутринигральное введение ДСШ1 вызывает снижение судорожных проявлений, индуцируемых у ингактных жиеотных внутрибрюшинным введением судорожной дозы пикротоксина, а также коразола и у киндлин-говых животных - применением тестирукщей дозы.пикротоксина. Введение ДСИП в РЧС не оказывает влияния на генерализованные судороги, вызываемые применением стрихнина,.

В отдельной серии исследований было изучено влияние внут-ринигрального введения ДСИП на ЭЭГ-эпилептиформные проявления, индуцированные системным применением пикротоксина (2,0 мг/иг). Инъекцию пептида осуществляли в условиях генерирования в исследуемых структурах мозга устойчивой ЭпА частотой разрядов 0,52,0 в с и их ашлитудой от 200 ыкВ до 1,0 мВ. Через 3-7 мин после введения ДСИП (10 мг/кг) в РЧС в 4 из 6 наблюдений отме-

чалось подавление спайковых разрядов в коре и подкорковых структурах мозга, в которых в этот период регистрировались спайк-волновые комплексы.длительностью-2-4 с и с частотой потенциалов от б до 12 в с, амплитудой отдельных разрядов 200500 мкВ. В этот период в коре головного мозга отмечались спай-ковые разряды амплитудой от 200. до ООО мкВ и частотой 10-50 в мин. Еще через 6-8 мин во всех образованиях мозга регистрировались комплексы спайк-волновых потенциалов длительностью от 2 до 6-7 с, величиной отдельных разрядов 0,5-1,0 мВ. Подобная активность наблюдалась еще на протяжении 3-5 мин, после чего в течение 10-25 мин отмечалось снижение выраженности и частоты эпилептических разрядов и их полное исчезновение. В 6 из 7 контрольных наблюдений в этот.период времени регистрировались генерализованные судорожные разряда.

Таким образом, приведенные результаты показывают, что введение ДСИП в РЧС вызывает подавление генерализованной ЭпА,индуцируемой в структурах мозга системным применением пикроток-сина.

2.4. Эффекты введения ДСИП в P4G на генерализованную ЭпА.'в условиях повреждения хвостатых ядер и верхних бугорков четверохолмия

В' данных исследованиях использовали животных, которым за три недели до наблюдения в ростральные отделы хвостатых ядер или в глубокие слои ВШ: вводили каиновую кислоту. Животным контрольной rpjmnbi в аналогичных условиях осуществляли билате-' ральное введение в РЧС физиологического раствора. Применение пикротоксина (2,0 мг/кг) у крыс с повреждениями хвостатых ядер, которым в РЧС билатерально применяли ДСИП '(10 мкг), вызывало первые судорожные вздрагивания, латентный период которых был достоверна болыюш(на.38,5. чем у животных контрольной группы (Р <0,01). В этих условиях' у животных регистрировались клонйческие судороги приступообразные клоническиё судорожные сокращения мышц передних конечностей, а" также у 2 крыс из 7 развился клонико-тонический судорожный приступ. Средняя тяжесть судорожных проявлений.была достоверно меньшей (на 20 %) (Р.<0,05), чем у животных контрольной группы. Введение пикро-

токсина (2,0 ыг/кг) крысам с -билатеральным повреждением ЕБЧ, которым в РЧС вводили ДСИП (10 ыкг), вызывало судорожные вздрагивания у животных, латентный период которых не отличался от такового у крыс контрольной группы (Р> 0,05). У животных регистрировались судорожные вздрагивания, клонические сокращения мышц туловища, передних конечностей, а также у 4 из 7 крыс -генерализованные клонико-тонические судорожные приступы. Тяжесть судорог не отличалась от аналогичного показателя у крыс контрольной группы (1?^ 0,05).

Таким образом, приведенные данные показали, что билатераль ное повреждение хвостатых ядер с помощью каиновой кислоты не изменяло эффекта угнетения пикротоксин-индуцированной генерализованной ЭпА, наблюдаемого при введении в РЧС ДСИП. В то же время, билатеральное повреждение ББЧ блокировало, противосудо-рожное действие внутринигрального введения ДСИП в аналогичных условиях провокации 'ЭпА.

