Автореферат и диссертация по медицине (14.03.05) на тему:Фармакология исследования мази "Фладекс" - нового растительного препарата для комплексной терапии дерматозитов

МІНІСТЕРСТВО ОХОРОНИ ЗДОРОВ'Я УКРАЇНИ ОДЕСЬКИЙ ДЕРЖАВНИЙ МЕДИЧНИЙ УНІВЕРСИТЕТ

■) <,;!

• ■ ВАСИЛЬЄВА Людмила Мнколаїппа

УДК 1615.322:615.262]. 015:616.5-08

ФАРМАКОЛОГІЧНІ ДОСЛІДЖЕННЯ МАЗІ 'ФЛАДЕКС' -НОВОГО РОСЛИННОГО ПРЕПАРАТУ ДЛЯ КОМПЛЕКСНОЇ ТЕРАПІЇ ДЕРМАТОЗІВ

14. 03. 05. - фармакологія

- Автореферат дисертації на здобуття наукового ступеня кандидата біологічних наук

Одеса - 1997

' Дисертацією є рукопис

Робота виконана в Державному наукового центрі лікарських засобі Державного комітету медичної та мікробіологічної промисловості

Науковий керівник: доктор біологічних наук

МАСЛОВА Наталія Федорівна Державний науковий центр лікарських засобів, завідуюча лабораторією фармакології ферментний препаратів та інгібіторів

Офіційні опоненти:

Доктор медичних наук, професор ДЄМІДОВ Володимир Михайлович Одеський державний медичний університет, кафедра загальної хірургії

Кандидат біологічних наук ПАВЛОВА Олена Семенівна

Український НДІ медичної реабілітації та курортології, провідний науковий співробітник клініко-діагностичної лабораторії оцінки ефективності використання фізичних лікувальних засобів

Провідна установа: Українська фармацевтична академія

МОЗ України, м. Харків

Захист відбудеться "//?" // 1997 року о ^ годині

засіданні спеціалізованої вченої ради Д.41.600.01 при Одеськ державному медичному університеті (270100, м. Одеса, п] Валіховський, 2)

Автореферат розіслано "_______"________________1997 р.

З дисертацією можна ознайомитися у бібліотеці Одеси державного медичного університету.

Вчений секретар спеціалізованої ради, кандидат медичних наук,

доцент ( Рожковська Н. №

ЗАГАЛЬНА ХАРАКТЕРИСТИКА РОБОТИ

Актуальність проблеми. Проблема раціональної місцевої терапії іахворювань шкіри є однією з актуальних в дерматології. Провідними іатологічним ознаками захворювань шкіри є запалення, порушення І і лі сн ості шкірних покровів та больовий синдром. Невирішені питання їтіології і патогенезу захворювань шкіри стримують розробку шдіональїгих методів лікування цієї патології. Крім того, на сьогодні >днією з найбільш важливих є проблема "екологія та шкіра", іесприягливі зміни екологічного середовища створюють Пфедумови для юзвитку нової патології шкіри, яка протікає під виглядом токсикодермії. [ютодерматитів та інших відомих дерматозів алергічного характеру. За іаними В О 03, алергічні захворювання шкіри складають від 20 до 70 % «ред загальної алергічної захворюваності (Кулага В.В., 1988;

4ашкилейсон Л.А., 1990; Зайченко A.I., 1990).

Слід зазначити, що в загальній структурі дерматологічної патології іначно підвищилась питома вага вірусних дерматозів, серед яких гайбільш розповсюджені обрісник пухирчатий та кружлястий (Ісаков

З.А. та співавт., 1991; Киямов Ф.А.; Касимов Н.К., 1991; Федоров С.М. •а співавт., 1994 та інш.).

В Україні арсенал препаратів для місцевої терапії захворювань шсіри, в т. ч. й вірусного походження, представлений лікарськими іасобами, які містять в основному синтетичні хіміотерапевтичні або іитостагичні сполуки. Аналіз науково-інформаційної літератури іасвідчив, що наявність вказаних препаратів за кордоном та в країнах ПН Д замало відрізняється від становища в Україні. Незважаючи на :фекгивність, їх застосування є обмеженим внаслідок розвитку вагомих іобічних реакцій, які мають місцевий або системний характер (Gilard, 989; Klarsfeld, 1993; Голишева М.А. та співавт., 1991 та інш.).

Більшість з дозволених до застосування в Україні м'яких іікарських форм для місцевого використання в дерматології (мазі, іініменти, креми та інш.) виробляються за кордоном. В той час, як ^країна володіє величезними ресурсами лікарської рослинної сировини, і країні в недостатньому ступені розвивається виробництво препаратів Літохімічної природи. Перевагами фітопрепаратів є їх низька токсичність а можливість тривалого застосування без суттєвих побічних явищ, що юобливо важливе в дерматологічній практиці у зв'язку із переважанням ронічних форм захворювань шкіри (Кулага В.В., 1988; МашкилейСон

І.А., 1990; Н. Stephen, 1992; Gillard, 1989).

Враховуючи викладене, актуальним га доцільним для вітчизняної іхорони здоров'я є створення нового оригінального лікарського засобу юслшшого походження - мазі "ФЛАДЕКС" - для дерматологічної Ірак тики. Препарат володіє протизапальною та ранозагоюючою дією, інеболюючим ефектом, протиалергічними та десенсибілізуючими

властивостями, протигерпесною активністю, тобто, тим комплексом фармакотерапевтичних ефектів, який необхідний для лікування більшості дерматозів.

Зв'язок роботи з науковими програмами. Дисертація виконана згідно з планом науково-дослідних робіт Державного наукового центру лікарських засобів по проблемі "Пошук та створення нових лікарських засобів та форм з рослинної сировини" (№ держ. реєстрації 0084205).

Мета і задачі дослідження. Метою даної роботи є теоретичне та експериментальне обгрунтування розробки та застосування в медичній практиці нового рослинного засобу для комплексного лікування дерматозів різноманітної етіології - мазі "ФЛАДЕКС".

Виходячи з зазначеної мети, були поставлені такі задачі:

1. Вивчити фармакологічні властивості (протизапальний,

ранозагоюючий, знеболюючий, противірусний ефекти) та деякі механізми дії суми поліфенолів, отриманої з десмодіума канадського -фладексана.

2. Провести експериментальні дослідження щодо вибору

оптимального складу лікарської форми препарату із вмістом фладексалу.

3. Вивчити специфічну активність мазі "Фладекс" на

експериментальних моделях дерматитів різної етіології у порівнянні з кількома офіцінальними дерматологічними лікарськими засобами.

4. Вивчити деякі параметри нешкідливості мазі "Фладекс".

Наукова новизна одержаних результатів.

• Вперше встановлено протизапальний, ранозагоюючий,

знеболюючий та антигерпетичний ефекти суми поліфенолів, отриманої з десмодіума канадського (фладексан - нова оригінальна речовина) і залежності від доз та шляхів введення.

• Вперше запропонований оптимальний склад та вивчена фармакологічна активність лікарської форми із вмістом фладексана ■ мазі "Фладекс".

• Теоретично та екпериментально обгрунтована можливість застосування мазі "Фладекс" в дерматології для лікування дерматозії різноманітної етіології, в т. ч. й герпесвірусної.

• Експериментально доказані перевалі використання мазі "Фладекс" відносно деяких дерматологічних лікарських засобів, які полягають у комплексності та значній силі таких видів дії, як протизапальна, ранозагоююча, знеболююча, герпесінгібіторна.

Новизна роботи підтверджена авторським свідоцтвом (АС 571940 СРСР) та патентом на "Засіб "Фладекс" для лікування дерматозів' (17253 А України, РКІ А 61 К 35/78).

Практичне значешш одержаних результатів. Проведене фармакологічне вивчення фладексана та лікарської форми з його вмістом

- мазі "Фладекс"- засвідчило високу ефективність останньої як засоба призначеного для місцевого лікування в дерматологічній практиці.

з

Матеріали дисертаційної роботи стали основою звіту про доклінічне вивчення мазі "Фладекс", який був поданий до Фармакологічного комітету МОЗ СРСР.

Проведені широкі клінічні випробування мазі "Фладекс" у 10-ти клініках Росії та України підтвердили її високу терапевтичну ефективність при лікуванні усіх форм та стадій псориазу, алергічного, атопічного, периорального та себорейного дерматитів, фотодерматозів, нейродермітів, а також при обрісішку пухирчатому та кружлястому.

Препарат отримав дозвіл на медичне застосування (протокол №12 від 27.06.90 р.) і виробляється на ОАТ "Фармфірма "Здоров'я" (м. Харків).

Особистий внесок здобувана. Автором дисертації обгрунтована ;хема вивчення фармакологічних ефектів фладексана та мазі "Фладекс"; зизначені методологічні підходи, у зв'язку з якими проведені жспериментальні дослідження; здійснений аналіз та систематизація жспериментальних даних; розроблені основні положення та висновки эобоги.

Апробація результатів дисертації. Основні положення дисертації Зули викладені та обговорені на: IV Всесоюзному симпозіумі з jілеспрямованого пошуку фармакологічно активних речовин (Рига, 1981); Всесоюзній науковій конференції "Исследования по изысканию іекарствешшх средств природного происхождения" (Ленінград, 1981); іауково-практичній конференції "Перспективы создания и производства іекарствешшх средств в Украине" (Одеса, 1993); Першому Заціональному з'їзді фармакологів України "Сучасні проблеми фармакології" (Полтава, 1995).

Публікації. За матеріалами дисертації опубліковані 16 наукових іраць, в тому числі 4 статті, 11 тез доповідей, 1 патент.

Основні положення роботи, що виносяться на захист.

1. Фармакологічні властивості нового поліфенольного комплексу з іесмодіума канадського - фладексана - в залежності від дозування та [іляхів введення.

2. Дослідження деяких сторін механізмів протизапальної та іанозагоюючої дії фладексана.

3. Вибір та обгрунтування складу лікарської форми на основі зладексана - мазі "Фладекс".

4. Вивчення спектру фармакотерапевтичних властивостей мазі Фладекс".

5. Обгрунтування доцільності розробки та застосування мазі Фладекс" для лікування дерматозів різноманітної етіології.

Обсяг та структура дисертації. Дисертаційна робота викладена на 45 сторінках машинопису, складається з вступу, огляду літератури, пису матеріалів та методів досліджень, аналізу і узагальнення езультатів досліджень, висновків, списку використаної літератури та

додатка. Робота ілюстрована 26 таблицями та 9 рисунками. Бібліографія

- 206 джерел, в тому числі 68 іноземних.

ЗМІСТ РОБОТИ

Об'єкти та методи експериментальних досліджень

Об'єктами фармакологічних досліджень були фладексан - сума поліфенолів, здобута з трави десмодіума канадського - Ве&тпо<ііитг, сапайепсе (Ь.), БС та мазь "Фладекс" з його вмістом.