2;5. Противосудорокные эффекты внутринигрального-введения ДСИП в условиях модуляции активности нейроыедиаторных систем мозга

Внутрибршшнное применение пикротоксина животным с введением ДСИП (10 мкг) в РЧС и внутрижелудочковой инъекцией атропина (50 мкг) сопровождалось развитием хлонических судорог туловища и передних конечностей, интенсивность судорожных проявлений бьша достоверно большей, чем у животных с одним введением ДСИП (Р <0,05), но оставалась меньшей, чем в соответствующей контрольной группе животных, которым применяли один атропин (Р<0,05). Аналогичное введение пикротоксина крысам, которым применяли ДСИП в РЧС и внутрибршинно вводили галоперидол (3,0 ыг/кг) сопровождалось возникновением первых судорожных проявлений, латентный период которых был достоверно большим по сравнению с таковым в группах как с одним внутрибрюшинныы применением галоперидола, так и с внутринигральным введением ДСШ (Р<0,05). У 3 крыс судороги отсутствовали, а у остальных 4 животных в этих условиях регистрировались судорожные вздрагивания - Интенсивность судорог была достоверно меньше, чем у

крыс указанных групп (Р<0,01). ЭпА, провоцируемая пикротокси-ном у животных с внутрибршинным введением иохимбкна (1,0 мг/кг) и ДСИП в РЧС (10 мкг), характеризовались сокращениями отдельных групп мышц, а также судорожными вздрагиваниями - интенсивность судорог была достоверно меньше по сравнению с таковой у животных соответствующей контролоной группы (Р<0,001). В условиях внутрибрюшинного применения налоксона (1,0 мг/кг) и внутринигрального введения ДСИП под влиянием пикротоксина у животных возникали интенсивные клонические судороги мышц туловища и конечностей и у 2 из 6 животных наблюдались'клонико-то-нические судорожные приступы. Интенсивность судорожных проявлений не отличалась от таковой у животных контрольной группы,которым вводили один нешоксон (1,0 мг/кг)(Р >0,05).

Таким образом, приведенные данные показывают, что противо-судорожные эффекты введения ДСИП в РЧС устранялись налоксоном, усиливались галоперидолом и иохимбином.

3. ЭЭГ-изменения, вызываемые экстрактами мозга киндлинговых животных. Эффекты на ЭпА^'^швот^ ных-реципиентоJ

Задачей первой' серии экспериментов было исследование ЭЗГ-изыенений при аппликации на кору головного мозга кошек кристаллической формы экстракта (20-40 мкг), полученного из ыозга крыс с коразол-индуцированным киндлингом. Нанесьние экстракта на кору мозга сопровождалось через 3-7 мин с момента начала аппликации появлением спай::овых разрядов амплитудой 0,3-1,0 мВ, возникающих с частотой от 3 до 15 в с. Одновременно отмечалось появление острых волн амплитудой от 400 до I ООО мкВ, чезтота генерирования которых составляла от 1-2 до 5-7 в с. Указанные эпилептические потенциалы были сгруппированы в "пачки" разрядов, имевших длительность о" 5 до 20 с и возникавших с частотой 1-5 в мин. Через 40-60 мин от момента нанесения экстракта происходило снижение амплитуда спайковых потенциалов до 200-400 мкВ и частоты их возникновения до 1-5 в с, величина медленных волн в этот период составляла оггвОО до 800 мкЗ, частота генери рования - 1-4 в с. Одновременно отмечалось снижение продолжи-

гельноети периодов возникновения групп разрядов до 3-10 с и частоты их возникновения до 1-2 в мши Еще через 10-20 мин происходило полное исчезновение эпилептических разрядов. Указанный результат — появление зпилспткформких ЭЭР-кэмененчй при аппликации на неокортекс кристаллического экстракта мозга кинд-линговых животных отмечался у 7 из 9 животных, в то время как ни в одном случае (8 наблюдений) нанесение на кору головного' мозга экстракта мозга животных контрольной группы не сопровождалось появлением в ЭЭГ эпилептиформных изменений (Р <0,05).