Фладексан застосовували при пероральному, внутрішньо очеревинному та місцевому введенні у дозах від 80 до 320 мг/кг . Для введення фладексану усередину та місцевого нанесення використовували 1% крохмаль; для парентерального способу - спеціальний розчинник флавоноїдів - суміш бури, глюкози та води. Мазь "Фладекс' застосовували у 2% концентрації; основа мазі містить вазелин, стеаринову кислоту, пропіленгліколь. Як препарати порівняння при вивченні специфічної активності мазі "Фладекс" використовували такі офіцінальні лікарські засоби: мазі "Календула", "Мегилурацилсша", "Оксолінова" та лінімент "Госипол". Вибір препаратів порівняння здійснювали, керуючисі двома критеріями: наявністю спільних з маззю "Фладекс" властивосте!" та природою діючої речовини.

Досліди по вивченню фармакологічних ефектів фладексана та мазі "фладекс" проведені згідно з "Методическими рекомендациями пс применению лекарственных растений в дерматологической практике' (1985), "Методическими рекомендациями по исследованию биолопичеаа активных веществ в дерматологии" (1989), "Методическими вопросам* научной разработки противовирусных средств" (1977), "Методическими рекомендациями по доклиническому изучению нестероидныл противовоспалительных лекарственных средств" (1994).

Протизапальну дію фладексану вивчали за його впливом нг ексудативну та проліферативну фази запального процесу. Анти ексудативну активність досліджували на моделях формалінового набряк) кінцівки мишей (ваговий метод оцінки) та декстранового запалення стога щурів (онкометричний метод оцінки). Проліферативну дію фладексан; оцінювали за його впливом на утворення грануляційної тканини (мето; Иисіаз Б., 1960).

Для вивчення деяких сторін механізму протизапальної ді: фладексана використовували оцінку його впливу на проникність судин зг методикою Монакової К.Н. (1954), функціональний стан мембран тучнм клітин, а також вміст ДНК та РНК у грануляційній тканині тварин зг методом Цанєва Р.Г. та Маркова Г.Г. (1977).

Вивчення протизапальної дії мазі "Фладекс" проводили на модел кротонового запалення вушної раковини щурів та в умовах таки? експериментальних дерматитів як УФ опромінювання, контактниї

s

алергічний (ДНХБ) та інтертригінозний (аміак) дерматити. Критеріями оцінки протизапальної дії мазі "Фладекс" служили вираженість таких ознак ураження шкіри при експериментальному запаленні як товщина її складки, температура та електроопір.

Ранозагоюючу дію фладексану та мазі "Фладекс" вивчали на загальноприйнятих моделях лінійних, трафаретних та круглих видавлених ран у щурів. Механізм ранозагоюючої дії фладексала оцінювали за його впливом на фагоцитоз, фагоцитарний показник та індекс, а також на вміст оксилроліну в грануляційній тканині.

Анальгетичну активність фладексана вивчали на мишах за методами "гарячої пластинки" та "судом", які викликали оцтовою кислотою або ацетилхоліном. Знеболюючу дію мазі "Фладекс" досліджували за методом Комендантової М.В. та Шуміліної З.Н. (1970) в умовах гіперальгезії, індукованої шкипи даром. Ефективність препарата оцінювали по подовженню латентного періоду виникнення больової реакції.

Вірусінгібуючу активнім, фладексана вивчали відносно вірусів Herpes simplex та Herpes zoster. Дію фладексана досліджували in vitro на клітинній культурі фібробластів курячих ембріонів та in vivo на мишах в умовах вірусного енцефаліту. Цитопатичну дію фладексана вивчали на культурі клітин Нер-2. Противірусну активність мазі "Фладекс" вивчали на моделі герпегичного кератиту у кролів. Клінічні прояви захворювання оцінювали у балах, враховуючи такі показники як набряк та гіперемія повік, інфільтрація кон'юнктиви, сльозовитікання, швидкість регресу патологічних змін рогівки.

Для підтвердження ранозагоюючої дії та відсутності місцевоподразнюючих та алергізуючих властивостей мазі "Фладекс" проводили тістоморфологічне дослідження шкіри тварин.

Досліджеїшя гострої та хронічної токсичності фладексана та мазі "Фладекс" наведені за показниками функції печінки, нирок, кровоносної системи, місцевоподразнюючої та алегрізуючої дії.

Статистичну обробку проводили за загальноприйнятим критерієм t Стьюдента. ЕД50 та LDjq розраховували за Штабським Б.М. та співавт. (1980).

В роботі використано 367 білих нелінійних мишей, 748 білих нелінійних щурів, 90 кролів породи Шиншила, 327 морських свинок, З собаки. Усі вказані тварини були обох статей. 90 дослідів виконано in vitro.

РЕЗУЛЬТАТИ ДОСЛІДЖЕНЬ ТА ЇХ ОБГОВОРЕННЯ

Вивчення протизапальної дії фладексана показало, що його анти ексудативний ефект не залежить від якості флогогена (формалін або декстран) та в інтервалі співставлених доз (160-240 мг/кг) був майже однаковий і знаходився у межах 40,5 - 56,0 % (Р=0,05). Найбільш

виражену дію фладексан чинив в умовах декстранового запалення при внутришньоочеревинному введенні за 0,5 год до застосування флогсягена. Цей ефект був вірогідно вшций відносно до максимального прояву при введенні речовини усередину (Р<0,01). В разі профілактичного застосування протягом 7 діб до відтворення запалення фладексан попереджував розвиток процесу. При вивченні проліфераіивної дії встановлено, що найбільш значний ефект мав місце в умовах місцевого застосування фладексана.

Встановлений факт більш вираженої протизапальної дії фладексана при тих шляхах введення,. які попереджують його попадання у шлунок, очевидно, можна пояснити інактивацією цієї речовини у травному каналі тварин. Наведене припущення підтверджують отримані нами дані про госіру токсичність фладексана: в дослідах на мишах ІЛ>5о при введенні усередину майже в 11 разів більша, ніж при внутрішньоочеревинному застосуванні.

Вивчення деяких сторін механізму протизапальної дії

фладексана. Пригнічення фладексаном формалінового набряку свідчить

про його вплив на проникність судинної стінки та, можливо, на мікроциркуляцію. Пригнічення ексудації при декстрановому

запаленні свідчить про

стабілізуючий вплив на мембрани тучних клітин, оскільки відомо, що ексудативна дія дек страну

обумовлена його зв'язуванням із рецепторами цих клітин.

Для аналіза механізму

протизапальної дії фладексана був вивчений його вплив на процес дегрануляції тучних клітин в умовах реакції гіперчутливості негайного типу, яку викликали дек стран ом. Результати дослідів показали, ща фладексан при однократному введенні чинив виразний інгібуючий ефект щодо дегрануляції: кількість дегранульованих тучних клітин зменшилась більш ніж в - 3 раз» відносно контролю на запалення. Найбільш виражений інгібуючій" ефект фладексана на процес дегрануляції гучних клітин

Рис.1. Вилив фладексана на дегрануляцію тучних клітин і - контроль:

2 - декстранове запалення;

3 - розчинник фладексана;

4 - однократне введення

фладексана; 5 - попереднє семиденне введення фладексана

спостерігався при його попередньому семидобовому введенні, коли кількість дегранульованих клітин була у 5 разів менша у порівнянні з контролем (рис.1).

Отримані результати дозволяють припустити, що анти ексудативна дія фладексапа реалізується за рахунок впливу на процеси дегрануляції тучних клітин. Окрім того, у механізмі протизапальної дії фладексана певну роль, очевидно, відіграє зниження проникності судин. Перевірка цього припущення у дослідах за методикою К.Н.Монакової підтвердила дану гіпотезу: отримані у цих дослідженнях дані свідчать про

безпосередній гальмуючий вплив фладексана на виникнення порушень проникності судинної стінки.

Отже, протизапальний ефект фладексана обумовлений, щонайменше, двома факторами: і - стабілізацією мембран тучних клітин, завдяки чому запобігається вихід біологічно активних речовин, які відповідають за розвиток запалення; 2 - зменшенням проникності стінок кровоносних судин. Наведені дані узгоджуються з відомими уявленнями про притаманну флавоноїдам капілярозміціпоючу дію.

Вивчення протизапальної дії мазі "Фладекс" на різних видах тварин з використанням різних моделей запалення показало, що препарат впливає

як на ексудативну, так і на проліферативну фази цього процесу. Так, в умовах індукованого кротоновою олією запалення вушної раковини у щурів мазь "Фладекс" зменшує ексудативний процес у середньому на 85 % порівняно з коніролем. При цьому мазь "Фладекс" не поступається одному з препаратів порівняння - мазі "Календула". В той же час другий препарат порівняння - лінімент Госішол (протнгерпетичний засіб) -суттєвого впливу на запалення не чинить (рис.2). Мазь "Фладекс" стимулює утворення грануляційної тканини, підвищує в ній вміст білка та нуклеїнових кислот, та щодо вказаної ефективності не поступається перед таким препаратом порівняння як мазь "Календула".

Мазь "Фладекс" чинить

Рнс.2. Вплив мазі "Фладекс" на кротонове запалення

1 - контроль; 2 - основа мазі;

З - мазь "Фладекс";

4 - лінімент "Госипол"; 5 - мазь "Календула”

лікувально-профілактичну та лікувальну дію при експериментальних дерматитах різної етіології (УФ опромінення, вплив ДНХБ або аміаку). Так, застосування мазі "Фладекс" при УФ опроміненні (табл.1) знижувало ступінь вираженості еритеми практично в 3 рази відносно контролю; при цьому вплив на температуру шкіри та товщину її складки невірогідний. За впливом на використані ознаки запалення мазь "Фладекс" дещо переважає мазь "Календула".

Лікувальна дія мазі "Фладекс" в умовах алергічного контактного дерматита у морських свинок зумовлена зниженням вираженості запалення, що полягає у підтриманні практично на нормальному рівні таких показників стану шкіри як температура та товщина складки, електроопір та загальна капілярна проникність (табл.2), а також гематологічних показників (відсутність лейкоцитозу та суттєвих змін в лейкоформулі). При цьому встановлена протиалергічна дія мазі "Фладекс", яка полягає у вірогідному зниженні кількості тканинних базофілів (на 54 %) та контролюється місцевими аплікаціями алергену.

Мазь "Фладекс" чинить лікувальну дію в умовах інтеріригинозного дерматита у морських свинок. Динаміка перебігу цього дерматита за загальною вираженіспо запальної реакції (рис.З) свідчить про відсутність запалення шкіри під впливом препарату практично у всі терміни спостереження.

Вивчення ралоаопоючої дії фладексана та мазі "Фладекс"

дозволило встановити, що обидва об'єкти стимулюють регенерацію шкіри як при парентеральному (в разі фладексана), так і при місцевому (в разі мазі "Фладекс") застосуванні. Так, міцність створеного рубця підвищувалась під впливом тижневого застосування фладексана у межах 70-90%.