Таким образом, приведенные данные показали, что аппликация на кору головного мозга интактных кошек экстрактов ыозга крыс, подвергнутых киндлингу повторными введениями коразола, вызывает появление эпилептиформной активности.

В следующей серии экспериментов было изучено влияние внут-рижелудочкового введения экстрактов мозга киндлинговых щэыс (100 мкг) на ЭЭГ интактных крыс-реципиентов. Через 2-4 мин с момента осуществления инъекции экстракта в ЭЭГ регистрировались спайковые разряды амплитудой от 200 до 500 мкВ и частотой от 5 до 2и в мин, возникавшие у 4 из б животных вначале в гиппокам-пе, а затем распространявшиеся в'другие структуры мозга - сен-сомоторную кору и хвостатое ядро. Через 8-12 мин с момента применения экстракта у животных регистрировалась высокочастотная синхронизированная активность вначале в гиппокампе, а затем в остальных исследуемых образованиях мозга. Амплитуда судорожных потенциалов при этом составляла в гиппокампе от 450 до 700 мкВ, в других зонах мозга - от 200 до 400 мкВ. После прекращения периода генерализации ЭпА в течение еще 5-10 с в 3 из 6 случаев в зонв гиппокампа продолжали регистрироваться синхронизированные эпилептические потенциалы. Эпилептические разряды в гиппокампе наблюдались еще на протяжении 5-8,5 мин, после чего в течение 6-17 мин отмечалось снижение их амплитуда, а также частоты генерирования и полное исчезновение. Указанные эпилептоген-ные эффекты экстрактов устранялись после их обработки проназой, что свидетельствует о пептидной природе действующего вещества экстрактов.

Изучение влияния внутрибршинного введения экстракта мозга киндлинговых животных (50 мг/кг) на ЭпА, вызываемую коразо-лоы (60 мг/кг) у мышей, показало достоверное уменьшение латент-

ного периода судорожных реакций (на 46 %), увеличение числа животных с генерализованными, клонико-тоническши судорогами, их средней тяжести (на 35 %) и легальности по сравнению с аналогичными показателями при введении экстрактов мозга животных контрольной группы- Предварительное применение налоксона (1,0 мг/кг) устраняло указанные эффекты экстракта. Введение экстракта мозга киндлинговых животных, обработанного проназой, не вызывало указанного . _1^оШыштагаеск<5го ~ - эффекта. Под влиянием экстракта мозга киндлинговых животных отмечалось уменьшение на 14,4 % продолжительности латентного периода первых судорожных реакций, индуцируемых пикротоксином, а также увеличение Hà 66,6 % их тяжести, что достоверно отгччалось от аналогичных показателей у животных соответствующей контрольной группы (Р < 0,05). Сходные проэпилептнческие эффекты на коразол-индуциро-ваннуга ЭпА отмечены в условиях применения у животных-реципиентов экстрактов мозга крыс с кинддингом, вызванным повторными введениями' пикротоксйна, а также ЭС миндалины у копек.

Таким-образом, проведенные исследования показали, что экстракты мозга киндлинговых животных повышал? судорожную чувствительность мозга животных-реципиентов.. Данный эффект наблюдается у различных видов животных.

В следующих сериях исследований было изучено влияние экстрактов различных отделов мозга на ЭпА - животных-реципиентов,с целью определения участка образования эндогенных эпилеп-тогенных соединений. Показано, что при введении коразола (35 мг/кг) в условиях внутрижелудочкового применения экстракта вентральных отделов среднего.мозга (ВОСМ) киндлинговых животных (20 мкг) латентный период первых судорожных проявлений составил.151 - 24 с, что было достоверно меньше (на 47 %) по сравнению с тяжестью судорог у крыс, которым введение коразола осуществляли.после внутрижелудочковой инъекции экстракта ВОСМ крыс-контрольной группы (Р<0,05). Средняя тяжесть судорог составляла 3,4Î0,4 балла, что ■ также было достоверно больше (в 2,8 раза) по сравнению с тяжестью судорог у животных контрольной группы (Р <0,01). В условиях внутрижелудочкового введения экстрактов ^остального мозга" животных, подвергнутых киндликгу (20 мкг)»изучаемые показатели не.отличались от тако-

вых в группе животных, которым введения коразола осуществляли после аналогичной инъекции экстракта (20 мкг) "остального мозга" контрольных крыс (Р >0,05).

Таким образом, результаты данной серии экспериментов покатали, что ьоной образования эпилептогенных факторов - эффекторов эпилептической системы при киндлинге является ЮСЫ -экстракты данной зоны мозга повышают судорожную готовность животных-реципиентов.

Задачей следующей серии исследований было изучение содержания пептидных веществ в образцах ткани ыозга (ЗОСМ и гиппо-кампе) животных, подвергнутых киндлингу с помощью пикротоксина и крыс контрольной группы. Проведенные исследования показали, что в условиях фармакологического киндлинга наблюдается снижение содержания J-эндорфина до 0,405^0,06 нмоль/мг (на 95 %) в структурах ВОСМ и до 2,62±0,13 нмоль/ыг (на 83 %) в образованиях гиппокаыпа (Р.СО,001). Содержание ыет-эькефалина также снижалось в указанных образованиях соответственно до 3,58-0,26 (на 82 %) и 11,72-1,7 нмоль/мг (на 72 %)(? <0,001). Уровень ДСЛП б BOC2Î уменьшался до 0,077^0,01 нмоль/мг (на 81 %) и в гиппокампе - до -0,5710,06 нмоль/мг (на 63 %)(Р <0,001).

Таким образом, приведенные данные показывают, что в условиях фармакологического киндлинга у крыс отмечается снижение содержания ^-эндорфина, мет-энкефалина и ДСШ в структурах ВОСМ и г»шпокампа.

ВЫВОДЫ

I. Структуры мозга, активация которых с помощью электрических стимуляций или индуктивно- в результате развития эпилептического синдрома, йриводит к ограничению и подавлению эпилептической активности составляют антиэпилептическуз систему (АЭС). К ним относятся образования мозжечка, хвостатые ядра, верхние бугорки четверохолмия, каудальное ретикулярное ядро моста.Про-тивоэгшлэптический эффект АЭС реализуется трдьссинаптически и в результате высвобождения в ЦЗЖ гуморальных факторов, оказывающих штиэпилептическое действие. Характер осуществления про-тивосудорожного эффекта АЭС, участие в его'реализации отдельных структур системы определяете типом эпилептического синдрома,. ■ свойствами датерыинантной структуры и мощностью генерируемого возбуждения.

2. Появление гуморальных соединений в ЦСЖ, как результат активации АЭС, представляет собой ввдонеспбцифичеекий процесс. Противоэпилептичесними факторами ЦСЙ являются пептиды, действие ¿.оторых устраняется обработкой проназой, применением большой дозы налоксона (10 мг/кг). Молекулярная масса этих соединений составляет около 14 ООО, их эффект осуществляется с участием дельта-опиоидных рецепторов. Внутрижелудочковое зведение пептидов животным-реципиентам приводи', к подавлению генерализованных остры, и хронических судорожных реакций, предотвращает развитие клонико-тонических судорог и подавляет разряды эпилептических очагов в норе головного мозга.

3. Индуктивное возбуждение образований мозжечка в результате развития генерализованного эпилептического синдрома приводит к высвобождению в ЦСлС пептидных соединений, обладающих противоэпидемическим действием. Их введение животным-реципиентам подавляет генерализованные и фокальше формы эпилептической активности, вызываемой•различными эпилептогенамк; данный эффект устраняется проназой и применением налоксона в дозе 1С мг/кг.