Таблиця 1

Вплив мазі "Фладекс” на розвиток УФ еритеми ______ и морських свинок (х * Бх) _______________________

Умови дослідів в Вираженість еритеми, бали і° шкіри в центрі еритеми, °С Товщина складки шкіри, мм

Вихідні дані

Контроль 18 - 36,7 ± 0,07 3,1 ± 0,01

Основа мазі 12 - 36,8 ± 0,07 3,0 ± 0,01

Фладекс 15 - 36,6 ± 0,05 3,2 ± 0,02

Календула 18 - 36,7 і 0,05 3,1 ± 0,01

Через 4 год

Контроль 18 2,92 ± 0,50 37,9 ± 0,07 ** 4,4 ± 0,20 **

Основа мазі 12 2,90 ± 0,40 37,8 ± 0,07 ** 4,3 ± 0,01 **

Фладекс 15 • оо о о +1 о 36,9 ± 0,05 * 3,5 ± 0,02 *

Календула 18 1,20 ± 0,04 * 37,1 ± 0,18 * 3,8 ± 0,01 *

Примітки: 1- * - вірогідність відносно контроля (Р<0,05);

2 - ** - відносно вихідного рівня (Р<0,05).

Таблиця 2

Вплив мазі "Фладекс" на деякі показники перебігу експериментального дерматоза у морських свинок (х + Бх)

Показники Од. ВИР І і РУ Умови дослідів Фон Термін спостереження, доба

1 3 9 11 13

Тяжкість уражень шкіри бал Контроль "Фладекс" 0 0 1.0 0,5 2,7 1,0 5.0 2.1 5,0 1,5 4,0 0,5

Температура шкіри °С Контроль "Фладекс" 37,4 ±0,2 37,2 ±0,3 39,0* .±0,4 38,2* ±0,5 39,1* ±0,2 38,0 ±0,2 38,4* ±0,4 38,2 ±0,4 38,8* ±0,2 37,5 ±0,2 38,8* ±0,5 37,2 ±0,2

Товщина складки шкіри мм Коїггроль "Фладекс” 4.8 ±0,3 4.8 ±0,4 7,7* ±0,2 5,6 ±0,4 8,4е ±0,7 7,2* ±0,3 7,9* ±0,3 5,9* ±0,7 7,8* ±0,3 5,9* ±0,2 7,8* ±0,4 4,8 ±0,4

Електроопір шкіри кОм Контроль "Фладекс" 85.0 ±5,7 40.0 ±3,5 15,0* ±2,3 30,0 ±3,3 10,0* ±1,2 20,0 ±2,5 16,0* ±2,7 22,0 ±3,0 20,0* ±2,3 24,0 ±2,5 23,0* ±3,2 35,0 ±3,0

Загальна капілярна проникність шкіри с ІСонтроль "Фладекс” 48.0 ±3,0 44.0 ±3,7 55.0 ±2,8 49.0 ±2,5 25,0* ±2,0 39,0 ±2,8 25,0* ±2,7 40,0 ±2,2 28,0 ±3,5 43,0 ±3,1 30.0 ±2,5 42.0 ±2,0

Примітка: * - вірогідність підносно контроля (Р<0,05);

При цьому тягар, необхідний для розриву ранового рубця у дослідах, коли фладексан застосовували місцево, був вірогідно вищий, ніж тоді, коли його вводили внутрішньоочеревинно. Термін повного загоювання трафаретних ран завдяки впливу фладексан а при внутрішньоочеревинному введенні скорочувався на ЗО % (Р<0,02), при місцевому - на 22 % (Р<0,05) порівняно з контролем. Встановлено також, що фладексан підсилював фагоцитоз практично однаково при парентеральному та місцевому шляхах застосування. Про активацію процесу регенерації свідчить також підвищення у середньому на 20 % (Р<0,05) вмісту оксипроліна в грануляційній тканині.

Мазь "Фладекс” покращує репара-пивні процеси. При місцевому нанесенні на область лінійних ран шкіри препарат збільшує міцність ранового рубця у середньому більш, ніж на 50 % (Р<0,001)

порівняно з контролем. Відносно порівняння з офіцінальними дерматологічними препаратами встановлене

Рис.З Вплив мазі "Фладекс" на вираясенісхь запалення в умовах інтертригінозного дерматита у морських свинок

А - контроль; Б - основа мазі;

В - мазь "Фладекс";

і, 2, 3 - термін спостереження

Рис.4 Вплив мазі "Фладекс" та препаратів порівняння на больову чутливість в умовах запалення кінцівок у мишей 1 - контроль; 2 - основа мазі; 3 - маз "Фладекс"; 4 - мазь "Календула" 5- лінімент "Госипол"

слідуюче: мазь "Фладекс" незначно поступається за активністю

Метилурациловій мазі і вигідно відрізняється від лінімента "Госипол", який ранозагоюючої дії не чинить. В умовах поширеного раньового дефекту на моделі круглих ран у щурів мазь "Фладекс" інтенсифікує регенераторні процеси в епідермісі, стимулює ріст та визрівання новоутвореної тканини, що приводить до більш ранньої відбудови ранового дефекту порівняно з контролем,

Анальгетичнии ефект фладексана та мазі "Фладекс" вивчали за змінами порогу больової реакції, яку викликали термічними та хімічними подразниками.