4. Возникновение у развитие" эпилептической активности при фармакологическом кищуганге обусловлено снижением активности АЭС, в частности механизмов, обусловленных дельта сон-индуци-рующим. пептидом: при пикротоксин-индуцированном'киндлинге отмечается снижение содержания ДСИП в образованиях вентральных отделов среднего мозга. В межприступном периоде у киндлинговых животных отсутствие судорожных проявлений связано с компенсаторной активацией АЭС и появлением в ЦСЖ пептидных соединений, действие которых блокируется проназой и налоксоном в дозе 1,0 мг/кг. .; ' -

5. ДСИП оказывает противсэпилептическое действие, которое отмечается при его системном применении з условиях моно- и многоочаговой формы эпилептической активности, вызванной в коре головного мозга, а также в условиях хронической эпилепгизации • мозга - фармакологического киндлинга и острых генерализованных судорог.

6. Противосудорожное действий ДСИП характеризуется видо-неспецифичностью, значительной продолжительностью эффекта, за-

висимостыэ его выраженности от особенностей функционального механизма гиперактивной структуры, а также мощности эпилептической активности и дозы пептида. Длительность антизпилептическо-

го эффекта, вызванного ДОИЛ, свидетельствует о его важной роли в индукции активности АЭС.

7. Сочетанное применение ДСИП и противозпилептических препаратов (фенобарбитала и диазепама) увеличивает их антиэпилептические эффекты при генерализованной эпилептической активности. Под влиянием пептида усиливается цротивоэпилептическое действие никотинамида, обладающего пративосудорожкыми свойствами. Данный эффект отмечается в условиях генерализованной и фокальной форм эпилептической активности у животных разных видов.

в. В реализации противоэпилептических эффектов ДСИП важную роль играет ретикулярная часть черной субстанции - наиболее ыощкай ГМКергический отдел мозга. Бнутринигральное введение пептида сопровождается подавлением поведенческих и электрографических проявлений эпилептической активности.

9. Противосудорожное действие внутринигрального применения ДСИП обеспечивается модуляцией нейромедиаторных механизмов мозга: усиливается галоперидолоы и йохимбином, устраняется налон-соном, атропин не изменяет выраженности противосудорожных эффектов. Данное действие ДСИП реализуется с участием верхних бугорков четверохолмия, разрушение которых блокирует противосу-доролшые эффекты введения пептида в ретикулярную часть черной субстанции.

10.При фармакологическом и электросгимуляционном киндлинге в ткани мозга животных выявляются факторы, обеспечивающие повышение судорожной готовности мозга к действию коразола и пикроток-сина. Внугримозговое и системное введение экстрактов мозга крыс со сформированным кинддингом вызывает,видонеспецифическое повышение судорожной готовности у животных-реципиентов. Отмеченные эффекты не возникают гри инкубации экстрактов с проня-зэй, а также при введении налоксона в дозе 1,0 мг/кг. Результаты свидетельствуют о пептидной природе действующих факторов и участии мю-опиоидных рецепторов в опосредовании их действия. Местом накопления пептидных соединений являются вентральные отделы среднего мозга.

СПИСОК ПЕЧАТНЫХ. РАБОТ И ИЗОБРЕТЕНИЙ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Влияние активации медленноволнового сна и бодрствования на эпилептическую активность в коре головного ьюзга // Матер. Х2Г съезда Всес.физиол. общества им.И.П.Павяова: Тез. докл. Кишинев, 1987T.I. - С.156-157 /в соавт. с Р.Ф.Макуль-кинш и А.А.Шандрой;/:.

2. Влияние повреждения и активации ряда структур мозга на судорожную активность // Там же-. - С. 158-159 /в соавт. с Р.Ф.Макульуиньм и А.А.Шандрой/.,

3. Моделирование паркинсонического синдрома путем введения каиновой кислоты в хг.остатые ядра мозга // Бал. эксперим;. биологии я" медицины. - 1987. - T.I03, ?? 6. - С.650-653 /

в соавт. с ГЛ.Крьгаано'вским, А.л.Шандрой, Р.Ф.Макулькиным, В.С.Рожковш:/.

4. Влияние пептида дельта-сна на эпилептическую активность в коре большого мозга крыс и кошек // Бюл. эксперим. биол. и мед. - 1987. , Т.Ю4, №11. - С.582-585 /в соавт. с Г.H.Крьжановским, А.А.Ландрой, М.Н.Карповой, И.И.Михатевой, В.Т.Ивановык/.!

5. Протйвосудорожные свойства ликвора при активации антиэпилептической системы мозга // Вюл.эксперим.биол. и мед. -1988. - Т.106, №8. - С.146-149/ в соавт. с Г.Н.Крьшдаовскмл, А.А.Шандрой/.; , •■■■'.■

'.6. Роль нейропептидов в патогенезе паркинсонического синдрома // Труда 5-го Всес.съезда геронтологов и гериатров. -Тбилиси, 1988.. - T.I. -_Ç.I59 / в соавт. с А.А.Шавдрой,-Р.Ф.Макуль киным и А.М.Мазарати/.!

... 7.'Противосудорганое влияние дельта сон-яндуциругааего пептида (ДСИП) и механизмы его осуществления// Тез .докладов 2-й Всес.конф. по нейрокаук?ш._- Киев, 1938. - С. 158 / в соавт. с А.А.Шандрой, А.А.Маэ$рати/.! -

8. Влияние пептида дельта-"сна.на судорожную активность при коразоловом.киндлинге //Бюл.эксперим.биол. и кед. - 1988.-T.I06, 9. - С.269-271 / в соав?. с А.А.Шандрой, Г_._Н.Крыжанов-ским, Р.Ф.Макулькиным, И.И.Михалеьой, В.Т.Ивановым/.

... 36

9. Киндлинг как модель формирования эпилептической активности '// Успехи физиол. наук. - 1968. - T.I9, № 4. - С.12~32_ / в соазт. с Г.Н.Крыжашвским, А.А.Шаздрой и Р.Ф.Макулышкш/J

10.Влияние дельта сон-ждуцирувдего пептида (ДСШ) на активность эпилептических нейронов // йпгегратшная дгдагельвость нейрона: Молекулярные основы.' Матер. Мевд.еиш., поев. 90-ле- . тию со дня рожд. Б.К. Анохина,. - 1L, 1988. - С. 132-133 / в соазт с А.А.Шавдрой, А.И,Ыазарати/.

II-Поведенческие нарушения при формировании пшераютшшх детерминантных структур в- с^риатуиег // Стриаркая скстета в норме и патологии. Матер. 4 Всес. сшт. - Симферополь, 1966.-С. 132-133 / в соавт. с АЛ.111аядрой, Г.Н.Крдаановсшда, P.S.Ma-кулькинкм, А.М.Мазарати/.

12. ШЬе Influence of slow wave sleep on. tbe generalisation of epileptic activity in the cerebral cortex // EeuroMology of sleep-wakefulnsss cycle.- Tbilisi, 1988. - P. 307-514;/.

/ в соавт. с Г.Н.Крыжановским, Р.Ф.Ыакулькиным, А.А.Шавдрой.

13.Влияние дельта сон-индуцирующего пелетида, противосу-дорожных препаратов, никотинаыида на генерализованную судорожную активность //'Бюд.экспериы.биол. и мед. - 1989* - T.IQ7,

J? 2. - С.211=214 / в соавт. с А.А.Шандрой, А..М.Мазарати, Р.£. Макулькиньш/,

14.Влияние низкочастотной электрической стимуляции зубчатого ддра мозжечка на очаги эпилептической активности JJ Па-тол. 4изиол. и экспериы._ терапия. - 1989. - Я 3. - С.24-28 /

в соавт. с 'А.А.1|1андроЙ:/•

15. Antipileptic properties of cerebrospinal fluid after ectivatioii of the entiepileptic system of tbe brain // Epilepsia . - -1989. - V.30, H 5« - P. 631 - 633/.

/ в.соавт. с Г.Н.Нрыжсновским, А.А.Шандрой, М.ЮЛСаргановым.,

16. Heuropbyeiological aspects of pharmacological kindling // 18-th Int.Epilepsy Con<5rees..— Sss Dehli, 1989.-P.414 / в соазт. с А.А.Шандрой, А.Бандиопадяем'/.

17.Роль черной субстанции в противосудорожных и антиагрессивных эффектах диазепама при фармакологическом киндлинге // Нейрофизиология. - 1990. - Т.22, К» 4. - С.482-487 / в соавт. с