В результаті проведених досліджень встановлено, що фладексан, який вводили тваринам в дозах 160-240 мг/кг за 30 хв до викликання болю, чинить дозозалежний знеболюючий ефект, який чини ті

знеболюючий ефект, як при термічному способі ноціцептивного впливу, так і в умовах оцтових або ацетилхолінових "судом". ЕД50 фладексану при різних шляхах введення знаходиться у межах 100 мг/кг. Наявність анальгетчних властивостей становить суттєву особливість фармакодинаміки фладексана.

Місцеве застосування мазі "Фладекс" в умовах гіперальгезії, яка супроводжує запалення кінцівок у мишей, подовжує поріг больової чутливості в середньому у 5 разів порівняно з контролем (рис. 4), а препарати порівняння (мазь "Календула" та лінімент "Госипол") у використаній постановці дослідів впливу на больову чутливість не проявили.

Вивчення противірусної активності фладексана в дослідах in vitro та in vivo проводили у слідуючих аспектах: вивчення стерильності фладексана та його цитопатичної дії, дослідження противірусної активності по відношенню до двох представників вірусів групи герпеса -Herpes simplex (HVS), штам ELA-5699 та Herpes zoster (HVZ), штам "Нікулін".

Стерильність фладексана вивчали згідно вимог ДФ XI у концентраціях 0,025 % та 1 %. Проведені випробування показали, що при висіві цієї речовини в обох концентраціях на всіх поживних середовищах не було виявлено зросту патогенної мікрофлори, на підставі чого можна зробити висновок про стерильність фладексана.

Дослідження цитотоксичного впливу фладексана здійснювали шляхом нанесення речозини в концентраціях 1%, 0,1 %, 0,05% та 0,025% на моношар культури клітин Нер-2. В реультаті встановлено, що цитопагична дія має місце лише у разі застосування фладексана у великих концентраціях - 1% та 0,1%, тоді як в концентраціях 0,05% та

0,025% фладексан не чинив цитопатичного впливу.

Противірусну дію фладексана оцінювали, використовуючи тест гальмування утворення під впливом HVS та HVZ характерних бляшок на хоріоналантоїсній оболонці (ХАО) курячих ембріонів (табл. 3). Встановлено, що фладексан навіть у мінімальній концентрації (0,025%) повністю запобігав процесу бляшкоутворення різними розведеннями обох видів вірусів.

В дослідах на мишах здійснені дослідження впливу фладексана (внутрішньоочеревинне введення в дозі 170 мг/кг) на їх життєздатність в умовах герпетичного енцефалііу. Встановлена певна захисна дія фладексана: тривалість життя тварин збільшилась на 4 доби у разі профілактичного застосування фладексана та на 2 доби - при його застосуванні одночасно із зараженням.

Дослідження противірусної активності мазі "Фладекс" проведені на моделі герпетичного кератиту у кролів. Встановлено, що

Таблиця З

Інгібуюча дія фладексана у концентрації 0,025 % на віруси Herpes simplex (штам ELA-5699) та Herpes zoster (штам ______________ "Нікулін")_________(х * Sx)______________:______

Умови дослідів в Кількість бляшок на ХАО

Розведення вірусів

Вихідний титр -1 їй -2 lg -4 lg

Контроль 25 20,0 ± 2,0 13,0 ± 0.9 5,0 ± 0,5 0,8 ± 0,01

Розчинник «фладексана 20 20,0 ± 1,8 14,0 ± 0,7 4,0 + 0,2 0,9 ± 0,02

Herpes simplex

Фладексан 20 0 0 0 0

Herpes zoster

Фладексан | 25 0 0 0 0

Примітка: ХАО - хоріоналантоїсна оболонка.

застосування мазі "Фладекс" при водить до значного зменшення вира жєності всіх ознак клінічного перебіг} хвороби (набряк, гіперемія, зміни у рогівці та інш.), а також до скоро чення термінів видужання у 2 разі-по відношенню до контроля. Терапев пічний ефект мазі "Фладекс" більи виражений у порівнянні із маззк "Оксоліновою" (Р < 0,05) та не пос тупається лініменту Тосипол"(рис.5).

Результати вивчення нешкідливості дозволили встановити, гцс фладексан згідно класифікації К.К. Сидорова є відносно нешкід

_ Г II . „л „ ливою речовиною в умовах введеній

Рис.5. Вплив мазі Фладекс на г ■'

. усередину та практично нетоксичною ■

терміни регресу кератита у 1 у 3. * .

кпплін ПРИ внутршшьоочереишному введенні

1 - контроль; 2 - основа мазі; Мазь нешкідлива прт

З-мазь "Фладекс" (лікувально- застосуванні (1 міс), не

профілактична дія); 4 - мазь чиш,тъ м,сцевоподразнюючої тг

"Фладекс" (лікувальна дія); алерпзуючої №. підтверджене

5 - мазь "Оксолінова"; патоморфологічними дослідженнями.

6 - лінімент "Госипол" На ^сгав1 проведдаих Доклі

нічних фармакотоксикологічних досліджень, а також з урахуванням сучасних вимог до медичного

застосування дерматологічних лікарських засобів, були розроблені і рекомендовані для клінічної апробації показання та схеми оптимального застосування мазі "Фладекс". Результати широких клінічних досліджень препарату підтвердили його високу фармакотерапевтичну ефективність в терапії дерматозів різного генезу, в тому числі й герпесвірусного, а також виявили відсутність побічних реакцій та протипоказань.

Розроблена мазь "Фладекс" впроваджена у виробництво на ОАТ "Фармфірма "Здоров'я".

ВИСНОВКИ

1. Вперше встановлено фармакотоксикологічні властивості нової оригінальної речовини фладексана - суми поліфенолів, виділеної з трави Desmodium canadense (L.) DC, та нового оригінального препарату на її основі - мазі "Фладекс" для застосування в дерматології. Спосіб одержання біологічно активної речовини - фладексана - захищений АС № 571949 (СРСР).

2. Встановлена протизапальна дія фладексана та мазі "Фладекс" на різних моделях запалення. За ефективністю мазь "Фладекс" аналогічна мазі "Календула" та не поступається Мегілурациловій мазі. Механізм протизапальної дії фладексана зумовлений стабілізацією мембран тучних клітин та зменшенням проникності стінок кровоносних судин.

3. Показаний стимулюючий вплив фладексана та мазі "Фладекс" на репаративні процеси у шкірі. Вставовлено, що мазь "Фладекс" має однакову ефективність з препаратом порівняння - маззю "Календула" і незначно поступається (на 14%) відомому репаранту - Мегилурациловій мазі.

4. Встановлена анальгезуюча дія на різних моделях больового

подразнення і при різних способах введення. ЕД50 фладексана при різних шляхах введення знаходяться у межах 100 мг/кг. Місцеве застосування мазі "Фладекс" в умовах гіперальгезії запального

походження подовжує поріг больової чутливості в 5 разів відносно контроля, тоді як препарати порівняння - мазь"Календула" та лінімент

"Госгаюл" - вказаним ефехтом не володіють.

5. Встановлена вірусінгібуюча активність фладексана та мазі

"Фладекс" у відношенні до Herpes simplex (штам Ela-5699) та Herpes zoster (штам "Нікулін"). Терапевтичний ефект мазі "Фладекс"

перевершує у 2 рази дію Оксолінової мазі та не поступається перед лініментом Тосипол".

6. На різних моделях дерматитів встановлено, що мазь "Фладекс" чинить антиалергічну дію.

7 На підставі значень LD50 фладексан є безпечним при введенні усередину та практично нетоксичним - при внутрішньоочеревиному. Мазь "Фладекс" при тривалому застосуванні не чинить місцевоподразнюючої

та алергізуючої дії, а також не впливає на життєвоважливі органи та системи.

8. Мазь "Фладекс" характеризується наявністю такого комплексу фармакотерапевтичних властивостей (протизапальна, репаративна, анальгетична, ангиалергічна, вірусінгібуюча дія) та нешкідливістю, хцо дозволяє застосовувати Уі як монозасіб, що є цінною перевагою перед іншими дерматологічними препаратами.

9. Результати доклінічного вивчення мазі "Фладекс" підтверджені її випробуванням у 10 клініках України та Росії, на підставі чого отримано дозвіл до медичного застосування. Розроблена інструкція по використанню мазі "Фладекс" у терапії дерматозів різного генезу, в т. ч. і герпесвірусного. Отримано Патент України на засіб "Фладекс" для лікування дерматозів. Промисловий випуск перших серій мазі "Фладекс" здійснюється на ОАТ "Фармфірма "Здоров'я".

Перелік робіт, опублікованих за темою дисертації

1. Анальгезирующее действие флавоноидов Rododendron Luteum Sweet, Hypericum perforatum L., Lespedeza bicolor Tucz. и L. hedysaroides (Pall.) Kitag./ Васильченко E.A., Васильева JI.H., Комиссаренко Н.Ф., Левашова И.Г., Балок B.C. //Расг. ресурсы. -1986. - Т. 22, №1. - С. 12-21.

2. Флавоноидьа десмодиума канадского и их обезболивающее действие /Батюк B.C., Васильченко Е.А., Васильева Л.Н., Чернобровая Н.В., Комиссаренко Н.Ф. // Хим.-фармац. фурн. - 1987. - №1 - С. 6367.

3. Лікарські препарата протизапальної, анальгегичної та репаративної дії /Чайка Л.О., Хаджай Я.І., Оболєнцева Г.В., Васильченко Є.О., Любарцева Л.О., Топчий Л.Я., Відюкова О.І., Лібіна В.В., Лукашев С.В., Васильєва Л.М., Павлова В.П., Єршова Н.В., Шенгур В. В., Котляр В. О., Гребьонкіна В. К., Андріанова Т. В. //Фармацевт, журн. - 1990, - >J°3. - С. 34-37.

4. Васильева Л.Н. Изучение фармакогерапевтических свойств мази "Фладекс" в эксперименте и клинике // Провизор. - 1997. - №4. - С. 16-17.

5. Пат.17253 А України, РКІ А 61 К 35/78. Засіб "Фладекс" для лікування дерматозів /Васильева Л.М., Васильченко Є.О., Комісаренко М.Ф. та інш. (Україна). - 1997. - 1 с.

6. К вопросу об изыскании ненаркогических анальгетиков среди веществ растительного происхождения / Васильченко Е.А., Соколова

В.Е., Васильева Л.Н., Задорожный Б.А., Бондарь З.С. //Тез. докл. 4го Всес. симп. по целенаправленному изысканию физиологически активных феществ. - Рига. - 1981. - С.75.

7. Васильева Л.Н. Об изыскании лекарственных средств растительного происхождения для дерматологической практики //Тез.

докл. Всес. науч. конф. "Исследования по изысканию лекарственных средств природного происхождения". - Л., 1981. - С. 177.

8. Васильченко Е.А., Васильева Л.Н. Анальгезирующее действие веществ растительного происхождения //Тез.докл.науч.конф. "Результаты и перспективы научных исследований в области создания лекарственных средств из растительного сырья". - М., 1985. - С. 190.

9. Васильева Л.Н., Васильченко Е.А. Некоторые свойства десмодиума канадского как несгероидного противовоспалительного средства // Тез.докл. 2-й Респ. конф. по мед. ботанике. - Киев. - 1988. -

С. 212-213.

10. К вопросу об оптимизации механизмов действия лекарственных средств на основе полифенолов /Васильченко Е.А., Измайлова И.К., Хромова Т.О., Васильева Л.Н., Шенгур В.Ф., Котляр В.А. // Тез. докл. Рос. науч. конф. "Создание лекарственных средств". -М., 1992. - С. 67-68.

11. Васильева Л.Н., Васильченко Е.А. Влияние мази "Фладекс" -флавоноидното препарата - на течение экспериментального герпетического кератита // Тез. доп. 3-й Укр. конф. з мед. ботаники. - Київ, 1992. - С. 23-24.

12. Новые лекарственные средства для лечения дерматозов /Батюк B.C., Васильченко Е.А., Васильева Л.Н., Чернобровая Н.В., Комиссаренко Н.Ф. // Тез. докл. науч.-практ. конф. "Перспективы создания и производства лекарственных средств в Украине”. - Харьков, 1993. - С. 7-8.

13. Васильева Л.Н. Противовоспалительное действие очищенного экстракта из травы десмодиума канадского (фладексана) //Там же. - С. 206-207.

14. Васильєва Л.М., Васильченко Є.О. До питання про створення фітопрепаратів для дерматології // 1-й Конгрес світової федерації Українських фармацевтичних товариств: Тез.доп. - Львів, 1994. - С. 290291.

15. Васильєва Л.Н. О противовоспалительном действии нового растительного препарата для дерматологии - мази "Фладекс" //Тез. докл. "Научные достижения и проблемы производства лекарственных средств". - Харьков, 1995. -С. 20-22.

16. Васильєва Л.М. Фармакологічне обгрунтування використання мазі "Фладекс" у фітотерапії дерматозів //Тез. доп. Першого нац. з'їзду фармакологів України "Сучасні проблеми фармакології". -Полтава, 1995. - С.1.

АНОТАЦІЇ

Васильєва Л.М. Фармакологічні дослідження мазі "Фладекс" -нового рослинного препарату для комплексної терапії дерматозів.

- Рукопис.

Дисертація на здобуття нукового ступеня кандидата біологічних наук за спеціальністю 14.03.05 - фармакологія. - Одеський державний медичний університет, Одеса, 1997.

Теоретично та експериментально обгрунтовано склад нового фітопрепарату - мазі "Фладекс" - на основі оригінальної субстанції з десмодіума канадського для комплексної терапії дерматозів різного генезу, у тому числі герпесвірусної природи. Фармакологічне вивчення показало, що мазь "Фладекс" має протизапальну, ранозагоюючу, знеболюючу та антиалергічну дію, а також вірусінгібуючу активність по відношенню до вірусів обріснику пухирчатого та кружлястого. Результати фармакологічних досліджень підтверджені даними клінічних випробувань та дозволом препарату до медичного застосування і промислового випуску. На засіб "Фладекс" для лікування дерматозів одержано патент № 17253 А від 01.04.97 (Україна).

Ключові слова: фладексан, мазь "Фладекс", протизапальна дія, ранозагоюючий ефект, знеболююча дія, протигерпетична активність.

Васильєва Л.Н. Фармакологические исследования мази "Фладекс" -нового растительного препарата для комплексной терапии дерматозов.

- Рукопись.

Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук по специальности 14.03.05 - фармакология. - Одесский государственный медицинский университет, Одесса, 1997.

Теоретически и экспериментально обоснован, состав нового фитопрепарата - мази "Фладекс" - на основе оригинальной субстанции из десмодиума канадского для комплексной терапии дерматозов разлігшого генеза, в том числе герпесвирусной природы. Фармакологическое изучение показало, что мазь "Фладекс" обладает противовоспалительным, ранозаживляющим, обезболивающим и антиаллергическим эффектами, а также вирусгаггибирующей активностью в отношении вирусов простого герпеса и опоясывающего лишая. Результаты фармакологического исследования подтверждены данными клинических испытаний и разрешением препарата к медицинскому применению и промышленному выпуску. На средство "Фладекс" для лечения дерматозов получен Патент № 17253 А от 01.04. 97 (Украина).

Ключевые слова: фладексан, мазь "Фладекс", противовоспалительное действие, ранозаживляющий эффект, болеутоляющее действие, прогивогерпегическая активность.

Vasilieva L.N. The pharmacological study of oinment FLADEX - the new plant drug for the dermatoses complex treatment (therapy). The manuscript.

Dissertation for scientific degree of Biologycal Sciences on speciality 14.03.05 - Pharmacology. Odessa State Medical University, Odessa, 1997.

The composition of the new phytochemical drug on the basic of the original substance of Desmodium Canadensis L. (fladexan) far the coplex treatment (therapy) of the various generics dermatoses, including the virus herpes ones, was theorenically and experimetally grounded. It was demonstrated throught the pharmacological study that the oinment FLADEX pros esses the antiinflammatory, wound healing, analgetsic, antiallergic as well as the virus inhibitory activity in respect of herpes simplex and herpes zoster. The results of pharmacological investigations are confirmed by the clinical studes data and by the drug approval for the medical application and industrial prodaction. The agent FLADEX is protected by the patent of the Ukraine № 17253 A of 1st April, 1997.

Key words: fladexan, oiment FLADEX, antiinflammatory action, pain threshold, analgetsic and antiviral activity..